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Medicine

검출 하는 혈 청 알레르기 항 원 특정 면역 글로불린 e (sIgE) 바이오 미세 기술의 응용

doi: 10.3791/59100 Published: April 21, 2019
* These authors contributed equally

Summary

이 종이 알레르기 진단에 미세 화학 카트리지 기반 시스템의 유용성 평가와 특정 혈 청 면역 글로불린 E를 탐지 하기 위한 프로토콜을 제공 합니다.

Abstract

알레르기 질환은 성인과 아이 들 둘 다에 일반적 이다. 원인이 알레르기 증상의 질병 관리 및 예방에 중요 하다. 그러나 높은 가격-성능 비율 특정 면역 글로불린 E (IgE) 측정 시스템은 주치의 병원에서 특히 중국 본토에서에서 부족 한. 이 문서에서는 미세 화학 카트리지 기반 시스템을 사용 하 여 알레르기 관련 IgE 혈 청에서 검출 하는 원리 및 운영 절차를 설명 합니다. 결과 ImmunoCAP (시스템 1), 산업 표준 비교 되었다 고 환자 일반적인 알레르기에 민감하게 감지 시스템의 재현성 평가. 결과는 ImmunoCAP (시스템 1), 비해 BioIC 시스템 (시스템 2)는 좋은 정밀도 및 감도 다양 한 흡입 및 식품 알레르기에 대 한 하지만 훨씬 저렴 한 비용으로 특정 혈 청 IgE 검출에 나타났다. 그것은 낮은 금융 경제성 있는 본토 중국에서 1 차 진료 병원 시스템 1에 좋은 대안이 될 수 있습니다.

Introduction

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알레르기의 유행 지난 수십 년간에서 꾸준히 증가 하 고 세계 인구1의 20%-30%에 영향을. 원인이 알레르기 증상의 질병 관리에 중요 한 의미가 있습니다. 중국에서는, 등록 된 vivo에서 피부 자식 시험 국가에서 사용할 수 있습니다 이후, 특정 혈 청 IgE의 생체 외에서 결정은 가장 중요 한 도구 일반적으로 사용 되 나 알레르기를 입력2를진단 한다. 이것은 서방 세계에서 관행 이지만 ImmunoCAP 시스템 (시스템 1), 형광 효소 연결 된 immunosorbent 기본 시스템, 생체 외에서 알레르기 진단3골드 표준으로 인식 되, 비록 중국에 있는 그것의 사용 때문에 매우 제한 된 높은 장비 및 시 약 가격 하. 따라서 높은 가격-성능 비율을 새로운 다른 알레르기 진단 시스템은 나쁘게 필요 합니다.

BioIC 시스템 (시스템 2) 특정 혈 청 IgE의 다중화 분석 실험에 대 한 화학 원리에 따라 미세 카트리지 기반 시스템입니다. 크기는 7 cm x 4 cm, 미세 카트리지는 사출 성형 플라스틱의 3 레이어 구성 됩니다. 상단 부분은 3 m m 두꺼운 투명 폴 리 카보 네이트 열 어셈블리 프로세스 동안 좋은 안정성을 운반입니다. 3 m m 두꺼운 레이어 아크릴로 니트 릴, 부 타 디 엔, 스 티 렌 (ABS)의 공중 합체에서 건설, 함께 그것은 0.5 m m 두꺼운 중간 레이어 실리콘 고무의 만든 샌드위치. 블랙 색상에서 이기 때문에, 중간 계층 화학 탐지 동안 낮은 백그라운드를 제공 합니다. 실리 카 겔 위에 nitrocellulose 막 (NC 멤브레인)의 얇은 층 다른 allergenic 단백질의 야생 수 있는 반응 영역에 해당 하는 위치에 살포 된다. 이 연구의 목적은 혈 청 ige의 알레르기 관련의 다중화 된 결정에 대 한 미세 시스템의 임상 성과 평가 하는 것입니다.

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Protocol

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이 연구와 인간의 혈 청 샘플의 사용의 첫 번째 제휴 병원의 광주 의과대학 (GYYY-2016-73)의 윤리 위원회에 의해 승인 되었다. 독립적으로 또는 (어린이)의 경우 그들의 부모를 통해 모든 참가자가 그들의 서 면된 동의 주었습니다.

1. 기본 정보 연구 그룹의

참고: 상태 키 실험실의 호흡기 질병 (공기-SKLRD)의 알레르기 정보 저장소는 광저우 연구소 호흡기 병원 (GIRH) 내의 설립 큰 혈 청 은행입니다. 지난 10 년간에서 시작, 공기 SKLRD 이미 수집 하 고 그들의 임상 정보 (표 1)4,5함께 알레르기 질환을 가진 환자에서 혈 청 샘플을 저장 하기 시작 했다. 현재 연구는 공기-SKLRD에서 세라와 함께 수행 되었다.

  1. 6 월 2018 년 1 월 2015에서 수집 하는 세라에 대 한 공기-SKLRD의 데이터베이스를 검색 하 고 지역에서 일반적인 알레르기에 민감한 것을 발견 했다 알레르기 질환을 가진 환자를 선택 합니다.
  2. 모든 선택 된 환자는 알레르기 관련 질환, 알레르기 비 염 및 천식, 알레르기 성 피부염, 두 드러 기, 등 여러 혈 청 알레르기 항 원 특정 면역 글로불린 E (sIgE)이 환자의 혈 청에 포함 되어 있는지 확인 시스템 1에서 검색 하는이 지역에서 일반적인 알레르기의 sensitizations.
  3. 그 후속, 과학적 목적, 그는 확인 된 면역 결핍, immunotherapy에 현재 그에 대 한 그들의 혈 청 샘플의 사용에 관한 동의 제공을 거부 하는 사람들을 잃은 불완전 한 의료 기록, 환자 제외 또는 immunomodulatory 에이전트, 또는 그 기생 감염을 발견.
  4. 치료 또는 약물 처방 혈 청 컬렉션 이전 실험실 연구 결과에 간섭을 최소화 하기 위하여 주어진 확인 하십시오. 기준을 충족 하지 않는 모든 혈 청 샘플을 거부 했다.

2. 연구의 흐름과 관심의 측정

참고: 미세 시스템 19 알레르기를 확인 하기 위한 혈 청의 100 µ L를 필요 합니다. 정 맥 혈액 (5 mL) 진공 혈관을 포함 하는 분리 젤을 사용 하 여 각 환자에 게 서 수집 되었다. 1000 x g에서 10 분 동안 centrifuging 후 상위 계층 테스트를 위해 수집 되었다. 사용 되지 않는 혈 청-80 ° c.에 저장 된 테스트, 이전 혈 청 30 분 동안 실내 온도에 유지 되었다 그리고 소용돌이 믹서와 동요 되었다. 반복된 그리고 freeze-thaw 주기 피 했다.

  1. 주로 테스트 sIgEs Dermatophagoides pteronyssinus (d1), Dermatophagoides farinae (d2), Blomia tropicalis (d201), 고양이 비 듬 (e1), 개 비 듬 (e5), 버뮤다 잔디 (g2)의 모든 알레르기에 대 한 혈 청 샘플, 티모시 ( g6), 바퀴벌레 (i6), Aspergillus fumigatus (m3), 칸디 다 albicans (m5), ragweed (w1), 달걀 흰 자 위 (f1), 우유 (f2), 밀 (f4), 땅콩 (f13), 콩 (f14), 아몬드 (f20), 게 (f23)와 새우 (f24). 섹션 3에서에서 주어진 지침을 따르십시오.
    참고: sIgE 결정 화학 분석기에 의해 분석 결과 (참조 테이블의 재료) 키트 및 측정 관련 알레르기 IgE와 수행 되었다.
  2. 임의로 재현성 연구에 대 한 충분 한 혈 청 (적어도 900 µ L)으로 3 개의 샘플 샘플 중에서 선택 합니다. 9 일 연속에 대 한 알레르기 sIgEs에 대 한 3 세라를 매일 측정 모든 조건 변경, 유지 (즉, 100 x 9 = 900의 총 혈 청의 µ L).

3. 반 자동화 미세 시스템의 테스트 절차

참고: 시스템 2 자동 미세 기술, 단백질 microarray, 형광 분석, 병렬 ige의 분석, 및 이미지 처리 기술을 통합 이다. 테스트 프로토콜 4 부분으로 나누어져 있습니다: 장비, 샘플 로드, 부 화, 및 측정의 준비.

  1. 장비 준비
    1. PC 및 분석기 전원을 켭니다.
      참고: 전원 스위치는 기지의 왼쪽에.
    2. PC에서 LabIT 프로그램을 시작 합니다. 어두운 프레임 경고 창이 팝업 경우 누설 테스트를 실행 하려면 확인 을 클릭 합니다. 그 후, 센터 로고 작업 인터페이스를 클릭 합니다.
      참고: 시스템 유휴 24 h에 대 한 누출 시험 을 실행 사용자 생각나 게 합니다.
    3. 반응 온도 CCD (전 하 결합 소자) 온도 화면의 오른쪽 아래 모서리에 확인 합니다. 반응 온도 37 ° C ± 1 ° C에서 약 10 분, 상승 한다 그리고 CCD 온도-15 ° C ±에 드롭 해야 1 ° c.
    4. CCD 온도-15 ° C ± 감소 했다 후 누출 테스트 실행 1 ° c. 누설 테스트를 실행 하기 전에 다른 항목이 악기 안에 남아 있는지 확인 하 고 문을 닫습니다. 도구 | 시스템 테스트 | 누설 테스트합니다. 테스트 하는 동안 문을 열지 마십시오. 테스트가 완료 되 면 보고서 창이 팝업 됩니다.
  2. 샘플 로딩
    1. 미세 카트리지에 해당 시 약 탱크를 세척 버퍼, 블로킹 버퍼의 120 µ L, A와 B 60 µ L 기판 A와 B, 그리고 혈 청 샘플의 100 µ L 어원이 같은 말의 60 µ L의 620 µ L를 추가 합니다.
  3. 부 화
    1. 카트리지 ID에 클릭 하 고를 사용 하 여 바코드 스캐너 카트리지의 일련 번호를 스캔, 샘플 ID 입력, 분석기에 카트리지를 넣어 문을 닫은 분석기 및 분석을 시작 하려면 실행 을 클릭 합니다.
  4. 측정
    1. 측정 후 결과를 통계 소프트웨어 (예: Excel)을 내보냅니다.
      참고: 외피의 30 분 후 분석기 자동으로 측정을 수행 하 고 결과 보고.
  5. 분석기의 전환
    1. 테스트를 마친 후 일상적인 유지 보수에 대 한 카트리지를 제거 하 고 분석기의 내부 난방 철 75% 알코올로 가볍게 전자석을 닦아.
      참고: 눌러 하드 하거나 전자석 흔들 없습니다.
    2. LabIT 창을 닫습니다. 온도 모니터링 창이 나타납니다. CCD는 5 ° C 보호 모드를 데우는 때 그것은 자동으로 닫힙니다. 다음으로, 분석기 및 PC의 전원을 꺼도 안전 합니다 것입니다.
      참고: 수동으로 닫지 마십시오 CCD 온도 5 ° C에 증가 했다 전에 창 모니터링 온도 그리고 CCD 워밍업 동안 분석기도 PC의 전원을 설정 하지 마십시오.

4입니다. sIgE 반응의 정의

참고: undiluted 혈 청 견본에 대 한 시스템 2의 탐지 범위는 0.21-100 IU/mL.

  1. 0.35 IU/mL의 임계값에 따라 달라 집니다, 긍정적인6,70.35 IU/mL를 초과 하는 sIgE 수준 고려. 8sIgE 테스트의 반응성을 평가: 1 클래스 (≥0.35 및 < 0.70 IU/mL), 2 클래스 (≥0.70 및 < 3.50 IU/mL), 3 클래스 (≥3.50 및 < 17.50 IU/mL), 4 클래스 (≥17.50 및 < 50.00 IU/mL), 5 클래스 (≥50.00 및 < 100.00 IU/mL) 그리고 클래스 6 (≥100.00 IU/mL).

5. 통계 분석

  1. 19 알레르기 (그림 1)의 긍정적인 속도 표시 Levey 제닝스 곡선을 사용 하 여 검출 시스템 (그림 2)9의 반복성을 설명 하는 히스토그램을 사용 합니다.
  2. 세 가지 가장 일반적인 흡입 알레르기 및 식품 알레르기 (총 6 개 알레르기)에서 선택한 나 시스템 1의 임상 진단 성능10,11평가 하는 결과 비교 합니다. 용어 색인 속도, 감도, 특이성, 긍정적이 고 부정적인 예측 값 및 평가 기준으로 운영 하는 특성 (ROC) 곡선 (AUC) 수신기 아래의 영역을 포함 합니다.
  3. 두 시스템 간의 상관 관계를 설명 하 고 카파 값을 사용 하 여 일관성에 대 한 Spearman의 상관 관계 분석12 를 적용 합니다. 카파 값을 거의 분류 완벽 (0.8-1.0), 실질적인 (0.6-0.8), 보통 (0.4-0.6), 공정 (0.2-0.4), 또는 가난한 (< 0.2)13. SPSS 23.0 및 MedCalc 11.0 통계 분석을 사용 하 고 P 를 정의 < 0.05 통계적 인 의미.

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Representative Results

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19 일반적인 알레르기 증상에 대 한 긍정적인 요금
293 세라에 대 한 결과 그림 3에 나와 있습니다. 모든 흡입 알레르기 중 D. farinae 높은 긍정적인 평가 했다 (80.89%, 273/293), 뒤에 pteronyssinus (78.84%, 231/293)입니다. 식품 알레르기 중 게는 긍정적인 비율 (20.48%, 60/293), 13.65% (40/293) 새우에 대 한 다음. 흡입 알레르겐에 대 한 총 긍정적인 평가 식품 알레르기에 대 한 보다 더 높았다.

미세 시스템의 반복성
반복성 결과 고양이 비 듬, 개 비 듬, 바퀴벌레에 따라 테스트, 9 라운드 했다 32.98 ± 8.94, 1.61 ± 0.48, 및 0.76 ± 0.18, 각각, 그리고 일관성 레벨은 100% (9/9), 100% (9/9), 및 67% (6/9). 결과의 분포는 그림2에서 Levey 제닝스 곡선으로 표시 됩니다. 모든 데이터는 최대 허용 가능한 임상 오류14와 일치 하는 X ± 2 x SD의 범위 내에 있습니다.

두 시스템의 비교
질적 결과 보여주었다는 고양이 비 듬 했다 시스템 1로 가장 높은 색인 (95.33%, 243/150). 가장 낮은 색인 새우에 보였다 (40.75%, 88/216). 95.33% 92.00%에서 배열 했다 흡입 알레르기 중 용어는 총 색인 식품 알레르기에 대 한 색인 범위 40.74%-72.39% 이었다. 흡입 제에 대 한 높은 감도 100%로 Dermatophagoides farinae (93.94%)에서 보였다. 식품 알레르기 가운데 가장 높은 감도 땅콩 (54.55%)에서 80.65%의 특이성으로 보였다. 표 2 는 또한 흡입 알레르겐에 대 한 모든 평가 결과 우수 식품 알레르기를 했다 보여줍니다. AUC 값을 0.984에 이르기까지 0.613 보여주었다 있기 때문에 3 개의 흡입 알레르겐에 대 한 AUC 0.950 보다 컸다, 시스템 2 시스템 1에 관하여 높은 정확도 결론 수 있습니다.

두 시스템에 대 한 일관성 분석 3 개의 흡입의 카파 값 0.727-0.876 0.876 (95 %CI, 0.786-0.965) 고양이 비 듬에서 볼 높은 값 사이 나타났다. 그들은 일반적으로 떨어졌다는 식품 알레르기에 대 한 모든 카파 값 보다 < 0.400. 카파 최소값은 0.112 새우 (95 %CI, 0.062-0.162) (표 3). 최고의 상관 관계를 보였다 spearman의 상관 관계 분석 했다 땅콩 및 고양이 비 듬에서 상관 계수 r = 0.942 (95 %CI, 0.907-0.965; p < 0.0001)와 r = 0.927 (95 %CI, 0.900-0.947; p < 0.0001), 각각.

그림 3, 점도 x따라 시스템 2의 결과 구성-축 및 y따라 시스템 1-결과를 보여주기는 sIgE의 분포 농도 두 시스템에서 D. pteronyssinus, d.에 대 한 축 화분, 고양이 비 듬, 우유, 새우, 그리고 땅콩. 색인 및 부조화 분석에 대 한 알레르기는 ± 1 클래스 차이 했다 D. pteronyssinus (91.60%, 250 대 229), D. farinae (81.25%, 112 대 91), 고양이 비 듬 (98.00%, 150 대 147), 우유 (83.58%, 112 134 대), 새우 (59.72%, 216 대 129), 그리고 땅콩 (76.56%, 64 대 49). 결합 된 총 일치 율은 81.75% (926 대 757) 이었다.

Figure 1
그림 1: 미세 분석 결과 의해 19 일반적인 알레르겐의 검출의 양성 율. d1- Dermatophagoides pteronyssinus, d2- Dermatophagoides farinae, d201- Blomia tropicalis, e1-고양이 비 듬, e5-개 비 듬, g2-버뮤다 잔디, g6-디 모 데 잔디, i6-바퀴벌레, m3- Aspergillus fumigatus, m5- Candida albicans, w1-ragweed, f1-달걀 흰 자 위, f 2-f 4-밀, 우유, f13-땅콩, f14-콩, f20-아몬드, f23-게, 그리고 f24-새우. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 2
그림 2: 반복 미세 시스템에 의해 감지 하는 세 가지 알레르기 증상의 Levey 제닝스 그래프. (A) 고양이 머리, (B) 개 머리, 그리고 (C) 바퀴벌레 반복성 평가 위해 선정 됐다. 검정, 녹색, 노란색, 빨간색 라인 대표 (X), 평균 ± 표준 편차 (SD X ±) 평균 평균 + 표준 편차 (± 2SD), X 2 및 평균 + 표준 편차 시간 시간 여러 측정 (X ± 3SD) 3, 각각. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

Figure 3
그림 3: 6 알레르기 sIgE 농도 측정의 음모를 피해 라 시스템 1. 시스템 1 (Y-축) 및 시스템 2 (X-축). 줄거리에 각 줄 클래스 차단 나타냅니다 (클래스 0: 0.35, 클래스 1: 0.35-0.7, 클래스 2: 0.7-3.5, 클래스 3: 3.5-17.5, 클래스 4: 17.5-50, 클래스 5시 50분-100, 및 클래스 6: > 100 IU/mL). 음영 처리 된 상자 농도 클래스에서 조화 된 지역 이다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.

특성 No.(%)
성별, n(%)
여성 123(41.98%)
남성 170(58.02%)
나이, 년, n(%)
중간값 (25%, 75%) 23(8,36)
≤ 10 97(33.11%)
11-20 37(12.63%)
21-40 101(34.47%)
> 41 58(19.80%)
진단, n(%)
알레르기 비 염 92(31.40%)
알레르기 성 천식 117(39.93%)
천식과 알레르기 비 염 36(12.29%)
다른 사람 48(16.38%)

표 1: 환자 인구 통계 학적 특성. 총 293 과목 누가 23 (interquartile에서 범위 8 36 세)의 평균 연령 포함 기준 충족을 발견 했다. 그들, 170 (58.02%) 중 남자와 123 (41.98%) 여성 이었다입니다. 또한, 92 (31.40%) 그들의 알레르기 비 염, 117 (39.93%) 했다 알레르기 성 천식, 36 (12.29%)를 했다 비 염과 천식, 48 (16.38%) comorbidity를 했다 다른 알레르기 질환, 음식 알레르기 또는 피부 알레르기 등을 했다.

샘플 크기 모자 + 모자- 전체 계약 SE SP PPV NPV AUC (95 %CI)
BioIC + BioIC- BioIC + BioIC-
d1 250 196 20 0 34 92.00% 90.74% 100.00% 100.00% 62.96% 0.975 (0.947 0.991)
d2 112 93 6 0 13 94.64% 93.94% 100.00% 100.00% 68.42% 0.984 (0.999 0.941)
e1 150 34 5 2 109 95.33% 87.18% 98.20% 94.44% 95.61% 0.968 (0.990 하 0.925)
f2 134 16 27 10 81 72.39% 37.21% 89.01% 61.54% 75.00% 0.744 (0.815에 0.661)
f13 64 18 15 6 25 67.19% 54.55% 80.65% 75.00% 62.50% 0.731 (0.834에 0.606)
f24 216 36 127 1 52 40.74% 22.09% 98.11% 97.30% 29.05% 0.613 (0.678에 0.545)
d1-Der. p1, d2-Der. f1, e1 고양이 비 듬, f2-우유, f13-땅콩, f24-새우. +-긍정, 모자 ImmunoCAP--부정, SE-감도, SP-특이성, PPV 긍정적인 예측 값, NPV 부정적인 예측 값, AUC-지역 ROC 곡선 아래. AUC 값에 대 한 95% 간격 값 (95 %CI)는 테이블에도 표시 됩니다.

표 2: 두 시스템 간의 임상 성능. d1- D. pteronyssinus, d2- D. 곡 식 가루, e1-고양이 비 듬, f2-우유, f13-땅콩, 그리고 f24-새우. 모자-ImmunoCAP, +-긍정적인,--부정, SE-감도, SP-특이성, PPV-긍정적인 예측 값, NPV-부정적인 예측 값, AUC-ROC 곡선 아래의 영역. AUC 값에 대 한 95% 간격 값 (95 %CI)는 테이블에도 표시 됩니다.

Kappa(95%,CI) Spearman'rho(95%,CI)
d1 0.727 (0.838에 0.617) 0.896 (0.918에 0.869)
d2 0.783 (0.617 0.948로) 0.731 (0.807에 0.631)
e1 0.876 (0.786 0.965에) 0.927 (0.900 0.947로)
f2 0.293 (0.463 0.122) 0.681 (0.763에 0.579)
f13 0.349 (0.569에 0.129) 0.969 (0.949 0.981에)
f24 0.112 (0.062 0.162에) 0.833 (0.788 0.870에)

표 3: 상관 관계와 두 시스템 간의 계약. d1- D. pteronyssinus, d2- D. 곡 식 가루, e1-고양이 비 듬, f2-우유, f13-땅콩, 그리고 f24-새우. 카파 Spearman의로 값에 대해 95% 간격 값 (95 %CI)는 테이블에도 표시 됩니다.

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Discussion

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많은 다른 연구 결과 유사15,16,17, 293 알레르기 환자 보여주었다 그 집에서에서 세라에 따라 미세 시스템에서 결과 먼지 진드기 ( D. pteronyssinus를 포함 하 여 D. farinae, 그리고 B. tropicalis)는 주요 흡입 알레르기 음식, 우유, 땅콩, 새우, 고 게 흔히 알레르기 알레르기 증상을 일으키는 원인이 되는 남쪽 중국에 있는 알레르기 질환을 선도. 재현성 연구 3 알레르기에 관하여 그들 모두 최대 허용 오차를 만난 즉 88.89%의 전반적인 반복 속도와 좋은 결과 보여주었다.

참고로 시스템 1을 사용 하 여, 현재 연구 평가 시스템 2의 임상 진단 효능. 컷오프20.35 IU/ml 혈 청 sIgE 수준으로 sIgE > 0.35 IU/mL과 샘플 환자는 알레르기와 높은 titer, 환자의 증상18에 상관 하는 더 나은 관계 임을 의미 합니다. 결과 쇼는 3 개의 흡입 알레르기의 일치 율 90% 이상 모든 했다. ~40.74%-72.39 %의 일치 했다, 식품 알레르기에 대 한 결과 뿐만 아니라 총 색인 81.75% (757/926) 이었다. D. pteronyssinus, D. 곡 식 가루, 고양이 비 듬의 카파 값 되었고 0.778, 0.663, 0.860 (p < 0.001), 각각. 식품 알레르기에 대 한 카파 값 0.4 아래 모든 했다. 3 주요 흡입 및 식품 알레르기, 양적 결과의 중요 한 상관 관계 (rSpearman ≈ 0.681 0.969, p < 0.01)는 두 시스템 간의 보였다.

그것은 rS 계수 동안 땅콩은 0.969, 일관성 평가 색인의 카파 값 이었다고만 발견 했다 0.349 (95 %CI, 0.129 0.569). 이러한 불일치의 지역에서 땅콩 감도 낮은 보급 한 것 그리고, 따라서, 대부분의 채용된 세라 그 특정 IgE에 대 한 부정 했다. 많은 연구는 sIgE titer 및 식품 알레르기의 임상 증상 사이 상당한 불일치를 볼 수 표시 했습니다. 음식 관련 ige의 결정에 대 한 다른 분석 결과 시스템의 사용 또한19큰 변화 만들 수 있습니다. 이 원시 섭취 음식 알레르기 증상을 트리거 아니에요 사실 수도 있지만 요리 또는 소화 하는 동안 생성 된 수정 된 구성 요소. 알레르기 증상을 다른 제조 업체에 의해 다른 원료를 사용 하 여도 결과 차이가20에 기여할 수 있다.

미세 카트리지는 5 개의 주요 부분으로 구성: 5 저장 탱크, 5 시 배달 채널, 5 개의 단방향 펌프, 어떤 알레르기에서 추출 물을 움직일 수 있다, 단 하나 반응 영역 및 모든 반응 부산물 수집 하 폐기물 탱크. 추출 반응 영역에 점선 수 40 알레르기까지 분석 결과 필요에 따라. PC에 의해 제어 5 단방향 펌프 가이드 혈 청 샘플, 세척 버퍼, 차단 시 약, 어원이 같은 말의 흐름을 조정 하 고 완료 한 2 단계 효소 연결 된 immunosorbent 분석 결과를 뺍니다. 반응이 완료 되 면 화학 반응 이미지는 저해상도 냉각된 CCD 카메라에 의해 캡처하고 양적 및 semiquantitative sIgE 결과 계산 하 고 보정 곡선을 설정 하는 PC에서 신호를 처리 하는 합니다.

현재 연구는 두 시스템 좋은 일관성을 보여 보여줍니다. 그러나, 시스템 1과 비교해, 시스템 2은 쉽게 사용할 수 있으며 작업자 교육에 대 한 낮은 수요 있습니다. 이후 각 미세 카트리지에 자체 품질 관리 곡선, 시스템의 안정성은 크게 향상. 시스템의 다른 장점은 빛 및 소형 풋프린트, 확장 가능한 모듈형 설치 및 작업 제어에 대 한 PC에 연결 되어 있는 용이성을 포함 합니다. 이러한 모든 장점을 크게 설치 및 운영 비용 감소와 같은 시간에 그들은 매일 임상 연습, 주치의 병원에서 알레르기 검사에 특히 적합 시키는 시스템의 정확성과 속도 요구를 위태롭게 할 하지 않을 중국에서. 그럼에도 불구 하 고, 미세 시스템의 1 개의 주요 결점은 아니에요 완전 자동 시스템 작업 중 빈번한 개입이 필요 하다. 그것은 아직도 매일 샘플의 큰 숫자를 처리 하는 데 필요한 시스템을 대체할 수 없습니다.

특정 알레르기 증상에 대 한 충분 한 긍정적인 세라의 부족,이 연구에서는 미세 카트리지, 그러나 단지 6 개의 일반적인 것 들 남부 중국에서 사용할 수 있는 모든 19 알레르기 커버 하지 않았다. 더 많은 연구 평가 인지 다른 알레르기에 적용 또한 정교 하 게 필요 하다.

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Disclosures

저자는 공개 없다.

Acknowledgments

저자는 원고 준비에 교수 메이 장 통계 분석에서 그녀의 도움 및 씨 망치 추이 감사합니다. 이 연구는 광주 과학 기술 재단 (201804020043) 및 국가 자연 과학 재단의 중국 (NSFC 81572063와 NSFC 81802076)에 의해 지원 되었다. 자금 그룹 연구 디자인, 데이터 분석, 원고 준비 및 게시 하기로 동의 했다. 다른 자금이 연구에 대 한 받았습니다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Agnitio BioIC Analyzer Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) BA-G2000
BioIC Allergen specific-IgE Detection Kit Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DR17A12
BioIC Cartrideg Placement plate Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) T20SET
BioIC Reagent Dispenser Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) DS-1
Image two-dimensional barcode machine Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) NLS-HR200
Software Package, LabIT Agnitio Science & Technology(Taiwan, China) Version 2.4.12
VORTEX-5 Vortex Mixer Haimen Kylinbell Lab Lastruments Co., Ltd. VORTEX-5

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검출 하는 혈 청 알레르기 항 원 특정 면역 글로불린 e (sIgE) 바이오 미세 기술의 응용
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Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).More

Huang, Z., Luo, W., Zou, X., Liu, X., Cai, C., Wu, Z., Hu, H., Sun, B. Application of Biochip Microfluidic Technology to Detect Serum Allergen-specific Immunoglobulin E (sIgE). J. Vis. Exp. (146), e59100, doi:10.3791/59100 (2019).

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