Summary
Kemik hücre dışı Matriks (BEM) modeli osteosarkom (OS) için de kurulan ve gösterilen işte. Bu uygun bir iskele birincil tümör büyüme vitro taklit ve OS histolojik ve cytogenic heterojenlik eğitim için ideal bir model sağlamak için kullanılabilir.
Abstract
Osteosarkom (OS) en yaygın ve çok agresif birincil kemik tümörü var. Bu tanılama ya da prognostik zorluklar ile birlikte histolojik ve anatomik varyasyonlar ile karakterizedir. İşletim sistemi genotypically ve phenotypically türdeş olmayan kanser hücreleri oluşur. Kemik microenvironment öğeleri hesabına tümör heterojenite ve hastalık ilerleme için kanıtlanmıştır. Kemik hücre dışı Matriks (BEM) microstructural Matrisler ve biyokimyasal yerel hücre dışı matriks bileşenlerinin korur. Bu doku özel niş bir olumlu ve uzun vadeli iskele OS hücre tohum ve yayılması için sağlar. Bu makalede, BEM modeli ve daha fazla deneysel uygulama hazırlanması için bir iletişim kuralı sağlar. İşletim sistemi hücreleri büyümek ve birden çok fenotipleri OS klinik örneklerin histopatolojik karmaşıklığı ile tutarlı içine ayırt etmek. Model aynı zamanda çeşitli türleri morfoloji ve onların dernek genetik değişiklikler ve temel düzenleyici mekanizmaları ile görselleştirme sağlar. İnsan OS için homolog olarak bu BEM-OS model olabilir geliştirilen ve patoloji ve klinik araştırma OS için uygulanır.
Introduction
Osteosarkom (OS) genellikle alanları, uzun kemikler, metaphysis ergenlik döneminde aktif büyüyen oluşur. OS etkilenen sitelerin % 80'den fazla proksimal tibia ve proksimal humerus hem de büyüme plaka1konumuna karşılık gelen distal ve proksimal femur metaphysis için tercih var. OS Mezenkimal özellikleri ve histolojik özellikleri ve sınıf içinde önemli çeşitlilik ile birden çok hücre alt türlerinden oluşur. Delillerin Mezenkimal Kök hücre (MSCs), dokusunu taahhüt öncüleri ve perisitlerden kökenli2,3,4,5hücreler olarak destekler. Bu hücreler genetik veya epigenetik değişiklikler birikir ve çıkmasına OS için bazı kemik microenvironmental sinyalleri etkisi altında. İçsel ve dışsal mekanizmaları genomik istikrarsızlık ve OS, heterojen birden çok morfolojik ve klinik fenotipleri6,7ile sonuçlanır. Bireyselleştirilmiş tedavi veya yeni uyuşturucu testi ile taranması için roman modelleri heterojenite veya diğer klinik bozukluklar karşı oluşturulması gerekiyor.
İşletim sistemi bir intra kemik Malign solid tümör var. Karmaşıklığı ve microenvironment öğeleri çevresindeki etkinlik fenotipik ve işlevsel farklılıklar üzerine farklı yerlerde tümör hücrelerinde OS görüşmek. Kemik hücre dışı Matriks (BEM) bir yapısal ve biyokimyasal iskele mineral ifade ve kemik remodeling için sağlar. Hücre dışı Matriks (ECM) organik bölümünü esas oluşur türü ben iken, mineralized kısmı Kalsiyum fosfat hidroksiapatit8şeklinde oluşan osteoblastik lineage hücreleri tarafından salgılanan kollajen. ECM ağlar dinamik rolü hücre adezyon düzenlemektir, farklılaşma, çapraz-hadis ve doku bakım9fonksiyonu.
Demineralize BEM ve ECM hydrogels başarılı bir şekilde hücre kültüründe kullanılmıştır ve Hücre proliferasyonu10,11geliştirebilirsiniz. Yapay kemik gibi ECM havuz boyutu, kader karar ve soy ilerleme MSCs12,13,14düzenleyen. Ayrıca, sonuçları Osteojenik etkinlik kemik oluşumu ve rejenerasyon15,16,17sırasında uyarıcı hücresel süreçler tarafından sağlamak için klinik önemini kanıtlar.
Bu makalede, bizim grup değiştirilmiş modeli ve üç boyutlu uzun vadeli kültür için uygun bir alternatif oluşturur. İşletim sistemi hücreleri doku kaynaklı BEM enjekte heterogeneously Mezenkimal fenotip kolayca plastik iki boyutlu kültürleri ile karşılaştırıldığında sunuyoruz. İşletim sistemi yerel bir niş olmak vitro hücreleri ve OS teorik ve klinik araştırmalarda büyük bir potansiyele sahip BEM siteye özgü homolog doku gösterisinden dramatik avantajı elde. Bu karakterize BEM platform basit ama verimli vitro araştırma ve birden fazla kanser modelleme uzatılabilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Hayvan bakım ve kullanım Ulusal Sağlık Rehberi Enstitüleri göre bakım ve kullanmak, laboratuvar hayvanları (NIH yayın NO.80-23, 1996 yılında revize) hayvan Etik Komitesi, Sun Yat-Sen'in Üniversitesi onayını sonra yapılmaktadır.
1. kemik hazırlık
- 4'e 6-hafta-yaşlı BALB/c fare (olmadan seks özel gereksinim) edinin. Bir fare aseptik tarafından servikal çıkığı ötenazi ve taze fibula, tibia ve uyluk bir hindlimb üzerinden steril cerrahi makasla kesti. Epitel doku soyma ve çok yumuşak doku makas ve cımbız kullanarak mümkün olduğunca kaldırın.
- Bacak kemikleri steril 10 mM fosfat tamponlu tuz iki kez kan bir 6 cm tabak içinde kaldırmak için (PBS) ile yıkayın. 3 min için % 75 etanol kemiklerde bırakın sonra PBS ile iki kez durulayın. Temiz kemikler için gerekli kadar ay steril 50 mL santrifüj tüpü-80 ° C'de steril PBS ile saklanabilir.
Not: Aşağıdaki adımlarda kullanılan PBS 10 mM PO43−vardır.
2. kemik Demineralizasyon ve decellularization
- Oda sıcaklığında donmuş kemikleri çözülme ve 1 h. konu için kemikleri için en fazla 2-3 donma-çözülme çevrimleri hücre lizis ve doku dökümünü-80 ° C'de tekrar donmasına.
- 0,5 ile steril 50 mL santrifüj tüpü kemiklerde kuluçkaya N HCl gecede, oda sıcaklığında hafif sallanan/sallayarak ile sallanan bir platform veya orbital shaker üzerinde kemik tam ve hatta kapsama sağlamak için.
Not: kemikler tamamen asit hareket sırasında daldırılır ve işlemi sırasında razı değil emin olun. Birimin HCl bir çözüm olarak bu kemiklerin on katından fazla olmalıdır. - Kalsiyumun sonra tamamen HCl çözüm dikkatle boşaltmak ve durulama 1 h için suyun altına. Sonra kemikler üzerinde sallanan bir platform veya orbital shaker distile su ile yıkama başına 15 dk için iki kere yıkayın.
Not: çözüm veya su yıkama arasında ve son yıkama sonra distile su ile tamamen kaldırdığınızdan emin olun. - Metanol 1:1 karışımı ile demineralize kemik lipidler ve kloroform oda sıcaklığında101 h için kalay folyo ile sarılmış bir 50 mL santrifüj tüp ayıklayın.
- Sonra başka bir tüp ile 30 dakika süreyle kalay folyo sarılı metanol, içine kemik metanol tamamen kaldırmak ve ile durulayın transfer distile su ile hafifçe sallayarak 15dk için iki kez. Son yıkama suyu dikkatle boşaltmak ve steril koşul altında aşağıdaki adımlarla devam edin.
Not: ayıklama adımı sırasında ışık kloroform ayrışma önlemek için kaçınılması gerekir. Karışımı ışık dayanıklı kap içinde saklanabilir veya kalay folyo ile bir santrifüj tüpü sarılmış. Tüm tedavi gerçekleştirmek ve adımları mütevazı döndürme veya hareket sallanan altında yıkayın. - 3 min için steril PBS ile 6 cm çanak kemikleri durulayın ve sonra yeni bir 50 mL santrifüj tüpüne kemikleri aktarın. 40 mL steril % 0.05 tripsin-EDTA (TE) tüpün içine ekleyin ve kemikleri CO2 kuluçka 37 ° C1823 h için kuluçkaya.
- TE çözüm atın ve iki kez 90 μg/mL Ampisilin ve 90 μg/mL sefaloridin ile steril PBS ile durulayın. Son decanting sonra PBS tamamen yıka, 40 mL steril PBS ile doldurmak. 24 saat oda sıcaklığında hafif sallanan veya antibiyotik ıslatmak sallayarak için iyice yıkayın.
Not: Bu ve aşağıdaki adımları kullanılan steril PBS 90 μg/mL Ampisilin ve 90 μg/mL sefaloridin içerir. Gece yıkama döndürme veya hareket sallanan altında uzun süre antibiyotik etkili sterilizasyon gözenek mekanların ulaşmak için kapsamlı daldırma yapılma. - Ve steril PBS ile dolu bir taze 50 mL santrifüj tüpü içine kemikleri transfer PBS çıkarın. Hazırlanan demineralize ve decellularized kemik kemik hücre dışı Matriks (BEM) olarak adlandırılır ve 4 ° C'de 2 gerekli kadar ay saklanabilir okunur.
3. hücre tohum ve kültür
- BEM 4 ° C buzdolabından alın ve o % 75 etanol 30 s sonra PBS ile durulama için iki kez bırakın. BEM temiz 6-şey hücre kültür plaka üzerine aktarın. 2 mL tam kültür orta (Dulbecco'nın kartal orta/F12 (DF12) % 5 fetal sığır serum, 90 μg/mL Ampisilin ve 90 μg/mL sefaloridin içeren değiştirilmiş) ekleyin. BEM CO2 kuluçka 37 ° C'de geceleme kuluçkaya
- İnsan OS hücre hatları (MNNG/HOS ve MG-63) edinin. Yaklaşık 1.0 x 105 işletim sistemi hücreleri içeren fenol red göstergesi olarak 100 μL PBS ile askıya alma.
Not: daha iyi izlemek ve çok katmanlı hücreleri üç boyutlu BEM modeli içinde gözlemlemek için MNNG/HOS ve MG-63 lentiviral vektör floresan mCherry ve yeşil flüoresan protein (GFP) ifade ile bulaşmış. - BEM tam ortamda batırılmış sonra iğne BEM medüller boşluğuna eriştiğinde OS hücreleri distal veya proksimal epifiz BEM enjekte. OS-BEM modeli en az oksijen %5 2 h kuluçkaya CO2 atmosfer 37 ° C'de enjekte hücreleri sıkıca bağlı BEM için emin olmak için.
Not: hücre kültürü için kullanılan tüm medya önceden ısıtmak. Hücre kültürü için kullanılan kuluçka bir oksijen vardır % 5 CO2 atmosfer 37 ° C'de - 1 mL tam kültür orta tamamen BEM kültüründe gecede CO2 kuluçka 37 ° C'de yüzey kat için plaka içine ekleme
- Transfer OS-BEM modeli 6-şey plaka refeed 1 mL taze kültür orta bir steril cımbız ile yeni bir kuyuya yavaşça. Model 37 ° C'de CO2 kuluçka 14 gün boyunca kültür ve işletim sistemi hücrelerinin proliferasyonu duruma göre kültür orta yenileyin.
- Orta renk ve hücre durumu ters floresan mikroskop altında kültür işlemi sırasında izleme tutmak. Yavaşça OS hücreleri plakasına genişlettiğinizde, OS-BEM modeli de steril cımbız ile yeni diğerine aktarın.
Not: Kültür orta pH 7.4, parlak kırmızı olan en memeli hücre kültürü için optimum pH değeri olmasıdır. Orta turuncu ya da sarı dönüşürse, hemen OS hücreler için sağlıklı bir ortam sağlamak için orta yenilemek. - OS-BEM modeli yeni bir kuyuya cımbızla aktarmak ve yavaşça kültür orta kaldırmak için PBS ile durulayın. Sonra bir 15 mL santrifüj tüpüne aktarmak ve histolojik tanımlama için arabelleğe alınan % 10 formalin ile düzeltmek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Demineralizasyon ve decellularization sonra BEM daha güçlü esneklik ve yerel fare kemiğe göre azim ile yarı saydam olarak düşünülür. Küçük kas kalıntı ve medüller kavite boşluk (şekil 1A, B) açıkça görülebilmektedir. BEM etkili decellularization belirlemek için BEM fiksasyon sonra parafin içinde gömülü olup Hematoksilen-Eozin (H & E) boyama için 3-5 mikron bölümlere dilimlenmiş. Hücre çekirdeği ayrıntılı kaldırılması parlak alan görüntüleme tarafından gösterilir. Doğal gözenekli yapısı ve kollajen ağ düzenlemesi decellularized BEM (şekil 1C, D) de tutulur. Ayrıca, ben ve kollajen IV ECM bileşenlerinde üzerinde hiçbir zarar göstermek kollajen gibi kemik matrisi baskın organik bileşenlerinin immunohistokimyasal (IHC) Boyama BEM (şekil 1E) yerel kemiğe göre decellularized. Bu nedenle, BEM büyük Biyouyumluluk OS hücre tohum ve yayılması için uygun ve gelecek vaat eden bir iskele sağlar.
MG-63 hücreleri monolayer kültür (Şekil 2A, B) fibroblast benzeri milli tezgahlar şekiller varken MNNG/HOS hücreleri ince vacuolated sitoplazma ile son derece atipik bir Morfoloji sergi. Bir işletim sistemi hasta histolojik bölümünden önemli hücresel pleomorphism yuvarlak veya çokgen hücreleri, anisonucleosis ve birden çok mitoses (Şekil 2C) ile görüntüler. Canlılık ve BEM modelinin kalitesini doğrulamak için her iki hücre hatları BEM medüller boşluğuna enjekte ve floresan görüntüleme sırasında 14 günlük kültür (şekil 3A, B) üzerinden izlenir. H & E boyama ile histolojik kesitler OS hücreleri kas kalıntıları ekleyin ve kalın kazık büyümek veya Kemik Matriks uygun ve çoğalırlar olduğunu ortaya koyuyor. Kapaklarini ve endosteum işletim sistemi hücrelerinin genişleme sızmış. Çarpıcı, hücre büyüme kalıpları OS-BEM modelinin iki boyutlu plaka kültüründen farklı. Şekil 3' teCgösterildiği, işletim sistemi hücreleri decellularized BEM üzerinde son derece heterojen Morfoloji bir işletim sistemi bölümünün sitopatolojik özelliklerine benzer gösterir. Süngerimsi Kemik ve medüller boşluğu bulmak bazı OS hücreler küresel ve kısmen yaymak dışarı, oysa kapaklarini ve endosteum dinlenme hücreleri son derece uzun hücreleri tarafından nükleer pleomorphism eşliğinde içine dağılmış. Hücre etkinliği büyük avantajlar uzun vadeli kültürlerde tudziez Ki67 immunostaining kullanılarak belirlenir. Ayrıca, işletim sistemi hücreleri BEM kültür ifade son derece kemik matrisi glikoprotein — salgılanan protein asidik ve sistein (SPARC/osteonectin) zengin — osteoid matris (şekil 3D) belirli olduğu.
Resim 1 : Fare yapısal özelliklerine BEM decellularized. (A, B) Fare yerli (A) ve decellularized (B) kemik genel bakış. (C, D) Decellularization H & fare yerli tibia (C) Boyama ve kemik (D) decellularized E tarafından değerlendirildi. Hematoksilen ile lekeli çekirdeği yerli fare tibia ama BEM gözlenen. (E) IHC boyama için kollajen kollajen IV ve ben decellularization sonra fare tibia ECM korunur ana bileşenleri algılamaya. Sarı ok işaret bol miktarda kolajen ben Süngerimsi Kemik ve kompakt kemik içinde bol kollajen IV mavi ok işaret içinde. Ölçek çubukları 50 mikron =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Resim 2 : OS cytomorphological özelliklerinin. (A, B) İnsan OS MNNG/HOS (A) ve MG-63 (B) plastik şişeye kültüründe genişletilmiş satırları hücre. Ölçek çubuğu 100 mikron =. (C) histopatolojik bölümü H & E OS hastam boyama ile. Ölçek çubuğu 50 mikron =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Şekil 3 : OS karakterizasyonu hücreleri decellularized kemik hücre dışı matriks modeli. (A, B) Temsilcisi mCherry MNNG/HOS (A) ve GFP ifade (yeşil) görüntünün MG-63 (B) sonra tohum ve BEM içinde kültür Floresans mikroskobu tarafından görüntü ifade (kırmızı). Ölçek çubuğu 100 mikron =. (C) H & E analiz enjekte MNNG/HOS ve MG-63 hücrelerinin tipik Morfoloji BEM içinde kültür sonra gösterilen. BEM modelde 14 gün boyunca kültür sonra MNNG/HOS hücre Ki67 ve SPARC ifade düzeyinde (D) IHC çözümleme. İki seri bölümler Ki67 ve SPARC ile lekeli temsilcisi görüntülerdir. Ölçek çubuğu 50 mikron =. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Genel olarak, işletim sistemi olarak osteoblastik sınıflandırılabilir, chondroblastic ve fibroblastic alt türlerinden bağlı olarak kendi baskın histolojik bileşeni. Onun prognoz sadece ama aynı zamanda anatomik kendi sitesindeki histolojik parametreleri bağlıdır. Kemik ve extraosseous siteleri19yüzeylerde (intramedüller veya intracortical bölme), kemikleri içinde ortaya çıkabilir. Ortaya çıkması ve OS heterojen bir fiil oncogenic olaylar ve uzak organlara20,21' e,22 ardından artan geliştirme ve geçiş yeterli bir microenvironmental artırmak olarak aydınlatılmamıştır ,23. Gizem OS evrim sırasında klinik etkileri OS çevre ve niş hedeflemesi anahat için uygun bir model deşifre.
Ekimi plastik yemekleri veya şişeler vitro pek dinamik ve karmaşık biyolojik microenvironment özetlemek. Büyük adımlar çeşitli önceden klinik modeller (örneğin, fare, Zebra balığı ve köpek) osteosarkom taklit edilmiş ilan ve Patogenez araştırma ve ilaç geliştirme4,24,-25, uygulanan 26 , 27 , 28., araştırmacılar için deneysel hayvan deneyleri sırasında acı ve rahatsızlık nedeniyle endişe ortadan kalkmadı. Avantaj kolaylık, hızlı çalışma ve maliyet tasarrufu nedeniyle decellularized BEM modelimiz var gibi vitro üç boyutlu modeller; hücrelerin veya doku uzun vadeli ve kolay bakım sağlar ve aynı zamanda plastik kültür doğal biyolojik durumuna daha yakındır. Fenotipik heterojenite ve OS dedifferentiation başarı29ile düzenleyici mekanizma gösteren bizim araştırma kullanılmıştır.
Bu iletişim kuralı bir doku kaynaklı BEM fareden oluşturmak için fizibilite açıklık ve insan dokulardan, sıçan ve köpek için kullanılabilir. Başarılı kuruluş ve BEM uygulanması için en önemli adım vardır: (i) hücre artıkları; kaldırmayı tamamlamak (ii) steril, sağlıklı kültür durumu bakımından; (iii) el becerisi ve yumuşak enjeksiyon, transfer ve kültür OS-BEM modelinin sırasında pipetting.
Bildirilen diğer iletişim kuralları genellikle basınçlandırma veya kimyasal ve enzimatik tedaviler, Triton X-100, Sodyum Lauryl Sülfat (SDS) ve Dnaz/RNase çözüm güçlü decellularization30,31 elde etmek gibi bir arada istihdam . Deterjanlar ile decellularization uğrar kıkırdak doku glikozaminoglikan32de dahil olmak üzere ECM bileşenleri kaldırmak için gösterilmiştir. Ilımlı ama güçlü decellularization yöntemi en geniş daha sağlam bir BEM özetlemek için burada dağılması ve anahtar bileşenlerin hasar ve kemik ortamının yerel mimari önlemek için gerçekleştirilir.
Ancak, bu işletim sistemi-BEM model olmadan akan orta, sonuç olarak düzensiz dağılımı oksijen ve besin için önde gelen bir tabak içinde dinlenmiş ihmal değil öyle. Vasküler ağ ve iletişim ve etkileşim microenvironmental sinyallerin düzenleyen ve homeostasis kemik diğer hücre alt türlerini dikkate24, 33,34, alınması gereken 35. umut verici bir biçimde, bu model OS araştırma ve Kılavuzu hassas tıp ışık için diğer yüksek teknoloji mühendislik teknikleri ile birleştirilebilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar onlar rakip hiçbir mali çıkarları var bildirin.
Acknowledgments
Yazarlar destek Liuying Chen için onun yönetim yardım ve uzun Zhao kemik hücre dışı matriks iskele inşaatı sırasında onun mükemmel teknik destek için değer. Bu çalışmada hibe Ulusal doğal Bilim Vakfı, Çin'den (31871413) tarafından desteklenmektedir.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 15 mL centrifuge tube | Greiner | 188271 | |
| 50 mL centrifuge tube | Greiner | 227270 | |
| 6 cm cell culture dish | Greiner | 628160 | |
| 6-well plate | Greiner | 657160 | |
| Ampicillin | Sigma-Aldrich | A9393 | |
| C57-BL/6J mouse | Sun Yat-sen University Laboratory Animal Center | ||
| CO2 incubator | SHEL LAB | SCO5A | |
| Dibasic sodium phosphate | Guangzhou Chemical Reagent Factory | BE14-GR-500G | |
| DMEM/F12 | Sigma-Aldrich | D0547 | |
| Fetal bovine serum | Hyclone | SH30084.03 | |
| Hemocytometer | BLAU | 717805 | |
| Kanamycin | Sigma-Aldrich | PHR1487 | |
| MG-63 | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
| MNNG/HOS | Chinese Academy of Science, Shanghai Cell Bank | Human osteosarcoma cell line | |
| Phenol red | Sigma-Aldrich | P4633 | A solution of phenol red is used as a pH indicator: its color exhibits a gradual transition from yellow to red over the pH range 6.6 to 8.0. |
| Potassium chloride | Sangon Biotech | A100395 | |
| Potassium Phosphate Monobasic | Sangon Biotech | A501211 | |
| Sodium chloride | Sangon Biotech | A501218 |
References
- Longhi, A., Errani, C., De Paolis, M., Mercuri, M., Bacci, G. Primary bone osteosarcoma in the pediatric age: State of the art. Cancer Treatment Reviews. 32, 423-436 (2006).
- Mohseny, A. B., et al. Osteosarcoma originates from mesenchymal stem cells in consequence of aneuploidization and genomic loss of Cdkn2. Journal of Pathology. 219, 294-305 (2009).
- Mutsaers, A. J., Walkley, C. R. Cells of origin in osteosarcoma: mesenchymal stem cells or osteoblast committed cells. Bone. 62, 56-63 (2014).
- Sato, S., et al. Mesenchymal tumors can derive from Ng2/Cspg4-Expressing pericytes with β-Catenin modulating the neoplastic phenotype. Cell Reports. 16, 917-927 (2016).
- Patane, S., et al. MET overexpression turns human primary osteoblasts into osteosarcomas. Cancer Research. 66, 4750-4757 (2006).
- Poos, K., et al. Genomic heterogeneity of osteosarcoma - shift from single candidates to functional modules. PLoS One. 10, 123082 (2015).
- Martin, J. W., Squire, J. A., Zielenska, M. The genetics of osteosarcoma. Sarcoma. 2012, 1-11 (2012).
- Alfranca, A., et al. Bone microenvironment signals in osteosarcoma development. Cellular and Molecular Life Sciences. 72, 3097-3113 (2015).
- Alford, A. I., Kozloff, K. M., Hankenson, K. D. Extracellular matrix networks in bone remodeling. The International Journal of Biochemistry & Cell Biology. 65, 20-31 (2015).
- Sawkins, M. J., et al. Hydrogels derived from demineralized and decellularized bone extracellular matrix. Acta Biomaterialia. 9, 7865-7873 (2013).
- Alom, N., Peto, H., Kirkham, G. R., Shakesheff, K. M., Bone White, L. J. Bone extracellular matrix hydrogel enhances osteogenic differentiation of C2C12 myoblasts and mouse primary calvarial cells. Journal of Biomedical Materials Research Part B-Applied Biomaterials. 106, 900-908 (2018).
- Datta, N., Holtorf, H. L., Sikavitsas, V. I., Jansen, J. A., Mikos, A. G. Effect of bone extracellular matrix synthesized in vitro on the osteoblastic differentiation of marrow stromal cells. Biomaterials. 26, 971-977 (2005).
- Rubio, R., et al. Bone environment is essential for osteosarcoma development from transformed mesenchymal stem cells. Stem Cells. 32, 1136-1148 (2014).
- Sadr, N., et al. Enhancing the biological performance of synthetic polymeric materials by decoration with engineered, decellularized extracellular matrix. Biomaterials. 33, 5085-5093 (2012).
- Gautschi, O. P., Frey, S. P., Zellweger, R. Bone morphogenetic proteins in clinical applications. Anz Journal of Surgery. 77, 626-631 (2007).
- Rochet, N., et al. Modification of gene expression induced in human osteogenic and osteosarcoma cells by culture on a biphasic calcium phosphate bone substitute. Bone. 32, 602-610 (2003).
- Spang, M. T., Christman, K. L. Extracellular matrix hydrogel therapies: in vivo applications and development. Acta Biomaterialia. 68, 1-14 (2018).
- Schenke-Layland, K., et al. Impact of decellularization of xenogeneic tissue on extracellular matrix integrity for tissue engineering of heart valves. Journal of Structural Biology. 143, 201-208 (2003).
- Klein, M. J., Siegal, G. P. Osteosarcoma: anatomic and histologic variants. American Journal of Clinical Pathology. 125, 555-581 (2006).
- Lipinski, K. A., et al. Cancer evolution and the limits of predictability in precision cancer medicine. Trends in Cancer. 2, 49-63 (2016).
- McGranahan, N., Swanton, C. Clonal heterogeneity and tumor evolution: past, present, and the future. Cell. 168, 613-628 (2017).
- Brown, H. K., Schiavone, K., Gouin, F., Heymann, M., Heymann, D. Biology of bone sarcomas and new therapeutic developments. Calcified Tissue International. 102, 174-195 (2018).
- Abarrategi, A., et al. Osteosarcoma: cells-of-origin, cancer stem cells, and targeted therapies. Stem Cells International. 2016, 1-13 (2016).
- Tsukamoto, S., et al. Mesenchymal stem cells promote tumor engraftment and metastatic colonization in rat osteosarcoma model. International Journal of Oncology. 40, 163-169 (2012).
- Rodriguez, C. J., et al. Aerosol gemcitabine: preclinical safety and in vivo antitumor activity in osteosarcoma-bearing dogs. Journal of Aerosol Medicine and Pulmonary Drug Delivery. 23, 197-206 (2010).
- Rodriguez, C. J. Using canine osteosarcoma as a model to assess efficacy of novel therapies: Can old dogs teach us new tricks. Advances in Experimental Medicine and Biology. 804, 237-256 (2014).
- Mohseny, A. B., et al. An osteosarcoma zebrafish model implicates Mmp-19 and Ets-1 as well as reduced host immune response in angiogenesis and migration. Journal of Pathology. 227, 245-253 (2012).
- Saalfrank, A., et al. A porcine model of osteosarcoma. Oncogenesis. 5, 210 (2016).
- Zhang, Y., Pan, Y., Xie, C., Zhang, Y. MiR-34a exerts as a key regulator in the dedifferentiation of osteosarcoma via PAI-1–Sox2 axis. Cell Death & Disease. 9, (2018).
- Hashimoto, Y., et al. The effect of decellularized bone/bone marrow produced by high-hydrostatic pressurization on the osteogenic differentiation of mesenchymal stem cells. Biomaterials. 32, 7060-7067 (2011).
- Benders, K. E. M., et al. Extracellular matrix scaffolds for cartilage and bone regeneration. Trends in Biotechnology. 31, 169-176 (2013).
- Grayson, W. L., et al. Effects of initial seeding density and fluid perfusion rate on formation of tissue-engineered bone. Tissue Engineering Part A. 14, 1809-1820 (2008).
- Mikulic, D., et al. Tumor angiogenesis and outcome in osteosarcoma. Pediatric Hematology and Oncology. 21, 611-619 (2004).
- Ren, K., et al. Vasculogenic mimicry: a new prognostic sign of human osteosarcoma. Human Pathology. 45, 2120-2129 (2014).
- Bonuccelli, G., et al. Role of mesenchymal stem cells in osteosarcoma and metabolic reprogramming of tumor cells. Oncotarget. 5, 7575-7588 (2014).
