Summary

Outils faits maison simples pour manipuler les mouches des fruits—Drosophila melanogaster

Published: July 24, 2019
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Summary

Décrit ici est l’utilisation de plusieurs outils faits maison pour transférer, refroidir et tuer d’adultes Drosophila, ainsi que pour nettoyer les flacons de culture du verre et de recueillir des œufs. Ces outils sont faciles à fabriquer et sont plutôt efficaces dans la manipulation de La Drosophila.

Abstract

La mouche des fruits, Drosophila melanogaster, est largement utilisé à la fois dans la recherche biologique et l’éducation en biologie. La manipulation des mouches adultes est courante, mais difficile dans la pratique, car les mouches adultes volent. Démontré ici est de savoir comment faire quelques outils simples et rentables pour répondre à des questions difficiles dans le traitement de Drosophila. Des trous dans les bouchons de mousse sont faits et des bouts de pipette ou des entonnoirs sont insérés dans les trous. Les mouches se déplacent alors seulement dans une direction dans l’assemblage de pointe de pipette/funnel, permettant le contrôle efficace du transfert de Drosophila adulte dans ou hors d’une fiole. Les protocoles existants ont été modifiés pour les mouches d’anesthésie fraîche en se refroidissant dans la glace concassée et en les transférant sur une surface froide et dure. Le banquise est recouvert d’un morceau de gaze médicale qui maintient les mouches immobilisées de l’eau condensée lorsqu’elles sont examinées au microscope stéréomicroscope. Les mouches sont finalement euthanasiées pour le comptage et le tri ou jetées par micro-ondes. Une cage en forme de bouteille a également été développée pour la collecte des œufs, ainsi qu’un dispositif d’économie de main-d’œuvre et un protocole d’accompagnement pour le nettoyage des flacons de culture du verre.

Introduction

La mouche des fruits, Drosophila melanogaster, est un organisme modèle largement utilisé dans la recherche biologique et l’éducation en biologie pour étudier un large éventail de sujets1,2. Les problèmes de base de la manipulation de Drosophila sont le transfert des adultes de flacon à flacon et l’immobilisation des mouches afin qu’ils soient plus faciles à manipuler, comme tous les adultes (sauf pour certains mutants3,4) peuvent voler.

Traditionnellement, un chercheur transfère les mouches d’une fiole à l’autre en tenant deux flacons bouche-à-bouche, en tapant sur les mouches vers le bas ou en permettant aux mouches de voler vers le haut dans une autre fiole, puis en séparant et en rebranchant les deux flacons4. Évidemment, cela exige que l’ouverture de deux flacons avec le même diamètre, et il est difficile de contrôler la quantité de mouches transférées. Pendant ce temps, cela nécessite des mains rapides pour faire le travail, et échapper aux mouches errantes peut entraîner des problèmes pour le laboratoire ou la salle de classe. L’ajout de mouches extra vierges ou de mouches mâles à une croix déjà préparée est une autre tâche de routine dans les expériences Drosophila. Traditionnellement, les mouches doivent être immobilisées dans le flacon de croix avant l’ajout de mouches supplémentaires.

Drosophila adulte sont systématiquement anesthésiés par l’éther, CO2, ou de refroidissement5. Par rapport à l’exposition à l’éther et au CO 2, le refroidissement est l’agent le plus économique pour immobiliser la drosophile adulte et le moins nocif pour les mouches et les chercheurs (surtout les jeunes étudiants)6,7. Cependant, l’eau qui se condense continuellement sur la surface froide ou la chambre mouille les mouches. Il est difficile de déterminer les phénotypes des mouches humides, et ils peuvent facilement être endommagés lors de la manipulation8,9. Cela a empêché la méthode de refroidissement de devenir plus largement acceptée.

Les outils pour le transfert de mouche et une méthode pour le refroidissement de mouche ont été précédemment décrits10. Ici, une technique modifiée d’anesthésie de refroidissement est rapportée qui est sûre, fiable, et faisable pour des expériences de Drosophila. Également décrit sa part dans ce document 1) les méthodes pour tuer les adultes pour le comptage, le tri ou le rejet, 2) les dispositifs et les protocoles d’économie de main-d’œuvre pour le nettoyage des flacons de culture du verre, et 3) une cage simple pour la collecte des œufs. Les outils faciles à concevoir et rentables décrits ici peuvent être utilisés pour répondre aux problèmes difficiles de la manipulation des mouches, et ces méthodes ont été testées et se sont avérées robustes, fiables et faciles à manipuler pour les chercheurs expérimentés et débutants.

Protocol

1. Préparation d’outils et d’accessoires Arrêts tip/funnel Obtenir deux bouchons d’éponge (le diamètre des bouchons doit être légèrement plus grand que le diamètre interne des flacons utilisés pour transférer les mouches). Faire un trou dans les centres des bouchons d’éponge avec un fer à souder électrique chauffé. Obtenir deux pointes de pipette de 1 ml, couper une en deux transversalement avec un couteau pointu, et jeter l’extrémité pointue. Ensuite, coupe…

Representative Results

Les T- et F-stoppers ont été développés comme un ensemble d’outils simples qui peuvent être adaptés et utilisés dans toutes les activités de transfert de mouche. Transférer les mouches d’une ancienne culture à plusieurs cultures fraîches implique d’enlever les bouchons des flacons frais, de les remplacer par des bouchons F, puis de tapoter les mouches dans l’ancienne fiole, de retirer rapidement sa prise et de la remplacer par un bouchon En T. Si l’ancien aliment est compact, a…

Discussion

Certains outils faits maison pour la manipulation des activités de base impliquées dans l’élevage et l’expérimentation d’origine d’origine d’origine d’origine d’origine sont décrits dans cet article. Ces outils sont simples mais plutôt efficaces. Pratiquement, n’importe quel laboratoire peut fabriquer ces outils facilement, et un laboratoire de recherche ou un laboratoire d’enseignement n’a pas besoin de trouver une alternative prête à l’emploi qui n’est peut-être pas disponible localement.

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Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

aucun

Materials

a pair of pliers
cordless drill driver max speed: 500 rpm
electric soldering iron
file
funnel diameter of disk<60mm
ice box
insect pins
infrared thermometer HCIYET HT-830
long cuff rubber gloves
mechanical pencils
medical gauze
microcentrifuge tube 100 ul
microwave oven
Parafilm
peri dish internal diameter 60 mm
pipette tips 1 ml
plastic film
plastic peri dish Φ36 mm used to cover the empty vial
point tweezers
protective work gloves
re-freezable hard icepacks 26.5×14.5×2.5 cm or larger
rubber air blower
snap cutter
soft drink bottle 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm
sponge stopper
stainless steel sponges
tube brush
vial Φ34 mm × 90 mm

References

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Cite This Article
Yang, D. Simple Homemade Tools to Handle Fruit Flies—Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (149), e59613, doi:10.3791/59613 (2019).

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