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JoVE Journal Cancer Research
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Cancer Research

एक Orthotopic एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल Retroperitoneal Lymphadenopathy के साथ Vivo Propagated और संस्कृति VX2 कोशिकाओं में से बनाया

Published: September 12, 2019 doi: 10.3791/59340
Automatic Translation
1,2, 3, 4, 5, 6, 5,6, 5,7,8, 7,9,11, 10, 5,11
1Institute of Medical Science, University of Toronto, 2Department of Obstetrics and Gynecology, University of Toronto, 3Guided Therapeutics Laboratory, TECHNA Institute, University Health Network, 4Department of Pathology, Princess Margaret Cancer Center, University Health Network, 5Department of Medical Biophysics, University of Toronto, 6Princess Margaret Cancer Center, University Health Network, 7Techna Institute, University Health Network, 8Department of Surgery, University of Toronto, 9Department of Otolaryngology, Head and Neck Surgery, University of Toronto, 10Division of Gynecologic Oncology, University of Toronto /Princess Margaret Cancer Center, University Health Network, 11Princess Margaret Cancer Center, University Health Network

Summary

इस प्रोटोकॉल संस्कृति में VX2 कोशिकाओं को विकसित करने के लिए और खरगोशों में retroperitoneal लिम्फ नोड metastases के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर के एक orthotopic VX2 मॉडल बनाने के लिए एक मानकीकृत विधि प्रस्तुत करता है। ऑर्थोटोपिक एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल लिम्फ नोड मेटास्टेसिस के निदान के लिए उपन्यास इमेजिंग तौर तरीकों के पूर्व नैदानिक अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण हैं।

Abstract

एंडोमेट्रियल कैंसर उत्तरी अमेरिका में सबसे आम gynecologic द्रोह है और घटना दुनिया भर में बढ़ रहा है. उपचार के साथ या के बिना सहायक चिकित्सा के होते हैं लिम्फ नोड भागीदारी के आधार पर के रूप में लिम्फैडेनेक्टॉमी द्वारा निर्धारित. लिम्फैडेनेक्टॉमी एक रुग्ण प्रक्रिया है, जो कई रोगियों में एक चिकित्सीय लाभ के लिए नहीं दिखाया गया है, और इस प्रकार लिम्फ नोड मेटास्टेसिस का निदान करने के लिए एक नई विधि की आवश्यकता है। उपन्यास इमेजिंग एजेंटों का परीक्षण करने के लिए, रेट्रोपेरिटोनियल लिम्फ नोड मेटास्टेसिस के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक विश्वसनीय मॉडल की आवश्यकता है। VX2 एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल साहित्य में अक्सर वर्णित किया गया है; तथापि, मॉडल स्थापना की विधि के संबंध में महत्वपूर्ण भिन्नता मौजूद है। इसके अलावा, कोई अध्ययन सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के उपयोग पर रिपोर्ट किया है इस मॉडल बनाने के रूप में केवल विवो में प्रचारित कोशिकाओं पहले इस्तेमाल किया गया है. इसमें, हम VX2 एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल की स्थापना के लिए एक मानकीकृत शल्य चिकित्सा विधि और बाद ऑपरेटिव निगरानी विधि पेश करते हैं और इस मॉडल को बनाने के लिए सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के पहले उपयोग पर रिपोर्ट करते हैं।

Introduction

एंडोमेट्रियल कैंसर, या गर्भाशय की परत के कैंसर, दुनिया भर में दूसरा सबसे आम स्त्री रोग द्रोह और विकसित देशों में सबसे आम द्रोह1है। एंडोमेट्रियल कैंसर की घटनाओं में तेजी से वृद्धि हुई है, 2005-2013 के बीच प्रति वर्ष 2.3% की वृद्धि हुई है, जिसमें मृत्यु दर1,2,3में इसी 2.2% की वृद्धि हुई है . लिम्फ नोड मेटास्टेसिस का निदान सर्वोपरि है क्योंकि सकारात्मक लिम्फ नोड्स की उपस्थिति अस्तित्व के एक मजबूत नकारात्मक भविष्यवक्ताहै 4,5,6,7 और के प्रशासन मार्गदर्शन कर सकते हैं सहायक चिकित्सा8,9,10,11,12,13. लिम्फ नोड मेटास्टेसिस वर्तमान में श्रोणि और पेट में प्रमुख रक्त वाहिकाओं overlying लसीका ऊतक को शल्य चिकित्सा द्वारा निदान कर रहे हैं। यह प्रक्रिया, एक lymphadenectomy के रूप में जाना जाता है, दो बड़ेपरीक्षणोंसे परस्पर विरोधी अस्तित्व डेटा के कारण विवादास्पद है 14,15,16,17,18 और ज्ञात अन्तर-ऑपरेटिव15,19,20 और पोस्ट-ऑपरेटिव रूग्णता21,22,23काखतरा . के रूप में वर्तमान गैर इनवेसिव इमेजिंग रूपरेखा आवश्यक संवेदनशीलता और विशिष्टता लिम्फ नोड विच्छेदन24को बदलने के लिए नहीं है, वहाँ एक नई नैदानिक इमेजिंग तकनीक विकसित करने के लिए धक्का दिया गया है. एक पूर्व नैदानिक सेटिंग में इन उपन्यास तकनीकों का परीक्षण करने के लिए, retroperitoneal लिम्फ नोड मेटास्टेसिस के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक विश्वसनीय मॉडल की आवश्यकता है।

खरगोश VX2 ट्यूमर मॉडल एक अच्छी तरह से स्थापित मॉडल है जो बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया गया है फेफड़ों सहित कई मानव ठोस अंग ट्यूमर25 का अध्ययन करने के लिए26, सिर और गर्दन27,28, जिगर29, गुर्दे30, हड्डी31,32, मस्तिष्क33, अग्न्याशय34 और गर्भाशय35,36,37. VX2 मॉडल मूल रूप से 193339में Shope द्वारा की खोज की एक कपास की पूंछ खरगोश पेपिलोमा वायरस को सफलतापूर्वक प्रत्यारोपण द्वारा किड और रूर38 द्वारा 1940 में विकसित किया गया था . उस समय के बाद से, VX2 मॉडल vivo में बनाए रखा गया है, सफेद न्यूजीलैंड खरगोश40के चतुष्क मांसपेशियों में सीरियल मार्ग की आवश्यकता होती है. हाल ही में हालांकि, कई समूहों को सफलतापूर्वक इन विट्रो40,41,42 में VX2 कोशिकाओं हो गया है और सुसंस्कृत सेल लाइन31के बनाए रखा tumorigencity का प्रदर्शन किया, 42,43. VX2 ट्यूमर हिस्टोलॉजिकल रूप से एनाप्लास्टिक स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा44 के रूप में परिभाषित किया गया है और ग्रंथियों की विशेषताएं होती हैं जो एडेनोकार्सीनोमा26के समान होती हैं। ट्यूमर प्रत्यारोपण की आसानी से विशेषता है, तेजी से विकास और अति संवहनी44,45 और मज़बूती से metastasize, सबसे अधिक क्षेत्रीय और दूर लिम्फ नोड्स45के लिए. गर्भाशय संवहनी और लसीका शरीर रचना विज्ञान में समानता46 के रूप में के रूप में अच्छी तरह से orthotopic विकास साइट सुनिश्चित करें कि खरगोश VX2 कार्सिनोमा के metastatic पैटर्न मानव एंडोमेट्रियल कैंसर की नकल करता है, VX2 मॉडल मानव अध्ययन के लिए एक विश्वसनीय मॉडल बना मेटास्टैटिक रोग। इसके अलावा, असामान्य सूक्ष्मवाहिक प्रसार47 के रूप में इस तरह के हिस्टोलॉजिक सुविधाओं , साथ ही इम्यूनोलॉजिकल48 और आनुवंशिक समानताएं49,50 मनुष्यों और खरगोशों के बीच सुझाव है कि ट्यूमर सूक्ष्म पर्यावरण मानव एंडोमेट्रियल कैंसर की है कि प्रतिबिंबित कर सकते हैं.

कई समूहों VX2 के उपयोग पर सूचना दी है कि सफलता की एक उच्च रिपोर्ट दर के साथ retroperitoneal मेटास्टेसिस के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक मॉडल बनाने के लिए36,51,52; हालांकि, मॉडल निर्माण की विधि के संबंध में वर्तमान साहित्य के भीतर महत्वपूर्ण भिन्नता मौजूद है। सेल निलंबन खुराक के रूप में कम के रूप में 4 x 105 कोशिकाओं / गर्भाशय सींग51 और के रूप में उच्च के रूप में 5 x 109 कोशिकाओं / के रूप में अच्छी तरह से, टीका तरीकों की एक किस्म गर्भाशय मायोमेट्रियम36में ट्यूमर के सूक्ष्म शल्य चिकित्सा प्रत्यारोपण सहित सूचित किया गया है, VX2 सेल निलंबन37केइंजेक्शन ,44,52 , 53 और कुछ मामलों में, अहानिकर552से पहले गर्भाशय सींग का अतिरिक्त सेवन किया जाता है। अंत में, कोई समूह इस मॉडल को बनाने के लिए सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के उपयोग की सूचना दी है। इस प्रकार, इस अध्ययन का उद्देश्य VX2 मॉडल निर्माण के एक सफल मानकीकृत विधि का प्रदर्शन करने के लिए और सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के पहले उपयोग की रिपोर्ट करने के लिए एक खरगोश में retroperitoneal metastases के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक मॉडल बनाने के लिए है.

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Protocol

गहरी पेट की दीवार बंद: peritoneal चीरा के शीर्ष की पहचान और ऊतक संदंश के साथ peritoneum, रेक्टस मांसपेशियों और फासिया समझ. सभी पशु अध्ययन पशु संसाधन केंद्र (एआरसी) विश्वविद्यालय स्वास्थ्य नेटवर्क की अनुमोदित सुविधाओं में और अनुमोदित पशु उपयोग और देखभाल प्रोटोकॉल (एयूपी #3994/#4299) के अनुसार आयोजित किए गए थे। VX2 सेल लाइन विश्वविद्यालय स्वास्थ्य नेटवर्क में डॉ Aken लैब से प्राप्त किया गया था.

1. इन विट्रो VX2 सेल लाइन का निर्माण

  1. खरगोश से VX2 ट्यूमर हार्वेस्ट क्वाड्रीसेप मांसपेशियों और माउस पार्श्व में विकास.
    1. Thaw जमे हुए VX2 ट्यूमर ब्लॉक (1 सेमी x 1 सेमी), एक खोपड़ी ब्लेड का उपयोग कर एक संस्कृति प्लेट पर कीमा और एक 70 डिग्री मीटर फिल्टर के माध्यम से तनाव Hanks संतुलित नमक समाधान (HBSS) की छोटी मात्रा में जोड़ने के द्वारा क्रमिक रूप से सभी कोशिकाओं को सुनिश्चित करने के लिए 1 एमएल के एक अंतिम मात्रा के लिए तनावपूर्ण रहे हैं.
    2. कोशिकाओं की गणना करें और 0ण्9% फॉस्फेट बफरेड लवण विलयन के साथ 1 x 107/एमएल की सांद्रता के साथ पतला करें और एक बाँझ ट्यूब में बर्फ पर रखें।
      नोट: ट्यूमर ब्लॉक खरगोश क्वाड्रीसेप्स मांसपेशियों में VX2 ट्यूमर के पिछले प्रचार से एक प्रयोगशाला सहयोगी से प्राप्त किए गए थे।
    3. एक महिला सफेद न्यूजीलैंड खरगोश (वजन 2.5-3.5 किलो) 2-5% साँस isoflurane के साथ Anesthetize, इंजेक्शन साइट overlying फर हटाने और povidone-आयोडीन समाधान के साथ इंजेक्शन साइट को साफ. खरगोश की चतुष्कोणीय मांसपेशी में तैयार VX2 सेल निलंबन (5 x 106 कोशिकाओं/एमएल) के 500 डिग्री एल को इंजेक्ट करें। 10 दिन से शुरू ट्यूमर के विकास के लिए चिकित्सकीय खरगोश की निगरानी करें।
    4. ट्यूमर के बाद खरगोशों को 1-1.5 सेमी व्यास तक पहुँचने (कैलिपर्स के साथ बाह्य रूप से मापा जाता है) एक पशु चिकित्सा अनुमोदित विधि का उपयोग करते हुए। हृदय गति और श्वसन दर सहित महत्वपूर्ण संकेतों की जाँच करके इच्छामृत्यु की पुष्टि करें। betadine समाधान के साथ क्षेत्र की सफाई के बाद बाँझ उपकरणों का उपयोग कर ट्यूमर उत्पाद निकालें।
    5. बाँझ उपकरणों का उपयोग कर एक जैविक सुरक्षा कैबिनेट में, एक स्केलपेल ब्लेड का उपयोग कर एक 10 सेमी ऊतक संस्कृति पकवान पर छोटे टुकड़ों (0.2 सेमी) में ट्यूमर कीमा। चरण 1.1.1 में वर्णित HBSS के 1 एमएल का उपयोग करके 70 डिग्री सेल छलनी के माध्यम से ट्यूमर के टुकड़े को पास करें। कोशिकाओं की गणना करें और 200 े में 7ण्5 x 105 कोशिकाओं को प्राप्त करने के लिए 0ण्9% लवणीय विलयन का उपयोग करके पतला करें।
    6. पुरुष नोद स्किड गामा चूहों (वजन 25 ग्राम) का उपयोग कर 4% isoflurane पर 1 L/ एक बार चूहों anesthetized कर रहे हैं, एक 27 गेज सुई का उपयोग कर माउस पार्श्व के subcutaneous ऊतक में कदम 1.1.5 से समाधान के 200 डिग्री सेल्सियस सुई.
  2. इन विट्रो में VX2 कोशिकाओं की कटाई और पासिंग
    1. मॉनिटर xenograft विकास चिकित्सकीय दो बार साप्ताहिक जब तक ट्यूमर कैलीपर्स का उपयोग कर व्यास में 1 सेमी तक पहुँचने।
    2. एक सीओ2 कक्ष में रखकर या 4% isoflurane गैस के साथ एनेस्थेटाइज़िंग के बाद गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था प्रदर्शन द्वारा चूहों euthanize. एक जैविक सुरक्षा कैबिनेट में बाँझ शर्तों के तहत उत्पाद शुल्क ट्यूमर।
    3. एक 6 सेमी ऊतक संस्कृति डिश में 1-2 मिमी टुकड़े में एक स्केलपेल के साथ मिन्स ट्यूमर Dulbecco के संशोधित ईगल मध्यम (DMEM) के 3 एमएल युक्त /
    4. कोशिकाओं ट्यूमर टुकड़े से बाहर विकसित करने के लिए शुरू जब तक दो दिनों के लिए 5% सीओ2 के साथ एक 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में अबाधित ट्यूमर टुकड़े छोड़ दें। इसके बाद सेल संगम के लिए प्रकाश माइक्रोस्कोपी द्वारा प्रतिदिन सुसंस्कृत प्लेटों की जांच करें। 70% संगम तक पहुंचने पर, फ्लास्क में 0.05% ट्रिप्सिन का 1 एमएल जोड़कर और 5 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस इनक्यूबेटर में वापस रखकर कोशिकाओं को ट्रिप्सिनाकरें करें।
    5. DMEM/Ham के F12 + 10% FBS माध्यम के 6 एमएल के साथ trypsin तटस्थ, 300 x ग्रामपर 5 मिनट के लिए कोशिकाओं और अपकेंद्रण इकट्ठा 4 डिग्री सेल्सियस पर। नए DMEM/Ham के F12 + 10% FBS मीडिया के 3.5 एमएल में supernatant निकालें और फिर से निलंबित गोली. बीज ताजा 6 सेमी कोलेजन मैं प्रति प्लेट 1.6 x 106 कोशिकाओं के साथ प्लेटों लेपित लगभग 50% सेल बोने घनत्व को प्राप्त करने के लिए।
      नोट: 50% सेल घनत्व जब संलग्न प्लेट की सतह क्षेत्र के 50% लेने की कोशिकाओं को संदर्भित करता है।
    6. जल्दी गुजर: उपरोक्त प्रक्रिया दोहराएँ (trypsinizing, बोने) जब तक कोशिकाओं को पारित किया गया है 5 बार और फिर पीसीआर के साथ सेल लाइन शुद्धता का आकलन एक मात्रात्मक पीसीआर परख का उपयोग करने के लिए माउस जीनोमिक डीएनए से खरगोश जीनोमिक डीएनए भेद (देखें कदम 1.3.1-1.3.4).
      नोट: 8 मार्गों के बाद, कोशिकाओं गैर-कोलेजन लेपित नियमित रूप से अनुयायी ऊतक संस्कृति प्लेटों पर प्रचारित किया जा सकता है।
    7. मार्ग, TRYpsinize और DMEM/HAM F12 +30% FBS + 10%DMSO में कोशिकाओं की alicots फ्रीज 2 x 106 प्रति शीशी की एकाग्रता पर. तरल नाइट्रोजन में कोशिकाओं को स्टोर जब तक प्रयोगों के लिए आवश्यक.
  3. जीवित कोशिकाओं के VX2 मूल की पुष्टि:
    1. शुद्ध जीनोमिक माउस और खरगोश डीएनए से एक मानक इलाज बनाएँ (चरण 1.3.2 और चरण 1.3.3). लाइन-1 रेट्रोट्रांसपॉसन तत्व के दूसरे खुले पढ़ने के फ्रेम के भीतर प्रजातियों-विशिष्ट दृश्यों को लक्षित करने वाले प्राइमर का उपयोग करें।
      नोट: CRPV E6 के लिए प्राइमर अनुक्रम हैं: 5'- GATCCTGGACCAGTGand 5'-CCTGCCGGTGTGATATAT. लाइन-1 रेट्रोट्रांसपॉसन तत्वों का उपयोग किया गया था। खरगोश लाइन-1 के लिए प्राइमर अनुक्रम हैं: 5'-TCAGGAACCAGAAGATGC और 5'-TTGATTGAGATGT प्रधानमंत्री दृश्यों के लिए माउस लाइन-1 हैं: 5'-AATGAAACATCTCGTG और 5'-CCTTCCGAGATATGATTG
    2. CRPV E6 के लिए एक मानक वक्र बनाने के लिए, VX2 ट्यूमर सेल lysate शुद्ध (चरण 1.1.1) निर्माता के प्रोटोकॉल का पालन एक वाणिज्यिक किट का उपयोग कर. एक वाणिज्यिक परख का उपयोग कर इस डीएनए की मात्रा. कम EDTA-TE बफर में 225 pg/$L से 0.925 pg/$L करने के लिए 6 सीरियल कमजोर पड़ने प्रदर्शन. माउस जीनोमिक डीएनए के लिए एक मानक वक्र बनाने के लिए, कम EDTA-TE बफर में वाणिज्यिक माउस जीनोमिक डीएनए के 100 डिग्री ग्राम को पतला करने के लिए 5 कमजोरपन से 125 pg/$L नीचे 0.0125 pg/
    3. कुओं में चरण 1.3.2 से प्रत्येक पतला समाधान से 4 डिग्री सेल्सियस रखें और पीसीआर थर्मोसाइकिलर में नमूने चलाएं। thermocycler सॉफ्टवेयर ऑटो थ्रेसहोल्ड सेटिंग्स का उपयोग कर एक मानक वक्र की गणना करने के लिए प्रति अच्छी तरह से डीएनए मात्रा के साथ प्रत्येक रन से CQ मानका उपयोग करें।
    4. थर्मोसाइकिलर पर 2-चरण साइकिल चालन (98 डिग्री सेल्सियस और 60 डिग्री सेल्सियस) के 40 चक्रों के साथ पीसीआर करने के लिए मानक ुपीसीआर प्रक्रियाओं का उपयोग करें। थ्रेशोल्ड मान ों की स्थापना, और सेट डेल्टा Ct मान पर gt;35 खरगोश VX2 सेल लाइन में कम से कम माउस संदूषण है यह सुनिश्चित करने के लिए। प्रत्येक अभिक्रिया की कुल मात्रा 10 डिग्री सेल्सियस थी, जिसमें 2x मास्टरमिक्स का 5 डिग्री एल, आगे का 1 डिग्री एल + रिवर्स प्राइमर था जिसमें 250 एनएम पर प्रतिक्रिया में अंतिम प्राइमर सांद्रता के साथ और 4 डिग्री एल डीएनए नमूने के थे।
      नोट: पीसीआर के प्रदर्शन पर विवरण के लिए संदर्भ54,55 देखें। थ्रेसहोल्ड मान स्थापित कर रहे हैं, और डेल्टा Ct मान पर सेट कर रहे हैं और यह सुनिश्चित करने के लिए कि खरगोश VX2 सेल लाइन में कम से कम माउस संदूषण है. QPCR द्वारा विश्वसनीय पता लगाने के लिए VX2 डीएनए की सिफारिश की स्तर 1-10 pg है.

2. VX2 सेल संस्कृति और सेल निलंबन के निर्माण

  1. VX2 कोशिकाओं युक्त Thaw शीशियों (चरण 1.2.7 में) 1 मिनट के लिए 37 डिग्री सेल्सियस पर एक पानी के स्नान में और संस्कृति माध्यम के 10 एमएल के साथ एक शंकु अपकेंद्रित्र ट्यूब के लिए कोशिकाओं को हस्तांतरण (1:1 DMEM/F-12 + 10% FBS और 1% Penicillin-streptomycin). 107 x ग्रामपर 8 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूज, सुपरनेंट को त्यागें और मीडिया के 9 एमएल में सेल गोली को फिर से निलंबित करें।
  2. एक बड़ी संस्कृति फ्लास्क के लिए फिर से निलंबित कोशिकाओं स्थानांतरण. 37 डिग्री सेल्सियस पर मिलाते हुए बिना इनक्यूबेट कोशिकाओं। प्रकाश माइक्रोस्कोपी का उपयोग कर संगम के लिए दैनिक कोशिकाओं की जाँच करें और संस्कृति मीडिया हर तीन दिन बदल जाते हैं।
  3. इंजेक्शन के लिए सुसंस्कृत VX2 सेल निलंबन का निर्माण
    1. कोशिकाओं 80% संगम तक पहुँच गए हैं एक बार फ्लास्क करने के लिए 0.25% trypsin के 3 एमएल जोड़कर कोशिकाओं की कोशिश ें। 5 मिनट के लिए इनक्यूबेटर (37 डिग्री सेल्सियस) में फ्लास्क रखें। एक शंकु अपकेंद्रित्र ट्यूब के लिए स्थानांतरण समाधान और 107 x ग्राम पर 8 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र और फिर सुपरनॉट को हटा दें।
    2. सेल छर्रों 3 बार फॉस्फेट बफर नमकीन, अपकेंद्रित्र के साथ 3 बार धो लें और ऊपर के रूप में supernatant हटा दें। कोशिकाओं की गणना करें और 0ण्9% फॉस्फेट बफरेड लवण विलयन के साथ 4 x 107 कोशिकाओं/एमएल की सांद्रता के साथ पतला करें और बर्फ पर एक बाँझ शंकु अपकेंद्रित्र ट्यूब में रखें।
  4. इंजेक्शन के लिए विवो प्रचारित VX2 सेल निलंबन का निर्माण
    1. Thaw जमे हुए VX2 ट्यूमर ब्लॉक (1 सेमी x 1 सेमी), एक खोपड़ी ब्लेड का उपयोग कर एक संस्कृति प्लेट पर कीमा और कदम 1.1.1 में के रूप में एक 70 डिग्री मीटर फिल्टर के माध्यम से तनाव. सभी कोशिकाओं 1 एमएल के अंतिम खंड के लिए तनावपूर्ण रहे हैं यह सुनिश्चित करने के लिए HBSSS की छोटी मात्रा में जोड़ें। कोशिकाओं की गणना करें और 0ण्9% फॉस्फेट बफर ेड लवण को 1 x107/एमएल की सांद्रता के साथ पतला करें और एक बाँझ ट्यूब में बर्फ पर रखें।
      नोट: ट्यूमर ब्लॉक खरगोश क्वाड्रीसेप्स मांसपेशियों में VX2 ट्यूमर के पिछले प्रचार से एक प्रयोगशाला सहयोगी से प्राप्त किए गए थे।

3. सर्जिकल मॉडल स्थापना

  1. शल्य संज्ञाहरण और पूर्व ऑपरेटिव तैयारी की स्थापना
    1. पूर्व दवा महिला सफेद न्यूजीलैंड खरगोश (2.5-3.5 किलो) 1 एच acepromazine के इंजेक्शन का उपयोग कर योजना बनाई शल्य चिकित्सा प्रक्रिया से पहले (1 मिलीग्राम / एक महिला सफेद न्यूजीलैंड खरगोश (वजन 2.5-3.5 किलो) 2-5% साँस isoflurane के साथ Anesthetize, इंजेक्शन साइट overlying फर हटाने और povidone-आयोडीन समाधान के साथ इंजेक्शन साइट को साफ.
    2. एक स्वरयंत्र मुखौटा airway (LMA) का उपयोग कर और टेप के साथ जगह में सुरक्षित का उपयोग कर anesthetized खरगोश intubate, 2-5% के बीच साँस आइसोफ्लुरेन खुराक titrating द्वारा गहरी संज्ञाहरण बनाए रखने. महत्वपूर्ण संकेत (श्वसन दर, केशिका फिर से भरना, ऑक्सीजन संतृप्ति यदि उपलब्ध हो) की जाँच करके प्रक्रिया के दौरान नियमित रूप से शल्य चिकित्सा संज्ञाहरण की निगरानी करें और दर्द के संकेत के लिए निगरानी (आंदोलन, उत्तेजनाओं से वापसी, शोर) या प्रकाश संज्ञाहरण (आंदोलन, LMA ट्यूब पर चबाने).
      नोट: यह अनुभव शल्य संज्ञाहरण की निगरानी के साथ किसी के द्वारा किया जाना चाहिए.
    3. सीमांत पृष्ठीय शिरा में एक 22 गेज कान-शिरा कैथेटर रखें। शल्य त्वचा चीरा से पहले नसों में 10 मिनट के अंत में cefazolin (20 मिलीग्राम/
    4. ऑपरेटिंग टेबल पर खरगोश रखने से पहले श्रोणि और पेट पर बाल क्लिप, तो ऑपरेटिंग टेबल पर एक पृष्ठीय स्थिति में खरगोश जगह है। एक 3 कदम शल्य त्वचा तैयार (बीटाडीन साबुन, chlorhexidine समाधान, betadine समाधान) का उपयोग कर शल्य क्षेत्र को साफ करें। जघन हड्डी के शीर्ष को जमीन पर चिह्नित करने के बाद लैपरोटोमी पर्दे के साथ सर्जिकल क्षेत्र को ड्रेप करें, निचले पेट के 5 सेमी x 5 सेमी क्षेत्र को उजागर करें।
  2. लैपरोटॉमी चीरा और गर्भाशय सींग की पहचान का निर्माण
    1. एक शल्य टोपी और चेहरे मुखौटा पर रखो. chlorhexidine या betadine सर्जिकल स्क्रब समाधान का उपयोग कर हाथ स्क्रब करें। बाँझ तकनीक का उपयोग करना, एक बाँझ गाउन और बाँझ शल्य दस्ताने पर डाल दिया.
    2. एक $ 11-ब्लेड स्केलपेल का उपयोग करना, एक 2.5 सेमी लंबे चीरा 1 सेमी कपाल त्वचा और खरगोश पेट के चमड़े के नीचे ऊतक के माध्यम से symphysis जघन के लिए. रेक्टस फासिया को उत्तेजित करें और रेक्टस की मांसपेशियों को बाद में विभाजित करें ताकि अंतर्निहित पेरिटोनम को उजागर किया जा सकता है। यह सुनिश्चित करने के बाद पेरिटोनम तेजी से दर्ज करें कि सतह आंत्र या अन्य पेट के अंगों से स्पष्ट है।
    3. मूत्राशय की पहचान करने वाले गर्भाशय के सींगों का पता लगाएँ और मूत्राशय के शीर्ष पर बेहतर, पीछे और बाद में एक दस्ताने दारी उंगली को व्यापक करें।
      नोट: यदि आवश्यक हो, पूर्ण मूत्राशय डिजिटल दबाव का उपयोग कर खाली किया जा सकता है. एक बार स्थित है, पेट की दीवार पर आराम करने के लिए पेट चीरा के माध्यम से गर्भाशय सींग ले आओ.
    4. एक 3-0 चोटी अवशोषित सीवन का उपयोग करना, प्रत्येक गर्भाशय सींग के एक एकल सीवन ligation लगभग 1.5-2.0 सेमी cervices के लिए distal प्रदर्शन. सीवन को गर्भाशय धमनियों के लिए सिर्फ मध्यस्थ रखें, जो प्रत्येक सींग के पार्श्व पहलू के साथ चलते हैं। सीवनों को आराम से बाँधकर दूर गर्भाशय के सींगों को रोक नाले में बांधें (चित्र 1)।
  3. मायोमेट्रियल VX2 टीका
    1. एक 27 गेज सुई का उपयोग करना, या तो कदम से पहले तैयार VX2 सेल निलंबन के 0.5 एमएल सुई 2.3.2 (संस्कृत VX2 मॉडल के लिए) या 2.4 (विवो प्रचारित VX2 मॉडल के लिए) प्रत्येक गर्भाशय सींग के मायोमेट्रियम में सीवन साइट के लिए निकट (सीवन साइट के बीच) और गर्भाशय ग्रीवा). 1 मिनट से अधिक इंजेक्शन और सुनिश्चित करें कि कोशिकाओं अंतर्निहित गर्भाशय गुहा में इंजेक्शन नहीं किया जा रहा है। साँस isoflurane का उपयोग कर जानवरों एनेस्थेटाइज (2-5%) और एक Bain सर्किट के साथ एक संवेदनाहारी मशीन.
    2. कोशिकाओं के रिसाव को कम करने के लिए इंजेक्शन के बाद 30 एस के लिए मायोमेटरियल इंजेक्शन साइट पर दबाव लागू करें। हेमोस्टेसिस के लिए इंजेक्शन और सीवन साइटों का निरीक्षण करें और गर्भाशय के सींगों को वापस पेट में रखें।
  4. शल्य चीरा बंद
    1. गहरी पेट की दीवार बंद: peritoneal चीरा के शीर्ष की पहचान और ऊतक संदंश के साथ peritoneum, रेक्टस मांसपेशियों और फासिया समझ.
      1. ऐसा करने के लिए, चीरा के एक शीर्ष पर सीवन को चीरा के एक तरफ सतही और दूसरे पर सतही करने के लिए गहरी करने के लिए suturing द्वारा लंगर। एक गाँठ बाँधो. संलग्न सीवन का उपयोग करना, पक्ष की ओर से चीरा के साथ कदम-वार काम कर पेट की दीवार की परतों के माध्यम से चीरा के लंबवत टांके बनाते हैं। सीवन बाँधो और काट दो।
    2. सतही पेट की दीवार बंद: त्वचा चीरा के शीर्ष की पहचान और दफन चल subcuticular 3-0 अवशोषित पॉली-फिलामेंट सीवन का उपयोग कर पेट की त्वचा सीवन। त्वचा के किनारों का विरोध करने के लिए बंद चीरा करने के लिए सर्जिकल गोंद लागू करें।
      1. ऐसा करने के लिए, चीरा के एक शीर्ष पर सीवन लंगर, चीरा के एक तरफ सतही करने के लिए गहरी suturing और दूसरे पर गहरी करने के लिए सतही. एक गाँठ बाँधो. संलग्न टांके का उपयोग करना, पक्ष की ओर से चीरा के साथ कदम-वार काम कर रहे छेद परत के समानांतर dermal परत में चल टांके बनाते हैं। सीवन बाँधो और काट दो।
  5. पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल
    1. संज्ञाहरण से जागृति: चीरा बंद कर दिया है एक बार आइसोफ्लुरेन बंद कर दें और जागृति के संकेत के लिए निगरानी करते समय मुखौटा द्वारा खरगोश सांस ऑक्सीजन जाने (उदाहरण के लिए, सहज आंदोलनों, आंख खोलने और स्वरयंत्र मुखौटा airway पर चबाने की गति). खरगोश Extubate एक बार इन संकेतों का उल्लेख कर रहे हैं और मुखौटा और एक गर्म कंबल द्वारा ऑक्सीजन प्रदान जब तक खरगोश सतर्क और स्वतंत्र रूप से बैठने में सक्षम हैं.
    2. पोस्ट ऑपरेटिव निगरानी: मॉनिटर खरगोश 4 दिनों के लिए एक दिन में दो बार और एक अतिरिक्त 10 दिनों के बाद ऑपरेटिव के लिए दैनिक. निगरानी करने के लिए, उनकी सामान्य स्थिति का आकलन, उनके भोजन और पानी का सेवन, मूत्र और मल उत्पादन, दर्द का आकलन, वजन, महत्वपूर्ण संकेत (दिल की दर, श्वसन दर) और उनके शल्य चिकित्सा साइट सूजन, एरिथेमा, निर्वहन या dehiscence की तलाश में.
    3. पोस्ट ऑपरेटिव दर्द नियंत्रण: प्रशासन Meloxicam दैनिक (0.2 mg/kg SQ) 48 एच के बाद ऑपरेटिव के लिए और फिर दर्द के आकलन के आधार पर के रूप में की जरूरत है. प्रशासन buprenorphine तुरंत बाद ऑपरेटिव और हर 12 एच (0.01-0.05 मिलीग्राम/
    4. एंटीबायोटिक्स (enrofloxacin 5mg/kg IM) अपने पशु चिकित्सक द्वारा सिफारिश के रूप में घाव संक्रमण को रोकने के लिए सात दिनों के बाद के बाद दैनिक प्रशासित किया जा सकता है। निर्जलीकरण और नरम खाद्य पदार्थ या अन्य पूरक आहार के लिए आवश्यक के रूप में एक दिन में दो बार subcutaneous तरल पदार्थ (15 एमएल SQ) प्रशासन दैनिक के रूप में वजन घटाने के लिए आवश्यक प्रदान की जाती हैं.

4. ट्यूमर विकास की निगरानी

  1. नैदानिक निगरानी: मॉनिटर खरगोश हर 2 दिन ट्यूमर विकास के नैदानिक लक्षण के लिए पोस्ट ऑपरेटिव दिन 14 पर शुरू. ट्यूमर के विकास के नैदानिक लक्षण ों में मौखिक सेवन में कमी, सुस्ती, पेट की कोमलता, स्पष्ट पेट द्रव्यमान और सीकोट्रोफी की हानि शामिल हो सकती है।
  2. इमेजिंग और आक्रामक निगरानी
    1. सीटी इमेजिंग: बाद ऑपरेटिव दिन 21-28, पूर्व दवा, एनेस्थेटाइज़, और intubate खरगोश के रूप में पहले 3.1.1.3.1.2 में वर्णित है. एक पूर्व नैदानिक सीटी स्कैनर में एक पृष्ठीय स्थिति में स्थिति खरगोश और नसों iohexol विपरीत एजेंट के 10 एमएल प्रशासन के बाद श्रोणि और पेट की छवियों को प्राप्त करते हैं।
    2. सर्जिकल निगरानी: इमेजिंग के बाद ऑपरेटिंग रूम में खरगोशों को स्थानांतरित करें, जबकि अभी भी सामान्य एनेस्थेटिक के तहत। स्थिति, तैयारी और ड्रेप खरगोश के रूप में पहले चरण 3.1.4 में वर्णित है और पिछले चीरा के माध्यम से लंबाई में लगभग 1.5 सेमी एक दोहराने laparotomy चीरा प्रदर्शन. गर्भाशय के सींगों की पहचान करें और ट्यूमर की सावधानी पूर्वक जांच करें। चीरा बंद करें और पोस्ट ऑपरेटिव देखभाल प्रदान के रूप में पहले चरण में वर्णित 3.5.2-3.5.4.
    3. खरगोश मॉडल का उपयोग करें: खरगोश शल्य निगरानी के समय ट्यूमर है पाया जाता है, की योजना बनाई प्रयोगों के लिए खरगोश एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल का उपयोग करें। 4 सप्ताह के बाद टीका लगाने में अतिरिक्त प्रयोगों के लिए vivo प्रचारित कोशिकाओं में से बनाया खरगोश का प्रयोग करें और धीमी ट्यूमर विकास के लिए खाते के लिए लगभग 5-6 सप्ताह के बाद टीका लगाने पर सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं से बनाई गई खरगोश मॉडल का उपयोग करें। ट्यूमर के बाद खरगोशों को 1-1.5 सेमी व्यास तक पहुँचने (कैलिपर्स के साथ बाह्य रूप से मापा जाता है) एक पशु चिकित्सा अनुमोदित विधि का उपयोग करते हुए। हृदय गति और श्वसन दर सहित महत्वपूर्ण संकेतों की जाँच करके इच्छामृत्यु की पुष्टि करें। betadine समाधान के साथ क्षेत्र की सफाई के बाद बाँझ उपकरणों का उपयोग कर ट्यूमर उत्पाद निकालें।

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Representative Results

अट्ठाईस खरगोशों एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल के निर्माण के लिए इस्तेमाल किया गया. प्रयोग के समय खरगोशों का औसत वजन 2.83 किग्रा (2.71-3.58 किग्रा) था। गर्भाशय ट्यूमर सफलतापूर्वक 75% की एक समग्र मॉडल सफलता दर के लिए 21 खरगोशों में वृद्धि हुई. प्रोटोकॉल में गर्भाशय suturing के शामिल किए जाने से पहले, सफलता की दर थी 57% गर्भाशय suturing के बाद 81% की तुलना में जोड़ा गया था. गर्भाशय suturing प्रारंभिक कम मॉडल सफलता दर के जवाब में 7वीं खरगोश के बाद प्रोटोकॉल के लिए जोड़ा गया था. पांच मॉडल सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं से बनाए गए थे (8 खरगोशों में प्रयास किया, 63% सफलता दर) और 16 खरगोश मॉडल vivo प्रचारित कोशिकाओं में से बनाया गया था (22 में प्रयास किया, 73% सफलता दर). विवो प्रचारित VX2 कोशिकाओं में से बनाए गए मॉडलमें, सभी जानवरों में 5 x 106 प्रति गर्भाशय सींग की एक सेल खुराक का उपयोग किया गया था और टीका से प्रयोग करने के लिए दिनों की औसत संख्या 29 दिन (रेंज 24-31) थी। सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं से बनाए गए मॉडलों में, एक बढ़ती खुराक प्रोटोकॉल उचित टीका खुराक निर्धारित करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. 2.5 x 106 कोशिकाओं और 5 x 106 कोशिकाओं प्रति गर्भाशय सींग की खुराक असफल रहे थे और 10 x 106 गर्भाशय सींग प्रति कोशिकाओं की एक खुराक एक खरगोश में सफल रहा था हालांकि, ट्यूमर विकास टीका से प्रयोग करने के लिए 57 दिनों में धीमी थी. गर्भाशय सींग प्रति 20 x 106 कोशिकाओं की एक खुराक 45 दिनों के एक औसत समय में 4 खरगोशों में सफल रहा था (रेंज 36 - 51 दिन) टीका से प्रयोग करने के लिए और इस प्रकार इष्टतम इंजेक्शन खुराक के रूप में निर्धारित किया गया था. इस डेटा को तालिका 1में सारांशित किया गया है। पीसीआर विश्लेषण पर 5 पारित होने के बाद, सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं दोनों खरगोश लाइन-1 और CRPV-E6 माउस LI NE-1 की केवल ट्रेस मात्रा के साथ के लिए अत्यधिक सकारात्मक थे की पहचान की गई थी ([lt;0.01 pg/$l). कोशिकाओं को बाद में सेल संस्कृति में बड़े हो गए थे, हालांकि, विकास 7 दिनों (6-9 घ) के एक औसत समय के साथ धीमी गति से था फ्लास्क संगम को प्राप्त करने के लिए.

सभी मॉडलों ने रेट्रोपेरिटोनल लिम्फ नोड्स के मेटास्टैटिक रूपांतरण के परिणामस्वरूप सफलतापूर्वक परिणामदिया (चित्र 2)। उन्नीस खरगोशों ने पैथोलॉजिकल रूप से लिम्फ नोड मेटास्टेसिस की पुष्टि की थी और 11 में पैथोलॉजिकल रूप से अतिरिक्त नोड पेट मेटास्टेसिस की पुष्टि की गई थी। एक खरगोश अलग लिम्फ नोड्स हटा नहीं था; हालांकि, यह अंतर पेट की बीमारी है जिसमें लिम्फ नोड मेटास्टेसिस ग्रहण किया गया था की एक उच्च बोझ था, और एक खरगोश प्रयोग करने से पहले मर गया. सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं से ट्यूमर और मेटास्टैटिक लिम्फ नोड्स विवो में से ट्यूमर के समान दिखाई दिया ऊतक विज्ञान पर VX2 कोशिकाओं का प्रचार किया (चित्रा 3), घने hematoxylin दाग कोशिकाओं के साथ मांसपेशियों पर हमला और कई के साथ ग्रंथियों की तरह संरचनाओं के गठन रोगमाइटी आंकड़े।

एक उपन्यास इमेजिंग एजेंट का उपयोग करना, Porphysome, 81 लिम्फ नोड्स इंट्रा ऑपरेटिव की पहचान की और शल्य चिकित्सा हिस्टोलॉजिक विश्लेषण के लिए हटा दिया गया. 74 लिम्फ नोड्स श्रोणि लिम्फ नोड्स छोड़ दिया गया, 5 सही श्रोणि लिम्फ नोड्स थे और 2 सही पैरा-ओर्टी लिम्फ नोड्स थे। लसीका नोड्स vivo प्रचारित VX2 ट्यूमर में के साथ खरगोशों से हटा दिया काफी बड़ा और अधिक नेक्रोटिक थे 0.99 सेमी3 की एक औसत मात्रा के साथ सुसंस्कृत VX2 ट्यूमर के साथ खरगोशों से हटा दिया उन लोगों की तुलना में (रेंज 0.12 - 3.89) बनाम 0.59 सेमी3 (0.01 - ( २. ९. १२२) च ।। के रूप में अच्छी तरह से, विवो प्रचारित ट्यूमर में खरगोशों के साथ खरगोशों की तुलना में एक औसत लंबाई 5.6cm (4-6.8 सेमी) और 5.2cm (3.3 - 9 सेमी) बनाम 3.6 सेमी (2-5 सेमी) और 4.56 सेमी (3-7 सेमी) की औसत चौड़ाई की औसत चौड़ाई क्रमशः था। अंत में, वीवो प्रचारित VX2 कोशिकाओं में से बने खरगोश मॉडल में से अधिक अतिरिक्त-नोडल पेट मेटास्टेसिस था, जो कि सुसंस्कृत कोशिकाओं से बने खरगोश मॉडल की तुलना में 91% है, जो विवो प्रचारित खरगोशों में पाया जाता है।

Figure 1
चित्र 1: गर्भाशय suturing. काला तीर [ टांके, लाल तीर ] गर्भाशय सींग. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्रा 2: VX2 ट्यूमर (ए) इंट्रा-यूटेरिन ट्यूमर। काला तीर - ट्यूमर, लाल तीर - गर्भाशय सींग (बी) मेटास्टेटिक बाएं श्रोणि लिम्फ नोड्स। काला तीर - मेटास्टैटिक लिम्फ नोड्स। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3: सुसंस्कृत सेल VX2 ट्यूमर की ऊतकविज्ञान (ए) एच एंड ई धुंधला आसपास की मांसपेशियों के ट्यूमर घुसपैठ को दर्शाता है (10x आवर्धन, स्केल बार $ 300 m) (बी) Pancytokeratin धुंधला एच एंड ई पर ट्यूमर के क्षेत्रों के लिए इसी घने धुंधला ट्यूमर कोशिकाओं को दर्शाता है (10x आवर्धन, पैमाने पर $ 300 उ)। काला तीर - VX2 ट्यूमर. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

मॉडल प्रकार विवो VX2 ट्यूमर मॉडल में संस्कृतिVX2 ट्यूमर मॉडल
सफल मॉडलों की संख्या 16 5
प्रयास किए गए मॉडलकी संख्या 22* 8
मॉडल सफलता दर 73% 63%
टीका से प्रयोग करने का समय 29 दिन (24-31) 45 दिन (36-51)
सफल इंजेक्शन खुराक 1 x 107 40 x 106
(5x106 प्रति गर्भाशय सींग) (20 x 106 प्रति गर्भाशय सींग)
कुल मिलाकर सफलता दर 75%
गर्भाशय से पहले कुल सफलता दर 57%
गर्भाशय suturing के बाद कुल मिलाकर सफलता दर 81%

तालिका 1: प्रयोगात्मक स्थितियों, इस्तेमाल किया जानवरों की संख्या, और सफलता दर सहित मॉडल डेटा। 2 खरगोश ों को शुरू में सुसंस्कृत सेल ट्यूमर मॉडल के लिए इस्तेमाल किया जिसमें विकास असफल था बाद में विवो ट्यूमर मॉडल में के लिए इस्तेमाल किया गया

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Discussion

इसमें, हम एक VX2 एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल की स्थापना के लिए एक मानकीकृत शल्य चिकित्सा विधि की सूचना दी है और सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं के पहले उपयोग पर रिपोर्ट इस मॉडल बनाने के लिए. 75% की ट्यूमर ले दर साहित्य35,37,53,56में पहले की रिपोर्ट की 100% प्रतिशत दर से कम है ; तथापि, रोग विज्ञान की पुष्टि की लिम्फ नोड मेटास्टेसिस की 90% दर इस मॉडल35,53के पिछले अध्ययनों के अनुरूप है।

गर्भाशय suturing के शामिल किए जाने से मॉडल की सफलता की दर में काफी वृद्धि हुई 57% से 81% और हम इस कदम पर विचार करने के लिए शल्य प्रोटोकॉल का एक अभिन्न हिस्सा है. गर्भाशय suturing शुरू में साहित्य में suturing के उपयोग की परस्पर विरोधी रिपोर्टों और द्विपक्षीय गर्भाशय धमनी लिगेशन से गर्भाशय सींग devascularization के बारे में चिंताओं के कारण प्रदर्शन नहीं किया गया था. गर्भाशय suturing के अलावा के साथ लेने की दर में महत्वपूर्ण सुधार को देखते हुए, हम hypothesize कि सेल निलंबन के रिसाव इंजेक्शन साइट से दूर प्रारंभिक कम सफलता दर के लिए योगदान दिया हो सकता है. गर्भाशय सींग के एक छोटे से हिस्से में सेल निलंबन युक्त परमाणु यह सुनिश्चित करता है कि कोशिकाओं की एक उच्च स्थानीय एकाग्रता मायोमेट्रियम के वास्कुलेचर के संपर्क में है जो संभावित रूप से ट्यूमर engraftment में सुधार करता है। इसके अलावा, प्रयोग में गर्भाशय सींग परिगलन के कोई मामले नोट नहीं किए गए थे। यह सुनिश्चित करना कि सेल निलंबन मायोमेट्रियम में इंजेक्ट किया जाता है, इंट्रा-यूटेरिन या अतिरिक्त-मायोमेटिक इंजेक्शन भी सेल निलंबन के नुकसान को बढ़ा सकता है। खरगोशों में गर्भाशय मायोमेट्रियम बेहद पतली है और सच इंट्रा-मायोमेटिक इंजेक्शन मुश्किल है। इस वजह से, हम hypothesize कि इस तरह के Matrigel के रूप में एक सेलुलर मैट्रिक्स पाड़ का उपयोग कोशिकाओं है कि अनजाने में गर्भाशय गुहा में इंजेक्शन हैं की लेने की दर में सुधार हो सकता है. इन संभावित सीमाओं के बावजूद, हमें विश्वास है कि सेल निलंबन विधि पहले से सूचित microsurgical तरीकों से बेहतर है36 जिसमें ट्यूमर ब्लॉक गर्भाशय मायोमेट्रियम पर grafted के रूप में इस विधि तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण है. इसकी तुलना में, यहाँ विधि सरल है, आमतौर पर इस्तेमाल किया तकनीकों को शामिल किया गया है और यह इन कारणों के लिए है, हम इसे अत्यधिक reproduible होने का मानना है.

में विवो प्रचारित VX2 खरगोश मॉडल 5 x 10गर्भाशय सींग जो VX2 खरगोश मॉडल के साथ एक सहयोगी के अनुभव पर आधारित था प्रति कोशिकाओं की एक मानक खुराक के साथ इंजेक्शन थे. यह खुराक साहित्य में रिपोर्ट की तुलना में काफी कम है जिसमें सेल खुराक के रूप में उच्च के रूप में 1 x 108 हरिमा एट अल द्वारा52 और 5 x 109 दोनों Huang37,53 और Xu35 द्वारा इस्तेमाल किया गया. कम समय सीमा जिसमें मॉडल स्थापित किया गया था और दोनों लिम्फ नोड और अतिरिक्त नोड मेटास्टेसिस की उच्च दर को देखते हुए, हम विश्वास नहीं करते कि एक उच्च खुराक के उपयोग के मॉडल में सुधार होता है. एक उच्च खुराक और भी अधिक तेजी से और आक्रामक ट्यूमर प्रसार जो मॉडल की उपयोगिता ख़राब होगा बढ़ावा दिया हो सकता है. विवो प्रचारित VX2 मॉडल के 83% प्रयोग के समय अतिरिक्त नोडल रोग था और यह आश्चर्य की बात है कि अन्य समूहों 30 दिनों में पेट मेटास्टेस के विकास की रिपोर्ट नहीं किया है. इस अंतर के लिए एक संभव विवरण अनजाने इंट्रा-संवहनी टीका हो सकता है27 उच्च दबाव या उच्च गति इंजेक्शन जो अधिक तेजी से दूर metastatic प्रसार में परिणाम कर सकते हैं के कारण. हम इस प्रकार hypothesize कि इंजेक्शन की गति metastases की दर में एक कारक हो सकता है यही वजह है कि हम प्रोटोकॉल में एक धीमी गति से इंजेक्शन की गति की सिफारिश.

तुलनात्मक रूप से, उच्च इंजेक्शन खुराक के बावजूद (20 x 106 प्रति गर्भाशय सींग), सुसंस्कृत VX2 मॉडल खरगोशों का केवल 40% अतिरिक्त नोड रोग विकसित किया है और सभी metastatic जमा ध्यान से छोटे और इन खरगोशों में कम नेक्रोटिक थे. हमारे पास कोई ऐसा साहित्य नहीं है जिसके साथ सीधे परिणामों की तुलना की जाए क्योंकि यह इस मॉडल को बनाने के लिए सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं का पहला रिपोर्ट किया गया उपयोग है। तथापि, निष्कर्ष अन्य सुसंस्कृत VX2 ट्यूमर के अध्ययन के अनुरूप हैं जिसमें उच्च टीका खुराक की आवश्यकता थी और ट्यूमर के विकास को धीमी गति से27,31होना नोट किया गया था. इस प्रयोग के माध्यम से, हमने गर्भाशय सींग प्रति 20 x 106 कोशिकाओं की इष्टतम इंजेक्शन खुराक की पहचान की है जिसके परिणामस्वरूप एक बढ़ती खुराक प्रोटोकॉल का उपयोग करके खरगोशों के 80% में विश्वसनीय विकास और मेटास्टेसिस हुआ। यह संभव है कि सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं की एक भी उच्च खुराक जल्दी metastatic प्रसार में परिणाम होगा लेकिन के रूप में VX2 कोशिकाओं संस्कृति में धीरे धीरे वृद्धि हुई, यह संस्कृति के लिए चुनौतीपूर्ण था पर्याप्त कोशिकाओं को एक उच्च खुराक का प्रयास करने के लिए. यह अध्ययन की एक सीमा है और भविष्य की जांच के लिए एक संभावित क्षेत्र के रूप में इस की पहचान की है. हालांकि, हम सुसंस्कृत सेल मॉडल में धीमी वृद्धि दर को लाभप्रद मानते हैं क्योंकि हमारा मानना है कि यह एंडोमेट्रियल कैंसर के नैदानिक परिदृश्य को अधिक मज़बूती से दोहरा सकता है, क्योंकि एंडोमेट्रियल कैंसर आम तौर पर एक धीमी गति से बढ़ती बीमारी है जो पहले मेटास्टेस करता है श्रोणि लिमका नोड्स और देर से दूर मेटास्टेसिस में परिणाम. चूहों में VX2 कोशिकाओं का प्रचार करने के लिए प्रारंभिक विकल्प एक तेजी से बदलाव के लिए अनुमति दी, और कम महंगा रखरखाव लागत; हालांकि वैकल्पिक रूप से, कोशिकाओं खरगोशों की क्वाड्रीसेप्स मांसपेशियों से सीधे प्राप्त किया जा सकता था.

हमें विश्वास है कि संकेत और ट्यूमर के विकास के लक्षण ों के लिए बंद के बाद ऑपरेटिव निगरानी प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण पहलू है. हमारे अनुभव में, एक बार खरगोश मेटास्टैटिक रोग विकसित करते हैं, वे नैदानिक रूप से अस्वस्थ होने के लिए तेजी से प्रगति करते हैं, सबसे विशेष रूप से विवो प्रचारित समूह में। इस तेजी से, आक्रामक विकास की योजना बनाई प्रयोग की तारीख से केवल 2 दिनों की देरी के बाद metastatic रोग से एक खरगोश की मौत से प्रकाश डाला गया था. जबकि VX2 मॉडल स्थापना की गति एक शक्ति माना गया है, इसी तरह माउस मॉडल के रूप में (यानी, एचईसी-1 डोमेन्टोरियल कार्सिनोमा मॉडल चूहों में लिम्फ नोड metastases के साथ) दो बार तक ले जा सकते हैं के रूप में लंबे समय के लिए स्थापित करने के लिए57, इन निष्कर्षों को भी प्रदर्शित इष्टतम प्रयोगात्मक समय का है कि दृढ़ संकल्प सर्वोपरि है. निष्कर्ष पहले के अध्ययनों के साथ सहसंबंधित होते हैं जिसमें ट्यूमर के विकास और लिम्फ नोड वृद्धि में पोस्ट-ऑपरेटिव दिन 2137,53के बाद काफी वृद्धि हुई ; लेकिन हमें विश्वास है कि वहाँ VX2 सेल लाइन के संबंध में परिवर्तनशीलता का इस्तेमाल किया और समूहों को उनके विशिष्ट प्रयोगात्मक समय को समझने के लिए प्रोत्साहित करेंगे. इस समय हमारे सुसंस्कृत VX2 मॉडल के लिए सच पकड़ नहीं है और एक क्षेत्र है जो आगे के अध्ययन की आवश्यकता के रूप में इस की पहचान की है. ट्यूमर के विकास के बारे में कुछ होना करने के लिए, हम प्रोटोकॉल के दौरान दोनों गैर इनवेसिव और इनवेसिव ट्यूमर की निगरानी का उपयोग करने के लिए चुना है। हालांकि, एक और भविष्य की दिशा के बाद ऑपरेटिव इमेजिंग प्रोटोकॉल को परिष्कृत करने के लिए एक दूसरे इनवेसिव प्रक्रिया के लिए की आवश्यकता से बचने के लिए हो सकता है.

कुल मिलाकर, हम खरगोशों में retroperitoneal लसीकापर्वचिकित्सा के साथ एंडोमेट्रियल कैंसर का एक मॉडल बनाने के लिए एक सरल, मानकीकृत विधि की सूचना दी है. इस प्रोटोकॉल के माध्यम से, हम सेल खुराक, शल्य तकनीक और बाद ऑपरेटिव मॉडल निगरानी के संबंध में VX2 साहित्य के भीतर महत्वपूर्ण परिवर्तनशीलता को संबोधित किया है. हम समझते हैं कि अध्ययन की एक और सीमा यह है कि एक VX2 सेल लाइन के बजाय एक मानव xograft हम पूरी तरह से ट्यूमर जीव विज्ञान और मानव कैंसर के microenvironment नकल नहीं कर रहे हैं का उपयोग कर. हालांकि, हमें उम्मीद है कि अन्य समूहों सुसंस्कृत VX2 कोशिकाओं का उपयोग करने के लिए अपने मॉडल बनाने के रूप में हमें विश्वास है कि इस सेल प्रकार मानव endometrial कैंसर और अधिक मज़बूती से अपनी धीमी वृद्धि के माध्यम से मॉडल और metastasize करने के लिए प्रवृत्ति में कमी हो सकती है. हम गर्भाशय के इस तेजी से और आसान मॉडल के लिए अन्य समूहों को प्रोत्साहित retroperitoneal लिम्फ नोड मेटास्टेसिस उपन्यास इमेजिंग उपचार का अध्ययन करने के लिए metastatic एंडोमेट्रियल कैंसर के साथ रोगियों की मदद.

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Disclosures

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

इस अध्ययन टेरी फॉक्स अनुसंधान संस्थान (PPG $ 1075), कनाडा स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (#154326 फाउंडेशन अनुदान), कनाडा कैंसर सोसायटी अनुसंधान संस्थान (704718), प्राकृतिक विज्ञान और कनाडा के इंजीनियरिंग अनुसंधान परिषद द्वारा वित्त पोषित किया गया था, अभिनव और राजकुमारी मार्गरेट कैंसर फाउंडेशन के लिए ज़नाडा फाउंडेशन.

मैं प्रारंभिक VX2 मॉडल और जमे हुए VX2 ट्यूमर ब्लॉक की स्थापना के लिए प्रारंभिक VX2 कोशिकाओं को उपलब्ध कराने के लिए डॉ Margurite Akens शुक्रिया अदा करना चाहूँगा. मैं प्रारंभिक VX2 सेल संस्कृति प्रयोगों और Lili डिंग VX2 सेल संस्कृति के साथ मदद करने के लिए प्रदर्शन करने में मदद करने के लिए मार्को DiGrappa शुक्रिया अदा करना चाहते हैं.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
11-blade scalpel, Sterile, Disposible Aspen Surgical (VWR) 80094-086
22-gague ear vein catheter CDMV 14332
3-0 absorbable poly-filament suture (Polysorb) Covidien 356718
3-0 braided absorbable suture (Polysorb) Covidien 356718
70uM cell strainer, Individually wrapped, Nylon Falcon 352350
Acepromazine (Atravet) CDMV 1047
Betadine soap (Poviodone iodine 7.5%) CDMV 4363
Betadine solution (Poviodone iodine 10%) UHN Stores 457955
Buprenorphine McGill University
Cefazolin UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Chlorhexidine solution CDMV 119872
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 100mm dishes Corning 354450 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 24-well plates Corning 354408 brand not important
Corning BioCoatCellware, Collagen Type I, 6-well plates Corning 354400 brand not important
Corning Matrigel Basement Membrane Matrix, *LDEV-free, 10 mL Corning 354234
DMEM/HAM F12 1:1 Life Technologies 11320 brand not important
DMSO Caledon Lab Chem 1/10/4100
Enrofloxacin (Baytril injectable) CDMV 11242
Falcon Tube Corning Centri-Star 430828
Fetal Bovine Serum, Qualified, Canadian Origin, 500ml Life Technologies 12483020 brand/source not important
Isoflurane UHN in-patient pharmacy No Cat # Needed
Isohexol contrast GE Healthcare 407141210
Meloxicam (Metacam 0.5%) CDMV 104674
Normal Saline House Brand (UofT Medstore) 1011
PBS Multicell or Sigma 331-010-CL or D8537-500mL
Penicillin/Streptomycin (100mL; 10000U Penicillin, 10000ug Streptomycin) Corning-Cellgro CA45000-652
Sterile Hanks Balanced Salt Solution (-Ca++, -Mg++, -Phenol Red) T.C.M.F (Dr Bristow) 28-Jan-11
Surgical Glue (Tissue Adhesive) 3M Vetbond 14695B
Trypsin (0.25%), Proteomics Grade Sigma T-6567-5X20UG
Trypsin-EDTA, 0.05%, 100ml Wisent Inc 325-542-EL brand not important

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References

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: Sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. International Journal of Cancer. 136, E359-E386 (2015).
  2. Canada, S. Canadian Cancer Statistics Special topic: Pancreatic cancer. , (2017).
  3. Siegel, R. Cáncer Statistics. Cáncer Journal. 67, 7-30 (2017).
  4. Creasman, W. T., et al. Surgical pathologic spread patterns of endometrial cancer. A Gynecologic Oncology Group Study. Cancer. 60, 2035-2041 (1987).
  5. Morrow, C. P., et al. Relationship between surgical-pathological risk factors and outcome in clinical stage I and II carcinoma of the endometrium: A gynecologic oncology group study. Gynecologic Oncology. 40, 55-65 (1991).
  6. Hicks, M., et al. The National Cancer Data Base report on Endometrial carcinoma in African-American women. Cancer. 83, 2629-2637 (1998).
  7. Barrena Medel, N. I., et al. Comparison of the prognostic significance of uterine factors and nodal status for endometrial cancer. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 204, 1-7 (2011).
  8. Randall, M. E., et al. Randomized phase III trial of whole-abdominal irradiation versus doxorubicin and cisplatin chemotherapy in advanced endometrial carcinoma: A gynecologic oncology group study. Journal of Clinical Oncology. 24, 36-44 (2006).
  9. Galaal, K., Al Moundhri, M., Bryant, A., Lopes, A. D., Lawrie, T. A. Adjuvant chemotherapy for advanced endometrial cancer. Cochrane Database of Systematic Reviews. 2014, 2-4 (2014).
  10. Orr, J. W., Holimon, J. L., Orr, P. F. Stage I corpus cancer: is teletherapy necessary? American Journal of Obstetrics and Gynecology. 176, discussion 788-789 777-788 (1997).
  11. Ng, T. Y., Perrin, L. C., Nicklin, J. L., Cheuk, R., Crandon, A. J. Local recurrence in high-risk node-negative stage I endometrial carcinoma treated with postoperative vaginal vault brachytherapy. Gynecologic Oncology. 79, 490-494 (2000).
  12. Mohan, D. S., et al. Long-term outcomes of therapeutic pelvic lymphadenectomy for stage I endometrial adenocarcinoma. Gynecologic Oncology. 70, 165-171 (1998).
  13. Straughn, J. M., et al. Stage IC adenocarcinoma of the endometrium: Survival comparisons of surgically staged patients with and without adjuvant radiation therapy. Gynecologic Oncology. 89, 295-300 (2003).
  14. Panici, P. B., et al. Systematic pelvic lymphadenectomy vs no lymphadenectomy in early-stage endometrial carcinoma: Randomized clinical trial. Journal of the National Cancer Institute. 100, 1707-1716 (2008).
  15. ASTEC study group,, et al. Efficacy of systematic pelvic lymphadenectomy in endometrial cancer (MRC ASTEC trial): a randomised study. The Lancet. 373, 125-126 (2009).
  16. Kilgore, L., et al. Adenocarcinoma of the Endometrium: Survival comparisons of patients with and without pelvic node sampling. Gynecologic Oncology. 56, 29-33 (1995).
  17. Trimble, E. L., Kosary, C., Park, R. C. Lymph node sampling and survival in endometrial cancer. Gynecologic Oncology. 71, 340-343 (1998).
  18. Chan, J. K., et al. The outcomes of 27,063 women with unstaged endometrioid uterine cancer. Gynecologic Oncology. 106, 282-288 (2007).
  19. Cragun, J. M., et al. Retrospective analysis of selective lymphadenectomy in apparent early-stage endometrial cancer. Journal of Clinical Oncology. 23, 3668-3675 (2005).
  20. Piovano, E., et al. Complications after the treatment of endometrial cancer: A prospective study using the French-Italian glossary. International Journal of Gynecological Cancer. 24, 418-426 (2014).
  21. Abu-Rustum, N. R., et al. The incidence of symptomatic lower-extremity lymphedema following treatment of uterine corpus malignancies: A 12-year experience at Memorial Sloan-Kettering Cancer Center. Gynecologic Oncology. , 714-718 (2006).
  22. Todo, Y., et al. Risk factors for postoperative lower-extremity lymphedema in endometrial cancer survivors who had treatment including lymphadenectomy. Gynecologic Oncology. 119, 60-64 (2010).
  23. Beesley, V., Janda, M., Eakin, E., Obermair, A., Battistutta, D. Lymphedema after gynecological cancer treatment: Prevalence, correlates, and supportive care needs. Cancer. 109, 2607-2614 (2007).
  24. Haldorsen, I. S., Salvesen, H. B. What Is the Best Preoperative Imaging for Endometrial Cancer? Current Oncology Reports. 18, 1-11 (2016).
  25. Aravalli, R., Cressman, E. Relevance of Rabbit VX2 Tumor Model for Studies on Human Hepatocellular Carcinoma: A MicroRNA-Based Study. Journal of Clinical Medicine. 4, 1989-1997 (2015).
  26. Kreuter, K. A., et al. Development of a rabbit pleural cancer model by using VX2 tumors. Comparative Medicine. 58, 287-293 (2008).
  27. Li, S., Ren, G., Jin, W., Guo, W. Establishment and characterization of a rabbit oral squamous cell carcinoma cell line as a model for in vivo studies. Oral Oncology. 47, 39-44 (2011).
  28. Muhanna, N., et al. Multimodal Nanoparticle for Primary Tumor Delineation and Lymphatic Metastasis Mapping in a Head-and-Neck Cancer Rabbit Model. Advanced Healthcare Materials. 4, 2164-2169 (2015).
  29. Tong, H., Duan, L., Zhou, H., Feng, S. Modification of the method to establish a hepatic VX2 carcinoma model in rabbits. Oncology Letters. 15, 22-23 (2018).
  30. Bimonte, S., et al. Induction of VX2 para-renal carcinoma in rabbits: generation of animal model for loco-regional treatments of solid tumors. Infectious Agents and Cancer. 11, 1-8 (2016).
  31. Handal, J. A., et al. Creation of rabbit bone and soft tissue tumor using cultured VX2 cells. Journal of Surgical Research. 179, e127-e132 (2013).
  32. Pezeshki, P. S., et al. Bone targeted bipolar cooled radiofrequency ablation in a VX-2 rabbit femoral carcinoma model. Clinical and Experimental Metastasis. 32, 279-288 (2015).
  33. Wang, Y., et al. Magnetic resonance imaging-navigated argon-helium cryoablation therapy against a rabbit VX2 brain tumor. Experimental and Therapeutic. 9, 2229-2234 (2015).
  34. Zhang, W., et al. Laparotomy cryoablation in rabbit VX2 pancreatic carcinoma. Pancreas. 46, 288-295 (2017).
  35. Xu, L. -Q., Huang, Y. -W., Luo, R. -Z., Zhang, Y. -N. Establishment of the retroperitoneal lymph node metastasis model of endometrial VX2 carcinoma in rabbits and observation of its metastatic features. World Journal of Surgical Oncology. 13, 109 (2015).
  36. Duan, P., Lü, J. Q., Tu, Q. M., Yu, Z. K. Magnetic resonance evaluation of transplanted endometrial carcinoma and its lymph node metastasis in rabbits. Chinese Journal of Cancer Research. 19, 201-205 (2007).
  37. Huang, Y. -W., et al. VEGF-c expression in an in vivo model of orthotopic endometrial cancer and retroperitoneal lymph node metastasis. Reproductive Biology and Endocrinology. 11, 49 (2013).
  38. Kidd, J. G., Rous, P. A transplantable rabbit carcinoma originating in a virus-induced papilloma and containing the virus in masked or altered form. J Exp Med. 71 (6), 813-838 (1940).
  39. Shope, B. R. E., Hurst, B. E. W. Infectious papillomatosis of rabbits. , (1933).
  40. Galasko, C. S. B., Haynes, D. W. Survival of VX2 carcinoma cells in vitro. European Journal of Cancer. 12 (1965), 1025-1026 (1965).
  41. Osato, B. Y. T., Ito, Y. In vitro Cultivation And Immunofluorescent Studies Of Transplantable Carcinomas Vx2 And Vx7. , Laboratory of Viral Oncology, Research Institute, Aichi Cancer Center. Nagoya, Japan. (1967).
  42. Easty, D. M., Easty, G. C. Establishment of an in vitro cell line from the rabbit VX2 carcinoma. Virchows Archiv B Cell Pathology Including Molecular Pathology. 39, 333-337 (1982).
  43. Liu, X., et al. Establishment and characterization of a rabbit tumor cell line VX2. Zhonghua bing li xue za zhi Chinese Journal of Pathology. 34, 661-663 (2005).
  44. Parvinian, A., Casadaban, L. C., Gaba, R. C. Development, growth, propagation, and angiographic utilization of the rabbit VX2 model of liver cancer: a pictorial primer and “how to” guide. Diagnostic and Interventional Radiology. 20, 335-340 (2014).
  45. Pascale, F., et al. Modified model of VX2 tumor overexpressing vascular endothelial growth factor. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 23, 809-817 (2012).
  46. Oshiro, H. The role of the lymphatic system in rabbit models for cancer metastasis research a perspective from comparative anatomy. Okajimas Folia Anatomica Japonica. , 6-7 (2014).
  47. Guan, L., Xu, G. Destructive effect of HIFU on rabbit embedded endometrial carcinoma tissues and their vascularities. Oncotarget. 8, 19577-19591 (2017).
  48. Oshiro, H., et al. Establishment of successively transplantable rabbit VX2 cancer cells that express enhanced green fluorescent protein. Medical Molecular Morphology. 48, 13-23 (2015).
  49. Graur, D., Duret, L., Gouyt, M. Phylogenetic position of the order Lagomorpha (rabbits, hares and allies). Nature. 379, 333-335 (1996).
  50. Bõsze, Z., Houdebine, L. M. Application of rabbits in biomedical research: A review. World Rabbit Science. 14, 1-14 (2006).
  51. Kyotani, S., et al. A study of cis-diamminedichloroplatinum(II) suppositories for the treatment of rabbit uterine endometrial carcinoma. Biological and Pharmaceutical Bulletin. 16, 55-58 (1993).
  52. Harima, Y., Harima, K., Hasegawa, T., Shikata, N., Tanaka, Y. Histopathological changes in rabbit uterus carcinoma alter transcatheter arterial embolization using cisplatin. Cancer Chemotherapy and Pharmacology. 38, 317-322 (1996).
  53. Huang, Y. W., et al. Tumor-induced VEGF-C overexpression in retroperitoneal lymph nodes in VX2 carcinoma-bearing rabbits. Drug Design, Development and Therapy. 9, 5949-5956 (2015).
  54. Bio-Rad. Real-Time PCR Applications Guide. , Bulletin 5279 (2006).
  55. Taylor, S., et al. A practical approach to RT-qPCR—publishing data that conform to the MIQE guidelines. BioRad Bulletin. , 5859 (2009).
  56. Rhee, T. K., et al. Rabbit VX2 Tumors as an Animal Model of Uterine Fibroids and for Uterine Artery Embolization. Journal of Vascular and Interventional Radiology. 18, 411-418 (2007).
  57. Takahashi, K., et al. Development of a mouse model for lymph node metastasis with endometrial cancer. Cancer Science. 102, 2272-2277 (2011).

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कैंसर अनुसंधान अंक 151 एंडोमेट्रियल कैंसर ऑर्थोटोपिक कैंसर मॉडल VX2 सेल लाइन लिम्फैडेनेपैथी खरगोश मॉडल सर्जिकल मॉडल सेल संस्कृति
एक Orthotopic एंडोमेट्रियल कैंसर मॉडल Retroperitoneal Lymphadenopathy के साथ Vivo Propagated और संस्कृति VX2 कोशिकाओं में से बनाया
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Philp, L., Chan, H., Rouzbahman, M., … More

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