Medicine

עבודה חדשה מומלצת עבור אימות זריקות וריד הזנב עכברוש עם סוכנים ליד אינפרא אדום-שכותרתו

Published: April 19, 2019 doi: 10.3791/59295

Muzamil Saleem*^1,2,3, Andrea M. Stevens*^1,2,3, Brooke Deal^1,2,3, Lu Liu^3,4, Jelena Janjic^3,4, John A. Pollock^1,2,3

¹Bayer School of Natural and Environmental Sciences, Duquesne University, ²Department of Biological Sciences, Duquesne University, ³Chronic Pain Research Consortium, Duquesne University, ⁴Graduate School of Pharmaceutical Sciences, Duquesne University

* These authors contributed equally

Summary

כאן אנו מציגים שיטה לאימות זריקות וריד הזנב אצל חולדות על ידי ניצול אינפרא אדום קרינה פלואורסצנטית נתונים הדמיה של צבעי שולבו סוכנים או הגששים ביולוגי. הזנב הוא עם תמונה לפני אחרי הזריקה, לכמת את האות פלורסנט ואני נעשית הערכה של איכות הזרקה.

Abstract

עירוי לוריד (IV) של סוכנים לתוך וריד הזנב חולדות יכול להיות גם קשה וגם לא עקבי. אופטימיזציה של זריקות וריד הזנב הוא חלק מרכזי של הליכים ניסיוני רבים שבו ריאגנטים צריך להיות מוחדרים ישירות למחזור הדם. מבלי משים, ניתן ההזרקה תת עורית, ואולי לשנות את התוצאה מדעי. ניצול בדיקה ביולוגית המבוססת על nanoemulsion עם מואגד-סגול (NIRF) הפלורסנט, שיטה זו מציעה את היכולת של הדמיה הזנב מוצלחת וריד זריקה ויוו. עם השימוש imager NIRF, תמונות נלקחים לפני ואחרי ההזרקה של הסוכן. זריקה הרביעי מקובל אז איכותית או באופן כמותי נקבע בהתבסס על עוצמת האות NIRF באתר של הזרקה.

Introduction

התוואי של הממשל של סוכנים חיות קטנות משמש כנקודה קריטית של ניסויים רבים. זה קובע איפה הסוכן כדי להיגאל, כתוצאה מכך, מה יקרה לאחר מכן הסוכן. למרות נתיבים אחרים יכול לשמש עבור סוכן הניהול¹, תוואי משלוח תוך ורידי הוא נתיב מועדף עבור סוכן מסוים. הזרקת הרביעי מאפשר לסוכני להיות מוזרק ישירות למחזור הדם, תוך עקיפת רקמות הראשונה לעבור אפקטים והצורך שאינם שייכים absorption1 ממס. זה גם מאפשר מיקוד תאי הדם²^,³ , מסירה ישירה לכל רקמות בתוך מערכת הדם. בחולדות, מספר ורידים יכול להיחשב, כולל את הוריד הצווארי, את saphenous את הווריד הזנב.

בשיטה זו, NIRF לצבוע המכיל בדיקה ביולוגית — במקרה זה,⁵^,⁶⁴^,³^,nanoemulsion (איור 1 א') — מוזרק לווריד הזנב לרוחב של חולדות. Nanoemulsion המכילים NIRF המסוים הזה שימש בעבר תמונה ולעקוב אחר neuroinflammation ויוו ו- ex-vivo^{7, 8} ב מודל החולדה⁹ של כאב נוירופתי²^,³^,⁴^, ⁵^,¹⁰^,¹¹. הדמיה מבוצע לפני ואחרי הזרקת עם imager פלורסצנטיות פרה ניר (ראה טבלה של חומרים). זה משמש כלי כדי לאמת את האיכות של המינהל הסוכן. הדמיה לפני משמש הזרקה של וריד הזנב כבסיס לקבלת תמונה בסיסית.

יותר ויותר במחקרים שנעשו בבעלי חיים, nanoemulsions מנוהל דרך הווריד מנוצל הגששים ביולוגי, מיקוד סוכנים¹²^,¹³^,¹⁴^,¹⁵. זה אתגר מוכח לניהול סוכן דרך ה¹⁶^,וריד הזנב¹⁷— להיות זה סם, וקטור ויראלי או בדיקה אחרת – על מנת להבטיח כל התוכן של הזריקה בהצלחה נכנסו למחזור הדם ולא הרקמות שמסביב¹⁷. לכן, שיטת להמחיש והערכת איכות זריקה מוצלחת היא מועילה.

בדרך כלל, מנורת החימום או מים חמים משמש כדי לחמם את הזנב, הגורמת התרחבות הוריד, המתיר שלה ויזואליזציה לפני הזרקת. בעוד זה מבטיח קל יותר כניסה לווריד, אין דרך כמותיים כדי להבחין אם המתחם נכנס למחזור הדם שלה כולו¹⁸^,¹⁹^,²⁰^,²¹. זה הופך להיות קשה יותר עדיין בזנים של בעלי חיים איפה הווריד ניגודים באופן עמום עם העור, כגון בעכברים שחורים. בדרך כלל, החוקר להעריך זריקה כושל על ידי התנסות ההתנגדות במהלך ההזרקה ו, במקרים מסוימים, להמחיש בליטה על הזנב, המציין של זליגת תת עורית של²²^,סוכן²³.

במחקר זה, NIRF הדמיה של nanoemulsion מוזרק לתוך וריד הזנב לרוחב עכברים חיים מבוצעת על NIRF חיית-קטן מערכת הדמיה (ראה טבלה של חומרים). חולדות ניזונים מיוחד מטוהרים דיאטה (ראה טבלה של חומרים) כדי להפחית קרינה פלואורסצנטית בטן לא ספציפית. ייבוא תמונות בו זמנית של 800 nm זריחה ואור לבן נלכד באמצעות NIRF imager התוכנה המשוייכת. עוצמת קרינה פלואורסצנטית היחסי נמדד על הזנב-הברית הזרקת מראש, שלאחר הזרקת. עוצמת קרינה פלואורסצנטית עבור האזור עניין (ROI) באתר של הזרקת מוקלט, מחולק על ידי האזור של רועי. הערכות איכותי יכול להתבצע בו זריקות מקובלים. באופן אופציונלי, עוד ניתוח כמותי יכול להתבצע על ידי הגדרת סף לזריקות מקובל והקצאת רועי מדידות לקבוצות, באיזה שלב ניתן לחשב מובהקות סטטיסטית.

על ידי ניצול אסטרטגיה זו אימות בעקבות זריקות וריד הזנב, התקן של מחקר משפר עקב עקביות מוגברת של סוכן הניהול. שיטה זו של הערכת האיכות של הזרקת וריד הזנב ניתן אישית בקלות לסוכנים בזריקות שונות לכלול אינפרא אדום הגששים פלורסנט המסופקים באופן מסחרי על ידי מספר חברות.

Protocol

כל הפרוטוקולים בוצעו בהתאם להנחיות במדריך על טיפוח ועל שימוש של חיות מעבדה של מכוני הבריאות הלאומיים, טיפול בעלי חיים מוסדיים ושל שימוש הוועדה (IACUC) באוניברסיטת דוקיין.

1. הכנה והרדמה

הערה: טכניקות aseptic משמשים עבור מכלול של ההליך. רק חומרים חדשים סטרילי ומכשירים סטרילי בלוק הם כדי לשמש. ציוד מגן אישי (כפפות סטריליות, בונה לשיער, מסכה כירורגית, סקראבס) צריך להיות שחוקים כדי למנוע זיהום.

למבוגרים חולדות ספראג-Dawley זכר במשקל של 250-300 גר' שימשו פרוטוקול זה. להתאקלם חולדות תנאי החיים הרגיל, לשמור אותם על 12 שעות אור/12 h מחזור כהה, מספקים מזון ומים ad libitum. בית החיה מבחינה חברתית, תשאירו אותם על נייר תשתית וספק מיוחדת דיאט (ראה טבלה של חומרים) כדי להימנע autofluorescence במהלך דימות.
עם השימוש של כרית החימום שמוקם כראוי, עזים ומתנגד החיה תחת איזופלוריין 5% הראשונית 20% חמצן, ואחריו רמת התחזוקה של לא פחות מ- 1.5% איזופלוריין ולא יותר מ 3%, אלא אם בעל החיים מתעורר או שומר על תחושה.
לאשר הרדמה. ראויה באמצעות חוסר תגובה לעקוב צובט. נטר את זרימת הדם גם כן באמצעות סימנים חיוניים לכל אורך ההליך.

2. הזרקה קדם תמונה Aquisition

תמונת החיה ב- imager פלורסצנטיות פרה ניר על-ידי הצבת החיה רוחבית לחשוף ההזרקה על הזנב לרוחב כדי לקבוע תוכנית בסיסית של קרינה פלואורסצנטית בזנב (איור 1C, E). ביצוע של ייבוא תמונות בו זמנית של שני אור לבן (תצוגת גוף), ליד ערוצי אינפרא-אדום באמצעות NIRF imager, התוכנה המשוייכת עם טבלאות בדיקת מידע מקושר (LUT).
ביצוע הדמיה, להזיז את החיה לשולחן הדיונים כירורגי, ולמקם אותו תחת הרדמה על הזריקה וריד הזנב.
הערה: נמשיך לעקוב סימני החיים של החיה ולבדוק ההרדמה המתאים דרך הזנב צביטה.

3. הזנב הזרקה לווריד עם סוכן המכילות NIRF

עם החיה במצב שכיבה, אוריינט הזנב עם הצד הגבי פונה כלפי מעלה. אני על הזנב להערכת במים חמים למשך תקופה מינימלית של 1 מינימלית אוריינט הזנב הווריד אז הצד הלטראלי (ימינה או שמאלה) הוא 30° (בכיוון השעון או נגד כיוון השעון) לחשוף את הווריד הזנב ימינה או שמאלה (איור 1ב')...
1. ברגע וריד הזנב לרוחב אותרה (אשר מופיע בצבעים כהים על התארכות), לחטא את הזנב כולו עם רפידות אלכוהול, חוזר 2 x.
2. במינון המתאים בהתבסס על תכנון המחקר, להתחיל זריקות באזור חוליות coccygeal דיסטלי של הזנב ונעה מקורב יותר אם מיקום המחט תקין נכשל.
הכנס מחט סטרילית 25 – 27 גר', מסגרת משופעת, לווריד הזנב לרוחב, עם הזנב בזווית של 180 מעלות, החדרת המחט במקביל הזנב והרימה אותה. להתבונן דם פלאשבק בטבעת של המחט כדי להבטיח השמה נכונה. אם אין פלאשבק לכאורה, לאט הניעו את מחט (מבלי להסיר אותו מהזנב) למצוא וריד ההכנסה. אם מניחים subcutaneously, פלאשבק דם לא תתרחש.
הכנס את המזרק עם החומרים להזרקה לתוך החישוק של המחט. כאשר מושגת השמה נכונה, הנוזל להזרקה לא תישא התנגדות בעת ההזרקה. הזריקה יתקדמו וחלקה. ברגע מוזרק, הסר את המחט ואת המזרק, הפעילו לחץ עם גזה סטרילית לפחות 1 דקות להבטיח קרישת ולאחר לסמן את המקום של הזרקת עם עט על הזנב, הבטחת שהיא מוצגת בתמונה אור לבן.
הערה: אין שטף דם או הנגע יהיו גלויים באתר של הזרקה.
אם קצה המחט עובר במהלך ההוספה מזרק, הסר את המחט ונסה שוב ההליך כניסה המחט יותר מקורב על הווריד של חולשת הזנב. לא חוזר באותה המחט אם נקודת החזרה שונה הוא ניסה.
הערה: לחלופין, ניתן לבצע ההזרקה עם צנתר הרביעי עם מחוון זרימת הדם (ראה טבלה של חומרים). יש את היתרון של אימות חזותי של הקטטר במהלך venipuncture. להוסיף את הקטטר, שיפוע צד, הזווית שתואר קודם לכן. התבונן בשורת הפלאשבק ב לכל אורכה של מחוון זרימת הדם כדי להבטיח השמה נכונה. לחץ קל גב ניתן למשוך דם במזרק כדי לאשר השמה נכונה בתוך הכלי לפני הזרקת. שוב, ללא התנגדות תורגש.

4. ייבוא תמונות שלאחר הזרקה

ביצוע הערכת איכות בעקבות הזרקת וריד הזנב ב- imager פלורסצנטיות פרה ניר ב באופן התמונה שלפני הזריקה הבסיסית. להבטיח החיה. עדיין כראוי הוא מורדם – וככה הוא יהיה משך זמן הדמיה – לפני הצבתו של הצלם.
הערה: מערכת הדמיה המכיל חיבורים הרדמה housingwith של המגירה ומסיכה עבור החיה אמור לשמש אם הם זמינים.
אוריינט החיה על הצד הלטראלי לחשוף ההזרקה (לפי המסומן) על הזנב לרוחב. בדוק אם אות NIRF קיים רק באתר של הזרקה. הדבר מעיד על זריקת וריד הזנב מוצלחת (איור 1D).
הערה: אם האות מפוזרת בכל רחבי הזנב כולו, הוא נחשב להיות תת עורית, ומכאן לא מוצלח (איור 1F). איור 2 מציג דוגמאות נוספות של זריקות שנכשלו.

5. התמונה כמת

הערה: כימות התמונה יכולה להתבצע עם תוכנת הדמיה המלווה םלצה ניר, אם פונקציה זו זמינה. לחלופין, תוכנת ניתוח התמונה זמינים מסחרית אחרת עשוי להיות בשימוש²⁴.

בתמונה שלאחר ההזרקה, צייר אזור-של-עניין מסביב לאזור של זריחה-הזרקת באתר²^,⁶.
למדוד את אזור ואת עוצמת קרינה פלואורסצנטית היחסי רשומה כמו אזור/בעוצמה. להשוות תמונות הזרקת מראש שלאחר הזרקת ו'בסיסית גם איכותית או quantitively באמצעות ניתוח סטטיסטי המתאים (תלוי על קבוצות לימוד ותנאי).
הערה: החוקר יכול להחליט על סף להפלות טוב של זריקות רע או להקצות אחוז איכות הזריקה.

Representative Results

חולדות הוזרקו nanoemulsion NIRF המכילים המזרק הזנב לרוחב, מראש, שלאחר הזרקת התמונות צולמו עם הצלם קטן-חיה (טבלה של חומרים) כמפורט בפרוטוקול. תמונות שלאחר הזרקת איכותית שקובעת הזרקת איכות, ימוקם "בזריקה טובה" (n = 7), 'הזרקת רע' (n = 4) קבוצות. הערכה איכותי בוצע על ידי התבוננות עוצמת קרינה פלואורסצנטית שלאחר הזרקה לאזור. בזריקה אופטימלי, לא את האות NIRF לאתר של הזרקת. אין אות יראו אם הזריקה היא מוצלחת כי הסוכן נעקרו באופן מלא לזרם הדם. זריקה באיכות רע מציג סימן NIRF מפוזרת לאורכו של הזנב.

תמונות נותחו עם התוכנה הנלווית imager NIRF. אזורים-של-עניין נמשכו באתר של תמונות הזרקת מראש (איור 1C, E) וליד האזור של קרינה פלואורסצנטית בתמונות שלאחר ההזרקה (איור 1D, F). תמונות איפה פלורסצנטיות היה גלוי לכל אורך הזנב היו ייחשב והוציאו מניתוח (איור 2). מדידות של עוצמת קרינה פלואורסצנטית ושטח נרשמו. הערכים עבור אזור/זריחה בעוצמה חושבו, המותווה (איור 1G). הבדל משמעותי (אינטראקצית t-מבחן) על ידי קרינה פלואורסצנטית אינטנסיביות בין תמונות מראש, שלאחר הזרקת נצפתה בקבוצה 'הזרקת רע' (איור 1G) (p = 0.0024).

איור 1 : NIRF המבוסס על nanoemulsion והתמונות של וריד הזנב. (א) A מבוססי nanoemulsion ביולוגית החללית המכילים צבען NIRF היה מוזרק לתוך וריד הזנב (B) לרוחב ואת עם תמונה ב- imager NIRF. (C ו- D) קדם postinjection ותמונות של זריקה טובה. (E ו- F) קדם postinjection ותמונות של זריקה גרועה. החצים הלבנים להצביע על הנקודה של הזרקה. זה אפשרי להעריך איכותית ההצלחה של זריקה טובה לעומת זריקה רעה על-ידי הערכת מידת האות NIRF באתר של הזרקה. זריקות לא מקובל להציג פלורסצנטיות לכל אורך הזנב, הוצאו מן הניתוח (איור 2). (G) ניתן גם לנתח את התמונות כדי לחשוף את מדד כמותי של עוצמת קרינה פלואורסצנטית, עם ספי לאיכות הזריקה שהוקצה על-ידי החוקר. קווי השגיאה בגרף לשקף ב- SEM. עבור הקבוצה 'בזריקה טובה', n = 7. עבור הקבוצה 'הזרקת רע', n = 4. ישנו הבדל סטטיסטי בעוצמתם פלורסצנטיות בקבוצה 'הזרקת רע' בעת השוואת תמונות קדם ו- postinjection (אינטראקצית t-מבחן; p = 0.0024). אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

איור 2 : דוגמאות של זריקות רע. (א) אות פלורסנט ראה בחלק של הזנב. (B) אות ניאון שנראה במלוא אורך הזנב. אותות פלואורסצנט (C) התפזרו בכבדות הזנב כולו ואזור סימטרית של גוף החיה. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.

Discussion

מעבדות מחקר כרוכות עלויות משמעותית כתוצאה misadministration הסוכנים הבדיקה. זריקות וריד הזנב הם טכניקה קשה לשלוט להשיג אחוזי הצלחה עקבית, עם מנוסים לבעיותיהם לעיתים קרובות גביית misadministration שגיאות. אין שום דרך אמינה כדי לאשר זריקה מוצלחת. פרוטוקול זה מציע פתרון לבעיה זו על ידי מתן חוקרים שיטה כמותיים כדי לאמת את ההצלחה של זריקת וריד הזנב מאתר. כאן,⁸^,⁷^,nanoemulsion NIRF-מתויג²⁵ משלבת את הסוכן לפי בחירה (, במקרה זה, תרופה), היא תמונה באתר של הזרקת ב- imager חיית-קטן NIRF. יש גם האפשרות לפתח סוכן שאינה מבוססת על nanoemulsion ולהשתמש על אותו עיקרון של הדמיה NIRF על-ידי שילוב צבעים זמינים מסחרית אינפרא-אדום. בנוסף, סוכני דימות מוכן לשימוש עם מגוון רחב של יישומים, כגון גידול הדמיה, מטבולית הדמיה, תא סחר בבני אדם, אפופטוזיס הינם גם זמינים מסחרית. זריקה מתבצעת גם באמצעות מחט סטרילית או, לחילופין, של צנתר הרביעי; זה תלוי ההעדפה של החוקר. בנוסף, מרססים וריד הזנב אוטומטית²⁶ השתמשו כדי לסייע בתהליך זה, תואמים מתודולוגיה זו. עם זאת, טכנולוגיה זו לא כבר הפך זמין מסחרית.

ישנם צעדים חשובים בבשיטת הזרקת וריד הזנב להבטיח שיעור גבוה יותר של המינהל סוכן הנכון. ראשית, צריך לנקות הזנב עם אתנול כדי להסיר את כל הלכלוך או פסולת, ומאפשר לחוקרים כדאי להמחיש את הווריד. להרחבת את הווריד מאת השוקע הזנב במים חמים הוא גם צעד חשוב מאוד בשיטה שלו, שכן היא מאפשרת פני שטח גדול יותר להזרקה. הזרקת בנקודה דיסטלי יותר על הווריד של הזנב מאפשרת שגיאה כלשהי, במקרה בו ניסיונות מרובים נדרשים. הזרקת שכדאי לנסות במיקום מקורב יותר בזנב וריד הזנב גודלת בגודל של ההיבט סימטרית של גוף החיה הוא התקרב. בנוסף, תקחי את הזנב contralateral יכול לשמש אם מיקום המחט נכשל באתרים יותר מ 3-5 על הווריד של חולשת הזנב.

ניהול מוצלח של סוכן מבחן התוצאה מעט אין אות NIRF בנקודת ההזרקה. אם אין התנגדות מורגשת במהלך כהונתו של הזריקה, יש מעט כדי לא זריחה בזנב ואז הזרקת ניתן להקליט מוצלח. אם התנגדות מורגשת במהלך ההזרקה, יש עקבות של NIRF אות לאורך כמה אורך הזנב, ואז הזרקת נרשם בתור לא מוצלח והוא צפוי חלקית תת עורית. קרינה פלואורסצנטית תמונות נלקחים מראש, שלאחר הזרקת, האיכות של הזריקה מוערך על ידי התבוננות איכותית או ניתוח באופן כמותי את האות פלורסצנטיות באתר של הזרקה. התוכנה מלווה םלצה ידי קרינה פלואורסצנטית ניר היא לעיתים קרובות המסוגלים לבצע ניתוח זה.

ניתן להתאים את השיטה במספר דרכים. . זה החלים על הזנב בהזרקה לווריד ב עכברים וחולדות. רוב קטן-חיה ניר זריחה imagers יהיה מסוגל אדיב מאתר מכרסמים. רמות של הרדמה צריכים להיות מותאמים בהתאם המשקל של החיה, לפי פרוטוקול IACUC של המעבדה למחקר. שינוי אפשרי נוסף הוא הכנת בדיקה שאינה מבוססת על nanoemulsion או על ידי שילוב של צבע אינפרא-אדום ניסח סוכן של החוקר או על ידי רכישת סוכן מוכן לשימוש הדמיה, המותאמים ביולוגית יישום ספציפי.

אם עכבר גדול יחסית, זה עלול להיות קשה למקם אותו בתוך םלצה חיית-קטן. לכן מומלץ כי תמונת בדיקה הוא נלקח עם החיה במגירה לפני הזרקת, מבט שדה לקביעה איפה הזנב הוא גלוי. זה עוזר לקלטת הזנב המגירה של הצלם, כדי להבטיח זאת לא זזה במהלך דימות.

שיטות אלטרנטיביות המבקשים להעריך את האיכות של וריד הזנב זריקות חיות קטנות מוגבלות להניצול של תיוג ריאגנטים זה לא לשבש הליכים ניסיוני בו-זמניות ודורשים המתת חסד של postinjection בעלי חיים¹²^,¹³. ריאגנטים מסוימים עשוי להשפיע תוצאות מחקר והערכה טיפולית של החיות מעורב, אז מומלץ טיפול בעיצוב ניסיוני.

שיטה זו, בעתיד, ניתן מעודן עם התקדמות טכנולוגיית הדמיה חיית-קטן, כמו גם שיפורים הגששים פלורסנט אינפרא-אדום. הגששים ביולוגי עם צבע אינפרא-אדום מואגד, המיועד למגוון רחב של יישומים שונים, ניתן בשלב ניהול הסוכן של עיצוב מחקר כדי לאמת את האיכות של זריקה, כפי שמתואר בספר זה שיטה²^,³ ^,²⁷^,²⁸^,²⁹^,³⁰^,³¹^,³².

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

J.A.P. J.M.J. במשותף מתוכנן הגישה ניסיוני להערכת Nanoemulsions במודל חולדה כרונית פגיעה הכיווץ על ההשפעות על כאב נוירופתי. J.M.J. נוצר ועוצב הגישה משלוח סמים באופן כללי, ממוקדות מקרופאג עם nanoemulsions, הרכב nanoemulsion, ואת תהליכי ייצור. J.M.J. הפיק את nanoemulsion, אשר היה מפוברק עוד יותר על ידי שראשי תחת הדרכתו של J.M.J. היציבות nanoemulsion הוערכה על ידי טיפול J.M.J., א ו פ מ חיה, ניתוח, התנהגות, זריקות וריד הזנב, NIRF הדמיה בוצעו במשותף על ידי טרשת נפוצה, מופיעים תחת הדרכתו של J.A.P. כתב היד היה נכתב שהוכנו על ידי טרשת נפוצה ו בפרוטוקול נכתב על ידי A.M.S.

דימות אופטי ניר בוצעה על מערכת הדמיה חיה קטנה באוניברסיטת דוקיין (הנתמכים על ידי מענק של פיטסבורג רקמות זרע יוזמה הנדסה). J.M.J. מאשר תמיכה מן ההגנה פרס מספר FA8650-17-2-6836, נידה פרס מספר 1R21DA039621-01, NIBIB פרס מספר R21EB023104-02 פרס AFMSA מספר FA8650-17-2-6836. J.A.P., J.M.J להכיר תמיכה של פיטסבורג רקמות הנדסה יוזמה זרע המענק. J.A.P. ידוע גם בפרס Hunkele חששתי למחלות, ברנן, אמה וינטרס קרן, צ'ארלס הנרי ליץ II הקרן, ופרס חבר העמים אוניברסלי מחקר שיפור. J.A.P., J.M.J. להכיר תמיכה של פרווסט ההשבעה של אוניברסיטת דוקיין הבינתחומי למחקר קונסורציומים גרנט, אשר תומך האיחוד מחקר של כאב כרוני.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
100% Oxygen air tank	AirGas Heathcare	n/a	For ventilation of animal.
70% Ethanol	Multiple sources	n/a
Alcohol Pads	Henry Schein	112-6131
Artificial Tears	Henry Schein	100-2634	This protects the rats eyes while it is anesthetized.
Beaker	Multiple sources	n/a	This holds warm water to dilate the tail veins.
Distilled water	Multiple sources	n/a
Exhaust Fans	Hazard Technologies	n/a	For ventilation of lab, if it is not built in.
Face Mask	Multiple sources	n/a
Gas Chamber with tubing and face mask	Multiple sources	n/a
Gauze Pads	Henry Schein	100-2634
Hair Bonnet	Multiple sources	n/a
Heating Lamp	Multiple sources	n/a
Heating Pad	Multiple sources	n/a
Isoflurane	Southmedic Inc.	ND66794-013-25
Padded Bench Cloth	Box Board Products Inc.	026755100I
Pearl Small Animal Imager	Li-COR Biosciences
Pearl Trilogy Small Animal Imaging System	LI-COR Biosciences	n/a	Quote available via manufacturers web site. Other manufacturers such as Perkin Elmer (VisEn Medical FMT) offer preclinical NIR fluoresence imagers.
Scrubs, lab coat, shoe covers	Multiple sources	n/a
Sharps container	Multiple sources	n/a
special diet	Research Diets, Inc, New Brunswick, NJ
Sprague-Dawley rats	Hilltop Animals, Springdale, PA
Sterile injection cap	Multiple sources	n/a
Sterile needle, 27 G	Multiple sources	n/a
SURFLO IV Catheter, 24 G, yellow	TERUMO	SR+OX2419C1	This is an alternative to using a sterile needle. It provides additional indication of correct venous insertion.
Surgical gloves	Multiple sources	n/a
Surgical Tape	Multiple sources	n/a