Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Cancer Research

Tredimensionella ben extracellulärmatrix modell för osteosarkom

Published: April 12, 2019 doi: 10.3791/59271

Summary

Ben extracellulär matrix (BEM) modellen för osteosarkom (OS) är väl etablerade och visas här. Det kan användas som en lämplig byggnadsställning för att härma primär tumör tillväxt i vitro och ge en idealmodell för att studera OS histologisk och cytogenic heterogenitet.

Abstract

Osteosarkom (OS) är den vanligaste och en mycket aggressiv primära ben tumör. Det kännetecknas med anatomiska och histologiska varianter tillsammans med diagnostiska eller prognostiska svårigheter. OS består av genotypically och fenotypiskt heterogena cancerceller. Ben mikromiljö element är visade sig konto för tumör heterogenitet och sjukdom progression. Ben extracellulär matrix (BEM) behåller Mikrostrukturens matriser och biokemiska komponenter av native extracellulär matrix. Denna vävnad-specifika nisch ger en god och långsiktig byggnadsställning för OS cell sådd och spridning. Denna artikel ger ett protokoll för beredning av BEM modell och dess ytterligare experimentella tillämpning. OS celler kan växa och differentieras till flera fenotyper konsekvent med histopatologiska komplexiteten i OS kliniska prover. Modellen kan även visualisering av olika morfologier och deras samband med genetiska förändringar och underliggande regleringsmekanismer. Som homologa till mänskliga OS, kan denna BEM-OS-modell utvecklas och tillämpas på patologi och klinisk forskning av OS.

Introduction

Osteosarkom (OS) uppstår oftast i aktivt växande områden, metaphysis av långa ben, under tonåren. Mer än 80% av OS-drabbade områdena har preferens för metaphysis av proximala tibia och proximala humerus samt både distala och proximala lårbenet, motsvarar placeringen av tillväxten plattan1. OS består av flera cell subtyper med mesenkymala egenskaper och stor mångfald i histologisk funktioner och grade. Bevis stöder mesenkymala stamceller (MSC), osteoblaster engagerade prekursorer och pericyter som cellerna i ursprung2,3,4,5. Dessa celler kan samla genetiska och epigenetiska förändringar och ge upphov till OS under inflytande av vissa ben microenvironmental signaler. Både inre och yttre mekanismer resultera i genomisk instabilitet och heterogenitet i OS, med flera morfologiska och kliniska fenotyper6,7. För individualiserade terapier eller screening av nya droger måste nya modeller genereras till mot heterogenitet eller andra kliniska sjukdomar.

OS är en intra bendefekter maligna solida tumörer. Komplexiteten och aktivitet omgivande närmiljön element ger fenotypiska och funktionella skillnader vid OS celler på olika platser i en tumör. Ben extracellulär matrix (BEM) ger en strukturell och biokemiska byggnadsställning för mineraliska nedfall och benremodellering. Den organiska delen av extracellulär matrix (ECM) består huvudsakligen av typ I kollagen utsöndras av osteoblastiska härstamning celler, medan dess mineraliserade portion består av kalciumfosfat i form av hydroxyapatit8. Den dynamiska rollen som ECM nätverk är att reglera celladhesion, differentiering, överhörning och vävnad fungerar underhåll9.

Avmineraliserat BEM och ECM hydrogeler har använts framgångsrikt i cellodling och kan förbättra cell spridning10,11. Syntetiskt ben-liknande ECM kan reglera poolstorlek, öde beslut och härstamning progression av MSCs12,13,14. Övrigt bevis resultat dess kliniska betydelse för att ge osteogent aktivitet genom att stimulera cellulära processer under ben bildandet och förnyelse15,16,17.

I denna artikel fastställs vår grupp en modifierad modell och gynnsamt alternativ för tredimensionella långtidsodling. OS celler injiceras i den vävnad-derived BEM presenterar en heterogeneously mesenkymala fenotyp lätt jämfört med plast tvådimensionell kulturer. BEM härstammar från platsspecifika homologa vävnad visar dess dramatiska fördel som är en inbyggd nisch för OS celler in vitro- och har stor potential i OS teoretisk och klinisk forskning. Denna kännetecknas BEM-plattform är enkel men effektiv för in vitro- forskning och kan förlängas i modellering flera cancerformer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Djurvård och användning utförs enligt de nationella institut för hälsa Guide för vård och använda av försöksdjur (NIH publikation NO.80-23, reviderad 1996) efter godkännande från djur etik kommittén av Sun Yat-sen University.

1. ben förberedelse

  1. Få 4 till 6 veckor gamla BALB/c-möss (utan sex-specifika krav). Avliva en mus aseptiskt genom cervikal Dislokation och avskurna färska fibula, skenbenet och lårbenet från en bakbenet med sterila kirurgiska saxar. Lossnar epitelvävnad och sedan avlägsna så mycket av den mjuka vävnaden som möjligt med hjälp av sax och pincett.
  2. Skölj de ben ben med steril 10 mM fosfatbuffrad saltlösning (PBS) två gånger för att ta bort blod i en 6 cm skål. Sänk ner benen i 75% etanol för 3 min, skölj sedan med PBS två gånger. Ren ben kan förvaras i en steril 50 mL centrifugrör med steril fosfatbuffrad Koksaltlösning vid-80 ° C i månader tills krävs.
    Obs: PBS används i alla följande steg har 10 mM PO43−.

2. ben demineralization och decellularization

  1. Tina frysta ben i rumstemperatur, och sedan frysa igen vid-80 ° C för 1 h. omfattas ben mer än 2 – 3 frysning-tining cykler för cell lysis och vävnad sammanbrott.
  2. Inkubera ben i ett sterilt 50 mL centrifugrör med 0,5 N HCl över natten i rumstemperatur på en gungande plattform eller orbital shaker med mild gunga/skaka att säkerställa fullständig och jämn täckning av ben.
    Obs: Kontrollera att benen är helt nedsänkta under rörelse i syran och inte nöja sig under processen. Volymen av HCl-lösning bör vara mer än tio gånger som ben.
  3. Efter urkalkning, Dekantera den HCl-lösningen helt och skölj under rinnande vatten för 1 h. Tvätta sedan, ben två gånger för 15 min per tvätt med destillerat vatten på en gungande plattform eller orbital shaker.
    Obs: Se till att helt ta bort den lösningen eller vatten mellan tvättarna och efter den sista tvättningen med destillerat vatten.
  4. Extrahera lipider i avmineraliserat ben med en 1:1 blandning av metanol och kloroform i ett 50 mL centrifugrör lindade med aluminiumfolie för 1 h vid rumstemperatur10.
  5. Sedan, överföring ben till ett annat rör metanol lindade med aluminiumfolie för 30 min. avlägsna metanol helt och skölj med destillerat vatten två gånger under 15 minuter med försiktigt skaka. Dekantera sista tvättvattnet och fortsätt med följande steg under sterilt skick.
    Obs: Under utvinning steg, ljuset måste undvikas för att förhindra kloroform nedbrytning. Blandningen kan lagras i ljus-resistenta behållare eller ett centrifugrör lindade med aluminiumfolie. Utföra all behandling och tvätta stegen under blygsamma rotation eller gungande rörelse.
  6. Skölj benen i en 6 cm skålen med steril fosfatbuffrad Koksaltlösning för 3 min och sedan överföra ben i en ny 50 mL centrifugrör. Tillsätt 40 mL steril 0,05% trypsin-EDTA (TE) i röret och inkubera ben för 23 h i en CO2 inkubator vid 37 ° C18.
  7. Kassera TE lösningen och skölj två gånger med steril fosfatbuffrad Koksaltlösning kompletteras med 90 μg/mL ampicillin och 90 μg/mL kanamycin. Efter dekantering finalen tvätta PBS helt, fylla på med 40 mL steril fosfatbuffrad Koksaltlösning. Tvätta grundligt i 24 h vid rumstemperatur med mild gunga eller skakningar för antibiotika blöta.
    Obs: Alla sterila PBS används i detta och följande steg innehåller 90 μg/mL ampicillin och 90 μg/mL kanamycin. Över natten tvätta under rotation eller gungande rörelse utförs för långa perioder grundlig fördjupning med antibiotika för att uppnå effektiv sterilisering av pore utrymmen.
  8. Ta bort PBS och överföra ben i en färsk 50 mL centrifugrör fylld med steril fosfatbuffrad Koksaltlösning. Det beredda avmineraliserat och cell-lösa ben kallas ben extracellulär matrix (BEM) och kan lagras vid 4 ° C i 2 månader tills krävs.

3. cell sådd och kultur

  1. Ta ut BEM från 4 ° C kylskåp och fördjupa det i 75% etanol för 30 s, skölj sedan med PBS två gånger. Överföra BEM på ren 6-väl cell kultur plåt. Tillsätt 2 mL komplett odlingsmedium (Dulbeccos modifierad örnens medium/F12 (DF12) som innehåller 5% fetalt bovint serum, 90 μg/mL ampicillin och 90 μg/mL kanamycin). Inkubera i BEM övernattning i en CO2 inkubator vid 37 ° C.
  2. Få mänskliga OS cellinjer (MNNG/HOS och MG-63). Avbryta cirka 1,0 x 105 OS celler med 100 μL PBS som innehåller fenolrött som indikator.
    Obs: För att bättre spåra och följa flera lager celler inom tredimensionell BEM modellen, MNNG/HOS och MG-63 är infekterad med lentiviral vector uttrycker fluorescerande mCherry och grönt fluorescerande protein (GFP).
  3. Efter BEM är helt indränkt i mediet, injicera OS celler i BEM från proximala eller distala Epifys när nålen når märghålan Bem. Inkubera OS-BEM modellen i minst 2 h i en fuktad 5% CO2 atmosfär vid 37 ° C att säkerställa injicerade cellerna ordentligt följa BEM.
    Obs: Före varm alla medier används för cellodling. Inkubatorn används för cellodling har en befuktade 5% CO2 atmosfär vid 37 ° C.
  4. Tillsätt 1 mL komplett odlingsmedium i plattan att helt belägga ytan av BEM kulturen över natten i en CO2 inkubator vid 37 ° C.
  5. Försiktigt över den OS-BEM-modellen till en ny brunn 6-well platta med en steril pincett och refeed 1 mL färsk odlingsmedium. Kultur modellen för 14 dagar i en CO2 inkubator vid 37 ° C och uppdatera odlingssubstratet enligt spridning situationen av OS celler.
  6. Håll övervaka medellång färg och cell status i inverterad fluorescens Mikroskop under processen kultur. När OS celler expandera till plåten, försiktigt överföra OS-BEM modellen nya väl med steril pincett.
    Obs: Odlingssubstratet är klarröd vid pH 7.4, som är optimala pH-värdet för mest däggdjur cellodling. Om mediet förvandlas till orange eller även gul, omedelbart uppdatera mediet för att upprätthålla en hälsosam miljö för OS celler.
  7. Överföra den OS-BEM-modellen till en ny brunn med pincett och skölj försiktigt med PBS ta bort odlingssubstratet. Sedan överföra i en 15 mL centrifugrör och fixa med 10% buffrad formalin för histologiska identifiering.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Efter demineralization och decellularization verkar BEM vara genomskinliga med starkare motståndskraft och uthållighet jämfört med infödda mus ben. En liten muskel rester och utrymmet i märghålan kan observeras tydligt (figur 1A, B). För att avgöra den effektiva decellularization Bem, är BEM inbäddade i paraffin efter fixering, och sedan skivad i avsnitten 3 – 5 μm för hematoxylin-eosin (H & E) färgning. Grundlig borttagning av cellkärnor visar ljusa-området imaging. Naturliga porösa struktur och kollagen nätverk arrangemanget är väl underhållen i cell-lösa BEM (figur 1C, D). Dessutom immunhistokemisk (IHC) färgning av dominerande organiska komponenter av benmatrix, såsom kollagen jag och kollagen IV visar inga skador på ECM komponenter i cell-lösa BEM jämfört med infödda benet (figur 1E). BEM ger därför en lämplig och lovande byggnadsställning med utmärkt biokompatibilitet för OS cell sådd och spridning.

MNNG/HOS celler uppvisar en mycket atypisk morfologi med fint vakuoliserade cytoplasman, medan MG-63 celler har fibroblast-liknande spindlar former i enskiktslager kultur (figur 2A, B). Det histologiska avsnittet från en OS-patient visar betydande cellulära pleomorphism med rundade eller månghörniga celler, anisonucleosis och flera mitoser (figur 2C). För att kontrollera livskraft och kvalitet av BEM modellen, är både cellinjer injiceras i märghålan Bem och övervakas via fluorescens imaging under 14-dagars kultur (figur 3A, B). Histologiska sektioner med H & E färgning avslöja att OS celler bifoga till muskel rester och växa i tjocka högar eller följer längs benmatrix och föröka. Både benhinnor och endosteum är infiltrerade av utbyggnaden av OS celler. Påfallande, cell tillväxtmönster av OS-BEM-modellen skiljer sig från tvådimensionella platta kultur. Som illustreras i figur 3C, Visa OS celler på det cell-lösa BEM ytterst heterogen morfologi liknar de cytopathologic funktionerna i en OS-avsnitt. Vissa OS celler att lokalisera i spongiöst ben och medullär hålighet är sfäriska och delvis sprids ut, medan cellerna vilar längs periostet och endosteum är extremt utspridda i långsträckta celler åtföljs av nukleära pleomorphism. Cellernas aktivitet bestäms med hjälp av Ki67 immunfärgning, som också visar stora fördelar i långsiktiga kulturer. OS celler i BEM kultur uttrycker också, mycket ben matrix glykoprotein — utsöndras protein sura och rik på cystein (SPARC/osteonectin) — som är specifik för osteoid matris (figur 3D).

Figure 1
Figur 1 : Strukturella egenskaperna hos mus cell-lösa BEM. (A, B) Översikt över mus infödda (A) och cell-lösa (B) ben. (C, D) Decellularization bedömdes av H & E färgning av mus infödda tibia (C) och cell-lösa ben (D). Atomkärnor som färgas med hematoxylin kunde observeras i native mus tibia, men inte i BEM. (E) IHC färgning för kollagen I och kollagen IV för att upptäcka de viktigaste komponenterna i ECM som finns bevarade i mus tibia efter decellularization. Gul pil pekar ut rikligt kollagen jag inom spongiöst ben och blå pilen pekar ut det rikliga kollagenet IV i kompakt ben. Skala barer = 50 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2 : De cytomorphological egenskaperna hos OS. (A, B) Mänskliga OS cellinjer MNNG/HOS (A) och MG-63 B expanderat i plast kolv kultur. Skalstapeln = 100 μm. (C) histopatologiska avsnitt med H & E färgning av OS patienten. Skalstapeln = 50 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 3
Figur 3 : Karakterisering av OS celler i cell-lösa ben extracellulär matrix modell. (A, B) Representativ mCherry uttryck (röd) bild av MNNG/HOS (A) och god Jordbrukarsed uttryck (grön) bild av MG-63 (B) av fluorescensmikroskopi efter sådd och odling i BEM. Skalstapeln = 100 μm. (C) H & E analys visar typiska morfologi av injicerade MNNG/HOS och MG-63 cellerna efter odling i BEM. (D), IHC analys på Ki67 och SPARC uttryck av MNNG/HOS celler efter odling i BEM modell för 14 dagar. De representativa bilderna finns två uppsättningar av seriell avsnitt fläckade Ki67 och SPARC. Skalstapeln = 50 μm. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Generellt OS kan klassificeras som osteoblastiska, chondroblastic och fibroblastic undertyper beroende på dess dominerande histologisk komponent. Dess prognos beror inte bara på histologiska parametrar utan också på dess anatomiska område. Det kan uppstå inuti benen (i den intramedullära eller intracortical fack), på ytor av ben, och i extraosseous platser19. Uppkomsten och heterogenitet av OS kan belysas som en konjugering av onkogena evenemang och en adekvat microenvironmental boost, följt av ökande utveckling och migration till avlägsna organ20,21,22 ,23. Mysterium under OS evolution kan dechiffreras med en ordentlig modell för att beskriva kliniska inriktning OS miljön och nisch.

Odling på plast rätter eller i kolvarna i vitro kan knappast recapitulate det dynamiska och intrikata biologiska mikromiljö. Stora framsteg i olika prekliniska modeller (t.ex. mus, Zebrafiskar och hund) härma osteosarkom har deklarerats och tillämpas till patogenes utredning och drog utveckling4,24,25, 26 , 27 , 28. forskare har fortfarande, oro för försöksdjur på grund av deras obehag och lidande under experiment. In vitro tredimensionella modeller som vår cell-lösa BEM-modell har fördelen på grund av dess bekvämlighet, snabb operation och kostnadsbesparande; Det ger långsiktiga och enkelt underhåll av viabla celler eller vävnader, och är också närmare infödda biologiska situationen än plast kultur. Det har använts i vår forskning som visar de fenotypiska heterogenitet och reglerande mekanism av OS dedifferentiering med framgång29.

Detta protokoll förtydligas möjligheten för att generera en vävnad-derived BEM från mus och kan användas för vävnader från människa, råtta och hund. De viktigaste stegen för framgångsrik etablering och tillämpning av BEM är: (i) fullständigt avlägsnande av cellfragment; (ii) underhåll av en steril, hälsosam kultur skick. (iii) manuell skicklighet och skonsam pipettering under injektion, överföring och kultur av OS-BEM-modellen.

Andra rapporterade protokoll anställa generellt trycksättning eller en kombination av kemiska och enzymatiska behandlingar, såsom Triton x-100, sodium dodecyl sulfate (SDS) och DNAS/RNase lösning för att uppnå potenta decellularization30,31 . Brosk vävnaden som genomgår decellularization med tvättmedel har visat sig ta bort ECM komponenter inklusive glykosaminoglykaner32. För att sammanfatta en mer intakt BEM i största utsträckning, utförs en måttlig men ändå kraftfull decellularization metoden här för att undvika den upplösning och skador på viktiga komponenter och inhemska arkitekturen av ben miljön.

Det är dock inte att försummas att denna OS-BEM-modell vilade i en platta utan flödande medlet, följaktligen leder till en ojämn fördelning av syre och näringsämnen. Vaskulär nätverk och andra cell undertyper som hjälpa reglera kommunikation och interaktion av microenvironmental signaler och ben homeostas behöver tas i övervägande24, 33,34, 35. förhoppningsvis, denna modell kommer att kombineras med andra högteknologiska ingenjörsteknik att belysa OS forskning och guide precision medicin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna förklarar att de har inga konkurrerande finansiella intressen.

Acknowledgments

Författarna värderar Liuying Chen stöd för hennes administrativt bistånd och lång Zhao för hans utmärkta tekniskt bistånd under byggandet av ben extracellulärmatrix ställningar. Denna studie stöds genom bidrag från National Natural Science Foundation i Kina (31871413).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
15 mL centrifuge tube Greiner 188271
50 mL centrifuge tube Greiner 227270
6 cm cell culture dish Greiner 628160
6-well plate Greiner 657160
Ampicillin Sigma-Aldrich A9393
C57-BL/6J mouse Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center
CO2 incubator SHEL LAB SCO5A
Dibasic sodium phosphate Guangzhou Chemical Reagent Factory BE14-GR-500G
DMEM/F12 Sigma-Aldrich D0547
Fetal bovine serum Hyclone SH30084.03
Hemocytometer BLAU 717805
Kanamycin Sigma-Aldrich PHR1487
MG-63 Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank Human osteosarcoma cell line
MNNG/HOS Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank Human osteosarcoma cell line
Phenol red Sigma-Aldrich P4633 A solution of phenol red is used as a pH indicator: its color exhibits a gradual transition from yellow to red over the pH range 6.6 to 8.0.
Potassium chloride Sangon Biotech A100395
Potassium Phosphate Monobasic Sangon Biotech A501211
Sodium chloride Sangon Biotech A501218

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art. Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).
  2. Mohseny, A. B., et al. Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2. Journal of Pathology. 219, 294-305 (2009).
  3. Mutsaers, A. J., Walkley, C. R. Cells of origin in osteosarcoma: mesenchymal stem cells or osteoblast committed cells. Bone. 62, 56-63 (2014).
  4. Sato, S., et al. Mesenchymal tumors can derive from Ng2/Cspg4-Expressing pericytes with β-Catenin modulating the neoplastic phenotype. Cell Reports. 16, 917-927 (2016).
  5. Patane, S., et al. MET overexpression turns human primary osteoblasts into osteosarcomas. Cancer Research. 66, 4750-4757 (2006).
  6. Poos, K., et al. Genomic heterogeneity of osteosarcoma - shift from single candidates to functional modules. PLoS One. 10, 123082 (2015).
  7. Martin, J. W., Squire, J. A., Zielenska, M. The genetics of osteosarcoma. Sarcoma. 2012, 1-11 (2012).
  8. Alfranca, A., et al. Bone microenvironment signals in osteosarcoma development. Cellular and Molecular Life Sciences. 72, 3097-3113 (2015).
  9. Alford, A. I., Kozloff, K. M., Hankenson, K. D. Extracellular matrix networks in bone remodeling. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 65, 20-31 (2015).
  10. Sawkins, M. J., et al. Hydrogels derived from demineralized and decellularized bone extracellular matrix. Acta Biomaterialia. 9, 7865-7873 (2013).
  11. Alom, N., Peto, H., Kirkham, G. R., Shakesheff, K. M., Bone White, L. J. Bone extracellular matrix hydrogel enhances osteogenic differentiation of C2C12 myoblasts and mouse primary calvarial cells. Journal of Biomedical Materials Research Part B-Applied Biomaterials. 106, 900-908 (2018).
  12. Datta, N., Holtorf, H. L., Sikavitsas, V. I., Jansen, J. A., Mikos, A. G. Effect of bone extracellular matrix synthesized in vitro on the osteoblastic differentiation of marrow stromal cells. Biomaterials. 26, 971-977 (2005).
  13. Rubio, R., et al. Bone environment is essential for osteosarcoma development from transformed mesenchymal stem cells. Stem Cells. 32, 1136-1148 (2014).
  14. Sadr, N., et al. Enhancing the biological performance of synthetic polymeric materials by decoration with engineered, decellularized extracellular matrix. Biomaterials. 33, 5085-5093 (2012).
  15. Gautschi, O. P., Frey, S. P., Zellweger, R. Bone morphogenetic proteins in clinical applications. Anz Journal of Surgery. 77, 626-631 (2007).
  16. Rochet, N., et al. Modification of gene expression induced in human osteogenic and osteosarcoma cells by culture on a biphasic calcium phosphate bone substitute. Bone. 32, 602-610 (2003).
  17. Spang, M. T., Christman, K. L. Extracellular matrix hydrogel therapies: in vivo applications and development. Acta Biomaterialia. 68, 1-14 (2018).
  18. Schenke-Layland, K., et al. Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves. Journal of Structural Biology. 143, 201-208 (2003).
  19. Klein, M. J., Siegal, G. P. Osteosarcoma: anatomic and histologic variants. American Journal of Clinical Pathology. 125, 555-581 (2006).
  20. Lipinski, K. A., et al. Cancer evolution and the limits of predictability in precision cancer medicine. Trends in Cancer. 2, 49-63 (2016).
  21. McGranahan, N., Swanton, C. Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future. Cell. 168, 613-628 (2017).
  22. Brown, H. K., Schiavone, K., Gouin, F., Heymann, M., Heymann, D. Biology of bone sarcomas and new therapeutic developments. Calcified Tissue International. 102, 174-195 (2018).
  23. Abarrategi, A., et al. Osteosarcoma: cells-of-origin, cancer stem cells, and targeted therapies. Stem Cells International. 2016, 1-13 (2016).
  24. Tsukamoto, S., et al. Mesenchymal stem cells promote tumor engraftment and metastatic colonization in rat osteosarcoma model. International Journal of Oncology. 40, 163-169 (2012).
  25. Rodriguez, C. J., et al. Aerosol gemcitabine: preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs. Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 23, 197-206 (2010).
  26. Rodriguez, C. J. Using canine osteosarcoma as a model to assess efficacy of novel therapies: Can old dogs teach us new tricks. Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 237-256 (2014).
  27. Mohseny, A. B., et al. An osteosarcoma zebrafish model implicates Mmp-19 and Ets-1 as well as reduced host immune response in angiogenesis and migration. Journal of Pathology. 227, 245-253 (2012).
  28. Saalfrank, A., et al. A porcine model of osteosarcoma. Oncogenesis. 5, 210 (2016).
  29. Zhang, Y., Pan, Y., Xie, C., Zhang, Y. MiR-34a exerts as a key regulator in the dedifferentiation of osteosarcoma via PAI-1–Sox2 axis. Cell Death & Disease. 9, (2018).
  30. Hashimoto, Y., et al. The effect of decellularized bone/bone marrow produced by high-hydrostatic pressurization on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Biomaterials. 32, 7060-7067 (2011).
  31. Benders, K. E. M., et al. Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration. Trends in Biotechnology. 31, 169-176 (2013).
  32. Grayson, W. L., et al. Effects of initial seeding density and fluid perfusion rate on formation of tissue-engineered bone. Tissue Engineering Part A. 14, 1809-1820 (2008).
  33. Mikulic, D., et al. Tumor angiogenesis and outcome in osteosarcoma. Pediatric Hematology and Oncology. 21, 611-619 (2004).
  34. Ren, K., et al. Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma. Human Pathology. 45, 2120-2129 (2014).
  35. Bonuccelli, G., et al. Role of mesenchymal stem cells in osteosarcoma and metabolic reprogramming of tumor cells. Oncotarget. 5, 7575-7588 (2014).

Tags

Cancerforskning fråga 146 osteosarkom extracellulär matrix ben heterogenitet tredimensionella kultur modellera konstruktion
Tredimensionella ben extracellulärmatrix modell för osteosarkom
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Zhang, Y., Yao, Y., Zhang, Y.More

Zhang, Y., Yao, Y., Zhang, Y. Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma. J. Vis. Exp. (146), e59271, doi:10.3791/59271 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter