Summary
Vi beskriver i detaljer en klinisk relevant kolorektal cancer levermetastaser (CRLM) tumor model og indflydelsen af leveren iskæmi reperfusion (i/R) i tumorvækst og metastase. Denne model kan bidrage til bedre at forstå de mekanismer, underliggende kirurgi-induceret fremme af leveren metastatisk vækst.
Abstract
Lever iskæmi og reperfusion (I/R) skade, en fælles klinisk udfordring, er fortsat en uundgåelig patofysiologiske proces, der har vist sig at inducere flere væv og organskader. På trods af nylige fremskridt og terapeutiske tilgange er den generelle sygelighed forblevet utilfredsstillende, især hos patienter med underliggende parentchymale abnormaliteter. I forbindelse med aggressiv kræft vækst og metastase er kirurgisk I/R mistænkt for at være arrangøren, der regulerer tumor gentagelse. Denne artikel har til formål at beskrive en klinisk relevant murine model af lever I/R og kolorektal levermetastaser. I den forbindelse bestræber vi os på at hjælpe andre efterforskere med at etablere og perfektionere denne model for deres rutinemæssige forskningspraksis for bedre at forstå virkningerne af lever I/R på fremme af levermetastaser.
Introduction
Leveren er en af de mest almindeligt forekommende steder for udvikling af metastatisk sygdom1. Dødelighed er næsten uvægerligt tilskrives komplikationer forbundet med tumorvækst i leveren. Hos patienter med metastaserende faste tumorer i leveren, kirurgi er fortsat en afgørende intervention for sygdomskontrol og en mulig helbredende tilgang. Men langt størstedelen af patienterne i sidste ende til stede med tilbagevendende sygdom, overvejende i leveren2,3. Under lever kirurgi er intraoperativ blødning almindelig, hvilket ofte nødvendiggør blodtransfusion og forskellige tekniske tilgange til kontrol af blødning, herunder vaskulære fastspændings metoder. Men, sådanne foranstaltninger forårsager hepatisk iskæmi/reperfusion (I/R) til leveren væv. De negative virkninger af I/R på hepatocellulær funktion er veldokumenterede. Leveren I/R fornærmelse antænde inflammatoriske kaskader under genoprettelsen af blodgennemstrømningen via inflammatoriske veje4. Ikke alene lever I/R skade bidrager til leversvigt, men nuværende beviser viser også, at I/R skade stimulerer tumor celle adhæsion, og fremmer forekomsten af metastaser dannelse og væksten af eksisterende micrometastatic disease5. Vi har tidligere rapporteret, at kirurgisk stress inducerer aktivering af immunceller, som ikke kun hjælper i væksten af den primære tumor, men også letter metastaser ved at fange kræftceller i omløb6.
Her beskriver vi i detaljer en teknik til at etablere en levermetastaser muse tumor model. I denne model, vi også præsentere en metode til at inducere hepatisk iskæmi reperfusion skade, der fungerer som en surrogat til kirurgisk stress nuværende klinisk under hepatectomies. De kombinerede metoder til kræft injektion og hepatisk i/R kan med held fortolke udviklingen af CRLM hos patienter, der har gennemgået primær tumor resektion.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle animalske protokoller er godkendt af den institutionelle dyrepleje og brug udvalg og overholdt de nationale Institutes of Health (NIH) retningslinjer. Instrumenter, der anvendes til enhver kirurgisk procedure, er grundigt steriliseret.
1. indledende forberedelse
- Før injektion kræftceller i musen milt, autoklave og sterilisere alle instrumenter, der skal anvendes under proceduren.
- Steriliser og/eller autoklave en varmepude, kirurgiske handsker, gaze, par saks, små klemmer, beholder dilator, kirurgiske pincet, og en nål holder.
- Forbered postoperative analgetika (0,1 mg/kg buprenorphin), der skal administreres efter splenektomi og hver 12 h i 2 dage.
2. cellekultur
- Sørg for, at kræftcellerne er fri for Mycoplasma-kontaminering ved hjælp af et Mycoplasma ELISA-kit.
- Forbered en 500 ml opløsning af dulbecco's modificerede Eagle medium (DMEM) dyrkning medium ved 4 °c for kulturen af murine kolorektal cancerceller (MC38). Dyrkningsmediet bør suppleres med 10% varme inaktiveret føtal bovint serum (FBS), 100 e/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin, 15 mM HEPES og 200 mM L-glutamin.
- Kultur cancerceller i en DNAse-og Rnasefri kolbe (75 cm2). Inkubér cellekulturen i en celle-/vævs befuret kuvøse, der indeholder 5% CO2. Vedligehold temperatur ved 37 °C.
- Når de prolifererende celler nå 90-100% konfluency, aspirere de gamle medier, vaske celler med 1x fosfat-bufferet saltvand (PBS) og derefter behandle dem med 1x trypsin (0,25%) til at frigøre celler fra kolben.
- Saml cellerne i et 15 mL konisk rør og centrifugeres i 5 minutter ved 700 x g.
- Aspirer mediet og vask med 1x PBS to gange ved gentagen centrifugering.
- Fortsæt med at bekræfte cellernes levedygtighed ved at farvnings celler med trypan og et Blue Stain (0,4%).
- Resuspension af celler til en koncentration på 1 x 106 celler/100 μl i 1x PBS. Pipet celler grundigt for at undgå klumper. Hold kræftcellerne på is før injektion.
3. injektion af tumorceller
- Anesthetize 8 – 12-ugers gamle mandlige (C57BL6) mus ved at administrere ketamin (150 mg/kg) og xylazin (12 mg/kg) intraperitonealt ved hjælp af en 1 mL 25 G (0,5 mm x 16 mm) nål.
- Barberer maveskindet af musene ved hjælp af Clippers for at undgå postoperative infektioner.
- Placer mus på den magnetiske fiksator tilbagetrækning system. Bekræft, at musene er helt under effekten af anæstesi ved at klemme en tå eller halen.
- Tilsæt saltvands dråber i øjnene for at undgå tørhed under proceduren.
- Skrubbe povidon-jod opløsning (7,5%) til den barberede abdominalvæg til at desinficere huden, før du foretager et kirurgisk incision.
- Løft i første omgang huden med de tandede pincet og lav en mellemlinje indsnit ved hjælp af kirurgisk saks. Derefter løft abdominal musklen og bughinden for at skabe en mellemlinje indsnit på ca. 3 cm længde (midabdominal til xiphoid proces for at udsætte abdominal indholdet. Vær forsigtig med ikke at forlænge incisionen ud over xiphoid processen for at undgå omfattende blødning.
- Placer hemostat på begge sider af incisionen og under xiphoid processen. Udvid maven ved at trække halen nedad og taping det. Brug den 6-tommers sterile bomulds spids applikator til at adskille og udsætte milten fra bugspytkirtlen fedtvæv.
- Før injektion i milten, vortex kræftcellerne for at undgå enhver celle klumper.
- Brug en 0,5 mL 28 G (0,36 mm x 13 mm) insulin sprøjte til injektion. Undgå luftbobler.
- Injicer langsomt og forsigtigt 100 μL af cellerne i spidsen af milten. Placer en bomulds spids og tilsæt forsigtigt Tryk for at undgå tilbagestrømning til maveregionen. En vellykket injektion kan observeres ved at identificere ændringen i farven af leveren under injektionen.
- Fugt en steril gaze med 1x PBS og Placer den over det dissekterede område.
- Overfør musene på en varmepude i 15 minutter for at tillade kræftceller at cirkulere i systemet.
- For at fortsætte med kirurgisk iskæmi og reperfusion skade, Følg trin 5.3-5.10.
Bemærk: denne procedure er at studere effekten af I/R induceret etablering af metastatisk Foci.
4. splenektomi
- For at udføre en splenektomi skal du bruge en håndholdt kautery anordning. Løft forsigtigt milten med glatte pincet og ætse de spleniske blodkar for at undgå overdreven blødning. Fjern milten ved at transecting fartøjerne i den kauterisering sektion.
- Umiddelbart efter proceduren, lukke snittet i et dobbelt lag mønster ved først at suturere muskellag og derefter huden. Brug 4-0 polypropylensuturer til både bugvæggen og huden.
- Før gentagelse af proceduren på et andet dyr, Desinficer alle instrumenter ved enten at sprøjte dem med 70% isopropanol eller indsætte dem i en perle bad.
- Placer mus tilbage i originale bure og se efter tegn på angst og post-kirurgisk smerte.
- Injicér postoperative analgetika (buprenorphin 0,1 mg/kg) hver 12 h i 2 dage for at undgå post-kirurgisk smerte.
5. skade på ischemia reperfusion
- På 5 dage efter den første laparotomi, anæstetize mus ved at administrere ketamin (150 mg/kg) og xylazin (12 mg/kg) intraperitonealt ved hjælp af en 1 ml 25 G (0,5 mm x 16 mm) nål. Følg trin 3.3 – 3.4.
- Skrubbe povidon-jod opløsning (7,5%) på den barberede mave af musen til at desinficere huden og udføre en midterlinje laparotomi som beskrevet ovenfor i trin 3,6.
- Ved hjælp af to fugtet bomulds spidser skal du forsigtigt flytte tarmen fra hulrummet for at afsløre de tilhørende strukturer, herunder Portal vene. Dissekere leveren hilum fri for det omgivende væv.
- Løft de mediane og venstre laterale lapper op mod mellem gulvet. Adskil kvadrat-lobe fra venstre lateral lap ved at dissekere leveren hilum med fjeder saks ved hjælp af et operationsmikroskop for at give tydelig synlighed i forhold til portalens Triad-struktur.
- Placer en lille fugtig vatpind mellem midterlap og højre lateral lap for at skabe tilstrækkelig plads til fastspænding. Brug beholderen dilator tang, forsigtigt passere 10 cm tråd (4,0 polypropylen sutur) for at løfte Portal Triaden. Alle strukturer i Portal Triaden (hepatisk arterie, portal vene og galdegangen) til venstre og median lever lapper ved at placere en microvaskulær klemme ved hjælp af en mikro-serfinere klemme applikator med lås.
- Hvis lapper ikke udviser signifikant blanching, skal du justere klemmen ved at fjerne og genanvende.
Bemærk: Hvis den umiddelbare blanchering af leveren ikke forekommer, selv efter justering af klemmen, skal du omhyggeligt overveje, om du vil fortsætte med i/R. - Fjern den lille vatpind placeret mellem de mediane og højre laterale lapper. Udskift forsigtigt tarmen i bughulen. Dæk bugvæggen med en fugtig gaze (gennemblødt med 1x PBS) og dæk med en plastik wrap for at minimere fordampningstabet.
- Placer musen på varmepuden og anvende klemmen i en periode på 60 min.
- I hele iskæmisk interval, søge bevis for iskæmi skade ved at visualisere den blege blanchering af højre mediale og venstre mediale og laterale lobes.
- Start reperfusion ved at fjerne klemmerne efter 60 min. periode.
Bemærk: tegn på reperfusion kan observeres ved en umiddelbar farveændring af median og venstre laterale lapper. - Umiddelbart efter reperfusion, lukke indsnit med en dobbelt lag sutur mønster ved først at suturere muskellag og derefter huden. Brug 4-0 polypropylen sutur ved hjælp af en kanyle holder til at lukke bugvæggen og huden.
- Før gentagelse af proceduren på et andet dyr, Desinficer alle instrumenter ved enten at sprøjte dem med 70% isopropanol eller indsætte dem i en opvarmet perle bad.
- Placer mus tilbage i originale bure og se efter tegn på angst og post-kirurgisk smerte.
- Injicér postoperative analgetika (0,1 mg/kg buprenorphin) hver 12 h i 2 dage for at undgå post-kirurgisk smerte.
- For lever I/R Sham-mus skal du udføre laparotomi, hilum dissektion og abdominal suturer.
Bemærk: Den rolle kirurgisk stress påvirker etableringen af levermetastaser kan undersøges gennem to forskellige eksperimentelle design. Ovennævnte protokol (model-1) anvendes til at fastsætte micrometastatisk leversygdom og undersøge effekten af lever i/R på deres vækst (figur 1a). Alternativt kan lever-I/R-og tumor injektion udføres samtidigt (model 2) for at undersøge virkningen af i/r-skade ved etableringen af nye metastatiske Foci (figur 1b). For at gøre dette, injicere kræftceller i milten som beskrevet ovenfor og give dem mulighed for at cirkulere i 15 min. udføre lever I/R eller fingeret kirurgi efter den cirkulerende periode i 60 min. Udfør lateral splenektomi 60 min senere, og luk derefter laparotomi incision.
6. vurdering af betjente mus
- Under den kirurgiske procedure sikre, at musene er under påvirkning af fase III anæstesi ved at udføre øjenspalten og cornea refleks test. Yderligere bedøvelses dosis skal gives på tegn på reflekser.
- Give postoperative analgetikum (buprenorphin 0,1 mg/kg) lige efter operationen og hver 12h i 2 dage for at undgå post kirurgisk smerte.
- Tillad mus 30 – 60 min af restituningstid fra anæstesi. Konstant overvåge mus og ikke efterlade dem uden opsyn, indtil fuldstændig genopretning.
- Kig efter nødsignaler som krumrygget tilbage, lukkede øjne, langsom bevægelse og manglende brudgom. Behandles i overensstemmelse hermed, indtil mus vender tilbage til deres normale aktivitet.
- Supplimental pleje, herunder væsker, varme, yohimbine reverserings middel til xylazine, blødt papirhåndklæde sengetøj (for at undgå aspiration) bør gives efter operationen for at forbedre restitutionsperioden.
7. vurdering af leverischemia reperfusion skade
- Umiddelbart efter påføring af klemmen, Sørg for, at den blege blanchering af median og venstre laterale lapper forekommer sammenlignet med hale og kvadrat lapper.
- Vurder lever iskæmi skade ved at måle serum alanin transaminase (sALT), serum aspartat transaminase (sAST) og serum lactat dehydrogenase (sLDH) niveauer. Blodet kan trækkes fra ansigtet vene til at udtrække serum 3 – 6 h efter initiering af reperfusion. Udføre lever histologi at analysere procent tumor område inden for iskæmisk lap.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Alle dværg (C57BL6) mus (n = 20) blev underkastet levermetastaser model ved hjælp af den ovenfor beskrevne protokol. Alle injicerede mus med eller uden iskæmi reperfusion skade overlevede indtil datoen for offer. Det skematiske diagram figur 1a af en kræft injiceret lever illustrerer opspændingen af Portal Triaden (hepatisk arterie, portal vene og galdegangen), som inducerer en delvis leveriskæmisk (70%) fornærmelse mod median og venstre laterale lobes. En stigning i antallet af levermetastaser kan observeres inden for 2-3 uger post iskæmi reperfusion skade. Mus injiceret med MC38 cancerceller blev tilfældigt opdelt i Sham og I/R grupper. Som vist i figur 1bgennemgik den første gruppe mus splenektomi 15 min efter kræft indsprøjtningen. Lever iskæmi reperfusion kirurgi blev udført 5 dage efter injektionen. Denne model gør det muligt for de cirkulerende cancerceller (CCs) at etablere sig inden for organerne. Figur 2a viser, at kirurgisk stress øger mængden af præ-etablerede micrometastaser i leveren betydeligt. Den anden gruppe (figur 1c) gennemgik kirurgisk i/R 15 min efter Cancer indsprøjtningen. Reperfusion blev induceret ved at fjerne den microvaskulære klemme 60 min efter påføring. Den samtidige påvirkning af kirurgisk stress fører (figur 2b) til erobringen af nyligt injicerede kræftceller i leveren, der etablerer en micrometastatisk Foci. Dette øgede antallet af metastatiske knuder i leveren betydeligt.
Figur 1: En skematisk gengivelse af det eksperimentelle design. (A) det skematiske diagram over en kræft injiceret lever illustrerer opspændingen af Portal Triaden (hepatisk arterie, portal vene og galdegangen), som inducerer en partiel (70%) lever iskæmisk fornærmelse mod median og venstre laterale lobes. En stigning i antallet af levermetastaser kan observeres i de iskæmiske lapper inden for 2-3 uger efter reperfusion. I første omgang, mus blev udsat for intrasplenisk injektion af MC38 kolorektal cancer i både tumor Capture (B) og tumorvækst (C) model. Sham-mus blev også udsat for laparotomi uden anvendelse af microvaskulære klemmer. To-tre uger efter i/R, mus blev ofret, og levervævet blev høstet. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: repræsentative billeder af mus injiceret med murine cancer. (A) repræsentativ levermetastaser billede af en tumorvækst model (model-1) viser en signifikant stigning i den grove tumor knuder på overfladen af leveren efter inducerende hepatisk I/r sammenlignet med ikke-I/r gruppe. (B) tilsvarende, i fastsættelsen af tumor Capture model (model-2), lever I/r viste en signifikant stigning i tumor knuder 2 uger efter I/r sammenlignet med ikke-I/r gruppe. *, S < 0,05. Resultaterne udtrykkes som middelværdien ± standardafvigelse. Gruppe sammenligninger blev udført ved hjælp af elevens t-test (n = 5/Group). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den dyremodel, der er beskrevet i dette manuskript, er baseret på to store tilgange. Den første er at anerkende kræftcellernes evne til at lokalisere og formere sig i leveren lobes. Den anden er at studere effekten af hepatisk iskæmi reperfusion skade påvirker tumorvækst og metastaser. Denne model tillader den relevante undersøgelse af levermetastaser i fravær af sekundære metastaser i en immun kompetent mus. Modellen er nyttig til at behandle spørgsmålene om metastatisk effektivitet, såsom celle overlevelse ekstravasations og spredning.
I den første model, kræftceller injiceres først og micrometastatic sygdom er tilladt at danne. Efterfølgende udføres lever I/R 5 dage senere. Denne model er vigtig, når man studerer virkningen af kirurgi på allerede etablerede micrometastatisk sygdom. Selv om billeddannelse er væsentligt forbedret i det seneste årti, er der stadig mulighed for tilstedeværelsen af micrometastatic sygdom, der ikke kan påvises ved billeddannelse og er efterladt i henhold til en planlagt lever resektion med den hensigt at helbrede. Denne resterende mikroskopiske sygdom er påvirket af de inflammatoriske ændringer, der ledsager kirurgi, specifikt lever I/R, og væksten er eksponentielt forøget. På den anden side, i den anden model lever I/R og tumor injektion udføres på samme tid. Denne model fokuserer på virkningerne af lever I/R på de cirkulerende cancerceller og etableringen af nye metastatiske Foci. Under lever kirurgi, manipulation af tumoren frigiver tumorceller i omløb. Selv om de fleste af de cirkulerende celler er taget hånd om af værtens immun overvågning, kan en række celler etablere metastatisk Foci. Denne anden model er designet til at studere dette fænomen.
Dyremodeller, såsom ortotopisk lever injektion7 og hale vene injektion8, kan ikke være anatomisk gennemførlige for sådanne undersøgelser. Det har vist sig, at hale vene injektion normalt resulterer i en øget metastase af lungerne i forhold til leveren. Den ortotopisk injiceret kræft model har en øget risiko for leverskade påvirker mikromiljøet for tumoren til at vokse. Som et alternativ til splenisk injektion af tumorer, kan portalen vene også udnyttes. Portal Vein injektion har været en veletableret metastatisk model i studiet af levermetastaser9,10,11. Injektion af kræftceller gennem portalen vene kompromitterer ikke fjernelsen af milten sammenlignet med den ovenfor beskrevne model. Dette vil faktisk undgå de immune konsekvenser. Men, portal vene injektion har en øget risiko for overdreven blødning Due venøs rive (på injektionsstedet) og trombose under eller efter anvendelse af microvaskulære clamp på portalen Triad. Disse risici eksponentielt øges, når både tumor injektion og fastspænding sker på samme dag. Vores gruppe har udført begge metoder, og vi har opnået lignende resultater9,12. Vi erkender, at Portal vene injektion kræver højere tekniske færdigheder, når det gøres på samme tid som fastspænding og er forbundet med højere komplikationer. Begge metoder er gyldige til at studere levermetastaser.
Der er mange vigtige aspekter, der skal overvejes før og under hele proceduren. Brugen af kræftceller specifikt med samme art baggrund genoptages før injektion. Celle nummeret er også vigtigt at overveje i denne undersøgelse, da et lille antal celler måske ikke er tilstrækkeligt til at gennemføre studiet i en kort periode (3 uger). Øge antallet af kræftceller bør undgås, da det kan forårsage en emboli effekt fører til trombose og død af gnaver. Den model, der er beskrevet i dette manuskript med celle koncentration på 1 x 106 , er specifik for MC38-celle linjen og har givet os mulighed for at observere en signifikant forskel i tumorvæksten stimuleret af effekten af kirurgisk iskæmi reperfusion skade. Vi anbefaler stærkt at prøve forskellige koncentrationer af kræftceller afhængigt af det specifikke eksperiment med den ønskede Cancer cellelinje af interesse. Tilsvarende, mærkning af kræftceller kan være meget nyttigt i mange metastase undersøgelser. Dette ville give en idé om den procentdel af celler, der er i stand til at frø og formere sig. Endvidere, korrekt anvendelse af portalen klemme til at inducere hepatisk iskæmi skade er meget vigtigt i denne model. Manglende evne til helt at blokere blodgennemstrømningen kan føre til mindre eller ingen indvirkning på kræftcellerne. Som beskrevet i metoderne, er det vigtigt at sikre, at blanchering af leveren lapper opstår efter påføring af microvaskulære klemmer. Endelig, koagulerende fartøjer korrekt via kautery er afgørende for at undgå indre blødning. I vores erfaring, især med brug af elektro kautery, blødning fra den spleniske seng er ekstremt ualmindeligt, og da vi udfører en gentagelse laparotomi kun 5 dage efter den første operation, mængden af sammenvoksninger er minimal. Men hvis blødning er stødt, dette kan udgøre en vanskeligere anden operation. Hvis blødning sker efter splenektomi, dette kan indikere, at cirkulerende kræftceller kan også have implanteret i bughulen og dermed kan påvirke resultaterne af forsøgene. Det tilrådes at udvise forsigtighed ved håndtering af dette problem, da det kan påvirke eksperimenter og resultater. Det skal nøje overvejes at afgøre, om du skal fortsætte med i/R i disse mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne afslører ingen interessekonflikter, der vedrører dette arbejde.
Acknowledgments
Forfatterne takker Sara Minemyer og Alexander Comerci for den sproglige revision.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dulbecco's Modified Eagle Medium | Lonza | 12-614F | |
| Fetal Bovine Serum | Lonza | 900-108 | |
| L-Glutamin | Gibco | 25030-081 | |
| Penicilin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| Stretomysin | Fisher scientific | 15-140-122 | |
| HEPES | Fisher Scientific | SH3023701 | |
| Trypsin | Hyclone | sh30042.02 | |
| Cell culture Flask 75cm | 5 Cells Star | 658170 | |
| 15ml PP Conical Tubes | BioExcell | 41021037 | |
| Trypan Blue Stain | Giibco | 15250-061 | |
| Gauze | Fisherbrand | 1376152 | |
| Cautry | Bovie | AA01 | |
| Microvascular clamp | Finescience tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine clamp applicator with lock | Fine science toosl | FST-18056-14 | |
| Spring scissor | Fine science toosl | FST-15021-15 | |
| Vessel Dilator | Fine science toosl | FST-00276-13 | |
| Magnetic fixator Retraction system | Fine science toosl | FST-18200020 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11019-12 | |
| Micro-Adson Forceps | Fine science toosl | FST-11018-12 | |
| 4-0 polypropylene suture | Ethicon | K881H | |
| Needle holder | Harvard Apparatus | 72-8826 | |
| Heating Pad | Fisher scientific | 1443915 | |
| Clipper | Oster | 559A | |
| Povidone-Iodine solution | Medline | MDS093945 | |
| Syringe 1ml 25G | BD safety Glide | 305903 | |
| Insulin syringe 0.5 ml | BD insulin Syringes | 32946 | |
| Cotton -Tipped Applicator | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Surgical Microscope | Leica | LR92240 | |
| Mycoplasma Elisa Kit | Roche | 11663925910 | |
| Ketamine | Putney | #056344 | |
| Xylazine | NADA | #139-236 | |
| ALT strip | Heska | 15809554 | |
| AST strip | Heska | 15809542 | |
| LDH strip | Heska | 15809607 |
References
- Riihimäki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. Patterns of metastasis in colon and rectal cancer. Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).
- Oki, E., et al. Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis. Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).
- Wolpin, B. M., Mayer, R. J. Systemic treatment of colorectal cancer. Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).
- van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).
- Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations. Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).
- Tohme, S., et al. Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress. Cancer Research. 76 (6), 1367-1380 (2016).
- Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. Orthotopic mouse model of colorectal cancer. Journal of Visualized Experiments. (10), 484 (2007).
- Elkin, M., Vlodavsky, I. Tail vein assay of cancer metastasis. Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).
- Thalheimer, A., et al. The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer. BMC Cancer. 9 (1), 29 (2009).
- Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Saëc, P. R. emaud-, Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody. Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).
- Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
- Limani, P., et al. Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).
