Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Daglig fototerapi med rødt lys Regulate Candida albicans Biofilm vekst

Published: April 23, 2019 doi: 10.3791/59326
Automatic Translation
1, 2, 1
1Department of Cariology, Operative Dentistry and Dental Public Health, Indiana University School of Dentistry, 2Department of Restorative Dentistry, Ceará Federal University, School of Dentistry

Summary

Her presenterer vi en protokoll for å vurdere utfallet av rødt lys program på vekst av Candida albicans biofilm. En ikke-sammenhengende rødt lys enhet med bølgelengden til 635 nm og energi tetthet av 87.6 J·cm-2 ble brukt gjennom vekst av Candida albicans biofilm for 48 timer.

Abstract

Her presenterer vi en protokoll for å vurdere utfallet av kostgodtgjørelse rødt lys behandling på veksten av Candida albicans biofilm. For å øke planktoniske veksten av C. albicans SN425, vokste inoculums på gjær Nitrogen Base media. For biofilm formasjon, ble RPMI 1640 media, som har høye konsentrasjoner av aminosyrer, brukt til å hjelpe biofilm vekst. Biofilm 48 h ble behandlet to ganger om dagen for en periode på 1 min med en ikke-sammenhengende lys enhet (rødt lys, bølgelengde = 635 nm; energi tetthet = 87.6 J·cm-2). Som en positiv kontroll (PC), 0,12% chlorhexidine (CHX) ble brukt, og som en negativ kontroll (NC), 0.89% NaCl ble brukt av biofilm. Kolonien danner enheter (CFU), tørr vekt, løselig og uløselig exopolysaccharides kvantifisert etter behandlinger. Kort, protokollen presenteres her er enkel, reproduserbare og gir svar om levedyktighet, tørr vekt og ekstracellulære polysakkarid beløp etter rødt lys behandling.

Introduction

Den økte forekomsten av diabetes, suppressive musikkterapi anvendelser, HIV-smitte, AIDS-epidemien, invasiv kliniske prosedyrer og bredspektret antibiotika forbruk i de siste årene har økte forekomsten av Candida albicans relaterte sykdommer1,2. C. albicans infeksjoner er vanligvis knyttet til biofilm utvikling og kan forårsake kliniske manifestasjoner, som candidiasis eller systemisk manifestasjoner, for eksempel candidemia1,2. En av de mest bemerkelsesverdige virulens faktorene biofilm vekst er ekstracellulære polysakkarid matrix etablering. Biofilm formasjon samarbeider for å øke motstanden mot eksisterende antifungal medisiner, miljøbelastning og vert immun mekanismer3.

Biofilm veksten av C. albicans begynner med tidlig tilslutning planktoniske celleområde til et substrat etterfulgt av spredning av gjærceller gjennom substrat overflate og hyphal vekst. Den siste fasen av biofilm vekst er modning fase, der gjær-lignende utvikling er undertrykt hyphal utviklingen utvider og den ekstracellulære matrisen omslutter biofilm4. C. albicans exopolysaccharides (EPS) i matrisen samhandle for å danne mannan – Glukan komplekse5,6. Samspillet av exopolysaccharides er avgjørende for forsvaret av biofilm mot narkotika7. Derfor kan reduksjon av EPS C. albicans ekstracellulær matrix støtte utviklingen av nye antibiofilm protokoller for muntlig candidiasis kontroll.

Lys regulerer vekst, utvikling og atferd av flere organismer8 , og det har vært brukt som en antimikrobiell i Fotodynamisk antimikrobiell kjemoterapi (pakt). PAKTEN gjelder en synlig lys av en bestemt bølgelengde og en lys-absorberende photosensitizer9. Men har photosensitizers vanskeligheter i gjennomtrengende biofilm, forårsaker lavere effekt10. Svikt i terapeutisk agenter å fullt infiltrere biofilm er en grunn til at biofilm sporadisk motstå tradisjonell antimikrobielle terapi3,5. For å deaktivere vedlagte mikrobiell cellene, må poesi aksent gjennomsyre gjennom ekstracellulær matrix; likevel karakteriserer EPS et diffusional hinder for slike molekyler ved å spørre deres nivå av transport inn i biofilm eller påvirke responsen av antimikrobielle med matrix seg11.

Vurderer ulempene av PAKTEN, bruk av lys selv fremstår som en verdifull forbedring. Foreløpige data viste at behandling med blå lys to ganger om dagen betydelig hemmet produksjonen av EPS-uløselig i Streptococcus mutans biofilm. Ved reduksjon av EPS-uløselig, blått lys redusert biofilm vekst. Likevel er utfallet av lysbehandling bruker rødt lys i C. albicans biofilm knappe. Dermed var målet med undersøkelsen å evaluere i hvilken måte fototerapi bruker rødt lys påvirker vekst og ordning av C. albicans biofilm. For to ganger daglig behandling, vi tilpasset vårt laboratorium tidligere protokoller9,12 for å gi en lett og reproduserbar biofilm modell som leverer svar om levedyktighet, tørr vekt og ekstracellulære polysakkarider beløpene etter rødt lys behandling. Samme protokoll kan brukes for å teste andre terapier.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. utarbeidelse av kultur medier

  1. Forberede sabouraud druesukker agar (SDA). Suspendere 65 g SDA med chloramphenicol (50 mg/L) i 1000 mL destillert vann. Kok for å oppløse mediet helt. Sterilisere av autoklavering på 15 PSI (121° C) i 30 min. kult å 45-50 ° C. Bland godt og hell 20 mL SDA i sterilt Petri-platene (størrelse: 100 x 15 mm).
  2. Forberede gjær nitrogen base (YNB) medium supplert med 100 mM glukose ved å blande 6,7 g YNB og 18 g druesukker til 1000 mL ultrapure vann. Bland med en rørestang og sterilisere mediet bruker et 0.22 µm vakuum filtersystem.
  3. Utarbeide RPMI ved å blande 10.4 g RPMI 1640 og 34.32 g 3-(N-morpholino) propanesulfonic syre (MOPPER) til 1000 mL ultrapure vann. Bland i en rørestang uten varme og justere pH 7 ved å legge 1 N NaOH (legge 2 g av NaOH til 50 mL ultrapure vann). Sterilisere mediet bruker et 0.22 µm vakuum filtersystem.

2. før inoculum og inoculum

  1. Fjern microorganism C. albicans SN425 fra −80 ° C fryseren og la det tine ved omgivelsestemperatur. Frø 10 µL av lager kultur Petri retter som inneholder SDA med chloramphenicol (50 mg/L). Inkuber Petri retter din aerobt ved 37 ° C i 48 timer.
  2. Etter 48 timer med inkubering, legge til 10 kolonier av C. albicans 10 mL av gjær nitrogen base (YNB) medium supplert med 100 mM glukose og ruge din aerobt på 37 ° C 16 h for den før inoculum.
  3. Etter rugende for 16 h, forberede inoculums fortynne startkulturer til frisk YNB medium supplert med 100 mM glukose i en 1:10 andel (1 mL av startkulturer utvannet i 9 mL av YNB). Måle første optisk densitet (OD) på 540 nm.
  4. Inkuber inoculums din aerobt på 37 ° C 8 h til stammene kommer midt Logg vekstfase og måle siste OD på 540 nm. Trekke endelige OD fra første OD å kontrollere om OD av inoculums er på midten av Logg vekstfase (8 h, basert på vekst kurvene i figur 1).
  5. For å nå en inoculum med 107 celler mL-1, sentrifuge inoculum for 5 min 5500 x g, forkaste nedbryting og konsentrere inoculum halvparten av volumet av rør.

3. Biofilm dannelse og fototerapi

  1. Legg 1 mL av inoculum fordelt av en 24-vel polystyren plate. Inkuber din aerobt ved 37 ° C i 90 min tillate celle vedheft til bunnen av brønnene.
  2. Bruke en ikke-sammenhengende rødt lys (se Tabell for materiale) som lyskilde med bølgelengde på 635 ± 10 nm og en fast utgangseffekt på 1 460 mW cm2.
  3. Bruk en makt meter for å måle tetthet av lys. Strålende eksponering brukt er 87.6 J cm-2, tilsvarende ca 1 min eksponering. Bruk formel energi tetthet (J/cm2) = tetthet (W/cm2) x bestråling tid (s). Bruke en avstand på 5 mm mellom lyskilden og biofilm å unngå oppvarming prøven.
  4. Behandle positiv kontroll biofilm med 0,12% chlorhexidine for 1 min og negativ kontroll biofilm 0.89% NaCl for 1 min.
  5. Etter behandlinger, vaske alle biofilm to ganger med 0.89% NaCl løsning.
  6. Legge 1 mL av RPMI 1640 buffered med 3-(N-morpholino) propanesulfonic syre (MOPPER) ved pH 7 å biofilm og Inkuber platene på 37 ° C over natten.
  7. I morgen, gjelder de samme behandlingene som trinn 3.2 å 3.6, vaske biofilm to ganger med 0.89% NaCl, legge til nye RPMI buffered med MOPPER (1 mL, pH 7) fordelt og ruge din aerobt på 37 ° C.
  8. På samme dag, etter 6 h og utsette biofilm til rødt lys. Behandle positiv kontroll biofilm med 0,12% chlorhexidine for 1 min og negativ kontroll biofilm 0.89% NaCl for 1 min. Etter behandlinger, vaske biofilm to ganger med 0.89% NaCl løsning.
  9. Gjenta trinnene 3.2-3.8 til å oppnå 48t biofilm utvikling.
    Merk: I utgangspunktet en behandling vil skje i morgen og annenen vil skje på ettermiddagen på samme dag (6 h fra hverandre).

4. prosessering

  1. Legge 1 mL steril 0.89% NaCl til brønnen fjerner biofilm ved å skrape den fra det godt med en pipette tips. Legg den fjernet biofilm i et sterilt rør.
  2. Legge til en annen 1 mL steril 0.89% NaCl til brønnen. Skrap det igjen og Legg til suspensjon samme rør for et totalt volum på 2 mL.
  3. Colony-forming enheter (CFU)
    1. Kraftig vortex biofilm suspensjon for 1 min. Bruke en aliquot på 0,1 mL for seriell fortynning biofilm-hjuloppheng.
    2. Fortynne biofilm suspensjon fra 10-1 til 10-4 i 0.89% NaCl løsning.
    3. Frø 50 μL av hver fortynning til SDA plater og ruge platene på 37 ° C i 48 timer.
    4. Telle koloniene og bruke formelen CFU/mL = antall kolonier x 10n / q (n = fortynning; q = seeded volum).
  4. Tørr vekt
    1. Veie og etiketten microcentrifuge rør.
    2. Bruke 0,1 mL for tørr vekt (biomasse) besluttsomhet biofilm-hjuloppheng.
    3. Legge 1 mL av absolutt etanol til en aliquot på 0,1 mL av biofilm og lagre den på 20 ° C 18 h. Etter 18 h, sentrifuge 10.000 x g i 10 min.
    4. Forkaste nedbryting, plassere rør på en desiccator tørke prøvene for en uke og veie microcentrifuge rør igjen.
  5. Vannløselige polysakkarider (WSPs) og lut-løselig polysakkarider (ASPer)
    1. Fra biofilm suspensjon, kraftig vortex resten av volumet (1,8 mL) 1 minutt og sentrifuge 5500 × g for 10 min på 4 ° C. Lagre nedbryting i en ny tube og vask bunnfall to ganger med celler som inneholder uløselig spesialpreparatets ekstracellulær matrix med sterilt ultrapure vann (5500 × g, 10 minutter til 4 ° C).
    2. Nytt suspendere uløselig innholdet på 1,8 mL steril ultrapure vann.
    3. Vannløselige polysakkarider (WSPs)
      Merk: Utføre dette eksperimentet på avtrekksvifte.
      1. Fra lagrede nedbryting, reservere 1 mL for kvantifisering av vannløselige polysakkarider (WSPs).
      2. Homogenize lagret nedbryting for 1 min. Deretter overføre til sterilt rør og legge til 2,5 mengder 95% etanol. Lagre rør for 18 h på 20 ° C for WSPs nedbør.
      3. Etter 18 h, sentrifuge rør 9500 x g for 20 min på 4 ° C. Etter sentrifugering, forkaste supernatants.
      4. Vask prøvene tre ganger med 75% etanol og air-dry pellets. Nytt utsette pellets med 1 mL steril ultrapure vann, og kvantifisere WSP med fenol-sulfuric syre metoden.
      5. Bruke 0,1% glukose (0,01 g av glukose til 10 mL ultrapure vann) for standardkurven (0, 2.5, 5, 10, 15, 20 og 25 µL av glukose per rør).
      6. Legge til 200 µL av 5% fenol (2,7 mL av 90% fenol til 47.3 mL ultrapure vann) glassrør bestående av 200 µL av utvalget eller standardkurve punkt (i tre eksemplarer per prøve) og bland forsiktig.
      7. Legg 1 mL av svovelsyre til røret og bland. Vente 20 minutter for reaksjonen og måle eksemplene bruker et spektrofotometer (490 nm).
    4. Lut-løselig polysakkarider (ASPer)
      Merk: Utfør dette eksperimentet i avtrekksvifte.
      1. Fra uløselig re suspendert beløpet, Skill 1 mL for fastsettelse av ASPer. Sentrifuge dele hver biofilm-hjuloppheng (13 000 x g, i 10 minutter på 4 ° C).
      2. Forsiktig fjerne nedbryting av hver. Plass eksemplene på en vakuum konsentrator tørke pellets.
      3. Veie pellets og legger 300 µL av 1 N NaOH (2 g av NaOH til 50 mL ultrapure vann) per 1 mg av tørr vekt. Inkuber dem for 2 h på 37 ° C og deretter virvel 13.000 × g i 10 min.
      4. Forsiktig samle supernatants med Pipetter og overføring til microcentrifuge rør, opprettholde pellet.
      5. Igjen, legge til en lik mengde 1 N NaOH til rør bestående av pellets, og gjenta de samme trinnene som ovenfor for utvinning av ASP.
      6. Etter inkubasjon for 2t sentrifuge prøvene (13 000 x g i 10 min), nøye samle supernatants og legge til de tidligere innsamlede supernatants.
      7. For tredje utvinning, gjenta de samme trinnene som ovenfor, men denne gangen, ikke ruge prøvene for 2t før sentrifugering.
      8. Etterpå legger til tre bind med 95% etanol hvert utvalg. Deretter lager eksemplene på −20 ° C 18 h for nedbør av ASP.
      9. Sentrifuge rør (9500 × g for 20 min på 4 ° C) og kast supernatants.
      10. Vask hver pellet tre ganger med 75% etanol og air-dry (samme prosedyrer gjorde for WSP). Nytt avbryte pellets lik totale volumet av den første ekstraksjonen med 1 N NaOH.
      11. Les eksempler for kvantifisering av ASP med fenol-sulfuric (samme som for WSP analyse).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Figur 2 viser resultatene av Logg10 CFU/mL av C. albicans etter kostgodtgjørelse behandlinger med rødt lys for 1 min. rødt betydelig redusert Logg10 CFU/mL sammenlignet med NC (p = 0.004). Figur 3 viser resultatene av biomasse (mg) av C. albicans biofilm etter daglig behandlinger. Alle behandlet grupper viste reduksjon av biomasse sammenlignet med NC (p = 0.000) og det røde lyset behandlet grupper presentert tilsvarende reduksjon av biomasse til som observert i PC. Figur 4 og figur 5 viser dårligere mengder C. albicans EPS-løselig og EPS-uløselig i PC sammenlignet med NC (p = 0.000). Selv om ikke statistisk redusert betydelig, kostgodtgjørelse anvendelse av rødt lys for 1 min til C. albicans biofilm numerisk mengder EPS-løselig og EPS-uløselig.

Figure 1
Figur 1 . Vekstkurve av C. albicans belastning SN 425. Planktoniske kultur ble gjort i YNB medium supplert med 100 mM av glukose og ruges på 37 ° C. Optisk densitet (OD på 540 nm) og Log10 CFU/mL var bestemt over tid. Standardavvik vises. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 2
Figur 2 . Middelverdi og avvik Logg10 CFU/mL C. albicans. Vurderinger ble gjort mellom behandlingen med rødt to ganger om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0.89% NaCl (NC). Lik bokstaver representerer statistisk likheten mellom grupper (p > 0,05). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 3
Figur 3 . Middelverdi og avvik av tørr vekt (mg) av C. albicans. Vurderinger ble gjort mellom behandlingen med rødt to ganger om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0.89% NaCl (NC). Lik bokstaver representerer statistisk likheten mellom grupper (p > 0,05). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 4
Figur 4 . Middelverdi og avvik av EPS-løselig beløp i C. albicans biofilm (µg/mg av tørr). Sammenligninger ble gjort mellom behandlingen med rødt to ganger om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0.89% NaCl (NC). Lik bokstaver representerer statistisk likheten mellom grupper (p < 0,001). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figure 5
Figur 5 . Middelverdi og avvik av EPS-uløselig innhold i C. albicans biofilm (µg/mg av tørr). Vurderinger ble gjort mellom behandlingen med rødt to ganger om dagen og controls-0.12% CHX (PC) og 0.89% NaCl (NC). Lik bokstaver representerer statistisk likheten mellom grupper (p < 0,001). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

De viktigste trinnene for vellykket dyrking av C. albicans biofilm er: 1) å gjøre det før inoculum og inoculum i YNB medium supplert med 100 mM glukose; 2) til 90 min venter vedheft fasen og nøye vask dobbelt brønnene 0.89% NaCl fjerne ikke overholdt celler. og 3) til RPMI medium til adhered cellene å starte biofilm formasjon, siden RPMI vil stimulere hyfer vekst. Aneuploidies kan oppstå når dyrking C. albicans. Det er derfor viktig ikke å bruke kolonier som er mer enn syv dager gammel, ikke å lagre plater på 4° C, og ikke nytt strek celler fra eksisterende plater. Likeledes bør stammer brukes før 18 timer natten vekst13.

En studie begrensning er at det ble utført i vitro. Mens in vitro studier har kraftig økt forståelse av biologi biofilm, representerer de nettopp ikke i vivo forhold14. Men gi i vitro tester høy gjennomstrømming screening er en billig og enkel metode14 å svare på spørsmål om nye antibiofilm terapier. Velge riktig kultur media for hver fase av biofilm utvikling er et viktig skritt for å lykkes med metoden. RPMI 1640 er et næringsrikt medium som har aminosyrer og simulerer sammensetningen av menneskelig væske15. RPMI 1640 inneholder L-glutamin, L-arginin, L-asparagine i tillegg vitaminer og uorganisk salter. Likevel har YNB media en hevet mengde glukose (18 g/L) sammenlignet med RPMI 1640 middels (2 g/L glukose). Høy glukose innholdet har blitt beskrevet for å øke planktoniske vekst av Candida arter16. Eksistensen av høyere konsentrasjoner av aminosyrer vil derimot hjelpe biofilm vekst i RPMI medium sammenlignet YNB middels16. Kvalitative data bruke SEM micrographs viste at den strukturelle utformingen av C. albicans biofilm i RPMI presenterer en kompleks organisasjon med en solid vekst av gjær med ramifying hyfer, spirende elementer og bud arr med en rikelig ekstracellulær matrix16. Slike utfall er i samsvar med en tidligere studie som rapportert at RPMI 1640 utvidet hyphal dannelsen i C. albicans biofilm15. Disse resultatene viser forskjellene i underlaget bruken av Candida forskjellige biofilm vekstfaser og viser betydningen av skiftende media i planktoniske vekst og biofilm formasjon.

Valg av riktig temperatur og pH å dyrke C. albicans biofilm er også viktig å utføre metoden med tilstrekkelig dannelsen av hyfer. C. albicans forplikter konverteringen fra blastospores til filamenter reaksjon på forhold som etterligner miljøet pattedyr vert vev17. Disse forholdene omfatter kroppstemperatur (37 ° C) og nøytral pH17, og dette er grunnen hvorfor pH i RPMI mediet justeres til 7.

Metoder brukt i denne studien er viktig siden biofilm av C. albicans SN 425 var preget før12, viser for å ha store mengder EPS-løselig og -uløselig, som gjør det en pålitelig metode for å analysere resultatet av lysene på de ekstracellulære polysakkaridene. Videre samme ikke-sammenhengende lys enhet brukes i forsøkene ble brukt til bakteriell planktoniske suspensjoner18 og biofilm9, og den største fordelen med denne enheten er reduksjonen i behandling stund, gjør det enhet mer gjennomførbart for klinisk bruk18. Analyse av daglige lysbehandling på C. albicans biofilm er viktig siden metodikken brukt studien simulerer en behandling som er raskt og enkelt kan gjøres av pasienten hjemme.

Rødt lys daglig behandling redusert meningsfullt C. albicans levedyktig kolonien teller og biofilm biomasses. Flere studier kan prøve en kombinasjon av behandlinger, med fototerapi og senere bruke aktuelle soppdrepende. Denne strategien kan hjelpe disorganizing den ekstracellulære matrisen skjerming C. albicans biofilm, tillater bedre narkotika infiltrasjon gjennom biofilm å nå og endelig utrydde C. albicans celler. Tatt i betraktning begrensningene for dette i vitro eksperimentet, bruk av rødt lys for 1 min kan hjelpe oppnå emnet antifungals om behandling av muntlig candidiasis.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Forfatterne ikke avsløre.

Acknowledgments

Vi takker Dr. Paula da Silveira, Dr. Cecília Atem Gonçalves de Araújo Costa, Shawn M. Maule, Shane M. Maule, Dr. Malvin N. Janal og Dr. Iriana Zanin for utvikling av denne studien. Vi erkjenner også Dr. Alexander D. Johnson (UCSF) for å donere belastningen analysert i denne studien.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Clorhexidine 20%  Sigma-Aldrich C9394
Dextrose (D-Glucose) Anhydroous Fisher Chemical D16-500
Ethanol 200 proof Decon Laboratories DSP-MD.43
LumaCare LC-122 A  LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, USA 
NaCl  Fisher Chemical S641-500
NaOH  Fisher Bioreagents  BP 359-500
Phenol 5% Milipore Sigma 843984
RPMI 1640 buffered with 3-(N-morpholino) Sigma R7755
Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol Acumedia 7306A
Sulfuric acid  Fisher Chemical SA200-1
Yeast nitrogen base  Difco DF0392-15-9
3-(N-morpholino)propanesulfonic acid MOPS Sigma-Aldrich M1254
 24-well polystyrene plate  Falcon 353935

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options. Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).
  2. Harriott, M. M., Noverr, M. C. Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).
  3. Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. Overcoming antifungal resistance. Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).
  4. Finkel, J. S., Mitchell, A. P. Genetic control of Candida albicans biofilm development. Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).
  5. Zarnowski, R., et al. Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia. MBio. 5, e013333 (2014).
  6. Mitchell, K. F., et al. Community participation in biofilm matrix assembly and function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).
  7. Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions. PLoS Pathogens. 12, e1005828 (2016).
  8. Dai, T., et al. Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).
  9. de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development. PLoS One. 10 (7), e0131941 (2015).
  10. Fontana, C. R., et al. The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms. Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).
  11. Donlan, R. M., Costerton, J. W. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).
  12. Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology. Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372 (2017).
  13. Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms. Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60 (2018).
  14. Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection. Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).
  15. Kucharíková, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujdáková, H. Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin. Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).
  16. Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development. Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).
  17. Kadosh, D., Johnson, A. D. Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis. Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).
  18. Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device. Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).

Tags

Immunologi og infeksjon problemet 146 biofilm Candida albicans fototerapi rødt lys ekstracellulær matrix polyssacharides
Daglig fototerapi med rødt lys Regulate <em>Candida albicans</em> Biofilm vekst
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Panariello, B. H. D., Garcia, B. A., … More

Panariello, B. H. D., Garcia, B. A., Duarte, S. Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth. J. Vis. Exp. (146), e59326, doi:10.3791/59326 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter