Summary
Este modelo de conflito é usado para medir a deficiência de controle inibitório após exposição à drogas que viciam, ou outros fatores que podem influenciar o controle inibitório. Um estímulo sexual e um obstáculo aversive são apresentados simultaneamente, assim, ratos machos têm de conquistar o obstáculo para aproximar a recompensa sexual.
Abstract
O presente protocolo descreve uma tarefa de conflito do romance como um modelo de controle inibitório em ratos. Neste modelo, um estímulo gratificante natural (estímulo sexual) que representa uma alto valor recompensa e os contrário estímulos (pinos), são apresentados simultaneamente. Os ratos masculinos tem que subir ou saltar sobre o obstáculo cheio de alfinetes para abordar e investigar o parceiro sexual. Se o animal persistir no seu comportamento se aproxima independentemente dos estímulos contrário, considera-se como um comportamento de busca de recompensa mal-adaptativos ou arriscado. A tarefa do conflito permite a avaliação do déficit no controle inibitório, resultantes da exposição a drogas abusadas, como a morfina, ou um evento estressante.
A principal vantagem desse modelo é que ele fornece uma maneira simples e rápida de descobrir o déficit no controle inibitório após exposição à drogas opiáceas ou outros eventos estressantes. Além de opiáceos, este modelo comportamental também seria útil para descobrir rapidamente os défices de controle inibitório induzidos por outras drogas que viciam. No entanto, a limitação é que o desempenho dos ratos masculinos pode estar sujeitas a exercer efeitos com testes repetidos sob esta tarefa de conflito. No futuro, podemos esperar que os indivíduos com o fenótipo compulsivo de comportamento de busca de recompensa após exposição a opiáceos será identificada com base em modificar esse modelo de conflito.
Introduction
Da toxicodependência é uma doença cerebral crônica que se caracteriza pela droga impulsiva e compulsiva, buscando e levando1. Estas características-chave do vício têm ambos foi a hipótese de resultam a capacidade prejudicada de controle inibitório2,3, ou seja, falhando em inibir a busca imediata da gratificante estímulos e desenvolvendo adaptativos padrões de comportamento4.
A tarefa de avançar/não avançar e sinal de paragem de tarefa são as tarefas protótipos usadas para medir a capacidade de resposta inibição2,5. Estes dois paradigmas experimentais avaliam a capacidade de suprimir as ações que são inadequadas, por contrastando infrequentes respostas inibitórias contra um implícito ir de base6,7. A inibição de resposta exibida nestas tarefas foi mostrada para ser prejudicada em usuários de cocaína8,9, viciados em ópio10e nicotina usuários11. Outra duas tarefas — aprendizagem de reversão e várias tarefas de série de tempo de reação de escolha — também fornecer medidas de inibição de resposta/inibitório controlam12,13. No entanto, a maioria desses paradigmas realizado em roedores não só requer treinamento a longo prazo para que os sujeitos podem distinguir os requisitos de resposta representados por sinais diferentes, mas também as diferenças individuais na velocidade de aprendizagem e efeitos de aprendizagem pode interferir com os resultados de teste inibitório subsequentes11.
Neste trabalho, apresentamos uma tarefa de conflito romance que pode ser usada para medir a deficiência de controle inibitório após exposição à drogas que viciam. Nesta tarefa, um estímulo gratificante natural (estímulo sexual) que representa um alto valor de recompensa14e os estímulos aversive (pinos) que ratos machos têm de conquistar, são apresentados simultaneamente. Os ratos masculinos tem que subir ou saltar sobre o obstáculo cheio de alfinetes para abordar e investigar o parceiro sexual. Se o animal persistir no seu comportamento se aproxima independentemente dos estímulos contrário, considera-se como um comportamento de busca de recompensa mal-adaptativos ou arriscado. Dentre as justificativas para o estabelecimento desta tarefa é que é conceitualmente simples e não impõe exigências pesadas em processos executivos como fazer outras tarefas. Comparado a outras tarefas que medem a inibição de resposta, esta tarefa de conflito é baseada no comportamento natural e ratos com função sexual normal e experiência sexual pode ser testada diretamente, sem um processo de aprendizagem. Outra razão é que um conflito apresentado nesta tarefa entre aproximando-se a recompensa e evitando os contrário estímulos (ou o risco de ser picado) pode ter uma validade melhor, como ele imita o que ocorre nos viciados que muitas vezes se colocam em semelhante em conflito, mas persistentemente perseguir a recompensa de drogas, independentemente do risco de consequências negativas na vida real15.
Portanto, a aplicação deste modelo de conflito é uma maneira rápida e sensível para descobrir o déficit no controle inibitório após exposição à drogas que viciam, ou outros fatores que podem influenciar a capacidade de controle inibitório, tais como estresse. Ele também fornece uma estratégia comportamental romance para investigação de mecanismos neurais subjacentes déficits no controle inibitório. Além disso, modificações alternativas podem ser adicionadas para essa tarefa. Por exemplo, alterando a relação custo/benefício, substituindo o estímulo sexual com o estímulo social pode revelar mais significados comportamentais.
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Protocol
Este estudo foi aprovado pelo International Review Board (IRB), do Instituto de psicologia, da Academia Chinesa de Ciências, e todos os experimentos são realizados em conformidade com o guia de institutos nacionais de saúde (EUA) para (cuidados e uso de animais de laboratório 2011).
1. materiais e configuração para o modelo de conflito
- Casa quatro ratos por gaiola (50 cm comprimento x 22,5 cm largura x 30 cm de altura) em quartos de colônia com temperatura controlada (22 – 25 ° C) e um ciclo de luz/escuridão invertida h 12/12 h (luzes acesas às 21:00) pelo menos 10 dias.
Nota: Pesando 330 – 400 e 230 – 250 g, no início dos experimentos, ratos Sprague-Dawley machos e fêmeas, respectivamente, foram usados. - Execute todos os testes sob iluminação fraca, durante a fase de escura.
- Usamos as caixas opacas (37 cm comprimento x 26 cm largura x 18 cm de altura) com pinho fundamento de rapagem de madeira para transportar ratos de gaiolas em casa para testes quartos.
- Lidar com ratos 3 min por dia durante 5 dias antes de começar os experimentos.
- Prepare 120 mL de morfina para todo o experimento. Dissolver o cloridrato de morfina em 0,9% NaCl (soro fisiológico) em uma concentração final de 20 mg/mL. Armazenar em temperatura ambiente (RT).
- Prepare-se 10 mL da solução de pentobarbital de sódio para a cirurgia. Dissolver o pentobarbital de sódio em 0,9% NaCl na concentração de 1 g/mL. Loja a 4 ° C.
- Prepare-se 10 mL de benzoato de estradiol (EB) e 10 mL de progesterona para indução artificial de estro. Dissolva o benzoato de estradiol e progesterona em óleo de gergelim em concentrações de 0,125 mg/mL e 5 mg/mL, respectivamente.
Nota: Incube a suspensão de óleo do EB ou progesterona em um banho de água (55-60 ° C) pelo menos 1 h e então completamente agitá-lo. Certifique-se de que o EB ou progesterona é completamente dissolvida. Loja em RT. - Para o arriscado busca recompensa comportamento de teste, use as câmaras do campo aberto recompensa-proximidade de vidro acrílico preto. Em uma das extremidades da arena campo aberto (85 cm comprimento x 35 cm largura x 50 cm de altura) montar uma gaiola de estímulo de tela de arame (15 cm comprimento x 25 cm largura x 25 cm de altura). Instale a placa com pinos no chão na frente da gaiola de estímulo, com cerca de 20 cm.
Nota: Os pinos são fixos na 34,5 cm comprimento x placas de largura de 13 cm (Figura 1). As placas com três tipos de pinos são usadas por sua vez, durante o teste (tabela 2).
2. indução de cio nas fêmeas e acasalamento de triagem em machos
-
Ovariectomia bilateral em ratos fêmeas
Nota: Os instrumentos cirúrgicos e outros itens usados na cirurgia são estéreis. E a cirurgia é realizada utilizando a técnica asséptica.- Preparar os instrumentos cirúrgicos e materiais como bisturis, lâminas cirúrgicas, pinça hemostática, pinças, tesouras oftálmicas, gaze, cotonetes de algodão, agulhas de sutura e suturas de seda com antecedência, assim como 75% de álcool, iodo, sódio pentobarbital, 0,9% NaCl, sódio de penicilina.
- Intraperitonealmente injete pentobarbital de sódio (55 mg/kg), à espera de anestesia completa de ratos fêmeas. Ratos Regalarsi suavemente e não reagir a pitada da cauda.
Nota: A ovariectomia é executada somente quando o peso do rato fêmea atinge pelo menos 240 g. - Coloque o rato fêmea em posição prona, raspar o pelo nas costas e desinfectar a pele exposta com Iodofor. Use um bisturi para fazer uma incisão vertical média (cerca de 2 cm de comprimento) na parte traseira (1 cm abaixo da borda da caixa torácica).
- Puxar a pele para o lado esquerdo, e blunt dissecar o tecido subcutâneo com pinça hemostática para expor os músculos lombares. Corte a camada muscular (incisão de 1 cm) na cavidade abdominal, até atingir o tecido adiposo.
- Puxe o tecido adiposo com uma pinça curvada e localize o ovário, que é um tecido de carne-de-rosa (cerca de 0,5 cm x 0,4 x 0,3 cm) rodeado por tecido adiposo com o entrelaçamento de Falópio na superfície.
- Fixar o tubo de Falópio com fórceps e ligate-lo e, em seguida, cortar o ovário juntamente com o tecido adiposo.
- Volte a colocar o tubo de Falopio residual e tecido adiposo na cavidade abdominal após assegurar sem sangramento e a camada muscular da sutura.
- Remover o ovário do outro lado com o mesmo procedimento e em seguida de sutura a incisão da pele.
- Coloque o rato sobre um cobertor aquecido até despertar e então colocá-lo de volta na gaiola em casa.
- Após pelo menos duas semanas de recuperação, use os ratos fêmeas como uma ferramenta para triagem e testes comportamentais de acasalamento.
Nota: Preste atenção ao estado do rato fêmea após a cirurgia e fornecer alimentação e água adequada. Manter os ratos ovariectomizados único abrigados por uma semana e então a casa quatro por gaiola.
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Indução de estro em ratos fêmeas ovariectomizados
- Lidar com ratos fêmeas ovariectomizados tudo três vezes (3 min/dia) antes de usá-los para triagem de acasalamento.
- Delicadamente pegar um rato da caixa de transporte com a mão esquerda e segure nos braços por alguns segundos. Então o rato na caixa e repetir estas operações por 3 min.
- Injectar por via subcutânea benzoato de estradiol (25 μg/rato) cerca de 48 – 52 h antes acasalamento triagem ou o teste de conflito.
- Por via subcutânea injetar progesterona (1 mg/rato) cerca de 4-6 h antes acasalamento triagem ou o teste de conflito.
Nota: As hormonas estrogénicas são injetadas por via subcutânea na parte de trás do pescoço. Desde que um ciclo de estro dura ~4\u20125 dias, os ratos fêmeas são usados uma vez por semana.
- Lidar com ratos fêmeas ovariectomizados tudo três vezes (3 min/dia) antes de usá-los para triagem de acasalamento.
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Rastreio de ratos machos para acasalamento desempenho
Nota: Triagem é conduzida sob luz fraca durante a fase escura do ciclo claro/escuro na sala de habitação.- Coloque um rato masculino individualmente na caixa (60 cm comprimento x 50cm largura x 40 cm de altura) com pinho fundamento do corte de madeira e deixe-o se habituar por 5 min.
- Introduza um rato fêmea estral os comportamentos copuladores masculinos caixa e monitor (por observadores experientes).
- Coloque os ratos para gaiolas em casa depois de ratos machos completar sua primeira ejaculação dentro de 30 min ou não exibir intromissão dentro de 15min ou ejaculação dentro de 30 min.
- Atribua os ratos machos que passam a triagem (ejaculação bem sucedida durante três dias consecutivos) aleatoriamente em diferentes grupos (tais como os grupos tratados de solução salina e morfina).
3. pré-tratamento em ratos machos antes do teste de conflito
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Tratamento de compulsão, como morfina
Nota: Ratos machos são injetados intraperitonealmente com solução salina ou morfina entregue em um regime de compulsão, como14 (tabela 1).- Os ratos masculinos de pesar e calcular o volume de injeção para cada rato com base no peso do corpo (ver tabela 1).
- Prepare as seringas com morfina ou solução salina soluções.
- Injetar um rato em um momento intraperitonealmente e imediatamente, coloque-a suavemente no ringue em casa (4 ratos/gaiola).
- Depois de pelo menos 6 h, dar ratos masculinos a segunda injeção da mesma forma.
-
Estresse agudo
Nota: Choques de pé são entregues antes de cada teste de conflito nas quatro câmaras idênticas montados com quatro geradores de choque e controladas pelo profissional software instalado em um computador.- No dia do teste de conflito, leve os ratos masculinos para outro quarto diferente do conflito do quarto de teste.
- Coloque os ratos machos em câmaras de (30,5 cm comprimento x 25,4 cm de largura x 30,5 cm de altura) para se habituar por 1 min.
- Configure o programa de software com antecedência. O programa inclui os choques intermitentes pé entregados dentro de 10 min (0,5 mA x 0,5 s x 10 min; significa inter choque intervalo 40 s, escala s 10-70).
- Digite animal IDs e escolher se quer ligar os geradores de choque de acordo com o agrupamento (o grupo de choque e o grupo de controle). Em seguida, pressione o botão Iniciar .
- Quando for concluído o procedimento de stress, traga os ratos imediatamente para a sala de teste de conflito nas caixas de transporte; um rato por caixa.
4. o teste de conflito
Nota: O teste é realizado sob luz fraca durante a fase escura do ciclo claro/escuro na sala de teste de conflito.
- No dia antes do teste, trazer todos os ratos para a sala de teste de conflito e permitir que se habituar a câmara de campo aberto recompensa-proximidade (sem qualquer obstáculo, Figura 1) por 15 min.
- No dia do teste, coloque o rato masculino na câmara, permitindo a exploração livre por 10 min (sob a mesma condição que o dia antes do teste).
- Coloque um rato fêmea estral na gaiola-estímulo como incentivo e permitem que o macho sujeitas a abordagem livremente e investigar o rato incentivo por 5 min.
Nota: O rato masculino aleatoriamente é exposto a uma fêmea estral, e esta fêmea não é um rato familiar. - Após 5 min livre abordagem, mudar o assunto masculino da jaula de estímulo para a outra extremidade da arena, coloque um obstáculo (um 14 cm de largura placa grossa com pinos) e em seguida, iniciar o primeiro julgamento do teste.
Nota: O nível de dificuldade dos obstáculos é variado entre baseados em tipos de pinos e a altura da placa. O sistema de classificação é mostrado na tabela 2. - Mova o rato macho longe o estímulo-gaiola 15 – 20 s após cada vez que supera o obstáculo.
- Fim de um julgamento se o sujeito masculino sobe ou pula sobre o obstáculo 3 vezes dentro de 4 min e imediatamente começar o próximo julgamento com o aumento da dificuldade do obstáculo.
- Se um assunto masculino supera o obstáculo a menos de três vezes dentro de 4 min, terminar o teste e registrar os tempos que supera o obstáculo.
- Trazer o rato macho volta para a gaiola em casa e esfregar a câmara de campo aberto com 0,05% de ácido acético glacial.
- Pontuação cada ultrapassar (ou aproximando) conforme tabela 2. Use a soma das pontuações para todos os surmountings como uma pontuação total para um assunto masculino neste teste de conflito.
5. análise estatística
- Apresente os dados como média ± SEM ou pontos de dados únicos. No caso é desafiada a homogeneidade da variância ou distribuição normal de conjuntos de dados, log-transformar os conjuntos de dados.
- Analisar os efeitos do tratamento prévio de morfina no comportamento de busca de recompensa, exibido no dia 7 e 17 da retirada (Wd7 e Wd17) usando t-testes com "pré-tratamento" como um fator entre sujeitos (morfina versus solução salina, Figura 2).
- Analisar os efeitos do tratamento prévio de morfina no comportamento de busca de recompensa após repetidas testes usando análise de variância da repetido-medida (ANOVA) com "tempo da retirada" (Wd7 contra Wd14) como o fator de dentro-temas e "pré-tratamento" (morfina versus salina) como um fator entre indivíduos.
- Além disso, use a correlação de Pearson para analisar a correlação entre as pontuações que assuntos masculinos adquiridos nos dias 7 e 14 de abstinência (Wd7 e Wd14, Figura 3).
Nota: Após a conversão logarítmica dos dados originais, são realizadas análises estatísticas. - Analisar o efeito do estresse agudo sobre o comportamento de busca de recompensa em drogas-ingênuo ratos usando o teste-t com o estresse como um fator entre sujeitos (choque versus controle, Figura 4)
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Representative Results
Para explorar se este modelo de conflito pode revelar o comportamento de busca de recompensa mal-adaptativos/risco induzido por opiáceos, os comportamentos de busca de recompensa exibidos pelos grupos de solução salina e morfina-pré-tratados foram comparados pelo testes t após a curto prazo (Wd7) e a longo prazo (Wd17) a retirada da morfina respectivamente (Figura 2). Os resultados mostram que, no dia 7 e dia 17 de retirada, os ratos pré-tratados de morfina mostraram comportamentos se aproxima significativamente mais do que os ratos pré-tratados por solução salina (Figura 2a: t =-3.958; DF = 24; p < 0,01. Figura 2b: t =-2.350; DF = 17; p < 0.05), sugerir que os ratos morfina-retirada exibido mais comportamentos perseverative diante do obstáculo contrário e esse comportamento mal-adaptativos persiste por um longo tempo após a retirada.
Quando os ratos foram repetidamente testados sob a tarefa de conflito (Figura 3), a medida repetidas ANOVA mostrou um significativo efeito principal do pré-tratamento (F (1,24) = 12.910; p < 0,01). Nenhum efeito significativo do tempo de retirada (comparando Wd7 e Wd14, [F (1,24) = 0.807; p > 0,05)] nem interação significativa (retirada x interação pré-tratamento: F (1,24) = 1.093, p > 0,05) foi encontrada (ver Figura 3a). Para investigar mais a estabilidade do comportamento arriscado busca recompensa, foi analisada a correlação dos escores entre os períodos de abstinência diferentes (entre Wd7 e Wd14). Os resultados mostraram que os comportamentos se aproxima durante períodos de abstinência de curto e longo prazo foram significativamente correlacionados (correlação de Pearson: r = 0.445; p < 0.05, ver Figura 3b), indicando que os comportamentos de busca de recompensa arriscado dos ratos eram geralmente estáveis sobre repetidos testes.
Para investigar a influência de eventos estressantes sobre a capacidade de controle inibitório em animais, os ratos de droga-ingênuo foram expostos a um estresse de pé-choque intermitente antes do teste de conflito. Embora não havia nenhuma diferença significativa entre os grupos controle e estresse (figura 4a: t =-1.207; DF = 17; p > 0,05), os comportamentos de busca de recompensa exibido uma distribuição bi-modal dentro do grupo de stress, sugerindo os efeitos marcadamente diferenciais do estresse agudo sobre comportamentos de busca de recompensa arriscados entre os indivíduos (veja figura 4b).
Figura 1: O aparelho para o teste de conflito A câmara de campo aberto (85 cm comprimento x 35 cm largura x 50 cm de altura) com uma gaiola de estímulo segurar um rato fêmea estral foi usado para testar os comportamentos de busca de recompensa em conflito. Os temas masculinos tinham que superar um obstáculo perigoso, ou seja, escalar uma placa continuamente aumentada (34,5 cm comprimento x 13 cm de largura) grossa com pinos, para aproximar a gaiola de estímulo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: os comportamentos de busca de recompensa arriscados nos testes de conflito exibidos por ratos machos. (um) as partituras para aproximar-se comportamentos que exibido pela morfina-(preto) e soro fisiológico (branco) tratados grupos no dia 7 de retirada. (b) as pontuações para abordar comportamentos exibidos pela morfina-(preto) e soro fisiológico (branco) tratados grupos no dia 17 de retirada. As barras representam a média ± SEM. * indica p < 0,05; * * indica p < 0,01; Sal = soro fisiológico, Mor = Morphine.This figura foi modificada de17 com permissão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: os comportamentos de busca de recompensa arriscados consecutivamente testaram no dia 7 e 14 de retirada da morfina. (um) as partituras para aproximar-se comportamentos que exibido pela morfina-(preto) e soro fisiológico (branco) tratados grupos no dia 7 e 14 de retirada (Wd7 e Wd14). As barras representam a média ± SEM. (b) a correlação dos escores de comportamentos de busca de recompensa arriscados entre dois testes no dia 7 e 14 de retirada. * indica p < 0,05; * * indica p < 0,01. Sal = soro fisiológico, Mor = morfina. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: efeito do stress pé-choque sobre comportamentos de busca de recompensa em teste o conflito (um) as pontuações para abordar comportamentos exibidos pelo controle (cinza) e grupos (pretos) submetidos a salina pré-tratamento de choque. As barras representam a média ± SEM. * indica p < 0,05; * * indica p < 0,01. (b) as pontuações para abordar comportamentos exibidos pelos grupos controle e choque são mostradas em pontos únicos. Estes números foram modificados de referência17 , com permissão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Dia 1 | Dia 2 | Dia 3 | Dia 4 | Dia 5 | |
| 1 injeção dest | 10 mg/kg | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
| 2nd de injeção (mais tarde 6h) | 20 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg | 40 mg/kg |
Tabela 1: esquema de tratamento de compulsão, como morfina. Ratos machos são pré-tratados duas vezes diariamente por 5 dias com injeções intraperitoneal de solução salina ou morfina entregado em um regime de compulsão, como17: 10, 20, 20, 40, 40, 40, 40, 40, 40 e 40 mg/kg. As duas doses de morfina administrada em cada dia são separados pelo menos 6 h.
| Julgamento | Obstáculo | Marcando por abordagem |
| 1 | um + 0 cm | 0,5 |
| 2 | um + 2cm | 1.0 |
| 3 | um + 4cm | 1.5 |
| 4 | b + 4 cm | 3.0 |
| 5 | b + 7 cm | 3.5 |
| 6 | b + 10cm | 4.0 |
| 7 | b + 13 cm | 4.5 |
| 8 | b + 17 cm | 5.0 |
| 9 | c + 17 cm | 6.0 |
| 10 | c + 21 cm | 6.5 |
| 11 | c + 25 cm | 7.0 |
| 12 | c + 29 cm | 7.5 |
Tabela 2: A classificação para a quantidade de dificuldade o assunto conquistada por abordagem. De acordo com o comprimento de pinos e distância média entre os pinos, três tipos de placa grossa com pinos foram utilizados: um com pino-comprimento de 0,5 cm, distância média de 1 cm; b com pino-comprimento 0,8 cm, distância média de 0,5 cm; e c com pino-comprimento de 2 cm, distância média de 1 cm. A placa foi repetidamente aumentada da seguinte forma: 0, 2, 4, 7, 10, 13, 17, 21, 25 e 29 cm. Assim, existem 12 níveis de dificuldade de superar o obstáculo, ou seja, 12 ensaios, durante o teste. A quantidade de dificuldade o assunto conquistou cada vez que a abordagem a gaiola de estímulo é marcou e somada até a pontuação total para cada sujeito17.
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Discussion
Os défices de controle inibitório causados por drogas de abuso18 desempenham um papel fundamental na promoção de drogas compulsiva buscando/tendo comportamentos e recaída19,20. O modelo de conflito apresentado aqui oferece uma nova abordagem para explorar as mudanças no controle inibitório dos indivíduos expostos a drogas que viciam.
Existem vários passos críticos no protocolo. Em primeiro lugar, os sujeitos (ratos machos) devem adquirir experiência sexual antes de entrar a tarefa de acompanhamento do conflito. Por exemplo, os ratos machos precisam passar o rastreio de cópula (copulando pelo menos três vezes), antes do tratamento de drogas e são atribuídos em diferentes grupos, aleatoriamente. A fim de realizar a cópula triagem lisamente, dois pontos devem ser dada atenção ao. Um é o peso corporal de ratos fêmeas após ovariectomia. A ovariectomia é executada somente quando o peso dos ratos fêmeas atinge pelo menos 240 g. Desde que o amadurecimento do corpo dos ratos fêmeas ocorre mais tarde do que de maturação gonadal21, ovariectomia precoce poderia impedir que ratos machos com êxito copulando com ratos fêmeas, mesmo que as fêmeas foram administrados hormônios estrogênicos. O outro ponto é que ratos machos devem se habituar às caixas de seleção antes de cópula com ratos fêmeas, a fim de evitar a influência de Cainofobia para um contexto de novela na cópula seguinte.
Fatores de estresse devem ser rigidamente controladas durante todo o experimento. Ratos machos e fêmeas são manipulados e habituados ao transporte antes de começa a tarefa de conflito. Além disso, durante a habituação à câmara de recompensa-proximidade antes do dia de teste, ratos machos são repetidamente aproveitados e mudou-se da frente da gaiola estímulo para a outra extremidade da câmara várias vezes.
Como a tarefa de conflito continua, o obstáculo (a placa com pinos) repetidamente é aumentado, assim, ratos machos atrás do obstáculo não podem ver ou diretamente o rato fêmea na gaiola estímulo me sinto mais. A fim de manter os ratos machos continuamente atraídos pelo parceiro sexual, algum material de roupa de cama suja por ratos fêmeas estral são colocados na gaiola estímulo, permitindo o odor feminino a difundir no ar. Os fundamentos são recolhidos pela frente a tarefa de conflito e armazenados a-20 ° C até o uso.
Após a cessação do tratamento de morfina, os ratos machos poderiam ter sofrido sintomas de abstinência físicos que desaparecer 3 dias mais tarde14. Embora tenha havido uma possibilidade de que as suas patas foram picadas por alfinetes, nenhum ferimento grave ou sustentável foi detectado e actividades dos machos não foram influenciadas.
Nesta tarefa de conflito, um pode também investigar o impacto do valor de recompensa em busca de recompensa comportamentos, por exemplo, alterando o valor da recompensa, substituindo o rato fêmea (recompensa sexual) com um rato masculino (recompensa social)14,16. Se recompensas sexuais e sociais são usadas em um experimento, seria melhor executar o experimento em duas câmaras de recompensa-proximidade, uma recompensa sexual e o outro para recompensa social. Se o experimento tem que ser realizado em uma câmara, tanto a câmara e a gaiola de estímulo devem ser cuidadosamente limpos com 0,1% de ácido acético glacial entre sujeitos, bem como testes, para evitar a contaminação olfativa entre estímulos masculinos e femininos . Os pinos a bordo devem ser renovados regularmente para garantir a constante ameaça de ratos machos.
Desempenho dos ratos masculinos pode estar sujeitos a exercer efeito com testes repetidos sob esta tarefa de conflito. Notamos que alguns animais (especialmente os ratos pré-tratados por solução salina) poderiam evitar os pinos melhores através do exercício sobre a saltar sobre o obstáculo durante o segundo teste (Figura 3a). Embora haja uma correlação significativa entre os comportamentos de busca de recompensa arriscados durante os dois testes repetidos, não foi verificado se esta tarefa pode ser usada para identificar os fenótipos de alto e baixo risco de comportamento de busca de recompensa. Portanto, até agora esta tarefa de conflito é adequada para sonda rapidamente qualquer alteração no controle inibitório após tratamentos farmacológicos ou comportamentais.
Comparado com avançar/não avançar tarefa, tarefa de sinal de parada, várias tarefas de tempo de reação serial de escolhas e reversão de aprendizagem, que refletem a capacidade do sujeito de inibição sobre as respostas inadequadas depois de aprender as regras de tarefas2,5 , nesta tarefa de conflito, os sujeitos não precisa inibir qualquer respostas aprendidas mas inibir sua espontânea vontade/motivação devido às possíveis consequências negativas. Portanto, esta tarefa de conflito melhor imita a situação de conflito que viciados em muitas vezes enfrentam e ajuda a examinar a capacidade de controle inibitório durante o processo psicológico de ponderando o custo e benefício. Além disso, em contraste com outras tarefas de tomada de decisões, tais como decisão arriscada fazendo22,23 ou jogo tarefa24,25, esta tarefa de conflito é mais simples e mais fácil de realizar, uma vez que consiste apenas em single recompensa e risco único.
O modelo de conflito estabelecida pode ser usado para revelar déficits no controle inibitório após exposição à droga ópio, morfina. Acreditamos que este modelo comportamental também seria útil para descobrir rapidamente a deficiência do controle inibitório induzida por outras drogas que viciam. Além disso, o confiável induzida por opiáceos compulsivo busca recompensa comportamental fenótipo será identificado com base neste modelo de conflito. Neste momento, estamos trabalhando para substituir o obstáculo (o tabuleiro cheio de pinos) com uma rede elétrica, para que os choques de pé podem ser entregue aos ratos masculinos e também estão modificando o procedimento comportamental para medir repetidamente comportamentos de busca de recompensa do animal na face com consequências negativas (choques de pé). Como é sabido, não há nenhum disponível modelo comportamental de opiáceo-induzida busca recompensa comportamento compulsivo até agora, que é provavelmente por causa do efeito analgésico de opioides26,27.
Clinicamente, estresse é um dos fatores importantes levando a recaída após a retirada de drogas28. Além disso, o estresse também é um importante fator influenciando para comportamento de inibição/impulsividade/compulsivity29. A introdução deste modelo de conflito também nos permite observar as influências de vários eventos estressantes sobre a capacidade de controle inibitório em assuntos rapidamente após a exposição a drogas abusadas.
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Disclosures
Os autores não têm nada para divulgar.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado por CAS chave laboratório de Saúde Mental, Instituto de psicologia (KLMH2016K01) e avaliação e pesquisa de tecnologia de intervenção para a população de pacientes de estresse pós-traumático (JCYJ20170413170301569)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetic acid | Beijing Tongguangjingxi Chemical company | CN No.81601 | CH3COOH |
| Benzypenicillin sodium for Injection | Huabei Pharmaceutical | F7072109 | C16H17N2NaO4S |
| Cotton swabs | Wan Xin, Shandong, China | 8 cm | |
| β-estradiol benzoate | SIGMA-ALDRICH | E8515-200MG | estradiol benzoate |
| Gauze | Wan Xin, Shandong, China | 21s × 21s 110×100 | |
| Hemostatic forceps | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Morphine hydrochloride | Qinghai Pharmaceutical Co. Ltd | 20100105 | Morphine hydrochloride |
| Ophthalmic scissors | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. | ||
| Pentobarbital Sodium | Sigma | C11H17O3N2Na | |
| Precision animal shocker | Coulbourn | ||
| Progesterone | SIGMA-ALDRICH | V900699-5G | progesterone |
| Sesama oil | Fengyi trading company ltd. | Sesama oil | |
| Sodium chloride injection | HuaLu Pharmaceutical | H17092107 | NaCl |
| Scalpels | Gillette | 96797241 | |
| Surgical blades | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Suture needles | Han Qin, Shanghai, China | Δ1/2 6×14 | |
| Silk sutures | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co.,Ltd | ||
| Sprague-Dawley rats | Vital River Animal Center, Beijing, China | Sprague-Dawley | animal strain |
| Syringe | WeiGao Group Medical Polymer Co.Ltd | 1 mL, 2 mL | |
| Tweezers | Beijing Zhong Sheng Wanda Biotechnology Co.,Ltd. |
References
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