Summary
Denne protokol beskriver en simpel metode til erhvervelse af ånde prøver fra børn. Kort, prøver af blandede luft er pre koncentreret i sorptionsmiddel rør inden gaskromatografi-massespektrometri analyse. Ånde biomarkører for smitsomme og ikke-smitsomme sygdomme kan identificeres ved hjælp af denne ånde samling metode.
Abstract
Ånde indsamling og analyse kan bruges til at opdage flygtige biomarkører i en række smitsomme og ikke-smitsomme sygdomme som malaria, tuberkulose, lungekræft og leversygdom. Denne protokol beskriver en reproducerbar metode for prøveudtagning ånde hos børn og så stabilisere ånde prøver til yderligere analyse med gaskromatografi-massespektrometri (GC-MS). Målet med denne metode er at etablere en standardiseret protokol til erhvervelse af ånde prøver til yderligere kemisk analyse, fra børn i alderen 4-15 år. Først, ånde er stikprøven ved hjælp af en pap talerør knyttet til en 2-vejs ventil, som er tilsluttet en 3 L taske. Ånde analysander er derefter overført til en termisk desorption tube og opbevares ved 4-5 ° C indtil analyse. Denne teknik har tidligere været anvendt til fange pust af børn med malaria for vellykket ånde biomarkør identifikation. Efterfølgende, har vi med succes anvendt denne teknik til yderligere pediatric kohorter. Fordelen ved denne metode er at det kræver minimal samarbejde på en del af patienten (af ganske særlig værdi i pædiatriske populationer), har en kort samling periode, kræver ikke uddannet personale, og kan udføres med bærbart udstyr i ressource-begrænset Feltindstillinger.
Introduction
Biomarkører kan give værdifulde oplysninger om normale og patologiske biologiske processer, der kan bidrage til klinisk identificerbar sygdom. For nylig har der været stigende interesse for evaluering af ånde flygtige stoffer som biomarkører for en række sygdomstilstande, herunder infektion, metaboliske sygdomme og kræft 1. Udåndede ånde indeholder målbare niveauer af flygtige organiske forbindelser (VOC), semi-flygtige organiske forbindelser og microbially afledt materiale (f.eks. nukleinsyrer fra bakterier og vira). Det centrale mål for udåndede ånde analyse er at få indsigt i status for en medicinsk tilstand og/eller miljømæssige eksponeringer ikke-invasivt. Der er forskellige metoder til indsamling og analyse af udåndede ånde, afhængigt af bestanddelene af interesse. I øjeblikket er der ingen standardiseret udåndede ånde indsamlingsmetode, hvilket komplicerer sammenlignende analyse af resultater på tværs af undersøgelser. Standardisere ånde samling procedurer er væsentlige, som prøveudtagningsproceduren, selv har en betydelig indvirkning på downstream resultaterne af ånde analyser.
I mange undersøgelser er sent respiratorisk ånde prøveudtagning ansat2,3. Denne prøveudtagning indebærer kassere den indledende del af udåndede ånde ("dead space"), for at fange fortrinsvis i luften i slutningen af den ånde cyklus. Fordelen ved denne strategi er at det minimerer niveauer af eksogene VOC (fx miljømæssige VOC), mens berigende for endogene, patient-specifikke VOC. Denne metode omfatter ikke de første par sekunder af udånding fra en individuel før indsamling åndedrag prøve. Andre efterforskere har ansat en tryksensor at aktivere prøveudtagning i en foruddefineret fase af udløb4,5. Fordi tryksensorer kræver komplekst ingeniørarbejde, kræver denne alternative metode en dedikeret og relativt dyre prøveudtagning enhed.
Pediatric ånde prøveudtagning kan være særligt udfordrende. Et hovedanliggende er at unge børn kan være ude af stand til at samarbejde med protokoller for frivillig udånding af luft, "dead space". Af denne grund er det lettere at få blandet respiratorisk ånde fra børn. Dog er en større advarsel med blandet respiratorisk ånde prøver risiko for kontaminering, miljømæssige og materiale. Derfor er muligheden for pediatric samling en drivende bekymring i feltet.
Hertil kommer, at indsamlingsmetoder, kan opbevaring af ånde prøver også påvirke prøve kvalitet. Den høje luftfugtighed i ånde exhalate og ultra-lave koncentrationer (dele pr billioner) af flygtige organiske ånde forbindelser gør ånde prøver særligt modtagelige over for problemer i forbindelse med opbevaring6,7. Trods det store potentiale af real-time teknikker som proton overførsel reaktion-massespektrometri (PTR-MS) fortsat GC-MS guldstandarden til analyse af ånde prøver. Da GC-MS analyse af ånde prøver er en offline teknik, er det kombineret med pre koncentration metoder som termisk desorption (TD) rør, faste fase mikro-udvinding og nål fælde enheder. Før præ koncentration skal ånde prøver gemmes midlertidigt i polymer poser8. Polymer tasker er populære på grund af deres moderat pris, relativt god holdbarhed og genanvendelighed. Mens poser kan genbruges, er tid og kræfter nødvendige for at sikre effektiv rengøring7,8. Hver specifikke taske type kræver også empirisk bestemmes og standardiserede procedurer for kvalitetskontrol, genbrug og nyttiggørelse.
TD rør er almindeligt brugt til ånde pre koncentration fordi de fange et stort antal af flygtige stoffer og kan tilpasses. De absorberende materiale anvendes til pakning TD rør kan tilpasses til særlige anvendelser og særlige mål flygtige stoffer af interesse. TD rør væsentligt forbedre bekvemmeligheden af ånde biomarkør undersøgelser, især i fjerntliggende områder, fordi TD rør sikkert gemme ånde flygtige stoffer i mindst to uger og er nemme at transport3.
I et forsøg på at standardisere pediatric ånde samling for biomarkør opdagelse, beskriver vi her en simpel metode til at indsamle ånde fra småbørn. For at illustrere de repræsentative resultater af de gennemførte protokoller, præsenteres de identificerede data fra en igangværende kohorte af børn (8-17 år) gennemgår evalueringen for ikke-alkoholiske fedtsyre lever sygdom (NAFLD). Fuld resultater og analyse af denne undersøgelse vil blive rapporteret i en senere publikation. I dette arbejde rapportere vi et sub-sæt af data til at dokumentere anvendelsen af vores protokol. Kort sagt, børn bliver bedt om at udånder normalt via talerør i en polymer taske, som om "blæser en ballon." Processen gentages 2 - 4 gange indtil 1 L af ånde er indsamlet. Prøven er derefter overført til en TD tube og opbevares ved 5 ° C inden GC-MS analyse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Undersøgelsen er godkendt af den institutionelle Review Board af Washington University School of Medicine (#201709030). Blev indhentet informeret samtykke fra en forælder eller værge før inklusion i studiet. Fotografier i figur 2 gengives med skriftlig informeret forældresamtykke.
1. ånde sampler forsamling
- Bruger engangshandsker, tillægger en pap talerør ånde sampler, som vist i supplerende figur 1. Vedhæfte en kort længde af stor diameter slangen til anden yderlighed af ånde sampler, som vist i supplerende figur 1. Brug nye slanger for hver patient.
- Tillægge taske ventilen via slangen ånde-stik. Se figur 1 for foto af ånde sampler og taske forbundet.
- Drej den riflede thumbscrew på den side af fjorden montering mod uret hen til låse op ventilen og skubbe taske ventil stilk ned, for at åbne fjorden montering for prøveudtagning.
- Lås ventil åben, ved at dreje den riflede thumbscrew på den side af fjorden montering med uret.
- Bekræfte, at den blå ventil på ånde sampler er åben (parallelt med stikket).
- Skrive patient-ID, dato og klokkeslæt på etiketten af polymer taske.
- Betingelse TD sorptionsmiddel tube før ånde samling ved hjælp af anbefalede procedurer (tilgængelig fra individuelle producenter). Cap og gemme termisk desorption rør på 4-5 ° C før ånde samling at minimere artefakter.
2. åndedræt samling
- Udføre en demonstration af ånde udånding til barnet ved hjælp af en ånde sampler (uden en pose). Forklar barnet at de bør puste ud, ligesom de ville gøre, når "blæser op en ballon" og fortsætte vejrtrækning, som de kan komfortabelt. Sætte pap mundstykket mellem dine læber og udånder så langt som du kan.
- Give barnet med en ny ånde sampler knyttet til en pose og bede dem om at udånder som i demonstrationen, som illustreret i figur 2.
- Lukke den blå ventil på enheden ånde sampler, så snart barnet er færdig udånding. Genåbne ventilen efter behov før yderligere udstødning.
- Gentag trin 2.2 og 2.3 indtil mindst 1 L af ånde er blevet indsamlet. For et sundt barn dette kan tage 2 udstødning, og for en syg eller yngre barn 2 – 4 udstødning. 1 L af ånde er analytisk minimumskravet. Bemærk på etiketten taske hvor mange vejrtrækninger blev indsamlet fra patienten. Se supplerende figur 2 for et foto af pose indeholder forskellige mængder af ånde.
- Før afmontering taske fra ånde sampler, Sørg for at løsne den riflede fingerskrue på den side af fjorden montering ved at dreje det mod uret og skubbe stilken af ventilen op til tæt inlet montering. Se supplerende figur 3 for foto taske ventilen i åben og lukket position.
- Låse taske Ventilen lukkes ved at dreje den riflede thumbscrew på den side af fjorden montering med uret.
- Frigøre taske fra ånde sampler.
- Bortskaffe mundstykket og lægge ånde sampler rengøres før brug med en anden patient.
3. pust overførsel til termisk desorption rør
- Fjerne TD røret fra køleskabet. Fjerne de langsigtede oplagring caps af sorptionsmiddel røret, ved hjælp af værktøjet producent-leverede rør loft over/uncapping.
- Vedhæfte den rillede ende af TD sorptionsmiddel røret til udtagningssaekken ved hjælp af slanger. Bemærk at tube orientering er vigtig, som TD rør er designet til at have luft strømmer i én retning, startende fra den rillede ende. Bemærk, at overførsel af ånde fra taske til TD bør ske inden for 1 time af ånde samling.
- Indsæt anden enden af TD røret ind i slangen, som er forbundet til en pumpe.
- Tænd pumpen og til at køre på 100 mL/min i 10 min.
- Åbne ventilen på tasken ved at dreje mod uret riflede tommeskruen på den side af fjorden montering og skubbe stilken af ventilen til åben inlet montering. Dette er illustreret i supplerende figur 4, som viser ånde overførsel til en TD sorptionsmiddel rør ved hjælp af en pumpe.
- Start pumpen, som vil stoppe efter 10 min af samling.
- Fjerne TD sorptionsmiddel røret og stramme caps på begge ender ved hjælp af værktøjet tube loft over/uncapping. Langsigtede oplagring caps skal strammes kraftigt for at sikre en tætte forsegling.
- Placere en mærkat på slutningen af en fælles landbrugspolitik til at angive rør er blevet brugt. På mærkaten, angive patient undersøgelse identifikation (ID) nummer og dato.
- Placer røret i en lille genlukkelig plasticpose. Butik sorptionsmiddel tube på 4-5 ° C. Tryk resten af ånde ud af posen og kassér taske. Optage patient undersøgelse ID, TD tube serienummer, samling dag, tid af ånde samling, ånde overførsel og fødeindtagelse (tidspunktet for fødeindtagelse før ånde samling og måltider indtages).
4. luftens samling
- Indsamle de omgivende Luftprøver i patientens miljø umiddelbart efter ånde samling.
- Vedhæfte tasken til udgangsporten pumpe ved hjælp af slanger, som illustreret i supplerende figur 5.
- Skubbe stilken af taske ventilen til åben inlet montering for prøveudtagning.
- Lås ventil åben ved at dreje med uret den riflede thumbscrew på den side af fjorden montering.
- Tænd pumpen og til at køre på 100 mL/min i 12 min. Pumpen vil indsamle 1.200 mL luft.
- Efter den ønskede mængde er blevet indsamlet, løsne den riflede fingerskrue på den side af fjorden montering ved at dreje det mod uret og skubbe stilken af ventilen op til tæt inlet montering.
- Låse taske Ventilen lukkes ved at dreje med uret den riflede thumbscrew på den side af fjorden montering.
- Frigøre taske fra pumpen.
- Følg de samme trin som i afsnit 3. Den eneste forskel er at luften VOC vil blive overført, ikke dem fra ånde.
5. prøven og dataanalyse
Bemærk: Betingelserne for analyse af ånde og luft prøver er blevet beskrevet tidligere9.
- Analysere indsamlet data og afsløre forbindelser i kromatogrammer. Bruge typisk software-programmer til at finde og identificere alle forbindelser opdaget af instrument (figur 3A). For eksempel, bruge en deconvolution funktion til at identificere forbindelser. Filtrere data ved hjælp af lagring vindue størrelse faktor 80, masse højder filtre ≥100 tæller, og sammensatte absolut området filter ≥500 tæller.
- Bruge kemiske standarder til identitet forbindelser i ånde og luft prøver. Uddrag base ion topareal af forbindelser af interesse, såsom isopren og β-pinen (figur 4), og sammenligner niveauet af flygtige stoffer i ånde og luft.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I vores undersøgelse, ånde blev prøverne indsamlet fra 10 børn (8-17 år gamle) gennemgår evalueringen på St. Louis children's Hospital. Ånde prøver og omgivende Luftprøver (n = 10) blev indsamlet som beskrevet ovenfor. Prøverne blev analyseret ved hjælp af gaskromatografi Quadrupol time of flight massespektrometri (GC-QToF-MS) og termisk desorption, som tidligere beskrevet9. Efter fjernelse af baggrunden forureninger givet de implementerede protokoller gennemsnitligt 311 flygtige organiske forbindelser (VOC) i hver af de blandede udåndede ånde prøver. I gennemsnit betydeligt mere VOC blev fundet i ånde prøver i forhold til ambient/miljøkontrol (311 ± 11,5 versus 190 ± 12.6, p < 0,0001) (figur 3A). Øget antallet af VOC i ånde, i forhold til luften, er synligt skelnes ved at sammenligne repræsentative samlede ion kromatogrammer (TICs) (figur 3B).
Som en kvalitetskontrol foranstaltning af vellykket ånde samling, var niveauer af to fælles ånde VOC (isopren og β-pinen) i forhold til rum luft kontrol (figur 4). Isopren, en af de mest udbredte VOC i ånde, er normalt findes i dele pr mia (ppb) niveauer (131 ppb) mens β-pinen er fundet i sub-ppb niveauer (0,59 ppb)6. Begge forbindelser er veletableret at være beriget i ånde af raske voksne, i forhold til de lave niveauer til stede i rumluften, hvilket indikerer normale fysiologiske processer som en primær kilde til disse analysander i ånde6. Isopren (m/z 67) blev fundet på opbevaring tid 2,12 min og β-pinen (m/z 93) blev fundet på opbevaring tid 14,4 min. Vi finder, at overfloden af isopren var 10-fold højere i pediatric ånde prøver end i værelse luft kontrol (figur 4; gennemsnitlige overflod ± SEM er 4.2x105 ± 1.0x105 og 3.9x104 ± 0.9x104 ånde og luft henholdsvis p = 0,0003) og β-pinen udstillet 3-fold højere overflod i ånde end luft (betyde overflod ± SEM er 3.0x104 ± 1.3x104 og 9.1x103 ± 1.6x103 for ånde og luft henholdsvis p = 0,007), bekræfter vellykket ånde samling. Fuldt beskrivende analyse af biomarkør discovery resultaterne fra denne undersøgelse vil blive rapporteret i en kommende publikation.
Figur 1: samlet ånde sampler og taske til udåndede ånde samling. Ånde sampler (med blå ventil åben, dvs., parallel med stikket som angivet af den dobbelt-sidet rød pil) og taske forbundet med slanger, klar til ånde samling. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: barn exhaling ånde i en ånde prøvetagningssæk. (A) barn holder ånde sampler, udånder, og (B) giver åndedrag prøve i posen. Fotografere med tilladelse. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: udåndede BreathVolatiles. (A) antallet af forskellige flygtige forbindelser i hvert åndedrag prøve fra pediatric fag (n = 10) og ambient luft kontrol (n = 10). Vises er middel og standard fejl af middelværdien (SEM). (B) samlede ion chromatografen (TIC) repræsentative pediatric ånde prøver versus air control, til visualisering. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: overflod af to udåndede ånde flygtige. Overflod af isopren og β-pinen i ånde prøver fra pediatric fag (n = 10) og værelse luft kontrol (n = 10). Overflod kvantificeres ved topareal base ion. Betyde og SEM er vist. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Supplerende figur 1: ånde sampler. Venstre: A) samlet ånde sampler: 1) hankobling + 2) to-vejs kugleventil stik + 3) Teflon mandlige adapter. B) pap talerør. C) små og store diameter slanger. Højre: ånde sampler med mundstykket og slanger vedlagte. Venligst klik her for at downloade denne fil.
Supplerende figur 2: forskellige ånde diskenheder. Ovenfor er billeder af en prøvetagningssæk fyldt med forskellige mængder af luft (1 L, 2 L og 2,5 L), som en visuel repræsentation af omtrentlige ånde mængder vil blive indsamlet. Venligst klik her for at downloade denne fil.
Supplerende figur 3: ventil på posen. Venstre: stilk af ventilen er ned (taske ventilen er åben). Låse taske Ventilen lukkes ved at dreje med uret den riflede thumbscrew på den side af fjorden montering. Tasken er klar til ånde samling. Højre: stilk af ventilen er op (taske ventilen er lukket). Venligst klik her for at downloade denne fil.
Supplerende figur 4: ånde overførsel. Venstre: sorptionsmiddel tube (1) knyttet til den ene ende af posen ved hjælp af små og store diameter slanger og på anden enden til pumpen. Højre: Bemærk rillede ende på sorptionsmiddel røret; rillede ende skal pege i retning af prøvetagningssækken. Venligst klik her for at downloade denne fil.
Supplerende figur 5: luften samling. Venstre: pumpe med to porte: luftindtag og -udtag. Udgangsporten er knyttet til prøvetagningssækken. Indløbsstuds vil trække luften og overføre det til posen. Højre: luften indsamlingssystemer samles. Venligst klik her for at downloade denne fil.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Trods betydelige fremskridt i ånde forskning i det sidste årti forblive standardiserede metoder til prøveudtagning og analyse af ånde gas flygtige stoffer udefineret10. Den primære årsag til denne mangel på standardisering har været mangfoldigheden af ånde samling metoder, som har direkte indvirkning på den deraf følgende kemiske diversitet i enhver given udåndede åndedrag prøve. Ånde exhalate indeholder et omfattende udvalg af flygtige organiske forbindelser ved meget varieret koncentrationer6. Derfor ændrer ændre indsamlingsmetoder ikke kun overfloden, men også mangfoldigheden af forbindelser, der kan være til stede i en given prøve.
Ånde gas prøveudtagning er overraskende kompleks. Mens fag behøver kun at udånder i talerør for en ånde opkøber eller i en lufttæt beholder inden analyse, ånde prøvetagning skal højde og kontrol for en række potentielle variabler. I dette arbejde detalje vi en specifik, validerede protokol for ånde gas prøveudtagning i børn. Vi har tidligere med succes gennemført denne protokol med febril børn så unge som 4 år, i et felt scenario i en ressource-begrænset indstilling (Malawi), demonstrere mulighederne for vores ånde indsamling og analyse rørledninger til biomarkør Discovery9. Efterfølgende har vi også gennemført og evalueret vores protokoller for indsamling af ånde prøver fra børn under evaluering i en moderne pediatric subspecialty klinik i USA. Vores resultater tyder på, at for opdagelsen af pediatric ånde biomarkører, indsamling af blandet luft er kritisk, da det giver en sand "breathprint" af en given person. Blandet ekspiratorisk ånde er derudover også den enkleste form for ånde, der kan opnås, fordi alle faser af udåndingsluft (mund og næse) er erhvervet3.
I feltet, og især når emner er akut syge, det kan være svært at kontrollere for fælles konfoundere såsom kost, kropstemperatur, og/eller brug af duft eller cremer ved et givet emne. Disse faktorer kan have en dybtgående indvirkning på ånde niveauer og kvalitet. Af denne grund anbefaler vi efterforskere ikke kun registrere tidspunktet for ånde indsamling og overførsel til sorptionsmiddel rør, men Bemærk også yderligere patient-specifikke faktorer som kost (f.eks., 24-timers kosten tilbagekaldelse), brug af mundskyl og medicinforbrug, for at evaluere specifikt for virkninger af disse potentielle konfoundere under biomarkør opdagelse og downstream analyser.
Forbindelser inhaleret fra luften kan også påvirke sammensætningen af udåndede ånde, som kan udgøre en udfordring at ånde biomarkør discovery indsats. Analyse og indsamling af omgivende luft er derfor en kritisk kontrol, giver vigtige indsigter om oprindelsen af udåndede ånde flygtige stoffer. For eksempel, er luften flygtige profiler blevet brugt til at fastslå, om en given ånde flygtige er på højere eller lavere overflod i ånde i forhold til de omgivende luft11. En særlig ånde sammensatte således betragtes som udledes fra inde i kroppen (fx endogen oprindelse), hvis koncentration er højere i vejret end i luften, mens nedsat koncentration i ånde angiver at sammensatte stammer fra miljøet (fx eksogene oprindelse). Sammenligne flygtige overflod i ånde versus luften fungerer også som en vigtig positiv kontrol for om ånde samling er passende. Som påvist i vores repræsentative data (figur 4), den flygtige sammensatte isopren er af endogen oprindelse og bør være til stede i ånde prøver ved koncentrationer > 10 gange af omgivende luft6.
For biomarkør opdagelse, flygtige profiler fra personer med forhold af interesse skal være i forhold til en matchede raske kontrol personer, således at mønstre kan identificeres ved hjælp af statistiske teknikker som maskinen læring og flerdimensional analyser12. Den ånde samling metode beskrives her kan anvendes til en bred vifte af patologiske stater; det eneste krav er, at barnet er i stand til at samarbejde med ånde prøvetagning frivilligt. Fordi alkometertest er non-invasiv, let gentages, og nøje afspejler de arterielle koncentrationer af biologiske stoffer, holder det meget lovende for gennemførelsen i punkt af pleje test til klinisk brug.
Fremtidige arbejde vil fokusere på udvikling af nye metoder til ånde samling i unge spædbørn og børn (< 4 år), der udviklingsmæssigt ikke kan udånder på kommando.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ikke noget at oplyse.
Acknowledgments
Vi udtrykker vores taknemmelighed over for børn og familier af St Louis children's Hospital, der har deltaget i denne undersøgelse. Vi anerkender Ms. Stacy Postma og Ms. Janet Sokolich unikke indsats under samlingen ånde. Dette arbejde støttes af St. Louis children's Hospital Foundation.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breath bag | SKC | 237-03 | These are 3 L bags |
| Cardboard mouthpiece | A-M systems | 161902 | 0.86" OD, 2.00" L |
| Large diameter tubing | Cole Parmer | 95802-11 | Silicone Tubing, 1/4"ID x 5/16"OD, |
| Long-term storage caps | Markes International | C-CF010 | Brass storage cap ¼" & PTFE ferrule, pk 10 |
| Male adapter | Charlotte Pipe | 2109 | Part 1/3 of breath connector (1/2" Universal part No. 436-005) |
| Male adapter (made from Teflon) | In-house built | Part 3/3 of breath connector (1/4" ID x 1/2" MIP). This part was specially machined from rods made from virgin Teflon | |
| Pump | SKC | 220-1000TC-C | Pocket PumpTouch with Charger |
| Small diameter tubing | Supelco | 20533 | Teflon tubing L × O.D. × I.D. 25 ft × 1/4 in. (6.35 mm) × 0.228 in. (5.8 mm) |
| Thermal desorption tubes | Markes International | C2-CAXX-5314 | Tube, inert, TnxTA/Sulficarb, cond/cap, pk 10 |
| Tube capping/uncapping tool | Markes International | C-CPLOK | |
| Two-way ball valve connector | Homewerks Worldwide | VBV-P40-E3B | Part 2/3 of breath connector (1/2") |
References
- Ahmed, W. M., Lawal, O., Nilsen, T. M., Goodacre, R., Fowler, S. J. Exhaled volatile organic compounds of infection: a systematic review. ACS Infectious Diseases. 3 (10), 695-710 (2017).
- Berna, A. Z., et al. Analysis of breath specimens for biomarkers of Plasmodium falciparum infection. Journal of Infectious Diseases. 212 (7), 1120-1128 (2015).
- Lawal, O., Ahmed, W. M., Nijsen, T. M. E., Goodacre, R., Fowler, S. J. Exhaled breath analysis: a review of 'breath-taking' methods for off-line analysis. Metabolomics. 13 (10), (2017).
- Kang, S., Thomas, C. L. P. How long may a breath sample be stored for at-80 degrees C? A study of the stability of volatile organic compounds trapped onto a mixed Tenax:Carbograph trap adsorbent bed from exhaled breath. Journal of Breath Research. 10 (2), (2016).
- Basanta, M., et al. Non-invasive metabolomic analysis of breath using differential mobility spectrometry in patients with chronic obstructive pulmonary disease and healthy smokers. Analyst. 135 (2), 315-320 (2010).
- Mochalski, P., et al. Blood and breath levels of selected volatile organic compounds in healthy volunteers. Analyst. 138 (7), 2134-2145 (2013).
- Mochalski, P., Wzorek, B., Sliwka, I., Amann, A. Suitability of different polymer bags for storage of volatile sulphur compounds relevant to breath analysis. Journal of Chromatography B-Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 877 (3), 189-196 (2009).
- Mochalski, P., King, J., Unterkofler, K., Amann, A. Stability of selected volatile breath constituents in Tedlar, Kynar and Flexfilm sampling bags. Analyst. 138 (5), 1405-1418 (2013).
- Schaber, C., et al. Breathprinting reveals malaria-associated biomarkers and mosquito attractants. Journal of Infectious Diseases. 217 (10), 1553-1560 (2018).
- Herbig, J., Beauchamp, J. Towards standardization in the analysis of breath gas volatiles. Journal of Breath Research. 8 (3), (2014).
- Phillips, M., et al. Variation in volatile organic compounds in the breath of normal humans. Journal of Chromatography B. 729 (1-2), 75-88 (1999).
- Eckel, S. P., Baumbach, J., Hauschild, A. C. On the importance of statistics in breath analysis-hope or curse? Journal of Breath Research. 8 (1), (2014).
