Summary
सेरेब्रल इस्केमिया का एक माउस मॉडल-रिपरफ्यूजन स्ट्रोक की पैथोफिजियोलॉजी की जांच करने के लिए स्थापित किया गया है । हम distally सही मध्य सेरेब्रल धमनी और सही आम ग्रीवा धमनी और बहाल रक्त प्रवाह के बाद 10 या ४० ischemia के ंयूनतम ।
Abstract
इस अध्ययन में, एक मध्यम मस्तिष्क धमनी (एमसीए) रोड़ा माउस मॉडल मस्तिष्क ischemia का अध्ययन करने के लिए नियोजित है-reperfusion. एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और विश्वसनीय माउस मॉडल मस्तिष्क ischemia के pathophysiology की जांच के लिए उपयोगी है-reperfusion और स्ट्रोक के साथ रोगियों के लिए संभावित चिकित्सकीय रणनीतियों का निर्धारण । C57BL/6 चूहों के विलीस के वृत्त के एनाटॉमी में भिन्नता सेरेब्रल-इस्केमिया-प्रेरित चोट के बाद उनके infarct मात्रा को प्रभावित करता है । अध्ययनों से संकेत दिया है कि बाहर का एमसीए रोड़ा (mcao) इस समस्या को दूर कर सकते हैं और एक स्थिर infarct आकार में परिणाम. इस अध्ययन में, हम मस्तिष्क ischemia के एक दो पोत रोड़ा माउस मॉडल स्थापित-सही एमसीए करने के लिए रक्त के प्रवाह के व्यवधान के माध्यम से reperfusion । हम distally सही एमसीए और सही आम ग्रीवा धमनी (सीसीए) और ischemia की एक निश्चित अवधि के बाद रक्त के प्रवाह को बहाल ligate । यह इस्कीमिया-रिपरफ्यूजन चोट स्थिर आकार और एक व्यवहार घाटे के एक infarct लाती है । परिधीय प्रतिरक्षा कोशिकाओं को 24 एच घुसपैठ की अवधि के भीतर इस्कीमिक मस्तिष्क घुसपैठ । इसके अतिरिक्त, cortical क्षेत्र में न्यूरोनल हानि एक लंबे समय तक reperfusion अवधि के लिए कम है । इसलिए, यह दो पोत रोड़ा मॉडल मस्तिष्क ischemia के बाद reperfusion अवधि के दौरान प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया और न्यूरोनल वसूली की जांच के लिए उपयुक्त है ।
Introduction
सेरेब्रल इस्केमिया-रिपरफ्यूजन माउस मॉडल ischemia-प्रेरित मस्तिष्क चोट1के pathophysiology की जांच के लिए सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया प्रयोगात्मक दृष्टिकोण में से एक है । क्योंकि सेरेब्रल इस्केमिया-reperfusion परिधीय प्रतिरक्षा प्रणाली को सक्रिय करता है, परिधीय प्रतिरक्षा कोशिकाओं इस्कीमिक मस्तिष्क में घुसपैठ और कारण न्यूरोनल क्षति2. इस प्रकार, एक विश्वसनीय और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य माउस मॉडल है कि mimics सेरेब्रल इस्कीमिया-reperfusion स्ट्रोक की pathophysiology समझने के लिए आवश्यक है.
C57BL/6j (बी-6) चूहे स्ट्रोक प्रयोगों में सबसे अधिक इस्तेमाल किया तनाव है क्योंकि वे आसानी से आनुवंशिक रूप से हेरफेर किया जा सकता है । mcao के दो आम मॉडल/reperfusion कि सेरेब्रल ischemia की स्थिति की नकल-reperfusion उपलब्ध हैं । सबसे पहले समीपस् थ mcao का इंट्राएलुमिनल फिलामेंट मॉडल है, जहां सिलिकॉन लेपित फिलामेंट को एमसीएल में रक्त प्रवाह को इंट्रावेक्युलर से बाहर करने के लिए नियोजित कर रहा है; अधिविष् ट रेशा बाद में रक्त प्रवाह को बहाल करने के लिए हटा दिया जाता है3. एक कम रोड़ा उपकोर्टिकल क्षेत्र के एक घाव में परिणाम है, जबकि एक लंबे समय तक रोड़ा अवधि cortical और subcortical क्षेत्रों में infarcts का कारण बनता है । दूसरा मॉडल डिस्टल mcao का बंधाव मॉडल है, जो एमसीए के माध्यम से रक्त के प्रवाह को कम करने के लिए एमसीएल और सीसीए का बहिर्वाहिकीय बंधन शामिल है, जिसके बाद रक्त प्रवाह सीवन और धमनीविस्फार क्लिप4को हटाने के माध्यम से बहाल किया जाता है । इस मॉडल में, cortical क्षेत्रों में एक infarct का कारण बनता है, और मृत्यु दर कम है । क्योंकि mcao/reperfusion मॉडल के बंधाव बाहर एमसीए की साइट का पर्दाफाश करने के लिए craniectomy की आवश्यकता है, साइट आसानी से पुष्टि की जा सकती है, और जांच कि क्या बाहर एमसीए में रक्त प्रवाह प्रक्रिया के दौरान बाधित है सीधा है ।
बी6 चूहे विइस के अपने सर्कल के एनाटॉमी में काफी बदलाव दर्शाते हैं; यह मस्तिष्क के ischemia के बाद infarct मात्रा को प्रभावित कर सकता है-reperfusion5,6,7। वर्तमान में, यह समस्या डिस्टल एमसीए8के बंधाव के माध्यम से दूर किया जा सकता है । इस अध्ययन में, हम एमसीए रक्त प्रवाह अधिविष् ट और ischemia की एक पूर्व निर्धारित अवधि के बाद reperfusion को सक्षम करने के लिए एक विधि स्थापित । सेरेब्रल ischemia के दो पोत रोड़ा-reperfusion मॉडल ischemia की एक निश्चित अवधि के बाद बहाल रक्त प्रवाह के साथ, सही दूरस्थ एमसीए और सही सीसीए के बंधाव के माध्यम से एमसीए क्षेत्र के क्षणिक ischemia लाती है । इस mcao/reperfusion मॉडल स्थिर आकार, मस्तिष्क के एक थोक इस्कीमिक मस्तिष्क में प्रतिरक्षा कोशिकाओं घुसपैठ, और मस्तिष्क इस्कीमिक के बाद एक व्यवहार घाटे-reperfusion के एक infarct लाती है ।
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Protocol
शैक्षिक sinica और ताइपे चिकित्सा विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समितियों प्रयोगात्मक जानवरों के उपयोग के लिए इस प्रोटोकॉल को मंजूरी दे दी.
1. mcao/रिपरफ्यूजन मॉडल
- पानी के लिए मुफ्त का उपयोग और चाउ सर्जरी तक के साथ चूहों प्रदान करते हैं ।
- शल्य चिकित्सा उपकरण autoclave और सर्जरी की मेज और उपकरणों sanitize ७०% इथेनॉल का उपयोग । एक सर्जिकल मास्क और बाँझ दस्ताने पहनें । एक सूखी मनका का उपयोग करें स्टरलाइजर सर्जिकल उपकरण resterilize अगर एकाधिक माउस सर्जरी एक प्रयोग में आयोजित किया जाएगा ।
- एक intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से ०.८% क्लोरल हाइड्रेट का उपयोग करके एक 8-से 12 सप्ताह के पुराने माउस (द्रव्यमान: 25 – 30 ग्राम) को एनेस्थेटाइज़ करें । सुनिश्चित करें कि एनेस्थेटाइज्ड माउस में पेडल पलटा नहीं है (जैसा कि परीक्षण के बाद एक फर्म पैर की अंगुली चुटकी का उपयोग करके) एनेस्थेटाइजेशन के बाद ।
- जब यह संज्ञाहरण के तहत है माउस के लिए आंख सूखापन को रोकने के लिए vet मरहम का उपयोग करें ।
- माउस के रक्तचाप की निगरानी के लिए एक noninvasive रक्तचाप प्रणाली का प्रयोग करें ।
- इसके मलाशय के तापमान और धमनी रक्त गैसों की निगरानी के लिए एक शारीरिक निगरानी प्रणाली का उपयोग करें । ३६.५ ± ०.५ डिग्री सेल्सियस पर शरीर का तापमान बनाए रखें ।
- subcutaneously एक रोगनिरोधी एंटीबायोटिक के साथ माउस सुई (25 मिलीग्राम/किलो cefazolin)8.
- हीटिंग पैड पर लापरवाह स्थिति में माउस प्लेस ।
- अधर गर्दन क्षेत्र पर माउस के फर शेविंग द्वारा त्वचा का पर्दाफाश करने के लिए इलेक्ट्रिक कतरनी का प्रयोग करें, साथ ही दाईं आंख और दाहिने कान के बीच के क्षेत्र में ।
- माउस के शरीर से फर साफ करने के लिए एपिलेट क्रीम का प्रयोग करें और povidione-आयोडीन और ७०% इथेनॉल के साथ शल्य साइट प्रत्यावर्ती scrbus कीटाणुरहित ।
- गर्दन पर 1 सेमी लंबी मिडलाइन चीरा काटने के लिए आइरिस कैंची का प्रयोग करें ।
- शारीरिक चोट के कारण बिना वेग्स नसों से मुक्त सीसीए को ध्यान से टुकड़े करने के लिए आईरिस संदंश का प्रयोग करें ।
- सीसीएल को अलग करने के लिए 5-0 सिल्क स्टेंचर का प्रयोग करें ।
- दाईं आंख और दाहिने कान के बीच मध्यबिंदु पर खोपड़ी में एक ०.३ सेमी चीरा बनाओ ।
- जीवाणु और शल्कास्थि हड्डी को बेनकाब करने के लिए temporalis मांसपेशियों में कटौती करने के लिए microscissors का प्रयोग करें ।
- एक स्टीरियो विदारक सूक्ष्मदर्शी के तहत, एक microdrill का उपयोग करने के लिए एक 2 मिमी व्यास का छेद सीधे दाईं ओर बाहर का एमसीए से अधिक बना ।
- एक 10-0 सीवन का उपयोग करते हुए दाईं ओर डिस्टल एमसीए के ट्रंक को लिकेट करते हैं ।
- एक nontraumatic धमनीविस्फार क्लिप का उपयोग कर दाईं ओर सीसीए रोकना ।
- या तो 10 या ischemia के ४० मिनट के बाद, धमनीविस्फार क्लिप्स और सीवन को हटाने के लिए एमसीए और सीसीए के लिए रक्त के प्रवाह को बहाल ।
- सिर पर त्वचा चीरा सील करने के लिए एक सीवन क्लिप का उपयोग करें ।
- सील ग्रीवा त्वचा चीरों सीवन या स्टेपल9के साथ गर्दन त्वचा बंद करके पीछा एक एकल सीवन का उपयोग कर ।
- चमड़े के नीचे दर्द राहत के लिए बुप्रेनोरपाइन (०.१ मिलीग्राम/
- हीटिंग पैड पर ३६.५ ± ०.५ डिग्री सेल्सियस पर माउस के शरीर का तापमान बनाए रखें जब तक यह पूरी तरह से संज्ञाहरण से बरामद किया गया है । यह पूरी तरह से बरामद किया गया है जब तक कि अन्य जानवरों की कंपनी के लिए सर्जरी आया है कि पशु वापस मत करो । जब तक यह पर्याप्त चेतना आएगा पशु उपेक्षित छोड़ मत करो ।
- autoclaved पिंजरे में माउस प्लेस इतना है कि यह आसानी से पानी और चाउ का उपयोग कर सकते है के बाद यह पूरी तरह से बरामद किया है ।
2.2, 3, 5-triphenyltetrazolium क्लोराइड के साथ धुंधला
- एक intraperitoneal इंजेक्शन के माध्यम से ०.८% क्लोरल हाइड्रेट के साथ माउस एनेस्थेटिज़ ।
- पशु को डिकैप्ट करने के लिए ऑपरेटिंग कैंची का प्रयोग करें ।
- सिर की त्वचा में चीरा बनाने के लिए आइरिस कैंची का उपयोग करके खोपड़ी को बेनकाब करें ।
- अग्रवर्ती अस्थि के पूर्वकाल को काटने के लिए प्रचालन कैंची का प्रयोग करें ।
- परितारिका सीवन के साथ खोपड़ी में कटौती करने के लिए आईरिस कैंची का प्रयोग करें ।
- एक हड्डी rongeur का उपयोग करने के लिए एक तरफ धक्का और पार्श्विक हड्डी और मस्तिष्क का पर्दाफाश ।
- मस्तिष्क को काटना करने के लिए आईरिस संदंश का प्रयोग करें ।
- 2 मिमी कोरोनल स्लाइस प्राप्त करने के लिए एक माउस मस्तिष्क मैट्रिक्स और रेज़िडोर ब्लेड का उपयोग करें ।
- 2% 2, 3, 5-triphenyltetrazolium क्लोराइड (टीटीसी) में 1x फॉस्फेट-buffered खारा के साथ ३७ डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए मस्तिष्क स्लाइस दाग ।
- 10% formalin के साथ मस्तिष्क 2x कुल्ला ।
- 24 एच के लिए कमरे के तापमान पर 10% formalin में मस्तिष्क को ठीक करें ।
3. infarct आकार का मापन
- एक साफ प्लास्टिक स्लाइड पर वर्गों की व्यवस्था और रोस्ट्रल से पुच्छ को वर्गों ओरिएंट.
- स्कैनर का उपयोग करके स्लाइड को स्कैन करें । एक मीट्रिक मापनी रखें और सुनिश्चित करें कि यह स्कैन की गई छवि में दृश्यमान है. स्लाइड फ्लिप पर और रिवर्स साइड स्कैन ।
- imagej सॉफ्टवेयर का उपयोग कर प्रत्येक अनुभाग के इंफार्क्शन क्षेत्र की गणना ।
- छवि फ़ाइल खोलें और छवि के लिए स्केल सेट करें ।
- infarct क्षेत्र का चयन करने के लिए मुक्तहस्त चयन का उपयोग करें ।
- रुचि के क्षेत्र को मापने के लिए ब्याज (ROI) प्रबंधक के क्षेत्रों का उपयोग करें ।
- प्रत्येक अनुभाग के लिए इंफार्क्शन क्षेत्रों को योग करें और कुल इंफार्क्शन वॉल्यूम का अनुमान लगाने के लिए अनुभाग मोटाई द्वारा परिणाम को गुणा करें ।
4. सांख्यिकीय विश्लेषण
- छात्र के टी-टेस्ट के साथ सांख्यिकीय महत्व का निर्धारण करने के लिए graphpad चश्मे 6 का प्रयोग करें.
नोट: बार रेखांकन पर त्रुटि पट्टियां माध्य (sems) की मानक त्रुटियों का प्रतिनिधित्व करते हैं । - उपयोग जी * पावर ३.१ उचित नमूना आकार की गणना और एक शक्ति विश्लेषण करने के लिए10.
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Representative Results
इस mcao/reperfusion प्रक्रिया सही एमसीए के आसपास के क्षेत्र में एक cortical infarct का उत्पादन किया और एक व्यवहार घाटे का कारण बना । ischemia प्रेरित infarct मात्रा के विभिंन डिग्री (चित्रा 1a, बी) और न्यूरोनल हानि (चित्रा 1 सी, डी) बंधाव अवधि में वृद्धि के माध्यम से सही एमसीए क्षेत्र के सेरेब्रल प्रांतस्था में बनाया गया था । इस mcao/reperfusion चोट mcao के बाद ४८ ज पर जानवर के लोकोमोटर गतिविधि में कमी आई/ परिधीय प्रतिरक्षा कोशिकाओं (CD45उच्च कोशिकाओं) के एक थोक भी सेरेब्रल इस्कीमिक के बाद इस्कीमिक मस्तिष्क (ipsilateral गोलार्द्ध) घुसपैठ-रिपरफ्यूजन (चित्रा 3). इसके अलावा, हम mcao मॉडल के साथ इस दो पोत रोड़ा मॉडल की तुलना में और पाया कि इन दो मॉडलों के infarct संस्करणों काफी अलग नहीं थे (चित्रा 4) । मृत्यु दर कम थी (< 5%) सेरेब्रल ischemia के दो पोत रोड़ा माउस मॉडल में-reperfusion । सर्जरी के दौरान अगर अत्यधिक रक्तस्राव हुआ था तो हमने चूहों को आगे के विश्लेषण से बाहर रखा । जब शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं सही ढंग से पीछा किया गया, craniectomy या एमसीए से अत्यधिक रक्तस्राव के कारण पशु बहिष्करण की दर से कम था 15%. सही एमसीए या सीसीए अकेले का रोड़ा रोधगलन का कारण नहीं था ।
चित्रा 1: infarct मात्रा और न्यूरोनल नुकसान सकारात्मक पोत रोड़ा की लंबाई के साथ सहसंबद्ध हैं । (क) एमकेओ/रीपरफ्यूजन के बाद चूहों से मस्तिष्क स्लाइस के प्रतिनिधि टीटीसी दाग, 24 एच । mcao की अवधि 10 या ४० मिनट थी । दिखाए गए डेटा तीन स्वतंत्र प्रयोगों के प्रतिनिधि हैं. (इ) इंफारक्ट आयतन का परिमाणन । त्रुटि पट्टियां sems का प्रतिनिधित्व करती हैं; n = 8; *पी < ०.०५. (ग) MAP2 अभिव्यक्ति में बी 6 दिमाग में mcao के बाद 24 ज/रिपरफ्यूजन इम्यूनोहिस्टोकैमिस्ट्री का उपयोग करके निर्धारित किया गया था । MAP2-नकारात्मक क्षेत्रों मस्तिष्क खंड के MAP2 धुंधला के प्रतिनिधि छवि में एक धराशायी लाइन से संलग्न हैं । (घ) MAP2 ऋणात्मक क्षेत्र का परिप्रमाणन. MAP2-ऋणात्मक क्षेत्र (%) = ipsilateral MAP2-ऋणात्मक क्षेत्र/contralateral गोलार्द्ध x १००; n = 3; * p < ०.०५.
चित्रा 2: लोकोमोटर गतिविधि सेरेब्रल इस्कीमिया के बाद कमी आई-reperfusion. (क) लोकोमोटॉर गतिविधि का विश्लेषण किया गया ४८ ज के बाद mcao/ mcao की अवधि ४० मिनट थी । डेटा एक खुले क्षेत्र परख में ६० मिनट के लिए दर्ज किए गए । चूहों की ट्रैकिंग दूरी चतुराई से topscan १.० का उपयोग कर विश्लेषण किया गया. अन्तर्वासना नियंत्रण समूह में चूहों का समावेश था जो एमसीए या सीसीएल की आड़ के बिना सर्जरी से गुजरा था । (ख) अन्तर्वासना और एमकेओ/रिपरफ्यूजन चूहों द्वारा स्थानांतरित दूरी का परिमाणन । डेटा को माध्य ± SEM के रूप में प्रस्तुत किया गया है; n = 7; *पी < ०.०५. कृपया यहां क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए ।
चित्रा 3: परिधीय प्रतिरक्षा कोशिकाओं सेरेब्रल इस्कीमिक के बाद इस्कीमिक गोलार्द्ध में घुसपैठ-reperfusion । (क) मस्तिष्क-प्रतिरक्षा कोशिकाओं में घुसपैठ (CD45उच्च कोशिकाओं) ipsilateral और contralateral गोलार्द्ध में, पर 24 ज के बाद mcao/reperfusion, प्रवाह cytometry द्वारा विश्लेषण किया गया. मस्तिष्क-घुसपैठ प्रतिरक्षा कोशिकाओं के अलगाव एक पिछले अध्ययन में वर्णित किया गया है4. mcao की अवधि ४० मिनट थी. (ख) ipsilateral और contralateral गोलार्द्ध में मस्तिष्क-घुसपैठ प्रतिरक्षा कोशिकाओं का परिमाणन, mcao के बाद 24 ज पर/रिपरफ्यूजन. डेटा को माध्य ± SEM के रूप में प्रस्तुत किया गया है; n = 4; *पी < ०.०५.
चित्रा 4: infarct मात्रा mcao-और mcao/reperfusion-प्रेरित चोटों के बीच अलग नहीं है । (क) चूहों से मस्तिष्क स्लाइस के प्रतिनिधि ttc दाग, mcao के बाद 24 ज. mcao प्रयोगात्मक समूह में, सही एमसीए स्थायी रूप से एक पोत cauterizer का उपयोग कर काट दिया गया था, जबकि सही सीसीए transiently ४० मिनट के लिए ligated था. mcao/reperfusion (mcao/प्रतिनिधि) प्रायोगिक समूह में, प्रक्रिया के रूप में प्रोटोकॉल की धारा 1 में वर्णित किया गया था । mcao की अवधि ४० मिनट थी (ख) infarct मात्रा का परिमाणन । डेटा को माध्य ± SEM के रूप में प्रस्तुत किया गया है; n = 7.
तालिका 1: विभिन्न प्रयोगों से infarct वॉल्यूम और परिवर्तनशीलता की तुलना. infarct मात्रा में निर्धारित किया गया था 24 ज के बाद mcao/reperfusion से तीन स्वतंत्र प्रयोगों. mcao की अवधि ४० min. SD = मानक विचलन था; n = प्रयोग प्रति इस्तेमाल चूहों की संख्या ।
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Discussion
mcao/reperfusion माउस मॉडल आमतौर पर मानव में क्षणिक ischemia नकल करने के लिए कार्यरत एक पशु मॉडल है । इस पशु मॉडल ट्रांसजेनिक और पीटकर चूहों उपभेदों को स्ट्रोक की pathophysiology जांच करने के लिए लागू किया जा सकता है । प्रोटोकॉल में कई कदम विशेष रूप से महत्वपूर्ण हैं । (1) microdrill सावधानी से इस्तेमाल किया जाना चाहिए जब खोपड़ी में एक छेद बनाने, अनुचित कार्रवाई के साथ आसानी से एमसीए से रक्तस्राव के कारण. (2) एमसीए क्षतिग्रस्त नहीं किया जाना चाहिए, और खून बह रहा से पहले और बंधाव प्रक्रिया के बाद बचा जाना चाहिए. एमसीए को नुकसान इस्कीमिक ब्रेन7में रिपरफ्यूजन के स्तर को प्रभावित करता है । एमसीओ के बाद एमसीए रिपरफ्यूजन स्थिति की जांच होनी चाहिए । रोड़ा और एमसीए करने के लिए रक्त के प्रवाह की बहाली एक लेजर डॉपलर का उपयोग करके विश्लेषण किया जा सकता है । (३) सीसीएल के अलगाव के दौरान सीसीएल को खून नहीं देना चाहिए. (४) वेग्स नर्व को सीसीए आइसोलेशन के दौरान क्षतिग्रस्त नहीं किया जाना चाहिए क्योंकि इससे इन्फारक्ट साइज और मृत्युदर की संभावना बढ़ सकती है. (5) माउस के शरीर का तापमान ३६.५ ± ०.५ डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखा जाना चाहिए । हाइपरथर्मिया इंफारक्ट आकार और मृत्यु दर11की संभावना को बढ़ाता है । हाइपोथर्मिया सेरेब्रल इस्केमिया12के बाद infarct मात्रा को कम करता है ।
इस mcao/reperfusion मॉडल का महत्व यह है कि यह उच्च प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य cortical infarcts और व्यवहार घाटा4बना सकते हैं । इस तरह के रूप में hypoxic इस्कीमिक (एच/मैं स्ट्रोक मॉडल के रूप में विभिंन mcao मॉडल, के साथ तुलना में पिछले एक अध्ययन में वर्णित8, यह दो पोत रोड़ा मॉडल infarct मात्रा में एक अपेक्षाकृत छोटे परिवर्तनशीलता लाती (भिंनता के गुणांक से 0.11-0.17) (तालिका 1) । वैकल्पिक स्ट्रोक मॉडल, इस तरह के रूप में intraluminal फिलामेंट मॉडल, सर्जरी के बाद एक अप्रत्याशित infarct मात्रा में परिणाम की अनिश्चित स्थिति की वजह से हो सकता है और reperfusion हालत13। तीन पोत mcao मॉडल के साथ तुलना में (सही एमसीए और सही और वाम ccas)14, प्रस्तावित मॉडल के बंधाव केवल दो जहाजों (सही एमसीए और सही सीसीए) के बंधन मस्तिष्क ischemia प्राप्त करने के लिए शामिल है । नतीजतन, एक छोटी सर्जरी के समय तीन पोत mcao मॉडल की तुलना में आवश्यक है । इस mcao/reperfusion मॉडल की मुख्य सीमा है कि यह craniectomy की आवश्यकता है एमसीए ligation प्रदर्शन करने के लिए । एक अध्ययन से संकेत मिलता है कि craniotomy मस्तिष्क में transcriptional परिवर्तन का कारण बनता है15. इसलिए, एक अन्तर्वासना नियंत्रण जीन अभिव्यक्ति पर mcao/reperfusion के प्रभाव को निर्धारित करने के लिए आवश्यक है ।
cortical क्षेत्र में न्यूरोनल हानि कम है जब एक लंबे समय तक reperfusion अवधि कार्यरत है. अध्ययनों से यह दर्शाया गया है कि MAP2-ऋणात्मक क्षेत्र रिपरफ्यूजन के 7 दिनों के बाद छोटा होता है, जो4,16के 2 दिनों के साथ तुलना करता है । हालांकि, इस वसूली प्रभाव ischemia के साथ एक मस्तिष्क में संभावना नहीं है mcao17,18के एक intraluminal मोनोफिलामेंट मॉडल द्वारा प्रेरित । इसके अलावा, mcao का इन्ट्राएल्यूमिनल मोनोफिलामेंट मॉडल कम से 7 दिनों के लिए इंफारक्ट आकार को बनाए रख सकता है ।
B6 चूहों पूर्वकाल सेरेब्रल धमनी और एमसीए के बीच व्यापक collateralization है19. जब हम स्थायी रूप से इस्कीमिक मस्तिष्क में एमसीए काट दिया, हमने पाया कि infarct मात्रा mcao के बाद 24 एच में एक reperfused एमसीए के साथ चूहों से काफी अलग नहीं था (चित्रा 4). इसलिए, हम सुझाव देते हैं कि पूर्ववर्ती सेरेब्रल धमनी से रक्त के प्रवाह को एमसीएल क्षेत्र के इस्कीमिया प्रभावों के लिए क्षतिपूर्ति हो सकती है जब डिस्टल एमसीए स्थायी रूप से है ।
इस अध्ययन में, दो पोत mcao/reperfusion मॉडल एक ischemia-reperfusion चोट बनाया और परिधीय प्रतिरक्षा कोशिकाओं को इस्कीमिक मस्तिष्क में घुसपैठ की वजह से । इस मॉडल मस्तिष्क और प्रतिरक्षा प्रणाली के बीच परस्पर क्रिया की जांच करने के लिए नियोजित किया जा सकता है । इसके अलावा, यह संभावित neuroprotectants या दवाओं कि मस्तिष्क ischemia के बाद प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया मिलाना परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है-reperfusion.
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Disclosures
लेखकों का खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
इस काम के विज्ञान और प्रौद्योगिकी मंत्रालय द्वारा समर्थित किया गया था, ताइवान (सबसे 106-2320-b-038-024, सबसे 105-2221-E-038-007-MY3, और सबसे 104-2320-b-424-001) और ताइपे मेडिकल विश्वविद्यालय अस्पताल (107tmuh-SP-01). इस पांडुलिपि वालेस अकादमिक संपादन द्वारा संपादित किया गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bone rongeur | Diener | Friedman | |
| Buprenorphine | Sigma | B-044 | |
| Cefazolin | Sigma | 1097603 | |
| Chloral hydrate | Sigma | C8383 | |
| Dissection microscope | Nikon | SMZ-745 | |
| Electric clippers | Petpro | ||
| 10% formalin | Sigma | F5304 | |
| Germinator dry bead sterilizer | Braintree Scientific | ||
| Iris Forceps | Karl Klappenecker | 10 cm | |
| Iris Scissors | Diener | 9 cm | |
| Iris Scissors STR | Karl Klappenecker | 11 cm | |
| Microdrill | Stoelting | FOREEDOM K.1070 | |
| Micro-scissors-Vannas | HEISS | H-4240 | blade 7mm, 8 cm |
| Mouse brain matrix | World Precision Instruments | ||
| Non-invasive blood pressure system | Muromachi | MK-2000ST | |
| Operating Scissors STR | Karl Klappenecker | 14 cm | |
| Physiological Monitoring System | Harvard Apparatus | ||
| Razor blades | Ever-Ready | ||
| Stoelting Rodent Warmers | Stoelting | 53810 | Heating pad |
| Suture clip | Stoelting | ||
| Tweezers | IDEALTEK | No.3 | |
| Vetbond | 3M | 15672 | Surgical glue |
| 10-0 suture | UNIK | NT0410 | |
| 2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride | Sigma | T8877 |
References
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