Summary
Detta protokoll beskriver optimerings procedurer i en virusbaserad Dual Fluorescence-märkt tumör xenograft modell med larv zebrafiskar som värdar. Denna heterogena xenograft modell härmar vävnads sammansättningen av pankreascancer mikromiljö in vivo och fungerar som ett mer exakt verktyg för att bedöma läkemedelssvar i personlig zPDX (Zebrafish patient-derived xenograft) modeller.
Abstract
Patient-derived tumörxenograft (PDX) och cell-derived tumörxenograft (CDX) är viktiga tekniker för preklinisk bedömning, medicinering vägledning och grundläggande cancer forskningar. Generationer av PDX-modeller i traditionella värd möss är tidskrävande och fungerar bara för en liten del av proverna. Nyligen har zebrafiskar PDX (zpdx) vuxit fram som ett unikt värdsystem, med kännetecken av småskalig och hög verkningsgrad. Här beskriver vi en optimerad metod för att generera en dual Fluorescence-märkt tumör xenograft modell för jämförande kemoterapi bedömning i zPDX modeller. Tumörceller och fibroblaster var berikad från nyskördade eller frysta pankreascancer vävnad vid olika odlingsförhållanden. Båda cellgrupperna var märkta av lentivirus uttrycker grönt eller rött fluorescerande proteiner, samt en anti-apoptos gen BCL2L1. De transfekterade cellerna var färdigblandade och co-injiceras i 2 DPF larv zebrafiskar som sedan föds upp i modifierad E3 medium vid 32 ° c. Xenograft-modellerna behandlades med cytostatika och/eller BCL2L1-hämmare, och viabiliteterna hos både tumörceller och fibroblaster undersöktes samtidigt. Sammanfattnings, detta protokoll gör det möjligt för forskare att snabbt generera en stor mängd zPDX modeller med en heterogen tumör mikromiljö och ger en längre observationfönster och en mer exakt kvantifiering vid bedömningen av effektiviteten i läkemedelskandidater.
Introduction
Precision Oncology syftar till att hitta de mest fördelaktiga terapeutiska strategierna för individuell patient1. För närvarande, många prekliniska modeller såsom in vitro-primär kultur, in vitro Organoid kultur2, och patient-härledda xenograft (pdx) i möss före eller efter Organoid kultur föreslås för diagnos och att skärmen/bedöma den potentiella terapeutiska val3. PDX-modell som genereras genom injektion av humana primära cancerceller i immunkomprometterade möss, är ett av de mest lovande verktygen för individanpassad läkemedels screening i klinisk onkologi3,4. Till skillnad från odlade cellinjer in vitro, PDX modeller brukar bevara integriteten och heterogenitet i in vivo tumör miljön, bättre imitera mångfalden och idiosynkratiska egenskaper hos olika tumör patienter, och därför kan förutsäga potentiella medicinska resultat av patienter4. Generering av PDX-modeller hos möss kräver dock högkvalitativa patientprover och månader för att samla in tillräckligt med celler och modeller för flera grupp experiment, och xenografens cellulära/genetiska sammansättningar kan glida från de ursprungliga patientensbiopsi. Framgången för att etablera möss PDX modellen är också låg, vilket gör det svårt att i stort sett genomföras i klinisk praxis. För de patienter som bär snabbt framskridit cancerformer som pankreascancer, de kanske inte kan få värdefull information från PDX experiment i tid.
Under de senaste åren, zebrafiskar har rapporterats vara potentiella värdar för inte bara CDX (cell-derived tumör xenograft) modeller, men också PDX modeller5,6,7,8,9, 10. som ryggradsdjur är zebrafiskar tillräckligt likheterna med däggdjur i både genetik och fysiologi, med två betydande fördelar: transparens och små i storlek11. Zebrafish är också mycket Fecundity, och hundratals inavlade larver kan erhållas inom några dagar från ett enda par vuxna12. Flera studier har använt zebrafiskar för att generera både transgena och xenograft modeller av cancersjukdomar13,14. Jämfört med möss xenograft, zebrafiskar xenograft tillåta spårning vid enkel cell upplösning. En viss mängd mänskliga vävnader kan generera hundratals zebrafiskar PDX-modeller (zpdxs), medan kan bara vara tillräckligt för att generera ett par möss PDX modeller15,16. Förutom, zebrafiskar larverna på 2-5 DPF redan utveckla kompletta cirkulationssystem och metabola organ såsom lever och njure, men inte immunförsvaret17, medan den resterande äggula SAC är en naturlig 3D-medium, perfekt för Drug screening, drog motstånds prov och tumör migration observationer6,18,19,20,21.
Med ett ultimat försök att använda zPDX som en screening/testplattform för klinisk användning, här, beskriver vi ett optimerat förslag för zPDX modell för cancer i bukspottskörteln, vilket gör att in vivo läkemedelskandidat bedömning inom en kort tid med färre celler till lägre kostnader. Jämfört med tidigare hänvisningar om zpdx6,9,10, introducerade vi flera optimeringar för att göra systemet mer genomförbart och tillförlitligt för klinisk personlig diagnos: 1) försortera olika cell grupper i den primära tumör vävnader och stabiliserande primära celler för en vecka innan ytterligare experiment; 2) märkning av mänskliga celler och förbättra cellernas lönsamhet i xenograft via lentivirusbaserad genetisk modifiering; 3) optimera zebrafiskar kultur skick i både näring kosttillskott (glukos och glutamin) och temperatur; 4) kvantifiering av läkemedels svaren från olika celltyper på ett jämförande sätt. Vi har också gjort ändringar i injektionslösningen genom att tillsätta flera kompletterande material. Sammantaget ger dessa förbättringar möjlighet att snabbt generera en mer patientliknande xenograft i zebrafiskar värdar som kan användas som ett tillförlitligt verktyg för att bedöma svaret av läkemedelskandidater.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alla djur förfaranden godkändes och följde riktlinjerna från Animal etikkommittén vid Fudan University och alla pankreascancer prover erhölls från Fudan University Shanghai Cancer Center. Etiskt godkännande erhölls från FUSCC etikkommitté, och skriftligt informerat samtycke erhölls från varje patient.
1. förberedelse av utrustning för mikroinjektion
-
Förberedelse av injektions plattan.
- Bered en 50 mL lösning på 1% aguppstod upplöst i E3 lösning (0,6 g/L akvarium salt i dubbelt destillerat vatten + 0,01 mg/L metylenblått). Koka upp lösningen tills Agros löser sig.
- Häll 50 ml av agupplösningen i en 10 cm petriskål och placera sedan zebrafiskar embryo fixering mögel på ytan. Ta bort mögel när aguppstod lösningen blir stelnat.
- Tillsätt 20 mL E3-lösning till injektions plattan och behåll den vid 4 ° c för långtidsförvaring.
-
Beredning av injektionsnålar.
- Dra en 10 cm glas kapillär med en inre dimension av 0,9 mm i två nålar på en nål avdragare.
- Använd tång för att skära änden av nålen för att skapa en öppning under mikroskopet.
2. beredning av embryon för transplantation
- Placera 1 till 2 par av vuxna zebrafiskar i en parnings tank på 7-9 PM och samla de befruktade äggen på cirka 8 am av nästa morgon.
- Överför de befruktade äggen från parnings tanken till en petriskål som innehåller 40 mL färsk E3-lösning och inkubera vid 28,5 ° c.
- Efter 8 h inkubering i E3 lösning, tillsätt 0,03% 1-Phenyl-2-thiourea (PTU) i E3 lösning för att hämma pigmentering. Inkubera embryona i E3 lösning med 0,03% PTU vid 28,5 ° c till 48 HPF. Detta steg kan utelämnas om du använder i-uppfödda Casper Mutant Zebrafish.
3. isolering och kultur av primära mänskliga celler från färska kirurgiska pankreascancer prov eller fryst vävnad
- Få prover av mänskliga pankreascancer vävnad av storleken runt 1 cm3 under en bukkirurgi, och omedelbart överföra vävnaden till tillväxt medier (DMEM med 10% foster bovint serum (FBS), 10 μm Y-27632, 100 μg/ml primocin, 10 μg/ml monomer natriumdihydroklorid, 10 mM nikotinamid och 1% penicillin streptomycin).
- Överför pankreascancer provet till en petriskål och ta bort omgivande nekrotisk vävnad, fettvävnad och bindväv.
- Skölj cancervävnaden för 5-6 gånger med fosfatbuffert (PBS) och skär vävnaden i 1 mm3 stycken med skalpeller.
- Överför de strimlad vävnaderna till 5 mL HBSS i en 50 mL tub och tillsätt kollagenase typ IV, hyaluronidas och DNase I vid slutliga koncentrationer på 200 enheter/mL, 100 mg/L respektive 20 mg/L. Pipettera blandningen uppåt och nedåt för att blanda väl.
- Inkubera blandningen vid 37 ° c i en 5% koldioxidinkubator för 15-20 min. Pipettera blandningen upp och ner några gånger var 5 min.
- Tillsätt 7 mL DMEM till röret och centrifugera vid 110 x g i 5 min vid 4 ° c när matsmältningen är slutförd.
- Dekanera supernatanten och åter avbryta tumör blandningen i DMEM.
- Platta blandningen i en 6 cm petriskål i 3 ml full tillväxt media (DMEM med 10% FBS, 20 μg/ml insulin, 100 ng/ml bFGF, 10 ng/ml EGF, 10 μm Y-27632, 100 μg/ml primocin, 10 μg/ml monomer dihydroklorid, 10 mm nikotinamid , 1% penicillin streptomycin). Separera cellerna i två grupper.
- I grupp I, tillsätt 100x hämmare av pankreascancer fibroblaster i mediet efter 48 h att ta bort övervuxna fibroblaster, lämnar cancerceller som de stora celltyperna;. I grupp II kommer fibroblaster växa ur cancercellerna inom en vecka.
- Kultur båda cellgrupper för 1-2 vecka beroende på cell tätheter/purities och ändra Media var tredje dag. De förväntade celltyperna i både grupp I & II kan uppta över 98% i proportion i en typic framgångsrik experiment.
4. märkning cellerna med lentivirus uttrycker anti-apoptos Gene BCL2L1 (BCL-XL) och olika fluorescerande proteiner separat
-
Lentivirus produktion
- Tallrik 3 x 106 hek 293t celler med komplett DMEM medium (DMEM levereras med 10% FBS) i 10 cm rätter och kultur över natten vid 37 ° c i en 5% koldioxidinkubator. Byt ut mediet mot 6 mL serumfritt material före transfektion.
- Bered lösning A: 8 μg BCL2L1innehållande lentivirala vektorer (Pcdh-EF1α-MKATE2-E2A-BCL2L1-wpre eller pCDH-EF1α-egfp-E2A-BCL2L1-wpre), 2,4 μg pvsvg, 4 μg pmdl (GAG/pol), 1,6 μg PREV och SERUMFRITT DMEM i en total volym av 500 μl. försiktigt Pipettera blandningen flera gånger, och placera den i rumstemperatur i 5 min.
- Bered lösning B: 40 μL av PEI (polyetyleneimin) i 460 μL serumfritt DMEM. Placera den i rumstemperatur i 5 minuter.
- Tillsätt långsamt lösning B i lösning A och lämna röret i rumstemperatur i 30 min.
- Tillsätt den slutliga blandningen i den HEK 293T cellkultur skålen som bereds i steg 4.1.1 och inkubera vid 37 ° c i en 5% koldioxidinkubator. Efter 12 h, tillsätt ytterligare 5 mL av det kompletta DMEM-mediet. Efter 48 h, skörda mediet som innehåller lentivirus.
- Filtrera supernatanten med ett sterilt 0,45 μm-filter, tillsätt supernatanten i en koncentrations kolumn, Centrifugera vid 6 000 x g i 25-30 min vid 4 ° c. Lentivirus-aliquoterna på 100 μL per tub tillverkas och lagras vid-80 ° c.
-
Infektion i primär cellerna
- Utsäde cellerna (grupp I & II) att vara smittade i en 12-brunn tallrik med 30-40% densitet och kultur cellerna över natten vid 37 ° c i en 5% koldioxid inkubator.
- Byt ut mediet mot 500 μL serumfritt medium innehållande 8 μg/mL polybrene i 4 timmar. Tillsätt sedan ytterligare 100 μL av lentiviruset i mediet (eGFP-E2A-BCL2L1 för grupp I eller mKate2-E2A-BCL2L1 för grupp II). Efter 12 h, Byt ut mediet med 1 mL komplett medium.
- Kontrollera fluorescensmarkörer efter 48 h.
- Skörda de infekterade cellerna och blanda dem på 1:1 förhållande med en slutlig koncentration av 106/ml.
- Centrifugera cellerna vid 110 x g i 5 min och återsuspendera cell blandningen i 50 μl injektionslösning (1640 medium med 10% fbs, 0,05% hyaluronsyra natriumsalt, 0,05% metylcellulosa).
5. injicera blandad cell suspension i Zebrafish
- Tillsätt 10X trikain lösning till E3 vatten för att söva zebrafiskar larver och överföra larverna (från steg 2,3) till injektions plattan fylls av modifierad E3 (E3 med 1 g/l glukos och 5 mmol/l l-glutamin).
- Fyll 25 μL av blandad cellsuspension i mikrokapillärerna nål och sätt in nålen i mikro-injektion manipulator.
- Ställ in insprutningstryck och tid. Injicera 50-80 celler (~ 8 nL) i äggulan SAC av 48 HPF Zebrafish.
6. kultur av Xenografted Zebrafish (zPDX modell)
- Överför de postxenotransplanterade zebrafiskar-larverna till 40 ml blandningslösning (E3-lösning med 1 g/l glukos och 5 mmol/l l-glutamin) vid 32 ° c.
7. Drug Administration på Xenografted Zebrafish och bedömningen av tumörceller/fibroblaster Viabilities
-
Bestämning av den optimala koncentrationen av gemcitabin/navitoclax.
- Placera 10 vildtyp zebrafiskar embryon på 48 HPF i varje brunn av en 12-brunn tallrik.
- Tillsätt olika koncentrationer av gemcitabin eller navitoclax i varje brunn och inkubera vid 32 ° c i två dagar.
- Efter 2 dagar, beräkna maximal tolerans dosering (MTD) av gemcitabin och navitoclax vid vilken zebrafiskar larverna inte visat signifikant missbildning och onormalt beteende, och de arbetande koncentrationerna är fastställda under MTD.
-
Behandling av zPDX-modeller med gemcitabin/navitoclax.
- Förlägga 10 xenografted larver in i varje brunn av en 12 brunn pläterar.
- Dela upp larverna i fyra grupper, behandla kontrollgruppen i E3 som innehåller 0,1% DMSO, och behandla de andra grupperna med 5 μg/mL gemcitabin och/eller 50 μM navitoclax, och inkubera vid 32 ° c i två dagar.
-
Bedömning av cellernas ekonomisk och cellulära sammansättning i zpdx modeller.
- Anesthetize de xenotransplanterade larverna efter behandling och placera dem i 3% metylcellulosa.
- Avbilda larverna från den laterala vyn med hjälp av ett fluorescensmikroskop eller konfokala Mikroskop.
- Kvantifiera intensiteten av röda och gröna fluorescens signaler med ImageJ och GraphPad programvara.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En schematiserade skissera av tillvägagångssättet föreställs i figurera 1. Kort sagt, de primära cancervävnad celler var seedade i hela mediet efter matsmältningen med eller utan tillsats av pankreascancer fibroblasthämmare. Cancerceller och fibroblaster berikades som två distinkta populationer som fibroblaster dominerade utan hämmare, och cancer celltillväxt rådde efter tillsats av hämmare (figur 2). Två lentivirala förpacknings vektorer konstruerades, som uttryckte gröna eller röda fluorescerande proteiner och BCL2L1 som visas i figur 3. Den virusbaserade fluorescerande märkningen representerade också cellernas överlevnads status. Den blandade cancerceller och fibroblaster injicerades i zebrafiskar äggula SAC på 48 HPF och behandlades med gemcitabin och/eller navitoclax i två dagar. Cell viabiliteterna i olika populationer och cellulär sammansättning av xenograft ändrades som svar på läkemedelsbehandling (figur 4).
Figur 1: Schematiskt diagram över generering och läkemedels utvärdering av zebrafiskar xenograft-modellen som härstammar från pankreascancer. Kirurgiskt borttagna vävnader från patienter med pankreascancer är klippt och smält, följt av kultur på två olika villkor, varav en tillsätts av en fibroblasthämmare, och den andra gruppen är inte. Efter 1-2 veckor var de primära cellerna genetiskt modifierade för att uttrycka ett antiapoptotiskt protein BCL2L1 och olika fluorescerande proteiner. Efter det, de två populationerna blandades och co-injiceras i 48 HPF zebrafiskar larver att bedöma effekterna av kemoterapeutiska läkemedel. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: odling och berikning av cancerceller i bukspottskörteln och fibroblaster. Bilder av cancerceller och fibroblaster berikas från tre olika pankreascancer patienter efter 10-dagars kultur. Skalbar, 100 μm. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: struktur av lentiviral vektor uttrycker BCL2L1 och olika fluorescerande proteiner. Schematiskt diagram av två lentivirala vektorer uttrycker ständigt mKate2-E2A-BCL2L1 eller eGFP-E2A-BCL2L1, respektive. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: effekter på xenograft av gemcitabin. (A) lateral syn på xenograft i äggula säcken av zebrafiskar larver vid 3 h post transplantation (HPT). Brepresentativa bilder av xenografterna i zebrafisklarver vid 60 HPT, behandlade med DMSO eller gemcitabin. C) representativ 3D-rendering av xenografterna vid 60 HPT. D) statistik över fluorescensintensiteten hos xenograft före och efter behandling med gemcitabin och/eller BCL2L1-hämmare. N = 10 per grupp för varje analys. Skalstapel = 100 μm; NS, inte betydande; *P < 0,05; P < 0,0001; medelvärde ± SD, med statistiska skillnader som bestäms av enkelriktad ANOVA. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Både PDX och CDX modeller är vitala plattformar inom tumörbiologi22, och det kritiska steget i en lyckad Inter-Art transplantation är att förbättra överlevnaden av xenograft. Nyligen, vissa studier har visat att övergående uttryck av BCL2L1 (BCL-XL) eller BCL2 kan avsevärt förbättra livskraften hos mänskliga embryonala stamceller i möss värdar utan att påverka cell identiteter och öden23 , 24 , 25. i vårt manuskript, vi märkt cellerna med lentivirus ständigt uttrycker anti-apoptos Gene BCL2L1 (BCL-XL), samt fluorescerande proteiner. Introduktionen av BCL2L1 förbättrade kraftigt överlevnadstiden för xenograft humana celler i zebrafisk för att förlänga observations fönstret för studierna, medan de fluorescerande signalerna inte bara etikettera cellerna, utan även rapportera levnads villkoret för celler, som vi fann att fluorescensen bleknar snabbt med celldöd. Samtidigt modifierar vi för närvarande zebrafiskar som en bättre värd för mänskliga xenografts. Å ena sidan är rag2 och prkdc slås ut via CRISPR/Cas9 teknik för att förbereda en kombinerad immun-brist zebrafiskar, som liknade kombinerade immunbrist möss, att göra äldre zebrafiskar larver också förenligt med mänskliga celler och vävnader26. Å andra sidan, var zebrafiskar också modifierad för att uttrycka mänskliga proteiner som IGF1 och ins för att bättre stödja överlevnad och spridning av implanterade mänskliga celler med hjälp av Tol2 transposon-medierad transgena teknik. Dessutom, zPDX saknar också en människoliknande funktionella immunförsvaret, och samspelet mellan mänskliga stromaceller och immunförsvaret, och i framtiden, vi kan försöka Co injicera mänskliga immunceller att återuppbygga en kortsiktig humaniserad immun miljö i zebrafisk.
I möss PDX-modellerna, var xenograft villkor traditionellt övervakas genom direkt observation på noder av synlig storlek, som kräver en lång tid att utveckla. I de transparenta zPDX-modellerna som jämförelse kan xenograft undersökas under mikroskopi i realtid. Det var dock svårt att bedöma cell nummer växlingen i en enfärgad population utan en ordentlig kontroll, och idén att introducera två cellpopulationer av olika fluorescens förbättrar avsevärt kvantifiering av cellernas lönsamhet. Genom att blanda och injicera olika celler vid fasta nyckeltal, vi inte bara efterlikna tumören mikromiljö, men också kunna exakt kvantifiera läkemedelssvar genom att jämföra de två cellgrupper. Även om det ursprungliga förhållandet mellan cancerceller till fibroblaster i primär vävnader är mycket olika, här började vi med 1:1 förhållandet, och effekterna av läkemedelsbehandling på samma cell sammansättning av en annan kvot kommer att undersökas i framtiden. Dessutom, effekterna av 32 ° c i stället för 37 ° c inkuberingar på beteenden av mänskliga celler kräver också detaljerade jämförande studier. Slutligen, strategin för den patient-härledda heterogena xenograft modell för pankreascancer för jämförande drog bedömning kan också tillämpas på andra typer av solida cancerformer. Detta tillvägagångssätt är särskilt användbart för PDX med hjälp av zebrafiskar larver som värdar, som är kristallklara och genomförbara för analys vid Single-cell upplösning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Inga potentiella intressekonflikter avslöjades.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes av National Natural Science Foundation i Kina 81402582, Natural Science Foundation i Shanghai 12DZ2295100, 14YF1400600 och 18ZR1404500
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| DMEM | GIBCO | C11995500BT | |
| FBS | Hyclone | sv30087.03 | |
| Y-27632 | Cliniscience | Y0503 | Rho kinase inhibitor |
| Primocin | invivogen | ant-pm-1 | an antibiotic for primary cell cultures |
| Putrescine dihydrochloride | Sigma | P5780 | |
| Nicotinamide | Sigma | N3376 | |
| Penicillin streptomycin | GIBCO | 15140122.00 | |
| Phosphate buffer (PBS) | GIBCO | C10010500CP | |
| HBSS | GIBCO | 14170112.00 | |
| Collagenase type IV | GIBCO | 17104019.00 | |
| Hyaluronidase | Sigma | H3884 | |
| Dnase I | Sigma | D5025 | |
| Insulin | Sigma | I9278 | |
| b-FGF | GIBCO | PHG0264 | |
| EGF | GIBCO | PHG0314 | |
| Pancreatic cancer fibroblasts inhibitor | CHI Scientific | FibrOUT | |
| 0.45 μm sterile filter | Millipore | SLHV033RB | |
| Concentration column | Millipore | Millipore UFC910008 | Concentrate the virus |
| Polybrene | Sigma | H9268 | |
| Hyaluronic Acid Sodium Salt | Sigma | H7630 | |
| L-glutamine | GIBCO | 21051024.00 | |
| Gemcitabine | Gemzan | ||
| Methylcellulose | Sigma | M0262 | |
| Navitoclax(ABT-263) | Selleck | S1001 | Bcl-xL inhibitor |
| Equipment | |||
| Microinjector | NARISHIGE | ||
| Stereomicroscope | OLYMPUS | MVX10 | |
| Confocal Microscope | LEICA | SP8 | 0.00 |
References
- Collins, D. C., Sundar, R., Lim, J. S. J., Yap, T. A. Towards Precision Medicine in the Clinic: From Biomarker Discovery to Novel Therapeutics. Trends in Pharmacological Sciences. 38 (1), 25-40 (2017).
- Huang, L., et al. Ductal pancreatic cancer modeling and drug screening using human pluripotent stem cell- and patient-derived tumor organoids. Nature Medicine. 21 (11), 1364-1371 (2015).
- Pauli, C., et al. Personalized In Vitro and In Vivo Cancer Models to Guide Precision Medicine. Cancer Discovery. 7 (5), 462-477 (2017).
- Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
- Jung, J., Seol, H. S., Chang, S. The Generation and Application of Patient-Derived Xenograft Model for Cancer Research. Cancer Research and Treatment. 50 (1), 1-10 (2018).
- Fior, R., et al. Single-cell functional and chemosensitive profiling of combinatorial colorectal therapy in zebrafish xenografts. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (39), E8234-E8243 (2017).
- Chen, L., et al. A zebrafish xenograft model for studying human cancer stem cells in distant metastasis and therapy response. Methods in Cell Biology. 138, 471-496 (2017).
- Gaudenzi, G., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in neuroendocrine tumors. Endocrine. 57 (2), 214-219 (2017).
- Lee, J. Y., Mazumder, A., Diederich, M. Preclinical Assessment of the Bioactivity of the Anticancer Coumarin OT48 by Spheroids, Colony Formation Assays, and Zebrafish Xenografts. Journal of Visualized Experiment. (136), (2018).
- Zhang, M., et al. Adipocyte-Derived Lipids Mediate Melanoma Progression via FATP Proteins. Cancer Discovery. 8 (8), 1006-1025 (2018).
- Howe, K., et al. The zebrafish reference genome sequence and its relationship to the human genome. Nature. 496 (7446), 498-503 (2013).
- Lieschke, G. J., Currie, P. D. Animal models of human disease: zebrafish swim into view. Nature Reviews: Genetics. 8 (5), 353-367 (2007).
- Guo, M., et al. U0126 inhibits pancreatic cancer progression via the KRAS signaling pathway in a zebrafish xenotransplantation model. Oncology Reports. 34 (2), 699-706 (2015).
- Yao, Y., et al. Canonical Wnt Signaling Remodels Lipid Metabolism in Zebrafish Hepatocytes following Ras Oncogenic Insult. Cancer Research. 78 (19), 5548-5560 (2018).
- Veinotte, C. J., Dellaire, G., Berman, J. N. Hooking the big one: the potential of zebrafish xenotransplantation to reform cancer drug screening in the genomic era. Disease Models & Mechanisms. 7 (7), 745-754 (2014).
- Zon, L. I., Peterson, R. The new age of chemical screening in zebrafish. Zebrafish. 7 (1), 1 (2010).
- Lam, S. H., Chua, H. L., Gong, Z., Lam, T. J., Sin, Y. M. Development and maturation of the immune system in zebrafish, Danio rerio: a gene expression profiling, in situ hybridization and immunological study. Developmental & Comparative Immunology. 28 (1), 9-28 (2004).
- Mercatali, L., et al. Development of a Patient-Derived Xenograft (PDX) of Breast Cancer Bone Metastasis in a Zebrafish Model. International Journal of Molecular Sciences. 17 (8), (2016).
- Wu, J. Q., et al. Patient-derived xenograft in zebrafish embryos: a new platform for translational research in gastric cancer. Journal of Experimental and Clinical Cancer Research. 36 (1), 160 (2017).
- Tulotta, C., et al. Imaging Cancer Angiogenesis and Metastasis in a Zebrafish Embryo Model. Advances in Experimental Medicine and Biology. 916, 239-263 (2016).
- Yao, Y., et al. Screening in larval zebrafish reveals tissue-specific distributions of fifteen fluorescent compounds. Disease Model& Mechanisms. , 028811 (2017).
- Tentler, J. J., et al. Patient-derived tumour xenografts as models for oncology drug development. Nature Reviews: Clinical Oncology. 9 (6), 338-350 (2012).
- Charo, J., et al. Bcl-2 overexpression enhances tumor-specific T-cell survival. Cancer Research. 65 (5), 2001-2008 (2005).
- Wang, X., et al. Human embryonic stem cells contribute to embryonic and extraembryonic lineages in mouse embryos upon inhibition of apoptosis. Cell Research. 28 (1), 126-129 (2018).
- Boise, L. H., et al. bcl-x, a bcl-2-related gene that functions as a dominant regulator of apoptotic cell death. Cell. 74 (4), 597-608 (1993).
- Moore, J. C., et al. Single-cell imaging of normal and malignant cell engraftment into optically clear prkdc-null SCID zebrafish. Journal of Experimental Medicine. 213 (12), 2575-2589 (2016).
