Summary
Vi præsenterer en enkel cytogenetisk teknik bruger 4′, 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) til at bestemme den befrugtning og primære kønsfordelingen af haplodiploid invasive skadedyr Bemisia tabaci.
Abstract
Et par arter af sap-sugende whiteflies er nogle af de mest skadelige jordbaserede skadedyr på verdensplan på grund af den afgrøde skader de påføre og plant vira de vektor. Trods talrige undersøgelser af biologi af disse arter i forskellige miljøer, en nøgle livshistorie parameter, afkom sex nøgletal, har modtaget megen opmærksomhed, endnu er vigtig for at forudsige populationsdynamik. Den primære kønsfordelingen (kønsfordelingen på oviposition) af Bemisia tabaci er aldrig blevet rapporteret men kan findes ved fastsættelsen af æg befrugtning sats af denne haplodiploid insekt. Teknikken indebærer dechorionation af æg med blegemiddel, en række fiksering trin og anvendelsen af den generelle DNA fluorescerende plet, DAPI (4′, 6-diamidino-2-phenylindole, en DNA-bindende fluorescerende farvestof), binde til kvindelige og mandlige pronuclei. Vi præsenterer her, teknikken, og et eksempel på dets anvendelse, at teste, om en endosymbiotiske bakterie, Rickettsia sp. nr. bellii, påvirket den primære kønsfordelingen af B. tabaci. Denne metode kan hjælpe i befolkningen undersøgelser af whiteflies, eller bestemme, hvis sex tildeling findes med visse miljømæssige stimuli.
Introduction
Studiet af sex tildelingen, eller den relative investering i mandlige og kvindelige afkom, er en hjørnesten i adfærdsmæssige økologi1,2,3. Ud over sin magt til test adaptive modeller af adfærd, kan at kende sex strategien i en organisme forbedre modeller af sit populationsdynamikken. I mange arter styres sex tildeling af mødre. For at fastslå køn tildeling, er det vigtigt at bestemme de primære kønsfordelingen eller andelen af hunner samtidig med ægget deposition. Selv om kønsfordelingen på voksen opståen kan give et fingerpeg til sex tildeling, kan differential udviklingsmæssige dødelighed mellem mandlige og kvindelige ungfisk almindeligvis skew adult sex forholdet betydeligt. I nogle arter af hvepse, rækkefølgen af insekter, der indeholder myrer, bier og hvepse, er den primære kønsfordelingen fastslået med cytogenetisk assays, farvning af embryoner for at se genetisk DNA. Fordi hymenopterans er haplodiploid, en begyndende mandlige æg er haploide og indeholder kun de kvindelige pronucleus (n), mens begyndende kvindelige æg er diploide og indeholder både mandlige og kvindelige pronuclei (2n). Selvom Aleyrodidae, familien sap-fodring af hemiptera (Hemiptera) kendt som whiteflies, er også haplodiploid, har der ikke været en etableret analyse til at finde den primære kønsfordeling i disse insekter. Det er måske overraskende, da intensiteten af undersøgelse af de par kosmopolitiske alvorlige skadedyr i denne familie og betydningen af køn nøgletal i konkurrencedygtige interaktioner i whiteflies4,5,6,7 ,8,9,10 og i populationsdynamikken generelt. I haplodiploid insekter også er sex nøgletal ugenert af sex bestemmelse systemer, så muligheden for selektiv befrugtning og labile sex nøgletal, der varierer med miljø2. Her præsenterer vi en teknik til at bestemme de primære kønsfordelingen af arter kompleks af whiteflies kendt kollektivt som sweetpotato whitefly, B. tabaci. Denne én art navn omfatter mere end 28 arter på verdensplan11og omfatter nogle af de mest skadelige globale invasive skadedyr12,13. Anvendelse af denne teknik til at bestemme sex tildeling mønstre i B. tabaci og andre Aleyrodidae vil tillade en mere nøje undersøgelse af variabler, herunder temperatur, værten plante, endosymbiotiske bakterier eller plante/whitefly patogener, der kan påvirke whitefly primære sex nøgletal og whitefly populationsdynamik.
Vi er uvidende om nogen sammenlignelige æg-farvning teknikker til B. tabaci. Protokollen er bekvemt i forhold til farvning metoder anvendes til andre insekt æg14 som det udelader en overnight fiksering skridt, og derfor kan afsluttes inden for 3 h. Som et eksempel på et program, en endosymbiotiske bakterie, Rickettsia sp. nr. bellii, er forbundet med kvindelige fordomme i vores laboratorium linjer af B. tabaci Mellemøsten og Asien mindre 1 (MEAM1)15,16. I én B. tabaci MEAM1 laboratorium linje ("MAC1," indsamlet fra Maricopa landbrugs Center), vi tester om Rickettsia-inficerede (R+) hunnen befrugte flere æg end ikke-inficerede (R-) kvinder.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Bemærk: Sikre, at alt arbejde udføres ved stuetemperatur i et velventileret område eller under et stinkskab. Alle 'dråber' i denne protokol er defineret som 5 – 20 µL, afhængig af operatørens præference.
1. indledende opsætning
- Tillade kvindelige whiteflies til oviposit på rene blade. Eksempler på oviposition arenaer omfatter klip bure eller blade skåret til at passe på agar i en petriskål. Lav en coverable hul i klip bur eller petriskål dækning til at indsætte og fjerne voksne. Alternativt, hurtigt sat et fartøj af indsamlede voksne på is, og derefter indsætte dem på bladet. Begræns tid mellem oviposition og æg fiksering til ikke mere end 60 min., for at sikre observation af sperm overgang til den faderlige pronucleus i æg.
Bemærk: Æg ikke fjernet fra bladet kan opdrættes til voksenalderen at optage adult sex nøgletal. - Før eller under whitefly oviposition, forberede et objektglas ved at rense det med sæbe og vand, tørring det godt, og derefter strække et stykke paraffin film over en ende, og sørg for paraffin film overflade ikke bryder (figur 1).
Bemærk: Paraffin film er hydrofobe og semi-uigennemsigtig, så væsker til form dråber og æg skal ses lettere.
2. Dechorionation
- Med et glas Pasteur afpipetteres, tilføje dråber blegemiddelopløsning (0,83% natriumhypochlorit) til paraffin film.
Bemærk: Det er nemmere at holde styr på æg, hvis det kun er 2-3 æg er i hvert fald. Alternativt, du kan administrere nogle store æg, indsamle æg i dråber 1 x fosfatbufferet saltopløsning (PBS).
Forsigtighed: Blegemiddel er ætsende; bære handsker når du håndterer blegemiddel og inhalerer ikke. - Fjerne de voksne whiteflies fra bladet.
- Placer blad under et mikroskop for at se æggene klart og indsamle æg enkeltvis og omhyggeligt med en tynd sonde. At gøre en sonde, indsættes en minuten nadel pin på 45° eller i en komfortabel arbejde vinkel ind i en smeltet pipette tip (figur 2).
- Overføre æggene til blegemiddel eller 1 x PBS. Hvis du bruger 1 x PBS, fjerne 1 x PBS med et glas Pasteur afpipetteres en gang alle æggene indsamles og derefter tilføje blegemiddel til æg.
Bemærk: Når at indsamle æg, løft langsomt æg fra sin base, indtil stilken er fjernet fra bladet. Stilken er klistret, og ægget vil normalt holde sig til sonde tip indtil det er dyppet i blegemiddel.
Bemærk: Det anbefales at bruge særskilte glas Pasteur pipetter til alle reagenser, og pipetter kan ændres med varme at gøre tips smallere og reducere risikoen for et uheld sugning whitefly æg. For at forhindre rester og forurening, skal du rense pipetter med deioniseret vand efter hver brug. - Vente 10 min. Hvis der er interesse for embryogenese i æg ældre end 1 h, forlade æggene i blegemiddel for op til 15 min.
Bemærk: For æg, der er op til 1 time gammel, er 10 min tilstrækkeligt.
3. fiksation
Bemærk: Disse trin er taget fra en Hymenopteran protokol17.
- Fjern blegemiddel (som indeholder chorion fragmenter) med et glas Pasteur pipette og kassér den. Tilføje dråber iseddike med et glas Pasteur afpipetteres og vente 3 min.
Forsigtighed: Gå videre med dette trin under et stinkskab. Iseddike er ætsende; bære handsker ved håndtering af iseddike og ikke inhalerer, især i kombination med den resterende blegemiddel. - Fjerne iseddike med et glas Pasteur pipette og tilføje dråber af Clarkes løsning (3:1 absolut ethanol: iseddike) med et glas Pasteur afpipetteres. Vent, indtil de fleste af løsningen er fordampet (eller 10 min max).
- Tilføje dråber af 70% ethanol til æg med et glas Pasteur pipette og vente, indtil de fleste af ethanol er fordampet (eller 10 min max).
4. farvning
- Fjern eventuelle resterende ethanol med et glas Pasteur pipette og tilføje dråber 1 x PBS til æg med et glas Pasteur pipette til få pH tæt på 7,0. Angiv objektglas i et fugtigt kammer til at forhindre udtørring, for eksempel i en tom pipette tip box med en våd køkkenrulle inde (figur 3). Vent mindst 30 min.
Bemærk: Dette er den bedste, hvis en pause er nødvendig, så længe fugtigt kammer kan forhindre udtørring. - Fjern 1 x PBS med et glas Pasteur pipette, og tilføje dråber 0,1 μg/mL DAPI, en DNA fluorescerende plet, med et glas Pasteur afpipetteres. Sæt objektglas i et mørkt fugtigt kammer og vent mindst 15 min.
Forsigtighed: DAPI er et irritationsmoment, så håndtere det med handsker.
5. vask
- Fjerne DAPI med et glas Pasteur pipette.
- Tilføje dråber 1 x TBST (5 x løsning fremstillet af 30 g af Tris, 43.8 g NaCl, 5 mL af Polysorbat 20 og 1.0 g af NaN3 [pH 7,5], og bragt til 1 L med vand af PCR) til æg med et glas Pasteur afpipetteres. Vent 5 min. før du fjerner 1 x TBST med en glas Pasteur pipette. Gentag dette trin 2 gange.
6. montering
- Efter den sidste vask, afpipetteres nøje alle æg fra paraffin film på en ren del af objektglas. Fjern overskydende 1 x TBST; derefter tilsættes 20 µL af montering medier (80% glycerol og 20% 1 x TBST med 2% n-propyl-gallate) og læg en ren dække slide på toppen af æg.
- Til langtidsopbevaring, forsegle det dække dias med klar neglelak, og derefter enten gemme diaset i mørke ved 2 ° C eller straks se det under et mikroskop for fluorescerende.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For at teste, om Rickettsia påvirker befrugtning sats af B. tabaci MEAM1 hunner, vi opdrættet Rickettsia-inficeret (R+) eller inficerede (R-) B. tabaci på cowpea planter (Vigna unguiculata) i adskille bure på 27 ° C, 70% relativ luftfugtighed og en 16 h lys/8 h mørke lysperiode. R+ og R- fjerde instar whiteflies blev omhyggeligt fjernet fra blade og isoleret i 200 µL strip rør. Når voksne opstået, de blev indsamlet i grupper af 50% hunner og overført til rene blade i petriskåle (n = ~50-100/leaf) for 4 dage efter parring. Grupper af ca 20 hunner og flere hanner blev derefter overført til en ren blad disk (en for R- voksne, en for R+ voksne) i 35 mm petriskåle hvilende på 1% agar. Petriskål låget var blevet skåret ud og den fine stof mesh bruges til indeslutning også forhindret overskydende kondens. Efter ca. 45 min., alle voksne var fjernet, nogle af æggene er høstet for at bestemme den befrugtning og æggene var ikke indsamlet blev opdrættet til voksenliv til at beregne den voksne kønsfordeling. En kohorte en enkelt dag, for både R+ og R- whiteflies, blev defineret som en blok. Der var syv blokke til beregning af befrugtning sats eller primære køn ratio, mens der var seks blokke til beregning af adult sex forholdet, da der var ikke nok sidesten æg fra én blok til bageste til voksenalderen. En generaliseret lineær model blev brugt i Statistikpakken Rasmussen til at bestemme, om befrugtning satser eller voksen sex nøgletal var væsentligt påvirket af Rickettsia infektion og/eller blok. Svar variabler var andelen af befrugtede æg/alle æg, eller andelen af kvindelige voksne/alle voksne, henholdsvis, mens forklarende variabler blev blok og Rickettsia infektion status.
Æg dechorionation efterfulgt af DAPI nukleare farvning tilladt utvetydige tildelingen af befrugtning (og embryo sex) når observeret med en fluorescerende mikroskop (figur 4). For dette eksperiment, 90 æg lagt af R-B. tabaci MEAM1 hunner og 82 æg af R+B. tabaci MEAM1 hunner blev scoret. Hvad angår æg, der er opdrættet til voksenalderen, blev 60 R- og 95 R+ voksne scoret. Mens en kvindelig bias i adult sex nøgletal har vist konsekvent i tidligere undersøgelser15,18,19, i den aktuelle undersøgelse, voksen R+ var sex nøgletal (69% kvinder, median) kvinde-partisk i forhold til R - kvinder (50% kvinder, median), men de sex nøgletal i de to behandlinger var ikke signifikant forskellige (χ2 = 1,02, df = 1, p = 0.31; Figur 5). De primære Rasmussen- sex nøgletal (60% befrugtede æg, median) var kvinde-partisk i forhold til R+ sex nøgletal (44% befrugtede æg, median) men også ikke var signifikant forskellig (χ2 = 0,51, df = 1, p = 0,47), at give no beviser for større befrugtning satser af R+ hunner (figur 5). Blok også ikke har en betydelig indvirkning på primære (χ2 = 0,29, df = 1, p = 0,59) eller voksen (χ2 = 1,20, df = 1, p = 0,27) kønsfordelingen.
Figur 1: foto af et objektglas med paraffin film og dråber af blegemiddel. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: et eksempel på en sonde, gammeldags med varme, fra en pipette spids og en minuten nadeln pin. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: et eksempel på et fugtigt kammer, gammeldags fra en tom pipette tip box og en våd køkkenrulle. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: Fluorescerende mikroskop billeder af B. tabaci æg. (en) B. tabaci MEAM1 befrugtede, begyndende kvindelig ægget. (b) Unfertilized, begyndende mandlige æg. Æggene var løst på mindre end 1 time efter oviposition og farves med DAPI. Bunden af hvert æg fluorescerende på grund af bakteriel DNA (Portiera, Hamiltonella, og eventuelt Rickettsia) i cellen bacteriome Stamform, som er inkluderet i lagt æg20,21. I hvert æg, den kvindelige pronucleus er nær midten af ægget, og i den kvindelig ægget sæden er synlig som en lyse stribe nær toppen af æg i nærheden af hvad er formentlig en autofluorescing micropyle. Billederne er screenshots taget fra en Z-stak genereret video, produceret af en laser scanning Konfokal inverteret mikroskop. Skala barer blev anslået fra tidligere mikroskop billeder. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: Primære og adult sex nøgletal for Rickettsia-inficeret eller inficerede B. tabaci. Boks og bakkenbart parceller af den primære køn ratio (procentdel af befrugtede æg, eller procentdel af kvindelige zygotes) i sort i forhold til den voksne kønsfordeling (procentdel af voksne hunner) i grå, af Rickettsia-inficeret (R+) og inficerede (R -) B. tabaci MEAM1, "MAC1" genetiske linje. Boks og bakkenbart parceller Vis medianen som den midterste linje, mener som et plustegn, og øvre og nedre kvartiler som de linjer, der gør enderne af boksen, og intervallet er repræsenteret i de ydre linjer strækker sig fra boksen. R- æg scorede: n = 90; R+ æg scorede: n = 82. Til R- voksne tælles: n = 60; for R+ voksne tælles: n = 95. I en logistisk analyse af den primære kønsfordeling (andel af befrugtede æg) udført i Statistikpakken Rasmussen, blev ikke fundet nogen væsentlige virkninger for blok (n = 7, χ2 = 0,29, df = 1, p = 0,59) eller for Rickettsia infektion (χ2 = 0,51, df = 1, p = 0,47). Adult sex nøgletal, som påvirkes af blok (n = 6) og Rickettsia infektion status, blev ligeledes analyseret. Her så godt, ingen betydelige virkninger blev fundet for blok (χ2 = 1,20, df = 1, p = 0,27) eller for Rickettsia infektion (χ2 = 1,02, df = 1, p = 0,31). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denne protokol er først til at fange befrugtning sats eller primære kønsfordelingen af B. tabaci. Udfordringen i denne protokol er, at det kræver forskere til at lære at håndtere whitefly æg hurtigt, at sikre, at ikke mere end 1 time er gået siden æggene var oviposited indtil de er faste. Ved indledende forsøg var æg, der blev fastsat til 3 h eller mere postoviposition for gammel til at observere befrugtning, som syngamy havde fundet sted og mitotiske divisioner var undervejs. Mellem 1 til 3 h tog pronuclei på et rundere figur. Mens den tidlige tilstedeværelsen af to kerner angiver et befrugtet æg, lidt senere, anbringelse af de to kerner som forberedelse til syngamycan synes at være en kerne, og senere igen, de to produkter af første mitotiske deling findes i både mandlige og kvindelige æg. Derfor, skelnen mellem kønnene er ikke klar på disse senere tidspunkter, og anbefaler vi at begrænse intervallet fra oviposition til fiksering til 1 h som en konservativ foranstaltning. Det er også en udfordring at lære at være blid med æg med hver overførsel af væske, så de ikke ved et uheld indsugning i pipetten. I forbindelse med visning af æg under et mikroskop for fluorescerende, kan et par af æggene have brudt under protokollen, så æggene ikke sexed og regnes som pronuclei og æggeblomme kan have undgået. Ellers når operatøren bliver fortrolig med disse trin, kan protokollen fuldføres bekvemt inden for 3 timer, som det ikke kræver en overnight fiksering trin. Det er også fleksibel, fordi den kan ændres for at plette ældre æg, for disse forskere interesseret i opfange udvikling.
En anvendelse af denne protokol omfatter forskning på sex tildeling. Selv om mange snesevis af undersøgelser af whitefly biologi har rapporteret adult sex nøgletal i forskellige miljøer, adult sex nøgletal forvirre sex tildeling af moderen med sex-specifikke udviklingsmæssige dødelighed af nymfer og gøre det umuligt at fastslå årsagen af enhver kønsfordelingen mønster. Cytogenetisk teknikken beskrevet her tillader muligheden for forståelse whitefly sex tildeling mønstre mere generelt. Mens de store dispersive populationer af B. tabaci og andre skadedyr såsom drivhus whitefly, kan Trialeurodes vaporariorum, forudsiges for at resultere i 1:1 sex nøgletal, som ofte udstillet i laboratoriet indstillinger22, 23, vi forudser også, at reproduktive indblanding, endosymbionts og potentielt vært plantekvaliteten kunne påvirke primære sex nøgletal. At disse samme faktorer også kunne påvirke sex-specifikke dødelighed mønstre under udvikling, systematisk skævvridning kønsfordelingen skøn, understreger behovet for en direkte måling af den primære kønsfordeling.
Mens kvindelige fordomme forbundet med Rickettsia infektion er blevet konsekvent fundet i den genetiske linje "MAC1"15,18,19, var adult sex forhold ikke væsentligt kvindelige partisk i den aktuelle undersøgelse. Det primære køn nøgletal observeret med cytogenetisk teknik ikke var væsentligt partisk enten. Vi censused primære og adult sex forhold til B. tabaci hunner på blot 1 dag i begyndelsen af en oviposition anfald, når hunnerne var 4-5 dage gammel, så sex nøgletal studerede ikke kan har repræsenteret de sex nøgletal, som vi observeret over længere perioder. Ikke desto mindre, teknikken gjort det muligt at bestemme befrugtning sats eller primære kønsfordelingen og i dette tilfælde, viste en korrespondance mellem de primære og adult sex nøgletal.
Bestemmelse af befrugtning kan også være værdifuld i tilfælde, hvor forskere måske ønsker at bestemme, hvilken type af reproduktiv isolation blandt whitefly populationer. Mens det har været et spørgsmål om nogle kontroverser12,24,25, det er nu generelt accepteret at navnet B. tabaci refererer til snesevis af kryptiske arter, med dokumentation fra både genetiske forskelle og krydser tests i som par hunner er produceret12,25. I disse undersøgelser, ville det være af interesse at vide, hvor isolationen opstår. Overføres sperm, og heterospecific sædceller befrugter æggene, eller er forsøgt parringer forgæves? Med hensyn til bestemmelse af den primære kønsfordeling, denne teknik kan afgøre, om den primære kønsfordelingen er påvirket af endosymbionts, egoistiske genetiske elementer, eller en af mange andre faktorer, herunder artsfæller, konkurrenter, prædatorer, parasitoider, patogener, den vært plante eller abiotiske effekter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Denne forskning er finansieret af en NSF grant (DEB-1020460) til M.S.H. og en USDA AFRI grant (2010-03752) til M.S.H. Forfatterne takke Brennan Zehr for farvning whitefly æg med stor dygtighed og Zen. Forfatterne tak Mike Riehle for at tillade brugen af hans fluorescerende mikroskop til billedbehandling. Forfatterne tak Suzanne Kelly og Marco Gebiola for æg billeder. Forfatterne tak Suzanne Kelly og Jimmy Conway for at hjælpe på afgørende øjeblikke under forsøgene.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1x PBS | Any | ||
| 1x TBST | Any | 5x solution made from 30 g Tris, 43.8 g NaCl, 5 mL Tween-20 and 1.0 g NaN3 pH 7.5, and brought to 1 L with PCR grade water | |
| Bleach | Clorox | Any household bleach will work as long as it can be diluted to 0.83% Sodium hypochlorite | |
| Clear nail polish | Any | ||
| DAPI dilactate | Santa Cruz Biotechnology | sc300415 | |
| Ethanol | Any | Dilute to 70% EtOH | |
| Fluorescent microscope | Nikon | Nikon Eclipse 50i was used in this experiment, but any fluorescent microscope with 340/380 nm excitation filter and at least 4-10x magnification can be used | |
| Glacial acetic acid | Mallinckrodt | UN2789 | |
| Glycerol | Any | ||
| Microscope | Wild | A Wild M5A microscope was used for this experiment, but any microscope where the operator can clearly see the whitefly eggs can be used | |
| Microscope slide covers | Any | Methods are for 18 mm x 18 mm sized slide covers. More mounting media will need to be added for larger slide covers. | |
| Microscope slides | Any | ||
| Minuten nadel pins | BioQuip | 1208SA | Minuten nadel pins are optional for fashioning as probes with pipette tips |
| NaCl | Any | ||
| NaN3 | Any | ||
| n-propyl-gallate | Sigma/Santa Cruz Biotechnology | P3130/sc-250794 | |
| Parafilm | Bemis | ||
| Pasteur pipettes | Fisher Scientific | 13-678-20A | Fisherbrand Disposable Borosilicate glass Pasteur pipettes 5.75 in. A Bunsen burner may also be needed if operator would like to lengthen and narrow pipettes |
| PCR grade water | Any | ||
| Pipette tips | Any | Pipette tips are optional for fashioning as probes with minuten nadel pins | |
| Small dropper bulb | Any | Must fit on Pasteur pipette | |
| Tris | Any | ||
| Tween-20 | Any |
References
- Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. The Theory of Sex Allocation. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).
- Godfray, H. C. J. Parasitoids: behavioral and evolutionary ecology. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1994).
- Bourke, A. F. G., Franks, N. R. Social Evolution in Ants. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1995).
- Pascal, S., Callejas, C. Intra- and interspecific competition between biotypes B and Q of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) from Spain. Bulletin of Entomological Research. 94 (4), 369-375 (2004).
- Liu, S. -S., et al. Asymmetric mating interactions drive widespread invasion and displacement in a whitefly. Science. 318 (5857), 1769-1772 (2007).
- Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. Mate discrimination in invasive whitefly species. Journal of Insect Behavior. 23 (5), 364-380 (2010).
- Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. Plasticity in mating behaviour drives asymmetric reproductive interference in whiteflies. Animal Behaviour. 79 (3), 579-587 (2010).
- Tsueda, H., Tsuchida, K. Reproductive differences between Q and B whiteflies, Bemisia tabaci, on three host plants and negative interactions in mixed cohorts. Entomologia Experimentalis et Applicata. 141, 197-207 (2011).
- Wang, P., Crowder, D. W., Liu, S. -S. Roles of mating behavioural interactions and life history traits in the competition between alien and indigenous whiteflies. Bulletin of Entomological Research. 102 (4), 395-405 (2012).
- Sun, D. -B., Li, J., Liu, Y. -Q., Crowder, D. W., Liu, S. -S. Effects of reproductive interference on the competitive displacement between two invasive whiteflies. Bulletin of Entomological Research. 104 (3), 334-346 (2014).
- Liu, S. -S., Colvin, J., De Barro, P. J. Species concepts as applied to the whitefly Bemisia tabaci systematics: how many species are there? Journal of Integrative Agriculture. 11 (2), 176-186 (2012).
- Invasive Species Specialist Group. Global Invasive Species Database. , Available from: http://iucngisd.org/gisd/100_worst.php (2018).
- Gilbertson, R. L., Batuman, O., Webster, C. G., Adkins, S. Role of the insect supervectors Bemisia tabaci and Frankliniella occidentalis in the emergence and global spread of plant viruses. Annual Review of Virology. 2 (1), 67-93 (2015).
- Giorgini, M., et al. Rickettsia symbionts cause parthenogenetic reproduction in the parasitoid wasp Pingala soemius (Hymenoptera: Eulophidae). Applied and Environmental Microbiology. 76 (8), 2589-2599 (2010).
- Himler, A. G., et al. Rapid spread of a bacterial symbiont in an invasive whitefly is driven by fitness benefits and female bias. Science. 332 (6026), 254-256 (2011).
- Cass, B. N., et al. Dynamics of the endosymbiont Rickettsia in an insect pest. Microbial Ecology. 70 (1), 287-297 (2015).
- Vavre, F., de Jong, J. H., Stouthamer, R. Cytogenetic mechanism and genetic consequences of thelytoky in the wasp Trichogramma cacoeciae. Heredity. 93 (6), 592-596 (2004).
- Cass, B. N., et al. Conditional fitness benefits of the Rickettsia bacterial symbiont in an insect pest. Oecologia. 180 (1), 169-179 (2016).
- Hunter, M. S., Asiimwe, P., Himler, A. G., Kelly, S. E. Host nuclear genotype influences phenotype of a conditional mutualist symbiont. Journal of Evolutionary Biology. 30, 141-149 (2017).
- Gottlieb, Y., et al. Inherited intracellular ecosystem: symbiotic bacteria share bacteriocytes in whiteflies. FASEB Journal. 22 (7), 2591-2599 (2008).
- Luan, J., Sun, X., Fei, Z., Douglas, A. E. Maternal inheritance of a single somatic animal cell displayed by the bacteriocyte in the whitefly Bemisia tabaci. Current Biology. 28 (3), 459-465 (2018).
- Guo, J. -Y., Cong, L., Wan, F. -H. Multiple generation effects of high temperature on the development and fecundity of Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera: Aleyrodidae) biotype B. Insect Science. 20 (4), 541-549 (2013).
- Cui, X., Wan, F., Xie, M., Liu, T. Effects of heat shock on survival and reproduction of two whitefly species, Trialeurodes vaporariorum and Bemisia tabaci biotype B. Journal of Insect Science. 8 (24), (2008).
- Boykin, L. M. Bemisia tabaci nomenclature: Lessons learned. Pest Management Science. 70 (10), 1454-1459 (2014).
- Qin, L., Pan, L. -L., Liu, S. -S. Further insight into reproductive incompatibility between putative cryptic species of the Bemisia tabaci whitefly complex. Insect Science. 23 (2), 215-224 (2016).
