Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biochemistry
Click here for the English version

Biochemistry

إعداد الفطريات والمواد النباتية لتوضيح الهيكلية باستخدام الرنين المغناطيسي النووي الصلبة دينامية الاستقطاب النووي

Published: February 12, 2019 doi: 10.3791/59152
Automatic Translation
*1, *1, 2, 3, 1, 1
1Department of Chemistry, Louisiana State University, 2National High Magnetic Field Laboratory, 3Departments of Pediatrics, and Microbiology, Immunology and Parasitology, Louisiana State University Health Sciences Center
* These authors contributed equally

Summary

ويرد بروتوكول لإعداد 13ج،15عينات الفطريات والنبات المسمى ن مطيافية الرنين المغناطيسي النووي الصلبة المتعددة الأبعاد والتحقيق الاستقطاب النووي الحيوي (DNP).

Abstract

هذا البروتوكول يوضح كيفية انتظام 13ج، 15المسمى ن الفطرية يمكن أن تكون المواد المنتجة وكيف ينبغي أن سارت هذه المواد اللينة للرنين المغناطيسي النووي الصلبة وحساسية--تعزيز التثقيف والتجارب. ويرد أيضا إجراءات تجهيز عينة من الكتلة الحيوية النباتية. هذا الأسلوب يسمح بقياس مجموعة من 1 د و 2D 13ج-13ج/15ن الترابطات الأطياف، الذي يتيح توضيح الهيكلية ذات الدقة العالية الحيوية المعقدة في دولته الأصلية، مع الحد الأدنى من اضطراب. يمكن فحص العلامات النظائر بقياس الكثافة في أطياف د 1 وكفاءة نقل الاستقطاب في 2D ترابط الأطياف. ويمكن تقييم نجاح إعداد نموذج الاستقطاب النووي الحيوي (DNP) على عامل تعزيز الحساسية. تجارب أخرى بدراسة الجوانب الهيكلية للسكريات والبروتينات سيؤدي إلى وضع نموذج للهندسة المعمارية ثلاثية الأبعاد. هذه الطرق يمكن تعديلها وتكييفها للتحقيق في مجموعة واسعة من المواد الغنية بالكربوهيدرات، بما في ذلك الجدران الخلية الطبيعية من النباتات والفطريات والطحالب والبكتيريا، فضلا عن توليف أو مصممة على مجمع مع الآخر والبوليمرات الكربوهيدرات الجزيئات.

Introduction

الكربوهيدرات تلعب دوراً مركزياً في مختلف العمليات البيولوجية مثل تخزين الطاقة وبناء الهيكلية، والاعتراف بالهاتف الخلوي والالتصاق. أنها أثرت في جدار الخلية، الذي عنصر أساسي في النباتات والفطريات، والطحالب والبكتيريا1،،من23. جدار الخلية بمثابة مصدر مركزي لإنتاج الوقود الأحيائي، والمواد الحيوية، فضلا عن هدف واعدة للعلاجات المضادة للميكروبات4،،من56،،من78 , 9.

الفهم المعاصر لهذه المواد المعقدة تقدما جوهريا خلال عقود جهود التي كرست لتوصيف الهيكلية باستخدام أربع طرق رئيسية البيوكيميائية أو الوراثية. الأسلوب الرئيسي الأول يعتمد على علاجات متتابعة باستخدام المواد الكيميائية القاسية أو الإنزيمات لكسر جدران الخلايا إلى أجزاء مختلفة، التي تبعتها التركيبية وربط تحليل السكريات في كل جزء10. هذا الأسلوب يلقي الضوء على توزيع مجال البوليمرات، ولكن التفسير قد تكون مضللة بسبب الخواص الكيميائية والفيزيائية للجزيئات الحيوية. على سبيل المثال، من الصعب تحديد ما إذا كان الكسر القلوي استخراجها تنبع من مجال واحد من الجزيئات أقل تنظيماً أو من جزيئات المنفصلين مكانياً مع الذوبان قابلة للمقارنة. ثانيا، الأجزاء المستخرجة أو جدران الخلايا كلها يمكن أيضا أن تقاس باستخدام الحل الرنين المغناطيسي لتحديد الروابط التساهمية، كما وصفته crosslinking، بين جزيئات مختلفة11،،من1213، 14،15. وبهذه الطريقة، يمكن سبر بنية مفصلة التساهمية من المراسي، ولكن قد توجد قيود بسبب انخفاض معدلي الذوبان السكريات والعدد الصغير نسبيا من المواقع كروسلينكينج، والجهل بالآثار غير التساهمية التي تستقر السكاريد التعبئة، بما في ذلك الهيدروجين-الترابط، فإن دير فالس القوة، التفاعل الالكتروستاتيكي وتشابك البوليمر. ثالثا، كانت تقارب ملزم العزم في المختبر باستخدام السكريات معزولة16،17،،من1819، ولكن تنقية الإجراءات قد يترتب عليها تغيير جوهري هيكل وخصائص هذه الجزيئات الحيوية. فشل هذا الأسلوب أيضا لتكرار ترسب متطورة والجمعية للجزيئات الكبيرة بعد التركيب الحيوي. وأخيراً، النمط الظاهري ومورفولوجيا الخلايا والخصائص الميكانيكية لطفرات وراثية مع إنتاج الموهنة لبعض مكونات جدار الخلية تسليط الأضواء على المهام الهيكلية للسكريات، ولكن الأدلة الجزيئية أكثر ضروري لسد هذه الملاحظات العيانية مع الدالة هندسيا للبروتين الأجهزة20.

وأدخلت التقدم الذي أحرز مؤخرا في تطوير وتطبيق مطيافية الرنين المغناطيسي النووي الصلبة المتعددة الأبعاد فرصة فريدة لحل هذه الألغاز الهيكلية. تجارب الرنين المغناطيسي النووي الصلبة في 2D/3D تمكين التحقيق ذات الدقة العالية في تكوين وبنية المواد الغنية بالكربوهيدرات في الدولة الأصلية دون اضطراب كبير. أجريت دراسات الهيكلية بنجاح على الابتدائي وجدران الخلية الثانوية للنباتات، والكتلة الحيوية المعالجة حفازة، بيوفيلم البكتيرية، أشباح الصباغ في الفطريات، ومؤخرا من المؤلفين، جدران الخلية سليمة في نوع من الفطريات المسببة للأمراض رشاشيه دخناء 21 , 22 , 23 , 24 , 25 , 26 , 27 , 28 , 29 , 30 , 31-تطوير دينامية الاستقطاب النووي (DNP)32،33،34،35،36،،من3738 , 39 , 40 , 41 , 42 يسهل إلى حد كبير توضيح الهيكلية الرنين المغناطيسي النووي كتعزيز التثقيف حساسية ملحوظة تقصير الوقت التجريبية على هذه الحيوية المعقدة. البروتوكول هو موضح هنا تفاصيل الإجراءات المتعلقة بالنظائر-تصنيف الفطريات دخناء (أ) وإعداد الفطرية وعينات النبات لتوصيف الحالة الصلبة الرنين المغناطيسي النووي والتثقيف. ينبغي أن تكون إجراءات وضع العلامات مماثلة تنطبق على الفطريات الأخرى مع تغيير المتوسطة، وينبغي أن تكون إجراءات إعداد عينة ينطبق عموما على الحيوية الأخرى الغنية بالكربوهيدرات.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1-نمو 13ج، 15المسمى ن رشاشيه دخناء "السائلة المتوسطة"

  1. إعداد غير مسمى و 13ج، متوسط النمو المسمى N 15
    ملاحظة: سواء استخدمت "الخميرة استخراج سكر العنب ببتون" المتوسطة (YPD) و متوسط الحد الأدنى تحسين43 للحفاظ على الثقافة الفطرية. يتم تنفيذ كافة الخطوات بعد التعقيم في غطاء الاندفاق الصفحي للتقليل من التلوث.
    1. إعداد متوسطة السائلة غير مسمى: حل 6.5 غرام مسحوق YPD في 100 مل من الماء المقطر ثم اﻷوتوكﻻف لمدة 25 دقيقة في 134 درجة مئوية.
    2. إعداد متوسطة الصلبة غير مسمى
      1. إضافة 1.5 ز لاجار و 6.5 غرام من مسحوق YPD في 100 مل ماء المقطر.
      2. اﻷوتوكﻻف متوسطة لمدة 25 دقيقة في 121 درجة مئوية ثم تبرد وصولاً إلى ما يقرب من 50 درجة مئوية.
      3. نقل 13-15 مل المتوسط في كل البلاستيك المعقمة مسبقاً طبق بيتري وتغطية الطبق فورا باستخدام غطاء.
    3. إعداد 13ج، 15المسمى ن السائلة المتوسطة
      ملاحظة: إعداد الحل النمو للنظائر وسم، متوسط الحد أدنى الذي يحتوي على 13ج-الجلوكوز ونترات الصوديوم N من 15وحل عناصر النزرة تعد كل على حدة وثم المختلطة قبل الاستخدام.
      1. إعداد 100 مل المتوسطة الدنيا التي تحتوي على نظائر كما هو موضح في الجدول 1. قم بضبط درجة الحموضة إلى 6.6 باستخدام هيدروكسيد الصوديوم (1 م) أو حل HCl (1 م).
      2. اﻷوتوكﻻف متوسطة الحد الأدنى لمدة 25 دقيقة في 121 درجة مئوية.
      3. إعداد 100 مل (1، 000 x) لتتبع عناصر الحل، حل الأملاح المدرجة في الجدول 2 في الماء المقطر. اﻷوتوكﻻف الحل لمدة 25 دقيقة في 134 درجة مئوية. تهدئة وتخزين الحل عند 4 درجة مئوية للاستخدام القصير الأجل. سيكون حوالي 6.5 درجة الحموضة ويمكن التحقق من استخدام مقياس الأس الهيدروجيني.
      4. إضافة 0.1 مل من محلول العناصر النزرة إلى 100 مل من 13ج، 15المسمى ن متوسط الحد الأدنى كما هو موضح في الجدول 2 قبل الاستخدام.
  2. نمو المواد الفطرية
    1. نقل كمية صغيرة من الفطريات من التخزين على صفيحة YPD باستخدام حلقة إينوكولاتينج في غطاء الاندفاق الصفحي. الحفاظ الثقافة في 30 درجة مئوية لمدة يومين في حاضنة.
    2. استخدم حلقة إينوكولاتينج لنقل نشط حافة الفطرية المتنامية إلى 13ج،15وسم ن الحل في غطاء الاندفاق الصفحي. الحفاظ على الثقافة في 30 درجة مئوية ل 3-5 أيام عند 220 دورة في الدقيقة في حاضنة تهتز.
    3. الطرد المركزي في 4,000 س ز 20 دقيقة إزالة المادة طافية وجمع بيليه.
    4. استخدام الملاقط جمع ز ~0.5 بيليه رطب جيدا (> 50 الترطيب % wt) لدراسات الرنين المغناطيسي النووي. ستزداد سوءا فقدان الماء في أي لحظة إلى حد كبير القرار الطيفية.
      ملاحظة: إذا لزم الأمر، كمية صغيرة (0.1 g) من mycelia رطب يمكن فصلها وتجفيفها تماما تحت ن2 تدفق الغاز في غطاء محرك السيارة أو ليوفيليزير تقدير مستوى الماء وحساب نسبة كتلة جافة. عادة، بيليه الذي يحتوي على ~0.3 ز يمكن الحصول على الكتلة الجافة بعد 3 أيام. إذا كانت التجربة الرنين المغناطيسي النووي ستجري طويلة (> 7 أيام) و/أو إذا كانت دولة الفطريات يحتاج إلى إصلاح، المواد الفطرية يمكن تجميد عميق في سائل ن2 ل 10-20 دقيقة قبل إجراء مزيد من المعالجة. إذا كانت التجربة ستكون قصيرة (3-6 أيام)، التجميد يمكن تخطيها حتى تظل العينة الطازجة.
    5. خلط المواد الزائدة بنسبة 20% (v/v) من الجلسرين في أنبوب الطرد مركزي والاحتفاظ بها في ثلاجة ᵒC-80 للتخزين على المدى الطويل.

2-إعداد دخناء أ Solid-state الرنين المغناطيسي ودراسات إدارة التخطيط الوطني

  1. إعداد دخناء أ لتجارب الرنين المغناطيسي النووي الصلبة
    1. دياليزي ال 13ج، 15المسمى ن الفطرية من عينة (الخطوة 1.2.4.) ضد 1 لتر عازلة الفوسفات 10 ملم (pH 7.0) في 4 درجات مئوية باستخدام كيس الغسيل الكلوي مع وزن الجزيئي كاتشين 3.5 استقطاع لإزالة الجزيئات الصغيرة من متوسط نمو لإجمالي مدة 3 أيام. تغيير المخزن المؤقت مرتين يوميا.
      ملاحظة: بدلاً من ذلك، العينة يمكن غسلها عن 6-10 مرات استخدام المياه لإزالة الجزيئات الصغيرة المتبقية.
    2. نقل العينة إلى أنبوب 15 مل والطرد المركزي لمدة 5 دقائق (10,000 س ز) استخدام الطرد مركزي benchtop. إزالة المادة طافية وجمع المواد الفطرية المتبقية.
    3. حزمة 70-80 ملغ شكل موحد 13عينة المسمى ج ورطب جيدا لصق في دوار2 زرو 4 ملم أو 30-50 مغ للدوارات 3.2 mm لتجارب الرنين المغناطيسي النووي. متكررة ضغط العينة برفق باستخدام قضيب معدني وامتصاص المياه الزائدة باستخدام الورق.
    4. محكم في آب الدوار وإدراج العينة في المطياف لتوصيف الرنين المغناطيسي النووي الصلبة.
      ملاحظة: اقترحت الدوارات العلامة التجارية الجديدة للتقليل من احتمال تعطل الدوار وعينه الانسكاب في مطياف الرنين المغناطيسي النووي. إذا لزم الأمر، يمكن إدراج كل إف المتاح مع ختم مسامير ليكون بمثابة حاوية ثانوي داخل الدوار.
  2. إعداد عينات دخناء أ لتجارب إدارة التخطيط الوطني
    1. إعداد 100 ميليلتر من التثقيف المذيبات29،44 (يعرف أيضا باسم مصفوفة إدارة التخطيط الوطني) في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل 13ج،15المسمى ن العينات فطرية. مصفوفة إدارة التخطيط الوطني هذا يحتوي على خليط من د8-الجلسرين/د2س/ح2س (60/30/10 المجلد %).
      ملاحظة: إذا كانت العينات غير مسمى التحقيق، ثم إعداد مصفوفة إدارة التخطيط الوطني باستخدام 13المنضب ج د8-الجلسرين (12ج3، 99.95 في المائة؛ د8، 98 ٪) وإشارة د2س وح2س لتجنب 13ج مساهمة من المذيبات.
    2. حل 0.7 ملغ أموبول45 في 100 ميليلتر من المذيبات التثقيف للنموذج 10 مم حل جذري الأسهم. دوامة لمدة 2-3 دقيقة لضمان أن الجذور هي حل تماما في الحل.
    3. ينقع 10 مغ من دياليزيد 13ج، 15المسمى ن المواد الفطرية كما هو موضح في الخطوات السابقة (الخطوات 2.1.1 و 2.1.2) إلى 50 ميليلتر من حل أموبول، وطحن الخليط باستخدام مدقة وهاون لضمان تغلغل الجذور في أقل ما يقال جدران الخلايا المسامية.
      ملاحظة: للحد من معدل فقدان الماء، طحن يمكن أيضا تجري في أنبوب ميكروسينتريفوجي باستخدام ميكروبيستلي.
    4. إضافة ميليلتر 30 آخر من الحل الجذري لبيليه مطحون للصودا الكاوية المزيد العينة الفطرية.
    5. حزمة بيليه في دوار ياقوت 3.2 ملم، وضغط أقل ما يقال وإزالة المذيب التثقيف الزائدة. إضافة المكونات سيليكون 3.2 ملم لمنع فقدان الماء. عادة، يمكن أن تكون معبأة 5-30 ملغ عينة للدوار. المبلغ المحدد يجب أن يتحدد بشرط الحساسية تجارب الرنين المغناطيسي النووي لإجراء.
    6. إدراج وتدور العينة في مطياف التثقيف وقياس طيف تعزيز التثقيف تحت إشعاع الموجات الدقيقة ومقارنتها مع طيف الموجات قبالة. هذا سيؤدي إلى تعزيز عامل اليورو/إيقاف، التي ينبغي أن تكون 20-40 لهذه المواد المعقدة. تشغيل التجارب المصممة لتحديد بنية جدار الخلية.

3-إعداد الكتلة الحيوية النباتية للرنين المغناطيسي ودراسات إدارة التخطيط الوطني

  1. تحضير المواد النباتية للرنين المغناطيسي النووي الصلبة
    1. إنتاج موحد 13ج المسمى نباتات داخلية باستخدام اللوازم2 13شركة في نمو الدائرة 13ج-جلوكوز وسيط أو كما هو موضح سابقا46،47 أو مباشرة شراء مواد المسمى من شركات العلامات النظائر.
      ملاحظة: 13ج-الجلوكوز يمكن فقط استخدام في النمو الظلام لتجنب إدخال 12ج بعملية التمثيل الضوئي.
    2. قطع شكل موحد المسمى 13ج المواد النباتية إلى قطع صغيرة (عادة 1-2 ملم في البعد) باستخدام شفرة حلاقة مختبر.
      ملاحظة: تبعاً للغرض، جدران الخلية المستخرجة تستخدم أحياناً لتحديد الخصائص الهيكلية وبروتوكولات مفصلة في21،الدراسات السابقة46.
    3. إذا كان سابقا تجفف العينة، إضافة 100 ميليلتر من الماء إلى 30 ملغ مواد النباتية في أنبوب ميكروسينتريفوجي 1.5 مل، الدوامة، حجته في درجة حرارة الغرفة لمدة 1 يوم. الطرد المركزي في س 4,000 ز لمدة 10 دقائق وإزالة المياه الزائدة باستخدام ماصة.
    4. إذا كانت العينة المجففة ابدأ في أي نقطة، مباشرة استخدام العينة دون تلقي مزيد من العلاج.
    5. حزمة المواد النباتية الناتجة إلى 3.2 مم أو 4 مم2 زرو الدوارات لتجارب الرنين المغناطيسي النووي الصلبة.
  2. تحضير المواد النباتية لدراسات إدارة التخطيط الوطني
    1. إعداد 60 ميليلتر حل الأسهم من 10 مم أموبول الراديكالية كوصف الخطوات 2.2.1 و 2.2.2.
    2. قطع شكل موحد المسمى 13ج المواد النباتية دراستها إلى قطع صغيرة (1-2 مم في البعد) استخدام شفرة حلاقة مختبر وتزن 20 ملغ المواد النباتية.
    3. اليد طحن القطع النباتية إلى جزيئات صغيرة (~ 1-2 مم) باستخدام قذائف الهاون والمدقة. مساحيق النهائي لها مظهر متجانس.
    4. إضافة 40 ميليلتر من الحل الأسهم التثقيف أعدت في الخطوة السابقة (الخطوة 2.2.2) للمواد النباتية وطحن ملطفة لمدة 5 دقائق لضمان متجانسة الاختلاط مع الراديكالية.
    5. إضافة آخر ميليلتر 20 من حل الأسهم كذلك هيدرات المواد النباتية بعد الطحن.
    6. حزمة العينة النباتية متوازن في دوار ياقوت 3.2 ملم لتجارب إدارة التخطيط الوطني. إدراج المكونات سيليكون لتجنب فقدان الماء.

4-معيار الرنين المغناطيسي النووي الصلبة تجارب لتوصيف الأولية الحيوية الغنية بالكربوهيدرات

ملاحظة: يتم توفير لمحة موجزة عن تجارب الرنين المغناطيسي النووي في هذا القسم. ومع ذلك، يتطلب توضيح الهيكلية عادة خبرة واسعة. ولذلك، يوصي ببذل جهود تعاونية مع سبيكتروسكوبيستس الرنين المغناطيسي النووي.

  1. قياس 1-د 13ج عبر الاستقطاب (CP)، 13ج الاستقطاب المباشر (DP) مع 2-s و 35-s سلة التأخير، و 1ح-13"ج كفؤ"48،49 الأطياف للحصول على فهم عام للديناميكية توزيع مكونات الخلية (الشكل 1a). جدر الخلايا عادة الجزء جامدة نسبيا ويحمل إشارات المهيمنة في الطيف CP.
  2. قياس بسلسلة من التجارب علاقة13ج 2D القياسية 13ج-للمهمات صدى إشارات 13ج. بدء تشغيل مع عدم كفاية إعادة تركيز50،51 للحصول على اتصال الكربون، التي تحتاج إلى مساعدة بسلسلة من التجارب من خلال الفضائية مثل 1.5 ms رفدر52 (الشكل 1b) والحبل 50 مللي ثانية/الدر53 التجارب.
    ملاحظة: إذا كان من اهتمام لإيجاد عينة غنية بعنصر معين، على سبيل المثال، الابتدائية أو جدران الخلايا الثانوية، ثم شرائح متعددة أو محطات متعددة قد تحتاج إلى تقاس بشكل منفصل للعثور على العينة على النحو الأمثل.
  3. إجراء تجارب الارتباط13ج 2D 15N--الذي يمكن أن يقاس بتسهيل مهام صدى للبروتينات والكربوهيدرات نيتروجيناتيد.
    ملاحظة: التعيين الرنين عادة ما تستغرق وقتاً طويلاً. يجري حاليا وضع طريقة لتسهيل الإحالة صدى إشارات الكربوهيدرات لأولئك العلماء دون خبرة سابقة.
  4. قياس تجارب أكثر تخصصا لتحديد التقارب المكاني (الشكل 1 ج، د) والماء وموبيليتيس من الجزيئات الحيوية المعقدة لتحديد هيكل ثلاثي الأبعاد للمواد الغنية بالكربوهيدرات ووصف بصورة منتظمة سابقا22،29.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

العلامات النظائر إلى حد كبير يعزز حساسية الرنين المغناطيسي النووي ويجعل من الممكن لقياس مجموعة من 2D 13ج-13ج و 13ج-15ن أطياف الارتباط لتحليل تكوين والماء والتنقل والتعبئة من البوليمرات، التي سوف تكون متكاملة لبناء نموذج ثلاثي الأبعاد للعمارة خلية جدار (الشكل 1). إذا نجحت عملية تسمية موحدة، يمكن جمع مجموعة كاملة من ج د 1 13و 15ن أطياف ضمن ح 1 وكل طيف 2D القياسية ينبغي أن لا تزيد عن 24 ساعة لقياس.

عينات معدّة أعدادا جيدا عادة تتوقع كلا كثافات عالية الرنين المغناطيسي النووي وخطوط حادة. المساس بأي معلمة تشير إلى إعداد نموذج الأمم المتحدة الأمثل. ينبغي إعداد العينات الفطرية بطريقة ابدأ المجففة، والجفاف الجزئي أثناء التعبئة الخطوات التي يمكن أن تؤدي إلى توسيع ملحوظ لينيويدث. إذا كان الوقت تجريبية إلى حد كبير وقتاً أطول من المتوقع لنموذج الرنين المغناطيسي معبأة تماما، قد تكون على مستوى وضع العلامات منخفضة. إذا كانت الإشارات قبالة قطري يصعب الحصول عليها في 2D 13ج-13ج ارتباط الطيف، وضع العلامات الإحصائية ربما يكون قد حدث (الشكل 1b). قمم 13ج اثنين صفحة في الدقيقة 92 و 96 التوقيع الكربون 1 إشارات من الجلوكوز54، ولذلك مباشرة كثافة قوية في كمية 13ج الأطياف الاستقطاب (DP) تقاس بتأخيرات طويلة سلة من 35 s عادة ما تشير إلى الهيمنة الجزيئات الصغيرة بسبب الغسيل الكلوي غير مكتملة أو الغسل (الشكل 1a). مع عينات المسمى جيدا، يمكن قياس الارتباطات البعيدة المدى كذلك الكشف عن التقارب المكاني للجزيئات الحيوية (الشكل 1 ج) وبناء النموذج الهيكلي لجدران الخلايا سليمة (الشكل 1 د).

الاسم الكيميائي الصيغة الكيميائية تركيز (غرام/لتر)
فوسفات ديبوتاسيوم ك2هبو4 1.045 ز
هيبتاهيدراتي سلفات المغنيزيوم مجسو4·7H2س ز 0.52
مونوبوتاسيوم فوسفات خ2ص4 ز 0.815
15 ن-نترات الصوديوم 15 نانو3 ز 6.0
كلوريد البوتاسيوم بوكل ز 0.52
U-13ج-الجلوكوز 13 ج6ح12س6 ز 10.0

الجدول 1. تكوين الحد الأدنى المتوسط.

الاسم الكيميائي الصيغة الكيميائية تركيز (غرام/لتر)
رباعي هيدرات موليبدات أمونيوم (NH4) 6 24·4H مو7س2س ز 11
حمض البوريك بو ح33 ز 11
سداسي هيدرات كلوريد كوبالتوس كوكل2·6H2س ز 16
بينتاهيدراتي نفايات كبريتات CuSO4·5H2س ز 16
كبريتات الحديدية هيبتاهيدراتي فيسو4·7H2س ز 5
رباعي كلوريد المنغنيز هيدرات الحركة2·4H2س ز 5
اتهيلينيديامينيتيتراسيتاتي صوديوم غ4EDTA·4H2س ز 60
كبريتات الزنك هيبتاهيدراتي زنسو4·7H2س ز 22

الجدول 2. تكوين الحل العناصر النزرة (مركزة). لاحظ أنه يمكن لإعداد الفطريات غير مسمى، استخدام الجلوكوز غير المسماة وغير المسماة نترات الصوديوم.

Figure 1
رقم 1. مخطط انسيابي لوصف بنية جدار الخلية الفطرية باستخدام الرنين المغناطيسي النووي الصلبة. () د 1 الأطياف لفحص عينة أولية. من أعلى إلى الأسفل، عنبة، 13ج DP مع سلة 2-s التأخير، 13ج DP مع التأخير سلة 35-s وأطياف CP ج 13، مع تناقص الحركة للجزيئات المكتشفة. (ب) 2D 13ج-13ج ارتباط الطيف تقاس باستخدام 1.5 ms رفدر ريكوبلينج. (ج) ممثل الصليب الجزيئات ذروة الكشف عن استخدام الطيف الاسمية 15-مرض التصلب العصبي المتعدد. (د) نموذج الهيكلية التي تم الحصول عليها من بيانات الرنين المغناطيسي النووي. لوحات جيم و دال ، وعدلت من كانغ et al., nat. المشتركة. 9، 2747 (2018). الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

بالمقارنة مع أساليب الكيمياء الحيوية، الرنين المغناطيسي النووي الصلبة مزايا كأسلوب غير المدمرة وعالية الدقة. الرنين المغناطيسي النووي أيضا الكمية في التحليل التركيبي، وخلافا لمعظم أساليب تحليلية أخرى، لا أوجه عدم اليقين وأدخلت بالذوبان المحدودة من البوليمرات الحيوية. إنشاء البروتوكول الحالي يسهل الدراسات المستقبلية على الحيوية الغنية بالكربوهيدرات والبوليمرات فونكتيوناليزيد. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن تحليل البيانات وتعيين الرنين يمكن تستغرق وقتاً طويلاً وعادة ما يتطلب التدريب المنتظم. الكتاب حاليا بوضع أدوات وقواعد البيانات لمساعدة العلماء دون خبرة مسبقة للتغلب على هذا الحاجز.

نظراً لوفرة النظائر المشعة الطبيعية 13ج 1، 1 في المائة فقط، هو الاحتمال لمراقبة 13ج-13ج عبر استخدام الذروة غير مسمى المواد فقط 0.012% (1.1% x 1.1 في المائة) لذلك باستخدام شكل موحد المسمى عينات. ولذلك، تخصيب النظائر تحقيقه باستخدام هذا البروتوكول إلى حد كبير يعزز حساسية الرنين المغناطيسي بأربعة أوامر من حجم ويمكن تجارب علاقة ثنائية الأبعاد للتصميم الهيكلي.

وينبغي أن يحمل العينات المحسنة، ورطب جيدا خطوط حادة في 2D 13ج-13ج ترابط الأطياف. يجب أن يحمل عناصر متحركة، مثل بيتا glucans في دخناء أ وبيكتينس في النباتات ذات عرض كامل في لينيويدث (فوم) نصف الحد الأقصى من 0.3-0.5 جزء في المليون في 600-800 ميجاهرتز الرنين المغناطيسي مطيافات29،31. مكونات صلبة لها قمم أوسع قليلاً بسبب التغايرية conformational المتكررة، والتي تشكل وحدات السكر والافتقار إلى الالتماسات الجزيئية السريعة. لينيويدث نموذجي 13ج هو 0.7-1.0 ppm ل microfibrils السليلوز في النباتات و 0.5-0.7 جزء في المليون كيتين في الفطريات55. لينيويدث حادة من السليولوز وكيتين ناتجة أساسا عن كريستالينيتي البوليمر، وبالتالي هو جزئيا مقاومة للجفاف والتغير في درجة الحرارة، على سبيل المثال، درجة حرارة المبردة للتثقيف تجربة56،57. بيد أن الحدة ذروة البوليمرات مصفوفة، وحساسة للغاية لتغيير شروط العينة التي تؤثر على حركة البوليمر، وبالتالي، يمكن استخدامه كمؤشر لترطيب عينة. عادة ما تسمى الخطوط العريضة للبوليمرات مصفوفة نقص الماء في العينة، مما قد يكون كلياً أو جزئيا استردادها بإعادة إضافة المياه58. بشكل عام، مستوى الماء من 50-80% بالوزن ما يكفي لتوفير لينيويدث جيدة في المصنع والعينات فطرية.

غالباً ما يتم التثقيف اللازمة للتحقيق في هذه النظم كامل الخلية تحديا. عادة، يمكن أن يتحقق تعزيز حظيرة 20-40 حساسية على نموذج أمثل في مطياف التثقيف 600 ميجاهرتز/395 غيغاهرتز وتزيد هذه القيمة مع تناقص الحقل، على سبيل المثال، تضاعف تقريبا في26،إدارة التخطيط الوطني بسرعة 400 ميجاهرتز/263 غيغاهرتز59 . وهناك العديد من العوامل التي يمكن أن تؤثر على كفاءة إدارة التخطيط الوطني. أولاً، اختراق الشبكة المسامية لجدران الخلايا من الجذور أمر حاسم ويمكن تسهيل هذه العملية إلى حد كبير طحن خفيف الحيوية في مصفوفة إدارة التخطيط الوطني المحتوية على الراديكالية. ثانيا، الخصائص الفيزيائية، صلابة على سبيل المثال، العينة يؤثر على اختيار السلطة تعمل بالموجات الدقيقة، ومصفوفة إدارة التخطيط الوطني "يذوب" تحت 12 ث تشعيع كما يدل على ذلك بشحذ الأصداء 1ح، الذي لم يكن مشكلة بالنسبة للمصنع أقسى وينبع60. نتيجة لذلك لوحظ نمط موحد الخواص أكثر من ذروة المذيبات 1ح، مع خفض إلى حد كبير امبليتثد الغزل وتعزيز التثقيف الموهن. ولذلك، يوصي بالسلطة الأضعف لمواد أكثر ليونة. وثالثاً، ينبغي أن يكون الأمثل تكوين مصفوفة إدارة التخطيط الوطني. وتبين أن د8-والغليسيرول/د2س/ح2س هي عموما أفضل المذيبات للمواد اللينة بينما خيار أبسط وأقل تكلفة من د2س/ح2س يمكن أيضا أن تكون فعالة في بعض الحالات لأن السكريات الموجودة في النظام بمثابة المنتجة إلى حد ما. وفي المقابل، د6-[دمس]/د2س/ح2س حل يفشل في النباتات والفطريات عينات، مع أقل من 10 إضعاف من تعزيز الحساسية، وبالتالي فمن غير المستحسن للاستخدام إلا إذا كان لأغراض خاصة. قد تجلى مؤخرا بروتوكولا خالية من مصفوفة تكون فعالة للغاية بسبب نضوب المذيبات، الذي يقوم بإنشاء مساحة إضافية لاستيعاب أكثر المواد34،،من5661. ومع ذلك، يعرض فقدان الماء اضطراب كبير في هيكل الجزيئات الحيوية، وبالتالي هذا الأسلوب قد لا تكون مناسبة للنظم البيولوجية. إذا كان غير مسمى الخلية الجدران أن تدرس، 13المنضب ج د8-الجلسرين/د2س/ح2س هو المذيب المثلى التي لا تسهم أي إشارات 13ج الوفرة الطبيعية ولا أي حساسية من تضحيات تعزيز.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس لدينا شيء الكشف عنها.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل "المؤسسة الوطنية للعلوم" من خلال المكتب جبهة الخلاص الوطني-1833040. مختبر المجال المغناطيسي وطنية عالية (نهمفل) معتمد من قبل "المؤسسة الوطنية للعلوم" من خلال هيئة الهجرة واللاجئين-1157490، وفي ولاية فلوريدا. نظام ماس-إدارة التخطيط الوطني في نهمفل تموله جزئيا OD018519 S10 المعاهد الوطنية للصحة، وجبهة الخلاص الوطني تشي-1229170.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Ammonium Molybdate Tetrahydrate Acros Organics 12054-85-2
AMUPol Cortecnet C010P002
Analytical weighing balance Ohaus B730439218 Model PA84C
Bioclave 16 L VWR 470230-598
Biosafety Cabinet Labconco corporation 302319100
Boric acid VWR BDH9222 store at 15-30 °C
Cobalt(II) Chloride Hexahydrate Honeywell|Fluka 60820 ≥98 %
Copper(II) Sulfate Pentahydrate BDH BDH9312 ≥98 %
Corning LSE shaking incubator Thermo Fisher Scientific 7202152
D2O Sigma Aldrich 151882 99.9 atom % D
d6-DMSO Sigma Aldrich 151874 99.9 atom % D
d8-glycerol Sigma Aldrich 447498 ≥99 atom % D
Dialysis tubing 3.2 kDa Sigma Aldrich D2272 132724
Dipotassium Phosphate VWR BDH9266 ≥98 %
Glycerol Sigma Aldrich G5516 ≥99.5 %
Heraus Megafuge 16R Centrifuge Thermo Fischer Scientific 750004271 Maximum RCF 25,830 x g
HR-MAS Disposable Insert Kit Bruker B4493 Kel-F
Iron(II) Sulfate Heptahydrate Alfa Aesar 14498 ≥99+ %
Magnesium Sulfate Heptahydrate VWR 10034998 store at 18-26 °C
Manganese(II) Chloride Tetrahydrate Alfa Aesar 11563 ≥99 %
Monopotassium Phosphate VWR 470302-254 ≥99 %
pH Meter Mettler Toledo B706689216
Tetrasodium Ethylenediaminetetraacetate Acros Organics 13235-36-9 ≥99.5 %
Zinc Sulfate Heptahydrate Alfa Aesar 33399 ≥98 %
12C3, d8-glycerol Cambridge Isotope Laboratory CDLM-8660 12C3, 99.95%; D8, 98%
13C6-glucose Sigma Alrdrich 364606 ≥99 % (CP)
15N-sodium nitrate Sigma Aldrich 364606 ≥98 % 15N, ≥99 (cp)
3.2 mm sapphire NMR rotor Cortecnet B6939
3.2 mm Silicone plug Bruker B7089
4 mm MAS Rotor Kit Bruker H14355 Zirconia

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Murrey, H. E., Hsieh-Wilson, L. C. The chemical neurobiology of carbohydrates. Chemical Reviews. 108 (5), 1708-1731 (2008).
  2. Latge, J. P. The cell wall: a carbohydrate armour for the fungal cell. Molecular Microbiology. 66 (2), 279-290 (2007).
  3. Cosgrove, D. J. Growth of the plant cell wall. Nature Reviews Molecular Cell Biology. 6 (11), 850-861 (2005).
  4. Furtado, A., et al. Modifying plants for biofuel and biomaterial production. Plant Biotechnology Journal. 12 (9), 1246-1258 (2014).
  5. Loqué, D., Scheller, H. V., Pauly, M. Engineering of plant cell walls for enhanced biofuel production. Current Opinion in Plant Biology. 25, 151-161 (2015).
  6. Latge, J. P. Aspergillus fumigatus and aspergillosis. Clinical Microbiology Reviews. 12 (2), 310-350 (1999).
  7. Ragauskas, A. J., et al. The path forward for biofuels and biomaterials. Science. 311 (5760), 484-489 (2006).
  8. Service, R. F. Cellulosic ethanol - Biofuel researchers prepare to reap a new harvest. Science. 315 (5818), 1488-1491 (2007).
  9. Somerville, C., Youngs, H., Taylor, C., Davis, S. C., Long, S. P. Feedstocks for Lignocellulosic Biofuels. Science. 329 (5993), 790-792 (2010).
  10. Schiavone, M., et al. A combined chemical and enzymatic method to determine quantitatively the polysaccharide components in the cell wall of yeasts. FEMS Yeast Research. 14 (6), 933-947 (2014).
  11. Cheng, K., Sorek, H., Zimmermann, H., Wemmer, D. E., Pauly, M. Solution-State 2D NMR Spectroscopy of Plant Cell Walls Enabled by a Dimethylsulfoxide-d(6)/1-Ethyl-3-methylimidazolium Acetate Solvent. Analytical Chemistry. 85 (6), 3213-3221 (2013).
  12. Mansfield, S. D., Kim, H., Lu, F. C., Ralph, J. Whole plant cell wall characterization using solution-state 2D NMR. Nature Protocols. 7 (9), 1579-1589 (2012).
  13. Tan, L., et al. An Arabidopsis Cell Wall Proteoglycan Consists of Pectin and Arabinoxylan Covalently Linked to an Arabinogalactan Protein. Plant Cell. 25 (1), 270-287 (2013).
  14. Kollar, R., Petrakova, E., Ashwell, G., Robbins, P. W., Cabib, E. Architecture of the Yeast-Cell Wall - the Linkage between Chitin and Beta(1-3)-Glucan. Journal of Biological Chemistry. 270 (3), 1170-1178 (1995).
  15. Kollar, R., et al. Architecture of the yeast cell wall - beta(1->6)-glucan interconnects mannoprotein, beta(1-3)-glucan, and chitin. Journal of Biological Chemistry. 272 (28), 17762-17775 (1997).
  16. Mccann, M. C., et al. Old and new ways to probe plant cell wall architecture. Canadian Journal of Botany. 73, S103-S113 (1995).
  17. Whitney, S. E. C., Brigham, J. E., Darke, A. H., Reid, J. S. G., Gidley, M. J. In-Vitro Assembly of Cellulose/Xyloglucan Networks - Ultrastructural and Molecular Aspects. The Plant Journal. 8 (4), 491-504 (1995).
  18. Zykwinska, A. W., Ralet, M. C. J., Garnier, C. D., Thibault, J. F. J. Evidence for in vitro binding of pectin side chains to cellulose. Plant Physiology. 139 (1), 397-407 (2005).
  19. Kiemle, S. N., et al. Role of (1,3)(1,4)-beta-Glucan in Cell Walls: Interaction with Cellulose. Biomacromolecules. 15 (5), 1727-1736 (2014).
  20. Pogorelko, G., Lionetti, V., Bellincampi, D., Zabotina, O. Cell wall integrity: targeted post-synthetic modifications to reveal its role in plant growth and defense against pathogens. Plant Signaling & Behavior. 8 (9), e25435 (2013).
  21. Wang, T., Park, Y. B., Cosgrove, D. J., Hong, M. Cellulose-Pectin Spatial Contacts Are Inherent to Never-Dried Arabidopsis thaliana Primary Cell Walls: Evidence from Solid-State NMR. Plant Physiology. 168 (3), 871-884 (2015).
  22. Wang, T., Salazar, A., Zabotina, O. A., Hong, M. Structure and dynamics of Brachypodium primary cell wall polysaccharides from two-dimensional 13C solid-state nuclear magnetic resonance spectroscopy. Biochemistry. 53 (17), 2840-2854 (2014).
  23. Grantham, N. J., et al. An even pattern of xylan substitution is critical for interaction with cellulose in plant cell walls. Nature Plants. 3 (11), 859-865 (2017).
  24. Simmons, T. J., et al. Folding of xylan onto cellulose fibrils in plant cell walls revealed by solid-state NMR. Nature Communications. 7, 13902 (2016).
  25. Komatsu, T., Kikuchi, J. Selective Signal Detection in Solid-State NMR Using Rotor-Synchronized Dipolar Dephasing for the Analysis of Hemicellulose in Lignocellulosic Biomass. The Journal of Physical Chemistry Letters. 4 (14), 2279-2283 (2013).
  26. Perras, F. A., et al. Atomic-Level Structure Characterization of Biomass Pre- and Post-Lignin Treatment by Dynamic Nuclear Polarization-Enhanced Solid-State NMR. The Journal of Physical Chemistry A. 121 (3), 623-630 (2017).
  27. Chatterjee, S., Prados-Rosales, R., Itin, B., Casadevall, A., Stark, R. E. Solid-state NMR Reveals the Carbon-based Molecular Architecture of Cryptococcus neoformans Fungal Eumelanins in the Cell Wall. Journal of Biological Chemistry. 290 (22), 13779-13790 (2015).
  28. Zhong, J., Frases, S., Wang, H., Casadevall, A., Stark, R. E. Following fungal melanin biosynthesis with solid-state NMR: biopolymer molecular structures and possible connections to cell-wall polysaccharides. Biochemistry. 47 (16), 4701-4710 (2008).
  29. Kang, X., et al. Molecular architecture of fungal cell walls revealed by solid-state NMR. Nature Communications. 9 (1), 2747 (2018).
  30. Takahashi, H., et al. Solid-state NMR on bacterial cells: selective cell wall signal enhancement and resolution improvement using dynamic nuclear polarization. Journal of the American Chemical Society. 135 (13), 5105-5110 (2013).
  31. Wang, T., Hong, M. Solid-state NMR investigations of cellulose structure and interactions with matrix polysaccharides in plant primary cell walls. Journal of Experimental Botany. 67, 503-514 (2016).
  32. Mentink-Vigier, F., Akbey, Ü, Oschkinat, H., Vega, S., Feintuch, A. Theoretical aspects of magic angle spinning-dynamic nuclear polarization. Journal of Magnetic Resonance. 258, 102-120 (2015).
  33. Gupta, R., et al. Dynamic nuclear polarization enhanced MAS NMR spectroscopy for structural analysis of HIV-1 protein assemblies. The Journal of Physical Chemistry B. 120 (2), 329-339 (2016).
  34. Takahashi, H., Hediger, S., De Paëpe, G. Matrix-free dynamic nuclear polarization enables solid-state NMR 13 C-13 C correlation spectroscopy of proteins at natural isotopic abundance. Chemical Communications. 49 (82), 9479-9481 (2013).
  35. Ni, Q. Z., et al. High frequency dynamic nuclear polarization. Accounts of Chemical Research. 46 (9), 1933-1941 (2013).
  36. Koers, E. J., et al. NMR-based structural biology enhanced by dynamic nuclear polarization at high magnetic field. Journal of Biomolecular NMR. 60 (2-3), 157-168 (2014).
  37. Saliba, E. P., et al. Electron Decoupling with Dynamic Nuclear Polarization in Rotating Solids. Journal of the American Chemical Society. 139 (18), 6310-6313 (2017).
  38. Mentink-Vigier, F., et al. Efficient cross-effect dynamic nuclear polarization without depolarization in high-resolution MAS NMR. Chemical Science. 8 (12), 8150-8163 (2017).
  39. Smith, A. N., Twahir, U. T., Dubroca, T., Fanucci, G. E., Long, J. R. Molecular Rationale for Improved Dynamic Nuclear Polarization of Biomembranes. The Journal of Physical Chemistry B. 120 (32), 7880-7888 (2016).
  40. Su, Y., Andreas, L., Griffin, R. G. Magic angle spinning NMR of proteins: high-frequency dynamic nuclear polarization and 1H detection. Annual Reviews of Biochemistry. 84, 465-497 (2015).
  41. Hediger, S., Lee, S., Mentink-Vigier, F., Paepe, G. D. MAS-DNP Enhancements: Hyperpolarization, Depolarization, and Absolute Sensitivity. eMagRes. 7, 1-13 (2018).
  42. Ni, Q. Z., et al. In Situ Characterization of Pharmaceutical Formulations by Dynamic Nuclear Polarization Enhanced MAS NMR. The Journal of Physical Chemistry B. 121 (34), 8132-8141 (2017).
  43. Hill, T. W., Kafer, E. Improved protocols for Aspergillus minimal medium: trace element and minimal medium salt stock solutions. Fungal Genetics Reports. 48 (1), 20-21 (2001).
  44. Rossini, A. J., et al. Dynamic nuclear polarization surface enhanced NMR spectroscopy. Accounts of Chemical Research. 46 (9), 1942-1951 (2013).
  45. Sauvée, C., et al. Highly efficient, water-soluble polarizing agents for dynamic nuclear polarization at high frequency. Angewandte Chemie International Edition. 125 (41), 11058-11061 (2013).
  46. Phyo, P., et al. Gradients in Wall Mechanics and Polysaccharides along Growing Inflorescence Stems. Plant physiology. 175 (4), 1593-1607 (2017).
  47. White, P. B., Wang, T., Park, Y. B., Cosgrove, D. J., Hong, M. Water-polysaccharide interactions in the primary cell wall of Arabidopsis thaliana from polarization transfer solid-state NMR. Journal of the American Chemical Society. 136 (29), 10399-10409 (2014).
  48. Jippo, T., Kamo, O., Nagayama, K. Determination of long-range proton-carbon 13 coupling constants with selective two-dimensional INEPT. Journal of Magnetic Resonance. 66 (2), 344-348 (1969).
  49. Morris, G. A. Sensitivity enhancement in nitrogen-15 NMR: polarization transfer using the INEPT pulse sequence. Journal of the American Chemical Society. 102 (1), 428-429 (1980).
  50. Cadars, S., et al. The refocused INADEQUATE MAS NMR experiment in multiple spin-systems: interpreting observed correlation peaks and optimising lineshapes. Journal of Magnetic Resonance. 188 (1), 24-34 (2007).
  51. Lesage, A., Bardet, M., Emsley, L. Through-bond carbon− carbon connectivities in disordered solids by NMR. Journal of the American Chemical Society. 121 (47), 10987-10993 (1999).
  52. Bennett, A. E., et al. Homonuclear radio frequency-driven recoupling in rotating solids. The Journal of Chemical Physics. 108 (22), 9463-9479 (1998).
  53. Lu, X., Guo, C., Hou, G., Polenova, T. Combined zero-quantum and spin-diffusion mixing for efficient homonuclear correlation spectroscopy under fast MAS: broadband recoupling and detection of long-range correlations. Journal of Biomolecular NMR. 61 (1), 7-20 (2015).
  54. Wang, T., Zabotina, O., Hong, M. Pectin-cellulose interactions in the Arabidopsis primary cell wall from two-dimensional magic-angle-spinning solid-state nuclear magnetic resonance. Biochemistry. 51 (49), 9846-9856 (2012).
  55. Wang, T., Yang, H., Kubicki, J. D., Hong, M. Cellulose Structural Polymorphism in Plant Primary Cell Walls Investigated by High-Field 2D Solid-State NMR Spectroscopy and Density Functional Theory Calculations. Biomacromolecules. 17 (6), 2210-2222 (2016).
  56. Kirui, A., et al. Atomic Resolution of Cotton Cellulose Structure Enabled by Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR. Cellulose. , In Press (2019).
  57. Wang, T., et al. Sensitivity-enhanced solid-state NMR detection of expansin's target in plant cell walls. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (41), 16444-16449 (2013).
  58. Wang, T., Park, Y. B., Cosgrove, D. J., Hong, M. Cellulose-Pectin Spatial Contacts Are Inherent to Never-Dried Arabidopsis thaliana Primary Cell Walls: Evidence from Solid-State NMR. Plant Physiology. 168 (3), 871-884 (2015).
  59. Liao, S. Y., Lee, M., Wang, T., Sergeyev, I. V., Hong, M. Efficient DNP NMR of membrane proteins: sample preparation protocols, sensitivity, and radical location. Journal of Biomolecular NMR. 64 (3), 223-237 (2016).
  60. Kang, X., et al. Lignin-Polysaccharide Interactions in Plant Secondary Cell Walls Revealed by Solid-State NMR. Nature Communications. 10, 347 (2019).
  61. Takahashi, H., et al. Rapid Natural-Abundance 2D 13C-13C Correlation Spectroscopy Using Dynamic Nuclear Polarization Enhanced Solid-State NMR and Matrix-Free Sample Preparation. Angewandte Chemie International Edition. 51 (47), 11766-11769 (2012).

Tags

الكيمياء الحيوية، 144 قضية، Solid-state الرنين المغناطيسي النووي، الاستقطاب النووي الحيوي (DNP)، الكربوهيدرات، جدران الخلية، الحيوية، والنبات، والفطريات
إعداد الفطريات والمواد النباتية لتوضيح الهيكلية باستخدام الرنين المغناطيسي النووي الصلبة دينامية الاستقطاب النووي
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kirui, A., Dickwella Widanage, M.… More

Kirui, A., Dickwella Widanage, M. C., Mentink-Vigier, F., Wang, P., Kang, X., Wang, T. Preparation of Fungal and Plant Materials for Structural Elucidation Using Dynamic Nuclear Polarization Solid-State NMR. J. Vis. Exp. (144), e59152, doi:10.3791/59152 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter