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Neuroscience

डेटा अधिग्रहण और विश्लेषण में Brainstem Evoked प्रतिक्रिया ऑडियोमेट्री में चूहे

Published: May 10, 2019 doi: 10.3791/59200
Automatic Translation
1,2, 1, 1, 1, 3, 4, 5, 5, 6, 1,7, 1, 1
1Experimental Neuropsychopharmacology, Federal Institute for Drugs and Medical Devices, 2KBRwyle GmbH, 3Cognitive Neurophysiology, Department of Psychiatry and Psychotherapy, Faculty of Medicine, University of Cologne, 4Molecular and Cellular Cognition, German Center for Neurodegenerative Diseases (DZNE), 5Institute of Neurophysiology, Faculty of Medicine, University of Cologne, 6Federal Institute for Drugs and Medical Devices (BfArM), 7Thescon GmbH

Summary

Brainstem पैदा प्रतिक्रिया audiometry नैदानिक neurophysiology में एक महत्वपूर्ण उपकरण है. आजकल, brainstem पैदा प्रतिक्रिया audiometry भी बुनियादी विज्ञान और दोनों औषधीय और आनुवंशिक पशु मॉडल को शामिल पूर्व नैदानिक अध्ययन में लागू किया जाता है. यहाँ हम कैसे श्रवण brainstem प्रतिक्रियाओं को सफलतापूर्वक दर्ज किया जा सकता है और चूहों में विश्लेषण की एक विस्तृत विवरण प्रदान करते हैं.

Abstract

Brainstem पैदा प्रतिक्रिया audiometry (BERA) नैदानिक neurophysiology में केंद्रीय प्रासंगिकता की है. के रूप में अन्य पैदा की क्षमता (ईपी) तकनीक, इस तरह के नेत्रहीन पैदा की क्षमता (VEPs) या somatosensory पैदा की क्षमता (SEP), श्रवण पैदा की क्षमता (AEPs) समान उत्तेजनाओं की दोहराव प्रस्तुति से शुरू कर रहे हैं, इलेक्ट्रोएन्सेफेलोग्राफिक (ईईजी) अनुक्रिया जिसका बाद में औसत किया जाता है जिसके परिणामस्वरूप विशिष्ट धनात्मक (च) तथा ऋणात्मक (द) विक्षेप होते हैं। मनुष्यों में, आयाम और व्यक्तिगत चोटियों की विलंबता दोनों अंतर्निहित न्यूरोनल circuitries में तुल्यकालन और चालन वेग में परिवर्तन की विशेषता के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. महत्वपूर्ण बात, AEPs भी पहचान और औषधीय और आनुवंशिक पशु मॉडल में श्रवण समारोह की विशेषता के लिए बुनियादी और पूर्व नैदानिक विज्ञान में लागू कर रहे हैं. इससे भी अधिक, औषधीय परीक्षण के साथ संयोजन में पशु मॉडल sensorineural सुनवाई हानि के उपचार में संभावित लाभ के लिए जांच करने के लिए उपयोग किया जाता है (उदाहरण के लिए, उम्र या शोर प्रेरित सुनवाई घाटे). यहाँ हम क्लिक करें और टोन-बर्स्ट आवेदन का उपयोग कर चूहों में श्रवण brainstem-evoked प्रतिक्रियाओं (ABRs) रिकॉर्ड करने के लिए कैसे की एक विस्तृत और एकीकृत विवरण प्रदान करते हैं। इस प्रोटोकॉल का एक विशिष्ट ध्यान पूर्व-प्रयोगात्मक पशु आवास, संज्ञाहरण, एबीआर रिकॉर्डिंग, एबीआर फ़िल्टरिंग प्रक्रियाओं, स्वचालित तरंग-आधारित आयाम विकास समारोह विश्लेषण, और विलंबता का पता लगाने पर है।

Introduction

मस्तिष्क शरीर क्रिया विज्ञान का एक केंद्रीय पहलू इस तरह के सीखने के रूप में विभिन्न आंतरिक या extrinsic उत्पादन में जिसके परिणामस्वरूप पर्यावरण की जानकारी को संसाधित करने की क्षमता है, स्मृति, भावनात्मक प्रतिक्रियाओं, या motoric प्रतिक्रियाओं. विभिन्न प्रयोगात्मक और नैदानिक दृष्टिकोण एक उत्तेजना से संबंधित न्यूरॉन circuitry के भीतर न्यूरॉन्स के व्यक्तिगत न्यूरॉन सेल प्रकार या समूहों / इन इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल तकनीकों में सूक्ष्म, मध्य तथा स्थूल स्केल1पर विभिन्न स्पैटियोपोरल डाइमेंट्स शामिल हैं। माइक्रोस्केल स्तर का उपयोग कर विभिन्न पैच-क्लैम्प मोड में वोल्टेज और वर्तमान क्लैम्प दृष्टिकोण शामिल हैं, उदाहरण के लिए, सुसंस्कृत या तीव्रता से अलग न्यूरॉन्स1। इन इन इन इन की तकनीकों में अलग - अलग वर्तमान संस्थाओं और उनके औषधीय मॉडुलन2,3की विशेषता के लिए अनुमति देते हैं . तथापि, एक आवश्यक दोष सूक्ष्म और स्थूल परिपथ सूचना एकीकरण और प्रसंस्करण के संबंध में प्रणालीगत सूचना का अभाव है। इस हानि आंशिक रूप से mesoscale के इन विट्रो तकनीकों से दूर है, इस तरह के multielectrode arrays जो एक साथ extracellular multielectrode रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देते हैं न केवल सुसंस्कृत न्यूरॉन्स में लेकिन यह भी तीव्र मस्तिष्क स्लाइस में4, 5. जबकि माइक्रोसर्किटरी को मस्तिष्क स्लाइस में एक विशिष्ट सीमा तक संरक्षित किया जा सकता है (जैसे, हिप्पोकैम्पस में), लंबी दूरी के अंतर्संबंध आमतौर पर6खो जाते हैं। अंत में, न्यूरोनल circuitries के भीतर कार्यात्मक interconnections का अध्ययन करने के लिए, मैक्रोस्केल पर विवो इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल तकनीकों में प्रणालीगत पसंद7की विधि है। इन दृष्टिकोणों में अन्य बातों के साथ-साथ सतह (एपिड्यूरल) और गहरी (इंट्रासेरेब्रल) ईईजी रिकॉर्डिंग शामिल हैं जो मनुष्यों और पशु मॉडल1दोनों में की जाती हैं। ईईजी संकेत मुख्य रूप से विभिन्न cortical परतों में पिरामिड न्यूरॉन्स पर सिंक्रनाइज़ synaptic इनपुट पर आधारित हैं कि निरोधात्मक या प्रिंसिपल में उत्तेजक हो सकता है, उत्तेजक इनपुट8के सामान्य प्रभुत्व के बावजूद. तुल्यकालन पर, उत्तेजक पदों ynaptic क्षमता आधारित बदलाव extracellular विद्युत क्षेत्रों में सतह इलेक्ट्रोड का उपयोग कर खोपड़ी पर दर्ज किया जा करने के लिए पर्याप्त शक्ति का एक संकेत बनाने के लिए संक्षेप कर रहे हैं. विशेष रूप से, एक व्यक्तिगत इलेक्ट्रोड से एक डिटेक्टेबल खोपड़ी रिकॉर्डिंग पिरामिड न्यूरॉन्स के दस हजार और तकनीकी उपकरणों और प्रसंस्करण उपकरणों के एक जटिल आयुधालय की गतिविधि की आवश्यकता है, एक एम्पलीफायर सहित, छानने प्रक्रियाओं (कम पास फिल्टर, उच्च पास फिल्टर, पायदान फिल्टर), और विशिष्ट कंडक्टर गुणों के साथ इलेक्ट्रोड.

सबसे प्रयोगात्मक पशु प्रजातियों में (यानी, चूहों और चूहों), मानव आधारित खोपड़ी ईईजी दृष्टिकोण तकनीकी रूप से लागू नहीं है, अंतर्निहित प्रांतस्था द्वारा उत्पन्न संकेत के रूप में सिंक्रनाइज़ पिरामिड न्यूरॉन्स की सीमित संख्या के कारण बहुत कमजोर है9, 10,11. कृन्तकों में, सतह (स्कल्प) इलेक्ट्रोड या उपचर्म इलेक्ट्रोड इस प्रकार इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम और predominately electromyogram कलाकृतियों कि उच्च गुणवत्ता ईजी रिकॉर्डिंग असंभव बनाने के द्वारा गंभीर रूप से दूषित कर रहे हैं9,11, 12. unanesthetized स्वतंत्र रूप से चलती चूहों और चूहों का उपयोग करते समय, यह या तो भ्रूणइलेक्ट्रोड के माध्यम से प्रांतस्था से या गहरी, intracerebral संरचनाओं से सीधे रिकॉर्ड करने के लिए संवेदन टिप के प्रत्यक्ष शारीरिक संबंध सुनिश्चित करने के लिए अनिवार्य है संकेत पैदा करने वाले न्यूरोनल सेल समूहों के लिए सीसा/प्रतिरोपित इलेक्ट्रोड की। इन ईईजी दृष्टिकोणों को या तो एक निरोधक टेदर सिस्टम सेटअप में किया जा सकता है या गैर -निरोधीय इम्प्लांटेबल ईईजी रेडियो टेलीमेट्री दृष्टिकोण9,10,11का उपयोग किया जा सकता है . दोनों तकनीकों उनके पेशेवरों और विपक्ष है और जब्ती संवेदनशीलता की गुणात्मक और मात्रात्मक विशेषता में एक मूल्यवान दृष्टिकोण हो सकता है / समय आवृत्ति विश्लेषण, स्रोत विश्लेषण, आदि सहित9,10,13,14,15,16,17.

जबकि टेदर्ड सिस्टम और रेडियो टेलीमेट्री क्रमशः, संबंधित प्रयोगात्मक शर्तों एबीआर रिकॉर्डिंग के लिए आवश्यकताओं से मेल नहीं खाते, निरोधक/सेमीनिस्ट्रेसिंग या अनिरूक्षित शर्तों के तहत ईईजी रिकॉर्डिंग के लिए अनुमति देते हैं। परिभाषित ध्वनिक उत्तेजनाओं जो एक लाउडस्पीकर और प्रयोगात्मक पशु और नियंत्रित ध्वनि दबाव के स्तर (SPLs) की परिभाषित पदों के साथ समय के साथ बार-बार प्रस्तुत कर रहे हैं के लिए बाद की मांग. इसे या तो नियंत्रण की स्थितियों में सिर निर्धारण द्वारा प्राप्त किया जा सकता है या संज्ञाहरण18,19के बाद प्राप्त किया जा सकता है . प्रयोगात्मक तनाव को कम करने के लिए, जानवरों को आम तौर पर एबीआर प्रयोग के दौरान एनेस्थेटाइज किया जाता है, लेकिन यह विचार किया जाना चाहिए कि संज्ञाहरण एबीआर19,20के साथ हस्तक्षेप कर सकता है।

एक सामान्य विशेषता के रूप में, ईईजी 50-100 डिग्री सेल्सियस पृष्ठभूमि आवृत्तियों और आयाम की एक वोल्टेज रेंज में विभिन्न आवृत्तियों का निर्माण किया है दृढ़ता से प्रयोगात्मक जानवर की शारीरिक स्थिति पर निर्भर करते हैं। जागते हुए राज्य में, बीटा (जेड) और गामा (जेड) आवृत्तियों कम आयाम प्रबल के साथ। जब जंतु नींद में सो जाते हैं, तो अल्फ़ा (जेड), थीटा (जेड) और डेल्टा (जेड) आवृत्तियों का प्रदर्शन होता है, जिससे ईईजी आयाम21में वृद्धि होती है। एक बार एक संवेदी चैनल (जैसे, ध्वनिक मार्ग) प्रेरित है, सूचना प्रसार परिधीय और केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के माध्यम से न्यूरॉन गतिविधि के माध्यम से मध्यस्थता है. इस तरह के संवेदी (जैसे, ध्वनिक) उत्तेजना तथाकथित ईपीएस ट्रिगर या प्रतिक्रिया पैदा की। विशेष रूप से, घटना से संबंधित क्षमता (ईआरपी) ईईजी (यानी, कुछ माइक्रोवोल्ट केवल) की तुलना में आयाम में बहुत कम हैं। इस प्रकार, एक ही उत्तेजना के आधार पर किसी भी व्यक्ति ईआरपी उच्च-आयाम ईईजी पृष्ठभूमि के खिलाफ खो जाएगा। इसलिए, एक ईआरपी की एक रिकॉर्डिंग समान उत्तेजनाओं के दोहराव आवेदन की आवश्यकता है (उदाहरण के लिए, ABR रिकॉर्डिंग में क्लिक करता है) और बाद में औसत किसी भी ईईजी पृष्ठभूमि गतिविधि और कलाकृतियों को खत्म करने के लिए. यदि एबीआर रिकॉर्डिंग एनेस्थेटाइज्ड जानवरों में की जाती है, तो यहां सबडर्मल इलेक्ट्रोड का उपयोग करना आसान है।

मुख्य रूप से, एईपी में शॉर्ट-लेटेंसी ईपीएस शामिल हैं, जो सामान्य रूप से एबीआर या बेरा से संबंधित होते हैं, और आगे, बाद-ऑनसेट क्षमता जैसे कि मिडलेटेंस ईपीएस (मिडलेटी रिस्पॉन्सिंस [एमएलआर]) और लंबी-लेटेंसी ईपीएस22। महत्वपूर्ण बात, श्रवण जानकारी के सूचना प्रसंस्करण में गड़बड़ी अक्सर neurosychiatric रोगों की एक केंद्रीय विशेषता है (demyelinating रोगों, एक प्रकार का पागलपन, आदि) और AEP परिवर्तन के साथ जुड़े23,24 ,25. जबकि व्यवहार जांच केवल कार्यात्मक हानि का खुलासा करने में सक्षम हैं, एईपी अध्ययन विशिष्ट न्यूरोएनिक संरचनाओं से संबंधित श्रवण रोग के सटीक spatiotemporal विश्लेषण के लिए अनुमति देते हैं26.

ABRs के रूप में जल्दी, कम विलंबता ध्वनिक EPs आम तौर पर मध्यम से उच्च बुद्धि क्लिक आवेदन पर पता चला रहे हैं, और वहाँ सात ABR चोटियों (WI-WVII)तक हो सकता है. सबसे महत्वपूर्ण तरंगों(W I-WV) निम्नलिखित neuroanatomical संरचनाओं से संबंधित हैं: डब्ल्यूमैं श्रवण तंत्रिका के लिए (विशाल भाग, भीतरी कान के भीतर); डब्ल्यूद्वितीय cochlear नाभिक के लिए (लेखा तंत्रिका के आकस्मिक भाग, brainstem समाप्ति); डब्ल्यूIII से बेहतर ओलिवरी कॉम्प्लेक्स (एसओसी); डब्ल्यूचतुर्थ पार्श्व लेम्निस्कस (एलएल) के लिए; डब्ल्यूवी पार्श्व लेम्निस्कस (एलएल) की समाप्ति के लिए प्रतिपक्ष 27 पर अवर कॉलिक्युलस (आईसी) के भीतर (पूरकचित्र 1)। यह ध्यान दियाजाना चाहिए कि डब्ल्यू द्वितीय-WV आरोही श्रवण मार्ग के एक से अधिक शारीरिक संरचना उन्हें योगदान करने की संभावना है. विशेष रूप से, चोटियों और श्रवण पथ के अंतर्निहित संरचनाओं का सटीक सहसंबंध अभी भी पूरी तरह से स्पष्ट नहीं है.

श्रव्यता विज्ञान में, एबीआर का उपयोग स्क्रीनिंग और नैदानिक उपकरण के रूप में और शल्य चिकित्सा निगरानी28,29के रूप में किया जा सकता है। यह dysacusis की पहचान के लिए सबसे महत्वपूर्ण है, hypacusis, और एनाकस (उदाहरण के लिए, उम्र से संबंधित सुनवाई हानि में, शोर प्रेरित सुनवाई हानि, चयापचय और जन्मजात सुनवाई हानि, और असममित सुनवाई हानि और विकृति के कारण सुनवाई घाटे या विकृतियों, चोटों, और neoplasms)28| एबीआर अतिसक्रिय, बौद्धिक रूप से बिगड़ा हुआ बच्चों के लिए या अन्य बच्चों के लिए स्क्रीनिंग टेस्ट के रूप में भी प्रासंगिक हैं जो पारंपरिक ऑडियोमेट्री का जवाब देने में सक्षम नहीं होंगे (उदाहरण के लिए, न्यूरोलॉजिकल/मनोवैज्ञानिक रोगों जैसे एडीएचडी, एमएस, ऑटिज्म आदि29। , 30) और कोकलियर इम्प्लांट्स28के विकास और शल्य चिकित्सा फिटिंग में . अंत में, ABRs इस तरह के antiepileptics31,32के रूप में neuropsychopharmaceuticals के संभावित ototoxic दुष्प्रभाव में मूल्यवान अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं.

मानव के लिए औषधीय या ट्रांसजेनिक माउस मॉडल से प्राप्त neurophysiological ज्ञान के अनुवाद के मूल्य कई सेटिंग्स में प्रदर्शन किया गया है, विशेष रूप से चूहों और चूहों में श्रवण प्रतिमानों में ईआरपी के स्तर पर33, 34,35. बदल जल्दी AEPs और चूहों और चूहों में श्रवण सूचना प्रसंस्करण में जुड़े परिवर्तन में नई अंतर्दृष्टि इस प्रकार मनुष्यों के लिए अनुवाद किया जा सकता है और विशेषता और श्रवण के endophenotyping में केंद्रीय महत्व का है, तंत्रिका विज्ञान, और भविष्य में न्यूरोसाइकेट्रिक बीमारियां। यहाँ हम कैसे ABRs सफलतापूर्वक दर्ज किया जा सकता है और बुनियादी वैज्ञानिक, toxicological, और औषधीय प्रयोजनों के लिए चूहों में विश्लेषण की एक विस्तृत विवरण प्रदान करते हैं.

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Protocol

सभी पशु प्रक्रियाओं पशु देखभाल पर जर्मन परिषद के दिशा निर्देशों के अनुसार प्रदर्शन किया गया और सभी प्रोटोकॉल पशु देखभाल पर स्थानीय संस्थागत और राष्ट्रीय समिति द्वारा अनुमोदित किया गया (Landesamt f]r Natur, Umwelt, und Verbraucherschutz, राज्य उत्तर राइन-वेस्टफेलिया, प्रकृति, पर्यावरण और उपभोक्तावाद विभाग [LANUV NRW], जर्मनी के कार्यालय). लेखकों ने आगे प्रमाणित किया है कि सभी पशु प्रयोग प्रयोगशाला पशु की देखभाल और उपयोग के लिए स्वास्थ्य गाइड के राष्ट्रीय संस्थानों के अनुसार किया गया था (NIH प्रकाशन संख्या 80-23) संशोधित 1996 या ब्रिटेन पशु (वैज्ञानिक प्रक्रियाएं) अधिनियम 1986 और संबद्ध दिशानिर्देश, या 24 नवंबर 1986 (86/609/EEC) और 22 सितंबर, 2010 (2010/63/EU) के यूरोपीय समुदाय परिषद निर्देशक। इस्तेमाल किए गए जानवरों की संख्या और उनकी पीड़ा (3R [बदलाव, कमी, और शोधन] रणनीति) को कम करने के लिए विशिष्ट प्रयास किए गए थे।

1. प्रायोगिक जानवरों

  1. प्रयोगात्मक जानवरों और प्रजातियों का चयन
    1. कृन्तकों/कृषक मॉडलों (यानी चूहों या चूहों) में एबीआर अध्ययन करें जो एक विशिष्ट मानव रोग से संबंधित होमोलोजी, समरूपता, और पूर्वानुमानकीता की आवश्यकताओं को पूरा करते हैं। यह अनुवाद तंत्रिका विज्ञान में बुनियादी पहलुओं के संदर्भ में विशिष्ट महत्व का है.
      नोट: विचार करें कि उपलब्ध विविध माउस और चूहे उपभेदों बुनियादी शारीरिक और रोग-भौतिक विशेषताओं में अंतर दिखा सकते हैं36,37,38. इन माउस/राट लाइन से संबंधित विशिष्टताओं को प्रयोगात्मक योजना में ध्यान में रखा जाना चाहिए।
    2. शरीर क्रिया विज्ञान और औषध विज्ञान में माउस- और चूहे तनाव-विशिष्ट परिवर्तनों पर विचार करें जो इलेक्ट्रोफिजियोलॉजिकल प्रयोगों पर प्रभाव डाल सकते हैं (उदाहरण के लिए बदल संवेदनात्मक संवेदनशीलता, सर्कैडियन लय, [ऑडियोजेनिक] जब्ती संवेदनशीलता, उम्र, और आनुवंशिक पृष्ठभूमि )39,40,41,42.
    3. अध्ययन डिजाइन में लिंग-विशिष्ट स्तरण शामिल करें। याद रखें कि ज्वारचक्र संवेदनाहारी संवेदनशीलता, केंद्रीय लयबद्धता, सर्कैडियन निर्भरता, और जब्ती गतिविधि (ऑडिटरी दौरे) और संवेदी (ऑडिटरी) सूचना संसाधन43,44 को गंभीर रूप से प्रभावित कर सकता है , 45. इस प्रकार, लिंग-विशिष्ट विश्लेषण करें।
      नोट: पुरुष चूहों के लिए प्रतिबंध ित करें यदि वित्तीय और प्रयोगात्मक क्षमता सीमित है, हालांकि सामान्य रूप से साइकिल चालन महिलाओं से विभिन्न neurophysiological मानकों पुरुषों की तुलना में वृद्धि हुई परिवर्तनशीलता प्रदर्शन करने के लिए प्रतीत नहीं होता46.
  2. पशु आवास और हैंडलिंग
    1. एक जानवर की सुविधा के अंदर व्यक्तिगत हवादार पिंजरों में घर चूहों या चूहों.
    2. संज्ञाहरण, एबीआर इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट, और एबीआर रिकॉर्डिंग के लिए इरादा विशेष प्रयोगशाला कमरे में स्थित हवादार अलमारियाँ के लिए पशु सुविधा से प्रयोगात्मक जानवरों ले जाएँ।
    3. सुनिश्चित करें कि जानवरों को मानक पर्यावरणीय परिस्थितियों के तहत हवादार कैबिनेट में रखा जाता है (यानी, 21 डिग्री सेल्सियस, 50%-60% सापेक्ष आर्द्रता, और एक पारंपरिक 12/12 एच प्रकाश/अंधेरे चक्र के तापमान के साथ)। जानवरों acclimateize और बाद में प्रयोग करने से पहले कम से कम 14 दिनों के लिए इस circadian पैटर्न के लिए अनुकूल करने के लिए अनुमति दें।
    4. स्पष्ट पॉली कार्बोनेट पिंजरों प्रकार द्वितीय (26.7 सेमी x 20.7 सेमी x 14.0 सेमी, 410 सेमी2के एक क्षेत्र ) 3-4 के समूहों में आवास चूहों के लिए और स्पष्ट पॉली कार्बोनेट पिंजरों प्रकार III (42.5 सेमी x 26.6 सेमी x 18.5 सेमी, 800 सेमी2के एक क्षेत्र) चूहों के लिए उपयोग करें। पीने के पानी और मानक खाद्य छर्रों के लिए विज्ञापन libitum पहुँच प्रदान करें.
    5. एबीआर रिकॉर्डिंग से पहले और बाद में प्रयोगात्मक जानवरों के पृथक्करण/अलगाव से बचें क्योंकि अलगाव प्रयोगात्मक परिणामों को प्रभावित करने वाले गंभीर तनाव को लागू कर सकता है। इस प्रकार, संज्ञाहरण, ABR इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट, और ABR रिकॉर्डिंग के बाद जानवरों को अपने घर पिंजरे में वापस रखें।
    6. खुले आवास की स्थिति लागू न करें क्योंकि वे विभिन्न प्रयोगात्मक कमियों के अधीन हैं, विशेष रूप से श्रवण अध्ययन में। हवादार अलमारियाँ, बजाय, से पहले और प्रयोगात्मक श्रवण प्रक्रियाओं जो अन्यथा sensorineural सुनवाई हानि (जैसे, शोर प्रेरित सुनवाई हानि) के लिए नेतृत्व कर सकता है और इस तरह परिणामों को प्रभावित के बीच में ध्वनिक तनाव से बचाने के लिए.
    7. माउस और चूहे-विशिष्ट स्वच्छता, संवेदनाहारी, और तकनीकी उपकरणों का उपयोग करें ताकि न तो चूहे और न ही चूहे एक दूसरे की उपस्थिति को समझ सकें क्योंकि प्रजातियों के प्रतिद्वंदियों के पारस्परिक संवेदी धारणा के कारण अध्ययन में परिहार्य भ्रमित कारकों को जन्म दे सकता है।

2. माउस संज्ञाहरण

  1. इंजेक्शन एनेस्थेटिक्स का उपयोग करसंज्ञाा प्रदर्शन करें। केटामाइन हाइड्रोक्लोराइड (कृषक खुराक: 100 मिलीग्राम/किग्रा) और जाइलज़ीन हाइड्रोक्लोराइड (कृषक खुराक: 10 मिलीग्राम/किलोग्राम) का एक संयोजन 0.9% NaCl या रिंगर समाधान में तैयार करें और पशु को अपने शरीर के वजन के आधार पर इंट्रापेरिटोनली इंजेक्ट करें।
    नोट: isoflurane के माध्यम से साँस लेना narcosis की सिफारिश नहीं है के रूप में ABR प्रक्रिया सामान्य रूप से एक ध्वनि क्षीण कक्ष और Faraday पिंजरे की आवश्यकता है, रिकॉर्डिंग सेटअप के भीतर स्थानिक सीमाओं में जिसके परिणामस्वरूप. हालांकि कई एनेस्थेटिक्स NMDA प्रणाली पर कार्य और स्पष्ट रूप से ABR रिकॉर्डिंग परिणामों को प्रभावित, ABR रिकॉर्डिंग में एक गैर संवेदनाहारी निरोधक दृष्टिकोण चेतना के तहत प्रक्रियाओं को रोकने के रूप में सिफारिश नहीं है नाटकीय जानवर के लिए तनाव प्रेरित, के साथ एबीआर में गंभीर बाद में कलाकृति गठन।
  2. एक पूंछ चुटकी, पैर चुटकी, और निगरानी श्वसन दर (मीस: 150-220 सांस / संभव गैसिंग के लिए जाँच करें और यदि आवश्यक प्रतिक्रिया.
    नोट: विभिन्न माउस लाइनों या औषधीय माउस मॉडल संज्ञाहरण के लिए विभिन्न संवेदनशीलता प्रदर्शित कर सकते हैं. एक ही उत्परिवर्ती माउस मॉडल के लिए सच रखती है. Endotracheal intubation इस प्रयोगात्मक सेटिंग में आवश्यक नहीं है और अनुशंसित नहीं है। चूंकि अंत:करण श्वासनली और संक्रमण के आघात का खतरा बढ़ाता है, एबीआर प्रक्रिया के दौरान एंडोट्रेकल इंटूबेशन का लाभ/जोखिम नकारात्मक होता है।

3. perianesthetic व्यवस्था और इंस्ट्रूमेंटेशन के सामान्य पहलुओं

  1. पशु के शरीर के कोर तापमान को बनाए रखने के लिए एक होमथर्मिक हीटिंग कंबल का उपयोग कर के दौरान और ABR रिकॉर्डिंग के बाद पूरक गर्मी लागू करें। बाद में बनाए रखें 36.5-38.0 डिग्री सेल्सियस (98.6-100.4 डिग्री सेल्सियस).
    नोट: हाइपोथर्मिया शरीर की सतह के उच्च अनुपात के कारण छोटे कृन्तकों में एक जोखिम कारक है (माउस शरीर की सतह ] 10.5 x (जी में वजन)2/3; चूहे शरीर की सतह ] 10.5 x (जी में वजन)2/3) शरीर की मात्रा के लिए।
  2. कॉर्निया शुष्कता से बचने के लिए पूरे एबीआर रिकॉर्डिंग प्रक्रिया के दौरान पेट्रोलियम आधारित कृत्रिम आंसू मरहम या 5% dexpanthenol के साथ पशु की आंखों को कवर। पलक प्रति पूरी तरह से पुनर्स्थापित किया गया है जब तक कि इस कार्यविधि को जारी रखें।
  3. एक ऑटोक्लेव या कीटाणुनाशक का उपयोग करके प्रयोगात्मक उपकरणों (सामग्री की सारणीदेखें) का बंध्याकरण करें।
    नोट: कांच मोती के साथ एक गर्मी आधारित शल्य चिकित्सा उपकरण स्टरलाइज़र के उपयोग की सिफारिश की है।
  4. सटीक ABR इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट के लिए, लचीला या स्वयं का समर्थन चल प्रकाश गाइड के माध्यम से तीव्र रोशनी के लिए एक ठंडा प्रकाश स्रोत के साथ एक दूरबीन शल्य आवर्धन माइक्रोस्कोप का उपयोग करें.
  5. प्रयोगात्मक पशु हैंडलिंग और प्रयोग के दौरान एक साफ प्रयोगशाला कोट, एक facemask, एक सिर कवर, और बाँझ दस्ताने का प्रयोग करें.
    नोट: इष्टतम उपकरणों और आपूर्ति प्रयोगशालाओं के बीच भिन्न हो सकते हैं और प्रयोगशाला विशेष और संस्थागत मानकों को पूरा करना चाहिए.

4. एबीआर रिकॉर्डिंग

नोट: यहाँ वर्णित प्रोटोकॉल monaural और binaural रिकॉर्डिंग के लिए एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ABR प्रणाली पर आधारित है. महत्वपूर्ण बात यह है कि जिस वैज्ञानिक प्रश्न का समाधान किया जाना है, उसे इस्तेमाल की गई एबीआर प्रणाली की तकनीकी विशिष्टताओं को पूरा करना चाहिए। उदाहरण के लिए, द्विकर्णीय रिकॉर्डिंग का एबीआर विश्लेषण, श्रवण मार्ग में श्रवण उत्तेजनाओं के पार्श्व कोडन की जांच करने और तंत्रिका-मनोरोग रोगों में परिधीय पार्श्व विषमता का अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है।

  1. एक preamplifier और प्रसंस्करण प्रणाली से जुड़े माइक्रोफोन रखकर रिकॉर्डिंग के प्रत्येक दिन पर उत्तेजना आवृत्तियों के एक अंशांकन प्रदर्शन (सामग्री की तालिकादेखें) सही के साथ स्थान पर ध्वनि attenuating कक्ष के अंदर अभिविन्यास जहां प्रयोगात्मक murine कान तैनात किया जाएगा.
    1. प्रणाली के संतुलन के लिए अनुमति देने के लिए अंशांकन से पहले कम से कम 5 मिनट माइक्रोफोन से जुड़ा preamplifier चालू करें.
    2. आस्टसीलस्कप चालू करें.
    3. प्रयोगात्मक murine कान की नकल करने के लिए ध्वनि क्षीण कक्ष के अंदर एक preamplifier से जुड़ा माइक्रोफोन स्थिति.
    4. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध प्रसंस्करण और अधिग्रहण सॉफ्टवेयर खोलें (सामग्री की तालिकादेखें)।
    5. अंशांकन विन्यास मोड को सक्रिय करने और प्रयोगात्मक शर्तों के अनुसार पैरामीटर का चयन करने के लिए सॉफ्टवेयर के भीतर अंशांकन Cal200K फ़ाइल का चयन करें।
    6. अंशांकन प्रक्रिया को निष्पादित करने के लिए प्रोसेसर सिस्टम का उपयोग करें। सुनिश्चित करें कि SPL सीमा, आवृत्ति सीमा, और वितरण के मामले में माइक्रोफोन और लाउडस्पीकर के तकनीकी विनिर्देशों सामंजस्य.
    7. पूर्वनिर्धारित क्लिक उत्तेजना प्रोटोकॉल का चयन करें और प्रारंभ करें.
    8. एक सिंगल क्लिक SPL (अधिमानतः, अधिकतम SPL) चलाने के लिए सत्यापित करें कि ध्वनि उत्तेजनाओं के स्पेक्ट्रम के रूप में ऑनलाइन फास्ट फूरियर परिवर्तन द्वारा विश्लेषण (FFT) आस्टसीलस्कप की आवश्यकताओं से मेल खाता है (वास्तविक ऊर्जा रेंज).
    9. चुनें और ब्याज की सीमा के भीतर पूर्वनिर्धारित टोन फट उत्तेजना प्रोटोकॉल शुरू (उदा., 1-42 kHz).
    10. एक आस्टसीलस्कप और ऑनलाइन FFT का उपयोग करके दर्ज ध्वनिक परीक्षण उत्तेजनाओं की आवृत्ति स्पेक्ट्रम की पुष्टि करें.
      नोट: प्रणाली और उत्तेजना आवृत्तियों के दैनिक अंशांकन उत्तेजना आवृत्तियों और SPLs स्वीकार्य काम श्रेणियों के भीतर कर रहे हैं कि गारंटी के लिए आवश्यक है.
  2. ध्वनिक फोम के साथ लाइन में खड़ा एक ध्वनि क्षीण कक्ष के अंदर एनेस्थेटाइज्ड माउस रखें।
    नोट: पूरे कक्ष एक Faraday पिंजरे द्वारा कवर किया जाना चाहिए (कस्टम बनाया जाली धातु या एक वाणिज्यिक एक) बाहरी विद्युत हस्तक्षेप से एबीआर रिकॉर्डिंग ढाल और उन्हें शोर से बचाने के लिए.
  3. मोनारल ब्रेनस्टेम-रिवोक्ड श्रवण क्षमता की रिकॉर्डिंग के लिए, शीर्ष पर सबडर्मल स्टेनलेस स्टील इलेक्ट्रोड डालें, पिने के अक्षीय (सकारात्मक [+] इलेक्ट्रोड) और दाएं या बाएं पिना (नकारात्मक [-] इलेक्ट्रोड) के आधार पर कान मापा जा करने के लिए। binaural रिकॉर्डिंग के लिए, दोनों सही और बाएँ pinnae पर नकारात्मक इलेक्ट्रोड जगह है. जानवर के कूल्हे पर भू-परिचालक को स्थिति में की गई है (अनुपूरक चित्र 1)।
    1. प्रविष्टि से पहले, स्टेनलेस स्टील इलेक्ट्रोड की नोक पर एक हुक आकार के रूप में इतना है कि इलेक्ट्रोड के subdermal निर्धारण की गारंटी है47.
  4. उचित इलेक्ट्रोड स्थिति/चालकता को सत्यापित करने के लिए प्रत्येक रिकॉर्डिंग से पहले सभी इलेक्ट्रोड की प्रतिबाधा माप निष्पादित करें। प्रत्येक इलेक्ट्रोड प्रतिबाधा स्तर को सत्यापित करने के लिए चार चैनल headstage पर प्रतिबाधा जांच बटन का प्रयोग करें.
    नोट: दोष 5 k$ से कम होना चाहिए।
  5. एक एकल लाउडस्पीकर का उपयोग कर मुक्त क्षेत्र शर्तों के तहत ABRs रिकॉर्ड (आवृत्ति बैंडविड्थ, उदाहरण के लिए, 1-65 kHz पर) जानवरों के rostrum के विपरीत 10 सेमी रखा (लाउडस्पीकर के अग्रणी बढ़त माउस interaural अक्ष के लिए सीधा). सुनिश्चित करें कि माउस सिर / माउस कान की स्थिति है कि अंशांकन माइक्रोफोन की, लाउडस्पीकर और अंशांकन के दौरान माइक्रोफोन के बीच चुना विशिष्ट दूरी के आधार पर.
    नोट: मुक्त क्षेत्र की स्थिति के बजाय, कान टयूबिंग भी इस्तेमाल किया जा सकता है. हालांकि, इन सेटिंग्स में SPLs निर्धारित करने के लिए विशेष सावधानियों और परीक्षण आवश्यक हैं।
  6. स्वयं क्रमादेशित या व्यावसायिक रूप से उपलब्ध सॉफ्टवेयर का उपयोग करके क्लिक और टोन फटने के लिए प्रोत्साहन प्रोटोकॉल प्रोग्राम करें (सामग्री की तालिकादेखें)। नीचे सूचीबद्ध व्यक्तिगत प्रोत्साहन पैरामीटर संबंधित ग्राफिकल यूजर इंटरफेस में जोड़ा जा करने की आवश्यकता है.
    1. क्लिक उद्दीपक निकाय के विन्यास से प्रारंभ करें (अर्थात्, बारी-बारी ध्रुवता के साथ 100 की अवधि की प्रोत्साहन [संघनन और दुर्लभता के बीच स्विच] और परिभाषित पर्याप्त ऊर्जा। क्लिक थ्रेशोल्ड का विश्लेषण करने और निर्धारित करने के लिए इस प्रोत्साहन निकाय का उपयोग करें, बाएं और दाएं कान की ABR सममिति, ABR W (I - IV) आयाम, और W (I - IV) लेटेंसी बाद में।
    2. सॉफ़्टवेयर प्रारंभ करें और क्लिक प्रोत्साहन पैरामीटर जोड़ने के लिए कॉन्फ़िगरेशन विंडो का उपयोग करें। प्रोटोकॉल को चलाने के लिए निष्पादित करें क्लिक करें.
    3. दूसरी उत्तेजना इकाई है, जो एक 4.5 एमएस टोन फट (अस्थायी sinusoidal पल्स) है Hann लिफाफा वृद्धि और 1.5 एमएस प्रत्येक (गेट / रैंप समय अवधि) के गिरने के समय के साथ polarity बारी के विन्यास के साथ जारी रखें. विशेष रूप से कम आवृत्ति टोन फटने के लिए, 3 एमएस की एक न्यूनतम टोन फट अवधि पर विचार करें। इस उद्दीपक का उपयोग सभी जीनोटाइपमें आवृत्ति-विशिष्ट श्रवण थ्रेशोल्डों का विश्लेषण करने और उनकी पहचान करने के लिए करें.
    4. चरण 4.6.2 के समान, टोन फट उत्तेजना पैरामीटर जोड़ने के लिए कॉन्फ़िगरेशन विंडो का उपयोग करें और प्रोटोकॉल को चलाने के लिए Execute क्लिक करें (जैसा कि निर्माता द्वारा कहा गया है48).
    5. टोन फट अध्ययन के लिए, कार्यक्रम उपयुक्त आवृत्ति रेंज वैज्ञानिक प्रश्न के आधार पर परीक्षण किया जा करने के लिए (उदाहरण के लिए, से 1-42 kHz में 6 kHz चरणों). सुनिश्चित करें कि आवृत्ति पर्वतमाला लागू किया जा करने के लिए लाउडस्पीकर की तकनीकी क्षमताओं को पूरा (इस मामले में, मुक्त या बंद क्षेत्र की स्थिति के लिए 1-65 kHz की एक आवृत्ति बैंडविड्थ के साथ एक multifield चुंबकीय वक्ता).
    6. औसत के लिए, अनुक्रमिक ध्वनिक उत्तेजनाओं की संख्या निर्धारित (क्लिक या टोन फटने), उदाहरण के लिए, 20 हर्ट्ज की दर के साथ 300x पर.
    7. क्लिक के लिए 5 डीबी चरणों में SPLs बढ़ाएँ और टोन फटने के लिए 10 डीबी चरणों, 0 डीबी से 90 डीबी (बढ़ तेरी एसपीएल मोड) से शुरू।
      नोट: दोनों बढ़ती और कम SPL मोड साहित्य में वर्णित किया गया है. SPL कदम आकार वैज्ञानिक सवालों के कारण अनुकूलित किया जा सकता है.
  7. व्यक्तिगत ध्वनिक उत्तेजना शुरुआत (पूर्व-ABR आधार रेखा) से पहले एक 5 ms आधार रेखा अवधि के साथ प्रारंभ कररहा, 25 ms की ABR डेटा प्राप्ति अवधि निर्धारित करें और किसी 10 Ms ABR अनुभाग से अधिक 10 ms आधार रेखा (पोस्ट-ABR आधार रेखा) (पूरकचित्रा 1) ).
  8. ABR डेटा अधिग्रहण के लिए एक उपयुक्त नमूना दर लागू करें (उदाहरण के लिए, 24.4 kHz) और bandpass फिल्टर (उच्च पास: 300 हर्ट्ज, कम पास: 5 kHz) एक 6-पोल बटरवर्थ फिल्टर का उपयोग कर. यदि आवश्यक हो तो पायदान फिल्टर को सक्रिय करें।
    नोट: नमूना दर और फिल्टर विशेषताओं प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के कारण अनुकूलित किया जा सकता है.
  9. उपचर्म इलेक्ट्रोड से एक सिर चरण में दर्ज परिणामी bioelectric संकेतों स्थानांतरण और आगे उचित प्रवर्धन के साथ एक preamplifier के लिए आगे (उदाहरण के लिए, 20 गुना).
  10. लाउडस्पीकर नियंत्रण और ABR अधिग्रहण, प्रसंस्करण, औसत, और डेटा प्रबंधन समन्वय करने के लिए एक विशिष्ट ABR प्रणाली प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर का प्रयोग करें.
  11. के बारे में 45 मिनट के भीतर पूरे ABR प्रोटोकॉल (क्लिक और टोन फट के लिए सुनवाई दहलीज, शिखर आयाम, और पीक विलंबता विश्लेषण, आदि) को निष्पादित करने की कोशिश करो. यह 100/10 मिलीग्राम केटामाइन/xylazine इंट्रापेरिटोनली का उपयोग करके गहरे नारकोसिस के समय से मेल खाता है।
  12. सुनिश्चित करें कि उत्तेजना प्रस्तुति और अधिग्रहण के लिए अंशांकन, प्रोग्रामिंग/समायोजन, फिल्टर सेटिंग्स, आदि जानवर एनेस्थेटाइज़ करने और वास्तविक रिकॉर्डिंग करने से पहले अपेक्षा के अनुरूप काम कर रहे हैं।

5. एबीआर विश्लेषण

  1. क्लिक करें- और टोन फट-उठा ABR सुनवाई सीमा विश्लेषण
    1. दृश्य निरीक्षण 49,50,51,52द्वारा एबीआरथ्रेशोल्ड निर्धारण में संभावित विसंगतियों से बचने के लिए पूर्व प्रकाशनों के आधार पर स्वचालित थ्रेशोल्ड का पता लगाने का कार्य करें .
    2. संकेत-से-शोर अनुपात (एसआरएन): TW1 (0-5 ms), TW2 (5-15 ms), और TW3 (15-25 ms) (अनुपूरक चित्रा 1) की गणना करने के लिए तीन अलग-अलग समय विंडो (TWs) को परिभाषित करें।
    3. दो अलग-अलग TWs के भीतर आधार रेखा के शोर मानक विचलन की गणना (यानी, TW1 और TW3) जहां कोई AEPs मनाया जाता है. इस गणना आत्म क्रमादेशित सॉफ्टवेयर का उपयोग किया जा सकता है.
    4. TW1 और TW3के पूल किए गए डेटा के लिए माध्य और मानक विचलन दोनों की स्थापना के लिए एक ABR रिकॉर्ड के भीतर प्रत्येक SPL माप के लिए गणना करें।
    5. किसी भी डीसी ऑफसेट को निकालने के लिए संबंधित परिकलित मतलब द्वारा व्यक्तिगत रूप से सभी रिकॉर्डिंग नमूने रीसेट करें।
    6. सुनवाई थ्रेशोल्ड निर्धारण के लिए, सबसे कम SPL (डीबी) की पहचान जहां ABR प्रतिक्रिया समय विंडो (TW2) में कम से कम एक लहर आयाम मान (W I-WIV) पहले से परिकलित मानक विचलन के चार गुना से अधिक हो गया।
      नोट: अधिकतम SPL पर क्लिक करें और आवृत्ति सीमा विश्लेषण के लिए कोई ABR लहर का पता लगाया गया था, तो 100dB का एक नाममात्र सीमा स्तर कान को सौंपा है.
  2. ABR लहर आयाम और लहर विलंबता विश्लेषण
    1. सकारात्मक (च) तरंगों (पीक) के साथ ही नकारात्मक (एन) तरंगों (गड्ढे) सतत तरंगपरिवर्तन (CWT) आधारित द्वारा एक डिफ़ॉल्ट तरंगलेट का उपयोग कर के अस्थायी अनुक्रमिक व्यवस्था निर्धारित करने के लिए मैक्सिकन टोपी तरंग का उपयोग कर एक तरंग-आधारित दृष्टिकोण का संचालन पैटर्न-मिलान एल्गोरिथ्म52 (पूरकचित्र 1)।
      1. गणितीय रूप से, CWT53के रूप में प्रस्तुत किया जाता है।
        Equation
        यहाँ, s(t) संकेत है, एक पैमाने है, ख अनुवाद है, $(t) माँ तरंगिका है, $ए, ख(टी) स्केल और अनुवादित तरंगलेट है, और सी 2D मैट्रिक्स है तरंगी गुणांक.
    2. शुरू में, प्रत्येक लहर के लिए सबसे अच्छा पैमाने मानकों की पहचान करने के लिए प्रत्येक ABR रन के 55-डीबी माप का उपयोग CWT, जो तीन वर्गों में परिणाम के लिए पारित किया जा करने के लिए: सभी n-waves के लिए 0.5-4 तराजू, सभी पी-तरंगों के लिए 0.5-6, और डब्ल्यूचतुर्थ के लिए 0.5-12 के रूप में यह सबसे व्यापक है नमूने के भीतर लहर.
      नोट: 55 डीबी SPL लहरों आम तौर पर यहाँ सबसे प्रमुख हैं और मज़बूती से पता लगाया जा सकता है के रूप में चुना गया था.
    3. सभी 55 डीबी माप के भीतर मज़बूती से डब्ल्यूI-WIV के सही अस्थायी collocation का पता लगाने के लिए सभी वर्गों को साबित।
    4. 55 डीबी माप के भीतर सटीक लौकिक क्रम में ABR WI-WIV निर्धारित करने के लिए, p-peaks और n-peaks (pits) समय विंडो को सीमित करने के लिए पहले से पहचान की चोटियों के सापेक्ष पदों का उपयोग कर एक निश्चित अनुक्रम में पहचाने जाते हैं बाद में स्कैन.
    5. एक बार सभी नौ चोटियों 55 डीबी पर पहचान कर रहे हैं, आसन्न ध्वनि दबाव माप के लिए अस्थायी खोज फ्रेम के लिए प्रारंभिक अंक के रूप में संबंधित मूल्यों का उपयोग करें (50 डीबी और 60 डीबी) चोटियों की पहचान से पहले 1-9 दोहराया जाता है.
    6. इस प्रकार, यदि संभव हो तो सभी डीबी स्तर (55-0 डीबी और 60-90 डीबी) के p- और n-peaks निर्धारित करें। एक बार जब एक च- और द-पीक की पहचान तरंगिका विश्लेषण द्वारा नहीं की जाती है, तो इसकी लौकिक व्यवस्था पिछले डीबी स्तर में पहचाने गए किसी भी अन्य शिखर शिखर पर शिखर के अस्थायी ऑफसेट की गणना करके निर्धारित की जाती है।
    7. वर्तमान डेसीबल स्तर के भीतर चोटियों के लिए शंख ऑफसेट लागू करने से अपरिभाषित चोटियों के लिए अधिकतम आठ निर्धारित लौकिक पदों में परिणाम होता है जहां मतलब निकटतम सन्निकटन के रूप में लिया जाता है।
    8. आयाम विकास समारोह और सभी तरंगों की विलंबतातुलना का मूल्यांकन करने के लिए (W I-WIV),संबंधित n-peaks की समय सीमा के भीतर प्रत्येक p-peaks के अधिकतम आयाम और मतलब विलंबता की विशेषता है।
    9. नेत्रहीन बाद में स्वयं क्रमादेशित स्वत: तरंगिका उपकरण के आधार पर सभी परिणामों की जाँच करें, और, यदि आवश्यक हो, अलग-अलग ABR बाहर आंकड़ों से चलाता है अगर वे सख्त शामिल किए जाने /
      नोट: दोनों स्वचालित विश्लेषण और ABRs के दृश्य निरीक्षण में, एक डबल अंधा दृष्टिकोण की सिफारिश की है.

6. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल और बाद ABR उपचार

  1. लगातार जानवरों की निगरानी जब तक वे होश में आ गया है और कठोर recumbency बनाए रखने में सक्षम हैं.
  2. यह पूरी तरह से बरामद किया है जब तक अन्य जानवरों की कंपनी के लिए एबीआर रिकॉर्डिंग आया है कि एक जानवर वापस मत करो।
  3. इंजेक्शन कार्प्रोफेन (माउस: 1x 5-10 मिलीग्राम/किग्रा, subcutaneously; चूहा: 1x 2.5-5.0 मिलीग्राम/kg, subcutaneously) के बाद ऑपरेटिव दर्द उपचार के लिए।
    नोट: लंबे समय तक चलने वाले दर्द उपचार की आवश्यकता नहीं है क्योंकि ABR रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड को subcutaneously डाला जाता है।
  4. बाद में, भोजन के तेज की सुविधा के लिए नम छर्रों फ़ीड. ध्यान से भोजन का पालन करें ($15 g/100 g of body weight/day; $5 g/24 h) और पानी ($15 mL/100 g of body weight/day; $5 mL/24 h) खपत।
  5. उनके सामान्य आसन और व्यवहार की वापसी के लिए बारीकी से जानवरों की निगरानी.
    नोट: एन्रोफ्लोक्सासिन या ट्राइमेथोप्रिम-सल्फोनमाइड जैसे एंटीबायोटिक दवाओं के प्रणालीगत प्रशासन की यहां सिफारिश नहीं की जाती है, क्योंकि सबडर्मल इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट केवल न्यूनतम आक्रामकता का है। एंटीबायोटिक दवाओं के आवेदन को तब तक प्रतिबंधित किया जाना चाहिए जब तक कि स्थानीय या सामान्यीकृत सूजन के लक्षण न हों।
  6. पशु के शरीर के वजन को नियंत्रित करके ABR रिकॉर्डिंग के बाद अनुवर्ती पोस्ट प्रयोगात्मक वसूली.

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Representative Results

क्लिक करें- और टोन फट-उठाA ABR रिकॉर्डिंग सुनवाई सीमा मतभेद, आयाम विकास समारोह, और विलंबता तुलना का मूल्यांकन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। SPL बढ़ती मोड में क्लिक-evoked ABRs नियंत्रण और दो अनुकरणीय उत्परिवर्ती माउस लाइनों जो Cav3.2 टी प्रकार वोल्टेज gated Ca2 + चैनल के लिए कमी कर रहे हैं के लिए चित्रा 1 में चित्रित कर रहे हैं (यानी, Cav3.2+/- और Ca v3.2 शून्य उत्परिवर्ती [Cav3.2-/-]). जैसा कि ऊपर बताया गया है, सामान्यतः लिंग-विशिष्ट जांच की सिफारिश की जाती है, क्योंकि मनुष्यों में श्रवण पैरामीटरों में लिंग-विशिष्ट अंतर54,55 और चूहे56,57हैं . ABRs मुक्त क्षेत्र क्लिक करने के लिए (0.1 एमएस) और टोन फट (1-42 kHz में 6 kHz कदम, एक 1.5 एमएस रैंप समय के साथ कुल में 4.5 एमएस) ध्वनिक उत्तेजनाओं प्रोटोकॉल में वर्णित के रूप में दर्ज किए गए थे. ध्यान दें कि शीर्ष-सकारात्मक विभवों को ऊपर की ओर विक्षेपों केरूप में प्लॉट किया जाता है जैसा कि प्रतिनिधि क्लिक-वि-लक्षित रिकॉर्डिंग में मादा Ca v 3.2+/+ (चित्र 1A), Cav3.2+/- (चित्र 1B) के लिए चित्रित किया गया है ), और Cav3.2-/- चूहे (चित्र 1C) इस सेटिंग में, महिलाओं में प्रतिनिधि ABRs एक वृद्धि हुई क्लिक-evoked ABR सुनवाई सीमा का सुझाव दियाऔर महिला Cav3.2 में आयाम विकास समारोह बदल-/ 3.2+/- पशु. पुरुषों के लिए एक ही प्रवृत्ति देखी गई जो एक वृद्धि हुई क्लिक-evoked ABR थ्रेशोल्ड और Cav2.3 में कम आयाम का सुझाव दिया-/- नियंत्रण और विषमयुग्मज Cav3.2+/- चूहों की तुलना में. अनुकरणीय स्वर फट-उत्तेजित एबीआर को मादा Cav3.2+/+के लिए चित्र 2 में दर्शाया गया है, Cav3.2+//-, और Cav3.3-/- चूहे (सभी जानवर 20 सप्ताह की आयु के थे)।

सामान्य सुनवाई के प्रदर्शन का विश्लेषण करने में पहला कदम के रूप में, विभिन्न SPLs (0-90 डीबी) के लिए क्लिक-evoked ABRs प्रोटोकॉल के खंड 5 में वर्णित स्वचालित एबीआर थ्रेशोल्ड का पता लगाने प्रणाली का उपयोग कर जांच की गई (चित्र 3)। विश्लेषण किए गए जानवरों की आयु का मिलान किया गया क्योंकि वृद्धावस्था का संवेदकात्मक श्रवण हानि58,59पर नाटकीय प्रभाव पड़ सकता है . इसके बाद, विभिन्न टोन फट आवृत्तियों (1-42 kHz, चित्र 4) द्वारा पैदा एबीआर थ्रेशोल्ड स्तरों में संभावित परिवर्तनों का विश्लेषण किया गया। अनुकरणीय माउस लाइनों में, Cav2.3+/- और Cav3.2-/- ने नियंत्रण की तुलना में क्लिक- और टोन फट-संबंधित सुनवाई सीमाओं का प्रदर्शन किया (सभी जंतुओं की आयु 20 सप्ताह थी).

ऊपर उल्लिखित तरंग-आधारित अभिगम का उपयोग करते हुए, क्लिक-उत्पीड़ित एबीआर आयाम वृद्धिफलन तथा एबीआर तरंग कृषता विश्लेषण क्रमशः किया गया (चित्र 5 तथा चित्रयूरे 6, क्रमशः)। उत्तरार्द्ध आंतरिक कान और brainstem के भीतर श्रवण सूचना प्रसंस्करण पर ब्याज की जीन के संभव spatiotemporal प्रभाव में अंतर्दृष्टि की अनुमति देता है.

Figure 1
चित्र 1: नियंत्रण और उत्परिवर्ती चूहों में क्लिक-evoked ABRs (Cav3.2+/-, Cav3.2-/-) . (A) से प्राप्त प्रतिनिधि ABRs ( A ) Cav3.2+/+, (B) Cav3.2+/-, और (C) Cav3.2-/- मादा चूहों को बढ़ती SPL मोड में क्लिक उत्तेजना पर (से 0 5 डीबी एसपीएल कदम के साथ -90 डीबी). औसत के लिए, प्रत्येक उद्दीपक इकाई को 20 भ्भ् पर 300 बार लगाया गया था। ध्वनिक उत्तेजना शुरुआत एक ऊर्ध्वाधर लाल रेखा द्वारा संकेत दिया है. यह आंकड़ा लुंट एट अल60से संशोधित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: टोन फट नियंत्रण और उत्परिवर्ती चूहों में ABRs evoked (Cav3.2+/-, Cav3.2-/-). प्रतिनिधि ABRs से (ए) Cav3.2+/+, (B) Cav3.2+/-, और (C) Cav3.2-/- मादा चूहों के बाद टोन फटने के बाद 1-42 kHz (6 kHz कदम) 80 डीबी के एक SPL पर. औसत के लिए, प्रत्येक उद्दीपक इकाई को 20 भ्भ् में 300 बार प्रस्तुत किया गया। ध्वनिक उत्तेजना शुरुआत एक ऊर्ध्वाधर लाल रेखा द्वारा संकेत दिया है. यह आंकड़ा लुंट एट अल60से संशोधित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3: नियंत्रण और उत्परिवर्ती चूहों में क्लिक-evoked ABR आधारित सुनवाई थ्रेशोल्ड (Cav3.2+/-, Cav3.2-/-) क्लिक-evoked audiometric सुनवाई सीमा के (A) महिला और (B) पुरुष Cav3.2+/+ (महिला: n ] 12; पुरुष: n ] 13), Cav3.2+/- (महिला: n ] 10; पुरुष: n ] 9), और Cav3.2-/- चूहे (महिला: n ] 10; पुरुष: द ] 9)। डेटा को माध्य के रूप में प्लॉट किया गया है - SEM. सांख्यिकीय महत्व का निर्धारण $ 0.05 और p-मानों का उपयोग करके निर्धारित किया गया था जिसे *p और lt; 0.05; * *पी एंड एलटी; 0.01; पी और 0.001; पी और 0.0001. यह आंकड़ा लुंट एट अल60से संशोधित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्र 4: टोन फट-उठाA हुआ ABR-आधारित नियंत्रण और उत्परिवर्ती चूहों में सुनवाई दहलीज (Cav3.2+/-,Cav3.2-/-). 1-42 kHz (6 kHz कदम) टोन फट-उठाA ABR आधारित audiometric सुनवाई थ्रेशोल्ड के लिए Cav3.2+/+ (महिला: n ] 12; पुरुष: n $ 12; ]), Cav3.2+/ (महिला: n ] 10; पुरुष: n ] 8; ]), और Cav3.2-/- जानवर (महिला: n ] 10; पुरुष: n ] 9; डेटाको माध्य के रूप में प्लॉट किया गया है - SEM. सांख्यिकीय महत्व का निर्धारण $ स्तर $ 0.05 और च-मूल्यों का उपयोग करके निर्धारित किया गया था जिसे *च और 0.05 के रूप में परिभाषित किया गया था; * *पी एंड एलटी; 0.01; पी और 0.001; पी और 0.0001. यह आंकड़ा लुंट एट अल60से संशोधित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 5
चित्र5: नियंत्रण और उत्परिवर्ती चूहों में क्लिक आधारित ABR रिकॉर्डिंग पर आयाम विकास समारोह (Cav3.2+/-, Cav3.2-/-) WI-WIV आयाम (माइक्रोवोल्ट में) एक बढ़ती SPL के खिलाफ साजिश रची (डेसीबल में) क्लिक के लिए-evoked ABR लहर विश्लेषण में Cav3.2+/+ (महिला: n ] 12; पुरुष: n ] 11; काले रंग की रेखा का प्रतिनिधित्व ग्रे में 95% विश्वास अंतराल सहित अनुमानित नियंत्रण वक्र), Cav3.2+/- (महिला: n ] 8; पुरुष: n ] 7; और Cav3.2-/- जानवर (महिला: n ] 7; पुरुष: n ] 9 ; दोनों Cav3.2-/- महिला और पुरुष चूहों प्रदर्शन काफी के लिए बढ़ रही SPLs भर आयाम वृद्धि में देरी (ए और बी)W I, (सी और डी)W II, और (जी और ज) ड ह ) डह ब 4 की तुलना में Cav3.2+/+ और Cav3.2+/- चूहे. (ई और एफ) डब्ल्यूIIIके लिए, केवल Cav3.2-/- पुरुष चूहों महिला Cav3.2की तुलना में बढ़ती SPL भर में आयाम वृद्धि में एक महत्वपूर्ण देरी प्रदर्शित किया -/ डेटा को माध्य के रूप में प्रस्तुत किया गया है - SEM. सांख्यिकीय महत्व का निर्धारण $-स्तर - 0.05 और च-मानों का उपयोग करके निर्धारित किया गया था जिसे *च और 0.05 के रूप में परिभाषित किया गया था; * *पी एंड एलटी; 0.01; पी और 0.001; पी और 0.0001. यह आंकड़ा लुंट एट अल60से संशोधित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 6
चित्र 6: नियंत्रण और उत्परिवर्ती चूहों में क्लिक-evoked ABR रिकॉर्डिंग पर विलंबता विश्लेषण (Cav3.2+/-, Cav3.2-/-) Latencys (मिलीसेकंड में) प्रत्येक ABR लहर के लिए (WI-WIV) 65 डी बी SPL पर Cav3.2+ + (महिला: n ] 12; पुरुष: n $ 11), Cav3.2+/- (महिला: n ] 8; पुरुष: द र् 7), तथा कैv3.2-/- चूहे (मादा: द ] 8; पुरुष: द र् 9)। ध्यान दें कि विलंबता विश्लेषण भी विशिष्ट सनसनी के स्तर पर किया जा सकता है. डेटा को माध्य के रूप में दर्शाया गया है - SEM. सांख्यिकीय महत्व का निर्धारण $-स्तर $ 0.05 और च-मूल्यों का उपयोग करके निर्धारित किया गया था जिसे *च और 0.05 के रूप में परिभाषित किया गया था; * *पी एंड एलटी; 0.01; पी और 0.001; पी और 0.0001. यह आंकड़ा लुंट एट अल60से संशोधित किया गया है। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

अनुपूरक चित्र 1: ABR वास्तुकला और इलेक्ट्रोड स्थिति. (क) प्रतिनिधि एबीआर रिकॉर्डिंग 65 डीबी एसपीएल में। प्रारंभिक आधार रेखा (TW1, 5 एमएस) परीक्षण उत्तेजना द्वारा पीछा किया गया (क्लिक करें या टोन फट) और TW2 (10 एमएस) जल्दी brainstem-evoked क्षमता युक्त. TW2 एक और आधार रेखा (TW3, 10 एमएस) द्वारा पीछा किया गया था. आधार रेखा अवधियों SD आधार रेखा शोर की गणना करने के लिए उपयोग किया गया था। जब भी एक व्यक्ति ABR लहर (WI-WIV) आयाम चार गुना में आधारभूत शोर की एसडी से अधिक है, सुनवाई सीमा तक पहुँच गया था. लहर आयाम और विलंबता तुलना के लिए, एक "मैक्सिकन टोपी"आधारित तरंगिका दृष्टिकोण स्वचालित रूप से नकारात्मक चोटियों (नीले-पीले धारीदार लाइनों) और सकारात्मक चोटियों (लाल-ग्रे धारीदार लाइनों) का पता लगाने के लिए बाहर किया गया था। ग्रीन पार पूर्ण अधिकतम ABR लहर आयाम से संकेत मिलता है और तरंगिका दृष्टिकोण के आधार पर अनुमानित मूल्यों को प्रदर्शित नहीं करते. (बी) ABR रिकॉर्डिंग के लिए, एक हुक के आकार की टिप के साथ subdermal स्टेनलेस स्टील इलेक्ट्रोड इस्तेमाल किया गया. संदर्भ इलेक्ट्रोड बाईं कूल्हे पर रखा गया था, सकारात्मक (+) इलेक्ट्रोड शीर्ष पर तैनात किया गया था (पिनाके के अक्ष), और नकारात्मक (-) इलेक्ट्रोड सही पिन्ना के वेंट्रोलोटरल डाला गया था कि क्या एक monaural या binaural रिकॉर्डिंग था पर निर्भर करता है बाहर किया गया. यह आंकड़ा लुंट एट अल60से संशोधित किया गया है। इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

इस प्रोटोकॉल कैसे श्रवण चूहों में brainstem प्रतिक्रियाओं पैदा रिकॉर्ड करने के लिए की एक विस्तृत और एकीकृत विवरण प्रदान करता है. यह पशु pretreatment पर विशेष ध्यान केंद्रित डालता है, संज्ञाहरण, और संभावित methodological confounding कारकों. बाद में, दूसरों के अलावा, लिंग, माउस लाइन, उम्र, और आवास की स्थिति शामिल हैं। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि इन सभी कारकों sensorineural सुनवाई हानि और श्रवण सूचना प्रसंस्करण के मौलिक पहलुओं पर एक प्रभाव हो सकता है. इस प्रकार, श्रवण रूपरेखा अध्ययन का उचित स्तरीकरण अनिवार्य है।

एईपी रिकॉर्डिंग के इंस्ट्रूमेंटेशन काफी पिछले 50-60 वर्षों में विकसित किया गया है, और आजकल, वाणिज्यिक एबीआर रिकॉर्डिंग सिस्टम उपलब्ध हैं जो बढ़ाया है और तकनीक के आवेदन को सरल बनाया है, लेकिन यह भी नए नुकसान शुरू की है। इनमें से कुछ पहलुओं पर यहां चर्चा की गई है। सबसे पहले, उपयोगकर्ता ABR प्रणाली के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए, कि है, डेस्कटॉप या लैपटॉप कंप्यूटर से बना इंस्ट्रूमेंटेशन, preamplifier, एम्पलीफायर, इलेक्ट्रोड इनपुट बॉक्स, और संभावित ट्रांसड्यूसर (उदा., लाउडस्पीकरों, डालने इयरफ़ोन, अधि-कर्ण हेडफोन, और हड्डी oscillators). विशेष रूप से, रिकॉर्डिंग की स्थिति केंद्रीय महत्व के हैं. उनके उच्च संवेदनशीलता के कारण, ABR रिकॉर्डिंग उन्हें बाहरी बिजली के शोर के साथ संदूषण से बचाने के लिए और एक पर्याप्त संकेत करने के लिए शोर अनुपात की गारंटी के लिए परिरक्षित किया जाना चाहिए.

एक अन्य महत्वपूर्ण पहलू इंस्ट्रूमेंटेशन ही है (उदा., उत्तेजना जनरेटर, ट्रांसड्यूसर, और चलाता है). चूहों में उत्तेजनाओं का सबसे अधिक इस्तेमाल किया प्रकार 100 डिग्री क्लिक और एक संग्राहक आयाम और / Transducers या तो एक कान के लिए या दोनों कानों के लिए ध्वनिक उत्तेजनाओं की एक किस्म पेश कर सकते हैं. यहाँ हम ABR प्रयोगात्मक जानवर के लिए एक लाउडस्पीकर रोस्ट्रल का उपयोग कर परिणाम प्रस्तुत किया है. हालांकि, अन्य दृष्टिकोण भी संभव हैं, ट्यूबल शैली डालने इयरफ़ोन या तो एक कान या दोनों कान में शामिल. मनुष्यों में उपयोग किए जाने वाले सुप्रा-कर्णहेड्स चूहों में व्यवहार्य नहीं हैं। जैसा कि साहित्य दिखाता है, विभिन्न दृष्टिकोण सफल हो सकते हैं, और वे प्रयोगात्मक जरूरतों के आधार पर अनुकूलित किया जाना चाहिए. विशेष ध्यान ट्रिगर जो संकेत औसत के लिए आवश्यक है की शुद्धता के लिए भुगतान किया जाना है के रूप में इस डिजिटल नाड़ी निर्धारित करता है जब प्रत्येक व्यक्ति उत्तेजना प्रस्तुत की है. उचित रिकॉर्डिंग के लिए, ट्रिगर और उत्तेजना शुरुआत तुल्यकालिक होना चाहिए, समय बिंदु शून्य का प्रतिनिधित्व. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध ABR रिकॉर्डिंग सिस्टम आम तौर पर आत्म निहित ट्रिगर शामिल हैं जब व्यक्तिगत उत्तेजनाओं प्रस्तुत कर रहे हैं. कई प्रणालियों में, बाहरी आगतों जो एक बाहरी उत्तेजना जनरेटर और एक जुड़े ट्रिगर से एक कनेक्शन की अनुमति है. दोनों ही मामलों में, यह एक बाहरी आस्टसीलस्कप का उपयोग कर उत्तेजना और ट्रिगर विशेषताओं को नियंत्रित करने के लिए मूल्यवान हो गया. अधिग्रहण मापदंडों पर विशेष ध्यान भी दिया जाना चाहिए (उदाहरण के लिए, अंतर प्रवर्धन, फ़िल्टरिंग, एनालॉग बनाम डिजिटल फ़िल्टर, फ़िल्टर डिजाइन, और सिग्नल औसत के पैरामीटर). विशेष रूप से, यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल में प्रस्तुत मापदंडों ऊपर चित्रित अनुकरणीय परिणामों की प्रयोगात्मक आवश्यकताओं के अनुरूप. हालांकि, अनुकूलन, उदाहरण के लिए नमूना दर में, औसत के लिए आवेदन उत्तेजनाओं की संख्या, और उनके आवेदन आवृत्ति, प्रयोगात्मक सेटिंग्स के आधार पर आवश्यक हो सकता है.

अंत में, इलेक्ट्रोड प्रतिबाधा पर कुछ संक्षिप्त टिप्पणी की जानी चाहिए, इलेक्ट्रोड प्रकार, और इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट. इलेक्ट्रोड एंटेना की तरह कार्य, त्वचा के नीचे से वोल्टेज परिवर्तन उठा. उपत्वचा इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट अनिवार्य है क्योंकि त्वचा या खोपड़ी पर इलेक्ट्रोड का मात्र उपयोग बाहरी त्वचा परत के प्रतिरोध के कारण उपयुक्त नहीं है (यानी, स्ट्रेटम कॉर्नियम)। जबकि मनुष्यों में विद्युत चालकता सामान्य रूप से मृत त्वचा कोशिकाओं और एक इलेक्ट्रोलाइट जेल या पेस्ट के आवेदन brading द्वारा सुधार होता है, यह आमतौर पर नहीं किया है और चूहों में उपयुक्त जहां subdermal इलेक्ट्रोड का उपयोग किया जाता है. इलेक्ट्रोड और त्वचा का इंटरफ़ेस इलेक्ट्रोड प्रतिबाधा बनाता है जिसमें कुल में चालक के विद्युत गुण शामिल होते हैं। कंडक्टर गुण इलेक्ट्रोड की सामग्री गुण और संपर्क इलेक्ट्रोड की सतह क्षेत्र, मलबे सहित ऊतक के गुण (तेल, गंदगी, पसीना, आदि), और इलेक्ट्रोलाइट समाधान शामिल हैं. इलेक्ट्रोड सामग्री चांदी, सोना, प्लेटिनम, सीसा, टिन, और कम प्रतिबाधा और कम इलेक्ट्रोड क्षमता के साथ स्टेनलेस स्टील भी शामिल है. ध्यान रखना होगा कि इलेक्ट्रोड सामग्री रिकॉर्डिंग शर्तों के तहत निष्क्रिय है। चांदी के साथ, यह तथाकथित जटिल इलेक्ट्रोड का उपयोग करके हासिल की है (यानी, चांदी-सिल्वर क्लोराइड [Ag-AgCl] इलेक्ट्रोड). इस मामले में, विद्युत डबल परत आयनों जो आगे प्रतिबाधा कम कर देता है की एक मुक्त विनिमय के लिए अनुमति देता है. यह अक्सर अनुशंसा की जाती है कि इलेक्ट्रोड प्रतिबाधा 5 k से अधिक नहीं होना चाहिए और यह कि अलग-अलग इलेक्ट्रोड के प्रतिबाधा (कम से कम तीन) तुलनीय है। यह भी सिफारिश की जाती है कि अंतर-इलेक्ट्रोड प्रतिबाधा 2 के$ से कम होनी चाहिए। रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड एक इन्सुलेट कोटिंग के साथ एक लंबे धातु के तार का प्रतिनिधित्व करता है। तार इलेक्ट्रोड रिकॉर्डिंग उपकरण के लिए एक प्लग के माध्यम से जुड़ा हुआ है, ज्यादातर मामलों में preamplifier / चूहों में, इलेक्ट्रोड तार के दूसरे छोर आमतौर पर एक सुई इलेक्ट्रोड है कि सीधे छोड़ दिया जा सकता है या बेहतर-arcuated का buildup है. अन्य इलेक्ट्रोड प्रकार, जैसे डिस्क या कप के आकार वाले, कोई फर्क नहीं पड़ता कि क्या वे पुन: उपयोग के लिए कर रहे हैं या डिस्पोजेबल pregeled, मनुष्यों में उपयोग करने के लिए प्रतिबंधित कर रहे हैं और चूहों के लिए लागू नहीं.

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Disclosures

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

लेखकों को पशु प्रजनन और पशु स्वास्थ्य देखभाल में उनकी सहायता के लिए डॉ क्रिस्टीना Kolb (जर्मन न्यूरोडिजेनेटिव रोगों के लिए केंद्र [डीजेडएनई] और डॉ रॉबर्ट स्टार्क (डीजेडई) का शुक्रिया अदा करना चाहते हैं। यह काम आर्थिक रूप से दवाओं और चिकित्सा उपकरणों के लिए संघीय संस्थान द्वारा समर्थित किया गया था (Bundesinstitut f]r Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM, बॉन, जर्मनी).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AEP/OAE Software for RZ6 (BioSigRZ software) Tucker-Davis Technologies (TDT) BioSigRZ
Binocular surgical magnification microscope Zeiss Stemi 2000 0000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000
Cages (Macrolon) Techniplast 1264C, 1290D
Carprox vet, 50mg/ml Virbac Tierarzneimittel GmbH PZN 11149509
Cold light source Schott KL2500 LCD 9.705 202
Cotton tip applicators (sterile) Carl Roth EH12.1
Custom made meshed metal Faraday cage (stainless steel, 2 mm thickness, 1 cm mesh size) custom made custom made
5% Dexpanthenole (Bepanthen eye and nose creme) Bayer Vital GmbH PZN: 01578681
Disposable Subdermal stainless steel Needle
electrodes, 27GA, 12mm		 Rochester Electro-Medical, Inc. S03366-18
Surgical drape sheets (sterile) Hartmann PZN 0366787
Ethanol, 70% Carl Roth 9065.5
1/4'' Free Field Measure Calibration Mic Kit Tucker-Davis Technologies (TDT) PCB-378C0
Gloves (sterile) Unigloves 1570
Graefe Forceps-curved, serrated FST 11052-10
GraphPad Prism 6 Software, V6.07 GraphPad Prism Software, Inc. https://www.graphpad.com/
Heat-based surgical instrument sterilizer FST 18000-50
Homeothermic
heating blanked		 ThermoLux 461265 / -67
Ketanest S (Ketamine), 25mg/ml Pfizer PZN 08707288
Ringer’s solution (sterile) B.Braun PZN 01471434
Matlab software MathWorks, Inc. https://de.mathworks.com/products/matlab.html
Medusa 4-Channel Low Imped. Headstage Tucker-Davis Technologies (TDT) RA4LI
Medusa 4-Channel Pre-Amp/Digitizer Tucker-Davis Technologies (TDT) RA4PA
Microphone PCB Pieztronics 378C01
Multi Field Speaker- Stereo Tucker-Davis Technologies (TDT) MF1-S
Oscilloscope Tektronix DPO3012
Optical PC1 express card for Optibit Interface) Tucker-Davis Systems (TDT) PO5e
Askina Braucel pads (cellulose absorbet pads) B.Braun PZN 8473637
Preamplifier PCB Pieztronics 480C02
RZ6 Multi I/O Processor system (BioSigRZ) Tucker-Davis Technologies (TDT) RZ6-A-PI
0.9% saline (NaCl, sterile) B.Braun PZN:8609255
SigGenRZ software Tucker-Davis Technologies (TDT) https://www.tdt.com/
Software R (version 3.2.1) + Reshape 2 (Version 1.4.1) + ggplot 2 (version 1.0.1) + datatable (version 1.9.4), + gdata (version 2.13.3), + pastecs (version 1.3.18), + waveslim (version 1.7.5), + MassSpecWavelet (version 1.30.0) The R Foundation, R Core Team 2015 Open Source Software (freely distributable)
Sound attenuating cubicle Med Associates Inc. ENV-018V
Standard Pattern Forceps, 12cm and 14.5 cm length FST 11000-12, 11000-14
Leukosilk tape BSN medical GmbH & Co. KG PZN 00397109
Tissue Forceps- 1x2 Teeth 12 cm FST 11021-12
Uniprotect ventilated cabinet Bioscape THF3378
Ventilated cabinet Tecniplast 9AV125P
Xylazine (Rompun), 2% Bayer Vital GmbH PZN 1320422

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JoVE में इस महीने अंक 147 आयाम श्रवण प्रणाली औसत binaural brainstem क्लिक करें सुनवाई दहलीज विलंबता monaural प्रणालीगत neurophysiology टोन फट तरंग
डेटा अधिग्रहण और विश्लेषण में Brainstem Evoked प्रतिक्रिया ऑडियोमेट्री में चूहे
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Lundt, A., Soos, J., Henseler, C.,… More

Lundt, A., Soos, J., Henseler, C., Arshaad, M. I., Müller, R., Ehninger, D., Hescheler, J., Sachinidis, A., Broich, K., Wormuth, C., Papazoglou, A., Weiergräber, M. Data Acquisition and Analysis In Brainstem Evoked Response Audiometry In Mice. J. Vis. Exp. (147), e59200, doi:10.3791/59200 (2019).

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