Summary
Опухоли мочевого пузыря мышиных индуцированных с канцерогенных нитрозаминов N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) (BBN). Поколение опухоли мочевого пузыря является неоднородной; Поэтому точной оценки бремени опухоли требуется до рандомизации для экспериментального лечения. Здесь мы представляем быстрый, надежный протокол МРТ для оценки размера опухоли и стадии.
Abstract
Мышиных пузыря опухоли модели имеют решающее значение для оценки новых терапевтических возможностей. Опухоли мочевого пузыря, индуцированной с канцерогенных нитрозаминов (BBN) N-butyl-N-(4-hydroxybutyl) выгодны над клеток линии на основе модели, потому что они тесно репликация геномной профили человека опухоли, и, в отличие от клеток модели и ксенотрасплантатов, они обеспечивают хорошая возможность для изучения immunotherapies. Однако поколение опухоли мочевого пузыря является неоднородной; Поэтому точной оценки бремени опухоли требуется до рандомизации для экспериментального лечения. Описанные здесь является BBN мыши модель и протокол для оценки мочевого пузыря рак опухоли бремя в естественных условиях с помощью последовательности быстрый и надежный магнитный резонанс (МР) (правда FISP). Этот метод является простым и надежным, потому, что, в отличие от УЗИ, Мистер зависит от оператора и позволяет для обработки простой после приобретения изображений и обзор. С помощью осевой изображений мочевого пузыря, анализ регионов интерес вдоль стенки мочевого пузыря и опухоли позволяют для расчета площади стены и опухоли мочевого пузыря. Это измерение коррелирует с ex vivo вес мочевого пузыря (rs= 0,37, p = 0,009) и стадии опухоли (p = 0.0003). В заключение BBN генерирует гетерогенных опухоли, которые идеально подходят для оценки immunotherapies, и МРТ может быстро и надежно оценить опухоли бремя до рандомизации для экспериментального лечения оружия.
Introduction
Рак мочевого пузыря является пятым наиболее распространенной формой рака в целом, отвечает за примерно 80 000 новых случаев заболевания и 16 000 смертей в Соединенных Штатах в 2017 году1. Примерно через 30 лет без значительных успехов для системного лечения рака мочевого пузыря2недавние испытания ингибитора анти PD-1 и анти PD-L1 КПП продемонстрировали захватывающие и иногда прочный ответы больных с передовой Urothelial карцинома3,4,5. Однако только около 20% больных показывают объективный ответ на эти процедуры, и необходимы дальнейшие исследования для расширения эффективного использования иммунотерапия больных с раком мочевого пузыря.
Мышиных мочевого пузыря рак модели являются важнейшими инструментами в доклинической оценке Роман лечения6,7. Для того чтобы контролировать размер опухоли при случайной мышей для различных методов лечения, опухоль бремя должны оценивать и контролируемых между группами лечения. Предыдущие исследования использовали УЗИ или биолюминесценции для оценки ортотопическая клеток на основе линии мочевого пузыря рак модели8,9,10,11. Однако оба методы представляют несколько недостатков. Ультразвуковых измерений могут зависеть от навыков оператора и отсутствие трехмерные характеристики и высокое пространственное разрешение. Биолюминесценции методы обеспечивают только полу количественной оценки опухолевых клеток и не позволяют для визуализации мочевого пузыря анатомии и морфологии. Кроме того биолюминесценцию может использоваться только с моделями на основе линии клеток, которые выражают биолюминесцентных генов в лысых мышей или мышей с белым пальто.
Магнитно-резонансная томография (МРТ), с другой стороны, предлагает уникальную гибкость в приобретении анатомических изображений с высоким разрешением, выставляют широкий спектр тканей контраст, который позволяет точную визуализацию и количественной оценки бремени опухоли без необходимости выразить биолюминесцентных свойства. Г-н изображения более легко воспроизводимые с соответствующий анализ трубопроводов и процедуру визуализации мочевого пузыря. Крупнейший ограничения МРТ, продолжительность времени, необходимого для обследования и связанные высокие затраты, которые ограничивают анализов высокой пропускной способности. Однако несколько исследований показали, что г-н последовательностей может предоставить диагностические изображения высокого качества, которые могут использоваться для эффективного выявления и мониторинга клетки опухоли мочевого пузыря, на основе линии; Таким образом они могут использоваться для высокой пропускной способности анализа9,12.
Здесь мы описываем неинвазивный метод, основанный на MR, надежно и эффективно охарактеризовать канцероген индуцированной пузыря опухолей у мышей. Для этого мы используем быстро изображений с установившемся прецессии MR техника (правда FISP), который гарантирует короткие сканирования сессий, обеспечивая высокое качество и высокое пространственное разрешение (~ 100 мкм) для обнаружения и измерения мочевого пузыря опухоли13. Кроме того чтобы подтвердить точность этой неинвазивной пробирного МРТ, мы описываем корреляции между МРТ производные параметры и ex vivo вес мочевого пузыря, а также стадии патологически подтвердил опухоли.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Все методы, описанные здесь были одобрены институциональный уход животных и использование Комитет (IACUC) Северо-Западного университета.
1. индукции опухоли с BBN
- Получение самцов мышей C57/BL6, каждая по крайней мере 6 недель.
Примечание: Мышей-самцов развиваться рак мочевого пузыря, более быстро и последовательно, чем самок мышей14,15. - Добавьте N-nitrosobutyl(4-hydroxybutyl) Амин (BBN) в дозе 0,05% питьевой воды. Сохранить его в контейнере непрозрачной и предоставить ad libitum как питьевая вода для мышей16.
Примечание: Хранение BBN решение в контейнере ясно будет деградировать канцероген17. - Измените 0,05% BBN воды два раза в неделю.
- Мониторинг животных, проверяя для признаки бедствия, связанные с опухоли мочевого пузыря, включая гематурия, фирма мочевого пузыря и масс. Осмотрите мышей дважды в неделю или в соответствии с местными IACUC руководящих принципов.
- Ожидаете опухоли развивать между 16 и 24 недель воздействия18.
2. МРТ установки
- Выполните подкожного введения стерильного физиологического раствора (0,1 – 0,2 мл, с помощью иглы и 1 мл шприца 25 – 27 G) 10 мин до МРТ для облегчения наполнения мочевого пузыря.
- Анестезировать каждая мышь с газовой смеси 100% O2 и изофлюрановая (2%-4% в случае необходимости). Проверка надлежащего плоскости анестезии путем проверки вывода рефлекс (мыс пинча) прежде. Применить стерильная глазная мазь для животного.
- Передача мыши владельцу изображений с ураном для доставки ингаляционных изофлюрановая (0,5%-3%).
- Следить за температурой тела и дыхания, используя ректальной температуры зонда, подключенных к компьютеру физиологических записи.
Примечание: Нормальной температуры тела (36 — 37 ° C) поддерживается с помощью рециркуляции горячей воды цепи, построен в животных держатель MR. Температура измеряется через ректальным датчиком и записанные на физиологические мониторинга компьютера, используя выделенный физиологического мониторинга программного обеспечения. Та же система используется для записи дыхания и ЭКГ сигналов измеряется через пневматические подушки под грудной клетки и через электроды ЭКГ 3-свинца. Дыхание сигнала также используется для запуска приобретения МРТ и уменьшения артефактов, связанных с движением дыхания.
3. МРТ изображения приобретение
- Используйте катушки тела квадрирования для возбуждения.
- Место 4-канальный приемник катушки на нижней части живота мыши проверяемых для оптимизированного обнаружения сигналов от региона интерес.
- Инициируйте автоматической корректировки путем комплексной визуализации программного обеспечения приобрести tri осевой набор изображений тела всей мыши. От этого ссылка набора изображений Определите области интереса (в данном случае, область мочевого пузыря).
- Приобрести три набора ортогональных нарезанных изображений вдоль аксиальная, фронтальная и сагиттальная плоскости, с использованием радиологических отсчета.
- Использовать истинный FISP изображений последовательности (включены как одна из функций в комплексной обработки изображений) с указанными ниже параметрами MR: TR = 900 МС, TE = 2 мс, FA = 70, 14 средние.
Примечание: Этот набор параметров позволяет для быстрой обработки изображений с высоким качеством диагностики, в том числе Утяжеление T1/T2 в < 10 мин на мышь. - Пространственное резолюции и кусочек толщиной определяются геометрические параметры, выбранные пользователем через графический интерфейс интегрированной платформы обработки изображений. Это приводит к серии фрагментов через весь пузыря толщиной 0,5 мм с разрешением в плоскости 0,148 мм.
4. г-н анализ изображений
- Определите набор ломтиками толщиной 0,5 мм и в плоскости резолюции 0,148 мм, охватывающих весь мочевого пузыря.
- Экспорт программного обеспечения анализ медицинских изображений, выбрав папку с соответствующими изображениями в формате ANALYZE.
- Выберите «представитель осевой вид» в центре пузыря для количественного анализа, прокрутка изображений, созданных и выявления кусочек на середину мочевого пузыря, который позволяет для визуализации стенки мочевого пузыря и люмен.
Примечание: Центр срез должен быть выбрали один с большим диаметром. - Тщательно разграничить области интереса (ROI) вручную трассировки границ вокруг внешнего края мочевого пузыря (BLAвне) и внутренний просвет (БЛАв) мочевого пузыря (см. схема и представительных цифры на рисунке 2) в выбранном представлении представитель осевой.
- Вычтите внутренний просвет от внешнего края к вычислить площадь поверхности стенки мочевого пузыря.
БЛАстены = блавне - блав
Примечание: Площадь поверхности мочевого пузыря управления с не опухоль, как ожидается, будет меньше, чем с опухоли мочевого пузыря.
5. эвтаназии и вскрытия мочевого пузыря
- После 20 недель BBN воздействия усыпить мышей с использованием стандартных оперативных процедур в соответствии с местными IACUC руководящие принципы.
- Чистота области разреза с 70% этанола, а затем понять и снять кожу брюшной стенки с щипцами.
- Сделайте срединной линии разреза от лобковой симфиза до мечевидного отростка.
- Резко надрезать брюшной полости, схватив с щипцами и промо с ножницами.
- Определите пузырь, который расположен в средней линии нижней части живота.
- Выявить и сократить средний пупочной связки, соединяющий купол мочевого пузыря в пупок и брюшной стенки.
- Захватите купол мочевого пузыря с щипцами для обеспечения countertraction и вскрыть мочевого пузыря от окружающих структур, включая семенные пузырьки, прямой кишки и жира.
- Идентифицировать мочеточников, мочевого пузыря ввода и резать с ножницами недалеко от мочевого пузыря.
- Подъема пузыря краниально, вырезать уретры с ножницами и удаление мочевого пузыря.
- Сразу же весят мочевого пузыря после промывки с PBS.
6. гистологическое обследование ткани мочевого пузыря
- Исправьте ткани мочевого пузыря в нейтральных буферизации формалина 10% для 36-48 ч при комнатной температуре (RT).
- Внедрить в блоков парафина ткани, вырезать слайды для последующего изучения и выведение слайды с гематоксилином и эозином для микроскопического исследования как описано ранее,19,20.
- Выполните микроскопическое исследование мочевого пузыря мыши на низком уровне (2,5 x и 10 x) и высокой (20 x и 40 x) увеличений, изучению макроскопических поражений, гиперплазия, рак на месте, папиллом, папиллярных опухолей и инвазивных новообразования19 , 21.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Используя протокол описал (рис. 1), опухоли мочевого пузыря были наведены в самцов мышей C57/B6. МРТ была исполнена на 16 недель, и мышей были умерщвлены в 20 недель. Ex vivo мочевого пузыря весов (BW) для каждой мыши были записаны. Слайды окрашивали гематоксилином и эозином, а все гистология слайды были рассмотрены на стадии опухоли.
Чтобы проанализировать бремя опухоли с помощью MR, стены внутренний просвет мочевого пузыря (БЛАв) был вычитается из мочевого пузыря стены внешние люмен (BLA,) для расчета толщины стенок мочевого пузыря (BLAстены) (Рисунок 2). Представитель истинный FISP MR изображения, реконструкций 3-D стене мочевого пузыря и патологические образы мышь управления (то есть, не опухоль) отображаются в рисунке 3A-F и мышь с большой опухоли показано на рисунке 3 g-L.
МРТ производный параметр бластены слабо коррелирует с ex vivo BW (rs = 0,37, p = 0,009; Рисунок 4). Анализ МРТ производные бластены параметра и BW данных демонстрирует связь с стадии опухоли (Крускала-Уоллиса теста МРТ p = 0.0003, Рисунок 5A; BW p = 0.0006; Рисунок 5B), а также ассоциации при стратификации патологии мышц неинвазивная мочевого пузыря рак и рак мочевого пузыря мышц инвазивные (U Манна-Уитни теста МРТ p = 0.0002, рис. 5 c; BW p < 0,0001, Рисунок 5 d). Производительность бластены и BW для определения рака мочевого пузыря мышц инвазивных показан на рисунке 5E. Площадь под кривой (AUC) для БЛАстены (AUC = 0,81, 95% ДИ 0,68-093) статистически похож на АУК BW (AUC = 0,89, 95% ДИ от 0,80-0,98; p = 0,30).
Рисунок 1: схема для индукции опухоли мочевого пузыря с BBN и сроков МРТ и эвтаназии. BBN — управляемые ad libitum в концентрации 0,05% в питьевой воде. Мышей пройти МРТ в 16 недель. Мышей умерщвлены в 20 недель и емкостей для каждого рассматриваются с иммуногистохимия. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 2: Схематически графического метода для получения бластены и представитель г-н изображение с соответствующими контуры. С помощью интенсивности МРТ изображения, была определена наружной стенки мочевого пузыря и наброски было обращено в красном (BLAвне). Hyperintense просвет пузыря было изложено в Грин (БЛАв), и соответствующую область просвет пузыря был получен. Вычитание из этих двух величин принесли бластены параметр, который соответствует светло серый диска в графическом изображении. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 3: представитель истинный FISP MR изображения, реконструкций 3-D стене мочевого пузыря и патологические образы мышь управления (то есть, не опухоль) (A-F) и мышь с большой опухоли (G-L). (A) представитель г-н изображение мыши не опухоли. (B) сегментации площадь стен мочевого пузыря (BLAстены), изложенные в красном, определяется как район между мочевого пузыря люмен (БЛАв) и стена внешняя мочевого пузыря (BLAвне). (C) 3-D визуализации стенки мочевого пузыря от управления мышью, генерируемые определения бластены на каждый ломтик через мочевого пузыря. Зеленые стрелки иллюстрируют мочевого пузыря на изображения 2-D, переведено на 3-D визуализации. (D) 3-D визуализации вырез бластены от управления мышью. (E) малой мощности (2,5 x) и (F) высокой мощности (10 x) изображения же мыши мочевого пузыря. (G) представитель г-н изображение мышью с большой опухоли. (H) сегментации площадь стен мочевого пузыря (BLAстены), изложенные в красном, определяется как район между мочевого пузыря люмен (БЛАв) и стена внешняя мочевого пузыря (BLAвне). (I) 3-D визуализации стенки мочевого пузыря мыши с большой опухоли. (J) 3-D визуализации вырез пузыря мышь с большой опухоли, создается путем определения бластены на каждый ломтик через мочевого пузыря. Зеленые стрелки иллюстрируют мочевого пузыря на изображения 2-D, переведено на 3-D визуализации. (K) малой мощности (2,5 x) и (L) высокой мощности (10 x) изображения же пузыря мыши. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 4: Спирмена корреляции между МРТ производные бластены и вес окончательной пузыря. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Рисунок 5: Сравнение патологической стадии и МРТ производный параметр бластены в 47 мышей. (A) сравнение всех патологических этапов и МРТ BLAстены (Крускала-Уоллиса). (B) сравнение всех патологических этапов и вес мочевого пузыря (Крускала-Уоллиса). (C) сравнение неинвазивные мышцы мочевого пузыря рак (этап ≤T1) и неинвазивного мышц мочевого пузыря рак (этап ≥T2) с МРТ BLAстены (тест U Манна-Уитни). (D) сравнение неинвазивные мышцы мочевого пузыря рак (этап ≤T1) и неинвазивного мышц мочевого пузыря рак (этап ≥T2) с весом мочевого пузыря (тест U Манна-Уитни). (E) ROC кривой МРТ производные bladder области и вес окончательной мочевого пузыря в определении неинвазивного мышц мочевого пузыря рак (этап ≥T2). Перечисленных p-значение разницы между двумя AUCs. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Точная визуализация моделей опухоли необходим для соответствующей предварительной эвтаназии промежуточной и животных рандомизации до начала экспериментального лечения. С помощью процедуры, представленные здесь, мы демонстрируем методологии (1) генерировать опухоли мочевого пузыря с помощью BBN канцероген и (2) стратифицировать бремя опухоли мочевого пузыря с помощью г-н MR-производные области измерения (стеныBLA) коррелирует значительно с ex vivo вес мочевого пузыря и ассоциируется с стадии патологических опухоли.
Приняв быстрый изображений подход с короткой приобретение раз на высокое пространственное разрешение (правда FISP) и высокое качество диагностики, мы можем проводить анализы высокопроизводительных мышей на промежуточных стадиях развития опухоли, до обращения рандомизации. Наш доклад согласуется с предыдущих докладах МР изображений на основе линии опухолевых клеток имплантаты9,12 и подтверждает свой потенциал как инструмента оптимизации большой предмет исследования количество наркотиков.
В этом протоколе МРТ важно для изображения мыши с полным мочевым пузырем получить высокое качество изображения и определить различия между люмен опухоли и мочевого пузыря. Мы находим, что инъекций каждая мышь с физиологическим 10 минут до изображений позволяет для надлежащей обработки изображений мочевого пузыря. Дальнейшие критические шаги включают надежное срабатывание МРТ приобретения с помощью дыхания сигнал обнаружен с пневматической подушкой под мышь грудной клетки и приобретение достаточное количество магнитно-РЕЗОНАНСНЫХ срезов, позволяющий освещение всей мочевого пузыря.
Другие варианты для визуализации развития и прогрессирования опухоли мочевого пузыря мышиных УЗИ8 и биолюминесценции10,11. Микро-УЗИ имплантированных MBT-2 клетки обнаружены опухоли в 15 мышей, 13 из которых были подтверждены гистологически иметь опухоли8. УЗИ объем значительно коррелирует с стереоскопический объем опухоли, но вес опухоли и стадии не были исследованы8. Биолюминесценции был использован для точного мониторинга клетки опухоли, на основе линии имплантатов, но его нельзя использовать для мониторинга канцероген индуцированного рака без пересадки опухоли канцероген, полученных от одной мыши в другой. Способность точно контролировать канцероген индуцированного рака имеет решающее значение, поскольку эти модели имеют ряд преимуществ над клеток линии модели. Модели, основанные на линию клеток генетически однородных и производные от опухоли, которые уже уклонился от immunosurveillance, и имплантированных опухоли расти быстро без хронических воспалительных микроокружения22. BBN модель использовалась успешно на протяжении более 30 лет, и он остается критическим модель для понимания развития рака мочевого пузыря и лечения23,24,25. Кроме того модель BBN демонстрирует мутационного и экспрессии генов профили похож на человека рак мочевого пузыря, сохраняя при этом неповрежденной иммунной системы для изучения потенциальных иммунотерапевтических агентов26,27 .
Наличие выделенного зверек магнитно-резонансную томографию как общие ресурсы в нескольких учреждениях делает это методы выгодно и практичным для фундаментальных исследований и скрининг Роман терапии. Однако существуют некоторые ограничения. Мышей были образы только в одном timepoint, не непрерывно в ходе развития опухоли. Однако основываясь на наших статистических результатов, мы предлагаем, что один timepoint значение имеет возможность точно стратифицировать мышей в группы размер опухоли и стадии, и он представляет идеальное, неинвазивная параметр для классификации и назначить различные группы субъектов. Несколько этапов опухоли были получены с помощью BBN, начиная от Ta T4. Однако, они могут расслаиваются (как это предлагается в рисунке 5 c-D) как мышцы инвазивные (T2 или больше) и мышцы инвазивные (T1 или меньше), поскольку это стандартное управление в человека мочевого пузыря рак28.
Еще одним потенциальным ограничением является, что параметр бластена была получена с использованием одного ломтика через каждый мочевого пузыря и не все доступные срезы, покрывая его. Эти критерии были выбраны для уменьшения требований к трубопроводу анализ (т.е. требование Рисование нескольких ROIs через несколько срезов) и были сочтены достаточными для быстрый, количественного анализа. Более сложные объемный анализ может проводиться по темам (т.е., показано в иллюстративных целях на рис. 3), но неизбежно потребует больше усилий и затрат. Автоматические алгоритмы обработки изображения может быть использован для автоматического делимитации региона мочевого пузыря; Однако эти методы страдает от внутренней изменчивости мочевого пузыря формы и размера среди отдельных мышей и требуют значительного тестирования и проверки до принятия надежных в доклинические исследования29.
Качественной оценки объемных данных предполагают, что этот метод один срез является достаточным для этого типа анализа. Однако вполне возможно, что более продвинутые анализов может потребовать этот шаг обработки дополнительных данных/изображение. С точки зрения приобретения есть несколько дополнительных проверок, которые могут быть приобретены, которых может повысить способность предсказывать прогрессии опухоли а также выявление более тонкие опухоли микроокружения изменения. Эти дополнительные методы включают динамический контраст расширение МРТ, МРТ диффузии взвешенный и других последовательностей30 , позволяющие всеобъемлющих, многосторонних параметрические характеристики стенки мочевого пузыря. Однако рассмотрение стоимости и эффективности привели нас ограничить наши пробирного описанной в настоящем Протоколе.
В заключение мы описываем методологии для T1/T2-взвешенный быстрой визуализации MR последовательностей (правда FISP) приобрести многослойная изображения, охватывающих всю поверхность мыши мочевого пузыря. Мы показываем, что эти изображения могут использоваться для определения степени опухоли рака мочевого пузыря мышиных модели, основанной на канцероген. Данные МРТ коррелирует с весами ткани мочевого пузыря и связан с стадии опухоли. Эти результаты поддерживают использование этого быстрого и надежного анализа МРТ чтобы стратифицировать мышей до экспериментальных обращения рандомизации.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего сообщать.
Acknowledgments
J. J. M. финансируется ветеранов здравоохранения администрации заслуги Грант BX0033692-01. J. J. м. также поддерживается Фондом Джона P. Hanson для исследований рака университета Роберт H. Лурье всеобъемлющем Рак центр из северо. Мы благодарим центр для трансляционного Imaging за приобретение МРТ и обработки. Источники финансирования имел никакой роли в письменной форме рукописи или решение представить для публикации.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| C57BL/6 mice | The Jackson Laboratory | 664 | Mice |
| N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine carcinogen (BBN) | TCI American | B0938 | Carcinogen |
| 0.9% normal saline | Hospira, Inc | NDC 0409-488-02 | |
| Isoflurane | Piramal HealthCare | 60307-120-25 | Anesthetic |
| 7Tesla ClinScan MRI | Bruker | NA | Dedicated Small Animal Imaging MRI |
| Syngo | Siemens | NA | MR Integrated Imaging Software |
| Model 1030 Monitoring & Gating System | Small Animal Instruments, Inc. (SAII) | NA | Small animal physiologic monitoring |
| Formalin, Neutral Buffered, 10% | Sigma | HT501128 | Fixative |
| Eosin Y | Fisher Scientific | NC1093844 | Histologic staining agent |
| Hematoxylin | Fisher Scientific | 23-245651 | Histologic staining agent |
| Jim7 | Xinapse Systems | NA | Medical image analysis software |
| GraphPad Prism v7.04 | Graphpad | NA | Graphing software |
| R v3.4.2 | The R Project for Statistical Computing | NA | Statistical software |
| R package pROC v1.10.0. | The R Project for Statistical Computing | NA | ROC analysis |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer Statistics, 2017. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 67 (1), 7-30 (2017).
- Abdollah, F., et al. Incidence, survival and mortality rates of stage-specific bladder cancer in United States: a trend analysis. Cancer Epidemiology. 37 (3), 219-225 (2013).
- Rosenberg, J. E., et al. Atezolizumab in patients with locally advanced and metastatic urothelial carcinoma who have progressed following treatment with platinum-based chemotherapy: a single-arm, multicentre, phase 2 trial. The Lancet. 387 (10031), 1909-1920 (2016).
- Sharma, P., et al. Nivolumab monotherapy in recurrent metastatic urothelial carcinoma (CheckMate 032): a multicentre, open-label, two-stage, multi-arm, phase 1/2 trial. The Lancet Oncology. 17 (11), 1590-1598 (2016).
- Bellmunt, J., et al. Pembrolizumab as Second-Line Therapy for Advanced Urothelial Carcinoma. New England Journal of Medicine. 376 (11), 1015-1026 (2017).
- Chan, E., Patel, A., Heston, W., Larchian, W. Mouse orthotopic models for bladder cancer research. BJU International. 104 (9), 1286-1291 (2009).
- Zhang, N., Li, D., Shao, J., Wang, X. Animal models for bladder cancer: The model establishment and evaluation (Review). Oncology Letters. 9 (4), 1515-1519 (2015).
- Patel, A. R., et al. Transabdominal micro-ultrasound imaging of bladder cancer in a mouse model: a validation study. Urology. 75 (4), 799-804 (2010).
- Chin, J., Kadhim, S., Garcia, B., Kim, Y. S., Karlik, S. Magnetic resonance imaging for detecting and treatment monitoring of orthotopic murine bladder tumor implants. The Journal of Urology. 145 (6), 1297-1301 (1991).
- Jurczok, A., Fornara, P., Soling, A. Bioluminescence imaging to monitor bladder cancer cell adhesion in vivo: a new approach to optimize a syngeneic, orthotopic, murine bladder cancer model. BJU International. 101 (1), 120-124 (2008).
- Vandeveer, A. J., et al. Systemic Immunotherapy of Non-Muscle Invasive Mouse Bladder Cancer with Avelumab, an Anti-PD-L1 Immune Checkpoint Inhibitor. Cancer Immunology Research. 4 (5), 452-462 (2016).
- Kikuchi, E., et al. Detection and quantitative analysis of early stage orthotopic murine bladder tumor using in vivo magnetic resonance imaging. Journal of Urology. 170, 1375-1378 (2003).
- Chung, H. W., et al. T2-weighted fast MR imaging with true FISP versus HASTE: comparative efficacy in the evaluation of normal fetal brain maturation. American Journal of Roentgenology. 175 (5), 1375-1380 (2000).
- Miyamoto, H., et al. Promotion of bladder cancer development and progression by androgen receptor signals. Journal of the National Cancer Institute. 99 (7), 558-568 (2007).
- Bertram, J. S., Craig, A. W. Specific induction of bladder cancer in mice by butyl-(4-hydroxybutyl)-nitrosamine and the effects of hormonal modifications on the sex difference in response. European Journal of Cancer. 8 (6), 587-594 (1972).
- Nagao, M., et al. Mutagenicity of N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine, a bladder carcinogen, and related compounds. Cancer Research. 37, 399-407 (1977).
- Hirose, M., Fukushima, S., Hananouchi, M., Shirai, T., Ogiso, T. Different susceptibilities of the urinary bladder epithelium of animal species to three nitroso compounds. Gan. Gann; The Japanese Journal of Cancer Research. 67 (2), 175-189 (1976).
- Shin, K., et al. Cellular origin of bladder neoplasia and tissue dynamics of its progression to invasive carcinoma. Nature Cell Biology. 16 (5), 469-478 (2014).
- Epstein, J. I. Chapter 17: Immunohistology of the Bladder, Kidney, and Testis. Diagnostic Immunohistochemistry. , Fifth Edition, 624-661 (2019).
- Cohen, S. M., Ohnishi, T., Clark, N. M., He, J., Arnold, L. L. Investigations of rodent urinary bladder carcinogens: collection, processing, and evaluation of urine and bladders. Toxicologic Pathology. 35 (3), 337-347 (2007).
- Wood, D. P. Jr Tumors of the bladder. Campbell-Walsh Urology. 11 (92), 2184-2204 (2016).
- Zitvogel, L., Pitt, J. M., Daillere, R., Smyth, M. J., Kroemer, G. Mouse models in oncoimmunology. Nature Reviews Cancer. , (2016).
- Kaneko, S., Li, X. X chromosome protects against bladder cancer in females via a KDM6A-dependent epigenetic mechanism. Science Advances. 4 (6), eaar5598 (2018).
- Smilowitz, H. M., et al. Biodistribution of gold nanoparticles in BBN-induced muscle-invasive bladder cancer in mice. International Journal of Nanomedicine. 12, 7937-7946 (2017).
- Dai, Y. C., et al. The interaction of arsenic and N-butyl-N-(4-hydroxybutyl)nitrosamine on urothelial carcinogenesis in mice. PLoS One. 12 (10), e0186214 (2017).
- Williams, P. D., Lee, J. K., Theodorescu, D. Molecular Credentialing of Rodent Bladder Carcinogenesis Models. Neoplasia. 10 (8), (2008).
- Fantini, D., et al. A Carcinogen-induced mouse model recapitulates the molecular alterations of human muscle invasive bladder cancer. Oncogene. 37 (14), 1911-1925 (2018).
- Network, N. C. C. NCCN Guidelines in Clinical Oncology - Bladder Cancer 5.2018. , Available from: https://www.nccn.org/professionals/physician_gls/pdf/bladder.pdf (2018).
- Costa, M. J., Delingette, H., Novellas, S., Ayache, N. Automatic segmentation of bladder and prostate using coupled 3-D deformable models. Medical Image Computing and Computer-Assisted Intervention. 10 (Pt 1), 252-260 (2007).
- Rosenkrantz, A. B., et al. Utility of quantitative MRI metrics for assessment of stage and grade of urothelial carcinoma of the bladder: preliminary results. American Journal of Roentgenology. 201 (6), 1254-1259 (2013).
