Summary
Det här protokollet beskriver en enkel metod för förvärvet av andedräkt prov från barn. Prover av blandad luft är kort, pre koncentrerade sorbent rör före gaskromatografi-masspektrometri analys. Andedräkt biomarkörer för smittsamma och icke-infektiösa sjukdomar kan identifieras här andedräkt samling metoden.
Abstract
Andedräkt insamling och analys kan användas för att upptäcka flyktiga biomarkörer i ett antal smittsamma och icke-smittsamma sjukdomar, som malaria, tuberkulos, lungcancer och leversjukdom. Det här protokollet beskriver en reproducerbar metod för provtagning andedräkt hos barn och sedan stabilisera andedräkt prover för vidare analys med gaskromatografi-masspektrometri (GC-MS). Målet med denna metod är att införa ett standardiserat protokoll för förvärvet av andetag prover för vidare kemisk analys, från barn i åldrarna 4-15 år. Första samplas andetag med en kartong munstycke bifogas en 2-vägs ventil, som är ansluten till en 3 L påse. Andedräkt analyter sedan överförs till en termisk desorption tube och lagras vid 4-5 ° C fram till analys. Denna teknik har använts tidigare att fånga andan av barn med malaria för framgångsrika andedräkt biomarkör identifiering. Därefter har vi framgångsrikt tillämpat denna teknik till ytterligare pediatric kohorter. Fördelen med denna metod är att den kräver minimal samarbete på delen av patienten (särskilt värde i pediatriska populationer), har en kort kredittid, inte kräver utbildad personal och kan utföras med bärbar utrustning i begränsade resurser Fältinställningar.
Introduction
Biomarkörer kan ge värdefull information om normala och patologiska biologiska processer som kan bidra till kliniskt identifierbar sjukdom. Nyligen har det varit ökande intresse för utvärderingen av andetag flyktiga ämnen som biomarkörer för en mängd olika sjukdomstillstånd, inklusive infektioner, metabola sjukdomar och cancer 1. Utandningsluften innehåller mätbara halter av flyktiga organiska föreningar (VOC), semi flyktiga organiska föreningar och mikrobiellt härlett material (t.ex. nucleic syror från bakterier och virus). Det centrala målet för utandningsluften analys är att få insikt i status av ett medicinskt tillstånd eller miljöexponeringar icke-invasivt. Det finns olika metoder för att samla in och analysera utandningsluften, beroende på beståndsdelarna i intresse. För närvarande finns det ingen standardiserad utandningsluften samling metod, vilket försvårar jämförande analys av resultaten i studier. Standardisera andedräkt samling förfaranden är viktigt, som provtagningsförfarandet själv har en betydande inverkan på de nedströms analysresultat andetag.
I många studier är sena respiratoriska andedräkt provtagning anställd2,3. Denna provtagning innebär att kasta den första delen av utandningsluften (”dead space”), för att företrädesvis fånga luften i slutet av cykelns andetag. Fördelen med denna strategi är att det minimerar nivåerna av exogena VOC (t.ex. miljömässiga VOC), samtidigt berika för endogen, patientspecifika flyktiga organiska föreningar. Denna metod utesluter de första sekunderna av utandning individ innan du samlar in utandningsprov. Andra utredare har anställt en tryckgivare till aktivera provtagning under en fördefinierad fas av utgångsdatum4,5. Eftersom tryckgivare kräver komplexa engineering, kräver alternativa metoden dedikerad och relativt kostsamma provtagningsutrustning.
Pediatric andedräkt provtagning kan vara särskilt utmanande. En nyckelfråga är att små barn kan inte samarbeta med protokoll för frivilliga utandning av ”dead space” luft. Av denna anledning är det lättare att få blandat respiratorisk andetag från barn. En stor varning med blandat respiratorisk andedräkt prover är dock risken för förorening av miljön och materialet. Genomförbarheten av pediatric samling är därför en drivande oro i fältet.
Förutom att metoder för insamling, kan lagring av andetag prover också påverka prov kvalitet. Den höga luftfuktigheten i andetag exhalate och extremt låga koncentrationer (delar per-triljoner) av flyktiga organiska andedräkt föreningar gör andetag prover särskilt känsliga för problem relaterade till lagring6,7. Trots den stora potentialen som realtid tekniker som proton överföring reaktion-masspektrometri (PTR-MS) förblir GC-MS den gyllene standarden för analys av andetag prover. Eftersom GC-MS analys av andetag prover är en offline teknik, är det tillsammans med före koncentrationen metoder såsom termisk desorption (TD) rör, fast fas mikro-extraktion och nål fälla enheter. Före före koncentrationen behöver andetag prover lagras tillfälligt i polymer väskor8. Polymer väskor är populära på grund av deras moderat pris, relativt bra hållbarhet och återanvändbarhet. Medan väskor får återanvändas, är tid och ansträngning skyldiga att säkerställa effektiv rengöring7,8. Varje specifik väska typ kräver också empirically beslutsamt och standardiserade förfaranden för kvalitetskontroll, återanvändning och återvinning.
TD-rör används allmänt för andetag före koncentrationen eftersom de fånga ett stort antal flyktiga ämnen och kan anpassas. Absorberande material som används för att förpacka TD rören kan anpassas till särskilda program och visst mål flyktiga ämnen av intresse. TD rör väsentligen förbättra bekvämligheten av andetag biomarkör studierna, särskilt på remote fältet platser, eftersom TD rör säkert lagra andedräkt flyktiga ämnen i minst två veckor och är lätta att transport3.
I ett försök att standardisera pediatric andedräkt samling biomarkör identifiering, beskriver här vi en enkel metod för att samla in andetag från barn. För att illustrera de representativa resultat av genomförda protokoll, avidentifierade data presenteras från en pågående kohort av barn (8-17 år) som genomgår utvärdering för alkoholfria fettsyra lever sjukdom (NAFLD). Fullständiga resultat och analys av denna studie kommer att redovisas i en senare publikation. I detta arbete rapporterar vi en underuppsättning av data att demonstrera tillämpning av våra protokoll. I korthet, instrueras barnen att andas ut normalt via munstycket till en polymer påse, som om ”blåser en ballong”. Processen upprepas 2 - 4 gånger tills 1 L andedräkt samlas. Provet är sedan överföras till en TD rör och lagras vid 5 ° C före GC-MS analys.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Studien har godkänts av den institutionella i styrelsen av Washington University School of Medicine (#201709030). Informerat samtycke erhölls från en förälder eller vårdnadshavare innan ingå i studien. Fotografier i figur 2 återges med skriftliga informerade föräldramedgivande.
1. andedräkt sampler församling
- Använda engångshandskar, fäst en kartong munstycket andedräkt sampler, som visas i kompletterande figur 1. Bifoga en kort längd på stor diameter slang till den andra ytterligheten av andetag sampler, som kompletterande figur1. Använd nya slangar för varje patient.
- Fäst sändaren andedräkt väska ventilen via slangen. Se figur 1 för foto av andetag sampler och väska ansluten.
- Vrid den räfflade skruven på sidan av inloppet till passande moturs för att låsa upp ventilen och tryck stammen av väska ventilen ner, öppna inlopp passande för provtagning.
- Försäkra dig om ventilen öppen, genom att vrida den räfflade skruven på sidan av inloppet till passande medurs.
- Bekräfta att den blå ventilen på andetag sampler är öppen (parallellt med connector).
- Skriva patient-ID, datum och tid på etiketten av polymer påsen.
- Skick TD sorbent tube före andedräkt samling med rekommenderade förfaranden (tillgänglig från enskilda tillverkare). Förslut och förvara termisk desorption rören vid 4 – 5 ° C före andedräkt samlingen att minimera artefakter.
2. andedräkt samling
- Utföra en demonstration av andetag utandning barnet med en andedräkt sampler (utan en påse). Förklara för barnet att de bör andas ut som de skulle göra när ”blåser upp en ballong” och fortsätta andas ut så långt de kan bekvämt. Lägg kartong munstycket mellan läpparna och andas ut så långt du kan.
- Förse barnet med en ny andedräkt sampler kopplad till en påse och be dem att andas ut i demonstrationen, som illustreras i figur 2.
- Stäng blå ventilen på andetag sampler enheten så snart barnet har slutat andas ut. Öppna ventilen som behövs före ytterligare utandningar.
- Upprepa steg 2.2 och 2.3 tills minst 1 L andfådd har samlats. För ett friskt barn kan detta ta 2 utandningar, och för en sjuk eller yngre barn 2 – 4 utandningar. 1 L andedräkt är lägsta analytiska krav. Obs på påsen märk hur många andetag samlades in från patienten. Se kompletterande figur 2 för ett foto av påsen som innehåller olika volymer av andetag.
- Innan du lossar påsen från andedräkt sampler, se till att lossa räfflade skruven på sidan av inloppet till passande genom att vrida det moturs och driva stammen av ventilen upp till nära inloppet tillbehöret. Se kompletterande figur 3 för foto väska ventilen i öppet och stängt läge.
- Försäkra dig om väska ventilen stängd genom att vrida den räfflade skruven på sidan av inloppet till passande medurs.
- Lossa påsen från andedräkt sampler.
- Förfoga över munstycket och gallrat andedräkt provtagaren för rengöring före användning med en annan patient.
3. andedräkt överföring till termisk desorption rör
- Ta bort TD röret från kylskåpet. Ta bort långsiktig lagring mössor av sorbent röret, med verktyget tillhandahålls av tillverkaren tube tak/avtäckning.
- Fäst den räfflade änden av TD sorbent röret provsäcken med slangar. Observera att tube orientering är viktigt, som TD rören är utformade för att har luft som strömmar i endast en riktning, från den räfflade utgången. Observera att överföringen av andetag från påse till TD bör ske inom 1 timme efter andetag samling.
- Sätt den andra änden av TD röret i slangen, som är kopplad till en pump.
- Starta pumpen och inställd på att köras på 100 mL/min i 10 min.
- Öppna ventilen på påsen genom att vrida moturs räfflade skruven på sidan av inloppet tillbehöret och tryck stammen av ventilen ner till öppna inlopp tillbehöret. Detta illustreras kompletterande figur 4som visar andedräkt överföring till en TD sorbent rör med hjälp av en pump.
- Starta pumpen, som kommer att sluta efter 10 min av samling.
- Ta bort TD sorbent röret och dra åt mössor på båda ändarna med verktyget tube tak/avtäckning. Långsiktig lagring caps måste vara ordentligt åtdragna för att säkerställa en läcka-tät förslutning.
- Placera ett klistermärke på slutet av en cap att indikera röret har använts. På dekalen, ange patientstudien identifiering (ID)-nummer och datum.
- Placera röret i en liten återförslutningsbar plastpåse. Lagra sorbent röret vid 4 – 5 ° C. Tryck på resten av andningen ur påsen och släng påsen. Spela in patientstudien ID, TD tube serienummer, samling dag, andetag insamlingstillfället, tid för andedräkt överföring och födointag (tid för födointag innan andetag samling och måltider konsumeras).
4. luften samling
- Samla in luften proverna i patientens miljö omedelbart efter andan samling.
- Fäst påsen till pumpens utlopp porten med hjälp av slangar, som illustreras i kompletterande figur 5.
- Tryck stammen av väska ventilen ner till öppna inlopp tillbehöret för provtagning.
- Låsa ventilen öppen genom att vrida medsols räfflade skruven på sidan av inloppet tillbehöret.
- Starta pumpen och inställd på att köras på 100 mL/min för 12 min. Pumpen kommer att samla in 1 200 mL av luften.
- Efter den begärda volymen har samlats, lossa räfflade skruven på sidan av inloppet till passande genom att vrida den moturs och driva stammen av ventilen upp till nära inloppet tillbehöret.
- Försäkra dig om väska ventilen stängd genom att vrida medsols räfflade skruven på sidan av inloppet tillbehöret.
- Lossa påsen från pumpen.
- Följ samma steg som i avsnitt 3. Den enda skillnaden är att luften flyktiga organiska föreningar kommer att flyttas, inte dem från andetag.
5. urval och analys av data
Obs: Villkor för analys av andetag och luft prover har tidigare beskrivits9.
- Analysera insamlade data och identifiera föreningar i kromatogrammen. Använda typiska program att hitta och identifiera alla föreningar detekteras av instrumentet (figur 3A). Till exempel använda en avfaltning funktion för att identifiera föreningar. Filtrera data med hjälp av kvarhållande fönster storlek faktor 80, massa höjder filter ≥100 räknas, och sammansatta absoluta området filter ≥500 räknas.
- Använd kemiska standarder för identitet föreningar i andedräkt och luft prover. Extrahera bas ion topparean för föreningar av intresse, såsom isopren och β-pinen (figur 4), och jämför nivåerna av flyktiga ämnen i andedräkt och luft.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I vår studie, andetag prover samlades från 10 barn (8-17 år) som genomgår utvärdering på St. Louis Barnsjukhus. Andedräkt prover och omgivande luftprover (n = 10) har samlats in enligt ovan. Proverna analyserades med hjälp av gaskromatografi quadrupole time-of-flight masspektrometri (GC-QToF-MS) och termisk desorption, som tidigare beskrivits9. Efter avlägsnande av bakgrunden föroreningar gav de genomförda protokoll genomsnitt 311 flyktiga organiska föreningar (VOC) i varje blandade utandningsluften prov. I genomsnitt betydligt mer VOC hittades i andedräkt prov jämfört med omgivande/miljökontroll (311 ± 11,5 kontra 190 ± 12,6, p < 0,0001) (figur 3A). Det ökade antalet VOC i andetag, jämfört med luften, särskiljs synligt genom att jämföra representativa totala ion kromatogram (TICs) (figur 3B).
Som en åtgärd för kvalitetskontroll av framgångsrika andedräkt samling jämfördes nivåerna av två vanliga andetag VOC (isopren och β-pinen) rum luft kontroller (figur 4). Isopren, en av de vanligast förekommande flyktiga organiska föreningar i andetag, finns normalt i delar-per-miljarder (ppb) nivåer (131 ppb) och β-pinen finns i sub-ppb nivåer (0,59 ppb)6. Båda föreningarna är väl etablerade berikas i andetag av friska vuxna, jämfört med de låga nivåerna i rumsluften, vilket indikerar normala fysiologiska processer som en primär källa till dessa analyter i andedräkt6. Isopren (m/z 67) hittades på retention tid 2,12 min och β-pinen (m/z 93) hittades vid lagring tid 14,4 min. Finner vi att överflödet av isopren var 10 gånger högre i pediatric andedräkt prover än i rum luft kontroller (figur 4, betyder överflöd ± SEM är 4.2x105 ± 1.0x105 och 3.9x104 ± 0.9x104 för andedräkt och luft respektive p = 0.0003) och β-pinen uppvisade 3-faldigt högre överflöd i andetag än luft (betyder överflöd ± SEM är 3.0x104 ± 1.3x104 och 9.1x103 ± 1.6x103 för andedräkt och luft respektive p = 0,007), bekräftar framgångsrika andedräkt samling. Full beskrivande analys av biomarkör identifiering resultaten från denna studie kommer att redovisas i en framtida publikation.
Figur 1: samlat andedräkt sampler och väska för utandningsluften samling. Andedräkt sampler (med blå ventil öppen, dvs parallellt med kontakten som indikeras av den dubbelsidiga röda pilen) och väska ansluten med slang, redo för andedräkt samling. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: barn utandning andetag i en andedräkt provsäck. (A) barn innehar andedräkt sampler, andas ut, och (B) ger utandningsprov i påsen. Fotografera med tillstånd. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: utandad BreathVolatiles. (A) antalet distinkta flyktiga föreningar i varje andetag prov från pediatriska försökspersoner (n = 10) och luften kontroller (n = 10). Visas är medel och standardavvikelsen för medelvärdet (SEM). (B) Total jonkromatograf (TIC) av representativa pediatric andedräkt prov kontra luftkontroll, för visualisering. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: överflöd av två utandningsluften flyktiga ämnen. Överflöd av isopren och β-pinen i andetag prover från pediatriska försökspersoner (n = 10) och rum luft kontroller (n = 10). Överflöd kvantifieras av bas ion toppens. Menar och SEM visas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Kompletterande Figur1: andedräkt sampler. Vänster: (A) monterade andedräkt sampler: 1) hane adapter + 2) tvåvägs kulventil connector + 3) Teflon hane adapter. (B) kartong munstycket. (C) små och stor diameter slangar. Rätt: andedräkt sampler med munstycket och slangen ansluten. Vänligen klicka här för att hämta den här filen.
Kompletterande figur 2: olika andedräkt volymer. Ovan är bilder av en provtagningssäck fyllda med olika volymer av luft (1 L, 2 L och 2,5 L), som en visuell representation av ungefärliga andedräkt volymer som ska samlas in. Vänligen klicka här för att hämta den här filen.
Kompletterande figur 3: ventilen på väskan. Vänster: stam av ventilen är nere (väska ventilen är öppen). Försäkra dig om väska ventilen stängd genom att vrida medsols räfflade skruven på sidan av inloppet tillbehöret. Väskan är redo för andedräkt samling. Rätt: stammen av ventilen är upp (väska ventilen är stängd). Vänligen klicka här för att hämta den här filen.
Kompletterande figur 4: andedräkt överföring. Vänster: sorbent tube (1) fäst ena änden av påsen med små och stora diameter slangar och, i andra änden, till pumpen. Rätt: Obs räfflade änden på sorbentens röret; räfflade änden ska peka mot provtagningssäcken. Vänligen klicka här för att hämta den här filen.
Kompletterande figur 5: luften samling. Vänster: pump med två portar: inlopp och utlopp. Utlopp porten är ansluten till provsäcken. Inloppsport kommer att dra luften och överför den till påsen. Rätt: luften insamlingssystem monteras. Vänligen klicka här för att hämta den här filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Trots betydande framsteg i andedräkt forskning det senaste decenniet fortfarande standardiserade metoder för provtagning och analys av andetag gas flyktiga ämnen odefinierad10. En primär anledning till denna brist på standardisering har varit mångfalden av metoder för insamling av andetag, vilket har direkt inverkan på den resulterande kemiska mångfalden i någon given utandningsluften provet. Andetag exhalate innehåller ett omfattande utbud av flyktiga organiska föreningar vid mycket varierande koncentrationer6. Därför förändrar ändrar insamlingsmetoder inte bara överflöd utan också mångfalden av föreningar som kan finnas i ett givet prov.
Andedräkt gas provtagning är förvånansvärt komplex. Medan frågor som bara behöver till att andas in i munstycket på en andedräkt samlare eller i ett gastätt behållare före analys, andetag provtagning måste redovisa och kontroll för ett antal potentiella variabler. I detta arbete detalj vi en specifik, validerade protokoll för andedräkt gas provtagning hos barn. Vi har tidigare framgångsrikt genomfört detta protokoll med febril barn så unga som 4 år, i ett område scenario i en begränsade resurser inställning (Malawi), demonstrera genomförbarheten av våra andetag insamling och analys av rörledningar för biomarkör Discovery9. Därefter har vi också genomfört och utvärderat våra protokoll för andedräkt provtagning från barn under utvärdering i en modern pediatric subspecialty klinik i USA. Våra resultat tyder på att för upptäckten av pediatric andedräkt biomarkörer, insamling av blandad luft är kritisk, eftersom det ger en sann ”breathprint” av en viss individ. Dessutom är blandade exspiratorisk andedräkt också den enklaste typen av andedräkt som kan erhållas, eftersom alla faser av utandningsluften (mun och nasal) är förvärvade3.
I fältet, och speciellt när ämnen är akut sjuk, det kan vara svårt att kontrollera för gemensamma störfaktorer såsom kost, kroppstemperatur eller användning av doft eller krämer av ett visst ämne. Dessa faktorer kan ha en djupgående inverkan på andetag nivåer och kvalitet. Av denna anledning rekommenderar vi att utredarna inte bara spela in tidpunkten för andedräkt insamling och överföring till sorbentens rören, men också notera ytterligare patientspecifika faktorer såsom kost (t.ex. 24-timmars kosten recall), användning av munvatten och medicinering användning, för att utvärdera specifikt för effekterna av dessa potentiella confounders under biomarkör identifiering och nedströms analyser.
Föreningar som inhaleras från den omgivande luften kan också påverka sammansättningen av utandningsluften, som kan innebära en utmaning för andedräkt biomarkör identifiering ansträngningar. Analys och insamling av luften är därför en kritisk kontroll, vilket ger viktiga insikter om beskärningen av utandningsluften flyktiga ämnen. Exempelvis har luften flyktiga profiler använts kan fastställa huruvida en viss andedräkt flyktiga på högre eller lägre överflöd i andetag jämfört med omgivande luft11. En viss andedräkt förening anses således härledas från inne i kroppen (t.ex. endogent ursprung) om koncentrationen är högre i andetag än i luften, medan minskad koncentration i andedräkt indikerar att förening härrör från miljön (t.ex. exogena ursprung). Jämföra flyktiga överflöd i andetag kontra luften fungerar också som en viktig positiv kontroll för huruvida andedräkt samling är tillräcklig. Som visat i vår representativa uppgifter (figur 4), den flyktiga sammansatta isopren av endogent ursprung och bör vara närvarande i andedräkt prover vid koncentrationer > 10 gånger som av omgivande luft6.
Biomarkör identifiering, måste flyktiga profiler från personer med villkor av intresse jämföras med en matchade friska kontroll individer, så att mönstren kan identifieras med hjälp av statistiska metoder såsom maskininlärning och multivariat analyser12. Den andedräkt insamlingsmetod som beskrivs här kan tillämpas på ett brett utbud av patologiska stater; Det enda kravet är att barnet ska kunna samarbeta med andetag provtagning frivilligt. Eftersom utandningsprov är icke-invasiv, enkelt upprepas, och nära speglar arteriell koncentrationerna av biologiska ämnen, rymmer den mycket lovande för genomförandet i point-of-care testning för klinisk användning.
Framtida arbete kommer att fokusera på utveckling av nya metoder för andedräkt samling hos unga spädbarn och barn (< 4 år), som utvecklingsstörda inte kan andas ut på kommando.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har något att avslöja.
Acknowledgments
Vi uttrycker vår tacksamhet till barn och familjer i St Louis Barnens sjukhus som deltagit i denna studie. Vi erkänner Ms. Stacy Postma och Ms. Janet Sokolich unika insatser under samlingen andetag. Detta arbete stöds av St. Louis Children's Hospital Foundation.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Breath bag | SKC | 237-03 | These are 3 L bags |
| Cardboard mouthpiece | A-M systems | 161902 | 0.86" OD, 2.00" L |
| Large diameter tubing | Cole Parmer | 95802-11 | Silicone Tubing, 1/4"ID x 5/16"OD, |
| Long-term storage caps | Markes International | C-CF010 | Brass storage cap ¼" & PTFE ferrule, pk 10 |
| Male adapter | Charlotte Pipe | 2109 | Part 1/3 of breath connector (1/2" Universal part No. 436-005) |
| Male adapter (made from Teflon) | In-house built | Part 3/3 of breath connector (1/4" ID x 1/2" MIP). This part was specially machined from rods made from virgin Teflon | |
| Pump | SKC | 220-1000TC-C | Pocket PumpTouch with Charger |
| Small diameter tubing | Supelco | 20533 | Teflon tubing L × O.D. × I.D. 25 ft × 1/4 in. (6.35 mm) × 0.228 in. (5.8 mm) |
| Thermal desorption tubes | Markes International | C2-CAXX-5314 | Tube, inert, TnxTA/Sulficarb, cond/cap, pk 10 |
| Tube capping/uncapping tool | Markes International | C-CPLOK | |
| Two-way ball valve connector | Homewerks Worldwide | VBV-P40-E3B | Part 2/3 of breath connector (1/2") |
References
- Ahmed, W. M., Lawal, O., Nilsen, T. M., Goodacre, R., Fowler, S. J. Exhaled volatile organic compounds of infection: a systematic review. ACS Infectious Diseases. 3 (10), 695-710 (2017).
- Berna, A. Z., et al. Analysis of breath specimens for biomarkers of Plasmodium falciparum infection. Journal of Infectious Diseases. 212 (7), 1120-1128 (2015).
- Lawal, O., Ahmed, W. M., Nijsen, T. M. E., Goodacre, R., Fowler, S. J. Exhaled breath analysis: a review of 'breath-taking' methods for off-line analysis. Metabolomics. 13 (10), (2017).
- Kang, S., Thomas, C. L. P. How long may a breath sample be stored for at-80 degrees C? A study of the stability of volatile organic compounds trapped onto a mixed Tenax:Carbograph trap adsorbent bed from exhaled breath. Journal of Breath Research. 10 (2), (2016).
- Basanta, M., et al. Non-invasive metabolomic analysis of breath using differential mobility spectrometry in patients with chronic obstructive pulmonary disease and healthy smokers. Analyst. 135 (2), 315-320 (2010).
- Mochalski, P., et al. Blood and breath levels of selected volatile organic compounds in healthy volunteers. Analyst. 138 (7), 2134-2145 (2013).
- Mochalski, P., Wzorek, B., Sliwka, I., Amann, A. Suitability of different polymer bags for storage of volatile sulphur compounds relevant to breath analysis. Journal of Chromatography B-Analytical Technologies in the Biomedical and Life Sciences. 877 (3), 189-196 (2009).
- Mochalski, P., King, J., Unterkofler, K., Amann, A. Stability of selected volatile breath constituents in Tedlar, Kynar and Flexfilm sampling bags. Analyst. 138 (5), 1405-1418 (2013).
- Schaber, C., et al. Breathprinting reveals malaria-associated biomarkers and mosquito attractants. Journal of Infectious Diseases. 217 (10), 1553-1560 (2018).
- Herbig, J., Beauchamp, J. Towards standardization in the analysis of breath gas volatiles. Journal of Breath Research. 8 (3), (2014).
- Phillips, M., et al. Variation in volatile organic compounds in the breath of normal humans. Journal of Chromatography B. 729 (1-2), 75-88 (1999).
- Eckel, S. P., Baumbach, J., Hauschild, A. C. On the importance of statistics in breath analysis-hope or curse? Journal of Breath Research. 8 (1), (2014).
