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Behavior

चूहे में अवसाद की तरह व्यवहार को प्रेरित करने के लिए एक पुरानी immobilization तनाव प्रोटोकॉल

Published: May 15, 2019 doi: 10.3791/59546
Automatic Translation
1, 2, *1, *3
1Department of Anatomy and Convergence Medical Sciences, Institute of Health Sciences, Bio Anti-aging Medical Research Center, Gyeongsang National University Medical School, 2Department of Biological Sciences, Pusan National University, 3Department of Physiology and Convergence Medical Sciences, Institute of Health Sciences, Gyeongsang National University Medical School
* These authors contributed equally

Summary

यह लेख एक निरोधक का उपयोग करके लंबे समय से स्थिर चूहों में अवसादग्रस्तता की तरह व्यवहार को शामिल करने के लिए एक सरलीकृत और मानकीकृत प्रोटोकॉल प्रदान करता है. इसके अलावा, अवसाद के प्रेरण को सत्यापित करने के लिए व्यवहार और शारीरिक तकनीकों को समझाया जाता है।

Abstract

अवसाद अभी तक पूरी तरह से समझ में नहीं आया है, लेकिन विभिन्न कारकों की सूचना दी गई है. हाल ही में, अवसाद की व्यापकता में वृद्धि हुई है। हालांकि, अवसाद या अवसाद पर अनुसंधान के लिए उपचारात्मक उपचार दुर्लभ है. इस प्रकार, वर्तमान पत्र में, हम आंदोलन प्रतिबंध से प्रेरित अवसाद के एक माउस मॉडल का प्रस्ताव. जीर्ण हल्के तनाव (सीएमएस) अवसादग्रस्तता की तरह व्यवहार प्रेरित करने के लिए एक प्रसिद्ध तकनीक है. हालांकि, यह विभिन्न हल्के तनाव का एक संयोजन से मिलकर एक जटिल प्रक्रिया की आवश्यकता है। इसके विपरीत, पुरानी स्थिरीकरण तनाव (सीआईएस) एक आसानी से सुलभ पुरानी तनाव मॉडल है, एक संयम मॉडल है कि एक निश्चित अवधि के लिए एक निरोधक का उपयोग कर आंदोलन सीमित द्वारा अवसादग्रस्तता व्यवहार लाती से संशोधित है. अवसादग्रस्तता जैसे व्यवहार का मूल्यांकन करने के लिए, सुक्रोज वरीयता परीक्षण (SPT), पूंछ निलंबन परीक्षण (TST), और तनाव मार्कर corticosterone स्तर को मापने के लिए एलिसा परख वर्तमान प्रयोग में संयुक्त कर रहे हैं. वर्णित प्रोटोकॉल सीआईएस के प्रेरण और अवसाद के सत्यापन के लिए व्यवहार और शारीरिक कारकों में परिवर्तन के मूल्यांकन वर्णन.

Introduction

प्रमुख अवसादग्रस्तता विकार (एमडीडी) दुनिया भर में मानसिक विकलांगता का प्रमुख कारण है, एक घटना है कि प्रत्याशित की तुलना में तेजी से बढ़ रही है के साथ. 2001 में, विश्व स्वास्थ्य संगठन ने भविष्यवाणी की कि एमडीडी 2020 तक दुनिया में दूसरा सबसे आम बीमारी होगी। हालांकि, यह पहले से ही 20131में दूसरा सबसे आम था. इसके अलावा, वर्तमान एंटीड्रिप्रेसेंट्स की कई सीमाएं होती हैं, जिनमें विलंबित प्रभावता, दवा प्रतिरोध, पतन, और विभिन्न दुष्प्रभाव2,3 शामिलहैं। शोधकर्ताओं इसलिए अधिक प्रभावी antidepressants विकसित करना चाहिए. हालांकि, एमडीडी की अस्पष्ट pathophysiology उपन्यास antidepressants के विकास के लिए एक बाधा प्रस्तुत करता है.

लंबे समय तक तनाव एमडीडी के लिए मुख्य जोखिम कारक है. यह हाइपोथैलेमिक-पिट्यूटरी-एड्रेनल (एचपीए) अक्ष में शिथिलता पैदा कर सकता है, जो एमडीडी ईटियोलॉजी4,5से भी संबंधित है। जैसा कि पहले वर्णित है, एचपीए अक्ष कोर्टिकोस्टेरोन के स्तर6,7,8, को बढ़ाकर अवसाद और चिंता विकारों सहित तनाव प्रेरित मनोरोग रोग विज्ञान में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है 9कई पशु मॉडल एचपीए अक्ष के निरंतर सक्रियण पर आधारित हैं, जो एमडीडी4के रोगियों में मनाया जाता है। इसके अलावा, पुराने तनाव और subcutaneously इंजेक्शन glucocorticoids द्वारा प्रेरित उच्च glucocorticoids तंत्रिका कोशिका मृत्यु के साथ अवसादग्रस्तता व्यवहार का कारण, न्यूरॉन प्रक्रियाओं के शोष, और कृन्तकों के मस्तिष्क में कम वयस्क neurogenesis10 , 11. अवसाद से जुड़ा एक अन्य महत्वपूर्ण मस्तिष्क क्षेत्र मध्य पूर्व फ्रंटल कॉर्टेक्स (एमपीएफसी) है। एमपीएफसी मस्तिष्क उपक्षेत्रों को नियंत्रित करने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, जैसे हाइपोथैलेमस और एमीगडाला, जो भावनात्मक व्यवहार और तनाव प्रतिक्रियाओं को नियंत्रित करते हैं8,9. उदाहरण के लिए, पृष्ठीय एमपीएफसी में घावों ने एचपीए अक्ष रोग को प्रेरित किया और संयम तनाव12,13के कारण कॉर्टिकोस्टेरोन स्राव बढ़ाया . हाल ही में एक अध्ययन से यह भी पता चला है कि बार-बार संयम तनाव corticosterone के स्तर में वृद्धि हुई है, जो glutamate-glutamine चक्र के माध्यम से glutamine पूरकता द्वारा कम किया जा सकता है न्यूरॉन्स और mPFC9में एस्ट्रोसाइट के बीच .

एमडीडी के ईटियोलॉजी का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया गया पहला पुराना तनाव प्रतिमान कैट्ज14द्वारा सुझाव दिया गया था . Willner एट अल तो एक पुरानी हल्के तनाव (सीएमएस) Katz के निष्कर्षों के आधार पर मॉडल का प्रस्ताव रखा. उन्होंने इस बात की पुष्टि की कि इस मॉडल की भविष्यवाणी की गई थी कि एंटीड्रिप्रेसेंट्स ने सीएमएस-प्रेरित एनेडोनिक जैसे व्यवहार15,16को बहाल कर दिया है। आमतौर पर, सीएमएस मॉडल ऐसे हल्के शोर, पिंजरे झुकाव, गीला बिस्तर, बदल प्रकाश अंधेरे चक्र, पिंजरे मिलाते हुए, मजबूर तैराकी, और सामाजिक हार के रूप में विभिन्न हल्के तनाव, का एक संयोजन के होते हैं. सीएमएस मॉडल व्यापक रूप से शोधकर्ताओं द्वारा उपयोग किया जाता है; हालांकि, इस मॉडल गरीब प्रतिकृतिता की है, और समय और ऊर्जा कुशल. इसलिए, अवसाद का मूल्यांकन करने के लिए अवसाद जैसे व्यवहार और शारीरिक विश्लेषण को शामिल करने के लिए एक मानकीकृत और सरलीकृत प्रोटोकॉल की मांग बढ़ रही है। सीएमएस मॉडल की तुलना में, पुरानी अचलीकरण तनाव (सीआईएस; जिसे क्रोनिक संयम तनाव के रूप में भी जाना जाता है) मॉडल सरल और अधिक कुशल है; इसलिए, सीआईएस मॉडल व्यापक रूप से पुराने तनाव अध्ययन17,18,19,20,21,22,23में इस्तेमाल किया जा सकता है, 24इसके अतिरिक्त , सीआईएस का उपयोग नर और मादा चूहों दोनों में अवसादग्रस्तता व्यवहार25,26विकसित करने के लिए किया जा सकता है . सीआईएस के दौरान जानवरों को शरीर में फिट आकार के सिलेंडर में 2 या 4 सप्ताह9,27,28के लिए 1-8 घंटे प्रतिदिन के लिए रखा जाता है। इनमें से, 2 सप्ताह के लिए प्रति दिन 2 घंटे के लिए संयम तनाव की स्थिति चूहोंमेंकम से कम दर्द के साथ अवसादग्रस्तता व्यवहार पैदा करने के लिए पर्याप्त है9 ,28. संयम की स्थिति में रक्त कोर्टिकोस्टेरोन का स्तर तेजी से 9 ,28,29तक बढ ालाया गया . कई अध्ययनों से पता चला है कि सीआईएस मॉडल भविष्यवाणी वैधता है, पुष्टि है कि सीआईएस प्रेरित अवसादग्रस्तता की तरह लक्षण antidepressants द्वारा बहाल कर रहे हैं19,20,30,31. इसमें, हम चूहों में सीआईएस के बाद सीआईएस की विस्तृत प्रक्रियाओं, साथ ही कुछ व्यवहार और शारीरिक परिणामों की रिपोर्ट करते हैं।

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Protocol

सभी प्रयोगात्मक प्रोटोकॉल और पशु देखभाल Gyeongsang राष्ट्रीय विश्वविद्यालय के पशु अनुसंधान के लिए विश्वविद्यालय पशु देखभाल समिति के दिशा निर्देशों के अनुसार आयोजित किया गया (GLA-100917-M0093).

1. सामग्री

  1. चूहों
    1. प्रसवोत्तर सप्ताह 7 में 22-24 ग्राम वजन के C57BL/6 तनाव पृष्ठभूमि के पुरुषों का प्रयोग करें। प्रयोगों से पहले 1 सप्ताह के लिए प्रजनन कक्ष में निवास.
      नोट: सभी चूहों एक प्रयोगशाला पशु कंपनी से खरीदे गए थे.
    2. घर चूहों व्यक्तिगत रूप से एक तापमान नियंत्रित vivarium में (22-24 डिग्री सेल्सियस) एक 12 घंटे के प्रकाश के तहत /
  2. प्रतिरोधक
    1. एक बेलनाकार, पारदर्शी, एक्रिलिक टैंक (ऊँचाई ] 8.5 सेमी, व्यास - 2.5 सेमी) को नियंत्रित करने के लिए और अवसादग्रस्तता व्यवहार का उत्पादन करने के लिए एक वर्ग आसन पर तय का उपयोग करें (चित्र 1A)। इस सिलेंडर का व्यास शरीर को फिट करने के लिए बनाया गया था ताकि माउस बारी और आगे या पीछे की ओर स्थानांतरित नहीं कर सकता। निरोधक को वाणिज्यिक रूप से खरीदा जा सकता है या प्रयोगशाला में बनाया जा सकता है।
  3. पूंछ निलंबन उपकरण
    1. पारदर्शी एक्रिलिक से बने एक उचित आकार पूंछ निलंबन बॉक्स का उपयोग करें (ऊँचाई $ 30 सेमी, चौड़ाई ] 20 सेमी, लंबाई ] 20, चित्र 1B)। जानवरों के बीच बातचीत को रोकने के लिए, बॉक्स के भीतर आयताकार विभाजन का उपयोग करें ताकि फर्श और चार दीवारों में से तीन एक्रिलिक प्लेटों द्वारा अवरुद्ध कर रहे हैं। वीडियो रिकॉर्डिंग की अनुमति देने के लिए और क्षैतिज पट्टी को ठीक करने के लिए बॉक्स के शेष दो पक्षों को खुला छोड़ दें। बॉक्स व्यावसायिक रूप से खरीदा जा सकता है या प्रयोगशाला में बनाया.
  4. वीडियो रिकॉर्डिंग डिवाइस और वीडियो ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर
    1. व्यवहार प्रयोग की रिकॉर्डिंग की अनुमति देने के लिए एक काले और सफेद प्रदर्शन बंद सर्किट टेलीविजन कैमरा का उपयोग करें (सामग्री की तालिकादेखें) एक कंप्यूटर और एक तिपाई (या अन्य समर्थन उत्पादों) से जुड़े. वीडियो रिकॉर्डिंग इस प्रयोग में व्यवहार स्कोरिंग की अनुमति के लिए आवश्यक है, क्योंकि कम से कम दो चूहों एक ही समय में परीक्षण कर रहे हैं.
    2. सुनिश्चित करें कि कैमरा रिज़ॉल्यूशन वीडियो डेटा को कनेक्ट किए गए कंप्यूटर में स्थापित वीडियो ट्रैकिंग सॉफ़्टवेयर (सामग्री तालिकादेखें) का उपयोग करके विश्लेषित करने की अनुमति देने के लिए पर्याप्त उच्च है.

2. सीआईएस संयम द्वारा अवसाद का प्रेरण

नोट: माउस धीरे संभाल, लेकिन विश्वास के साथ मजबूती से. दोनों किसी न किसी और अस्थायी हैंडलिंग प्रयोग में एक और तनाव कारक है और यह माउस संघर्ष, काटने, और खरोंच के लिए एक महत्वपूर्ण कारण है.

  1. एक डिजिटल लक्स मीटर का उपयोग कर प्रकाश (200 लक्स) शर्तों के लिए कमरे प्रकाश सेट करें।
  2. परीक्षण से कम से कम एक सप्ताह पहले एक अलग पिंजरे में माउस घर और प्रयोग से पहले कम से कम 30 मिनट के लिए परीक्षण के कमरे में माउस जगह है.
    नोट: प्रयोग से पहले कम से कम 3 लगातार दिनों के लिए दिन में कम से कम एक बार चूहों को संभालें ताकि चूहे प्रयोगकर्ता से परिचित हो सकें। प्रयोग से पहले एक अनुकूलन अवधि यह सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक है कि चूहों को परिस्थितियों के अनुकूल, जैसे परीक्षण कक्ष.
  3. माउस को परेशान करने से बचने के लिए माउस की पूंछ को धीरे से पकड़ें, और फिर सावधानी से इसे किसी न किसी सतह पर रखें (पिंजर या पिंजरे के ढक्कन के तार पट्टी के ऊपर)।
  4. निरोधक को एक छोटे से सफेद तौलिया से ढक दें, और फिर धीरे से निरोधक के उद्घाटन पर माउस रखें ताकि माउस स्वेच्छा से निरोधक में प्रवेश कर े।
    नोट: इस मामले में, माउस के साथ कि जो यह निरोधक में प्रवेश करती है करने के लिए विपरीत दिशा में तैनात है। स्वेच्छा से निरोधक में प्रवेश करने के लिए माउस का नेतृत्व करने के लिए, निरोधक को अंदर गहरा बनाने के लिए एक छोटे तौलिया से कवर किया जाता है।
  5. माउस को यथासंभव तंग नियंत्रित करने के लिए बंद रखें, शरीर को नुकसान से बचने के लिए सावधान किया जा रहा है, जैसे पूंछ, पैर, और अंडकोष।
  6. माउस को लगातार 15 दिनों तक 2 h/दिन (9:00 A.M. से 11:00 A.M.) के लिए रोकें.
  7. उपाय शरीर के वजन और भोजन का सेवन हर 48 एच निरोधक के संपर्क के दौरान (यानी, आंदोलन संयम की दीक्षा से पहले 48 एच के दौरान भोजन का सेवन मात्रा).
    नोट: जब शरीर के वजन और भोजन का सेवन को मापने, सीआईएस के दौरान परीक्षण कक्ष में अपने घर पिंजरों में नियंत्रण चूहों जगह. सुनिश्चित करें कि अन्य पर्यावरणीय कारक ों सीआईएस चूहों के लिए के रूप में ही कर रहे हैं.
  8. इस तरह के sucrose वरीयता परीक्षण (SPT) और पूंछ निलंबन परीक्षण (TST) (चरण 4 और 5) के लिए देखें के रूप में व्यवहार परीक्षण प्रदर्शन करके अवसाद के प्रेरण की पुष्टि करें।
  9. ELISA परख का उपयोग कर तनाव मार्कर corticosterone को मापने के द्वारा अवसाद के प्रेरण की पुष्टि करें (खंड 6 को देखें).

3. सुक्रोज वरीयता परीक्षा

  1. परीक्षण से पहले, चूहों को दो पीने की बोतलों की उपस्थिति के लिए आदत (एक जिसमें 0.1 एम सुक्रोज और अन्य युक्त सादे पानी) 48 ज के लिए। 24 एच के बाद दो बोतलों की स्थिति को स्विच करें ताकि एक पक्ष पूर्वाग्रह द्वारा उत्पादित किसी भी भ्रमकोश को कम किया जा सके।
  2. 3rd दिन पर, 24 ज के लिए पानी के चूहों वंचित.
  3. SPT प्रयोग के दिन, चूहों 6 एच के लिए दो पीने की बोतलों को बेनकाब. 3 ज के बाद, पानी की बोतलों की स्थिति स्विच.
  4. सुक्रोज विलयन और जल की मात्रा (एमएल) को अभिशर्धित करें तथा फिर सुक्रोज के लिए पशुओं की आत्मीयता की गणना करें।
  5. आम तौर पर, परीक्षण के दौरान कुल तरल पदार्थ की खपत पर sucrose खपत की मात्रा का एक प्रतिशत के रूप में sucrose वरीयता की गणना।

4. पूंछ निलंबन परीक्षण

  1. TST शुरू करने से पहले कम से कम 30 मिनट परीक्षण कक्ष में सीआईएस प्रेरित चूहों लाओ.
  2. मंद (50 लक्स) शर्तों के लिए कमरे की रोशनी सेट करें।
  3. उच्चतम रिज़ॉल्यूशन वीडियो फ़ाइल प्राप्त करने के लिए, कैमरा को माउस के पास संभव के रूप में रखें (लगभग 40 सेमी माउस से).
  4. सेलोफेन चिपकने वाला टेप (पुच्छ की नोक से दूरी 1 सेमी) का उपयोग करके क्षैतिज पट्टी (नीचे की रेखा से 30 सेमी) से माउस को दृढ़ता से निलंबित करें। तनाव के अन्य स्रोतों को कम करने के लिए जितनी जल्दी हो सके माउस के लिए टेप लागू करने की प्रक्रिया को पूरा करें।
  5. एक बार माउस निलंबन बॉक्स के बीच में तैनात है, रिकॉर्डिंग शुरू करने और 6 मिनट के लिए लगातार व्यवहार परिवर्तन का निरीक्षण.
    नोट: यदि माउस अपनी पूंछ पर चढ़ने का प्रयास करता है, तो एक छड़ी का उपयोग करें या ऐसा करने से रोकने के लिए डाट चढ़ाई.
  6. प्रयोग के अंत में, माउस को अपने घर के पिंजरे में ले जाएं और ध्यान से अपनी पूंछ से टेप को हटा दें।
  7. वीडियो ट्रैकिंग सॉफ़्टवेयर का उपयोग करके स्थिर अवधियों के संचित समय का विश्लेषण करें.
    नोट: गतिहीनता की अवधि सबसे महत्वपूर्ण सीआईएस पैरामीटर है। यह स्थिर अवधियों के संचित समय के रूप में गणना की जा सकती है, सॉफ्टवेयर के स्तर फिल्टरिंग डिवाइस के भीतर निहित गति सीमा के संदर्भ में परिभाषित.

5. एलिसा द्वारा रक्त में corticosterone के स्तर को मापने

नोट: व्यवहार परीक्षण के एक दिन बाद, चूहों रक्त इकट्ठा करने के लिए बलिदान कर रहे हैं.

  1. संज्ञाहरण तक एक प्रेरण कक्ष में 5% आइसोलुरेन के साथ माउस को एनेस्थेटाइज करें। सुनिश्चित करें कि माउस प्रेरण कक्ष में पर्याप्त समय है (कम से कम 2 मिनट) सर्जरी के दौरान जागने को रोकने के लिए.
  2. एक 1 एमएल सिरिंज का उपयोग कर दिल से रक्त ले लीजिए, और बर्फ पर K3EDTA युक्त vacutainers में रक्त की दुकान (सुबह 9 बजे)
  3. 4 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए 1,000 डिग्री ग्राम पर सेंट्रीफ्यूगेशन द्वारा अलग प्लाज्मा।
  4. निर्माता के प्रोटोकॉल के अनुसार कॉर्टिकोस्टेरोन एलिसा किट (सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करके प्लाज्मा corticosterone के स्तर की मात्रा।

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Representative Results

प्रतिनिधि प्रयोग में, सभी डेटा से प्राप्त किए गए थे 6 - 8 प्रति समूह चूहों. प्रतिनिधि सामग्री और माउस को स्वेच्छा से निरोधक में सम्मिलित करने की विधि चित्र 1में दर्शाया गया है।

सीआईएस प्रेरण के बाद व्यवहार परीक्षण और रक्त नमूने करने के लिए, चूहों को चित्र 2कमें संक्षेप में प्रयोगात्मक प्रक्रिया के अधीन किया गया था। जैसा कि चित्र 2 और चित्र 3में दिखाया गया है, सीआईएस अवसादग्रस्तता जैसे व्यवहार को अच्छी तरह से प्रेरित करता है और तनाव मार्कर कॉर्टिकोस्टेरोन को रिलीज करता है। इसके अलावा, इन सूचकांकों glutamine पूरकता द्वारा बरामद किया गया (मीस पूरी प्रयोगात्मक अवधि के दौरान glutamine-पूरक आहार खिलाया गया, 150 मिलीग्राम/kg) के रूप में चित्र 3में दिखाया गया.

Figure 1
चित्र 1: निरोधक सेटअप. (A) संयमी, (B) टेल सस्पेंशन बॉक्स, और (C) पानी की बोतल और गेंद नोजल। (डी) सीआईएस को प्रेरित करने के लिए निरोधक में माउस डालने की प्रक्रिया। बाएं पैनल से, माउस स्वेच्छा से निरोधक में प्रवेश करता है के बाद निरोधक एक छोटे से तौलिया के साथ कवर किया जाता है। सही पैनल से पता चलता है कि माउस पूरी तरह से निरोधक में प्रवेश किया है. यह आंकड़ा सोन एट अल से संशोधित किया गया था9 कॉपीराइट अनुमति सभी पुन: उपयोग किए गए आंकड़ों के लिए पत्रिका से प्राप्त किया गया है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2. चूहों में पुरानी अचलीकरण तनाव और अवसादग्रस्तता जैसे व्यवहार का मूल्यांकन शामिल होना। (ए) प्रायोगिक प्रक्रिया। नियंत्रण समूह(नीली रेखा, द र् 8) में तथा सीआईएस समूह (लाल रेखा, द र् 8) में शरीर का भार (बी ) तथा भोजन का सेवन (सी ) . (डी और ई) सुक्रोज वरीयता और गतिहीनता समय (n ] 8 दोनों परीक्षणों में)। (च) रक्त कोरिकोस्टेरोन स्तर (द र् 7/समूह)। डेटा को मतलब के रूप में दिखाया गया है - SEM. *p और lt; 0.05 के रूप में निर्धारित द्वारा (बी और सी) दो तरह से Bonferroni पोस्ट-हॉक परीक्षण या (डी-एफ) unpaired छात्र के टी-परीक्षण के साथ ANOVA. सीआईएस - पुरानी स्थिरीकरण तनाव, एसपीटी - sucrose वरीयता परीक्षण, TST - पूंछ निलंबन परीक्षण, डीसी - decapitation. यह आंकड़ा सोन एट अल से संशोधित किया गया था9 कॉपीराइट अनुमति सभी पुन: उपयोग किए गए आंकड़ों के लिए पत्रिका से प्राप्त किया गया है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3. एक glutamine-पूरक आहार अवसादग्रस्तता की तरह व्यवहार को सुधारता है. नियंत्रण समूह (नीली रेखा,द ] 7), सीआईएस समूह (लाल रेखा, द ] 7) और सीआईएस + ग्लूटामाइन पूरक समूह (हरी रेखा, द ) 7 ) में शरीर का वजन (ए) और भोजन का सेवन ( बी ) । सुक्रोज वरीयता (सी), गतिहीनता समय (डी) और रक्त corticosterone स्तर (ई) (एन ] 6-7/ डेटा को मतलब के रूप में दिखाया गया है - SEM. *p और lt; 0.05 द्वारा निर्धारित के रूप में (ए और बी) दो तरह से Bonferroni पोस्ट-हॉक परीक्षण या (सी-ई) unpaired छात्र के टी-परीक्षण के साथ ANOVA. Gln ] ग्लूटामाइन. यह आंकड़ा सोन एट अल से संशोधित किया गया था9 कॉपीराइट अनुमति सभी पुन: उपयोग किए गए आंकड़ों के लिए पत्रिका से प्राप्त किया गया है. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

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Discussion

मस्तिष्क की जटिलता और एमडीडी की विषमता यह पूरी तरह से हालत पुन: पेश कि पशु मॉडल बनाने के लिए चुनौतीपूर्ण बनाते हैं। कई शोधकर्ताओं ने इस कठिनाई को दूर किया है एक endophenotype आधारित दृष्टिकोण32का उपयोग कर, जिसमें anhedonia (पुरस्कृत उत्तेजनाओं में रुचि की कमी) और निराशा developmentally संरक्षित और पशु मॉडल में परिमाणात्मक व्यवहार माना जाता है, जो अवसाद के रोगियों में भी देखा जाता है33. वर्तमान पत्र में, हमने एक विधि प्रस्तुत की है जिसमें सीआईएस ने एक ऐसी प्रणाली प्रस्तुत की है जिसमें सीआईएस और एमडीडी के बीच अनुवादात्मक प्रासंगिकता का प्रदर्शन करते हुए, अनहेडोनिया और निराशा को प्रेरित करने के लिए पर्याप्त था। इसके अलावा, कई अध्ययनों से सीआईएस का इस्तेमाल किया है तंत्र की पहचान करने के लिए अवसादग्रस्तता की तरह व्यवहार प्रकाश में लाने और सामान्य व्यवहार9बहाल करने में सक्षम antidepressants का आकलन करने के लिए9 ,19,20,30, 31,34. इस प्रकार, सीआईएस एमडीडी के ईटियोलॉजी का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त हो सकता है और इसलिए नए एंटीड्रिप्रेसेंट्स के विकास में उपयोगी हो सकता है।

सीआईएस के दौरान अवसादग्रस्तता जैसे व्यवहार के विकास को कई कारक प्रभावित करते हैं। पहले पशु तनाव है क्योंकि सीआईएस के लिए तनाव की प्रतिक्रिया की हद तक पशु तनाव के आधार पर भिन्न हो सकते हैं. वास्तव में, अवसादग्रस्तता व्यवहार परीक्षणों और अवसादरोधी दवाओं के जवाब में तनाव से संबंधित कई मतभेद35,36के नाम से जाने जाते हैं। इस संबंध में , सामान्य रूप से प्रयुक्त C57BL तनाव37,38,39के पूंछ पर चढ़ने वाले व्यवहार पर विशेष ध्यान दिया जाना चाहिए . दूसरा, पर्यावरण तनाव कारकों, जैसे प्रकाश, शोर, और आवास, कम से कम किया जाना चाहिए. हालांकि सामाजिक अलगाव तनाव निष्कर्षों को प्रभावित कर सकतेहैं 40,41, हम एकल घर चूहों पर सीआईएस का आयोजन किया क्योंकि अलगाव नुकसान से अधिक लाभ है. उदाहरण के लिए, यह सामाजिक हार तनाव को कम कर सकते हैं क्योंकि सीआईएस अक्सर समूह-घर चूहों का कारण बनता है एक दूसरे पर हमला करने के लिए. दरअसल, नियंत्रण चूहों को भी उनके housemates हमला, TST और SPT में आधारभूत व्यवहार को प्रभावित. एक और पहलू पर विचार करने के लिए प्रयोग शुरू करने से पहले सेक्स है. इस लेख में, हम पुरुष चूहों के साथ सभी प्रयोगों का प्रदर्शन किया, के रूप में भावनात्मक और संज्ञानात्मक व्यवहार मादा चूहों में मासिक धर्म चक्र से प्रभावित होते हैं42,43,44. इसके अलावा, मादा कृन्तकों को तनाव से संबंधित विकारों के लिए अपेक्षाकृत अधिक अतिसंवेदनशील होते हैं, जैसे अवसाद। इसलिए, यदि प्रयोगकर्ता मादा चूहों का उपयोग करना चाहता है, तो अवसादग्रस्तता जैसे व्यवहार प्रेरण के समय बिंदु की पुष्टि की जानी चाहिए और सीआईएस प्रोटोकॉल को संशोधित किया जाना चाहिए। इसके अलावा, सभी चूहों नई परिस्थितियों के लिए निवास की अवधि की अनुमति दी जानी चाहिए, और प्रयोगकर्ता प्रयोग के दौरान परीक्षण कक्ष में नए जानवरों को जोड़ने से बचना चाहिए, क्योंकि चूहों प्रयोग के दौरान नए घ्राण और अल्ट्रासोनिक संकेतों भावना हो सकता है . जब प्रयोगकर्ता चूहों को दूसरी मंजिल या लंबी दूरी पर ले जा रहा है, तो काले कपड़े के एक टुकड़े के साथ प्रजनन पिंजरे को कवर करना आवश्यक है। अंत में, उम्र45तनाव के लिए प्रतिक्रिया और वसूली की सीमा निर्धारित करने में एक महत्वपूर्ण कारक है। हमने किशोरावस्था में एमडीडी के ईटियोलॉजी पर ध्यान केंद्रित किया-8 सप्ताह पुराने चूहों का प्रयोग पूरे प्रयोग के दौरान किया गया था। प्रयोगकर्ताओं को इस बात पर विचार करना चाहिए कि क्या सीआईएस डिजाइन करते समय उपर्युक्त कारक परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं।

सीआईएस प्रेरण को मान्य करने के लिए, अवसाद का संकेत है कि परीक्षण, इस तरह के शरीर के वजन और भोजन का सेवनमाप के रूप में, TST, और एसपीटी, प्रदर्शन किया जाना चाहिए और एक शारीरिक तनाव सूचक, इस तरह के corticosterone में परिवर्तन के रूप में, 9 की जांच की जानी चाहिए, 46 , 47. तथापि, इस प्रयोग में लागू टीएसटी विधि चूहों में अनुशंसित नहीं है क्योंकि चूहे बहुत भारी होते हैं जिन्हें उनकी पूंछों द्वारा समर्थित किया जाता है। ऐसे मामलों में , टीएसटी को जबरन तैराकी या खुले मैदान परीक्षण39,48से बदल दिया जाना चाहिए . इस प्रयोग में, प्राथमिक विचार निलंबन बॉक्स का आकार था. चिपकने वाला सेलोफेन टेप का उपयोग करके, माउस की पूंछ छत पर बॉक्स के बीच में स्थित एक क्षैतिज पट्टी पर निलंबित कर दिया गया था। इसलिए, बॉक्स प्रयोग के दौरान दीवार से संपर्क करने से माउस को रोकने के लिए पर्याप्त बड़ा होना चाहिए। SPT, anhedonia का एक संकेत है, इस तरह के अवसाद के रूप में एक भावनात्मक विकार से पता चलता है. वर्तमान प्रयोग में, एक मिठाई पेय में चूहों की रुचि sucrose का उपयोग करके मूल्यांकन किया गया था.

अवसादग्रस्तता जैसे व्यवहार को प्रेरित करने के लिए, हमने सीआईएस स्थापित करने के लिए सीएमएस मॉडल की संयम तकनीक को संशोधित किया, जो अवसाद में प्रयोग करने के लिए एक सरलीकृत और अत्यधिक reprod्य तकनीक है। हालांकि, एक दोहराव संयम मॉडल के रूप में सीआईएस का उपयोग करने में, वहाँ एक संभावना है कि प्रयोगात्मक जानवरों सीआईएस के लिए अनुकूल है और यह करने के लिए असंवेदनशील हो सकता है। इसके अलावा, चलन परीक्षण उचित नहीं हो सकता है क्योंकि लंबे समय तक संयम जानवरों की आवाजाही को प्रभावित कर सकता है। इसलिए, अवसाद को छोड़कर अन्य कारकों को कम करने के लिए एक दिन और लगातार दिनों में संयम समय का एक निर्धारित बिंदु की स्थापना महत्वपूर्ण है। इसके अलावा, सीआईएस के संपर्क में आने के बाद अवसाद के प्रेरण को सत्यापित करने के लिए व्यवहार और शारीरिक परीक्षण करना आवश्यक है।

अंत में, अवसाद में शोधकर्ताओं की बढ़ती रुचि के बावजूद, यह व्यवस्थित रोग तंत्र को परिभाषित करने के लिए चुनौतीपूर्ण रहता है, जो अवसाद के विविध और जटिल pathophysiology के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है. इसलिए, सरलीकृत पशु मॉडल अवसाद प्रेरित करने के लिए, सीआईएस जैसे, महत्वपूर्ण सबूत प्रदान करने के लिए अवसाद प्रेरण के तंत्र की स्थापना और एक अच्छा प्रयोगात्मक मंच सुझाव है कि इस तरह के एक जटिल मानसिक समस्या के लिए चिकित्सीय जवाब प्राप्त कर सकते हैं.

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Disclosures

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

इस शोध कोरिया के राष्ट्रीय अनुसंधान फाउंडेशन (NRF) शिक्षा मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित (NRF-2015R1A5A2008833 और NRF-2016R1D1A3B03934279) और स्वास्थ्य विज्ञान के lnstitute के अनुदान के माध्यम से बुनियादी विज्ञान अनुसंधान कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया था (IHS) ग्योंगसांग राष्ट्रीय विश्वविद्यालय में जीएनयू-2016-02)।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1 ml disposable syringes Sungshim Medical P000CFDO
Balance A&D Company FX-2000i
Ball nozzle Jeung Do B&P JD-C-88
CCTV camera KOCOM KCB-381
Corticosterone ELISA kits Cayman Chemical
Digital lux meter TES TES-1330A
Ethovision XT 7.1 Noldus Information Technology
Isoflurane HANA PHARM CO., LTD. Ifran solution
Mice Koatech C57BL/6 strain
Restrainer Dae-jong Instrument Industry DJ-428
Saccharose (sucrose) DAEJUNG 7501-4400
Small animal isoflurane anaesthetic system Summit
Acrylic bar The apparatus was made in the lab for TST test
Tail suspension box The apparatus was made in the lab
Timer Electronics Tomorrow TL-2530
Water bottle Jeung Do B&P JD-C-79

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References

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व्यवहार अंक 147 तंत्रिका विज्ञान पशु मॉडल अवसाद पुरानी स्थिरीकरण तनाव पूंछ निलंबन परीक्षण sucrose वरीयता परीक्षण corticosterone C57BL /
चूहे में अवसाद की तरह व्यवहार को प्रेरित करने के लिए एक पुरानी immobilization तनाव प्रोटोकॉल
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Son, H., Yang, J. H., Kim, H. J.,… More

Son, H., Yang, J. H., Kim, H. J., Lee, D. K. A Chronic Immobilization Stress Protocol for Inducing Depression-Like Behavior in Mice. J. Vis. Exp. (147), e59546, doi:10.3791/59546 (2019).

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