Summary
Vi presenterar en enkel cytogenetiska teknik med 4, 6-diamidin-2-fenylindol (DAPI) för att fastställa vilken gödsling och primära könskvot av haplodiploid invasiva skadedjur Bemisia tabaci.
Abstract
Några arter av sap-sugande Vita flygare är några av de mest skadliga terrestrial skadedjur i hela världen på grund av gröda skador de förorsakar och växt virus de vektor. Trots många studier av biologi av dessa arter i olika miljöer, en nyckel livshistoria parameter, avkomma sex nyckeltal, har fått lite uppmärksamhet, men är viktigt för att förutsäga populationsdynamik. Den primära könskvot (sex ratio på oviposition) av Bemisia tabaci har aldrig rapporterats men kan hittas genom att bestämma andelen ägg befruktning av denna haplodiploid insekt. Tekniken innebär att dechorionation ägg med blekmedel, en serie fixering steg och tillämpningen av allmänna DNA fluorescerande fläcken, DAPI (4, 6-diamidin-2-fenylindol, ett DNA-bindande fluorescerande färgämne), binda till kvinnliga och manliga pronuclei. Här presenterar vi tekniken, och ett exempel på dess tillämpning, att testa om en endosymbiotic bakterie, Rickettsia sp. nr. bellii, påverkat den primära könskvot av B. tabaci. Denna metod kan hjälpa i befolkningsstudier av Vita flygare, eller för att avgöra om sex fördelning finns med vissa stimuli från omgivningen.
Introduction
Studien av sex tilldelning, eller relativa investeringen i manliga och kvinnliga avkomma, är en hörnsten i beteendeekologi1,2,3. Förutom dess makt för att testa adaptiv modeller av beteende, kan att veta kön fördelning strategi en organism förbättra modeller av dess populationsdynamik. Hos många arter styrs sex fördelningen av mödrar. För att avgöra kön fördelning, är det viktigt att fastställa den primära könskvot eller andelen honor vid tidpunkten för ägg nedfall. Även om sex förhållandet på vuxen uppkomst kan ge ledtrådar till sex tilldelningen, kan differentiell utvecklingsmässiga dödlighet mellan manliga och kvinnliga ungfisk ofta skeva förhållandet adult sex väsentligen. I vissa arter av Hymenoptera, ordning insekter som innehåller myror, bin och getingar, har den primära könskvot bestämts med cytogenetiska analyser, färgning embryon för att Visa genetiska DNA. Eftersom hymenopterans är haplodiploid, ett begynnande manliga ägg är haploida och innehåller bara de kvinnliga pronucleus (n), medan begynnande kvinnliga ägg är diploida och innehåller både manliga och kvinnliga pronuclei (2n). Även om Aleyrodidae, familjen sap-utfodring av true Halvvingar, känd som Vita flygare, är också haplodiploid, har inte ett etablerat test att hitta den primära könskvot i dessa insekter. Detta är kanske förvånande med tanke på intensiteten i studie av några kosmopolitiska allvarliga skadedjur i denna familj och vikten av sex nyckeltal i konkurrenskraftiga interaktioner av Vita flygare4,5,6,7 ,8,9,10 och populationsdynamik generellt. I haplodiploid insekter också är sex nyckeltal otvungen av sex beslutsamhet system, så att möjligheten till selektiv befruktning och labila sex nyckeltal som varierar med den miljö2. Här presenterar vi en teknik för att fastställa den primära könskvot av arter komplex av Vita flygare kollektivt kallas den sweetpotato mjöllus, B. tabaci. Här en art omfattar mer än 28 arter världen över11och omfattar några av de mest skadliga globala invasiva skadedjur12,13. Tillämpningen av denna teknik att avgöra kön fördelning mönster i B. tabaci och andra Aleyrodidae kommer att tillåta en mer noggrann undersökning av variabler, inklusive temperatur, värdväxt, endosymbiotic bakterier eller växt/mjöllus patogener, som kan påverka mjöllus primära sex nyckeltal och mjöllus populationsdynamik.
Vi är omedvetna om någon jämförbar ägg-färgning tekniker för B. tabaci. Protokollet är bekvämt jämfört med färgning metoder som används för andra insekters ägg14 som det utelämnar en övernattning fixering steg och, därför, kan slutföras inom 3 h. Som ett exempel på ett program, en endosymbiotic bakterie, Rickettsia sp. nr. bellii, förknippas med kvinnlig bias i vårt laboratorium linjer B. tabaci Mellanöstern-Asien mindre 1 (MEAM1)15,16. I en B. tabaci MEAM1 laboratorium linje (”MAC1”, samlas in från Maricopa Agricultural Center), vi testar om Rickettsia-infekterade (R+) Honor gödsla mer ägg än oinfekterade (R–) Honor.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Obs: Se till att allt arbete utförs i rumstemperatur i väl ventilerade utrymmen eller under ett dragskåp. Alla 'drops' i detta protokoll definieras som 5 – 20 µL, beroende på operatörens önskemål.
1. inledande installation
- Tillåta kvinnliga Vita flygare till oviposit på rena blad. För ovipositionen arenas exempel klipp burar eller bladen skäras för att passa på agar i en petriskål. Gör en ska täckas hål i klippet bur eller petriskål omslag att infoga och ta bort vuxna. Alternativt kan du snabbt sätta ett kärl av insamlade vuxna på is och sedan sätta in dem på lövet. Begränsa tiden mellan oviposition och ägg fixering till mer än 60 min, för att säkerställa observationen av spermier övergång till den paternal pronucleus i ägg.
Obs: Äggen tas inte bort från bladet kan födas upp till vuxen ålder spela in adult sex nyckeltal. - Före eller under mjöllus ovipositionen, förbereda ett objektglas genom rengöring med tvål och vatten, torka väl, och sedan sträcker sig en bit paraffin filma över ena änden, att se till att paraffin filma ytan inte bryter (figur 1).
Obs: Paraffin filma är hydrofoba och semi opaque, vilket gör att vätskor att bilda droppar och ägg ses lättare.
2. Dechorionation
- Med ett glas Pasteur Pipettera, tillsätt droppar blekmedel lösning (0,83% natriumhypoklorit) till paraffin filma.
Obs: Det är lättare att hålla koll på ägg om bara 2 – 3 ägg finns i varje droppe. Alternativt, för att hantera ett stort ägg nummer, samla ägg i droppar 1 x fosfatbuffrad saltlösning (PBS).
Varning: Bleach är frätande; Använd handskar vid hantering av blekmedel och andas inte. - Ta bort de vuxna Vita flygare från leaf.
- Placera bladet i Mikroskop för att se äggen tydligt och samla ägg ensamma och försiktigt med en tunn sond. Att göra en sond, infoga en minuten nadel pin på 45° eller på en bekväm arbeta vinkel till en smält pipettspetsen (figur 2).
- Överföra äggen till blekmedel eller 1 x PBS. Om du använder 1 x PBS, ta bort 1 x PBS med ett glas Pasteur Pipettera en gång alla äggen samlas och Lägg sedan till blekmedel till äggen.
Obs: När samla ägg, långsamt lyfta ägget från dess bas tills pedicel tas bort från bladet. Pedicel är klibbig och ägget fastnar ofta till sondens spets tills är det doppas i blekmedel.
Obs: Det rekommenderas att använda separat glas Pasteur-Pipetter för alla reagenser och pipetterna kan ändras med värmen att göra tips smalare och minska risken för misstag aspirera mjöllus ägg. För att förhindra rester och kontaminering, ren pipetterna med avjoniserat vatten efter varje användning. - Vänta i 10 min. Om det finns ett intresse i embryogenes i ägg som är äldre än 1 h, lämna äggen i blekmedel för upp till 15 minuter.
Obs: För ägg som är upp till 1 h gamla, räcker 10 min.
3. fixering
Obs: Dessa steg är tagna från en Hymenopteran protokoll17.
- Ta bort blekmedel (innehållande chorion fragment) med ett glas Pasteur-pipett och kassera den. Tillsätt droppar koncentrerad ättiksyra med ett glas Pasteur Pipettera och vänta 3 min.
Varning: Fortsätt med detta steg under ett dragskåp. Koncentrerad ättiksyra är frätande; Använd handskar när du hanterar isättika och andas inte, speciellt i kombination med kvarstående blekmedel. - Ta bort isättika med ett glas Pasteur-pipett och tillsätt droppar Clarkes lösning (3:1 absolut etanol: isättika) med ett glas Pasteur-pipett. Vänta tills de flesta av lösningen har avdunstat (eller 10 minuter max).
- Tillsätt droppar 70% etanol till ägg med ett glas Pasteur-pipett och vänta tills de flesta av etanolen har avdunstat (eller 10 minuter max).
4. färgning
- Ta bort eventuella kvarvarande etanol med ett glas Pasteur-pipett och tillsätt droppar 1 x PBS till ägg med ett glas Pasteur-pipett att få pH nära 7.0. Ange objektglas i en fuktkammare att förhindra uttorkning, exempelvis i en tom pipett tip box med en våt pappershandduk inuti (figur 3). Vänta minst 30 min.
Obs: Detta är den bästa punkten om en paus behövs, så länge fuktkammare kan förhindra uttorkning. - Ta bort 1 x PBS med ett glas Pasteur-pipett, och tillsätt droppar 0,1 μg/mL DAPI, en DNA fluorescerande fläck, med ett glas Pasteur-pipett. Ange objektglas i en mörk fuktkammare och vänta minst 15 minuter.
Varning: DAPI är irriterande, så hantera det med handskar.
5. tvättning
- Ta bort DAPI med ett glas Pasteur-pipett.
- Tillsätt droppar 1 x TBST (5 x lösning gjorde från 30 g av Tris, 43,8 g NaCl, polysorbat 20 5 mL och 1,0 g NaN3 [pH 7,5] och förde till 1 L med PCR-grade vatten) till ägg med ett glas Pasteur-pipett. Vänta 5 min innan du tar bort 1 x TBST med ett glas Pasteur-pipett. Upprepa detta 2 gånger.
6. montering
- Efter den sista tvättningen, pipett noggrant alla ägg från paraffin filma på en ren del av objektglas. Ta bort överflödigt 1 x TBST; Lägg sedan till 20 µL av montering media (80% glycerol och 20% 1 x TBST med 2% n-propylgallat) och placera en ren cover bild ovanpå äggen.
- För långsiktig lagring, försegla täcker bilden med genomskinligt nagellack och, sedan antingen lagra bilden i mörker vid 2 ° C eller omedelbart visa den under en fluorescerande Mikroskop.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att testa om Rickettsia påverkar befruktning av B. tabaci MEAM1 Honor, vi uppfödda Rickettsia-smittade (R+) eller infekterade (R–) B. tabaci på växter Ögonböna (Vigna unguiculata) i separata burar på 27 ° C, 70% relativ luftfuktighet och en 16 h ljus/8 h mörka fotoperiod. R+ och R– fjärde instar Vita flygare var noggrant avlägsnas från bladen och isolerade i 200 µL remsan rör. När vuxna framkom, de samlades i grupper om 50% kvinnor och överförs till rena blad i petriskålar (n = ~50-100/leaf) i 4 dagar för parning. Grupper av cirka 20 kvinnor och flera hanar överfördes sedan till en ren blad disk (en för R– vuxna, en för R+ vuxna) i 35 mm petriskålar vilar på 1% agar. Petriskål locket hade skurits ut och fint tyg mesh används för inneslutning förhindrade också överflödigt kondens. Efter ca 45 min, alla vuxna togs bort, några av äggen skördats för att fastställa vilken gödsling och äggen som inte samlades har fötts upp till vuxen ålder att beräkna adult sex förhållandet. En kohort för en enda dag, för både R+ och R– Vita flygare, definierades som ett block. Det fanns sju kvarter för beräkning av gödsling skattesatsen eller primära könskvot, medan det fanns sex block för att beräkna adult sex förhållandet, som det fanns inte tillräckligt överblivna ägg från ett kvarter till bakre till vuxen ålder. En generell linjär modell användes i statistiska paketet R för att avgöra huruvida de befruktning priser eller adult sex nyckeltal påverkades betydligt av Rickettsia infektion och/eller blocket. Variablerna svar var andelen befruktade ägg/all ägg, eller andelen kvinnliga vuxna/alla vuxna, respektive, medan förklarande variabler var i block och Rickettsia infektionsstatus.
Ägg dechorionation följt av DAPI nukleär färgning får entydig tilldelning av befruktning (och embryo kön) när observerats med fluorescerande Mikroskop (figur 4). För detta experiment, 90 ägg som lagts av R–B. tabaci MEAM1 kvinnor och 82 ägg av R+B. tabaci MEAM1 honorna var gjorde. När det gäller ägg föds upp till vuxen ålder, var 60 R– och 95 R+ vuxna gjorde. Medan en kvinnlig bias i adult sex nyckeltal har visats konsekvent i tidigare studier15,18,19, i den aktuella studien, vuxen R+ var sex nyckeltal (69% kvinnor, medianålder) kvinna-partisk jämfört med R – Honor (50% kvinnor, medianålder), men de sex nyckeltal i de två behandlingarna var inte signifikant (χ2 = 1,02, df = 1, p = 0,31; (Se figur 5). De primära R– sex nyckeltal (60% befruktade ägg, median) var kvinna-partisk jämfört R+ sex nyckeltal (44% befruktade ägg, median) men var även inte signifikant (χ2 = 0,51, df = 1, p = 0,47), som tillhandahåller nr bevis för större befruktning priser av R+ kvinnor (figur 5). Block också inte hade en betydande effekt på primärt (χ2 = 0,29, df = 1, p = 0,59) eller vuxen (χ2 = 1,20, df = 1, p = 0,27) baserat på kön.
Figur 1: Foto av ett objektglas med paraffin filma och droppar blekmedel. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: ett exempel på en sond, gammaldags med värme, från en pipettspetsen och en minuten nadeln pin. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: ett exempel på en fuktkammare, hederliga från en tom pipett tip box och en våt pappershandduk. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: Fluorescerande mikroskopbilder av B. tabaci ägg. (en) B. tabaci MEAM1 befruktade, begynnande kvinnliga ägget. (b), Unfertilized, begynnande manliga ägg. Äggen var fast på mindre än 1 h efter oviposition och fläckade DAPI. Basen av varje ägg fluorescerande på grund av bakteriell DNA (Portiera, Hamiltonellaoch eventuellt Rickettsia) i cellen bacteriome stamfader, som ingår i den avspända ägg20,21. I varje ägg, de kvinnliga pronucleus är nära centrum av ägget, och i det kvinnliga ägget bara, spermier är synlig som en ljus strimma nära spetsen av ägget nära vad är förmodligen en autofluorescing micropyle. Bilderna är skärmdumpar tagna från en Z-stack genererade video, producerad av en laser skanning confocal inverterade Mikroskop. Skala barerna uppskattades från tidigare mikroskopbilder. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5: Primära och adult sex nyckeltal av Rickettsia-smittade eller infekterade B. tabaci. Box och morrhår tomter av den primära könskvot (procentandel av befruktade ägg eller andelen kvinnliga zygoter) i svart jämfört med vuxna kön förhållandet (andelen vuxna honor) i grått, av den Rickettsia-infekterad (R+) och infekterade (R -) B. tabaci MEAM1, ”MAC1” genetiska linje. Box och morrhår tomter visar medianen som mittlinjen, medelvärdet ett plustecken och övre och nedre kvartiler som vilka rader som ska ändarna på rutan, och spänna representeras i de yttre linjer som sträcker sig från rutan. För R– ägg gjorde: n = 90; för R+ ägg gjorde: n = 82. För R– vuxna räknas: n = 60; för R+ vuxna räknas: n = 95. I en logistisk analys av den primära könskvot (andelen befruktade ägg) utförs i statistiska paketet R, hittades inga signifikanta effekter för block (n = 7, χ2 = 0,29, df = 1, p = 0,59) eller för Rickettsia infektion (χ2 = 0,51, df = 1, p = 0,47). Adult sex nyckeltal, som påverkas av block (n = 6) och Rickettsia infektionsstatus, analyserades på samma sätt. Här också, inga signifikanta effekter hittades för block (χ2 = 1,20, df = 1, p = 0,27) eller för Rickettsia infektion (χ2 = 1,02, df = 1, p = 0,31). Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Detta protokoll är först med att fånga befruktning skattesatsen eller primära könskvot av B. tabaci. Utmaningen med detta protokoll är att den kräver forskare att lära sig hantera mjöllus äggen snabbt, att se till att inte mer än 1 h förflutit sedan äggen var oviposited tills de är fasta. Under preliminära experiment var ägg som fastställdes till 3 h eller mer postoviposition för gammal för att följa befruktning, som syngamy hade inträffat och mitotiska divisioner var pågår. Mellan 1 till 3 h tog pronuclei på en rundare form. Medan tidiga förekomsten av två atomkärnor indikerar ett befruktat ägg, lite senare, apposition av två atomkärnor som förberedelse för syngamycan verkar vara en kärna, och senare igen, de två produkterna i den första mitotiska divisionen finns i både manliga och kvinnliga ägg. Därför skillnaden mellan könen är inte klart vid dessa senare tidpunkter, och vi rekommenderar att begränsa intervallet från ovipositionen till fixering till 1 h som en konservativ åtgärd. Det är också utmanande att lära sig att vara varsam med ägg med varje överföring av vätska så att de inte är oavsiktligt aspirerade i pipetten. Vid tiden för visning äggen under en fluorescerande Mikroskop, kan några av äggen ha brutit under protokollet, så att dessa ägg inte kan könsbestämmas och räknas som pronuclei och äggula kan ha undgått. Annars, när operatören blir bekväm med dessa steg, protokollet kan slutföras bekvämt inom 3 h, eftersom det inte kräver en övernattning fixering steg. Det är också flexibla i att det kan ändras för att färga äldre ägg, för de forskarna som är intresserade av att fånga utveckling.
En tillämpning av detta protokoll omfattar forskning kring sex fördelning. Även om många dussintals studier av mjöllus biologi har rapporterat adult sex nyckeltal i olika miljöer, adult sex nyckeltal förbrylla kön fördelning av mor med sex utvecklingsmässiga dödligheten av nymfer och gör det omöjligt att fastställa orsaken tillst könskvot. Den cytogenetiska teknik som beskrivs här kan möjligheten till förståelse mjöllus kön fördelning mönster mer generellt. Medan de stora spridande populationerna av B. tabaci och andra skadedjur såsom de växthusgaser mjöllus, kan Trialeurodes vaporariorum, förutsägas för att resultera i 1:1 sex nyckeltal, som ofta ställde ut i laboratoriet inställningar22, 23, vi förutspår också att reproduktiva störningar, endosymbionts och potentiellt värd växten kvalitet skulle kunna påverka primära sex nyckeltal. Att dessa samma faktorer kan också påverka dödligheten i sex mönster under utveckling, systematiskt skevning könskvot uppskattningar, understryker behovet av ett direkt mått på den primära könskvot.
Medan kvinnliga bias Rickettsia infektioner med konsekvent har hittats i den genetiska linjen ”MAC1”15,18,19, var adult sex inte signifikant kvinnliga partisk i den aktuella studien. Den primära sex nyckeltal som observerats med Cytogenetik tekniken inte var signifikant partisk antingen. Vi censused de primära och adult sex nyckeltal av B. tabaci Honor på bara 1 dag, i början av en ovipositionen skjutningen, när honorna var 4 till 5 dagar gamla, så de sex nyckeltal studerade inte kan har företrätt de sex nyckeltal som vi observerat över längre perioder. Dock tekniken gjort det möjligt att fastställa befruktning ränta eller primära könskvot och, i detta fall visade en korrespondens mellan de primära och adult sex nyckeltal.
Att fastställa befruktning kan också vara värdefulla i fall där forskare kanske vill avgöra vilken typ av reproduktiv isolering bland mjöllus populationer. Det har varit en fråga om vissa kontroverser12,24,25, det är nu allmänt accepterat att namnet B. tabaci hänvisar till tiotals kryptiska arter, med bevis som tillhandahålls av både genetiska skillnader och Crossing tester där några Honor är producerade12,25. I dessa studier vore det av intresse att veta om isolering inträffar. Överförs spermier, och heterospecific sperma befrukta ägg eller är försök parningar misslyckade? Beträffande bestämning av den primära könskvot, denna teknik kan fastställa huruvida den primära könskvot påverkas av endosymbionts, själviska genetiska element eller en av många andra faktorer, däribland artfränder, konkurrenter, predatorer, parasitoider, patogener, värdväxt eller abiotiska effekter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Denna forskning har finansierats av ett NSF-stipendium (DEB-1020460) att M.S.H. och USDA AFRI bidrag (2010-03752) att M.S.H. Författarna vill tacka Brennan Zehr för färgning mjöllus ägg med mycket skicklighet och Zen. Författarna vill tacka Mike Riehle för att tillåta användning av hans fluorescerande Mikroskop för avbildning. Författarna tackar Suzanne Kelly och Marco Gebiola för ägg bilder. Författarna tackar Suzanne Kelly och Jimmy Conway för att hjälpa på avgörande ögonblick under experimenten.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 1x PBS | Any | ||
| 1x TBST | Any | 5x solution made from 30 g Tris, 43.8 g NaCl, 5 mL Tween-20 and 1.0 g NaN3 pH 7.5, and brought to 1 L with PCR grade water | |
| Bleach | Clorox | Any household bleach will work as long as it can be diluted to 0.83% Sodium hypochlorite | |
| Clear nail polish | Any | ||
| DAPI dilactate | Santa Cruz Biotechnology | sc300415 | |
| Ethanol | Any | Dilute to 70% EtOH | |
| Fluorescent microscope | Nikon | Nikon Eclipse 50i was used in this experiment, but any fluorescent microscope with 340/380 nm excitation filter and at least 4-10x magnification can be used | |
| Glacial acetic acid | Mallinckrodt | UN2789 | |
| Glycerol | Any | ||
| Microscope | Wild | A Wild M5A microscope was used for this experiment, but any microscope where the operator can clearly see the whitefly eggs can be used | |
| Microscope slide covers | Any | Methods are for 18 mm x 18 mm sized slide covers. More mounting media will need to be added for larger slide covers. | |
| Microscope slides | Any | ||
| Minuten nadel pins | BioQuip | 1208SA | Minuten nadel pins are optional for fashioning as probes with pipette tips |
| NaCl | Any | ||
| NaN3 | Any | ||
| n-propyl-gallate | Sigma/Santa Cruz Biotechnology | P3130/sc-250794 | |
| Parafilm | Bemis | ||
| Pasteur pipettes | Fisher Scientific | 13-678-20A | Fisherbrand Disposable Borosilicate glass Pasteur pipettes 5.75 in. A Bunsen burner may also be needed if operator would like to lengthen and narrow pipettes |
| PCR grade water | Any | ||
| Pipette tips | Any | Pipette tips are optional for fashioning as probes with minuten nadel pins | |
| Small dropper bulb | Any | Must fit on Pasteur pipette | |
| Tris | Any | ||
| Tween-20 | Any |
References
- Charnov, E. L. Sex ratio in spatially structured populations. The Theory of Sex Allocation. May, R. M. , Princeton University Press. Princeton, NJ. 67-92 (1982).
- Godfray, H. C. J. Parasitoids: behavioral and evolutionary ecology. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1994).
- Bourke, A. F. G., Franks, N. R. Social Evolution in Ants. , Princeton University Press. Princeton, NJ. (1995).
- Pascal, S., Callejas, C. Intra- and interspecific competition between biotypes B and Q of Bemisia tabaci (Hemiptera: Aleyrodidae) from Spain. Bulletin of Entomological Research. 94 (4), 369-375 (2004).
- Liu, S. -S., et al. Asymmetric mating interactions drive widespread invasion and displacement in a whitefly. Science. 318 (5857), 1769-1772 (2007).
- Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. Mate discrimination in invasive whitefly species. Journal of Insect Behavior. 23 (5), 364-380 (2010).
- Crowder, D. W., Sitvarin, M. I., Carrière, Y. Plasticity in mating behaviour drives asymmetric reproductive interference in whiteflies. Animal Behaviour. 79 (3), 579-587 (2010).
- Tsueda, H., Tsuchida, K. Reproductive differences between Q and B whiteflies, Bemisia tabaci, on three host plants and negative interactions in mixed cohorts. Entomologia Experimentalis et Applicata. 141, 197-207 (2011).
- Wang, P., Crowder, D. W., Liu, S. -S. Roles of mating behavioural interactions and life history traits in the competition between alien and indigenous whiteflies. Bulletin of Entomological Research. 102 (4), 395-405 (2012).
- Sun, D. -B., Li, J., Liu, Y. -Q., Crowder, D. W., Liu, S. -S. Effects of reproductive interference on the competitive displacement between two invasive whiteflies. Bulletin of Entomological Research. 104 (3), 334-346 (2014).
- Liu, S. -S., Colvin, J., De Barro, P. J. Species concepts as applied to the whitefly Bemisia tabaci systematics: how many species are there? Journal of Integrative Agriculture. 11 (2), 176-186 (2012).
- Invasive Species Specialist Group. Global Invasive Species Database. , Available from: http://iucngisd.org/gisd/100_worst.php (2018).
- Gilbertson, R. L., Batuman, O., Webster, C. G., Adkins, S. Role of the insect supervectors Bemisia tabaci and Frankliniella occidentalis in the emergence and global spread of plant viruses. Annual Review of Virology. 2 (1), 67-93 (2015).
- Giorgini, M., et al. Rickettsia symbionts cause parthenogenetic reproduction in the parasitoid wasp Pingala soemius (Hymenoptera: Eulophidae). Applied and Environmental Microbiology. 76 (8), 2589-2599 (2010).
- Himler, A. G., et al. Rapid spread of a bacterial symbiont in an invasive whitefly is driven by fitness benefits and female bias. Science. 332 (6026), 254-256 (2011).
- Cass, B. N., et al. Dynamics of the endosymbiont Rickettsia in an insect pest. Microbial Ecology. 70 (1), 287-297 (2015).
- Vavre, F., de Jong, J. H., Stouthamer, R. Cytogenetic mechanism and genetic consequences of thelytoky in the wasp Trichogramma cacoeciae. Heredity. 93 (6), 592-596 (2004).
- Cass, B. N., et al. Conditional fitness benefits of the Rickettsia bacterial symbiont in an insect pest. Oecologia. 180 (1), 169-179 (2016).
- Hunter, M. S., Asiimwe, P., Himler, A. G., Kelly, S. E. Host nuclear genotype influences phenotype of a conditional mutualist symbiont. Journal of Evolutionary Biology. 30, 141-149 (2017).
- Gottlieb, Y., et al. Inherited intracellular ecosystem: symbiotic bacteria share bacteriocytes in whiteflies. FASEB Journal. 22 (7), 2591-2599 (2008).
- Luan, J., Sun, X., Fei, Z., Douglas, A. E. Maternal inheritance of a single somatic animal cell displayed by the bacteriocyte in the whitefly Bemisia tabaci. Current Biology. 28 (3), 459-465 (2018).
- Guo, J. -Y., Cong, L., Wan, F. -H. Multiple generation effects of high temperature on the development and fecundity of Bemisia tabaci (Gennadius) (Hemiptera: Aleyrodidae) biotype B. Insect Science. 20 (4), 541-549 (2013).
- Cui, X., Wan, F., Xie, M., Liu, T. Effects of heat shock on survival and reproduction of two whitefly species, Trialeurodes vaporariorum and Bemisia tabaci biotype B. Journal of Insect Science. 8 (24), (2008).
- Boykin, L. M. Bemisia tabaci nomenclature: Lessons learned. Pest Management Science. 70 (10), 1454-1459 (2014).
- Qin, L., Pan, L. -L., Liu, S. -S. Further insight into reproductive incompatibility between putative cryptic species of the Bemisia tabaci whitefly complex. Insect Science. 23 (2), 215-224 (2016).
