Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Cancer Research

Murin modell av metastaserande levertumörer i inställningen av ischemia reperfusion skada

Published: August 30, 2019 doi: 10.3791/59748

Summary

Vi beskriver i detalj en kliniskt relevant kolorektal cancer levermetastaser (CRLM) tumör modell och påverkan av leverischrefusion (I/R) i tumörtillväxt och metastaser. Denna modell kan bidra till att bättre förstå mekanismerna bakom kirurgi-inducerad främjande av levermetastatisk tillväxt.

Abstract

Lever ischemi och reperfusion (I/R) skada, en gemensam klinisk utmaning, är fortfarande en oundviklig patofysiologisk process som har visat sig framkalla flera vävnads-och organskador. Trots de senaste framstegen och terapeutiska metoder, den totala sjuklighet har varit otillfredsställande särskilt hos patienter med underliggande parenkymala avvikelser. I samband med aggressiv cancer tillväxt och metastaser, kirurgisk I/R misstänks vara arrangören reglerar tumör upprepning. Denna artikel syftar till att beskriva en kliniskt relevant murin modell av lever I/R och kolorektal levermetastaser. Därvid, vi strävar efter att hjälpa andra utredare att etablera och finslipa denna modell för deras rutinmässig forskning praxis för att bättre förstå effekterna av levern I/R på att främja levermetastaser.

Introduction

Levern är en av de vanligaste platserna för utveckling av metastaserad sjukdom1. Dödligheten är nästan undantagslöst hänförlig till komplikationer i samband med tumörtillväxt i levern. Hos patienter med metastaserande solida tumörer i levern, kirurgi är fortfarande en avgörande intervention för sjukdomskontroll och en möjlig kurativ metod. Emellertid, den stora majoriteten av patienter i slutändan närvarande med återkommande sjukdom, främst i levern2,3. Under lever kirurgi, intraoperativ blödning är vanligt, ofta kräver blodtransfusion och olika tekniska metoder för kontroll av blödning, inklusive vaskulära kläm metoder. Emellertid, sådana åtgärder orsaka hepatisk ischemia/reperfusion (I/R) till levern vävnad. De negativa effekterna av I/R på hepatocellulär funktion har väl dokumenterade. Levern I/R förolämpning antänder inflammatoriska kaskader under återställande av blodflödet via inflammatoriska vägar4. Inte bara lever I/R skada bidra till leversvikt, men aktuella bevis visar också att I/R skada stimulerar tumör cell adhesion, och främjar förekomsten av metastaser bildas och tillväxten av befintliga micrometastatic sjukdom5. Vi har tidigare rapporterat att kirurgisk stress inducerar aktivering av immunceller som inte bara hjälper i tillväxten av den primära tumören, men också underlättar metastaser genom att fånga cancerceller i cirkulationen6.

Här beskriver vi i detalj en teknik för att etablera en levermetastaser mus tumör modell. I denna modell, vi presenterar också en metod för att inducera hepatisk ischemi reperfusion skada som fungerar som ett surrogat till den kirurgiska stressen närvarande kliniskt under hepatectomies. De kombinerade metoderna för cancer injektion och hepatisk I/R kan framgångsrikt tolka utvecklingen av CRLM hos patienter som har genomgått primär tumörresektion.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Alla djur protokoll är godkända av den institutionella djuromsorg och användning kommittén och anslutit sig till National Institutes of Health (NIH) riktlinjer. Instrument som används för alla kirurgiska ingrepp var grundligt steriliseras.

1. inledande beredning

  1. Innan injicera cancerceller i musen mjälte, autoklav och sterilisera alla instrument som skall användas under förfarandet.
  2. Sterilisera och/eller autoklav en värmedyna, kirurgiska handskar, gasväv, sax, små klämmor, fartyg Dilator, kirurgiska pinpett, och en nål hållare.
  3. Förbered postoperativt analgetikum (0,1 mg/kg buprenorfin) som ska administreras efter splenektomi och var 12: e timme i 2 dagar.

2. cell odling

  1. Se till att cancerceller är fria från Mycoplasma kontamination med hjälp av en Mycoplasma ELISA kit.
  2. Förbered en 500 mL lösning av Dulbecco modifierade Eagle medium (DMEM) odlingssubstrat vid 4 ° c för kulturen av murina kolorektal cancerceller (MC38). Odlingsmediet bör kompletteras med 10% Värmeinaktiverade fetalt bovint serum (FBS), 100 U/mL penicillin, 100 μg/mL streptomycin, 15 mM HEPER och 200 mM L-glutamin.
  3. Odling av cancerceller i en DNAse-och RNAse-fri kolv (75 cm2). Inkubera cellkulturen i en fuktad cell-/vävnads inkubator som innehåller 5% CO2. Bibehålla temperaturen vid 37 ° c.
  4. När de prolifererande cellerna når 90 – 100% confluency, aspirera de gamla medierna, tvätta celler med 1x fosfatbuffrad saltlösning (PBS) och behandla dem sedan med 1x trypsin (0,25%) för att lossa celler från kolven.
  5. Samla in celler i ett 15 mL koniskt rör och Centrifugera i 5 min vid 700 x g.
  6. Sug upp mediet och tvätta med 1x PBS två gånger genom upprepad centrifugering.
  7. Fortsätt att bekräfta cellernas genomförbarhet genom att färga celler med trypan blå fläck (0,4%).
  8. Omsuspendera cellerna till en koncentration av 1 x 106 celler/100 μl i 1x PBS. Pipet-celler noggrant för att undvika klumpar. Håll cancerceller på is före injektion.

3. injicera tumörceller

  1. Anesthetize 8 – 12-veckors gammal hane (C57BL6) möss genom att administrera ketamin (150 mg/kg) och xylazin (12 mg/kg) intraperitonealt med en 1 mL 25 G (0,5 mm x 16 mm) nål.
  2. Raka buken huden på möss med hjälp av Clippers för att undvika eventuella postoperativa infektioner.
  3. Placera möss på det magnetiska fixatorsystemet. Bekräfta att mössen är helt under effekten av anestesi genom att nypa en tå eller svansen.
  4. Tillsätt saltlösning droppar i ögonen för att undvika torrhet under förfarandet.
  5. Scrub povidon-jodlösning (7,5%) till den rakade bukväggen för att desinficera huden innan du gör ett kirurgiskt snitt.
  6. Inledningsvis lyfta huden med tandad tång och göra en mittlinjen snitt med hjälp av kirurgisk sax. Sedan, lyft bukmuskeln och bukhinnan att skapa en mittlinjen snitt på cirka 3 cm längd (midabdominell till xiphoid process för att exponera buken innehållet. Ta försiktighet inte att förlänga snittet bortom xiphoid processen för att undvika omfattande blödning.
  7. Placera hemostat på båda sidor av snittet och under xiphoid processen. Förlänga buken genom att dra svansen nedåt och tejvning. Använd 6-tums steril bomull spets applikatorn för att separera och exponera mjälten från bukspottkörtel fettvävnad.
  8. Före injektion i mjälten, Vortex cancerceller för att undvika någon cell klumpar.
  9. Använd en 0,5 mL 28 G (0,36 mm x 13 mm) insulinspruta för injektion. Undvik luftbubblor.
  10. Injicera långsamt och försiktigt 100 μL celler i spetsen av mjälten. Placera en bomulls spets och tillsätt mjukt tryck för att undvika återflöde i buken regionen. En lyckad injektion kan observeras genom att identifiera förändringen i färgen på levern under injektionen.
  11. Fukta en steril gasväv med 1x PBS och placera den över dissekerade området.
  12. Överför mössen på en värmedyna i 15 minuter för att tillåta cancerceller att cirkulera i systemet.
  13. Följ stegen 5.3-5.10 för att fortsätta med kirurgisk ischemi-och reperfusion-skada.
    Anmärkning: detta förfarande är att studera effekten av I/R inducerad etablering av metastaserad Foci.

4. splenektomi

  1. För att utföra en splenektomi, Använd en handhållen diatermi enhet. Försiktigt lyfta mjälten med slät tång och bränna de mjälten blodkärlen för att undvika överdriven blödning. Ta bort mjälten genom att transekera fartygen vid den flamberats sektion.
  2. Omedelbart efter ingreppet, Stäng snittet i ett dubbelt lager mönster genom att först suturera muskellagret och sedan huden. Använd 4-0 polypropen suturer för både bukväggen och huden.
  3. Innan du upprepar proceduren på ett annat djur, desinficera alla instrument genom att antingen spraya dem med 70% isopropanol eller sätta in dem i ett pärlbad.
  4. Placera möss tillbaka i original burar och leta efter tecken på ångest och post-kirurgisk smärta.
  5. Injicera postoperativt analgetikum (buprenorfin 0,1 mg/kg) var 12: e timme i 2 dagar för att undvika postkirurgisk smärta.

5. ischemia reperfusion skada

  1. Vid 5 dagar efter den första laparotomy, söva möss genom att administrera ketamin (150 mg/kg) och xylazin (12 mg/kg) intraperitonealt med en 1 ml 25 G (0,5 mm x 16 mm) nål. Följ steg 3.3 – 3.4.
  2. Scrub povidon-jodlösning (7,5%) på den rakade buken av musen för att desinficera huden och utföra en mittlinjen laparotomi som beskrivs ovan i steg 3,6.
  3. Med hjälp av två fuktad bomull tips, försiktigt flytta tarmen från kaviteten att exponera tillhörande strukturer, inklusive portalen ven. Dissekera levern hilum fri från den omgivande vävnaden.
  4. Lyft upp median och vänster laterala loberna mot membranet. Separera kvadrat LOB från vänster lateral LOB genom dissekera levern hilum med våren saxen med hjälp av ett operativsystem Mikroskop för att möjliggöra tydlig synlighet mot portalen Triad struktur.
  5. Placera en liten fuktig bomullspinne mellan median LOB och höger lateral LOB för att skapa tillräckligt med utrymme för fastspänning. Använd kärlet dilatator tång, försiktigt passera 10 cm tråden (4,0 polypropen sutur) att lyfta portalen triaden. Ockludera alla strukturer i portalen Triad (leverartär, Portal ven, och gallgången) till vänster och median lever lober genom att placera en mikrovaskulära klämma med en mikro-serförfina klämma applikatorn med lås.
  6. Om loberna inte visar signifikanta blanching, justera klämman genom att ta bort och ansöka igen.
    Anmärkning: om omedelbar blanchering av levern inte inträffar även efter justering av klämman, noga överväga om eller inte att gå vidare med I/R.
  7. Ta bort den lilla bomullspinne placerad mellan median och höger laterala loberna. Försiktigt ersätta tarmen i bukhålan. Täck bukväggen med en fuktig gasväv (indränkt med 1x PBS) och täck med en plastfolie för att minimera avdunstning förlust.
  8. Placera musen på värmeplattan och applicera klämman under en period av 60 min.
  9. Under hela ischemiska intervallet, söka bevis för ischemisk skada genom att visualisera blek blanchering av rätt mediala och vänster mediala och laterala lober.
  10. Initiera reperfusion genom att ta bort klämmorna efter 60 min period.
    Anmärkning: bevis på reperfusion kan observeras genom en omedelbar färgförändring av median och vänster laterala loberna.
  11. Omedelbart efter reperfusion, Stäng snittet med ett dubbelt lager suturen mönster genom att först suturering av muskellagret och sedan huden. Använd 4-0 polypropen suturen med hjälp av en nål hållare för att stänga bukväggen och huden.
  12. Innan du upprepar proceduren på ett annat djur, desinficera alla instrument genom att antingen spraya dem med 70% isopropanol eller sätta in dem i en uppvärmd pärla bad.
  13. Placera möss tillbaka i original burar och leta efter tecken på ångest och post-kirurgisk smärta.
  14. Injicera postoperativt analgetikum (0,1 mg/kg buprenorfin) var 12: e timme i 2 dagar för att undvika postkirurgisk smärta.
  15. För levern I/R Sham möss, utföra laparotomy, hilum dissektion och buk suturer.
    Anmärkning: Den roll som kirurgisk stress påverkar inrättandet av levermetastaser kan undersökas genom två olika experimentella konstruktioner. Ovanstående protokoll (Model-1) används för att fastställa mikrometastatisk leversjukdom och studera effekten av lever i/R på deras tillväxt (figur 1a). Alternativt kan lever I/R och tumör injektion utföras samtidigt (modell-2) för att studera effekten av i/r-skada vid etablering av nya metastatiska Foci (figur 1b). För att göra detta, injicera cancerceller i mjälten som beskrivs ovan och ge dem möjlighet att cirkulera i 15 min. utför lever I/R eller simulerad kirurgi efter den cirkulerande perioden för 60 min. utför lateral splenektomi 60 min senare, och stäng sedan laparotomi incision.

6. bedömning av manövrerade möss

  1. Under det kirurgiska ingreppet se till att mössen är under påverkan av steg III anestesi genom att utföra palpebrala och hornhinnan reflex test. Ytterligare bedövningsmedel dos måste ges på tecken på reflexer.
  2. Ge postoperativa analgetiska (buprenorfin 0,1 mg/kg) direkt efter operationen och varje 12h för 2 dagar för att undvika postkirurgisk smärta.
  3. Låt möss 30 – 60 min återhämtningstid från anestesi. Ständigt övervaka möss och inte lämna dem obevakad tills fullständig återhämtning.
  4. Leta efter nöds tecken som böjd rygg, slutna ögon, långsamma rörelser, och underlåtenhet att brudgummen. Behandla därefter tills möss återgår till sin normala aktivitet.
  5. Supplimental Care inklusive vätskor, värme, yohimbin återföring agent för xylazine, mjukpapper handduk sängkläder (för att undvika aspiration) bör tillhandahållas efter operationen för att förbättra återhämtningsperioden.

7. bedömning av lever ischemi reperfusion skada

  1. Omedelbart efter applicering av klämman, se till att blek blanchering av median och vänster laterala lober inträffar jämfört med caudatus och kvadrat loberna.
  2. Utvärdera leverischcinskada genom att mäta serumalaninaminotransferas (sALT), serumaspartataminotransferas (sAST) och serumlaktatdehydrogenas (sLDH) nivåer. Blodet kan dras från ansikts venen för att extrahera serum 3 – 6 h efter initiering av reperfusion. Utför leverhistologi för att analysera procent tumör området inom den ischemiska LOB.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Alla vildtyp (C57BL6) möss (n = 20) utsattes för levermetastaser-modellen med hjälp av det protokoll som beskrivs ovan. Alla injicerade möss med eller utan ischemi reperfusion skada överlevde fram till dagen för offret. Det schematiska diagrammet figur 1a i en cancer-injicerad lever illustrerar fastspänningen av portalen triaden (leverartär, Portal ven, och gallgången) som inducerar en partiell lever ischemisk (70%) förolämpning mot median och vänster laterala loberna. En ökning av antalet levermetastaser kan observeras inom 2-3 veckor efter ischemi reperfusion skada. Möss som injicerades med MC38 cancerceller delades slumpmässigt in i Sham-och I/R-grupper. Som framgår av figur 1bgenomgick den första gruppen av möss splenektomi 15 min efter cancer injektionen. Lever ischemi reperfusion kirurgi utfördes 5 dagar efter injektionen. Denna modell gör det möjligt för cirkulerande cancerceller (CCs) att etablera sig inom organen. Figur 2A visar att kirurgisk stress signifikant ökade mängden företablerade mikrometastaser i levern. Den andra gruppen (figur 1c) genomgick kirurgisk I/R 15 min efter cancer injektion. Den reperfusion inducerades genom att ta bort mikrovaskulära klämma 60 min efter applicering. Den samtidiga påverkan av den kirurgiska stress leder (figur 2b) till fångst av nyligen injicerade cancerceller i levern upprättande av en mikrometastatic Foci. Detta ökade signifikant antalet metastaserande knutor i levern.

Figure 1
Figur 1: En schematisk representation av den experimentella designen. (A) den schematiska diagram över en cancer injiceras levern illustrerar fastspänningen av portalen triaden (leverartär, Portal ven, och gallgången) som inducerar en partiell (70%) lever ischemisk förolämpning mot median och vänster laterala loberna. En ökning av antalet levermetastaser kan observeras i den ischemiska loberna inom 2-3 veckor efter reperfusion. Initialt, möss utsattes för intrasplenic injektion av MC38 kolorektal cancer i både tumör Capture (B) och tumörtillväxt (C) modell. Sham möss utsattes också för laparotomi utan tillämpning av mikrovaskulära klämmor. Två-tre veckor efter i/R, möss offrades, och levervävnad skördades. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figure 2
Figur 2: representativa bilder av möss som injicerats med murincancer. (A) representativa levermetastaser bild av en tumörtillväxt modell (modell-1) visar en signifikant ökning av brutto tumör knölar på ytan av levern efter inducera hepatisk I/r jämfört med icke-I/r-gruppen. (B) på samma sätt, i fastställandet av tumör fångst modell (modell-2), levern i/r visade en signifikant ökning av tumör noduli 2 veckor efter I/r jämfört med icke-I/r-gruppen. *, S < 0,05. Resultaten uttrycks som medelvärdet ± standardavvikelsen. Grupp jämförelser utfördes med hjälp av Students t-test (n = 5/grupp). Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Djur modellen som beskrivs i detta manuskript bygger på två huvudinriktningar. Den första är att erkänna förmågan hos cancerceller att lokalisera och förgöra i levern loberna. Den andra är att studera effekten av hepatisk ischemi reperfusion skada som påverkar tumörtillväxt och metastaser. Denna modell tillåter relevant studie av levermetastaser i frånvaro av sekundära metastaser i en immunkompetenta mus. Modellen är användbar för att ta itu med frågor om metastaserande effektivitet, till exempel cellöverlevnad extravasations och proliferation.

I den första modellen, cancerceller injiceras första och micrometastatic sjukdom är tillåtet att bilda. Därefter, lever I/R utförs 5 dagar senare. Denna modell är viktig när man studerar effekten av kirurgi på redan etablerad micrometastatic sjukdom. Även Imaging har förbättrats avsevärt under det senaste decenniet, finns det fortfarande möjlighet till förekomst av micrometastatic sjukdom som inte kan upptäckas genom avbildning och är kvar efter en planerad leverresektion med avsikt att bota. Denna kvarvarande mikroskopisk sjukdom påverkas av de inflammatoriska förändringar som åtföljer kirurgi, specifikt lever I/R, och tillväxten ökar exponentiellt. Å andra sidan, i den andra modellen lever I/R och tumör injektion utförs på samma gång. Denna modell fokuserar på effekterna av levern I/R på de cirkulerande cancercellerna och inrättandet av nya metastaserande Foci. Under lever kirurgi, manipulering av tumören frigör tumörceller i omlopp. Även om de flesta av de cirkulerande cellerna tas om hand av värdens immun övervakning, ett antal celler kan etablera metastaserande Foci. Denna andra modell är utformad för att studera detta fenomen.

Djurmodeller, såsom ortotopisk lever injektion7 och svans ven injektion8, kan inte vara anatomiskt genomförbart för sådana studier. Det har visats att svans venen injektion vanligtvis resulterar i en ökad metastaser av lungan jämfört med levern. Den ortotopiskt injicerade cancer modellen har en ökad risk för leverskada som påverkar mikromiljön för tumören att växa. Som ett alternativ till mjältering injektion av tumörer, portalen ven kan också utnyttjas. Portalen ven injektion har varit en väletablerad metastaserande modell för att studera levermetastaser9,10,11. Injektion av cancerceller genom portalen ven äventyrar inte avlägsnande av mjälten jämfört med den modell som beskrivs ovan. Detta kommer verkligen att undvika immun konsekvenserna. Emellertid, Portal ven injektion har en ökad risk för överdriven blödning på grund venösa sönder (på injektionsstället) och trombos under eller efter tillämpningen av mikrovaskulära klämma på portalen Triad. Dessa risker ökas exponentiellt när både tumör injektion och fastspänning görs på samma dag. Vår grupp har utfört båda metoderna och vi har fått liknande resultat9,12. Vi erkänner att portalen ven injektion kräver högre tekniska färdigheter när det görs samtidigt som fastspänning och är förknippad med högre komplikationer. Båda metoderna är giltiga för att studera levermetastaser.

Det finns många viktiga aspekter som måste övervägas före och under hela förfarandet. Användning av cancerceller specifikt med samma art bakgrund återupptas före injektion. Cellnumret är också viktigt att överväga i denna studie, eftersom ett litet antal celler inte kan vara tillräckligt för att slutföra studien i en kort tidsperiod (3 veckor). Öka antalet cancerceller bör undvikas eftersom det kan orsaka en emboli effekt leder till Trombos och död av gnagare. Den modell som beskrivs i detta manuskript med cell koncentration av 1 x 106 är specifik för MC38 cellinjer och har tillåtit oss att iaktta en signifikant skillnad i tumörens tillväxt stimuleras av effekten av kirurgisk ischreperfusionsskada. Vi rekommenderar starkt att prova olika koncentrationer av cancerceller beroende på det specifika experimentet med önskad cancer cell linje av intresse. Likaså, märkning av cancerceller kan vara mycket användbart i många metastaser studier. Detta skulle ge en uppfattning om andelen celler som kan utsäde och förgöra. Dessutom, korrekt tillämpning av portalen klämma för att inducera hepatisk ischemi skada är mycket viktigt i denna modell. Oförmåga att helt blockera blodflödet kan leda till mindre eller ingen påverkan på cancerceller. Som beskrivs i metoderna, det är viktigt att se till att blanchering av levern lober inträffar efter applicering av mikrovaskulära klämmor. Slutligen, koagulera fartyg ordentligt via diatermi är avgörande för att undvika inre blödning. I vår erfarenhet, särskilt med användning av elektrocautery, blödning från mjältas sängen är extremt ovanligt och eftersom vi utför en upprepning laparotomi endast 5 dagar efter den första operationen, mängden sammanväxningar är minimal. Men om blödning påträffas, detta kan innebära en svårare andra operationen. Om blödning inträffar efter splenektomi, detta kan tyda på att cirkulerande cancerceller kan också ha implanteras i bukhålan och därmed kan påverka resultaten av experimenten. Det rekommenderas att vara försiktig när du hanterar det här problemet, eftersom det kan påverka experiment och resultat. Noggrann tanke måste ges för att avgöra om att fortsätta med i/R i dessa möss.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Författarna avslöjar inga intressekonflikter som hänför sig till detta arbete.

Acknowledgments

Författarna tackar Sara Minemyer och Alexander Comerci för den språkliga revideringen.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Dulbecco's Modified Eagle Medium Lonza 12-614F
Fetal Bovine Serum Lonza 900-108
L-Glutamin Gibco 25030-081
Penicilin Fisher scientific 15-140-122
Stretomysin Fisher scientific 15-140-122
HEPES Fisher Scientific SH3023701
Trypsin Hyclone sh30042.02
Cell culture Flask 75cm 5 Cells Star 658170
15ml PP Conical Tubes BioExcell 41021037
Trypan Blue Stain Giibco 15250-061
Gauze Fisherbrand 1376152
Cautry Bovie AA01
Microvascular clamp Finescience tools 18055-03
Micro-Serrefine clamp applicator with lock Fine science toosl FST-18056-14
Spring scissor Fine science toosl FST-15021-15
Vessel Dilator Fine science toosl FST-00276-13
Magnetic fixator Retraction system Fine science toosl FST-18200020
Micro-Adson Forceps Fine science toosl FST-11019-12
Micro-Adson Forceps Fine science toosl FST-11018-12
4-0 polypropylene suture Ethicon K881H
Needle holder Harvard Apparatus 72-8826
Heating Pad Fisher scientific 1443915
Clipper Oster 559A
Povidone-Iodine solution Medline MDS093945
Syringe 1ml 25G BD safety Glide 305903
Insulin syringe 0.5 ml BD insulin Syringes 32946
Cotton -Tipped Applicator Fisher Scientific 23-400-101
Surgical Microscope Leica LR92240
Mycoplasma Elisa Kit Roche 11663925910
Ketamine Putney #056344
Xylazine NADA #139-236
ALT strip Heska 15809554
AST strip Heska 15809542
LDH strip Heska 15809607

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Riihimäki, M., Hemminki, A., Sundquist, J., Hemminki, K. Patterns of metastasis in colon and rectal cancer. Scientific Reports. 6 (1), 29765 (2016).
  2. Oki, E., et al. Recent advances in treatment for colorectal liver metastasis. Annals of gastroenterological surgery. 2 (3), 167-175 (2018).
  3. Wolpin, B. M., Mayer, R. J. Systemic treatment of colorectal cancer. Gastroenterology. 134 (5), 1296-1310 (2008).
  4. van Golen, R. F., Reiniers, M. J., Olthof, P. B., van Gulik, T. M., Heger, M. Sterile inflammation in hepatic ischemia/reperfusion injury: present concepts and potential therapeutics. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 28 (3), 394-400 (2013).
  5. Demicheli, R., Retsky, M. W., Hrushesky, W. J. M., Baum, M., Gukas, I. D. The effects of surgery on tumor growth: a century of investigations. Annals of Oncology. 19 (11), 1821-1828 (2008).
  6. Tohme, S., et al. Neutrophil Extracellular Traps Promote the Development and Progression of Liver Metastases after Surgical Stress. Cancer Research. 76 (6), 1367-1380 (2016).
  7. Tseng, W., Leong, X., Engleman, E. Orthotopic mouse model of colorectal cancer. Journal of Visualized Experiments. (10), 484 (2007).
  8. Elkin, M., Vlodavsky, I. Tail vein assay of cancer metastasis. Current Protocols in Cell Biology. 19 (19.2), (2001).
  9. Thalheimer, A., et al. The intraportal injection model: A practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer. BMC Cancer. 9 (1), 29 (2009).
  10. Frampas, E., Maurel, C., Thedrez, P., Le Saëc, P. R. emaud-, Faivre-Chauvet, A., Barbet, J. The intraportal injection model for liver metastasis: Advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody. Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).
  11. Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A Portal Vein Injection Model to Study Liver Metastasis of Breast Cancer. Journal of Visualized Experiments. (118), (2016).
  12. Limani, P., et al. Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), G682-G688 (2016).

Tags

Cancerforskning levermetastaser lever ischa-reperfusion laparotomy splenektomi murin kolorektal cancer leverskada musmodell
Murin modell av metastaserande levertumörer i inställningen av ischemia reperfusion skada
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Yazdani, H. O., Tohme, S. MurineMore

Yazdani, H. O., Tohme, S. Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury. J. Vis. Exp. (150), e59748, doi:10.3791/59748 (2019).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter