Summary
هنا، نقدم بروتوكول لإنشاء ICR المناعة (معهد أبحاث السرطان) نموذج مورين من عدوى الجهاز العصبي المركزي لعرض تطور الاعتلال العصبي. ويمكن رصد اضطرابات الدماغ الفيروسية الحادة من خلال درجات المرض المتطابقة لإظهار الاعتلال العصبي الناجم عن فيروس حمى الضنك في الجسم الحي.
Abstract
فيروس حمى الضنك (DENV)، وهو فيروس ينتقل عن طريق المفصل ينتقل عن طريق البعوض، قد يسبب المرض الحاد المعروف باسم حمى الضنك النزفية، والذي يتميز بمضاعفات مميتة بسبب تسرب البلازما، الاستسقاء، الانصباب الجنبي، الضائقة التنفسية، نزيف حاد، وضعف الأعضاء. وهناك عدد قليل من حالات العدوى DENV تقديم مظاهر عصبية. ومع ذلك، لم تستكشف الدراسات الأمراض العصبية الناجمة عن DENV أكثر من ذلك. في هذه الدراسة، نقدم بروتوكوللاستخدام فأر ICR (معهد أبحاث السرطان) مناعية مناعية للتحقق من تحريض عدوى الجهاز العصبي المركزي (CNS) مع DENV، يليه تطور التهاب الدماغ الفيروسي الحاد مثل التهاب الدماغ الفيروسي المرض.
Introduction
DENV، وهو فيروس يحمله المفصليمن عائلة Flaviviridae، يحتوي على جينوم RNA بالمعنى الإيجابي الذي يشفر ثلاثة بروتينات هيكلية فيروسية (كابسيد، قبل الغشاء، والمغلف) وسبعة بروتينات فيروسية غير هيكلية (NS1، NS2A، NS2B، NS3، NS4A، NS4B ، وNS5). الأنواع المصلية الأربعة من DENV (DENV1-4)، التي تصيب ما يقرب من 390 مليون شخص سنويا، تسبب عبئا عالميا على الرغم من أن الحكومات قد وجهت جهودا كبيرة نحو ناقلات البعوض ومكافحة الأمراض1. وفي الوقت الراهن، يجري تطوير لقاحات واقية وأدوية علاجية مضادة للفيروسات وتتطلب مزيدا من التحقق على المدى الطويل2. في الممارسة السريرية، على الرغم من أن مريض حمى الضنك مع عدوى الجهاز العصبي الوطني نادرة، فإنه يحتاج إلى مزيد من الاستكشاف لفهم تنوع تطور مرض حمى الضنك3. وثمة حاجة إلى مزيد من التحقيق والتحقق؛ وعلى وجه الخصوص، أدرجت منظمة الصحة العالمية مشاركة ضعف الجهاز العصبي الوطني، مثل ضعف الإدراك، والتشنجات، واعتلال الدماغ، والتهاب الدماغ، في تصنيف حمى الضنك الشديدة3و4. بناء نماذج حيوانية من عدوى DENV أمر لا غنى عنه لاستكشاف الأمراض العصبية من عدوى DENV.
لتوليد عدوى الجهاز العصبي المركزي من قبل DENV، وقد نفذت العديد من الدراسات طرق مختلفة من عدوى DENV، بما في ذلك (1) التلقيح داخل الدماغ من الفئران C57BL/6 الذين تلقوا 4 × 103 وحدات تشكيل البلاك (PFU) من DENV3 غير مكيفة5، 6، (2) التلقيح داخل التعامق من الفئران BALB / ج الذين تلقوا 7 × 104 PFU من في المختبر NEUROadaptED DENV47، (3) التلقيح داخل المخ من الفئران السويسرية الذين تلقوا 1 × 105 PFU من في الجسم الحي NEUROadapted DENV18، و (4) التلقيح المشترك داخل الدماغ وداخل اقفارية من الفئران الإمتصاص ICR الذين تلقوا 1 × 106 PFU من DENV2 غير مكيفة9. وفقا لنتائج هذه الدراسات5,6,7,8,9, عدوى DENV في الفئران تؤدي إلى النسخ الفيروسي في الدماغ , مما يؤدي إلى الفيروسية الحادة متلازمات التهاب الدماغ مثل، والتغيرات السلوكية مصحوبة بشلل الأطراف وعدم الاستقرار الوضعي، والسمية العصبية للسي إن سي والتهاب، وتسرب البلازما العامة والمحلية من خلال حاجز الدم في الدماغ (BBB)، والفتك. وقد أظهرت جميع النتائج من هذه الدراسات5،6،7،8،9 قدرة DENV لإصابة الجهاز العصبي المركزى وتحريض التهاب الدماغ الفيروسي الحاد مثل المرض بعد العدوى.
بناء على النتائج الحاليةلدينا9،10،11،12،13،14،15،أنشأنا نموذج مورين من عدوى DENV باعتبارها في الجسم الحي منصة لدراسة الفعالية العلاجية للعوامل المستهدفة / العوامل ضد النسخ المتماثل الفيروسي، فضلا عن السمية العصبية. هنا، نبلغ عن البروتوكول المستخدم لإنشاء فأرICR خارجي مناعية للمناعة لدراسة عدوى الجهاز العصبي الوطني ولرصد تطور الاعتلال العصبي مع شدة مختلفة الناجمة عن DENV. وتظهر النتائج التقدم الكبير للأمراض الشبيهة بالتهاب الدماغ في الفئران المصابة بDENV بطريقة تعتمد على الوقت.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على البروتوكولات التجريبية لدراسة الحيوانات من قبل اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوانات والمستخدم في المركز الطبي للدفاع الوطني (IACUC رقم: 16-261)، وفقا للمبادئ التوجيهية التي وضعتها وزارة العلوم والتكنولوجيا، تايوان.
1. إجراء العدوى
- إعداد DENV2 غير مكيفة (سلالة PL046) الأسهم9 (التي تم الحصول عليها أصلا من مراكز مكافحة الأمراض في تايوان، تتراوح بين 2.5 × 107 إلى 1 × 109 PFU / مل).
- تخفيف مخزون الفيروس إلى 1 × 106 PFU مع معهد روزويل بارك التذكاري (RPMI) 1640 المتوسطة إلى حجم إجمالي قدره 40 درجة مئوية.
- ملء حقنة واحدة 0.3 مل مزودة إبرة 30 G مع 10 ميكرولتر (2.5 × 105 PFU) من الفيروس المخفف، وملء آخر 0.3 مل حقنة مزودة إبرة 30 G مع 30 ميكرولتر (7.5 × 105 PFU) من الفيروس المخفف.
-
اضغط على ماوس الإصصاصال ICR البالغ من العمر 7 أيام وقم بإجراء الخطوات التالية.
- للحقن داخل المخ، عقد الماوس في موقف عرضة عن طريق الضغط على الأوريكل بين السبابة والإبهام، وحقن داخل الدماغ 10 ميكرولتر من الفيروس المخفف في منطقة لامدا، النقطة عند تقاطع خياطة sagittal وlambdoid 16.
- بعد الحقن داخل الدماغ، عقد الماوس في موقف supine باستخدام السبابة والإبهام وحقن داخل peritoneally 30 درجة مئوية من الفيروس المخفف بلطف في البطن المورين.
ملاحظة: لتجنب أكل لحوم البشر، يتم استخدام الكحول بنسبة 75٪ لخلق فقدان مؤقت للإحساس الشمي للأم. بالإضافة إلى ذلك، يتم اقتراح تغطية القمامة مع البراز والبول الأم.
- وضع الفئران الإمتصاص مرة أخرى في أقفاصهم والانتظار لمدة 5 دقائق للتحقق من السلامة poststimulation مع متعطشا من الفئران، بما في ذلك المشي والأم مص الحليب.
ملاحظة: في معظم الأحيان، تظهر الفئران النشاط الطبيعي poststimulation ولا يبدو أن هناك أي آثار ضارة بعد التحدي التقني. وخلال هذه التجربة، تمت صيانة الحيوانات من قبل لجنة الرعاية الحيوانية المؤسسية والمستخدم في المركز الطبي للدفاع الوطني، تايوان. - تقييم التقدم اليومي للفئران من حيث وزن الجسم (باستخدام توازن ميكروغرام)، والأمراض الحادة الشبيهة بالتهاب الدماغ الفيروسي (حسب تسجيل المرض كما هو موضح في القسم 2)، ومعدل البقاء على قيد الحياة9و10و11 ،12،13،14،15.
2. تسجيل الأمراض
- مراقبة درجة الأمراض الحادة الشبيهة بالتهاب الدماغ الفيروسي. تعيين درجة 0 إلى الفئران صحية; 1 إلى الفئران مع أعراض المرض طفيفة, بما في ذلك فقدان الوزن, انخفاض الحركة, والتوجه الجسم حدبة; 2 إلى الفئران التي تظهر النوبات الحوفية. 3 إلى الفئران تظهر ضعف الحفي، بما في ذلك التحرك بصعوبة وضعف الطرف الأمامي أو الطرف الخلفي؛ 4 للشلل; خمسة للموت
ملاحظة: وبمجرد أن تصل النتيجة إلى 3، تعتبر أعراض المرض تتطور بسرعة. - رسم التهديف من المرض، وفقا للخطوة 2.1، لكل يوم كشخصية على أساس منحنى باستخدام متوسط ± SD من درجات الاختبار اليومي في كل مجموعة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم الإبلاغ عن مضاعفات عصبية شديدة مرتبطة بحمى الضنك في المرضى الذين يعانون من مرض حمى الضنك4. على الرغم من أن هذه الحالات نادرة في العيادة، يمكن استخدام إنشاء نموذج المورين المناعي من عدوى DENV ليس فقط لدراسة مسببات الأمراض المناعية ولكن أيضا لاستكشاف عدوى الجهاز العصبي الوطني، والتهاب الأعصاب، والسمية العصبية، والفيروسية الحادة مرض يشبه التهاب الدماغ. في هذه الدراسة، وفقالنموذجنا الحالي 9،10،11،12،13،14،15،7 يوم من العمر ICR الفئران الإمتصاص تم تلقيح في الوقت نفسه مع DENV2 من خلال الحقن المجهري داخل الدماغ (2.5 × 105 PFU) وحقن داخل اقفارية (7.5 × 105 PFU) (الشكل1). بعد العدوى، قمنا بإجراء العديد من التحليلات لإظهار وجود النسخ المتماثل dsRNA، والتعبير عن البروتين الفيروسي، وإطلاق الفيروس في الدماغ المصابة DENV9،10،11،12 ،13،14،15. وأظهرت هذه التجارب أنه تم إنشاء نموذج ناجح في الجسم الحي للعدوى DENV، والنسخ المتماثل، والإفراج.
لتقييم الحث على أمراض التهاب الدماغ الفيروسي الحادمثل9،10،11،12،13،14،15،رصدنا التغيرات في وزن الجسم في الفئران المصابة بDENV. بالمقارنة مع تغيرات وزن الجسم في المجموعة وهمية (حيث تم تلقيح الفئران مع المتوسطة RPMI فقط)، يظهر الشكل 2 زيادة في المجموعة وهمية ولكن انخفاض كبير (P < 0.01) في وزن الجسم في الفئران المصابة. وفقا لأعراض الأمراض الشبيهة بالتهاب الدماغ، بما في ذلك وضع الحدب، والنوبات اللاإرادية، والضعف في الحواطي، والشلل، والموت، كما يتجلى في الفئران المصابة بDENV، يظهر الشكل 3 زيادة كبيرة (P < 0.05) في درجة السريرية في الفئران المصابة بDENV. يظهر اختبار البقاء على قيد الحياة في الشكل 4 انخفاضًا يعتمد على الوقت في معدل البقاء على قيد الحياة (P < 0.001) للفئران المصابة بDENV. وتشير البيانات إلى إنشاء نموذج معدي من DENV في الجهاز العصبي الوطني، مما يدل على تطور الأمراض الحادة الشبيهة بالتهاب الدماغ الفيروسي.
الشكل 1: التصميم التجريبي لعدوى فيروس حمى الضنك (DENV) في الفئران الرضاعة. تم تلقيح سبعة فئران مُمتصّة من ICR عمرها اليوم بحقن DENV2 PL046 المتزامنة داخل الجمجمة والحقن داخل الشبكية. قمنا بقياس التغيرات في وزن الجسم، ونقاط المرض، والوفيات. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: وزن الجسم في الفئران الرضاعة أثناء عدوى فيروس حمى الضنك (DENV). في DENV2 المصابة ICR الفئران الإمتصاص (ن = 12)، تم قياس التغيرات في وزن الجسم في اليوم الواحد. بعد اختبار ويلكوكسون الموقعة رتبة، يتم تقديم القيم على أنها متوسط ± SD. **ص < 0.01. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3: يسجل مرض الدماغ في الفئران الرضاعة أثناء عدوى فيروس حمى الضنك (DENV). بعد عدوى DENV2 في الفئران الإمتصاص ICR(ن = 12)، تم قياس التغيرات الحركية الوقت في الدرجات السريرية لموقف الحدب (النتيجة 1)، والاستيلاء على الحفي (النتيجة 2)، وضعف النسيان (النتيجة 3)، والشلل (النتيجة 4)، والموت (النتيجة 5). بعد اختبار ويلكوكسون الموقعة رتبة، يتم تقديم القيم على أنها متوسط ± SD. *p < 0.05. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: معدل البقاء على قيد الحياة في الفئران الرضاعة أثناء عدوى فيروس حمى الضنك (DENV). تم قياس التغيرات الحركية في معدلات البقاء على قيد الحياة في الفئران المصابة بDENV2 ICR الإمتصاص (ن = 12). بعد اختبار رتبة السجل، يتم تقديم القيم كمتوسط ± SD. ***p < 0.001. الرجاء النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
تم الكشف عن عدوى DENV في الجهاز العصبي الوطني لمرضى حمى الضنك الشديدة3،17، مما يشير إلى إمكانية ظهور التهاب الدماغ الفيروسي الحاد وقعت خلال مرض حمى الضنك. هنا، نبلغ عن نموذج في الجسم الحي من عدوى DENV لدراسة مشاركة خلل الجهاز العصبي المركزي في حمى الضنك الشديدة، لا سيما مع التركيز على الأمراض الحادة الناجمة عن التهاب الدماغ الفيروسي الناجم عن DENV. بالمقارنة مع النماذج السابقة، وخاصة بالنسبة للعدوى ذات المسار الواحد (عن طريق الوريد فقط، داخل اقفارية فقط، أو داخل الدماغ فقط)، يتم استخدام titer عالية للغاية (1 × 108 PFU) من DENV في الفئران المختصة المناعية. ومع ذلك، في الفئران المناعية، يمكن تنفيذ titer منخفضة نسبيا ولكن البديل (1 × 105 إلى 1 × 108 PFU) من DENV18،19،20. في هذه الدراسة، استخدمنا عدوى ذات مسارين للحث على الإصابة بفيروس الجهاز العصبي المركزي المتزامن والعدوى الجهازية مع التلكر المنخفض (داخل الجمجمة: 2.5 × 105 PFU؛ داخل فترة الطوارئ: 7.5 × 105 PFU) من DENV في الفئران الإمتصاصية من الـ ICR المناعية المناعية. تطور مرض التهاب الدماغ مثل هو استنساخ تماما9،10،11،12،13،14،15 . وبالتالي، يتم التخفيف من التقييد المحتمل لهذه الدراسة باستخدام حقن داخل الجمجمة وداخل المجلس الاقتصادي في وقت واحد. على الرغم من أنها مصطنعة ومعذلك، بما يتفق مع الأعمال السابقة من قبل الآخرين 5،6،7،8 ولنا9،10،11، 12،13،14،15-DENV يتم تكرار بنشاط في الدماغ murine التجريبية9،10،11، 12 , 13 , 14 سنة , 15، والآثار المحتملة للعوامل الفيروسية والاستجابات المضيفة على التهاب الأعصاب ، فضلا عن السمية العصبية ، وبالتالي ، هي ذات أهمية.
لمسببات الأمراض العصبية ، يتم تشغيل تحفيز الخلايا العصبية المبرمج عن طريق عدوى DENV وكذلك التهاب الجهاز العصبي الوطني ، مثل تنشيط الخلايا المجهرية تليها النخر الورم السيتوكين proinflammatory عامل α (TNF-α) الإنتاج8، 12،15. وتكهن السمية العصبية المباشرة الناجمة عن عدوى DENV والتهاب الأعصاب غير المباشر التي بدأتها الاستجابات المناعية المضيفة أن تشارك في التهاب الدماغ حمى الضنك. التهاب الدماغ الفيروسي الحاد هو سبب التهاب الجهاز العصبي الوطني الناجم عن فيروس الدماغ3،21. الأعراض السريرية الشائعة هي ارتفاع درجة الحرارة، والصداع، وتصلب الرقبة والظهر، والقيء، والارتباك، في حين أن الحالات الشديدة أيضا تطوير النوبات والشلل، والغيبوبة21. من خلال رصد التغيرات في الدرجات مع وضع الحدبة ، والاستيلاء على الحسية ، والضعف في الحواطي ، والشلل ، والموت ، فإن تطور هذه الأمراض يظهر تطور مرض التهاب الدماغ الفيروسي الحاد في الفئران المصابة بDENV9، 10 سنوات , 11 , 12 , 13 , 14 سنة , 15.عموما، تلك الفئران المصابة DENV مع درجة من 3 (وفقا لطريقة تسجيل المرض المعروضة في البروتوكول) تقدمت بسرعة إلى الشلل والموت. وتتطلب الآليات المسببة للأمراض التي تسبب هذه الأمراض مزيدا من التحقيق؛ ومع ذلك، فمن المتوقع أن الخلل العصبية تليها الحث الاعتلال العصبي ينطوي21. استهداف النسخ المتماثل الفيروسي، فضلا عن TNF-α-بوساطة التهاب الجهاز العصبي الوطني10،11،12،13،14، على الأقل جزئيا، يضفي آثار علاجية ضد تطور مرض التهاب الدماغ الفيروسي الحاد المرتبط بحمى الضنك. ويمكن استخدام بروتوكول هذه الدراسة لخلق نموذج مرضي يشبه التهاب الدماغ من عدوى DENV.
وقد وصفت بعض الدراسات تحريض النزيف داخل المخ الناجم عن عدوى DENV في الدماغ22,23. أظهرنا سابقا الحث من اضطراب BBB في الفئران المصابة بDENV9. على الرغم من أن DENV لا يعترف كفيروس neurotropic, DENV يمكن أن تنتج عدوى فعالة في الخلايا العصبية في الجسم الحي وفي المختبر8,11. وتكهن مستقبلات الدوبامين D2 (D2R) لتكون مستقبلات الخلايا العصبية للعدوى DENV, والدوائية استهداف D2R يقلل بشكل فعال عدوى DENV في الخلايا العصبية في الجسم الحي وفي المختبر, فضلا عن الأمراض الدماغ الناجمة عن DENV11, 24. الاستراتيجيات العلاجية الممكنة ضد التهاب الدماغ الفيروسي الحاد مهمة لتطوير بحيث يمكن علاج حالات حمى الضنك الشديدة مع مضاعفات عصبية. لتطبيقه في المستقبل، وهذا البروتوكول من نموذج المرض باستخدام عدوى DENV في الدماغ قد تصبح منصة في الجسم الحي لفحص ليس فقط العوامل الفيروسية والمضيفة المرتبطة بالأمراض العصبية ولكن أيضا الأدوية المضادة للفيروسات والمضادة للدماغ ممكن. وفيما يتعلق بحدوث الاضطرابات العصبية المتغيرة الناجمة عن عدوى DENV25 بموجب هذا البروتوكول المعمول به، هناك حاجة إلى الفرق بين الأنواع المتغيرة و/أو سلالات DENV للتسبب في خلل عصبي للتحقق.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
وقد تم دعم هذه الدراسة بمنح من وزارة العلوم والتكنولوجيا (MOST107-2321-B-038-001) والتمويل الداخلي 106TMU-CIT-01-2، تايبيه، تايوان.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Roswell Park Memorial Institute 1640 medium (RPMI) | Gibco | 11875-085 | Diluting virus |
| 0.3 mL Insulin Syringe | BD Ultra-FineII | 328838 | Intracerebral and intraperitoneal injection |
| Microbalance | METTLER TOLEDO's LabX | AL104 | Weight mouse |
| Non-adapted DENV2 (strain PL046) | The Centers for Disease Control of Taiwan | - | Infect mouse |
| Institute of Cancer Research (ICR) suckling mouse | BioLASCO Taiwan Co., Ltd | - | Our murine model |
References
- Guzman, M. G., Gubler, D. J., Izquierdo, A., Martinez, E., Halstead, S. B. Dengue infection. Nature Reviews Disease Primers. 2, 16055 (2016).
- Katzelnick, L. C., Coloma, J., Harris, E. Dengue: knowledge gaps, unmet needs, and research priorities. Lancet Infectious Diseases. 17 (3), e88-e100 (2017).
- Carod-Artal, F. J., Wichmann, O., Farrar, J., Gascon, J. Neurological complications of dengue virus infection. Lancet Neurology. 12 (9), 906-919 (2013).
- Geneva: World Health Organization. Dengue: Guidelines for Diagnosis, Treatment, Prevention and Control: New Edition. , WHO Guidelines Approved by the Guidelines Review Committee (2009).
- Amaral, D. C., et al. Intracerebral infection with dengue-3 virus induces meningoencephalitis and behavioral changes that precede lethality in mice. Journal of Neuroinflammation. 8, 23 (2011).
- de Miranda, A. S., et al. Dengue-3 encephalitis promotes anxiety-like behavior in mice. Behavioural Brain Research. 230 (1), 237-242 (2012).
- Velandia-Romero, M. L., Acosta-Losada, O., Castellanos, J. E. In vivo infection by a neuroinvasive neurovirulent dengue virus. Journal of Neurovirology. 18 (5), 374-387 (2012).
- Despres, P., Frenkiel, M. P., Ceccaldi, P. E., Duarte Dos Santos, C., Deubel, V. Apoptosis in the mouse central nervous system in response to infection with mouse-neurovirulent dengue viruses. Journal of Virology. 72 (1), 823-829 (1998).
- Tsai, T. T., et al. Microglia retard dengue virus-induced acute viral encephalitis. Scientific Reports. 6, 27670 (2016).
- Cheng, Y. L., et al. Activation of Nrf2 by the dengue virus causes an increase in CLEC5A, which enhances TNF-alpha production by mononuclear phagocytes. Scientific Reports. 6, 32000 (2016).
- Ho, M. R., et al. Blockade of dengue virus infection and viral cytotoxicity in neuronal cells in vitro and in vivo by targeting endocytic pathways. Scientific Reports. 7 (1), 6910 (2017).
- Jhan, M. K., et al. Anti-TNF-alpha restricts dengue virus-induced neuropathy. Journal of Leukocyte Biology. 104 (5), 961-968 (2018).
- Kao, J. C., et al. The antiparasitic drug niclosamide inhibits dengue virus infection by interfering with endosomal acidification independent of mTOR. PLoS Neglected Tropical Diseases. 12 (8), e0006715 (2018).
- Tsai, T. T., Chen, C. L., Tsai, C. C., Lin, C. F. Targeting heat shock factor 1 as an antiviral strategy against dengue virus replication in vitro and in vivo. Antiviral Research. 145, 44-53 (2017).
- Jhan, M. K., et al. Dengue virus infection increases microglial cell migration. Scientific Reports. 7 (1), 91 (2017).
- Benskey, M. J., Manfredsson, F. P. Intraparenchymal Stereotaxic Delivery of rAAV and Special Considerations in Vector Handling. Methods in Molecular Biology. , 199-215 (2016).
- Fong, C. Y., et al. Mild encephalitis/encephalopathy with reversible splenial lesion (MERS) due to dengue virus. Journal of Clinical Neuroscience. 36, 73-75 (2017).
- Sarathy, V. V., et al. A lethal murine infection model for dengue virus 3 in AG129 mice deficient in type I and II interferon receptors leads to systemic disease. Journal of Virology. 89 (2), 1254-1266 (2015).
- Schul, W., Liu, W., Xu, H. Y., Flamand, M., Vasudevan, S. G. A dengue fever viremia model in mice shows reduction in viral replication and suppression of the inflammatory response after treatment with antiviral drugs. The Journal of Infectious Diseases. 195 (5), 665-674 (2007).
- Tyler, K. L. Acute Viral Encephalitis. New England Journal of Medicine. 379 (6), 557-566 (2018).
- Yauch, L. E., Shresta, S. Mouse models of dengue virus infection and disease. Antiviral Research. 80 (2), 87-93 (2008).
- Assir, M. Z., Jawa, A., Ahmed, H. I. Expanded dengue syndrome: subacute thyroiditis and intracerebral hemorrhage. BMC Infectious Diseases. 12, 240 (2012).
- Kumar, R., Prakash, O., Sharma, B. S. Intracranial hemorrhage in dengue fever: management and outcome: a series of 5 cases and review of literature. Surgical Neurology. 72 (4), 429-433 (2009).
- Simanjuntak, Y., Liang, J. J., Lee, Y. L., Lin, Y. L. Repurposing of prochlorperazine for use against dengue virus infection. Journal of Infectious Diseases. 211 (3), 394-404 (2015).
- Rocha, B. A. M., et al. Dengue-specific serotype related to clinical severity during the 2012/2013 epidemic in centre of Brazil. Infectious Disease Poverty. 6 (1), 116 (2017).
