Semplici strumenti fatti in casa per gestire le mosche della frutta -Drosophila melanogaster
Summary
Descritto qui è l’uso di diversi strumenti fatti in casa per trasferire, raffreddare e uccidere la Drosophilaadulta , così come per pulire fiale di cultura del vetro e raccogliere le uova. Questi strumenti sono facili da realizzare e sono piuttosto efficienti nella gestione della Drosophila.
Abstract
La mosca della frutta, La Drosophila melanogaster, è ampiamente utilizzata sia nella ricerca biologica che nell’educazione biologica. La manipolazione delle mosche adulte è comune ma difficile nella pratica, poiché le mosche adulte volano. Dimostrata qui è come fare alcuni strumenti semplici ed economici per affrontare problemi difficili nella gestione della Drosophila. I fori nei tappi di schiuma sono fatti e punte pipette o imbuti vengono inseriti nei fori. Le mosche si spostano quindi solo in una direzione nell’assemblaggio della punta/imbuto della pipetta, consentendo un controllo efficiente del trasferimento di Drosophila adulti dentro o fuori da una fiala. I protocolli esistenti sono stati modificati per raffreddare le mosche raffreddando raffreddandoili raffreddando nel ghiaccio tritato e trasferendole su una superficie fredda e dura del gelato. Il gelato è coperto da un pezzo di garza medica che mantiene le mosche immobilizzate dall’acqua condensata quando esaminate sotto uno stereoscopio. Le mosche vengono infine eutanasia per il conteggio e lo smistamento o scartate mediante microonde. Una gabbia a forma di bottiglia è stata sviluppata anche per la raccolta delle uova, nonché un dispositivo di risparmio di manodopera e un protocollo di accompagnamento per la pulizia delle fiale di coltura del vetro.
Introduction
La mosca della frutta, La Drosophila melanogaster, è un organismo modello ampiamente utilizzato nella ricerca biologica e nell’educazione alla biologia per studiare una vasta gamma di argomenti1,2. I problemi di base di gestione della Drosophila sono il trasferimento di adulti dalla fiala alla fiala e l’immobilizzazione delle mosche in modo che siano più facili da gestire, come tutti gli adulti (ad eccezione di alcuni mutanti3,4) possono volare.
Convenzionalmente, un ricercatore trasferisce le mosche da una fiala all’altra tenendo due fiale bocca a bocca, toccando le mosche verso il basso o permettendo alle mosche di volare su un’altra fiala, quindi separando e ricollegando entrambe le fiale4. Ovviamente, questo richiede che l’apertura di due fiale con lo stesso diametro, ed è difficile controllare la quantità di mosche trasferite. Nel frattempo, questo richiede mani veloci per portare a termine il lavoro, e fuggire dalle mosche vaganti può causare problemi per il laboratorio o la classe. L’aggiunta di mosche extra virginiche o mosche maschili a una croce già preparata è un altro compito di routine negli esperimenti di Drosophila. Convenzionalmente, le mosche devono essere immobilizzate nella fiala trasversale prima dell’aggiunta di mosche extra.
La Drosophila adulta è regolarmente anestesizzata da etere, CO2o refrigerante5. Rispetto all’esposizione all’etere e al CO 2, l’agghiacciamento è l’agente più conveniente per immobilizzare la Drosophila adulta e la meno dannosa sia per le mosche che per i ricercatori (soprattutto i giovani studenti)6,7. Tuttavia, l’acqua che si condensa continuamente sulla superficie fredda o sulla camera bagnata le mosche. È difficile determinare i fenotipi delle mosche bagnate e possono facilmente danneggiarsi durante la manipolazione8,9. Questo ha mantenuto il metodo di raffreddamento di diventare più ampiamente accettato.
Strumenti per il trasferimento di mosca e un metodo per il raffreddamento a mosca sono stati descritti in precedenza10. Qui, viene riportata una tecnica di anestesia refrigerante modificata che è sicura, affidabile e fattibile per gli esperimenti di Drosophila. In questo documento sono descritti anche 1) metodi per uccidere gli adulti per il conteggio, lo smistamento o lo scarto, 2) dispositivi e protocolli per il risparmio di lavoro per la pulizia delle fiale di coltura del vetro e 3) una semplice gabbia per la raccolta delle uova. Gli strumenti facilmente progettati ed economici descritti qui possono essere utilizzati per affrontare i difficili problemi della movimentazione del volo, e questi metodi sono stati testati e si sono dimostrati robusti, affidabili e facili da gestire per ricercatori esperti e principianti.
Protocol
Representative Results
Discussion
Alcuni strumenti fatti in casa per la gestione delle attività di base coinvolte nell’allevamento e nella sperimentazione della Drosophila sono descritti in questo documento. Questi strumenti sono semplici ma piuttosto efficaci. Praticamente, qualsiasi laboratorio può fare questi strumenti con facilità, e una ricerca o un laboratorio didattico non ha bisogno di trovare un’alternativa già pronta che forse non è disponibile a livello locale.
Il trasferimento del volo è la pratica p…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
nessuno
Materials
| a pair of pliers | |||
| cordless drill driver | max speed: 500 rpm | ||
| electric soldering iron | |||
| file | |||
| funnel | diameter of disk<60mm | ||
| ice box | |||
| insect pins | |||
| infrared thermometer | HCIYET HT-830 | ||
| long cuff rubber gloves | |||
| mechanical pencils | |||
| medical gauze | |||
| microcentrifuge tube | 100 ul | ||
| microwave oven | |||
| Parafilm | |||
| peri dish | internal diameter 60 mm | ||
| pipette tips | 1 ml | ||
| plastic film | |||
| plastic peri dish | Φ36 mm used to cover the empty vial | ||
| point tweezers | |||
| protective work gloves | |||
| re-freezable hard icepacks | 26.5×14.5×2.5 cm or larger | ||
| rubber air blower | |||
| snap cutter | |||
| soft drink bottle | 500 ml, internal diameter c.a. 65 mm | ||
| sponge stopper | |||
| stainless steel sponges | |||
| tube brush | |||
| vial | Φ34 mm × 90 mm |
References
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