Summary
이 충돌 모델은 습 관성 마약, 또는 억제 제어에 영향을 미칠 수 있는 다른 요인에 노출 된 후 억제 제어의 장애를 측정 하는 데 사용 됩니다. 성적 자극 및 혐오 장애물은 동시에 제공 됩니다, 따라서 남성 쥐 성적 보상을 접근 하는 장애물을 정복 해야 합니다.
Abstract
현재 프로토콜 모델 쥐에서 억제 제어의 소설 충돌 작업을 설명합니다. 이 모델에서 자연 보람 자극 (성적 자극), 높은 가치의 보상을 나타내는 및 혐오 자극 (핀), 동시에 선물 된다. 남자 쥐 등반 또는 접근 하 고 성적 파트너를 조사 하는 핀의 전체 장애물을 뛰어넘고 있다. 동물 혐오 자극에 그들의 접근 행동에 지속, maladaptive 또는 위험 보상 찾는 행동으로 간주 됩니다. 충돌 작업 금지 제어 학대 마약 모 르 핀 등 스트레스 이벤트에 노출에서 결과로에 적자의 평가 허용 합니다.
이 모델의 주요 장점은 아편 약물 이나 다른 스트레스 이벤트에 노출 후 억제 제어에 적자를 검색 하는 간단 하 고 빠른 방법을 제공 합니다. 아편, 뿐만 아니라이 행동 모델 것도 신속 하 게 다른 습 관성 약물에 의해 유발 억제 제어 적자를 발견 하는 데 유용 합니다. 그러나, 한계가 이다 남성 쥐 성능 운동 효과이 충돌 작업에서 반복 테스트 대상이 될 수 있습니다. 나중에 하나 약물에 노출 식별 됩니다 후 보상 찾는 행동의 박 형으로 개인이 충돌 모델 수정에 따라 희망 수 있습니다.
Introduction
마약 중독은 충 동적이 고 강제적인 약물 추구 하 고 복용1이 특징인 만성 뇌 질환 이다.입니다. 중독의 주요 특징은 이러한는 모두 되었습니다 가상 억제 제어2,3, 장애인된 능력 즉, 결과로 보람 자극 하 고 따라서 maladaptive 개발의 즉각적인 추구 억제에 실패 4동작 패턴입니다.
이동/노 가기 작업 및 정지 신호 작업 원형 작업 응답 억제2,5의 능력을 측정 하는 데 사용 되는. 이 두 실험 패러다임 하 적절 하지 않은 행동을 억제를 암시적에 대 한 드문 금지 응답을 대조 하 여 초기 계획6,7의 능력을 평가 합니다. 이러한 작업에 표시 되는 응답 억제 코카인 사용자8,9, 아편 중독자10및 니코틴 사용자11에서 장애인을 보였다. 다른 두 작업-반전 학습 및 다중 선택 직렬 반응 시간 작업-응답 억제/금지의 측정 제어12,13제공. 그러나, 설치류에서 수행 하는 이러한 패러다임의 대부분 뿐만 아니라 필요한 장기 훈련 과목 응답 요구 사항을 나타내는 다른 신호를 구분할 수 있습니다. 하지만 또한 학습 속도 학습 효과에 개인 차가 있습니다. 후속 억제 테스트11의 결과 방해.
이 종이에 선물이 소설 충돌 작업 습 관성 약물에 노출 된 후 억제 제어의 장애를 측정 하는 데 사용할 수 있습니다. 이 작업에서는 자연 보람 자극 (성적 자극)는 높은 가치의 보상14, 나타내는 및 혐오 자극 (핀) 남성 쥐, 정복 해야 하는 동시에 선물 된다. 남자 쥐 등반 또는 접근 하 고 성적 파트너를 조사 하는 핀의 전체 장애물을 뛰어넘고 있다. 동물 혐오 자극에 그것의 접근 행동에 지속, maladaptive 또는 위험 보상 찾는 행동으로 간주 됩니다. 이 작업을 설정 하기 위한 이론적 설명을 중 하나입니다 그것은 개념적으로 간단 하 고 다른 작업으로 집행 프로세스에 무거운 요구를 배치 하지 않는. 응답 억제를 측정 하는 다른 작업에 비해, 자연 동작, 그리고 정상적인 성적 기능을 가진 쥐를 기반으로 하는이 충돌 작업 하 고 성적 경험 학습 과정 없이 직접 테스트할 수 있습니다. 또 다른 근거는 중독자 종종 유사한에 자신을 장소에 발생 모방으로이 작업 보상을 접근 하 고 피하고 혐오 자극 (또는 찔 러 서 되 고의 위험) 사이 충돌이 더 타당성을 할 수 있습니다. 충돌 하지만 지속적으로 실제 생활15에 부정적인 결과의 위험에 마약 보상을 추구.
따라서,이 충돌 모델의 응용 프로그램 중독성 약물 또는 스트레스 등 억제 제어의 능력에 영향을 미칠 수 있는 다른 요인에 노출 된 후 억제 제어에 적자를 신속 하 고 중요 한 방법입니다. 그것은 또한 억제 제어에서 적자를 기본 신경 메커니즘의 조사에 대 한 소설 행동 전략을 제공 합니다. 또한, 대체 수정이이 작업에 추가할 수 있습니다. 예를 들어 사회적 자극으로 성적 자극을 대체 하 여 비용/이익 비율을 변경 하는 것은 더 많은 행동 significances 밝힐 수 있다.
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Protocol
이 연구로는 국제 검토 위원회 (IRB) 심리학의 연구소, 중국 과학원, 승인 하 고 관리 및 실험 동물의 사용 (국립 보건 연구소 (미국) 가이드에 따라 모든 실험 수행 2011 년)입니다.
1. 재료 및 충돌 모델에 대 한 설정
- 하우스 4 쥐 감 금 소 당 (50 cm 22.5 cm 넓은 x 30 cm 높이 x 길이) 식민지 객실 제어 온도 (22-25 ° C) 및 적어도 10 일 동안 반전된 12 h/12 h 명암 주기 (21:00에 빛).
참고: 남성과 여성의 Sprague-Dawley 쥐 무게 330-400와 230-250 g, 실험의 시작 부분에 각각 사용 되었다. - 어두운 단계 희미 한 조명 아래에서 모든 테스트를 수행 합니다.
- 불투명 한 종이 팩을 사용 하 여 (37 cm 26 cm 넓은 x 18 cm 높이 x 길이) 소나무와 수송 나무 면도 침구 실 테스트 홈 연습장에서 쥐.
- 쥐 실험을 시작 하기 전에 5 한 일 당 각 3 분 처리 합니다.
- 모든 실험에 대 한 모 르 핀의 120 mL를 준비 합니다. 0.9% 염 산 모 르 핀 분해 20 mg/mL의 최종 농도에 NaCl (생리 식 염 수). 실내 온도 (RT)에 저장 합니다.
- 수술 10 mL pentobarbital 나트륨 솔루션의 준비. 분해 pentobarbital 나트륨 0.9%에서 NaCl 1g/mL의 농도에서. 4 ° c.에 게
- 발 정기의 인공 유도 10 mL estradiol benzoate (EB) 및 황 체 호르몬의 10 mL를 준비 합니다. 분해 benzoate estradiol과 progesterone 0.125 mg/mL와 5 mg/mL의 농도에서 참기름에 각각.
참고: EB 또는 적어도 1 시간을 위한 물 욕조 (55-60 ° C)에 황 체 호르몬의 석유 정지 품 어 하 고 철저 하 게 흔들어. EB 또는 황 체 호르몬 완전히 녹는 것을 확인 하십시오. 실시간에 저장소 - 테스트를 위해 위험한 보상 추구 행동, 검은 아크릴 유리로 만들어진 오픈 필드 보상-근접 챔버를 사용 합니다. 오픈 필드 경기장의 한쪽 끝 (85 cm 긴 높은 35 cm 넓은 x 50 cm x) 와이어 스크린 자극 케이지 마운트 (15 cm 25 cm 넓은 x 25 cm 높이 x 길이). 핀 층 자극 케이지 앞 약 20 cm에 보드를 설치 합니다.
참고: 34.5 cm에 핀 고정 13 cm 넓은 보드 (그림 1)을 x 오래. 3 종류의 핀 보드 (표 2)을 테스트 중에 사용 됩니다.
2. 여성 및 남성에서 심사 짝짓기에 발 정기 유도
-
여성 쥐에서 양측 ovariectomy
참고: 수술 기구와 수술에 사용 하는 다른 항목은 살 균. 그리고 수술은 무 균 기술을 사용 하 여 수행 됩니다.- 준비 수술 도구와 scalpels, 외과 블레이드, hemostatic 집게, 핀셋, 안과 위, 거 즈, 면봉, 봉합 바늘과 실크 봉합 사전, 등 자료 75% 알코올, 요오드 화물, 나트륨 pentobarbital, 0.9 %NaCl, 페니실린의 나트륨
- Intraperitoneally 주사 pentobarbital 나트륨 (55 mg/kg), 여성 쥐의 완전 마 취에 대 한 대기. 쥐 respire 원활 하 게 하 고 꼬리 핀치에 반작용 하지 않는다.
참고: ovariectomy 여성 쥐의 무게는 적어도 240 g에 도달 하는 경우에 수행 됩니다. - 여성 쥐 경향이 위치에서 뒷면, 모피 떨어져 면도 놓고 iodophor와 노출 된 피부를 소독 합니다. 다음 뒷면 (흉 곽 가장자리 아래 1 cm)에 중간 수직 절 개 (약 2 cm 긴)을 메스를 사용 합니다.
- 왼쪽, 피부를 당겨 하 고 무뚝뚝한 허리 근육 노출 hemostatic 집게와 피하 조직 해 부. 지방 조직에 도달할 때까지 복 부 구멍으로 근육 층 (1 ㎝의 절 개)를 잘라.
- 구부러진된 핀셋으로 지방 조직에 밖으로 끌어와 육체-핑크 티슈는 난소를 찾습니다 (약 0.5 cm x 0.4 c m x 0.3 c m) 표면에 twining 나 팔 관을 지방 조직에 의해 둘러싸인.
- 집게와 나 팔 관을 클램프, 선 그리고 주변 지방 조직 함께 난소를 잘라.
- 잔여 나 팔 관 및 지방 조직 다시 복 부 구멍으로 출혈, 확인 한 후 넣고 근육 층을 봉합.
- 동일한 절차에 의해 다른 쪽에 난소를 제거 하 고 피부 절 개 후 봉합.
- 각 성까지 온수 담요에 쥐를 놓고 다시 집으로 넣어.
- 적어도 2 주 후의 복구, 도구로 서 여성 쥐를 사용 하 여 심사 및 행동 테스트 짝짓기.
참고: 수술 후 여성 쥐의 상태에 관심을 지불 하 고 적절 한 물, 음식 공급. 1 주일 동안 지 내게 ovariectomized 쥐 단일 유지 하 고 감 금 소 당 4 집.
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Ovariectomized 여성 쥐에 발 정기의 유도
- 심사 짝짓기에 대 한 그들을 사용 하기 전에 모든 ovariectomized 여성 쥐 3 시간 (3 분/일) 처리 합니다.
- 부드럽게 왼손으로 전송 상자에서 쥐를 선택 하 고 몇 초 동안 무기에 그것을 잡고. 그리고 다시 상자에 쥐를 넣어 3 분에 대 한 이러한 작업을 반복 합니다.
- 피하 주사 estradiol benzoate (25 μ g/쥐) 검사 또는 충돌 테스트 짝짓기 전에 약 48-52 h.
- 피하 주사 호르몬 (1 mg/쥐) 검사 또는 충돌 테스트 짝짓기 하기 전에 약 4-6 h.
참고: Estrogenic 호르몬은 목의 뒤에 피하 주입 됩니다. 때문에 발 정기 주기는 ~4\u20125 일 동안, 여성 쥐에는 일주일에 한 번 사용 됩니다.
- 심사 짝짓기에 대 한 그들을 사용 하기 전에 모든 ovariectomized 여성 쥐 3 시간 (3 분/일) 처리 합니다.
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남자 쥐 짝짓기 성능에 대 한 심사
참고: 심사는 주택 룸에 명암 주기의 어두운 단계 희미 한 빛 아래 실시 됩니다.- 판지에 남성 쥐를 개별적으로 배치 (60 cm 오랫동안 50 cm 넓은 x 40 cm 높이 x) 소나무와 함께 나무 면도 침구와 5 분 동안 길 들을 두고.
- 판지 및 모니터 남성 copulatory 동작 (경험 있는 관찰자)에 의해에 estrous 여성 쥐를 소개 합니다.
- 넣어 쥐 다시 홈 연습장 남성 쥐 그들의 첫 번째 루 30 분 이내 완료 후 15 분 이내 수단 또는 30 분 이내 사정 표시 되지 않습니다.
- 다른 그룹 (예: 염 분 및 모 르 핀 처리 그룹)으로 심사 (3 일 연속에 대 한 성공적인 루)를 통과 하는 남성 쥐를 임의로 할당 합니다.
3. 충돌 테스트 전에 남성 쥐에 전처리
-
파티와 같은 모 르 핀 치료
참고: 남자 쥐는 intraperitoneally 식 염 수 주사 또는 모 르 핀에 전달 진 탕 같은 처방14 (표 1).- 남자 쥐 무게와 몸 무게에 따라 각 쥐 주입 볼륨 계산 ( 표 1참조).
- 모 르 핀 또는 염 분 솔루션과 주사기를 준비 합니다.
- Intraperitoneally 한 번에 한 쥐를 주사 하 고 즉시 홈 (4 쥐/케이지)으로 부드럽게 장소.
- 후 적어도 6 h 줄 남성 쥐 두 번째 주입 같은 방식으로.
-
급성 스트레스
참고: 발 충격 4 개의 동일한 실 4 충격 발전기 조립 하 고 컴퓨터에 설치 된 전문 소프트웨어에 의해 제어에서 각 충돌 테스트 전에 전달 됩니다.- 충돌 테스트의 날, 다른 방으로 충돌 테스트 룸에서에서 다른 남성 쥐 걸릴.
- 실로 남성 쥐를 넣어 (30.5 cm 25.4 cm 30.5 cm 높이 x 폭 x 길이) 1 분에 대 한 길 들을.
- 소프트웨어 프로그램을 사전에 설정 합니다. 10 분 이내에 배달 하는 간헐적인 발 충격을 포함 하는 프로그램 (0.5 x 0.5 s x 10 분 mA; 평균 간 간격 40 s 충격, 범위 10-70 s).
- 동물 Id를 입력 하 고 그룹화 (충격 그룹과 컨트롤 그룹)에 따라 충격 발전기 설정 것인지 선택 하십시오. 그런 다음 시작 단추를 누릅니다.
- 스트레스 절차 완료 되 면, 즉시 전송 상자; 충돌 테스트 룸에 쥐를가지고 상자 당 한 쥐입니다.
4. 충돌 테스트
참고: 테스트는 충돌 테스트 룸에 명암 주기의 어두운 단계 희미 한 빛 아래 실시 됩니다.
- 테스트 하기 전에 하루에 충돌 테스트 룸에 모든 쥐를가지고 하 고 15 분 (어떤 장애물, 그림 1) 없이 오픈 필드 보상-근접 챔버를 길 들 하도록 허용 합니다.
- 테스트 당일 남성 쥐 (아래에서 테스트 하기 전에 하루 같은 상태) 10 분 무료 탐사를 허용 하는 챔버에 배치 합니다.
- Estrous 여성 쥐 동기 자극-장에 고 자유롭게 접근에 따라 남성을 허용 놓고 5 분에 대 한 인센티브 쥐를 조사 합니다.
참고: 남성 쥐 estrous 여성에 무작위로 노출 되 고이 여성 익숙한 쥐 아니다. - 5 분 무료 접근 후 경기장의 다른 쪽 끝을 자극 장에서 남성 주제 이동 장애물 (14 cm 넓은 보드 핀 두께), 놓고 테스트의 첫 번째 재판을 시작 합니다.
참고: 장애물의 난이도 핀의 종류와 보드의 높이에 따라 재판 중 변화 된다. 등급 시스템은 표 2에 표시 됩니다. - 에 대 한 자극-케이지에서 남성 쥐 이동 때마다 후 15-20 s surmounts 장애물.
- 결국 남성 주제 올라 또는 3 번 4 분 내 고 즉시 장애물을 통해 점프 하는 경우 재판 장애물의 어려움을 증가 함께 다음 재판을 시작 합니다.
- 남성 주제 4 분 이내 3 시간 미만 장애 surmounts, 테스트를 종료 하 고 장애물 surmounts 시간 기록.
- 다시 홈 케이지를 남성 쥐를 가져오고 0.05% 빙 초 산으로 오픈 필드 챔버 스크럽.
- 각 점수 극복 (또는 접근) 표 2에 의하여. 이 충돌 테스트에 남자 주제에 대 한 총 점수는 surmountings의 모든 점수의 합계를 사용 합니다.
5. 통계 분석
- 현재 데이터 ± sem의 단일 데이터 요소를 의미. 그 동질성의 차이 또는 데이터 집합의 정규 분포, 도전 하는 경우 로그-변환 데이터 집합입니다.
- 7 일 철수 (Wd7 및 Wd17)의 17 일에 표시 되는 보상 찾는 행동에 모 르 핀 전처리의 효과 분석 과목 사이의 요인 (염 분, 그림 2대 모 르 핀)으로 t-테스트 "전처리"를 사용 하 여.
- 보상 찾는 행동 "철수 시간" 반복 측정 분산 분석 (ANOVA)을 사용 하 여 테스트 반복 후에 모 르 핀 전처리의 효과 분석 (Wd14 대 Wd7) 과목 내에서 요소와 "전처리" 대 (모 르 핀으로 식 염 수) 과목 사이의 요인으로.
- 또한, Pearson의 상관 관계를 사용 하 여 절제 (Wd7 및 Wd14, 그림 3)의 7 및 14 일에 인수 하는 남성 과목 점수 간의 상관 관계를 분석 하.
참고: 원래 데이터의 로그 변환 후 통계 분석을 수행 합니다. - 약물 치 졸 쥐 사이 주제 요소 (컨트롤, 그림 4대 충격)으로 스트레스와 t-검정을 사용 하 여 보상 찾는 행동에 급성 스트레스의 효과 분석
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Representative Results
탐험이 충돌 모델 약물에 의해 유도 된 maladaptive/위험 보상 찾는 행동을 밝힐 수 있는지, 염 분 및 모 르 핀 청소용된 그룹에 의해 표시 보상 찾는 행동 단기 (Wd7) 후 t-테스트에 의해 비교 되었다, 모 르 핀에서 장기 (Wd17) 철수 각각 (그림 2). 결과 표시 모두 하루에 7 철수의 하루 17, 모 르 핀 청소용된 쥐 식 염 수-청소용된 쥐 보다 훨씬 더 많은 접근 행동 보여 (그림 2a: t =-3.958; 시티 = 24; p < 0.01입니다. 그림 2b: t =-2.350; 시티 = 17; p < 0.05), 모 르 핀 철수 쥐 더 perseverative 혐오 장애물 앞에서 행동과이 maladaptive 행동 표시 제안 철수 후 오랜 시간 동안 지속 됩니다.
쥐 충돌 작업 (그림 3)에서 반복적으로 시험 되었다 때 반복 측정 ANOVA 전처리의 중요 한 주요 효과 보였다 (F (1,24) = 12.910; p < 0.01)입니다. 출금 시간의 어느 큰 영향 (Wd7와 Wd14, 비교 [F (1,24) = 0.807; p > 0.05])도 중요 한 상호 작용 (전처리 상호 작용 x 철수: F (1,24) = 1.093, p > 0.05) 발견 되었다 ( 그림 3a참조). 더 위험한 보상 찾는 행동의 안정성 조사, (Wd7와 Wd14) 사이 다른 철수 기간 점수의 상관관계 분석 했다. 결과 단기 및 장기 철수 기간 동안 접근 동작 크게 상관 했다 나타났다 (피어슨 상관 관계: r = 0.445; p < 0.05, 그림 3b참조), 쥐 위험한 보상 찾는 행동 했다 대략 이상의 안정적인 나타내는 반복 테스트.
동물에서 억제 제어의 능력에 스트레스 이벤트의 영향을 조사, 약물 치 졸 쥐 충돌 테스트 전에 간헐적 발-충격 스트레스에 노출 되었다. 비록 스트레스 및 제어 그룹 사이의 큰 차이 (그림 4a: t =-1.207; 시티 = 17; p > 0.05), 보상 추구 동작 표시 ( 그림 4b참조) 개인 간의 위험한 보상 찾는 행동에 급성 스트레스의 현저 하 게 차동 효과 제안 스트레스 그룹 내에서 bi-모달 배포.
그림 1: 충돌 테스트에 대 한 장치 오픈 필드 챔버 (85 cm 긴 높은 35 cm 넓은 x 50 cm x) 자극 케이지와 함께 estrous 여성 쥐를 들고 충돌에서 보상 추구 동작 테스트를 위해 사용 되었다. 남성 과목 지속적으로 높아 보드 이상 등반 즉, 위험한 장애물, 극복 했다 (34.5 c m 13 c m x 길이) 핀, 자극 감 금 소에 접근을 가진 두꺼운. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2: 남성 쥐에 의해 표시 하는 충돌 테스트에서 위험한 보상 찾는 행동. (한) 행동 접근에 대 한 점수 표시 모 르 핀-(블랙) 및 염 분-(화이트) 대우 그룹에 의해 철수의 7 일에. (b) 행동 접근에 대 한 점수는 철수의 17 일에 모 르 핀-(블랙) 및 염 분-(화이트) 대우 그룹에 의해 표시 됩니다. 바 대표 평균 ± SEM. * p < 0.05;를 나타냅니다 * * 나타냅니다 p < 0.01; 소금 염 분, Mor = = Morphine.This 그림17 동의에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3: 위험 보상 찾는 행동 7과 모 르 핀에서 철수의 14 날에 연속적으로 테스트. (한) 행동 접근에 대 한 점수 표시 모 르 핀-(블랙) 및 염 분-(화이트) 대우 그룹 7-철수 (Wd7 및 Wd14)의 14 일에. 막대는 평균 ±를 SEM. (b) 두 테스트 7 일에 철수의 14 위험한 보상 찾는 행동에 대 한 점수의 상관관계를 나타냅니다. p < 0.05;를 나타냅니다. * * p < 0.01 나타냅니다. 소금 염 분, Mor = = 모 르 핀. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4: 충돌 테스트에서 보상 찾는 행동에 발 충격 스트레스의 효과 (한) 행동 접근에 대 한 점수 (회색) 컨트롤에서 표시와 충격 (검정) 그룹 염 전처리를 받게. 바 대표 평균 ± SEM. * p < 0.05;를 나타냅니다 * * p < 0.01 나타냅니다. (b) 접근 제어 및 충격 그룹으로 표시 하는 동작에 대 한 점수는 단일 지점에 표시 됩니다. 이러한 수치 참조17 동의에서 수정 되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
| 주 1 | 주 2 | 3 일 | 4 일 | 5 일째 | |
| 1세인트 주입 | 10 mg/kg | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
| 2차 주입 (6 시간 후) | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
표 1: 파티와 같은 모 르 핀 치료 처방. 남자 쥐는 청소용 두 번 매일 식 염 수 또는 진 탕 같은 처방17에 전달 하는 모 르 핀의 복 주사와 5 일: 10, 20, 20, 40, 40, 40, 40, 40, 40, 및 40 mg/kg. 매일 관리 하는 모 르 핀의 2 개의 복용량은 적어도 6 h 떨어져.
| 평가판 | 장애물 | 접근 당 점수 |
| 1 | + 0 cm | 0.5 |
| 2 | + 2 cm | 1.0 |
| 3 | + 4 cm | 1.5 |
| 4 | b + 4 cm | 3.0 |
| 5 | b + 7 cm | 3.5 |
| 6 | b + 10 cm | 4.0 |
| 7 | b + 13 cm | 4.5 |
| 8 | b + 17 cm | 5.0 |
| 9 | c + 17 cm | 6.0 |
| 10 | c + 21 cm | 6.5 |
| 11 | c + 25 cm | 7.0 |
| 12 | c + 29 cm | 7.5 |
표 2: 접근 당 정복 어려움 양을 등급 주제. 핀과 핀 사이의 평균 거리의 길이 따라 세 가지 유형의 핀 두꺼운 보드 사용 되었다: 는 0.5 cm, 1 cm;의 평균 거리의 핀 길이 b 핀-길이 0.8 cm, 0.5 cm;의 평균 거리 그리고 c 핀-길이 2 cm, 1 cm의 평균 거리의. 보드 같이 고조 반복 되었다: 0, 2, 4, 7, 10, 13, 17, 21, 25, 및 29 cm. 따라서, 테스트 기간 동안 즉, 12 시험, 장애물, 극복의 어려움의 12 단계가 있습니다. 양의 어려움 주제 정복 접근 자극 케이지는 득점 하 고 표현 때마다 각 주제17에 대 한 총 점수까지.
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Discussion
약물 남용18 에 의해 발생 억제 제어 적자 지독한 마약 행동 추구/복용 추진에 핵심적인 역할을 담당할 고19,20재발. 여기에 제시 된 충돌 모델 억제 제어 중독성 약물에 노출 된 개인의 변화를 탐구 하는 새로운 접근 방식을 제공 합니다.
프로토콜에 몇 가지 중요 한 단계가 있다. 첫째, 주제 (남성 쥐) 후속 충돌 작업에 들어가기 전에 성적 경험을 획득 해야 합니다. 예를 들어 남성 쥐 결합 (copulating 세 번 이상) 약물 치료에 대 한 심사를 통과 해야 하 고 다른 그룹에 무작위로 할당 됩니다. 원활 하 게 심사 하는 결합을 수행 하기 위해 두 점 주의를 지불 합니다. 하나는 ovariectomy 시 여성 쥐의 몸 무게입니다. ovariectomy 여성 쥐의 무게는 적어도 240 g에 도달 하는 경우에 수행 됩니다. 이후 여성 쥐의 바디 성숙 gonadal 성숙21보다 나중에 발생, 초기 ovariectomy 성공적으로 여성 쥐 copulating 됐지만 여성 관리 estrogenic 호르몬에서 남성 쥐를 방해 수 있습니다. 다른 요점은 남성 쥐 해야 다음 결합에 새로운 컨텍스트를 neophobia의 영향을 피하기 위하여 여성 쥐와 결합 하기 전에 심사 상자에 길 들.
스트레스 요인 실험을 통해 밀접 하 게 제어할 수 한다. 둘 다 남성과 여성 쥐 처리 되며 충돌 작업을 시작 하기 전에 운송에 익혀 진다. 또한, 테스트 하루 전에 보상 근접 약 실에 habituation, 동안 남성 쥐 반복적으로 파악 되며 여러 번 챔버의 다른 쪽 끝을 자극 감 금 소의 앞에서 이동.
충돌 작업 계속, 장애물 (핀 보드) 반복적으로 고조, 장애물 뒤에 남성 쥐 참조 하거나 직접 자극 감 금 소에 여성 쥐를 더 이상 느낄 수 없습니다 따라서. 유지 하기 위하여 지속적으로 성적 파트너에 맞춰 남성 쥐, 일부 침구 소재 estrous 여성 쥐에 의해 오염 된 공기에 확산 하 여 냄새를 수 있도록 자극 케이지에 배치 됩니다. 침구 충돌 작업에 앞서 수집 되며 사용까지-20 ° C에 저장.
모 르 핀 치료 중지 후 남성 쥐 수 고통을 있는 3 일 사라질 신체적 금 단 증상 후14. 그들의 발은 핀으로 찔 러 서 가능성은, 유지 또는 심한 상해 없음 검색 되었습니다 하 고 남성 활동에 영향을 안 했다.
이 충돌 작업에 하나 또한 보상 값 보상 추구 행동, 예를 들어 남성 쥐 (사회 보상)14,16여성 쥐 (성적 보상을) 대체 하 여 보상 값을 변화에 미치는 영향을 조사할 수 있습니다. 성적, 사회적 보상 한 실험에 사용 하는 경우에 두 개의 보상 근접 챔버, 성적 보상 및 사회적 보상에 대 한 다른 하나에 실험을 실행 기쁠 것 이다. 실험 한 챔버에 실시 하는, 경우 챔버와 자극 케이지 청소 되어야 한다 신중 하 게 테스트, 과목 간의 0.1% 빙 초 산으로 남성과 여성 자극 사이 후 각 교차 오염을 방지 하기 위해 . 보드에 핀 남성 쥐에 그들의 일정 한 위협 하도록 정기적으로 갱신 한다.
남자 쥐 성능 운동 효과이 충돌 작업에서 반복 테스트를 수 있습니다. 우리는 일부 동물 (특히 염 분 청소용된 쥐) (그림 3a) 두 번째 테스트 하는 동안 장애물을 통해 점프에 운동을 통해 더 나은 핀을 피할 수 있는 것으로 나타났습니다. 두 반복된 테스트 하는 동안 위험한 보상 추구 행동 사이 상당한 상관 관계가 있지만, 그것은 하지 않은 경우이 작업은 보상 찾는 행동의 위험성이 높은 그리고 낮은 고기를 식별 하는 데 사용할 수 있습니다 확인 했습니다. 따라서, 지금까지이 충돌 작업은 신속 하 게 약리학 또는 행동 치료 후 억제 제어에 어떤 변화를 조사 적합 합니다.
작업2,5 의 규칙 학습 후 부적절 한 응답에 억제의 능력을 반영 이동/노 가기 작업, 정지 신호, 여러 선택 직렬 반응 시간 작업 작업과 반전 학습에 비해, 이 충돌 작업에서는 과목 필요가 없습니다 어떤 배운된 응답을 억제 하지만 가능한 부정적인 결과 때문에 그들의 자연 스러운 갈망/동기를 억제. 따라서이 충돌 작업은 더 나은 어떤 중독자는 종종 얼굴 충돌 상황 및 비용과 혜택을 무게의 심리적 과정 억제 제어의 능력을 검사 하는 데 도움이 모방 합니다. 또한, 위험한 결정22,23 또는 작업24,25, 도박 등의 다른 의사 작업 대조적이 충돌 작업은 간단 하 고 쉽게 수행, 그것은 단지 단일 구성 되어 있기 때문에 보상 그리고 단일 위험입니다.
우리가 설립 충돌 모델 아편 약물에 노출 된 후 억제 제어에 적자를 공개를 사용할 수 있습니다-모 르 핀. 우리는이 행동 모델 또한 신속 하 게 다른 습 관성 약물에 의해 유발 억제 제어의 장애를 발견에 유용할 것 이다 믿습니다. 또한, 신뢰할 수 있는 아편 유도 지독한 보상 찾는 행동 표현 형이 충돌 모델에 따라 식별 됩니다. 현재, 우리는 장애물 (핀의 전체 보드)을 전기 그리드 바꿉니다 발 충격 남성 쥐에 배달 될 수 있다 고도 반복 해 서 얼굴에 동물의 보상을 추구 행동을 측정 하기 위한 행동 절차를 수정 하는 노력 부정적인 결과 (발 충격). 알려진 대로, 아편 유도 지독한 보상 추구 행동의 지금까지, 아편26,27의 진통 효과 때문에 아마는 사용할 수 없습니다 행동 모델이입니다.
임상, 스트레스 마약 철수28후 재발로 이어지는 중요 한 요소 중 하나입니다. 또한, 스트레스 또한 행동 억제/충 동성/compulsivity29에 대 한 중요 한 영향을 미치는 요소 이다. 이 충돌 모델의 소개는 또한 우리가 신속 하 게 학대 마약에 노출 다음 과목에서 억제 컨트롤의 기능에 다양 한 스트레스 이벤트의 영향을 관찰할 수 있습니다.
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Disclosures
저자는 공개 없다.
Acknowledgments
이 문서는 신경 스트레스 환자 인구 (JCYJ20170413170301569)에 대 한 CA 키 실험실의 정신 건강, 심리학 연구소 (KLMH2016K01)와 평가 개입 기술 연구에 의해 지원 되었다
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetic acid | Beijing Tongguangjingxi Chemical company | CN No.81601 | CH3COOH |
| Benzypenicillin sodium for Injection | Huabei Pharmaceutical | F7072109 | C16H17N2NaO4S |
| Cotton swabs | Wan Xin, Shandong, China | 8 cm | |
| β-estradiol benzoate | SIGMA-ALDRICH | E8515-200MG | estradiol benzoate |
| Gauze | Wan Xin, Shandong, China | 21s × 21s 110×100 | |
| Hemostatic forceps | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Morphine hydrochloride | Qinghai Pharmaceutical Co. Ltd | 20100105 | Morphine hydrochloride |
| Ophthalmic scissors | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Pentobarbital Sodium | Sigma | C11H17O3N2Na | |
| Precision animal shocker | Coulbourn | ||
| Progesterone | SIGMA-ALDRICH | V900699-5G | progesterone |
| Sesama oil | Fengyi trading company ltd. | Sesama oil | |
| Sodium chloride injection | HuaLu Pharmaceutical | H17092107 | NaCl |
| Scalpels | Gillette | 96797241 | |
| Surgical blades | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Suture needles | Han Qin, Shanghai, China | Δ1/2 6×14 | |
| Silk sutures | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Sprague-Dawley rats | Vital River Animal Center, Beijing, China | Sprague-Dawley | animal strain |
| Syringe | WeiGao Group Medical Polymer Co.Ltd | 1 mL, 2 mL | |
| Tweezers | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. |
References
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