Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Immunology and Infection
Click here for the English version

Immunology and Infection

Ежедневные фототерапии с красный свет для регулирования Candida albicans биопленки роста

Published: April 23, 2019 doi: 10.3791/59326
Automatic Translation
1, 2, 1
1Department of Cariology, Operative Dentistry and Dental Public Health, Indiana University School of Dentistry, 2Department of Restorative Dentistry, Ceará Federal University, School of Dentistry

Summary

Здесь мы представляем протокол для оценки результатов применения красный свет на рост Candida albicans биопленки. Устройство некогерентный красный свет с длиной волны 635 нм и плотность энергии 87,6 J·cm-2 был применен во всем рост Candida albicans биопленки в течение 48 часов.

Abstract

Здесь мы представляем протокол для оценки результатов лечения суточные красный свет на рост Candida albicans биопленки. Чтобы увеличить планктонных рост SN425 C. albicans , Инокулянты вырос на дрожжи азота базы СМИ. Для биопленки были применены RPMI 1640 СМИ, которые имеют высокие концентрации аминокислот, чтобы помочь росту биопленки. Биоплёнки 48 h относились два раза в день в течение 1 мин с устройством некогерентного света (красный свет, длина волны = 635 нм; плотность энергии = 87,6 J·cm-2). Как положительный контроль (PC), 0,12% хлоргексидин (CHX) был применен и как отрицательный контроль (НК), 0,89% NaCl был применен к биопленки. Колонии, образуя единиц (CFU), сухой вес, растворимых и нерастворимых экзополисахаридов были количественно после лечения. Кратко протокол, представленные здесь прост, воспроизводимые и дает ответы относительно жизнеспособности, сухой вес и внеклеточный полисахарид суммы после лечения красный свет.

Introduction

Увеличение заболеваемости диабетом, иммуносупрессивной терапии приложений, ВИЧ-инфекции, эпидемия СПИДа, инвазивных клинических процедур и широкого спектра действия антибиотиков потребления в последние годы увеличилось число Candida albicans связанные с заболеваниями1,2. C. albicans инфекции обычно связаны с развитием биопленки и может вызвать клинических проявлений, таких как кандидоз, или системных проявлений, таких как кандидемия1,2. Одним из наиболее значимых факторов вирулентности биопленки роста является создание матрицы внеклеточный полисахарид. Биопленки сотрудничает увеличить сопротивление существующих противогрибковых препаратов, экологический стресс и принимающих иммунные механизмы3.

Биопленки рост C. albicans начинается с раннего приверженность планктонных клеток подложки, следуют размножения дрожжевых клеток через поверхность субстрата и гиф роста. Последний этап биопленки роста является фаза созревания, которой дрожжеподобные развития подавляется, гиф развитие расширяет и внеклеточного матрикса заключает биопленки4. C. albicans экзополисахаридов (EPS) в матрице взаимодействуют сформировать Маннан глюкан комплекс5,6. Взаимодействие между экзополисахаридов имеет решающее значение для обороны биоплёнки против наркотиков7. Следовательно уменьшение EPS от C. albicans внеклеточного матрикса могла бы поддержать разработку новых протоколов antibiofilm управление устный кандидоз.

Свет регулирует рост, развитие и поведение нескольких организмов8 и она применялась в качестве противомикробного средства в фотодинамической антимикробной химиотерапии (Пакт). Пакт применяется видимого света определенной длины волны и фотосенсибилизатора поглощая свет9. Однако фотосенсибилизаторов испытывают трудности в проникающего биопленки, вызывая ниже эффективность10. Терапевтических агентов неспособность полностью проникнуть биоплёнки причина что биоплёнки иногда противостоять традиционной антибактериальной терапии3,5. Чтобы деактивировать закрытых микробной клетки, противомикробных препаратов должны проникать через внеклеточная матрица; Тем не менее EPS характеризует диффузионным препятствием для таких молекул, запрашивая их уровень перевозки в биопленки или влияя на ответ антимикробная с самой матрицы11.

Учитывая недостатки Пакт использование света сама по себе выступает как ценный улучшения. Предварительные данные показали, что лечение с голубой свет дважды в день значительно препятствует производства EPS-нерастворимые Streptococcus mutans биопленки. Снижением EPS-нерастворимые синий свет уменьшилась биопленки роста. Тем не менее результаты фототерапии, используя красный свет в C. albicans биоплёнки являются скудными. Таким образом цель данного исследования заключалась в оценке в какой манере фототерапии, используя красный свет влияет на рост и расположение C. albicans биопленки. Два раза в день обращения, мы адаптировали наши лаборатории предыдущих протоколы9,12 обеспечить легкий и воспроизводимые биопленки модель, которая обеспечивает ответы относительно жизнеспособности, сухой вес и внеклеточных полисахаридов суммы после лечения красный свет. Тот же протокол может использоваться для тестирования других терапий.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. Подготовка культуры средств массовой информации

  1. Подготовка sabouraud декстроза агар (ПДД). Приостановите 65 g ПДД, дополнена Хлорамфеникол (50 мг/Л) в 1000 мл дистиллированной воды. Варить до растворения среды. Стерилизация автоклавированием при 15 PSI (121° C) для 30 минут остыть до 45-50 ° C. Хорошо перемешать и залить 20 мл ПДД в стерильных пластин Петри (размер: 100 x 15 мм).
  2. Подготовка дрожжей азота базы (YNB) среднего дополнена глюкозы 100 мм, смешивая 6.7 g YNB и 18 г декстрозы до 1000 мл ультрачистая вода. Смешать с мешалкой и стерилизовать среды с помощью системы вакуумного фильтра 0.22 мкм.
  3. Подготовить RPMI, смешивая 10.4 г RPMI 1640 и 34.32 g 3-(N-Морфолино) propanesulfonic кислота (МОПЫ) до 1000 мл ультрачистая вода. Смешайте в мешалку без тепла и регулировка рН 7, добавив 1 N NaOH (добавить 2 г NaOH до 50 мл ультрачистая вода). Стерилизуйте среды с помощью системы вакуумного фильтра 0.22 мкм.

2. Предварительное посевным материалом и посевным материалом

  1. Удалить SN425 C. albicans микроорганизма из морозильной камеры −80 ° C и пусть он разморозить при комнатной температуре. Семян 10 мкл фонда культуры на Петри, содержащие ПДД, дополнена Хлорамфеникол (50 мг/Л). Проинкубируйте чашки Петри высокоусвояемого при 37 ° C в течение 48 часов.
  2. После 48 ч инкубации добавьте 10 колоний C. albicans 10 мл дрожжей азота базового среднего (YNB) дополняется 100 мм глюкозы и инкубировать высокоусвояемого при 37 ° C для 16 h для предварительной посевным материалом.
  3. После инкубации для 16 h, готовят Инокулянты путем разбавления стартерных культур в свежие среднего YNB дополнена глюкозы 100 мм в 1:10 пропорции (1 мл разбавленной в 9 мл YNB закваски). Измерить первоначальный оптической плотности (OD) на 540 Нм.
  4. Инкубировать Инокулянты высокоусвояемого при 37 ° C для 8 h до тех пор, пока штаммы достигают стадии роста среднего журнала и измерить окончательный ОД на 540 Нм. Вычтите последний ОД от первоначального ОД, чтобы проверить, если ОД Инокулянты находятся на стадии роста среднего журнала (8ч., на основе кривых роста на рис. 1).
  5. Чтобы достичь посевным материалом с 107 клеток мл-1, центрифуга посевным материалом для 5 мин при 5500 x g, удалить супернатант и сконцентрировать посевным материалом до половины объема трубы.

3. биопленки и фототерапии

  1. Добавьте 1 mL посевным материалом к скважинам 24-ну пенополистирольные плиты. Инкубируйте высокоусвояемого при 37 ° C 90 мин разрешать клеточной адгезии к нижней части скважины.
  2. Используйте некогерентный красный свет (см. Таблицу материалы) как источник света с длиной волны 635 ± 10 Нм и фиксированной мощностью 1460 МВт см−2.
  3. Используйте измеритель мощности для измерения плотности мощности света. Экспозиции применяется — 87,6 J см-2, эквивалентно около 1 мин воздействия. Использовать формулу плотность энергии (Дж/см2) = плотность мощности (W/cm2) x время облучения (s). Примените на расстоянии 5 мм между источником света и биопленки избежать потепления образца.
  4. Лечить положительный контроль биоплёнки с 0,12% хлоргексидин за 1 мин и отрицательный контроль биоплёнки с 0,89% NaCl на 1 мин.
  5. После лечения Вымойте все биоплёнки дважды с 0,89% раствор NaCl.
  6. Добавьте 1 mL RPMI 1640 буферизации с 3-(N-Морфолино) propanesulfonic кислота (МОПЫ) при pH 7 в биопленке и инкубировать пластины при 37 ° C на ночь.
  7. Утром, применять же лечение как шаги 3.2 до 3,6, мыть биоплёнки дважды с 0,89% NaCl, добавить новые RPMI буферизации с МОПЫ (1 мл, pH 7) к скважинам и инкубировать высокоусвояемого при 37 ° C.
  8. В тот же день, после 6 часов разоблачить биопленке на красный свет. Лечить положительный контроль биоплёнки с 0,12% хлоргексидин за 1 мин и отрицательный контроль биоплёнки с 0,89% NaCl на 1 мин. После лечения Вымойте биоплёнки дважды с 0,89% раствор NaCl.
  9. Повторите шаги 3.2-3.8 до достижения 48 h развития биопленки.
    Примечание: В основном, один лечения произойдет в первой половине дня и другой произойдет во второй половине дня в тот же день (кроме 6 h).

4. обработка

  1. Добавить 1 мл стерильного 0,89% NaCl в колодец удаление биопленки, царапая его от хорошо с помощью кончика пипетки. Добавьте удаленные биопленки в стерильную пробирку.
  2. Добавьте еще 1 мл стерильного 0,89% NaCl в колодец. Поцарапать его снова и добавьте подвеска же трубки для общего объема 2 мл.
  3. Образуя колонии единиц (CFU)
    1. Энергично вихрь биопленки подвеска за 1 мин. От биопленки подвеска используйте Алиготе 0,1 мл для последовательного растворения.
    2. Разбавьте биопленки подвеска от 10-1 до 10-4 в 0,89% раствор NaCl.
    3. Семян 50 мкл каждого разведения в ПДД пластины и инкубировать пластины при 37 ° C в течение 48 часов.
    4. Подсчет колоний и применить формулу кое/мл = количество колоний x 10n / q (n = разрежения; q = тома в сеяный).
  4. Сухой вес
    1. Взвешивание и метка microcentrifuge трубы.
    2. От биопленки подвеска используйте 0,1 мл для определения сухого веса (биомассы).
    3. Добавить 1 мл абсолютного этанола Алиготе 0,1 мл биопленки и храните его при 20 ° C для 18 h. После 18 часов центрифуги на g 10000 x 10 мин.
    4. Отбросить супернатанта, трубы на эксикатор для сухой образцы на одну неделю и весят microcentrifuge трубы снова.
  5. Водорастворимых полисахаридов (ПОБВ) и щелочных растворимые полисахаридов (АМС)
    1. От биопленки подвеска, энергично вихревой оставшуюся часть тома (1,8 мл) за 1 мин и центрифуги на 5500 × g 10 мин при 4 ° C. Хранить супернатант в новой трубки и мыть преципитат дважды с клеток, которые содержат нерастворимых компонентов внеклеточного матрикса с стерильных ультрачистая вода (5500 × g, 10 мин при температуре 4 ° C).
    2. Вновь приостановите содержание нерастворимых в 1,8 мл стерильной сверхчистой воды.
    3. Водорастворимых полисахаридов (ПОБВ)
      Примечание: Выполните этот эксперимент на зонта.
      1. Из сохраненных супернатанта резерв 1 мл раствора для количественного определения водорастворимых полисахаридов (ПОБВ).
      2. Однородный хранимой супернатант за 1 мин. Передача в стерильные пробирки затем добавьте 2.5 тома этанола 95%. Храните трубы для 18 ч при-20 ° C для ПОБВ осадков.
      3. После 18 часов центрифуга трубы на 9500 x g 20 мин при 4 ° C. После центрифугирования отбросить supernatants.
      4. Вымойте образцы три раза с 75% этанола и просушите гранулы. Вновь приостановить лепешка с 1 мл стерильного ультрачистая вода и количественно ПОБВ, с помощью метода фенола серной кислоты.
      5. Использование 0,1% раствор глюкозы (0,01 г глюкозы до 10 мл ультрачистая вода) для стандартной кривой (0, 2.5, 5, 10, 15, 20 и 25 мкл глюкозы в трубу).
      6. Добавить 200 мкл 5% фенола (2,7 мл 90% фенола 47.3 мл ультрачистая вода) в стеклянной трубки, состоящий из 200 мкл пример или калибровочной кривой точки (в трех экземплярах на сэмпл) и осторожно перемешать.
      7. Добавить 1 мл серной кислоты на трубу и перемешать. Подождите 20 минут для реакции и измерения образцов, используя спектрофотометр (490 Нм).
    4. Щелочно растворимые полисахаридов (АМС)
      Примечание: Выполните этот эксперимент в зонта.
      1. Из суммы нерастворимых вновь приостановлено отдельные 1 мл для определения осины. Центрифуга аликвоты каждого биопленки подвеска (13 000 x g, 10 минут при температуре 4 ° C).
      2. Осторожно удалите супернатант каждой трубы. Затем поместите образцы на вакуумные концентратор чтобы высушить гранулы.
      3. Взвешивания гранул и 300 мкл 1 N NaOH (2 г NaOH до 50 мл сверхчистой воды) на 1 мг сухого веса. Проинкубируйте 2 ч при 37 ° C и затем центрифуги на 13 000 × g за 10 мин.
      4. Осторожно Соберите supernatants с пипеткой и передачи microcentrifuge трубы, поддержание гранулы.
      5. Еще раз добавить равное количество 1 N NaOH в трубы, состоящий из гранул и повторите шаги выше для извлечения ASP.
      6. После инкубации в течение 2 ч Центрифугуйте образцы (13 000 x g 10 мин), тщательно собирать supernatants и добавить ранее собранные supernatants.
      7. Для извлечения третьего повторите те же шаги, что и выше, но на этот раз, не Проинкубируйте образцы за 2 ч до центрифугирования.
      8. После этого добавьте три тома этанола 95% для каждого образца. Затем фондовый образцы −20 ° C для 18 h для осадков ASP.
      9. Центрифуга для труб (9500 × g 20 мин при температуре 4 ° C) и отбросить supernatants.
      10. Мыть каждый Пелле три раза с 75% этанола и просушите (те же процедуры сделал для WSP). Вновь приостановите гранулы в равных общий объем добычи первой с 1 N NaOH.
      11. Прочитайте образцы для количественной оценки ASP с помощью фенола серной (то же, что касается анализа WSP).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Рисунок 2 отображает результаты журнала10 кое/мл C. albicans после суточных лечения с красный свет, красный свет 1 мин значительно уменьшена в журнал10 кое/мл, по сравнению с NC (p = 0,004). Рисунок 3 представлены результаты биомассы (мг) C. albicans биоплёнки после ежедневного лечения. Все лечение групп показали снижение биомассы по сравнению с NC (p = 0,000) и красный свет лечить представил аналогичное сокращение биомассы для групп, которые наблюдаются в ПК. Рисунок 4 и 5 дисплей уступает количество C. albicans EPS-растворимых и нерастворимых в EPS в ПК по сравнению с NC (p = 0,000). Хотя не статистически значимых, суточные применение красный свет за 1 мин C. albicans биоплёнки численно уменьшилось количество EPS-растворимых и нерастворимых в EPS.

Figure 1
Рисунок 1 . Кривая роста C. albicans деформации СН 425. Планктонных культура была сделана в среде YNB дополняется 100 мм глюкозы и инкубируют при температуре 37 ° C. Оптическая плотность (ОД на 540 Нм) и кое/мл Log10 были определены с течением времени. Показано стандартное отклонение. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 2
Рисунок 2 . Среднего и стандартного отклонения журнала10 кое/мл C. albicans. Оценки были сделаны между режимом с красный свет дважды в день и controls-0.12% CHX (PC) и 0,89% NaCl (NC). Равных буквы представляют статистическое сходство между группами (p > 0,05). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 3
Рисунок 3 . Среднего и стандартного отклонения сухой вес (мг) C. albicans. Оценки были сделаны между режимом с красный свет дважды в день и controls-0.12% CHX (PC) и 0,89% NaCl (NC). Равных буквы представляют статистическое сходство между группами (p > 0,05). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 4
Рисунок 4 . Среднего и стандартного отклонения EPS-растворимые сумма в C. albicans биопленки (мкг/мг сухого веса). Сравнения были сделаны между режимом с красный свет дважды в день и controls-0.12% CHX (PC) и 0,89% NaCl (NC). Равных буквы представляют статистическое сходство между группами (p < 0,001). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Figure 5
Рисунок 5 . Среднего и стандартного отклонения EPS-нерастворимые содержание в C. albicans биопленки (мкг/мг сухого веса). Оценки были сделаны между режимом с красный свет дважды в день и controls-0.12% CHX (PC) и 0,89% NaCl (NC). Равных буквы представляют статистическое сходство между группами (p < 0,001). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Наиболее важные шаги для успешного культивирования C. albicans биопленки являются: 1) сделать предварительно посевным материалом и посевным материалом в среде YNB дополнена глюкозы 100 мм; 2) чтобы подождать 90 мин для этапа адгезии и тщательно мыть дважды скважин с 0,89% NaCl для удаления неприкрепленных клеток; и 3) для добавления RPMI среднего придерживался клеток, чтобы начать биопленки, поскольку RPMI будет стимулировать рост гифы. Aneuploidies может произойти, когда культивирование C. albicans. Следовательно важно не использовать колоний, которые более чем семь дней, не для хранения пластины на 4° C, а не повторно полоска клеток из существующих плит. Аналогичным образом следует использовать штаммов до 18 часов ночи роста13.

Ограничением исследование является, что она была выполнена в пробирке. Хотя исследования in vitro значительно расширили понимание биологии биопленки, они не представляют собой именно в естественных условиях условия14. Однако тесты в лабораторных условиях обеспечивают высокопроизводительного скрининга, помимо того, что дешевый и простой методологии14 ответить на вопросы, касающиеся новых antibiofilm терапии. Выбор правильного средства массовой информации культуры для каждой фазы развития биопленки является важным шагом для обеспечения успеха метода. RPMI 1640 является средством питательн-богатые люди, аминокислоты и имитирует состав жидкостей человека15. RPMI 1640 содержит L-глютамин, L-аргинин, L-аспарагин помимо витаминов и неорганических солей. Тем не менее YNB СМИ имеет повышенные количества глюкозы (18 г/Л) по сравнению с RPMI 1640 среднего (2 г/Л глюкозы). Содержание глюкозы в высокий был описан увеличить планктонных рост Candida видов16. В противоположность этому существование более высокие концентрации аминокислот поможет биопленки рост среднего RPMI, по сравнению с YNB средних16. Качественные данные, применяя SEM микроскопии показал, что конструкции C. albicans биопленки в RPMI представляет сложную организацию с твердого роста дрожжей с многопланового гифы, многообещающий элементы и бутон шрамы с обильным 16внеклеточного матрикса. Такие результаты являются в соответствии с предыдущего исследования, которое сообщило, что RPMI 1640 дополненной гиф формирования в C. albicans биоплёнки15. Эти результаты демонстрируют различия в субстрат использования Candida этапах роста различных биопленки и показать важность изменения СМИ во время формирования планктонных роста и биопленки.

Выбор нужной температуры и рН культивировать C. albicans биоплёнки также важно для выполнения метод с адекватной формирования гифы. C. albicans осуществляет преобразование из blastospores нитей в ответ на условия, которые имитируют окружение тканей млекопитающих разместить17. Эти условия включают растет при температуре тела (37 ° C) и в нейтральном pH17, и это причина, почему рН среды RPMI корректируется до 7.

Методы, применяемые в настоящем исследовании являются значительными, поскольку биоплёнки C. albicans SN 425 характеризовались до12, показаны иметь большое количество EPS-растворимые и - нерастворимые, что делает его надежным методом анализа результатов огни на внеклеточных полисахаридов. Кроме того, же некогерентный свет устройство, применяемых в ходе экспериментов был успешно применен для бактериального планктона суспензий18 и биоплёнки9, и огромное преимущество этого устройства является сокращение время лечения, что делает устройство более осуществимым для клинические приложения18. Анализ ежедневных фототерапия применяется к C. albicans биоплёнки имеет важное значение, поскольку методология, применявшаяся в настоящем исследовании имитирует лечения, который быстро и легко может быть сделано путем пациента на дому.

Красный свет ежедневно лечения содержательн уменьшена C. albicans жизнеспособных колонии граф и биопленки биомасс. Дополнительные исследования могут попробовать сочетание лечения, начиная с фототерапии и позднее применения актуальных противогрибковые. Эта стратегия может помочь disorganizing внеклеточного матрикса, экранирование C. albicans биопленки, позволяющие лучше проникновения наркотиков через биопленки и окончательно искоренить C. albicans клетки. Учитывая ограничения в пробирке эксперимента как вспомогательное средство для темы противогрибковые лечения устной кандидоз может помочь использование красный свет за 1 мин.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторы не имеют ничего сообщать.

Acknowledgments

Мы благодарим д-р Паула да Силвейра, д-р Сесилия Атем Гонсалвес де Араужо Коста, Шон м. Maule, Мауле м. Шейн, д-р Мелвин N. Janal и доктор Ирина Занин для развития данного исследования. Мы также признаем д-р Александр D. Джонсон (UCSF) для пожертвования штамм, анализируются в настоящем исследовании.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Clorhexidine 20%  Sigma-Aldrich C9394
Dextrose (D-Glucose) Anhydroous Fisher Chemical D16-500
Ethanol 200 proof Decon Laboratories DSP-MD.43
LumaCare LC-122 A  LumaCare Medical Group, Newport Beach, CA, USA 
NaCl  Fisher Chemical S641-500
NaOH  Fisher Bioreagents  BP 359-500
Phenol 5% Milipore Sigma 843984
RPMI 1640 buffered with 3-(N-morpholino) Sigma R7755
Sabouraud dextrose agar supplemented with chloramphenicol Acumedia 7306A
Sulfuric acid  Fisher Chemical SA200-1
Yeast nitrogen base  Difco DF0392-15-9
3-(N-morpholino)propanesulfonic acid MOPS Sigma-Aldrich M1254
 24-well polystyrene plate  Falcon 353935

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Sardi, J. C. O., Scorzoni, L., Bernardi, T., Fusco-Almeida, A. M., Mendes Giannini, J. M. Candida species: current epidemiology, pathogenicity, biofilm formation, natural antifungal products and new therapeutic options. Journal of Medical Microbiology. 62 (Pt 1), 10-24 (2013).
  2. Harriott, M. M., Noverr, M. C. Candida albicans and Staphylococcus aureus form polymicrobial biofilms: effects on antimicrobial resistance. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 53 (9), 3914-3922 (2009).
  3. Srinivasan, A., Lopez-Ribot, J. L., Ramasubramanian, A. K. Overcoming antifungal resistance. Drug Discovery Today Technologies. 11, 65-71 (2014).
  4. Finkel, J. S., Mitchell, A. P. Genetic control of Candida albicans biofilm development. Nature Reviews Microbiology. 9 (2), 109-118 (2011).
  5. Zarnowski, R., et al. Novel entries in a fungal biofilm matrix encyclopedia. MBio. 5, e013333 (2014).
  6. Mitchell, K. F., et al. Community participation in biofilm matrix assembly and function. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 112 (13), 4092-4097 (2015).
  7. Mitchell, K. F., Zarnowski, R., Andes, D. R. Fungal super glue: the biofilm matrix and its composition, assembly, and functions. PLoS Pathogens. 12, e1005828 (2016).
  8. Dai, T., et al. Blue light rescues mice from potentially fatal Pseudomonas aeruginosa burn infection: efficacy, safety, and mechanism of action. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 57 (3), 1238-1245 (2013).
  9. de Sousa, D. L., Lima, R. A., Zanin, I. C., Klein, M. I., Janal, M. N., Duarte, S. Effect of twice-daily blue light treatment on matrix-rich biofilm development. PLoS One. 10 (7), e0131941 (2015).
  10. Fontana, C. R., et al. The antibacterial effect of photodynamic therapy in dental plaque-derived biofilms. Journal of Periodontal Research. 44 (6), 751-759 (2009).
  11. Donlan, R. M., Costerton, J. W. Biofilms: survival mechanisms of clinically relevant microorganisms. Clinical Microbiology Reviews. 15 (2), 167-193 (2002).
  12. Panariello, B. H. D., Klein, M. I., Pavarina, A. C., Duarte, S. Inactivation of genes TEC1 and EFG1 in Candida albicans influences extracellular matrix composition and biofilm morphology. Journal of Oral Microbiology. 9 (1), 1385372 (2017).
  13. Gulati, M., Lohse, M. B., Ennis, C. L., Gonzalez, R. E., Perry, A. M., Bapat, P., Valle Arevalo, A., Rodriguez, D. L., L, D., Nobile, C. J. In vitro culturing and screening of Candida albicans biofilms. Current Protocols in Microbiology. 50 (1), e60 (2018).
  14. Roberts, A. E., Kragh, K. N., Bjarnsholt, T., Diggle, S. P. The limitations of in vitro experimentation in understanding biofilms and chronic infection. Journal of Molecular Biology. 427 (23), 3646-3661 (2015).
  15. Kucharíková, S., Tournu, H., Lagrou, K., Van Dijck, P., Bujdáková, H. Detailed comparison of Candida albicans and Candida glabrata biofilms under different conditions and their susceptibility to caspofungin and anidulafungin. Journal of Medical Microbiology. 60 (Pt 9), 1261-1269 (2011).
  16. Weerasekera, M. M., Wijesinghe, G. K., Jayarathna, T. A., et al. Culture media profoundly affect Candida albicans and Candida tropicalis growth, adhesion and biofilm development. Memórias Do Instituto Oswaldo Cruz. 111 (11), 697-702 (2016).
  17. Kadosh, D., Johnson, A. D. Induction of the Candida albicans filamentous growth program by relief of transcriptional repression: a genome-wide analysis. Molecular biology of the cell. 16 (6), 2903-2912 (2005).
  18. Paschoal, M. A., Lin, M., Santos-Pinto, L., Duarte, S. Photodynamic antimicrobial chemotherapy on Streptococcus mutans using curcumin and toluidine blue activated by a novel LED device. Lasers in Medical Science. 30 (2), 885-890 (2015).

Tags

Иммунология и инфекции выпуск 146 биопленки Candida albicans фототерапия красный свет внеклеточная матрица polyssacharides
Ежедневные фототерапии с красный свет для регулирования <em>Candida albicans</em> биопленки роста
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Panariello, B. H. D., Garcia, B. A., … More

Panariello, B. H. D., Garcia, B. A., Duarte, S. Daily Phototherapy with Red Light to Regulate Candida albicans Biofilm Growth. J. Vis. Exp. (146), e59326, doi:10.3791/59326 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter