Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Daglige lysbehandling med rødt lys til Regulate Candida albicans Biofilm vækst

Published: April 23, 2019 doi: 10.3791/59326
Automatic Translation
1, 2, 1
1Department of Cariology, Operative Dentistry and Dental Public Health, Indiana University School of Dentistry, 2Department of Restorative Dentistry, Ceará Federal University, School of Dentistry

Summary

Vi præsenterer her, en protokol for at vurdere resultaterne af rødt lys ansøgning på væksten af Candida albicans biofilm. En ikke-kohærent rødt lys enhed med bølgelængde på 635 nm og energi tæthed af 87.6 J·cm-2 blev anvendt i hele vækst af Candida albicans biofilm for 48 h.

Abstract

Vi præsenterer her, en protokol for at vurdere resultaterne af dagpenge røde lys behandling på væksten af Candida albicans biofilm. For at øge de planktoniske vækst af C. albicans SN425, voksede inoculums på Yeast Nitrogen Base medier. Til Biofilmdannelse af blev RPMI 1640 medier, som har høje koncentrationer af aminosyrer, anvendt til at hjælpe biofilm vækst. Biofilm på 48 h blev behandlet to gange om dagen for en periode på 1 min. med en ikke-kohærent lys enhed (rødt lys, bølgelængde = 635 nm; energitæthed = 87.6 J·cm-2). Som positiv kontrol (PC), 0,12% klorhexidin (CHX) blev anvendt, og som en negativ kontrol (NC), 0,89% NaCl blev anvendt til biofilm. Kolonidannende enheder (CFU), tør-vægt, opløselige og uopløselige exopolysaccharides var kvantificeret efter behandlinger. Kort, protokol præsenteres her er enkel, reproducerbare og giver svar vedrørende levedygtighed, tør-vægt og ekstracellulære polysaccharid beløb efter rødt lys behandling.

Introduction

Den øgede forekomst af diabetes, immunsupprimerende behandling programmer, HIV-smitte, AIDS-epidemien, invasive kliniske procedurer og bredspektret antibiotika forbruget i de seneste år har øget forekomst af Candida albicans relaterede sygdomme1,2. C. albicans infektioner er almindeligvis relateret til biofilm udvikling og kan forårsage kliniske manifestationer, som candidiasis eller systemiske manifestationer, som candidemia1,2. En af de mest bemærkelsesværdige virulens faktorer af biofilm vækst er ekstracellulære polysaccharid matrix etablering. Biofilmdannelse samarbejder for at øge modstanden mod eksisterende svampemidler, miljømæssige stress og vært immun mekanismer3.

Biofilm vækst af C. albicans begynder med den tidlige overholdelse af planktoniske celler til et substrat, efterfulgt af udbredelsen af gærceller gennem substrat overflade og hyphal vækst. Den sidste fase af biofilm vækst er den modning fase, hvori gær-lignende udvikling er undertrykt, den hyphal udvikling udvider, og den ekstracellulære matrix omslutter biofilm4. C. albicans exopolysaccharides (EPS) i matrixen interagere for at danne mannan-glucan komplekse5,6. Samspillet mellem exopolysaccharides er afgørende for forsvaret af biofilm mod narkotika7. Dermed, begrænsning af EPS fra C. albicans ekstracellulære matrix kunne støtte udviklingen af nye antibiofilm protokoller for oral candidiasis kontrol.

Light regulerer vækst, udvikling og opførsel af flere organismer8 og det er blevet anvendt som et antimikrobielt i Fotodynamisk antimikrobiel kemoterapi (PACT). STABILITETSPAGTEN gælder en synligt lys af en bestemt bølgelængde og en lys-absorberende photosensitizer9. Photosensitizers har dog problemer med gennemtrængende biofilm, forårsager lavere effekt10. Terapeutiske agenter manglende fuldt infiltrere biofilm er en grund til, at biofilm lejlighedsvis modstå traditionelle antimikrobiel behandling3,5. Hvis du vil deaktivere de vedlagte mikrobielle celler, skal antimikrobielle stoffer gennemsyre gennem den ekstracellulære matrix; ikke desto mindre, EPS kendetegner en diffusional hindring for sådanne molekyler ved at spørge deres niveau af transport i biofilm eller ved at påvirke svaret af antimikrobielle med matrixen, selv11.

I betragtning af ulemperne af PAGTEN, brugen af lys i sig selv fremstår som en værdifuld forbedring. Foreløbige data viste, at behandling med blåt lys to gange om dagen betydeligt hæmmede produktionen af EPS-uopløseligt i Streptococcus mutans biofilm. Af reduktionen af EPS-uopløseligt formindsket blåt lys biofilm vækst. Ikke desto mindre, resultaterne af lysbehandling ved hjælp af rødt lys i C. albicans biofilm er knappe. Dermed, formålet med denne undersøgelse var at vurdere i hvilken måde lysbehandling ved hjælp af rødt lys påvirker vækst og arrangement af C. albicans biofilm. Til to gange daglig behandling, vi tilpasset vores laboratorium tidligere protokoller9,12 for at give en let og reproducerbare biofilm model, der leverer svar vedrørende levedygtighed, tør-vægt og ekstracellulære polysaccharider beløb efter rødt lys behandling. Samme protokol kan bruges til at teste andre behandlingsformer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. forberedelse af kultur medier

  1. Forberede sabouraud dextrose agar (SDA). Suspendere 65 g af SDA suppleret med chloramphenicol (50 mg/L) i 1000 mL destilleret vand. Kog til at opløse mediet helt. Steriliseres ved autoklavering ved 15 PSI (121° C) i 30 min. afkøles til 45-50 ° C. Bland godt og hæld 20 mL af SDA i sterile Petri plader (størrelse: 100 mm x 15 mm).
  2. Forberede gæren nitrogen base (YNB) medium suppleret med 100 mM glucose ved at blande 6,7 g YNB og 18 g af dextrose til 1.000 mL i ultrarent vand. Bland med en omrører og sterilisere medium ved hjælp af et 0,22 µm vakuum filtersystem.
  3. Forberede RPMI ved at blande 10,4 g RPMI 1640 og 34.32 g 3-(N-morpholino) propanesulfonic syre (MOPPER) til 1.000 mL i ultrarent vand. Bland med en omrører uden varme og ph indstilles til 7 ved at tilføje 1 N NaOH (tilføje 2 g NaOH til 50 mL i ultrarent vand). Sterilisere medium ved hjælp af et 0,22 µm vakuum filtersystem.

2. før inokulum og inokulum

  1. Fjerne mikroorganisme C. albicans SN425 fra −80 ° C fryser og lad den tø op ved stuetemperatur. Seed 10 µL af stamkultur på petriskåle, der indeholder SDA suppleret med chloramphenicol (50 mg/L). Inkuber petriskåle aerobt ved 37 ° C i 48 timer.
  2. Efter 48 h inkubation, tilsættes 10 kolonier af C. albicans 10 mL af gær nitrogen base (YNB) medium suppleret med 100 mM glukose og inkuberes aerobt ved 37 ° C i 16 h til pre-inokulat.
  3. Andel (1 mL af starteren kultur fortyndet i 9 mL af YNB) efter inkubation for 16 h, forberede inoculums ved at fortynde starter kulturer i frisk YNB medium suppleret med 100 mM glukose i en 1:10. Måle det indledende optisk densitet (OD) ved 540 nm.
  4. Inkubér inoculums aerobt ved 37 ° C i 8 timer, indtil stammer nå midten log vækstfase og måle den endelige OD ved 540 nm. Fratræk den endelige OD fra den oprindelige OD at kontrollere, om inoculums OD er på midten log vækstfase (8 h, baseret på vækstkurver i figur 1).
  5. For at nå et inokulum med 107 celler mL-1, centrifugeres inokulum i 5 min på 5.500 x g, supernatanten og koncentrere inokulum til halvdelen af mængden af rørene.

3. Biofilmdannelse og lysbehandling

  1. Der tilsættes 1 mL af inokulat brønde af en 24-godt polystyren plade. Inkuber aerobt ved 37 ° C i 90 min. at tillader celle vedhæftning til bunden af brøndene.
  2. Bruge en ikke-kohærent røde lys (Se Tabel af materialer) som lyskilde med bølgelængde på 635 ± 10 nm og en fast output-effekt af 1.460 mW cm−2.
  3. Bruge en power meter til at måle effekttæthed af lyset. Strålingseksponering anvendes er 87.6 J cm-2, svarende til ca 1 min eksponering. Brug formel energitæthed (J/cm2) = effekttæthed (W/cm2) x bestråling tid (s). Anvende en afstand af 5 mm mellem lyskilden og biofilm til at undgå opvarmning prøven.
  4. Behandling af positive kontrol biofilm med 0,12% klorhexidin for 1 min og negativ kontrol biofilm med 0,89% NaCl i 1 minut.
  5. Efter behandlinger, vaske alle biofilm to gange med 0,89% NaCl opløsning.
  6. Der tilsættes 1 mL RPMI 1640 bufferet med 3-(N-morpholino) propanesulfonic syre (MOPPER) ved pH 7 til biofilm og inkuberes plader ved 37 ° C natten over.
  7. Om morgenen, gælder de samme behandlinger som trin 3.2 til 3.6, vasker biofilm to gange med 0,89% NaCl, tilføje nye RPMI bufferet med MOPPER (1 mL, pH 7) brønde og Inkuber aerobt ved 37 ° C.
  8. På den samme dag, efter 6 h, udsætte biofilm til rødt lys. Behandling af positive kontrol biofilm med 0,12% klorhexidin for 1 min og negativ kontrol biofilm med 0,89% NaCl i 1 minut. Efter behandlinger, vaske biofilm to gange med 0,89% NaCl opløsning.
  9. Gentag trin 3,2-3,8 indtil at opnå 48 h af biofilm udvikling.
    Bemærk: Dybest set, en behandling vil ske i morgen og anden, der vil ske om eftermiddagen samme dag (6 h fra hinanden).

4. behandling

  1. Der tilsættes 1 mL sterilt 0,89% NaCl til godt fjerne biofilm ved at skrabe det fra de godt bruge en pipette tip. Tilføje de fjernet biofilm til en steril tube.
  2. Tilføje en anden 1 mL sterilt 0,89% NaCl til brønden. Skrab det igen og tilføje suspension til det samme rør for en samlet maengde paa 2 mL.
  3. Kolonidannende enheder (CFU)
    1. Energisk vortex biofilm suspension for 1 min. Fra biofilm suspension, skal du bruge en alikvot af 0,1 mL til seriel fortynding.
    2. Fortynd biofilm suspension fra 10-1 til 10-4 i 0,89% NaCl opløsning.
    3. Seed 50 μL af hver fortynding til SDA-plader og inkuberes plader ved 37 ° C i 48 timer.
    4. Kolonierne og anvende den formel CFU/mL = antallet af kolonier x 10n / q (n = fortynding; q = seedede volumen).
  4. Tørvægt
    1. Vejer og etiket microcentrifuge rør.
    2. Fra biofilm suspension, skal du bruge 0,1 mL til bestemmelse af tør vægt (biomasse).
    3. Der tilsættes 1 mL af absolut ethanol til en alikvot af 0,1 mL af biofilm og opbevar den ved-20 ° C i 18 h. Efter 18 h, centrifugeres ved 10.000 x g i 10 min.
    4. Supernatanten, placere rør på en ekssikkator til tør prøverne i en uge og vejer microcentrifuge rør igen.
  5. Vandopløselige polysakkarider (WSPs) og alkali-opløselige polysakkarider (ASP)
    1. Fra biofilm suspension, energisk vortex resten af volumen (1,8 mL) til 1 min og centrifugeres ved 5.500 × g i 10 min. ved 4 ° C. Gemme supernatanten i en ny tube og bundfaldet to gange med celler, der indeholder de uopløselige bestanddele i det ekstracellulære matrix med sterilt ultrarent vand (5.500 × gi 10 min. ved 4 ° C).
    2. Genopslæmmes uopløselige indholdet på 1,8 mL sterilt ultrarent vand.
    3. Vandopløselige polysakkarider (WSPs)
      Bemærk: Udføre dette eksperiment på et stinkskab.
      1. Fra de lagrede supernatanten, reserve 1 mL for kvantitativ bestemmelse af vandopløseligt polysakkarider (WSPs).
      2. Homogeniseres lagrede supernatanten for 1 min. Derefter overføre til sterile rør og tilføje 2,5 mængder af 95% ethanol. Gemme rør til 18 h ved-20 ° C for WSPs nedbør.
      3. Efter 18 h, centrifugeres rør på 9.500 x g i 20 min. ved 4 ° C. Efter centrifugering, slette analysere.
      4. Vaske prøver tre gange med 75% ethanol og lufttørre pellets. Genopslæmmes pellet med 1 mL sterilt ultrarent vand og kvantificere WSP ved hjælp af metoden phenol-svovlsyre syre.
      5. Bruge 0,1% glukose (0,01 g glukose til 10 mL i ultrarent vand) til standardkurven (0, 2,5, 5, 10, 15, 20 og 25 µL af glucose pr tube).
      6. Tilføje 200 µL af 5% phenol (2,7 mL 90% fenol til 47.3 mL i ultrarent vand) til et glasrør, bestående af 200 µL af prøven eller standardkurven punkt (i tre eksemplarer pr. prøve) og bland forsigtigt.
      7. Tilsæt 1 mL svovlsyre til røret og bland. Vente 20 min for reaktion og måle de prøver, der bruger et spektrofotometer (490 nm).
    4. Alkali-opløselige polysakkarider (ASP)
      Bemærk: Udføre dette eksperiment i et stinkskab.
      1. Adskille 1 mL til bestemmelse af ASP fra beløbet uopløselige re suspenderet. Der centrifugeres delprøver af hver biofilm suspension (13.000 x gi 10 min. ved 4 ° C).
      2. Forsigtigt fjerne supernatanten af hver tube. Derefter placere prøverne på en vakuum koncentrator tørre pellets.
      3. Pellets og der tilsættes 300 µL 1 N NaOH (2 g NaOH til 50 mL i ultrarent vand) pr 1 mg af tørvægt. Inkuber dem i 2 timer ved 37 ° C og derefter centrifugeres ved 13.000 × g i 10 min.
      4. Forsigtigt indsamle analysere med en pipette og overførsel til microcentrifuge rør, opretholde pelleten.
      5. Igen, tilføje et lige saa stort volumen af 1 N NaOH til rør bestående af piller, og Gentag de samme trin som ovenfor for udvinding af ASP.
      6. Efter inkubation i 2 h, centrifugeres prøver (13.000 x g i 10 min.), omhyggeligt indsamle analysere og tilføje til de tidligere indsamlede analysere.
      7. For det tredje ekstraktion, Gentag de samme trin som ovenfor, men denne gang, ikke Inkuber prøver for 2 h før centrifugering.
      8. Bagefter, tilføje tre bind af 95% ethanol til hver prøve. Derefter, lagerføre prøver på −20 ° C til 18 h fældningen af ASP.
      9. Centrifugeres rør (9.500 × g i 20 min. ved 4 ° C) og kassér analysere.
      10. Vask hver pellet tre gange med 75% ethanol og lufttørre (samme procedurer gjorde for WSP). Genopslæmmes pellets i tilsvarende samlede mængde af den første ekstraktion med 1 N NaOH.
      11. Læs prøver til kvantificering af ASP ved hjælp af phenol-svovlsyre (samme som for WSP analyse).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figur 2 viser resultaterne af Log10 CFU/mL af C. albicans efter diæten behandlinger med rødt lys for 1 min. Red light betydeligt reduceret Log10 CFU/mL sammenlignet med NC (p = 0,004). Figur 3 præsenterer resultaterne af biomassen (mg) af C. albicans biofilm efter daglige behandlinger. Alle behandlede grupper viste reduktion af biomassen i forhold til NC (p = 0.000) og det røde lys behandlede grupper præsenteret tilsvarende reduktion af biomasse som observeret i pc'en. Figur 4 og figur 5 viser de ringere beløb af C. albicans EPS-opløselige og EPS-uopløseligt i PC sammenlignet med NC (p = 0.000). Selv om ikke statistisk signifikant, diæten anvendelse af rødt lys for 1 min til C. albicans biofilm numerisk formindsket mængder af EPS-opløselige og EPS-uopløselige.

Figure 1
Figur 1 . Vækstkurven af C. albicans stamme SN 425. Planktoniske kultur foregik i YNB medium suppleret med 100 mM af glukose og inkuberes ved 37 ° C. Det optisk densitet (OD ved 540 nm) og Log10 CFU/mL blev bestemt over tid. Standardafvigelsen er vist. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 2
Figur 2 . Middelværdi og standard afvigelser af Log10 CFU/mL af C. albicans. Vurderinger blev foretaget mellem behandling med rødt lys, to gange om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0,89% NaCl (NC). Lig bogstaver repræsenterer statistiske ligheden mellem grupperne (p > 0,05). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 3
Figur 3 . Middelværdi og standard afvigelser af tør-vægt (mg) af C. albicans. Vurderinger blev foretaget mellem behandling med rødt lys, to gange om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0,89% NaCl (NC). Lig bogstaver repræsenterer statistiske ligheden mellem grupperne (p > 0,05). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 4
Figur 4 . Middelværdi og standard afvigelser af EPS-opløselige beløb i C. albicans biofilm (µg/mg dry-weight). Sammenligningerne blev foretaget mellem behandling med rødt lys, to gange om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0,89% NaCl (NC). Lig bogstaver repræsenterer statistiske ligheden mellem grupperne (p < 0,001). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Figure 5
Figur 5 . Middelværdi og standard afvigelser af EPS-uopløselige indhold i C. albicans biofilm (µg/mg dry-weight). Vurderinger blev foretaget mellem behandling med rødt lys, to gange om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0,89% NaCl (NC). Lig bogstaver repræsenterer statistiske ligheden mellem grupperne (p < 0,001). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De mest kritiske trin til vellykket dyrkning af C. albicans biofilm er: 1) at gøre før inokulat og inokulum i YNB medium suppleret med 100 mM glucose; 2) at vente 90 min for vedhæftning fase og omhyggeligt vaskes to gange brønde med 0,89% NaCl til at fjerne ikke-overholdt celler; og 3) at føje RPMI medium til overholdt cellerne til at starte Biofilmdannelse, da RPMI vil stimulere hyfer vækst. Aneuploidies kan opstå, når dyrkning af C. albicans. Det er derfor vigtigt ikke at bruge kolonier, der er mere end syv dage gammel, ikke at gemme plader ved 4° C og ikke til re streak celler fra eksisterende plader. Ligeledes skal stammer bruges før 18 timer af natten vækst13.

En undersøgelse begrænsning er, at det var udført i vitro. Mens in vitro undersøgelser har stærkt øget forståelse af biologi af biofilm, repræsenterer de ikke netop in vivo forhold14. Men, in vitro-undersøgelser giver high throughput screening ud over at være en billig og enkel metode14 at besvare spørgsmål vedrørende nye antibiofilm behandlingsformer. At vælge den korrekte dyrkningsmedier til hver fase af biofilm udvikling er et vigtigt skridt til succes af metoden. RPMI 1640 er en næringsrig medium, der har aminosyrer og simulerer sammensætningen af menneskelige væsker15. RPMI 1640 indeholder L-glutamin, L-arginin, L-asparagin foruden vitaminer og uorganiske salte. Ikke desto mindre har YNB medier en forhøjet mængde af glukose (18 g/L) i forhold til RPMI 1640 medium (2 g/L glukose). Høje glukose indhold er blevet beskrevet for at øge de planktoniske vækst af Candida arter16. Derimod vil eksistensen af højere koncentrationer af aminosyrer hjælpe biofilm vækst i RPMI medium i forhold til YNB medium16. Kvalitative data anvender SEM micrographs viste, at den strukturelle design af C. albicans biofilm i RPMI præsenterer en kompleks organisation med en solid vækst af gær med ramifying hyfer, spirende elementer og bud ar med en rigelig ekstracellulær matrix16. Sådanne resultater er i overensstemmelse med en tidligere undersøgelse, der rapporterede, at RPMI 1640 augmented hyphal dannelse i C. albicans biofilm15. Disse resultater viser forskelle i substrat udnyttelse af Candida i hele forskellige biofilm vækst faser og vise betydningen af medieskift under planktoniske vækst og biofilm dannelse.

Valg af den korrekte temperatur og pH at dyrke C. albicans biofilm er også vigtigt at udføre metoden med passende dannelsen af hyfer. C. albicans forpligter sig konverteringen fra blastospores til filamenter i reaktion på betingelser, der efterligner det miljø af pattedyr vært væv17. Disse betingelser omfatter vokser ved kropstemperatur (37 ° C) og på neutral pH17, og det er grunden til hvorfor pH i RPMI medium er justeret til 7.

De metoder, der anvendes i denne undersøgelse er betydelig, da biofilm af C. albicans SN 425 blev karakteriseret før12, viser for at have store mængder af EPS-opløselige og -uopløseligt, hvilket gør det til en pålidelig metode til at analysere resultatet af lys på de ekstracellulære polysaccharider. Endvidere, de samme ikke-kohærent lys enhed anvendt i forsøgene blev anvendt til bakteriel planktoniske suspensioner18 og biofilm9, og den største fordel ved denne enhed er nedsættelsen af behandlingstiden, hvad gør de enheden mere realistisk for kliniske applikationer18. Analyse af daglige lysbehandling anvendes til C. albicans biofilm er betydelig, da den metode, der anvendes i den foreliggende undersøgelse simulerer en behandling, der er hurtigt og let kan gøres ved at patienten derhjemme.

Rødt lys daglig behandling reduceret meningsfuldt C. albicans rentable colony count og biofilm biomasser. Flere undersøgelser kan prøve en kombination af behandlinger, begyndende med lysbehandling og senere anvende aktuelle svampedræbende. Denne strategi kan hjælpe med at disorganizing den ekstracellulære matrix afskærmning C. albicans biofilm, tillader bedre stof infiltration gennem biofilm at nå og endelig udrydde C. albicans celler. I betragtning af begrænsningerne af denne in vitro-eksperiment, brug af rødt lys for 1 min kan hjælpe som en adjuvant til emnet svampemidler på behandling af oral candidiasis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne har ikke noget at oplyse.

Acknowledgments

Vi takker Dr. Paula da Silveira, Dr. Cecilia Atem Gonçalves de Araújo Costa, Shawn M. Maule, Shane M. Maule, Dr. Hanne N. Janal og Dr. Iriana Zanin for udviklingen af denne undersøgelse. Vi anerkender også Dr. Alexander D. Johnson (UCSF) for at donere den stamme, der er analyseret i denne undersøgelse.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Clorhexidine 20%  Sigma-Aldrich C9394
Dextrose (D-Glucose) Anhydroous Fisher Chemical D16-500
Ethanol 200 proof Decon Laboratories DSP-MD.43
LumaCare LC-122 A  LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, USA 
NaCl  Fisher Chemical S641-500
NaOH  Fisher Bioreagents  BP 359-500
Phenol 5% Milipore Sigma 843984
RPMI 1640 buffered with 3-(N-morpholino) Sigma R7755
Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol Acumedia 7306A
Sulfuric acid  Fisher Chemical SA200-1
Yeast nitrogen base  Difco DF0392-15-9
3-(N-morpholino)propanesulfonic acid MOPS Sigma-Aldrich M1254
 24-well polystyrene plate  Falcon 353935

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options. Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).
  2. Harriott, M. M., Noverr, M. C. Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).
  3. Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. Overcoming antifungal resistance. Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).
  4. Finkel, J. S., Mitchell, A. P. Genetic control of Candida albicans biofilm development. Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).
  5. Zarnowski, R., et al. Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia. MBio. 5, e013333 (2014).
  6. Mitchell, K. F., et al. Community participation in biofilm matrix assembly and function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).
  7. Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions. PLoS Pathogens. 12, e1005828 (2016).
  8. Dai, T., et al. Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).
  9. de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development. PLoS One. 10 (7), e0131941 (2015).
  10. Fontana, C. R., et al. The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms. Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).
  11. Donlan, R. M., Costerton, J. W. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).
  12. Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology. Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372 (2017).
  13. Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms. Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60 (2018).
  14. Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection. Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).
  15. Kucharíková, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujdáková, H. Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin. Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).
  16. Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development. Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).
  17. Kadosh, D., Johnson, A. D. Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis. Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).
  18. Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device. Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).

Tags

Immunologi og infektion spørgsmålet 146 biofilm Candida albicans lysbehandling rødt lys ekstracellulære matrix polyssacharides
Daglige lysbehandling med rødt lys til Regulate <em>Candida albicans</em> Biofilm vækst
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Panariello, B. H. D., Garcia, B. A., … More

Panariello, B. H. D., Garcia, B. A., Duarte, S. Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth. J. Vis. Exp. (146), e59326, doi:10.3791/59326 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter