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Chemistry

強化された神経化学的検出のための金ナノ粒子修飾炭素繊維マイクロ電極

Published: May 13, 2019 doi: 10.3791/59552

Summary

本研究では、炭素繊維マイクロ電極を金ナノ粒子で改変し、神経伝達物質検出の感度を高める。

Abstract

30年以上にわたり、炭素繊維マイクロ電極(CFM)は神経伝達物質検出の標準となっています。一般的に、炭素繊維はガラス毛細血管に吸引され、細かいテーパに引っ張られ、エポキシを使用して密封され、高速スキャン環状ボルタンメトリー試験に使用される電極材料を作成します。ただし、ベア CFCM の使用にはいくつかの制限があります。まず第一に、炭素繊維は、比較的低い表面積を有し、他のナノ材料よりも低い感性を得る主に基底平面炭素を含有する。さらに、グラファイトカーボンは、その時間分解能、および比較的低い導電性によって制限されます。最後に、神経化学物質と高分子は、それらがさらなる神経伝達物質の吸着をブロックする非導電性ポリマーを形成する炭素電極の表面で汚れすることが知られています。本研究では、金ナノ粒子を用いてCMEを改変し、高速スキャン環状ボルタンメトリーによる神経化学的試験を強化する。Au3+をCMFの表面にコロイド溶液から電気堆積または浸漬した。金は安定で比較的不活性な金属であるため、神経化学物質の分析測定に理想的な電極材料です。金ナノ粒子修飾(AuNP-CMEs)は、4時間以上にわたってドーパミン応答に対する安定性を持っていた。さらに、AuNP-CCMは、裸の未改変CFMよりも高い感度(環状ボルタングラムの高いピーク酸化電流)と高速電子伝達動態(低ΔEPまたはピーク分離)を示します。AuNP-CMFの開発は、ドーパミン濃度および他の神経化学物質の急速な変化を検出の下限で検出するための新しい電気化学センサーの作成を提供します。この仕事は神経化学的測定の増強のための広大な適用を有する。薬物乱用、うつ病、脳卒中、虚血の神経化学的影響を研究するために、げっ歯類やその他のモデルの生体内の神経伝達物質を検出する新しい電極センサの開発には、金ナノ粒子修飾CFMの生成が非常に重要です。および他の行動や病気の状態。

Introduction

炭素繊維マイクロ電極(CFM)1は、ドーパミン3、ノルエピネフリン4、セロトニン5、アデノシン6を含むいくつかの重要な神経伝達物質2の酸化を検出するためのバイオセンサとして最もよく使用されます。ヒスタミン7、および他の8.炭素繊維の生体適合性と大きさは、より大きな標準的な電極と比較して組織の損傷を軽減するため、移植に最適です。9 CMFは有用な電気化学的特性を有することが知られており、高速電気化学的技術、最も一般的に高速スキャン環状ボルタンメトリー(FSCV)10、11で使用すると迅速な測定を行うことができる。FSCVは、適用電位を迅速にスキャンし、特定の分析物12、13に対して特定の環状ボルタングラムを提供する技術である。高速スキャンによって生成される大きな充電電流は、炭素繊維上で安定しており、特定の環状ボルタングラムを生成するためにバックグラウンドを減算することができます。

その最適な電気化学と神経生物学的重要性のため, ドーパミンは広く研究されています。.カテコールアミンドーパミンは、神経系内の動き、記憶、認知、感情の制御に重要な役割を果たす必須の化学メッセンジャーです。ドーパミンの余剰または欠乏は、多数の神経学的および心理的干渉を引き起こす可能性があります。;これらの中には、パーキンソン病、統合失調症、および中毒性の行動があります。今日、パーキンソン病はドーパミン合成に関与する中脳ニューロンの変性による流行性障害であり続けている14.パーキンソン病の症状には、振戦、運動の遅さ、こわばり、バランス維持の問題が含まれます。一方、コカイン15やアンフェタミン16、17などの覚醒剤はドーパミンのオーバーフローを促進する。薬物乱用は、最終的にドーパミンの定期的な流れを置き換え、最終的に中毒性の行動につながるドーパミンの余剰を必要とする脳の条件。

近年、神経伝達物質検出18において電極機能の向上に重点が置かれている。電極感度を高める最も広く普及した方法は、繊維表面をコーティングすることによってある。驚くべきことに、炭素繊維19上の金属ナノ粒子電着に関する研究は限られている。金等の貴金属ナノ粒子は、他の機能性材料20を用いて繊維表面にエレクトロポジットしてもよい。例えば、神経伝達物質吸着が起こる電気活性表面積を増加させる。エレクトロデポジット金属ナノ粒子は、急速に形成され、精製することができ、炭素繊維に付着する。これらのナノ粒子の核生成と成長の制御を可能にするため、貴金属ナノ粒子の堆積と炭素繊維の表面増強の両方に電気化学は重要であり続けます。最後に、触媒および導電性特性の増加、および質量輸送の改善は、金属ナノ粒子を電気分析に利用する他の利点の一つである。

アメリカン大学の高度な実験室シーケンスコース(実験生物化学IおよびII CHEM 471/671-472/672)は、分析、物理、生化学の研究室の組み合わせです。前期は、研究室の技術の概要です。2学期は学生主導で主導的な研究プロジェクト21です。これらのプロジェクトについて、学生は以前に生体分子、タンパク質、ペプチド、および金ナノ粒子22、23のアミノ酸促進合成のメカニズムを調べた。最近の研究では、電極表面における金ナノ粒子(AuNP)産生の形成と、CFCが神経伝達物質を検出する能力に対するAuNP効果の評価に焦点を当てています。本研究では、この技術を応用して、ドーパミン酸化を検出するCFMの感度が繊維表面上へのAuNPの電着を通じて高められることを実証した。各裸CFMEは、CFMEの表面にドーパミン酸化を測定するためにドーパミン酸化電流を検出する際に、様々なスキャン速度、安定性およびドーパミン濃度によって特徴付けられます。その後、Au3+をAu0に還元し、同時にナノ粒子として繊維表面にエレクトロデポジットし、続いて一連の特性解析実験を行った。直接比較の後, AuNP-CMS はドーパミン検出の高い感度を持っていることがわかりました。.電着を介して繊維表面にAuNPの均一なコーティングは、より高い電気活性表面積をレンダリングします。したがって、ドーパミンの吸着を修飾電極表面に増加させる。これは、より高いドーパミン酸化電流につながった.AuNP-CMEsのドーパミン酸化および還元ピーク(+Ep)の潜在的な分離も小さくなり、より速い電子伝達動態を示唆した。この研究の将来の研究は、ドーパミンの検出のための裸とAuNP-CMの両方の生体内試験が含まれています.

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Protocol

炭素繊維マイクロ電極の構築

  1. 炭素繊維の調製
    1. 炭素繊維マイクロ電極を作成するには、まず手、手袋、へらを使って炭素繊維(炭素繊維、直径7mm)を1つずつ分離します。
    2. ねじれた糸から繊維を引っ張るか、引っ張ります。
    3. 隔離された炭素繊維をガラスキャピラリー(マイクロフィラメントなしの単一バレルホウケイ酸塩キャピラリーガラス、外径1.2mm、内径0.68mm)に吸引する。
    4. 長さ約10cm、幅25cmの段ボールを切断して電極ホルダーを作成します。
  2. 垂直毛細管プーラーを使用して電極を引っ張ります。
  3. 垂直毛細管引きの引き戸を開きます。
  4. ガラスキャピラリーを挿入するのに十分なスペースでドリルチャックを反時計回りに回転させることによって、金属ホルダーロッドを緩めて取り外します。
  5. ガラスキャピラリーを電極ホルダーに挿入します。ガラス毛細血管を手作業で垂直毛細血管の上部に手動で上げます。
  6. ガラス毛細血管を壊したり粉砕したりすることなく、ドリルチャックでガラス毛細血管を時計回りに締めます。
  7. ヒーター 1、ヒーター 2、および磁石の設定を製造元に調整し、ガラスキャピラリーを電極材料の細かいテーパに引っ張るように提案しました。
  8. 赤いスタートボタンを押してコイルコイルを加熱し、圧力、重力、加熱を介して電極を引っ張ります。
  9. コイルを赤い熱い状態から冷やします。2つの引っ張った電極を上から下に接続するはさみで炭素繊維を切ります。ドリルチャック法を使用して、反時計回りにねじれ、垂直毛細管プーラーからガラス毛細血管を除去します。

2. 炭素繊維マイクロ電極製剤

  1. ステレオスコープまたは顕微鏡の下で、外科はさみまたは鋭いかみそり刃でガラス毛細血管の表面から突き出た炭素繊維を約100-150 μmの長さに切断する。
  2. 綿棒を用いて25mLバイアルに10gのエポキシと0.2mLの硬化器を混ぜてエポキシの溶液を調出す。
  3. 各電極の先端だけをエポキシおよび硬化器溶液に約15sの間浸します。
  4. 炭素繊維マイクロ電極の前述の上部をアセトンに約3秒浸し、炭素繊維マイクロ電極のバレルから余分なエポキシを洗い流す。

3. 電解

  1. 作動電極(炭素繊維マイクロ電極)を基準電極に加えて0.5mM HAuCl4の溶液中に入れ、マイクロマニピュレータを用いて塩化銀銀(Ag/AgCl)を用いた。
  2. 作動電極と参照電極をポテンショスタットとヘッドステージに接続します。
  3. UNC HDCV ソフトウェアを開きます。ソフトウェアの設定を変更して波形を適用します。コンピュータの設定に次の波形を入力します: 0.5 mM HAuCl4を含む 0.1 M KCl ソリューションで 0.2 V から -1.0 V まで、10 サイクルのスキャン レートで 50 mV/s のスキャン速度でスキャンします。緑色の矢印を押して波形を適用します。次に、開始ボタンを押して測定値の記録を開始します。

4. 走査型電子顕微鏡

注:画像裸と金ナノ粒子は、走査電子顕微鏡装置(SEM)を使用して炭素繊維マイクロ電極を改変しました。サンプルを黒い導電性テープにロードし、製造元の指示に従います。

  1. 楽器の電源を入れ
    1. キーを START およびリリースに切り取します。
    2. InTouchScope ソフトウェアをダブルクリックして開きます。
    3. キーを放します。それは単独でIシンボルに着陸する必要があります。
    4. EVAC ボタンが点滅しなくなるまで待ちます。
    5. EVACボタンが点滅しなくなったら、VENTボタンを押します。
    6. VENT ボタンが点滅しなくなるまで待ちます。
    7. 作業距離(WD)が20 mm ~ 30 mm であることを確認します。
    8. 待っている間に、サンプルを準備します。
  2. スキャン
    1. VENTボタンが点滅を停止したら、サンプルを計測器にロードします。
    2. サンプルをロードする際に、サンプルホルダーの曲面部分が計測器の方を向いていることを確認します。
    3. サンプルが読み込まれたら、EVAC ボタンを押します。
    4. 作業距離を 10 mm に調整します。
    5. EVAC ボタンが点滅しなくなったら、コンピュータの電源を入れます。
    6. デスクトップ上にあるインタッチスコープソフトウェアをクリックします。2つのインタッチスコープソフトウェアがあり、緑と黄色の円のないものをクリックしてください。
    7. ソフトウェアが開いたら、オブザーブ(画面右上)をクリックしてビームをオンにします。観察をクリックする前に、EVACボタンが点滅しなくなったことを確認します。
    8. サンプルの分析を開始します。
    9. 電圧、動作距離(WD)、プローブ電流(PC)の設定が許容可能であることを確認します。
    10. ズームアウト(約50X)を高い設定にし、低い設定で拡大します。
    11. 作業距離を 10 mm に設定します。
    12. サンプルの写真を撮る前に、画像が目的のコピー先フォルダに保存されていることを確認してください。
    13. 目的のフォルダを選択するには、設定(画面の左上)をクリックします。
    14. フラッシュ ドライブを使用してコンピュータから画像をエクスポートします。
  3. オフ
    1. ビームをオフにするには、[観察]をクリックします。
    2. VENT ボタンを押し、点滅が停止するのを待ちます。
    3. VENT ボタンが点滅するのを待っている間、作業距離を 20 mm - 30 mm に戻します。
    4. VENT ボタンが点滅しなくなったら、サンプルを計測器からアンロードします。
    5. EVAC ボタンを押し、点滅が停止するのを待ちます。
    6. EVAC ボタンが点滅しなくなったら、ソフトウェアから終了し、コンピュータをシャットダウンします。
    7. O記号のキーをオンにして、楽器を完全にオフにします。

5. 高速スキャン周期的なボルタンメトリーテスト

  1. 炭素繊維マイクロ電極をポテンショスタットとヘッドステージにAg/AgClリファレンス電極と接続します。
  2. マイクロマニピュレータを使用して、X、Y、Z測定ノブを手動で調整することにより、炭素繊維マイクロ電極をフローセルにしっかりと下げる。
  3. DI水中(131.5 mM NaCl、3.25 mM KCl、1.2mM CaCl 2、1.25 mM NaH2PO4、1.2mM MgCl2、および2.0 mM Na2SO4)で緩衝液を調べて7.4に調整します。
  4. フローセルをリン酸緩衝生理食べ物(PBS)バッファーで埋めます(pH = 7.4)。
  5. 充填された60 mLバッファーシリンジを使用して、約1 mL/分でフローセルにPBSバッファを注入します。
  6. 電極をフローセルに入れ、緑色のボタンを押して波形を適用します。オシロスコープを観察し、電極を切断するか、ゲインを調整して過負荷を防ぎます。各電極の実行間の平衡化の約10分を可能にする。
  7. 既定の波形をドーパミン波形に設定します。10 Hz および 400 V/s で 0.4 V から 1.3 V までスキャンします。
  8. 10 mMドーパミン、セロトニン、ノルエピネフリン、および過塩素酸の他のストック溶液を調調します。ピペットを用いてPBSバッファーの10mLにドーパミンストック溶液の1μMをピペッティングすることにより、バッファー中の1μMの最終濃度に神経化学物質を希釈する。
  9. 測定を開始するには、録音ボタンを押します。10 s の後, フローセルまたは神経伝達物質の任意の他の濃度に 1 μM ドーパミンの 0.2 mL を注入します。.それに応じて、濃度、スキャンレート、波形(保持電位またはスイッチング電位)を調整します。合計実行時間を 30 s に設定します。
  10. HDCV解析ソフトウェアを使用して実行を分析します。必要に応じてパラメータを変更します。
  11. 実験が完了したら、3 mLの水を注入してフローセルをきれいにし、フローセルのバッファーと注入ポートにそれぞれ3回空気を注入します。
  12. 波形と計器をオフにします。

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Representative Results

図1では、FSCV試験を用いてインビトロ中の神経伝達物質の濃度を測定する回路図を示す。図1は、適用されたドーパミン波形を表示する。三角形の波形は、400 V/s で -0.4 V から 1.3 V までスキャンします。図の左の2番目の部分では、ドーパミンオルソキノン(DOQ)へのドーパミンの酸化を表示し、電極の表面に分析体の表面から2つの電子伝達プロセスが起こる。最後に、現在の時間プロットと時間プロットがカラープロットでオーバーレイされます。現在の時間プロットと時間プロットは、ドーパミン酸化の表現です。ドーパミン酸化がない場合は平坦であり、ドーパミンがドーパミンオルソキノンに酸化され、分析剤の吸着物としてドーパミンに還元され、その後、電極の表面からdesorbsが低下すると、垂直に上昇します。カラープロットは電流の3次元プロットです。黄色の電流は背景電流(ゼロに近い)であり、緑色のプロットは正の酸化電流(ドーパミンオルソキノンへのドーパミン酸化)であり、青色プロットは負の還元電流(ドーパミンオルソキノンへのドーパミン減少)である。

SEMは、裸および修飾炭素電極の表面特徴を画像化するために利用された。図2では、3種類の電極材料の中で表面特徴に特有の違いがあることがわかります。図2aに、裸炭素繊維マイクロ電極を示す。繊維は外面に沿って円柱の尾根が付いているおよそ7 μmの直径である。図2bは、炭素繊維の表面から突出した金の大きな鋭い隆起を有する約20分間、炭素繊維の表面に電気堆積した金ナノ粒子を示す。金の存在はEDS/EDX測定でさらに検証された。その後、電着時間を5分に短縮し、図2cに示すように薄い均一なコーティングゴールドを観察しました。

感度と電子伝達の比較

図3aは、感度と電子伝達の比較を示す。重複する環状ボルタングラムと同様に、金変性炭素繊維マイクロ電極は、ピーク時酸化電流(図3b)と高速電子伝達動態(ΔEP)を有する。有意性は、ペアでないt検定(P = .004および.0016)で測定した。誤差余数は平均の標準誤差です。

安定 性

ベア(図4a)及び金ナノ粒子修飾(図4b)を4時間のフローセルに配置し、4時間毎に1μMドーパミンの検出を行った。両方の電極は、ドーパミンに関して安定した応答を持っていた.ドーパミンに対する安定した応答(水酸化なし)は、生体組織で測定を行う上で非常に重要です。誤差余数は平均の標準誤差です。

スキャンレート

スキャン速度は100V/sから1,000 V/sに変化した。ベア(図5a)と金ナノ粒子(図5b)の両方がドーパミン検出に対して線形応答を示し、したがって、改変された裸と金ナノ粒子の表面への吸着制御を示す電極。誤差余数は平均の標準誤差です。

濃度

濃度は、ベア(図6a)および金ナノ粒子修飾(図6b)炭素繊維マイクロ電極に対して100nMから100μMドーパミンに変化させた。線形範囲は100 nMから10 μMであった。10 μMの後、炭素繊維マイクロ電極の表面でドーパミンが過飽和であることを示す無症曲線を観察します。ドーパミン濃度に対するドーパミンのピーク酸化電流に対する線形応答は、電極の表面への吸着制御を示す。脳内のドーパミンの生理的に関連する濃度は、この範囲内にあり、脳領域間で変化します.

Figure 1
図 1.ドーパミン酸化の概略図.ドーパミン酸化炭素繊維マイクロ電極のオーバーレイ。ドーパミンがドーパミンオルソキノンに酸化され、三角形のドーパミン波形が適用されるにつれてドーパミンに戻るように電荷伝達が表面から示されます(-0.4 V〜1.3 V 400 V/s)。現在の時間と色のプロットは、ドーパミン酸化(緑)およびドーパミン減少(青)を示して示されています。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

Figure 2
図 2.(a)ベアカーボン繊維マイクロ電極のSEM画像は、(b)金ナノ粒子修飾炭素繊維マイクロ電極を20分の電極堆積時間で、(c)金ナノ粒子改質マイクロ電極を5分の電極堆積時間で修飾した。これは金ナノ粒子コーティングの大きさおよび厚さが電着時間によって制御することができるという原理の証明の結果を提供する。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

Figure 3
図 3.裸と金ナノ粒子修飾電極の感度比較.(A) 裸と金ナノ粒子の周期的なボルタングラムのオーバーレイは、マイクロ電極を改変した。(B)ベアと金ナノ粒子修飾マイクロ電極のピーク酸化電流の差を示す棒グラフ。(C)ベアと金ナノ粒子修飾マイクロ電極とのΔEPの差を示す棒グラフ。誤差余数は平均の標準誤差です。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

Figure 4
図 4.安定性実験.(A)ベア及び(B)金ナノ粒子修飾マイクロ電極を、合計4時間のフローセルに入れた。1 μMドーパミンに対する感度を4時間にわたって測定した。両方とも4時間にわたってドーパミンに均一な応答を持っていた. 誤差バーは平均の標準的な誤差である.この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

Figure 5
図 5.スキャンレート実験.(A) ベアおよび(B)金ナノ粒子修飾マイクロ電極をフローセルに入れ、スキャン速度を100V/sから1,000V/sに変化させた。裸と金ナノ粒子修飾マイクロ電極の両方がスキャン速度に対して線形応答を有し、従って裸および金ナノ粒子修飾炭素繊維マイクロ電極の表面にドーパミンの吸着制御を示した。誤差余数は平均の標準誤差です。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

Figure 6
図 6.濃度実験.(A)ベア及び(B)金ナノ粒子修飾マイクロ電極を、ドーパミン100nM~100μMの様々な濃度に曝露した。裸と金ナノ粒子の両方のマイクロ電極は、最大10μMのドーパミンに対して線形応答を有し、したがって電極の表面への吸着制御を示した。10μMより高い濃度では、すべての吸着部位を占有し、より多くの拡散制御をもたらすことによって、電極の表面にドーパミン飽和を示す無症曲線を観察します。この図のより大きなバージョンを表示するには、ここをクリックしてください。

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Discussion

本研究では,高速スキャン環状ボルタンメトリーを用いてドーパミンなどの神経伝達物質を検出するための金ナノ粒子修飾炭素繊維マイクロ電極を構築する新しい方法を示す.この方法は、生体分子検出の感度を高めるための効率的で、緑色で比較的安価なアプローチです。炭素繊維の表面に堆積した金の厚さは、電着の時間と電着溶液中に存在する金の濃度によって制御することができる。金改質炭素繊維マイクロ電極は、電子移動運動性の高速化に加えて、裸電極よりも有意に高い電気活性表面積を有することが示された。また、裸の未改変電極材料よりも高い感度と検出限界を持っていました。さらに、電極は、少なくとも4時間のフローセルで試験した場合、ドーパミン検出に向けた安定性を示した。電極の表面への吸着制御を示す金改変炭素繊維電極のスキャン速度と濃度の両方に関してドーパミン検出のためのピーク酸化電流に対して線形応答があった。

プロトコルの重要なステップは、垂直毛細管プーラーを用いた炭素繊維マイクロ電極の引っ張りおよびエポキシを用いたガラス毛細血管と炭素繊維との間接接着を達成することを含む。さらに、炭素繊維の表面に金の電着は、電極の表面に金の薄い均一コーティングを有することと、余分な金を表面に過剰に堆積させる間のバランスを維持するために非常に困難である。ノイズや信号過負荷による神経伝達物質の検出を妨げる電極。この方法の変更およびトラブルシューティングには、時間と濃度の両方に関する電着の方法の最適化が含まれる。金の異なるソース(AuCl 3、HAuCl4、および他の金水和物)は、これらの実験を実行するために利用されるべきです。この方法の限界には、過剰堆積によるポテンショスタットの信号を電ポジット金が過負荷化する可能性が含まれる。さらに、金属電極材料として、金改変電極は、より高い電位(1.45V以上)にスキャンすると水を酸化する可能性があり、これは、アナリテ信号を妨げる可能性があります。

この方法は、金ナノ粒子修飾マイクロ電極が神経伝達物質の検出を著しく強化し、FSCVを用いて神経伝達物質検出について十分に検討されていないとして、この分野における顕著な進歩である。CMFのための電気化学信号を増強する別の方法は、カーボンナノチューブ24、25、26による修飾を通じてである。カーボンナノチューブ懸濁液に電極を浸漬すると、信号が増加することがよくあります。しかし、堆積したカーボンナノチューブの層が不均一であるにつれてノイズも増加する。金ナノ粒子堆積は、強化された生体分子センサを作成するための迅速で再現性があり、効果的な方法です。今後の方法開発には、炭素繊維マイクロ電極の金ナノ粒子修飾の最適化が含まれる。さらに、他の神経化学物質(ノルエピネフリン、セロトニン、ヒスタミン、アデノシン、その他)の検出の研究と最適化も行われます。最後に、これらの強化された金改変マイクロ電極は、げっ歯類またはフルーツフライモデルにおける神経伝達物質の生体内測定を行うために使用されます。金ナノ粒子修飾によるドーパミン検出の強化は、パーキンソン病、薬物乱用、および他の障害を研究するなど、神経科学における多くの可能な応用および研究を可能にする。

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Disclosures

著者は何も開示していない。

Acknowledgments

アメリカン大学、教員研究支援助成金、NASA DCスペースグラント、NSF-MRI#1625977に感謝します。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dopamine hydrochloride Sigma Aldrich H8502-5G
Phosphate Buffered Saline Sigma Aldrich P5493-1L
Pine WaveNeuro Potentiostat Pine Instruments NEC-WN-BASIC This orders comes in bulk with all other accessories such as headstages, adapters, cords, and other electronics
Pine Flow Cell and Micromanipulator Pine Instruments NEC-FLOW-1 This is also another bulk order including the micromanipulator, flow cell, knobs, tubing, connectors, etc.
Glass-Capillary A-M Systems 602500
T-650 Carbon Fiber Goodfellow C 005711
Epon 828 Epoxy Miller-Stephenson EPON 828 TDS
Diethelynetriamine Sigma Aldrich D93856-5ML
Gold (III) chloride Sigma Aldrich 254169 Comes as either HAuCl4 or AuCl3
pH meter Fisher S90528
Farraday Cage AMETEK TMC 81-334-03
Syringe Pump NEW ERA PUMP NE-1000
Eppendorf Pipettes and Tips Eppendorf 2231000222 This is also a bulk order containing multiple pipettes and tips
10 -1,000 mL beakers VWR 10536-390
Carbon fiber Goodfellow C 005711
SEM JEOL JSM-IT100

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References

  1. Zestos, A. G., Nguyen, M. D., Poe, B. L., Jacobs, C. B., Venton, B. J. Epoxy insulated carbon fiber and carbon nanotube fiber microelectrodes. Sensors and Actuators B: Chemical. 182, 652-658 (2013).
  2. Bucher, E. S., Wightman, R. M. Electrochemical analysis of neurotransmitters. Annual review of analytical chemistry. 8, 239-261 (2015).
  3. Zestos, A. G., Venton, B. J. Communication—Carbon Nanotube Fiber Microelectrodes for High Temporal Measurements of Dopamine. Journal of The Electrochemical Society. 165, G3071-G3073 (2018).
  4. Park, J., Takmakov, P., Wightman, R. M. In vivo comparison of norepinephrine and dopamine release in rat brain by simultaneous measurements with fast-scan cyclic voltammetry. Journal of neurochemistry. 119, 932-944 (2011).
  5. Abdalla, A., et al. In Vivo Ambient Serotonin Measurements at Carbon-Fiber Microelectrodes. Analytical chemistry. 89, 9703-9711 (2017).
  6. Ganesana, M., Venton, B. J. Early changes in transient adenosine during cerebral ischemia and reperfusion injury. PloS one. 13, e0196932 (2018).
  7. Denno, M. E., Privman, E., Borman, R. P., Wolin, D. C., Venton, B. J. Quantification of histamine and carcinine in Drosophila melanogaster tissues. ACS chemical neuroscience. 7, 407-414 (2016).
  8. Sanford, A. L., et al. Voltammetric detection of hydrogen peroxide at carbon fiber microelectrodes. Analytical chemistry. 82, 5205-5210 (2010).
  9. Heien, M. L., Johnson, M. A., Wightman, R. M. Resolving neurotransmitters detected by fast-scan cyclic voltammetry. Analytical chemistry. 76, 5697-5704 (2004).
  10. Raju, D., et al. Polymer modified carbon fiber-microelectrodes and waveform modifications enhance neurotransmitter metabolite detection. Analytical Methods. 11, 1620-1630 (2019).
  11. Jacobs, C. B., Ivanov, I. N., Nguyen, M. D., Zestos, A. G., Venton, B. J. High temporal resolution measurements of dopamine with carbon nanotube yarn microelectrodes. Analytical chemistry. 86, 5721-5727 (2014).
  12. Zestos, A. G., Yang, C., Jacobs, C. B., Hensley, D., Venton, B. J. Carbon nanospikes grown on metal wires as microelectrode sensors for dopamine. Analyst. 140, 7283-7292 (2015).
  13. Zestos, A. G. Carbon Nanoelectrodes for the Electrochemical Detection of Neurotransmitters. International Journal of Electrochemistry. , (2018).
  14. Kim, J. H., et al. Dopamine neurons derived from embryonic stem cells function in an animal model of Parkinson's disease. Nature. 418, 50 (2002).
  15. Zestos, A. G., et al. Ruboxistaurin Reduces Cocaine-Stimulated Increases in Extracellular Dopamine by Modifying Dopamine-Autoreceptor Activity. ACS Chemical Neuroscience. 10, 1960-1969 (2019).
  16. Zestos, A. G., Kennedy, R. T. Microdialysis Coupled with LC-MS/MS for In Vivo Neurochemical Monitoring. The AAPS Journal. 19, 1284-1293 (2017).
  17. Carpenter, C., et al. Direct and systemic administration of a CNS-permeant tamoxifen analog reduces amphetamine-induced dopamine release and reinforcing effects. Neuropsychopharmacology. 42, 1940 (2017).
  18. Zestos, A. G., Venton, B. J. Carbon Nanotube-Based Microelectrodes for Enhanced Neurochemical Detection. ECS Transactions. 80, 1497-1509 (2017).
  19. Zachek, M. K., Hermans, A., Wightman, R. M., McCarty, G. S. Electrochemical Dopamine Detection: Comparing Gold and Carbon Fiber Microelectrodes using Background Subtracted Fast Scan Cyclic Voltammetry. J Electroanal Chem (Lausanne Switz). 614, 113-120 (2008).
  20. Li, J., Xie, H., Chen, L. A sensitive hydrazine electrochemical sensor based on electrodeposition of gold nanoparticles on choline film modified glassy carbon electrode. Sensors and Actuators B: Chemical. 153, 239-245 (2011).
  21. Hartings, M. R., Fox, D. M., Miller, A. E., Muratore, K. E. A hybrid integrated laboratory and inquiry-based research experience: replacing traditional laboratory instruction with a sustainable student-led research project. Journal of Chemical Education. 92, 1016-1023 (2015).
  22. Hart, C., et al. Protein-templated gold nanoparticle synthesis: protein organization, controlled gold sequestration, and unexpected reaction products. Dalton Transactions. 46, 16465-16473 (2017).
  23. Hartings, M. R., et al. Concurrent zero-dimensional and one-dimensional biomineralization of gold from a solution of Au3+ and bovine serum albumin. Science and technology of advanced materials. 14, 065004 (2013).
  24. Xiao, N., Venton, B. J. Rapid, sensitive detection of neurotransmitters at microelectrodes modified with self-assembled SWCNT forests. Analytical chemistry. 84, 7816-7822 (2012).
  25. Zestos, A. G., Jacobs, C. B., Trikantzopoulos, E., Ross, A. E., Venton, B. J. Polyethylenimine Carbon Nanotube Fiber Electrodes for Enhanced Detection of Neurotransmitters. Analytical chemistry. 86, 8568-8575 (2014).
  26. Yang, C., et al. Carbon nanotubes grown on metal microelectrodes for the detection of dopamine. Analytical chemistry. 88, 645-652 (2015).

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化学、問題147、高速スキャン環状ボルタンメトリー、FSCV、炭素繊維微小電極、ドーパミン、神経伝達物質、金ナノ粒子
強化された神経化学的検出のための金ナノ粒子修飾炭素繊維マイクロ電極
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Mohanaraj, S., Wonnenberg, P.,More

Mohanaraj, S., Wonnenberg, P., Cohen, B., Zhao, H., Hartings, M. R., Zou, S., Fox, D. M., Zestos, A. G. Gold Nanoparticle Modified Carbon Fiber Microelectrodes for Enhanced Neurochemical Detection. J. Vis. Exp. (147), e59552, doi:10.3791/59552 (2019).

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