Summary
효소 활동의 열 안정성은 쉽게 등온선 적정 열 량 (ITC)에 의해 측정 됩니다. 대부분 단백질 안정성 분석 실험은 현재 측정 단백질 전개, 사용 하지만 효소 활동에 대 한 정보를 제공 하지 않습니다. ITC의 효소 활동의 안정성에 효소 수정 효과의 직접 측정을 수 있습니다.
Abstract
이 작품에는 등온선 적정 열 량 (ITC)에 의해 효소 활동의 안정성을 측정 하기 위한 새로운 방법을 보여 줍니다. 최대 열 속도 효소 솔루션으로 기판 솔루션의 단일 주사 효소 활동을 연관 후 관찰. 시간이 지남에 따라 동일한 효소 솔루션으로 기판의 여러 주사 효소 활동의 손실을 보여줍니다. 분석 결과, 아주 약간의 인사 시간을 요구 하는 자치 이며 대부분의 미디어와 효소에 적용 됩니다.
Introduction
효소는 단백질 catalyzing 다양 한 유기 반응의 수 있습니다. 중립 pH 가혹한 용 매를 사용 하 여 피할 근처에서 수성 해결책에서 대부분 효소 기능. 그들의 높은 선택도 때문에 효소 촉매 반응 적은 생산 (일부 경우에 아무 부산물) 산 및 기초1등 선택적 비 촉매 보다 부산물. 이것은 특히 관련 식품 제조 최종 제품 인간의 소비를 위한 안전은 모든 화학 반응을 수행 해야 합니다 어디 에입니다. 현재, 효소는 높은 당 옥수수 시럽2, 치즈3, 맥주4, 유 당-무료 우유5및 다른 중요 한 식품을 생산 하는 데 사용 됩니다. 이 종이 식품 산업에서 효소 사용에 초점을 맞추고, 하는 녹색 화학 및 의약품 합성에 포함 하는 효소에 대 한 다른 많은 사용이 있습니다.
효소의 유틸리티는 효소의 3 차원 구조를 유지에 따라 효소 활동의 안정성에 의해 제한 됩니다. 효소 구조 수정 PEGylation6, 동원 정지 고체 지원7,8, 유전 수정 및 공식에 의해 안정 될 수 있다. 현재, 효소 안정성은 차동 스캐닝 열 량 측정 (DSC)에 의해 일반적으로 측정 하 고 끝점 효소 활동 분석 실험9. DSC 측정 온도는 효소 펼쳐져; 더 높은 온도, 더 안정적인 구조. 그러나, 활동의 손실 효소 또는 효소10내 도메인을 전개 하는 데 필요한 보다 낮은 온도에서 자주 발생 합니다. 따라서, DSC 효소 수정 효소 활동의 안정성을 증가 여부를 확인 하려면 충분 하지 않습니다. 끝점 효소 분석 실험 보통 집중 시간, 여러 샘플을 필요로 하 고 종종 매우 색 또는 불투명 솔루션 또는 정지에 적용 되지 않습니다 하는 결합 된 색도계 반응을 포함.
이 작품 등온선 적정 열 량 (ITC)에 의해 효소 활동의 안정성의 직접 측정 하는 방법을 보여 줍니다. ITC는 열 또는 반응의 과정에서 흡수의 속도 측정 합니다. 이후 거의 모든 반응 생성 하거나 열을 흡수, ITC는 우유와 같은 불투명 한 미디어에 반응 결합 반응을 하거나 발생 하지 않는 등 대부분 효소 촉매 반응에 대 한 사용할 수 있습니다. ITC는 많은 종류의 반응, 화학 운동 매개 변수를 측정 하기 위해 많은 수십 년 동안 사용 되었습니다 하지만 여기에 제시 된 프로토콜 ITC를 사용 하 여 효소 촉매 반응의 피크 열 속도 측정에 초점을 맞추고 효소 활동 선형 함을 보여 줍니다. 최대 열 속도와 상관 된다. ITC 피크 열 속도의 측정은 주로 자율 고 아주 작은 인사 시간 설정 및 분석 필요로.
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Protocol
1. 샘플 준비
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pH 4.6에서 0.1 M 나트륨 아세테이트 버퍼의 1000 mL
- 졸업 하는 1000 mL 비 커에 증류수 800 mL를 측정 합니다.
- 무수 나트륨 아세테이트의 8.2 g의 무게와 비 커에 추가.
- 비 커 저 어 접시에, 비 커로 저 어 막대를 배치, 저 어 접시에 돌려 놓고 완전히 녹아 때까지 저 어.
- 무수 나트륨 아세테이트는 완전히 해산, 보정 된 pH 미터를 가진 해결책의 pH를 측정 합니다.
- 원하는 pH 4.6를 1 M HCl 이나 NaOH 적절 하 게 추가 합니다.
- 때까지 총 볼륨은 1000 mL 증류수를 추가 합니다.
- 사용까지 실내 온도에 상점.
-
효소 솔루션
- 효소 졸업 0.1 M 나트륨 아세테이트 버퍼 pH 4.6 15 ml에서의 첫 번째 측정 8 mL에 의해 10-30 mg/mL 범위 내에서 솔루션 실린더의 10 mL를 준비 합니다.
- 효소와 함께 15 mL 원뿔 튜브에 버퍼 솔루션을 추가 하 고 효소 해산 했다 때까지 적극적으로 악수.
- 총 볼륨은 10 mL 때까지 더 많은 버퍼 솔루션을 추가 합니다.
- 사용 될 때까지 4 ° C에서 효소 솔루션을 저장 합니다.
-
기판 솔루션
- 300-600 m m 범위 내 기판 솔루션을 준비, 기판 그램에 원하는 농도 확인 하는 데 필요한 금액을 계산 합니다.
- 기판에 밖으로 무게와 100 mL 유리 비 커에 배치
- 졸업 25 mL 실린더를 사용 하 여 버퍼 솔루션의 20 mL를 측정 하 고 유리 비 커에 추가.
- 저 어 접시에 비 커를 놓고 비 커에 자석 저 어 막대를 배치 합니다. 더위를 켜고 교 반 속도 적절 하 게 조정.
- 기판은 해산 될 때까지 계속 저 어 수 있습니다.
- 50 mL 원뿔 튜브로 기판 솔루션을 부 어 하 고 총 볼륨은 45 mL 때까지 0.1 M 나트륨 아세테이트 버퍼 pH 4.6을 추가 합니다. 흔들어 섞는다.
- 사용 될 때까지 실 온에서 기판 솔루션을 저장 합니다.
2. 실험 수행
- ITC는 악기를 준비
- 참조 셀은 350 µ L의 증류수에 대 한 로드를 확인 합니다. 샘플 셀에 효소를 로드 하기 전에 샘플 셀 청소 되었는지 확인 합니다.
- 프로토콜-채우기 로드 주사기 2% 청소 솔루션 (자료 테이블)의 500 µ L와 함께 청소, 신중 하 게 샘플 셀에 바늘을 삽입, 셀 채우기 및 천천히 같은 주사기를 사용 하 여 액체를 제거. 비 커에 액체를 폐기 합니다. 70% 에탄올과 2% 청소 솔루션 (재료의 테이블)을이 두 번 세 번 반복 하 고 증류수로 10 번을 씻어.
- 효소 솔루션의 450 µ L 로드 주사기를 채우십시오, 신중 하 게 샘플 셀의 하단에 모든 방법을 바늘을 삽입 하 고 천천히 기포의 형성을 방지 하기 위해 100 µ L 라인 아래로 플런저를 누르십시오.
- 물으로 바늘 끝을 배치 다음 천천히 차지는 주사기로 물 다음 폐기물 용기에 물을 분배 하 여 증류수로 50 µ L 적정 주사기 세 번을 씻어.
- 세 번 기판 솔루션 rinsing 하 여 잔여 물을 제거 합니다.
- 주사기는 어떤 공기 거품 없이 가득 될 때까지 솔루션을 그려서 기판 솔루션 적정 주사기를 채우십시오.
- 여전히 기판 솔루션에에서 주사기 플런저를 제거 하 고 약 2 µ L 주사기의 상단을 입력 하는 플런저를 다시 공기의 허용.
- ITC의 buret 핸들을 제거, buret 핸들 안에 주사기를 놓고 나사를 꽉 때까지.
- 보풀 없는 조직으로 활동가의 끝을 닦아 다음 신중 하 게 buret 핸들 ITC에 놓고 장소에 잠금.
3입니다. 설정 ITCrun
- 컴퓨터에서 ITCrun 을 열고 설정을 클릭 합니다.
- 교 반 속도 클릭 하 고 350 RPM으로 설정. 주사기 크기 (µ L)을 확인 하 고 그것은 50 µ L에 확인.
- 온도 설정 하 고 업데이트를 누릅니다. 이 단계를 수행 하는 것이 좋습니다 ITC를 준비 하기 전에 적어도 1 시간. 열 또는 필요에 따라 진정 악기에 대 한 충분 한 시간 수 있습니다.
- 실험 설정에 대 한 증분 적정을 선택 합니다.
- 주사를 설정 하려면 삽입 을 클릭 합니다. 5400 주입 간격 조정 s, 4 및 4 주입 수 주입 볼륨 (µ L). 설정을 확인 하려면 확인 을 누릅니다.
- 재래식 상자에서 자동 equilibrate 및 큰 예상 열을선택 합니다. (예상된가 열 작은 경우에, 사람은 예상된 열 아래 작은 선정할 수 있다; 그러나,이 평형 시간을 증가할 것 이다.)
- 300으로 초기 기준선 설정 s.
- 실행된, 클릭 시작 하려면 시작 감동 요금 옆에 있는 기호 하 고 시작 렌치 기호 옆에 위치를 클릭 합니다.
- 파일을 저장 하 고 실행 하려면 악기를 허용.
4. 데이터 분석
- NanoAnalyze에서 파일을 엽니다. 데이터 를 클릭 하 고 데이터 열을 선택 합니다.
- 모든 데이터를 선택, 복사 하 고 Microsoft Excel로 데이터를 붙여 넣습니다.
- 300에서 필요한 값을 추가 하 여 0 기준선을 조정 하기 위해 s 0. 이 수정 열 속도 값의 전체 열에 적용 됩니다.
- 방정식을 사용 하 여 각 주입에 대 한 열 속도의 최소 또는 최대 값 찾기: =MIN(cell:cell) 또는 MAX(cell:cell). 각 데이터 요소는 각 주입에 효소의 피크 효소 활동을 나타냅니다.
- 값은 적정 하는 동안 발생 한 시간에 대 한 최소 또는 최대 값의 그래프를 플롯 합니다.
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Representative Results
그림 1 및 그림 5 는 대표적인 결과 데이터 두 효소 lactase 및 당화를에서 보여줍니다. Lactase 및 당화 endothermically와 exothermically, 각각 두 개의 단으로는 당의 가수분해 촉매. 두 효소 반응 효소의 채도 배제 하는 농도에서 실행 되었습니다.
Lactase 데이터 ITC 데이터를 사용 하 여 효소 안정성을 추정 하는 방법을 보여 줍니다. 600 m m 유 당 (그림 1)의 4 개의 순차적 4 µ L 주사 20 mg/mL lactase로 적정 했다. 5400의 간격 각 주입 사이 s, 적용 하 고 각 주입 하기 전에 초기 기준선 돌아갈 충분 한 시간 수 있습니다. 위에서 설명한 프로토콜 25 ° C와 35 ° C, 45 ° C, 55 ° c.에서 수행 되었다 또한, 유 당 600 m m 55 ° C에만 100mm 나트륨 아세테이트 버퍼에 혼합의 열에 대 한 제어로 적정 했다. 기판에 효소의 각 주입에 대 한 혼합, 초기 발열 열 그리고 유 당의 lactase 촉매 발열 가수분해 반응 완료 되 고 열 속 기준선에 반환 될 때까지 발생 하는 이후. Lactase 솔루션에 유 당 주입은 다음 반복 각 후속 주입 으로부터 흡 열 반응의 피크 높이 3 번 더 위의 주입 보다는 좀 덜 효소 활동의 감소 때문에. 원시 데이터 표시 시간 (그림 2A-D) 상대적인 피크 열 다음 변환할 수 있습니다. 각 주입에 대 한 피크 높이 다음 선형 회귀에 들어갈 수와 기울기 선택한 온도에서 효소 안정성을 나타냅니다. 더 많은 부정적인 사면, 덜 안정 효소. 예상 했던 대로, 효소 안정성 온도 (그림 2E) 증가 함께 감소 합니다.
유 희석 lactase의 결과 그림 1 에 설명 된의 각 주입. 이 희석 효소 활동에 있는 감소의 원인이 아니다는 것을 보여, ITC lactase 활동 분석 결과 또한 이루어졌다 25 ° c, lactase 농도 첫 번째 주사와 마지막 주사 (그림 3). 이 희석 효소 활동, 8% 감소 한 반면 분석 결과에서 4 주입 활동에서 73% 감소 결과. 4 사출 실험 동안에 lactase의 희석 따라서 상대적으로 작은 효과 (즉, 11%)를 했다 효소 활동. 활동의 실제 손실을 했다 따라서 73-8 = 65%.
설명 했 듯이 ITC를 사용 하 여 소개 장점 중 하나 이다 이러한 반응 불투명 미디어, 우유 등에서 할 수 있습니다. ITC의이 기능을 보여 우유 lactase (그림 4)에 직접 주입 했다. 때문에 우유의 pH는 나트륨 아세테이트 버퍼에 일치 하지 않는, 혼합 주사 직후의 큰 발열 열이 있다. 혼합 피크의 발열 열 피크를 혼합의 열 후 컨트롤 부족 lactase (그림 4, 회색 선)와 우유 (그림 4, 검정 및 점선)와 두 개의 주사에 여겨진다. Lactase 활동을 나타내는 흡 열 반응을 발생 합니다. 우유는 단백질, 비타민, 미네랄, 그리고 유 당의 복잡 한 혼합물을 포함합니다. 우유의 복잡성 때문에 다른 반응이 우리의 반응의 과정에서 발생 가능 하다. Lactase의 활동으로 인해 흡 열 피크 보여주는, 우유 유 당 146 m m와 함께 아군 했다. (그림 4, 점선) 아군 유 당 우유와 함께 반응에서 흡 열 피크와 곡선 아래 면적은 우유에 혼자 (그림 4, 검은색 선), 흡 열 피크 lactase 활동으로 인해 실제로 임을 나타내는 보다 큽니다. 기준선 오프셋 느린 반응 유 당 반응 완료 후 계속 나타냅니다.
이 분석 결과 사용 하 여 두 개의 서로 다른 효소 준비의 효소 활동의 안정성을 비교 하는 방법을 보여, 무료 당화와 나일론 6 nanofiber 멤브레인에 움직일 당화의 안정성 비교 그림 5 에서 35 ° c11 . Lactase 분석 결과에서 자당의 4 개의 4 µ L 주사 순차적으로 고 각 주입에 대 한 피크 높이에서 최대 열 속도 결정. 그림 6에서 같이, 피크 높이 시간 감소 효소 활동을 나타내는 선형으로 감소.
그림 1 : Lactase 활동의 ITC 데이터 흔적. 각 추적 pH 4.6 버퍼에 lactase 솔루션으로 유 당 600 m m의 4 개의 순차적 4 µ L 주사 보여줍니다. 45 ° C (어두운 회색), 35 ° C (점선), 25 ° C (밝은 회색), 그리고 아무 효소 컨트롤 (점선) 55 ° c.에에서 55 ° C (검정), 자취 끝났다 직선 맞는 각 주입에 따라 흡 열 피크 최소를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 2 : 효소 활동의 안정성 피크 활동에 변화의 속도에 따라. 25 ° C (A), 35 ° C (B), 45 ° C (C), 55 ° C (D)에서 시간 (s)을 기준으로 4 개의 주사의 각 피크 효소 활동. 데이터의 선형 적합 실선으로 표시 됩니다. A-D 부분에 장착 되어 라인의 E에서 온도 대 한 구성 됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 3 : 25에서의 피크 높이에 효소 희석 효과 ° C. Lactase 활동 20 mg/mL (검정)와 18.62 mg/mL (회색)의 첫 번째 및 네 번째 주사에 효소 농도에서 각각 측정 됩니다. 삽입은 피크 효소 활동에 비추어 확대 이다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 4 : 우유에 lactase 활동 측정. BYU 버퍼 (회색)으로 지방 무료로 우유 치즈 제조 소, 20 mg/mL lactase (검정)에 우유와 20 mg/mL (점선)에 5% 추가 유 당으로 아군의 주사의 ITC 추적입니다. Y 축 발열 효소 반응 및 혼합의 발열 열 불연속 이다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 5 : 35 ° C에서 ITC 효소 안정성 분석 결과 사용 하 수 당화의 두 개의 다른 준비를 비교 하는 방법의 대표적인 예. 당화 nanofiber 막 및 무료 효소 움직일의 활동 각각 점선 및 어두운 회색 선으로 표시 됩니다. 검은 선이 그냥 적절 한 비늘에 혼합의 열을 보여주는 아무 당화 된 컨트롤입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
그림 6 : 피크 발열 열 속도 당화 농도 600mm 자당의 4 µ L 주입 다음 사이 선형 관계. 이 표준 곡선 당화 알 수 없는 샘플의 농도 결정 하기 위해 사용할 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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Discussion
여기에 설명 된 ITC 효소 안정성 분석 결과의 주요 이점은 자동화 이다. 일단 모든 적절 한 버퍼 및 솔루션은, 각 분석 결과 대 한 설정 시간 분석 결과 하 고 사람에 대 한 약 15 분입니다. 반면, 당화 및 lactase의 활동에 대 한 기존의 분석 하 고 분석 결과의 지속적인 참여와 함께 약 2 시간을 요구 하 고 많은 효소 활동 분석 실험을 상당히 더 많은 시간. 이전 발행물에서 우리는 당화 활동11에 대 한 더 전통적인 spectrophotrometric 방법에 ITC 메서드에서 데이터를 비교 하는 방법을 증명 하고있다.
ITC는 분석 결과의 또 다른 장점은 거의 모든 효소12의 적용입니다. 따라서, 특정 조건에서 다른 효소의 안정성 테스트 여러 다른 분석 실험 설정이 필요 하지 않습니다. 또한, ITC 분석 결과 새로운 효소 또는 적합 한 색도계 분석 결과 효소의 활동의 안정성을 결정 하는 데 유용 합니다. ITC 분석 결과 또한 식품 과학에서 주요 장점은 불투명 매체에서 할 수 있습니다. 효소 활동의 대부분 이전 분석 실험을 사용 하 여 분 광 광도 법, 형광, 또는 발광 효소 활동을 측정, 이후 그들은 불투명 또는 높은 색 미디어와 호환 되지 않습니다. 비록이 작품만 효소 활동의 안정성에 온도 효과 보여줍니다, ITC 메서드 (예, pH, 소금, 비 수성 용 제, 그리고 변성 대리인) 효소 안정성에 영향을 주는 대부분의 다른 조건에 적용 됩니다.
모든 ITC 실험과 마찬가지로 효소 및 기판 솔루션에 사용 되는 버퍼는 가능한 밀접 하 게 일치 해야 합니다. 농도 또는 pH의 불일치는 열 량 계의 동적 범위를 초과 하는 큰 열 효과 발생할 수 있습니다. 효소와 기판 솔루션을 준비 하는 동일한 재고 버퍼의 사용은 일반적으로 충분 합니다. 하지만 그렇지 않은 경우 솔루션 두 솔루션 모두 동일한 버퍼 솔루션에 대 한 dialyzing에 의해 일치 시킬 수 있습니다.
추가 조건은 효소 기질 포화 수 없습니다, 어떤 경우에, 피크 높이 된다 기질 농도의 독립 이다. 또한, 반응으로 이동 완료 또는 평형 주사 사이 대 한 시간 과도 한 될 수 있습니다 및/또는 신호 열 량 계의 동적 범위를 초과할 수 있습니다. 그러나, 기질 농도 강한 열 신호를 제공 하기에 충분 해야 합니다. 효소는 기질 포화, 기질 농도 감소 될 수 있다, 또는 효소 농도 증가. 열 량 계 셀과 주사기를 로드할 때 하나 없는 거품이 있는지 확인 해야 합니다. 거품 주입 실험 과정에서 셀 발표 경우 비정상적인 이벤트 열 속도 신호에서 발생 합니다.
ITC 메서드 촉매 반응의 엔 탈피 변화 및 반응의 양과 속도에 따라 달라 집니다. 반응 위한 엔 탈피 변화는 너무 작은, 기판은 너무 용 해, 또는 효소에는 충분 한 활동, 열 속도 너무 작아 충분 한 신호를 얻을 수 있습니다. 또한, 효소 제품의 낮은 농도 의해 저해 하는 경우 관찰 실험 과정 중 효소 활동에 감소 것입니다 발생할 수 제품 억제 뿐만 아니라 활동의 손실에 의해 시간이 지남에. 예를 들어 lactase 적정 54 mM 포도 당 그리고 갈 락 토스의 최종 농도 55 ° C (데이터 표시 되지 않음)에서 효소 활동의 피크 높이 27% 감소 하면. 이것은 그림1에서 4 분사 주입 1에서에서 피크 높이 78% 감소 보다 훨씬 작다입니다. 그러나,이 분석 결과의 과정에 도달 하는 제품 농도의 효소 활동을 측정 하 여 수정 될 수 있습니다. 또한, titrating 적은 기질과 효소 제품 억제의 양을 줄일 수 있습니다.
다른 제한 효소 발생할 수 있습니다. 예를 들어 각 주입으로 효소를 희석 있을 것입니다. 이 ITC는 오버플로 반응 배를 사용 하기 때문에 실험 과정 중 사출 크기에 해당 솔루션의 볼륨 제거 됩니다 각 주입으로. 따라서, 적은 양의 효소 제거 되 고 반응의 제품은 각 주입으로 증가. 효과 제거 하는 효소의 양과 희석의 주입 크기는 작은, 유지 하 고 따라서 기판의 큰 농도 종종 필요한 경우 작은 보관할 수 있습니다. 주입 반응 선박 볼륨 볼륨의 비율 더 큰 반응 용기와 ITCs 작은 이므로 희석 효과 저용량이이 작품에 사용 하는 ITC에 보다 작습니다. 또한, 많은 효소에 대 한 각 반응 낮은 밀리 그램 수량을 그램을 요구할 것 이다 그래서 비싼 또는 정화 하기 어려운 효소가이이 분석 결과의 사용을 금지 수 있습니다.
이 분석 결과 중 발생할 수 있는 문제 대부분의 적절 한 유지 보수 관련 및 ITC 반응 배의 청소. ITC는 안정적인 기준에 도달 하지 않습니다, 경우 이것은 종종 충분히 깨끗 한 없다는 반응 배 때문입니다. 단백질 반응 용기에 충실 하 고 열 속도 측정을 방해할 수 있기 때문에 ITC에 단백질을 사용 하는 경우에 각 실험 후 강한 세제를 사용 하는 것이 좋습니다. 깊은 대 청소, 클리닝 솔루션 (자료 테이블), 에탄올, 물과 청소 뒤 최대 12 h 55 ° C에서 incubated 50% 개미 산 성 솔루션 제거 됩니다 대부분 오염 물질.
마지막으로, 때문에 ITC 솔루션을 로드 한 후 equilibrate를 약 45 분 소요, 또는 한계 조건에서 상대적으로 불안정 한 효소의 활동 가능한 않을 수 있습니다. 효소가 비활성화 하는 경우 신호를 시간, 사용할 수 또는 감퇴 안정성 데이터를 얻기 위해 첫 번째 주사 후 너무 빠른 수 있습니다.
ITC 분석 결과 효소의 활동을 직접 측정 하기 때문에 다양 한 다른 용도를 확장할 수 있다. 예,이 분석 결과 억제 정, 기, 효소 활동 억제 물 농도 증가 함께 감소에 따라 결정 하는 억제제의 농도 증가 함께 할 수 있었다. 그림 5에서 보듯이이 프로토콜 고체 지원에 고정된 효소에 대 한 적응 될 수 있다. Nanofiber 막이이 작품에 사용 된 하지만 다른 고체 지원 또한 사용할 수 경우에 삽입 하 고 작은 액세스 튜브를 통해 그것을 제거 하는 방법을 개발할 수 있습니다. ITC 메서드 또한 효소 화학적으로 또는 유전으로 변경 되는 열 안정성 향상을 위해 또는 알 수 없는 샘플에 활성 효소의 양을 결정 하 게 확장 될 수 (즉, 그림 6 은 열 속도 피크 사이의 선형 관계 높이 효소 농도)입니다.
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Disclosures
없음
Acknowledgments
없음
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| a-Lactose | Fisher Scientific | unknown (too old) | 500g |
| Sodium Acetate, Anhydrous 99% min | Alfa Aesar | A13184-30 | 250g |
| Lactase | MP Bio | 100780 | 5g |
| Hydrocholric Acid Solution, 1N | Fisher Scientific | SA48-500 | 500mL |
| Benchtop Meter- pH | VWR | 89231-622 | |
| Ethanol 70% | Fisher Scientific | BP8231GAL | 1gallon |
| Micro-90 | Fisher Scientific | NC024628 | 1L (cleaning solution) |
References
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