Summary
Denne protokollen beskriver optimaliserings prosedyrer i en virus BAS ert dual fluorescens-merket tumor xenograft modell ved hjelp av larvestadiet sebrafisk som verter. Denne heterogene xenograft modellen etterligner vev sammensetningen av bukspyttkjertelkreft mikromiljøet in vivo og fungerer som et mer presist verktøy for å vurdere narkotika responser i personlig zPDX (sebrafisk pasient-avledet xenograft) modeller.
Abstract
Pasient-avledet tumor xenograft (PDX) og celle-avledet tumor xenograft (CDX) er viktige teknikker for prekliniske vurdering, medisinering veiledning og grunnleggende kreftforskning. Generasjoner av PDX-modeller i tradisjonelle verts mus er tidkrevende og fungerer bare for en liten andel av prøvene. Nylig har sebrafisk PDX (zPDX) dukket opp som et unikt vertssystem, med egenskapene til småskala og høy effektivitet. Her beskriver vi en optimalisert metodikk for å generere en dobbel fluorescens-merket tumor xenograft modell for sammenlignende kjemoterapi vurdering i zPDX modeller. Tumor celler og fibroblaster ble beriket av fersk høstet eller frossen kreft i bukspyttkjertelen ved ulike kultur forhold. Begge celle gruppene ble merket med lentivirus som uttrykte grønne eller røde fluorescerende proteiner, samt et anti-apoptose gen BCL2L1. De transfekterte cellene var pre-blandet og co-injisert i 2 DPF larvestadiet sebrafisk som ble så avlet i modifisert E3 medium ved 32 ° c. De xenograft modellene ble behandlet av kjemoterapi narkotika og/eller BCL2L1 inhibitor, og viabilities av både tumorceller og fibroblaster ble undersøkt samtidig. Oppsummert tillater denne protokollen forskerne å raskt generere en stor mengde zPDX modeller med en heterogen tumor mikromiljøet og gir en lengre observasjon vindu og en mer presis kvantifisering i vurderingen effektiviteten av stoffet kandidater.
Introduction
Precision onkologi tar sikte på å finne de mest fordelaktige terapeutiske strategier for individuell pasient1. For tiden er tallrike prekliniske modeller som in vitro primær kultur, in vitro organoid Culture2, og pasient-avledet XENOTRANSPLANTATER (PDX) i mus før eller etter organoid kultur foreslått for diagnostisering og til skjerm/vurdere potensialet terapeutiske valg3. PDX modell generert av injeksjon av menneskelige primær kreftceller i uimottakelig-kompromittert mus, er en av de mest lovende verktøy for personlig narkotika screening i klinisk onkologi3,4. I motsetning til den kultivert cellelinjen in vitro, beholder PDX-modellene vanligvis integriteten og heterogenitet i in vivo tumor miljø, bedre etterligne mangfoldet og idiosynkratiske karakteristikker av ulike tumor pasienter, og derfor kan forutsi potensielle medisinske utfallet av pasientene4. Generering av PDX-modeller i mus krever imidlertid høykvalitets pasientprøver og måneders tid for å samle inn tilstrekkelige celler og modeller for eksperimenter med flere grupper, og de cellulære/genetiske komposisjoner av xenograft kan drive fra de opprinnelige pasientensbiopsi. Suksessraten for å etablere mus PDX-modellen er også lav, noe som gjør det vanskelig å bli bredt implementert i klinisk praksis. For pasientene som har raskt utviklet kreft som kreft i bukspyttkjertelen, kan de ikke være i stand til å innhente verdifull informasjon fra PDX-eksperimentene i tide.
I de siste årene, sebrafisk har blitt rapportert å være potensielle verter for ikke bare CDX (Cell-avledet tumor xenograft) modeller, men også PDX modeller5,6,7,8,9, 10. som en virveldyr modell dyr, sebrafisk havner tilstrekkelige likheter med pattedyr i både genetikk og fysiologi, med to vesentlige fordeler: åpenhet og små i størrelse11. Sebrafisk er også svært fekunditet, og hundrevis av innavlet larver kan fås i løpet av få dager fra et enkelt par voksne12. Flere studier har ansatt sebrafisk å generere både transgene og xenograft modeller av kreft sykdommer13,14. Sammenlignet med mus xenotransplantater, sebrafisk xenotransplantater tillate sporing på én celle oppløsning. En viss mengde menneskelig vev er i stand til å generere hundrevis av sebrafisk PDX modeller (zPDXs), mens kan bare være tilstrekkelig til å generere et par mus PDX modeller15,16. Dessuten, sebrafisk larver på 2-5 DPF allerede utvikle komplette sirkulasjonssystemer og metabolske organer som lever og nyre, men ikke immunsystemet17, mens de resterende eggeplomme SAC er en naturlig 3D medium, ideell for narkotika screening, narkotika motstands tester og tumor migrasjon observasjoner6,18, 19,20,21.
Med et ultimate forsøk på å bruke zPDX som en plattform for screening/testing for klinisk bruk, her beskriver vi en optimalisert forslag til zPDX modell av kreft i bukspyttkjertelen, som gjør at in vivo kandidat narkotika vurdering i løpet av kort tid bruker færre celler til lavere kostnader. Sammenlignet med tidligere referanser om zPDX6,9,10, introduserte vi flere optimaliseringer for å gjøre systemet mer gjennomførbart og pålitelig for klinisk personlig diagnose: 1) forhånds sortering av annen celle grupper i den primære tumor vev og stabilisere primær celler i en uke før videre eksperimenter; 2) merking av humane celler og forbedre celle levedyktigheten i xenograft via lentivirus-basert genetisk modifisering; 3) optimalisere sebrafisk kultur tilstand i både nutriment kosttilskudd (glukose og glutamin) og temperatur; 4) kvantifisere stoffet responser av forskjellige celletyper i en komparativ måte. Vi har også gjort endringer i injeksjons løsningen ved å legge til flere supplerende materialer. Til sammen gir disse forbedringene muligheten til raskt å generere en mer tålmodig-lignende xenograft i sebrafisk verter som kan brukes som et pålitelig verktøy for å vurdere responsen fra kandidat stoffene.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyr prosedyrer ble godkjent og fulgt retningslinjene i Animal etikk Committee ved Fudan University og alle kreft i bukspyttkjertelen ble innhentet fra Fudan University Shanghai Cancer Center. Etisk godkjenning ble innhentet fra FUSCC etikk komité, og skriftlig informert samtykke ble innhentet fra hver pasient.
1. klargjøre utstyret for Microinjection
-
Klargjøring av injeksjons platen.
- Forbered en 50 mL oppløsning på 1% agarose oppløst i E3-løsning (0,6 g/L akvarium salt i dobbelt destillert vann + 0,01 mg/L metylen blå). Kok løsningen til agarose oppløses.
- Hell 50 mL av agarose løsning i en 10 cm Petri parabolen og deretter plassere sebrafisk embryo fiksering mold på overflaten. Fjern mold når agarose løsningen blir befestet.
- Tilsett 20 mL E3-løsning på injeksjons platen og oppretthold den ved 4 ° c for langtidsoppbevaring.
-
Klargjøring av injeksjonsnåler.
- Trekk en 10 cm glass kapillær med en indre dimensjon på 0,9 mm i to nåler på en nål avtrekker.
- Bruk tang til å kutte enden av nålen for å skape en åpning under mikroskopet.
2. forbereder embryo for transplantasjon
- Sted 1 å 2 parene av voksen sebrafisk inne en mating tank for 7-9 pm og samle det befruktet eggeskall for i nærheten 8 er av morgendagen.
- Overfør de befruktet eggene fra parings tanken til en Petri-tallerken som inneholder 40 mL fersk E3-løsning og ruge ved 28,5 ° c.
- Etter 8 h av inkubasjons i E3 løsning, tilsett 0,03% 1-fenyl-2-thiourea (PTU) til E3 løsning for å hemme pigmentering. Ruge embryo i E3 løsning med 0,03% PTU ved 28,5 ° c til 48 hpf. Dette trinnet kan utelates hvis du bruker i-avlet Casper mutant sebrafisk.
3. isolering og kultur av primære menneskelige celler fra Fresh kirurgisk bukspyttkjertelkreft prøven eller frossen vev
- Skaff prøver av humant bukspyttkjertelkreft vev av størrelsen rundt 1 cm3 under en abdominal kirurgi, og umiddelbart overføre vevet inn i vekst medier (DMEM med 10% fosterets storfe serum (FBS), 10 μM Y-27632, 100 μg/ml primocin, 10 μg/ml putresin dihydrochloride, 10 mM nikotinamid og 1% penicillin Streptomycin).
- Overfør kreft i bukspyttkjertelen til en Petri parabol og fjerne de omkringliggende nekrotisk vev, fettvev og bindevev.
- Skyll kreft vevet for 5-6 ganger med fosfat buffer (PBS) og skjær vevet inn i 1 mm3 stk ved hjelp av skalpeller.
- Overfør det ristede vevet inn i 5 mL HBSS i et 50 mL rør og tilsett kollagenase type IV, Hyaluronidase og DNase I i endelige konsentrasjoner av 200 enheter/mL, henholdsvis 100 mg/L og 20 mg/L. Pipetter blandingen opp og ned for å blande godt.
- Ruge blandingen ved 37 ° c i en 5% karbondioksid inkubator for 15-20 min. Pipetter blandingen opp og ned et par ganger hver 5 min.
- Tilsett 7 mL DMEM til røret og sentrifuger på 110 x g i 5 min ved 4 ° c når fordøyelsen er fullført.
- Dekanter supernatanten og re-suspendere tumor blandingen i DMEM.
- Plate blandingen i en 6 cm Petri parabolen i 3 mL full vekst Media (DMEM med 10% FBS, 20 μg/mL insulin, 100 ng/mL bFGF, 10 ng/mL EGF, 10 μM Y-27632, 100 μg/mL primocin, 10 μg/mL putresin dihydrochloride, 10 mM nikotinamid , 1% penicillin Streptomycin). Skill cellene i to grupper.
- I gruppen jeg legge til 100-hemmer av bukspyttkjertelkreft fibroblaster inn i mediet etter 48 h for å fjerne overgrodd fibroblaster, forlater kreftceller som de store celletyper;. I gruppe II vil fibroblaster vokse fra kreftcellene i løpet av en uke.
- Kultur både celle grupper for 1-2 uke avhengig av celle tettheten/renheter og endre Media hver tredje dag. De forventede celle typene i begge gruppene jeg & II, kan oppta over 98% i forhold til et typic vellykket eksperiment.
4. merking av celler med lentivirus uttrykke anti-Apoptose Gene BCL2L1 (BCL-XL) og ulike fluorescerende proteiner separat
-
Lentivirus produksjon
- Plate 3 x 106 HEK 293T celler med komplett DMEM medium (DMEM leveres med 10% FBS) i 10 cm retter og kultur over natten ved 37 ° c i en 5% karbondioksid inkubator. Bytt medium med 6 mL serum frie medier før transfeksjoner.
- Forbered løsning A: 8 μg av BCL2L1-inneholdende lentiviral vektorer (PCDH-EF1α-MKATE2-E2A-BCL2L1-WPRE eller PCDH-EF1α-EGFP-E2A-BCL2L1-WPRE), 2,4 μg av pVSVG, 4 μg PMDL (gag/Pol), 1,6 μg av forrige og serum fri DMEM i et total volum på 500 ΜL. forsiktig Pipet blandingen flere ganger, og plasser den i romtemperatur i 5 min.
- Klargjør løsning B: 40 μL av PEI (polyethyleneimine) i 460 μL serum fri DMEM. Plasser den i romtemperatur i 5 minutter.
- Langsomt legge løsning B i løsning A og la røret ved romtemperatur i 30 min.
- Legg den endelige blandingen inn i HEK 293T cellekultur parabolen utarbeidet i trinn 4.1.1 og ruge ved 37 ° c i en 5% karbondioksid inkubator. Etter 12 h, tilsett ytterligere 5 mL av hele DMEM medium. Etter 48 h, høste mediet som inneholder lentivirus.
- Filtrer supernatanten med et sterilt 0,45 μm-filter, tilsett supernatanten i en konsentrasjons søyle, sentrifuger ved 6 000 x g for 25-30 min ved 4 ° c. Den lentivirus alikvoter på 100 μL per rør er laget og lagret ved-80 ° c.
-
Infeksjon i primær cellene
- Seed cellene (gruppe jeg & II) å bli smittet i en 12-brønn plate med 30-40% tetthet og kultur cellene over natten ved 37 ° c i en 5% karbondioksid inkubator.
- Bytt medium med 500 μL av serum fritt medium som inneholder 8 μg/mL polybrene for 4 timer. Deretter legger du til ytterligere 100 μL av lentivirus i mediet (eGFP-E2A-BCL2L1 for Group I eller mKate2-E2A-BCL2L1 for Group II). Etter 12 timer, Bytt medium med 1 mL komplett medium.
- Sjekk fluorescens markører etter 48 h.
- Høste de infiserte cellene og bland dem på 1:1 ratio med en endelig konsentrasjon på 106/ml.
- Sentrifuger cellene ved 110 x g i 5 min og re-suspendere celle blandingen i 50 μL av injeksjons løsning (1640 medium med 10% FBS, 0,05% hyaluronsyre natrium salt, 0,05% methylcellulose).
5. sprøytebruk blandet celle suspensjon i sebrafisk
- Legg 10x tricaine løsning i E3 vann til bedøve sebrafisk larver og overføre Larvene (fra trinn 2,3) til injeksjon plate fylt av modifisert E3 (E3 med 1 g/L glukose og 5 mmol/L L-glutamin).
- Fyll 25 μL av blandet celle fjæring i mikro blodkar nål og sett nålen inn i mikro-injeksjon manipulator.
- Sett injeksjon trykk og tid. Injiser 50-80 celler (~ 8 nL) i eggeplomme sac av 48 hpf sebrafisk.
6. kultur for Xenografted sebrafisk (zPDX Model)
- Overfør den post-xenografted sebrafisk larver til 40 mL blanding løsning (E3 løsning med 1 g/L glukose og 5 mmol/L L-glutamin) ved 32 ° c.
7. Drug Administration på Xenografted sebrafisk og vurdering av tumor celler/fibroblaster Viabilities
-
Bestemme den optimale konsentrasjonen av gemcitabin/navitoclax.
- Plasser 10 wildtype sebrafisk embryo på 48 hpf i hver brønn av en 12-brønn plate.
- Tilsett ulike konsentrasjoner av gemcitabin eller navitoclax i hver brønn og ruge ved 32 ° c i to dager.
- Etter 2 dager, beregne maksimal toleranse dosering (MTD) av gemcitabin og navitoclax der sebrafisk Larvene ikke vist signifikant misdannelse og unormal atferd, og arbeids konsentrasjonen er satt under MTD.
-
Behandling av zPDX-modeller med gemcitabin/navitoclax.
- Plasser 10 xenografted larver i hver brønn av en 12 brønn plate.
- Del Larvene i fire grupper, behandle kontrollgruppen på E3 som inneholder 0,1% DMSO, og behandle de andre gruppene med 5 μg/mL gemcitabin og/eller 50 μM navitoclax, og ruge ved 32 ° c i to dager.
-
Vurdering av celle viabilities og cellulær sammensetning i zPDX-modeller.
- Bedøve de xenografted Larvene etter behandling og legg dem i 3% methylcellulose.
- Bilde Larvene fra lateral visning ved hjelp av et fluorescens mikroskop eller konfokalmikroskopi mikroskop.
- Kvantifisere intensiteten av rød og grønn fluorescens signaler benytter ImageJ og GraphPad programvare.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En Schematized omriss av prosedyren er representert i figur 1. Kort sagt, den primære kreft vev celler ble sådd i hele medium etter fordøyelsen med eller uten tilsetning av bukspyttkjertelkreft Fibroblast hemmere. Kreftceller og fibroblaster ble beriket som to distinkte populasjoner som fibroblaster dominert uten hemmere, og kreftcelle vekst seiret etter tilsetning av hemmere (figur 2). To lentiviral emballasje vektorer ble konstruert, som uttrykte grønne eller røde fluorescerende proteiner og BCL2L1 som vist i Figur 3. Viruset-baserte fluorescerende merkingsteknikker representerte også overlevelses statusen til cellene. Den blandede kreftceller og fibroblaster ble injisert i sebrafisk eggeplomme SAC på 48 hpf og ble behandlet av gemcitabin og/eller navitoclax i to dager. Celle viabilities i ulike populasjoner og cellulær sammensetning av xenograft ble endret som svar på narkotikabehandling (Figur 4).
Figur 1: skjematisk diagram av generasjon og narkotika vurdering av sebrafisk xenograft modell avledet fra kreft i bukspyttkjertelen. Kirurgisk fjernet vev fra pasienter med kreft i bukspyttkjertelen er skåret og fordøyd, etterfulgt av kultur ved to ulike forhold, hvorav den ene er lagt til av en Fibroblast inhibitor, og den andre gruppen er det ikke. Etter 1-2 uker var primær cellene genetisk modifisert til å uttrykke et anti-apoptotisk protein BCL2L1 og forskjellige fluorescerende proteiner. Etter det ble de to populasjoner blandet og co-injisert i 48 hpf sebrafisk larver å vurdere virkningene av kjemoterapeutiske narkotika. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: kultur og berikelse av kreftceller i bukspyttkjertelen og fibroblaster. Bilder av kreftceller og fibroblaster beriket fra tre ulike kreft i bukspyttkjertelen etter 10-dagers kultur. Scale bar, 100 μm. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: struktur for lentiviral vektor som uttrykker BCL2L1 og forskjellige fluorescerende proteiner. Skjematisk diagram av to lentiviral vektorer stadig uttrykker mKate2-E2A-BCL2L1 eller eGFP-E2A-BCL2L1, henholdsvis. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: effekter på xenograft av gemcitabin. (A) lateral visning av xenograft i eggeplomme sac av sebrafisk larver på 3 h innlegg transplantasjon (HPT). (B) representative bilder av xenotransplantater i sebrafisk larver ved 60 HPT, behandlet av DMSO eller gemcitabin. (C) representativ 3D-gjengivelse av xenotransplantater ved 60 HPT. (D) statistikk over fluorescens intensitet av xenograft før og etter gemcitabin og/eller BCL2L1 inhibitor behandling. N = 10 per gruppe for hver analyse. Scale bar = 100 μm; NS, ikke signifikant; *P < 0,05; P < 0,0001; gjennomsnittlig ± SD, med statistiske forskjeller bestemt av enveis ANOVA. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Både PDX og CDX-modeller er viktige plattformer innen tumor biologi22, og det kritiske trinnet i en vellykket Inter-arter transplantasjon er å forbedre overlevelsen av xenograft. Nylig har noen studier vist at forbigående uttrykk for BCL2L1 (BCL-XL) eller BCL2 kan betydelig forbedre levedyktigheten til menneskelige embryonale stamceller i mus verter uten å påvirke cellen identiteter og skjebne23 , 24 priser og , 25. i vårt manuskript merket vi cellene med lentivirus som stadig uttrykker anti-apoptose gen BCL2L1 (BCL-XL), samt fluorescerende proteiner. Innføringen av BCL2L1 kraftig forbedret overlevelse tid xenograft menneskelige celler i sebrafisk å forlenge observasjons vinduet for studiene, mens de fluorescerende signalene ikke bare etiketten cellene, men også rapportere leve tilstanden til celler, som vi fant ut at fluorescens fades raskt med cellen død. I mellomtiden er vi for tiden endrer sebrafisk som en bedre vert for menneskelig xenotransplantater. På den ene siden, rag2 og prkdc blir slått ut via CRISPR/Cas9 teknologi for å forberede en kombinert uimottakelig-mangelfull sebrafisk, som var lik kombinerte immune-mangelfull mus, for å gjøre eldre sebrafisk larver også kompatibel med menneskelige celler og vev26. På den annen side ble sebrafisk også endret for å uttrykke menneskelige proteiner som IGF1 og INS for å bedre støtte overlevelse og spredning av implantert menneskelige celler ved hjelp av Tol2 Transposon-mediert transgene teknologi. Videre mangler zPDX også en menneskelig-lignende funksjonell immunsystem, og samspillet mellom menneskelige stromal celler og immunforsvaret, og i fremtiden, kan vi prøve å injisere menneskelige immunceller til å gjenoppbygge en kortsiktig humanisert immun miljø i sebrafisk.
I musene PDX-modellene ble de xenograft forholdene tradisjonelt overvåket av direkte observasjon på noder av synlig størrelse, noe som krever lang tid å utvikle. I de gjennomsiktige zPDX-modellene som sammenligning kan xenograft undersøkes under mikroskopi i sanntid. Det var imidlertid vanskelig å vurdere celle nummer alternations i en enkelt farge befolkning uten en skikkelig kontroll, og ideen om å innføre to celle befolkning på forskjellige fluorescens forbedrer kvantifisering av celle levedyktighet. Ved å blande og injisere forskjellige celler ved faste prosenter, vi ikke bare etterligne svulsten mikromiljøet, men også er i stand til å nøyaktig kvantifisere stoffet responsen ved å sammenligne de to celle grupper. Selv om det opprinnelige forholdet mellom kreftceller til fibroblaster i primær vev er svært forskjellig, her vi startet med 1:1 ratio, og effekten av narkotikabehandling på samme celle sammensetning av et annet forhold vil bli undersøkt i fremtiden. Dessuten krever effekten av 32 ° c i stedet for 37 ° c incubations på atferd av menneskelige celler også detaljerte sammenlignende studier. Endelig, strategien av pasient-avledet heterogene xenograft modell for kreft i bukspyttkjertelen for sammenlignende legemiddel vurdering kan også brukes til andre typer av solid kreft. Denne tilnærmingen er spesielt nyttig for PDX bruke sebrafisk larver som verter, som er krystallklare og gjennomførbart for analyse på enkelt celle oppløsning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Ingen potensielle interessekonflikter ble avslørt.
Acknowledgments
Dette arbeidet ble støttet av National Natural Science Foundation i Kina 81402582, Natural Science Foundation i Shanghai 12DZ2295100, 14YF1400600 og 18ZR1404500
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | GIBCO | C11995500BT | |
| FBS | Hyclone | sv30087.03 | |
| Y-27632 | Cliniscience | Y0503 | Rho kinase inhibitor |
| Primocin | invivogen | ant-pm-1 | an antibiotic for primary cell cultures |
| Putrescine dihydrochloride | Sigma | P5780 | |
| Nicotinamide | Sigma | N3376 | |
| Penicillin streptomycin | GIBCO | 15140122.00 | |
| Phosphate buffer (PBS) | GIBCO | C10010500CP | |
| HBSS | GIBCO | 14170112.00 | |
| Collagenase type IV | GIBCO | 17104019.00 | |
| Hyaluronidase | Sigma | H3884 | |
| Dnase I | Sigma | D5025 | |
| Insulin | Sigma | I9278 | |
| b-FGF | GIBCO | PHG0264 | |
| EGF | GIBCO | PHG0314 | |
| Pancreatic cancer fibroblasts inhibitor | CHI Scientific | FibrOUT | |
| 0.45 μm sterile filter | Millipore | SLHV033RB | |
| Concentration column | Millipore | Millipore UFC910008 | Concentrate the virus |
| Polybrene | Sigma | H9268 | |
| Hyaluronic Acid Sodium Salt | Sigma | H7630 | |
| L-glutamine | GIBCO | 21051024.00 | |
| Gemcitabine | Gemzan | ||
| Methylcellulose | Sigma | M0262 | |
| Navitoclax(ABT-263) | Selleck | S1001 | Bcl-xL inhibitor |
| Equipment | |||
| Microinjector | NARISHIGE | ||
| Stereomicroscope | OLYMPUS | MVX10 | |
| Confocal Microscope | LEICA | SP8 | 0.00 |
References
- Collins, D. C., Sundar, R., Lim, J. S. J., Yap, T. A. Towards Precision Medicine in the Clinic: From Biomarker Discovery to Novel Therapeutics. Trends in Pharmacological Sciences. 38 (1), 25-40 (2017).
- Huang, L., et al. Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell- and patient-derived tumor organoids. Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).
- Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
- Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
- Jung, J., Seol, H. S., Chang, S. The Generation and Application of Patient-Derived Xenograft Model for Cancer Research. Cancer Research and Treatment. 50 (1), 1-10 (2018).
- Fior, R., et al. Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinatorial colorectal therapy in zebrafish xenografts. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (39), E8234-E8243 (2017).
- Chen, L., et al. A zebrafish xenograft model for studying human cancer stem cells in distant metastasis and therapy response. Methods in Cell Biology. 138, 471-496 (2017).
- Gaudenzi, G., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in neuroendocrine tumors. Endocrine. 57 (2), 214-219 (2017).
- Lee, J. Y., Mazumder, A., Diederich, M. Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts. Journal of Visualized Experiment. (136), (2018).
- Zhang, M., et al. Adipocyte-Derived Lipids Mediate Melanoma Progression via FATP Proteins. Cancer Discovery. 8 (8), 1006-1025 (2018).
- Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
- Lieschke, G. J., Currie, P. D. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nature Reviews: Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).
- Guo, M., et al. U0126 inhibits pancreatic cancer progression via the KRAS signaling pathway in a zebrafish xenotransplantation model. Oncology Reports. 34 (2), 699-706 (2015).
- Yao, Y., et al. Canonical Wnt Signaling Remodels Lipid Metabolism in Zebrafish Hepatocytes following Ras Oncogenic Insult. Cancer Research. 78 (19), 5548-5560 (2018).
- Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. N. Hooking the big one: the potential of zebrafish xenotransplantation to reform cancer drug screening in the genomic era. Disease Models & Mechanisms. 7 (7), 745-754 (2014).
- Zon, L. I., Peterson, R. The new age of chemical screening in zebrafish. Zebrafish. 7 (1), 1 (2010).
- Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study. Developmental & Comparative Immunology. 28 (1), 9-28 (2004).
- Mercatali, L., et al. Development of a Patient-Derived Xenograft (PDX) of Breast Cancer Bone Metastasis in a Zebrafish Model. International Journal of Molecular Sciences. 17 (8), (2016).
- Wu, J. Q., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36 (1), 160 (2017).
- Tulotta, C., et al. Imaging Cancer Angiogenesis and Metastasis in a Zebrafish Embryo Model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 239-263 (2016).
- Yao, Y., et al. Screening in larval zebrafish reveals tissue-specific distributions of fifteen fluorescent compounds. Disease Model& Mechanisms. , 028811 (2017).
- Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews: Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).
- Charo, J., et al. Bcl-2 overexpression enhances tumor-specific T-cell survival. Cancer Research. 65 (5), 2001-2008 (2005).
- Wang, X., et al. Human embryonic stem cells contribute to embryonic and extraembryonic lineages in mouse embryos upon inhibition of apoptosis. Cell Research. 28 (1), 126-129 (2018).
- Boise, L. H., et al. bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. Cell. 74 (4), 597-608 (1993).
- Moore, J. C., et al. Single-cell imaging of normal and malignant cell engraftment into optically clear prkdc-null SCID zebrafish. Journal of Experimental Medicine. 213 (12), 2575-2589 (2016).
