Summary
제시된 것은 쥐에서 상이한 유형의 중간 신경(MN) 병변 및 수리를 생성하는 프로토콜이다. 추가적으로, 프로토콜은 몇몇 비침범성 행동 시험 및 생리적인 측정을 사용하여 신경의 기능적 회복을 평가하는 방법을 보여줍니다.
Abstract
이 조사의 주요 목표는 쥐에 있는 중앙 신경 (MN) 병변의 다른 모형을 만들고 복구하는 방법을 보여주기 위한 것입니다. 또한 수술 후 물리 치료를 시뮬레이션하는 다른 방법이 제시됩니다. 말초 신경 병변 및 수리의 MN 모델을 사용하여 운동 및 감각 회복을 평가하기 위해 여러 표준화 된 전략이 사용되므로 결과를 쉽게 비교할 수 있습니다. MN 부상을 입은 쥐에게 수술 후 물리 치료와 같은 환경을 제공하기위한 몇 가지 옵션이 포함되어 있습니다. 마지막으로, 이 논문은 여러 비침습적 시험(즉, 잡기 테스트, 핀 찌르기 테스트, 사다리 렁 걷기 테스트, 로프 등반 테스트 및 걷기 트랙 분석) 및 생리학적 측정(적외선 열화상, 전기 신경 근사, 굴곡 강도 평가 및 굴곡 카르피 방사형 근육 체중 결정)을 사용하여 MN의 회복을 평가하는 방법을 제공합니다. 따라서, 이 모형은 인간 적인 종에 결과의 추정을 촉진하는 임상 시나리오를 복제하기 위하여 특히 적당한 것처럼 보입니다.
근막신경이 말초신경 연구에서 가장 많이 연구된 신경이지만, 쥐 MN의 분석은 다양한 장점을 제시한다. 예를 들면, MN 병변 연구 결과에 있는 영향 받은 사지의 합동 계약 그리고 자동 절단의 감소된 부각이 있습니다. 게다가, MN은 근육 덩어리에 의해 엄호되지 않습니다, 그것의 해부를 심막 신경의 그것 보다는 쉽게 하. 또한 MN이 자골 신경보다 짧기 때문에 MN 회복이 더 빨리 관찰됩니다. 또한, MN은 팔에 척골 신경에 평행 한 경로를 가지고있다. 따라서, 척골 신경은 MN 부상을 복구하기위한 신경 이식편으로 쉽게 사용할 수 있습니다. 마지막으로, 랫트의 MN은 인간의 상지에 유사한 앞다리에 위치하며, 인간에서는, 상지는 대부분의 말초 신경 병변의 사이트입니다.
Introduction
말초 신경 병변은 외상, 감염, 혈관염, 자가 면역, 악성 종양 및 / 또는 방사선 요법1,,2의결과로 정기적으로 발생합니다. 불행하게도, 말초 신경 수리는 임상적으로 예측할 수 없고 자주 실망스러운 결과를 제시하는 것을계속합니다3,4. 4,4,,5,56,7에 영향을 받는 사람들의 전망을 개선하기 위해 상당한 기본 및 번역 연구가 여전히 필요하다는 광범위한 합의가 있습니다.
랫트 MN은 인간8,,9(도 1)의 그것과 큰유사성을나타낸다. 겨드랑이 부위의 상완 신경총에서 유래한 이 신경은 팔의 내측 측면으로 내려와 팔꿈치에 도달하고 팔뚝의 복부 구획에 있는 대부분의 근육으로 분기합니다. MN은 손에 도달하여 쥐의 손 피부9 (그림 1)의일부뿐만 아니라 처음 두 개의 광활 근육을 자극합니다.
랫트 MN을 이용하여, 인간10,,11,,12에서말초 신경 병변을 적절히 복제할 수 있다. 이 신경은 관례적으로 사용되는 sciatic 신경에 비해 몇 가지 잠재적 인 연구 이점이 있습니다. MN은 쥐의 앞다리에 위치하기 때문에 (인간의 상지에 가깝다), 골반 사지(13)의상당 부분을 내음하는 근막 신경에 비해 쥐의 웰빙에 훨씬 작은 충격으로 실험적으로 손상 될 수 있다. 또한 인간에서 대부분의 임상 병변은,쥐의 앞다리10,11,,,12,14,,15,16에해당하는 상지에서 발생합니다.,
이 논문은 쥐에 있는 MN 병변의 다른 모형을 생성하는 방법을 보여줍니다. 또한 수술 후 물리 치료를 시뮬레이션하는 다른 방법이 제시됩니다. 마지막으로, MN의 기능적 회복을 평가하기 위한 시험이 설명된다. 말초 신경 병변 및 수리의 MN 모델을 사용하여 운동 및 감각 회복을 평가하는 데 사용할 수있는 여러 표준화 된 전략이 있으므로 결과를 쉽게 비교할 수 있습니다. MN 모델은 임상 시나리오를 복제하는 데 특히 적합하여 인간 종에 대한 결과의 추정을 용이하게 합니다.
Protocol
동물 과목과 관련된 모든 절차는 노바 대학 의과 대학, 리스본, 포르투갈 (08/2012/CEFCM)의 기관 동물 관리 및 사용위원회와 윤리위원회에 의해 승인되었습니다.
1. 중간 신경 수술
참고 : 수술 중 무균 기술을 따르십시오. 개인 보호 기구 (PPE)를 사용하고 멸균 수술 가운(17)을착용하십시오. 수술 전에 필요한 모든 수술 기구를 오토클레이브하십시오(재료 표참조).
- 12주된 위스타 쥐를 사용한다. 수술 7일 전에 12시간 동안 밝은 어두운 주기로 광고 리비텀 음식과 물을 제공하십시오. 마취 전에, 필요한 마취의 양을 결정하기 위해 쥐를 무게.
- 케타민 (40-80 mg / kg 체중)과 자일라진 (체중의 5-10 mg / kg)의 혼합물의 복강 내 주사로 쥐를 마취시다. 발가락 핀치에 대한 반응이 부족하고 전체 절차18,,19에서호흡 률을 관찰하여 마취의 깊이를 확인하십시오. 발가락 꼬집기에 대한 호흡률 110 사이클/분 또는 모터 반응이 관찰되는 경우 추가적인 진통제를 제공18,,20.
- 선제적인 진통을 제공하기 위해 멜록시캄 1 mg/kg을피하주사하여 20,,21.
- 수술 중 각막 마모를 방지하려면 두 눈에 안과 젤을 바르세요.
- 제모 크림을 사용하여 오른쪽의 내측 측면 위로 머리카락을 제거하십시오. 일단 완료되면, 크림17을제거하기 위해 따뜻한 식염수로 씻어.
- 가열 패드에 쥐를 척추 위치에 놓습니다. 수술 부위에 요오드 또는 클로르헨시딘 기반 수술 용 스크럽을 적용하십시오. 적어도 15 s에 대 한 두고 다음 에탄올으로 닦아. 응용 프로그램을 3x 반복합니다. 스크럽이 수술을 진행하기 전에 적어도 2 분 동안 피부에 닿아 있는지 확인하십시오.
참고 : 수술 부위 감염을 방지하기 위해 대체 프로토콜에 대한 연구 단위의 감염 관리 기관에 문의19. - 수술 부위를 드레이프17.
참고 : 엄격한 무균 조건19에서모든 절차를 수행합니다. - 15개의 메스 블레이드를 사용하여 오른쪽 팔과 가슴 부위의 내측 면에서 피부를 깊은 근막면으로 절개합니다. 전기 소작을 사용하여 출혈 혈관을 조심스럽게 소작하십시오.
- 조심스럽게 근육을 덮고 희끄무레한 칼집으로 제시 상완 근막, 열 소작 또는 무딘 가위 한 쌍을 사용하여, 팔의 내측 측면에서 혈관과 신경 구조를 손상시키지 않도록주의.
- 가슴 주요 근육의 말단 삽입 아래에 무딘 가위 한 쌍을 열어, 기본 겨드랑이 동맥과 정맥에서이 근육을 애타게하기 위해, 뿐만 아니라 상완 신경총의 말단 지점에서.
- 가슴의 삽입을 전기 소작으로 나눕니다. 가슴의 경미한 근육을 노출하고 절제하십시오.
- 무뚝뚝하게 상악 혈관에서 그리고 팔꿈치에 차축 지역에서 시작하는 척골 신경에서 MN을 해부. 이것은 상완 신경총, 즉 중앙값, 척골, 방사형, 겨드랑이 및 근육 종막 신경의 상이한 말단 의 노출을 허용합니다(그림 2).
- 아래에 설명된 바와 같이 상이한 실험군을 분리한다.
- MN만 해부하여 Sham 그룹을 만듭니다.
- 15s에 대한 팔의 중간 부분에 MN을 압축하여 5개의 미세수술 집게, 또는 유사한계측기(22,,23)를사용하여 크러시 그룹을 생성한다.
- 한 쌍의 미세 수술 가위를 사용하여 절제 그룹을 만들어 팔에 있는 MN의 중앙 부분에서 10mm 길이의 세그먼트를 절제합니다. 축축성장을 방지하기 위해 8/0 나일론 봉합사로 신경의 근위 그루터기를 리게이트하십시오.
- 후자의 단계에서 설명한 MN의 10mm 길이 세그먼트를 사용하여 이식 그룹을 만들고 180°로 회전합니다. 중단 된 10/0 나일론 바늘을 사용하여 신경 이식편으로 절편 된 MN의 근위 및 말단 그루터기를 봉합합니다.
- 중단 된 5/0 나일론 바늘10,,24를사용하여 피부 상처를 닫습니다.
- 수술 후 진통을 제공 7 체리 맛 아세트 아미노 펜의 7 mL 와 혼합 43 수돗물의 mL 25 50 mL 플라스틱 물 병에 4.48 mg/mL의 농도를 얻기 위해 3 일 동안 쥐 광고 리비툼에 사용할 수 있게25.
2. 주거 및 물리 치료
- 쥐가 수술 전 2-4주 전에 물리 치료 장치와 접촉할 수 있도록 하여 운동 설정에 더 쉽고 빠르게 적응할 수 있도록 하십시오. 아래에 설명된 절차에 따라 연습을 수행합니다.
- 하루에 한 번, 개별 물리 치료 구체 안에 각 쥐를 배치하고, 그 후 몇 가지 장애물이있는 방에 구를 배치합니다. 쥐가 한 시간 반 동안 자유롭게 방을 탐험하자.
- 쥐를 운동을 돕기 위해 바퀴가 통합된 독방 케이지에 개별적으로 보관하십시오.
- 4-5 마리의 동물로 구성된 그룹을 형성하고 이 그룹을 개인화된 케이지에 보관합니다. 사다리, 로프, 달리는 바퀴 및 기타 환경 농축 요소를 포함하여 케이지를 개인화하십시오.
- 수술 다음날 개별 쥐를 개인 케이지로 되돌리시고.
- 수술 후 3일 간 물리 치료 운동을 재개하십시오.
3. 기능 테스트
- 기능 테스트를 수행하기 시작하기 1 주일 전에, 긍정적 인 강화로 사용되는 음식 취급과 쥐를 숙지. 각 테스트의 성공적인 완료 후이 보강을 제공, 수술 전후. 3 주의 초기 훈련 기간 후, 수술 후 1 주 모든 테스트를 재개.
- 쥐가 자연적으로 더 활동적인 저녁에 테스트를 수행합니다. 수술 후 1주일 검사를 재개하십시오.
- 격자에 쥐를 배치하여 잡기 테스트를 수행하고 꼬리에 의해 들어 올려, 그것의 앞발11,,26와그리드를 잡아 시키는. 쥐가 두 포발로 그리드를 잡을 수 있다면 "양수" 점수를 할당합니다. 쥐가 부상당한 발로 그리드를 잡을 수 없는 경우 "음수" 점수를 할당합니다.
참고 : 긍정적 인 파악 테스트는 MN의 모터 구성 요소가16,27작동임을나타냅니다. - 핀 찌르기 테스트28,,29을수행합니다.
- 4mm x 4mm 정사각형 그리드 패턴으로 플라스틱 플랫폼을 만듭니다. 21cm 길이의 금속 프레임으로 이 그리드에 지원을 제공합니다.
- 쥐를 플랫폼에 놓고 15.5 cm x 15.5 cm x 11cm 투명 플라스틱 상자로 그리드를 덮습니다. 정상적인 활동(예: 탐색 및 주요 그루밍)이 가라앉을 때까지 몇 분 정도 기다립니다.
- 쥐가 고정되어 있고 네 발에 서있을 때 테스트를 시작합니다.
- 거울의 도움으로 메쉬를 통해 마취계 (예 : 25g의 굽힘력을 가진 4 번 폰 프레이 머리카락)를 삽입하고 MN의 피부 영역에서 포발의 팔마 측면을 찌르고(그림 1). 각 포발에 대한 평가를 5x 반복하고 각 평가 후 몇 초 를 기다린다.
- 올바른 평가를 위해 폰 프레이필라멘트(30)의 굽힘 여부를 확인한다. 철수 응답에 대해 "0", "1"은 쥐가 필라멘트에서 발을 천천히 제거하는 경우, "2"는 쥐가 자극에 빠르게 반응하고 발을 제거하거나 발을 핥는 경우 를 점수화합니다.
참고 : 필라멘트의 앰블리와 물기를 관찰하는 경우, 이들은 모호한 응답으로 간주되기 때문에, 자극을 반복합니다.
- 교육 세션
참고: 저조도 환경에서 저녁에 수술을 하기 전에 3주 동안 매일 쥐를 훈련시보세요. 훈련 세션은 로프 등반, 사다리 렁 및 걷기 트랙 테스트를 위해 특별히 권장됩니다. 이들은 로프 등반 테스트, 사다리 렁, 마지막으로 걷는 트랙 테스트로 시작하여 이전에 제시 된 순서로 수행 할 수 있습니다. 같은 동물에게 새로운 시험을 하기 전에 몇 분간 휴식을 취하십시오.- 첫 주 동안, 상자 입구 에 가까운 사다리 / 로프 / 복도의 마지막 세 번째에 쥐를 놓습니다. 동물이 꼬리 끝을 부드럽게 만지거나 당기면서 상자 개구부쪽으로 움직이도록 조절합니다. 상자에 들어가면 쥐에게 음식 간식을 제공하여 테스트를 반복하기 전에 몇 초 동안 휴식을 취할 수 있습니다. 5일 동안 매일 5회 반복합니다.
- 두 번째 주 동안, 사다리/ 로프 / 복도의 두 번째 3 분의 1에 동물을 배치 3.5.1의 단계를 반복합니다.
- 세 번째 주 동안, 상자 입구의 반대편에 사다리 / 로프 / 복도의 바닥에 쥐를 놓습니다. 3.5.1에서 단계를 반복하지만, 제대로 테스트를 완료 할 때 만 동물을 보상.
- 사다리 렁 테스트를 수행합니다.
참고: 이 테스트는 앞다리 강도, 스테핑, 배치 및 조정31을평가하는 데 사용됩니다.- 래트 의 바닥에 쥐를 놓습니다 (120cm x 9cm x 2cm 18 단계 1.5 cm 두께, 간격 4cm 간격) 쥐의 꼬리를 부드럽게 터치. 사다리가 10° 경사에 배치되고 어두운 나무 31.5 cm x 35cm x 35cm 상자에 13.20 cm x 11cm 개구부로 연결되는지 확인하십시오.
- 쥐가 사다리를 오르기 시작하면 타이머를 시작하고 쥐의 주전자가 상자입구를 건널 때 타이머를 중지합니다.
- 시간을 기록하고 시험을 3x 반복하고 각각 1 분 간격으로 분리합니다.
- 로프 클라이밍
참고: 이 테스트는 MN 복구32에의존하는 파악 강도를 평가하는 데 사용됩니다.- 밧줄의 바닥에 쥐를 넣고 부드럽게 꼬리를 터치하여 등반을 설득. 동물이 등반을 시작하면 타이머를 시작하고 쥐의 주전자가 플랫폼입구를 가로지르는 순간 을 멈춥시다.
- 각 테스트에 대해, 쥐가 밧줄을 오르는 동안 플랫폼에 올라가는 데 걸린 시간과 부상당한 발의 전표 수를 기록하십시오. 동물이 작업 중에 주저하지 않거나 등반을 멈추지 않는 경우 유효한 테스트를 고려하십시오. 작업을 올바르게 수행 한 후 쥐에게 간식을 제공합니다.
- 시간을 기록하고 시험을 3x 반복하고 각각 1분 간격으로 분리한다.
- 걷기 트랙
참고 :이 테스트는 앞다리 모터 복구33,,34의평가에 사용됩니다.- 높이 16.5cm x 너비 8.7cm x 길이 43cm로 구성된 밀폐된 통로로 구성된 장치를 설치합니다. 이 검은 나무 23cm x 36cm x 28cm 상자의 벽 중 하나에 직사각형 8.8cm x 8.2 cm 개구부로 이어질 수 있는지 확인합니다. 상자 입구를 빠르게 닫을 수 있는 수직 슬라이딩 도어를 포함합니다. 래트(33,,34)를검색하는데 사용할 이동식 상판을 포함한다.
- 복도 바닥에 그래프 용지를 놓습니다. 꼬리로 쥐를 잡고 메틸렌 블루에 담근 그림 브러시를 잡습니다. 상자 안으로 걸어 갈 수 있도록 복도 입구에 쥐를 배치합니다. 복도 바닥에서 그래프 용지를 제거하고 두 포발의 좋은 대표적 인상을 얻을 때까지 테스트를 반복합니다.
- 얻어진 인쇄물에서, 명확한 연속적인 앞발 인쇄를 가진 하나를 선택하고, 티프 또는 jpeg 형식으로 촬영하고, 오픈 액세스 소프트웨어 FIJI35를사용하여 다음 매개 변수를 측정합니다.
참고 : 먼저 그래프 용지의 표시를 사용하여 각 이미지를 보정하십시오(분석 | 축척 설정)둘째, 각 이미지를 8비트 형식으로변환(이미지 | 유형 | 8 비트). 그런 다음 직사각형 선택 도구를 사용하여 발 인쇄를 선택합니다. 이미지의 이 부분을 자르기(이미지 | 자르기)를사용합니다. 각 이미지에서 발자국을 강조 표시하고 이미지의 임계값을 설정하여 배경을 제거합니다(이미지| 조정 | 임계값)을 참조하십시오.- 발 노출 영역을 측정하여 자세 계수를 측정합니다. 직사각형 선택 도구를 사용하여 발 인쇄를 선택하고 컨트롤 + M을누릅니다.
- 발 노출의 가장 긴 길이를 측정하여 인쇄 길이 계수를 측정합니다(단계 3.8.3.2-3.8.3.6의 경우 가장 먼 두 점을 선택하고 컨트롤 + M을누르면 직선 선택 도구를 사용합니다).
- 발 노출의 가장 넓은 폭을 측정하여 손가락 확산 계수를 측정합니다.
- 두 번째 손가락과 세 번째 손가락 사이의 가장 넓은 폭을 측정하여 중간 손가락 확산 계수를 측정합니다.
- 지정된 쪽에서 연속적인 발 노출의 상동 점 사이의 거리를 측정하여 보폭 길이를 측정합니다.
- 지지체의 기초를 측정하여 발 인상의 중심부분과 운동방향(29,,33,,36)사이의 수직 거리를 측정한다.
참고 : 대표적인 연속 양자 발 노출33의두 쌍에서 마지막 두 측정을 수행합니다.
4. 생리적 측정
- 적외선 서모그래피 (IRT)37,,38,39.
- 0.1 °C의 열 분해능을 가진 일반 디지털 수온계를 사용하여 측정이 수행될 실내온도가 18°C~25°C 사이인지 확인하십시오. 중요한 열원(예: 컴퓨터 또는 냉장고)이 없는지 확인합니다.
- 랫트에 적응하여 평가실 2시간 전에 평가실로 가져온다. 실험을 시작하기 전에 위에서 설명한 대로 쥐를 마취 (단계 1.3-1.6) 또는 기관의 프로토콜을 따르십시오. 실험을 시작하기 전에 발가락 핀치에 대한 반응이 없는지 확인합니다.
- 적외선 열화상 카메라를 획득 하기 15 분 전에 스위치를 켜고 평가 하는 동안 그것을 해제 하지 마십시오. 카메라의 방사율 매개변수를 쥐의 피부(θ = 0.98)의 것과 일치하도록 설정합니다(θ = 0.98)37,,40,,41.
- 폴리에틸렌 스폰지로 깨끗하고 안정적인 표면에 쥐를 도르섬에 놓습니다. 반사 재및 기타 가능한 유물 소스가 없는지 확인합니다. 이중 얼굴 접착제 테이프로 조심스럽게 앞발을 고정하십시오. 모든 평가 중에 직장 내부에 디지털 온도계 2cm를 삽입하여 쥐의 중앙 온도를 모니터링하십시오.
- 열화상 카메라를 쥐로부터 90° 각도및 30cm 거리로 잡습니다. 전체 동물의 몸에 카메라를 집중. 30초 간격의 적외선 서모그래피 이미지를 얻을 수 있습니다.
- 수집된 써모그램을 컴퓨터로 전송하고 분석 소프트웨어를 사용하여 분석합니다. 예를 들어 첫 번째 중이도골 풋 패드의 중심에 있는 MN의 발바닥 영역에서 고정된 직사각형 영역(예를 들어, 9 x 11 픽셀)을 사용하여 두 포발의 발바닥 표면의 온도를 정의합니다(그림1). 무료 FLIR 도구 소프트웨어를 사용하여, 그것을 두 번 클릭하여 서모그래피를 선택합니다. 왼쪽 도구 막대에서"상자 측정 도구 추가"버튼을 선택하고 두 포발의 발바닥 영역에 9*11 픽셀의 사각형을 그립니다. 사각형을 픽셀 단위로 조정하는 동안 크기를 확인할 수 있습니다. 두 포발에 수행합니다. 이미지의 오른쪽에 최대, 최소 및 평균 온도 찾을 수 있습니다.
- 이전에 그려진 ROI를 통해 마우스 오른쪽 단추를 클릭하고 내보내기를 선택합니다. 평균, 최대 및 최소 온도뿐만 아니라 ROI의 온도 매트릭스는 .csv 문서로 내보내됩니다. 이러한 데이터는 나중에 데이터 분석 소프트웨어를 사용하여 탐색할 수 있습니다.
- 전기 신경근학 (ENMG) 평가
- 전기 자극기 설정합니다. 일회용 침술 바늘 (0.25 mm x 25 mm)을 무시할 수있는 임피던스 [&1 Ω]로 테이프로 채우고 25mm 사이에 자극을 위한 전극을 만듭니다. 이제 자극기와 전극을 데이터 수집 장치에 연결하여 들어오는 신호를 컴퓨터 소프트웨어로 처리할 수 있는 디지털 신호로 변환합니다.
- 같은 방에서 평가를 수행하고, 항상 동일한 통제 된 환경 조건(42,,43,,44)에서수행한다. 쥐가 데이터 수집을 시작하기 전에 깊이 마취되어 있는지 확인하기 위해 앞발을 꼬집습니다.
참고 : 깊은 마취는 쥐43에의한 자발적 자발적 및 / 또는 무의식적 인 움직임과 관련된 변동성을 최소화하는 것이 가장 중요합니다. - 단계 1.8-1.13에 설명된 바와 같이 외과 현미경의 밑에 양측에 MN을 노출합니다. 숫자 15 메스 블레이드를 사용하여 복부 중간 선 절개로 완두골 절개를 팔뚝에 연장하십시오.
- 홍채 가위를 사용하여 지나치게 겹치는 연구 근막을 무뚝뚝하게 분리하여 굴곡의 피상적 인 측면을 노출시다. 신호 접지 플러그를 연결하기 위해 왼쪽 뒷다리의 사두근 femoris 근육에 접지 바늘을 삽입합니다.
- 오른쪽 포발로 시작하여 MN의 병변 부위에 근접시킨 포반및 자극 전극의 굴곡디지도룸 승유의 근육 배에 기록 전극을 놓는다. 식염수로 이 전극을 적시세요.
- 소프트웨어가 다음과 같이 설정되어 있는지 확인: 채널 입력 포트 1 (CH1) – 0-10 V에 자극기; 및 채널 입력 포트 2(CH2)-EMG에서 30-1,000 Hz. 10 mV의 자극 진폭을 선택하여 시작하고 화합물 근육 작용 전위 CAPPs 샘플 레이트 50,000 ms. 2,000 mV에 도달할 때까지 10 mV 단계에서 자극 진폭을 점진적으로 증가시다. 왼쪽 발42,,43,,44에대해 동일한 반복합니다.
참고: 신호가 1,000x로 증폭되고 30-1,000Hz 대역을 사용하여 필터링됩니다. 자극 출력은 1 ms42,,43,,44의지속 시간으로 단일 펄스에 대해 설정됩니다. - 기록 장치 소프트웨어에서 기록된 파일을 엽니다.
참고 : 기본적으로 화면은 빨간색, 자극기 펄스, 아래 레코더 ENMG의 파란색으로 상단에 견인 창을 표시합니다. 시간 척도 아래에 가로 스크롤 막대를 슬라이딩하면 전체 레코드를 시각화할 수 있습니다. 두 가지 주요 도구인 확대/축소 도구와 I-빔 도구는패널의 오른쪽 하단에 있습니다. 확대/축소 도구를사용하면 CAP의 시각화를 최적화하고 그래픽을 탐색할 수 있습니다. 시각화 화면에 잘 맞도록 하려면 확대/축소 후 디스플레이를 조정해야 할 수 있습니다. 이렇게 하려면 표시를선택합니다 | 자동 크기 조정 파형. I-빔 도구를 사용하면 그래프의 특정 영역을 선택하고 원하는 측정의 성능을 선택할 수 있습니다. 그래프 위에는 측정값이 표시되는 세 개의 작은 창이 있습니다. P-P는 볼트(자극기 레코드와 ENMG 모두)에서 선택한 영역의 평균 진폭 값을 표시하는 반면 델타-T는 해당 선택의 시간 간격을 표시합니다. - 화합물 근육 작용 전위로부터의 파라미터를 측정(CMPA, 표 1에기재된) 소프트웨어 플러그로부터 동음 이의측정 도구를 사용하여 "EMG "45에서MAP및 행동 전위및 행동 전위를 감독하지 않는 분류를 위한 툴박스.
- 각 쥐에 대해, CMAP의 진폭이 더 증가하지 않는 후 자극 전압의 최소 값을 결정합니다. 0.05 mV 자극에서 시작하여 0.05 mV의 증분 전압에서 연속적인 증가 자극을 제공합니다.
- 초상 자극 값을 얻기 위해 이 전압보다 20% 이상의 자극을 가한다.
- 후자의 값이 결정되고 해당 자극이 적용된 후 다음 CAP P 매개 변수를 기록합니다.
- 굴곡 강도 평가
- 4.2단계에서와 동일한 자극기 및 자극 전극을 사용하여 MN을 전기적으로 자극한다. 입력 채널 CH1을 자극기(0-10V)로 설정하고 1ms 지속 시간과 1Hz 주파수의 펄스로 30s의 자극 지속 시간에 대한 출력 설정을 설정합니다. d = 0.001 N의 해상도로 동력계를 컴퓨터에 연결합니다.
참고 : 데이터의 실시간 시각화는 이전에 컴퓨터에 설치하고 동력계46에연결된 소프트웨어를 사용하여 시간당 힘 플롯 (N / s)을 구축하여 얻을 수 있습니다. - 4.1.4단계에서 설명한 대로 쥐를 놓는다. 두 포발의 두 번째 중간 공간을 통해 5/0 실크 봉합사 루프를 놓습니다. 봉합사 루프를 동력계의 후크에 부착하고 봉합사 라인에 과도한 부담을 주지 않고 동력계에 정렬된 포전을 부착합니다.
- 동력계 판독값에서 가짜 이동 간섭을 피하기 위해 테이프로 반대발을 고정합니다.
- ZERO 버튼을 클릭하여 동력계를 0으로 설정합니다.
- 전압 매듭을 조정하여 자극기를 1.5V의 초상진폭 자극으로 조정합니다.
- PC에서 소프트웨어 AFH-01을 엽니다. 분리기 "장치"를 열고 장치 FH5를선택합니다. 새 파일만들기("Measurements1"기본적으로 지정된 이름) 파일 이름을 바꿉니다.
- MN의 근위 부분에 전극을 배치, 프로그램의 하단에 재생을 클릭, 30 초에 대한 동력계에 당겨 기록.
- 데이터 분석 소프트웨어로 가져온 값을 가져옵니다. 각 평가에 대한 강도 x 시간 그래프에 대한 최대 및 평균 힘 값과 곡선 아래의 면적(AUC)을 계산합니다.
- 왼쪽 포발에 대해 반복합니다.
- 4.2단계에서와 동일한 자극기 및 자극 전극을 사용하여 MN을 전기적으로 자극한다. 입력 채널 CH1을 자극기(0-10V)로 설정하고 1ms 지속 시간과 1Hz 주파수의 펄스로 30s의 자극 지속 시간에 대한 출력 설정을 설정합니다. d = 0.001 N의 해상도로 동력계를 컴퓨터에 연결합니다.
- 근육 무게
- 전신 마취하에 쥐를 안락사시켜47,,48을사내한다.
- 두 팔뚝에서 굴곡 카르피 방사형 근육을 수확, 그 말단 힘줄 삽입까지 그 원점에서 근육을 해부, 번호를 사용하여 15 메스 블레이드.
- 정밀 척도9,,49로근육의 무게를 측정합니다.
Representative Results
총 34마리의 랫트가 무작위로 다음 그룹으로 나누어졌다: Sham (n=17), 절제(n=17), 및 신경 이식(n=10) 수술. Excision 모든 쥐는 수술과 수술 후 기간을 유의없이 살아남았다. 수술 후 1주일 후, 이후 100일 동안 모든 동물은 일주일에 한 번 위에서 설명한 기능 검사를 받았다. 이러한 각 테스트의 대표적인 결과는 아래에 설명되어 있습니다.
파악 테스트
파악 테스트에서 양성 반응을 보였던 쥐의 비율은 Sham 그룹에 대해 가장 높았습니다. 이 값은 호감 및 신경 이식 군으로부터의 쥐에서 시간이 지남에 따라 점차적으로 증가하였다(그림 3).
핀 찌르기 테스트
Sham 그룹에서 쥐 신경 이식 그룹에서 쥐에 비해 누적 된 핀 찌르기 테스트에서 최고의 점수를 했다. 둘 다 절제 군의 쥐보다 더 나은 점수를가졌다(그림 4).
사다리 실행 테스트
사다리 실행 시험에서 쥐의 속도는 MN 병변에 제출된 쥐보다 Sham 군에서 가장 높았다. 후자 중에서, 사다리를 실행하는 시간은 시간이 지남에 따라 감소하는 경향이, MN 복구 병렬(그림 5)..
로프 테스트
사다리 달리기 테스트에서와 같이, 쥐가 밧줄을 오르는 데 걸린 시간은 MN이 부상을 입은 그룹에 비해 Sham 그룹에서 더 짧았다. 이 시험에서 랫트의 속도는 MN이 회복될 수 있을 때 증가하였다(도6).
걷기 트랙 분석
보행 트랙의 분석은 발 인쇄의 형태에 변화를 표시하는 경향이 있었다(그림 7). 이러한 변화는 종종 세그먼트 신경 병변보다 분쇄 부상에서 더 두드러졌다50.
적외선 서모그래피
서모그래피는 수술 후 처음 30일 동안 포어사이의 온도 차이를 조사할 때 유용했다. 온도 차이는 절제 군으로부터의 것과 같이 더 심하게 다친 MN을 가진 랫트에서 더 두드러졌다(도8 및 도 9).
전기 신경 근사학
표 1은 전기 신경 근사 측정의 생물학적 중요성을 요약하여 상이한 실험 군에 대한 대표적인 결과를 제공한다. 다양한 패턴이 전기 신경 근사 검사로 관찰되었습니다. 정상 CMAP는 Sham 군으로부터의 쥐의 전형이었고, 용체 CMAP는 호감 및 신경 이식 군에서와 같이 MN의 병변의 가변 정도와 연관되었다(그림10). 절제 그룹에서는 CAP가 관찰되지 않았습니다.
손목 굴곡 강도
손목 굴곡이 주로 MN에 의존한다는 점을 감안할 때,이 테스트는이 신경의 영역에서 운동 회복을 평가하는 데 사용되었습니다. 손목 굴곡 강도는 회복이 최대일 때 정상에 가장 가까웠습니다(그림 11).
근육 무게와 형태
굴곡 잉어 방사형 근육의 무게와 형태는 MN9,10에의해 독점적으로 내심이 있기 때문에MN회복에 의존했다. 따라서, Sham 그룹에서 정상 체중 및 형태학이 관찰되었다. 체중 및 근육 의 손실은 호감, 신경 이식및 절제 그룹에서 관찰되었다(그림 12).
그림 1: 쥐의 중간 신경의 해부학의 개략적 표현.
(1)쥐 뇌의 중간 신경의 기원 및 종료 (녹색 영역 = 기본 모터 영역; 파란색 영역 = 기본 감각 영역). (2)C7 세그먼트 수준에서 척수의 횡절편; (3)차실 신경; (4)근막 신경; (5)방사형 신경; (6)중간 신경; (7)울나르 신경; (8)팔의 내측 절단 지점; (9)팔뚝의 내측 절단 지점; (10)차실 동맥; (11)상아동맥; (12)중간 동맥; (13)표면 방사형 동맥; (14)울나르 동맥; (15)중위 신경의 모터 가지를 프로내터 테레스 근육으로; (16)굴곡 잉어 낭근근육에 대한 중도 신경의 모터 분지; (17)중추 신경의 모터 분지에서 굴곡으로 피상성 근육; (18)굴곡디지도룸 근에 대한 중추 신경의 모터 분지; (19)중구 신경의 감각 분지 내더너 영역; (20)제1 골반 공간의 공통 팔마 동맥; (21)첫 번째 자리의 방사형 팔마 디지털 동맥; (22)중위 신경의 모터 가지를 근육에 공급한다; (23)팔마 동맥 아치; (24)첫 번째 자리의 방사형 팔마 디지털 신경; (25)제1자리의 울나르 나마 디지털 신경; (26)제3 골반 공간의 공통 팔마 동맥; (27)중추 신경의 말단 의 모터 가지는 처음 3개의 광활근육으로; (28)울나르 는 제2, 제3, 제4자리의 디지털 신경을 자극한다. (29)울나르 는 디지털 동맥을 네 번째 및 다섯 번째 자리로; (30)제2, 제3, 제4자리의 방사형 palmar 디지털 신경; (31)5자리의 방사형 팔마 디지털 동맥; (32)포발(청색 그늘진 영역)에서 중앙신경의 피부 영역. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2: 팔과 겨드랑이 부위의 중간 신경의 외과 적 해부학을 나타내는 쥐의 오른쪽 앞다리 사진.
Cr, 두개골; 나, 중간이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도 3: 수술 후 100일의 기간에 걸쳐 상이한 실험군에서 양성 포지티브 테스트를 가진 쥐의 백분율. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도 4: 상이한 실험군에서 반대쪽 발로 정규화된 수술된 포반에서 누적 핀 찌르기 시험 결과를 이용한 Nociception 평가.
세로 막대는 95% 신뢰 구간을 나타냅니다. 그림의 위쪽 부분의 수평선은 실험 군***p&0.001 간의 통계적으로 유의한 차이를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5: 다른 실험 그룹에서 사다리 실행 테스트의 평균 속도.
세로 막대는 95% 신뢰 구간을 나타냅니다. 그림의 위부분에 있는 별표는 그룹 간의 통계적으로 유의한 차이인 *p&0.001을 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 6: Sham 및 절제 그룹에서 로프 테스트에서 평균 등반 속도.
세로 막대는 95% 신뢰 구간을 나타냅니다. 그림의 위부분에 있는 별표는 그룹 간의 통계적으로 유의한 차이를 보여 준다, *p&0.05; ** p<0.01. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 7: 상이한 실험 군에서 트랙 파라미터를 걷는다.
작동 된 사지의 값은 반대 측다리로 정규화 된 수단의 백분율로 표현됩니다. (A)자세 요인; (B)인쇄 길이; (C)손가락 확산 인자; (D)중간 손가락 확산 인자; (E)보폭 길이; (F)지원 의 기지. 세로 막대는 95% 신뢰 구간을 나타냅니다. 그림의 위부분에 있는 수평선은 실험 군 간의 통계적으로 유의한 차이를 나타낸다. D30, D60, D90 = 수술 후 30일, 60일 및 90일, *p&0.05; ** p<0.01; p&0.001. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 8: 적외선 열화상에 의해 등록된 평균 온도 차이.
상자 플롯은 샴(n=17) 및 절제(n=17) 그룹에서 작동측(오른쪽)의 중앙신경의 팔마 영역과 반대측(왼쪽) 사이의 온도 차이를 나타낸다(n=17) 그룹, *p&0.05; Sham ** p<0.01. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
도 9: 수술 후 처음 45일 동안 절제기로부터 동물의 전형적인 적외선 열모학 패턴. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 10: 수술 후 90일 후에 샴 및 신경 이식 그룹에서 온 동물의 화합물 근육 작용 전위(CMAP)의 전형적인 패턴. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. CMAPs
그림 11: 서로 다른 실험 그룹에서 수술 후 90일 동안 양쪽 포발에 대한 손목 굴곡 강도의 평가.
손목 굴곡 강도는 30s의 기간에 걸쳐 곡선 (AUC) 아래 영역을 사용하여 상급 자극을 사용하여 평가되었다. 세로선은 95% 신뢰 구간을 나타냅니다. 그림의 위쪽 부분의 가로선은 그룹 간의 통계적으로 유의한 차이인**p<0.01을 강조 표시합니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 12: 플렉서 카르피 방사형 근육 무게 및 거시적 외관 100 수술 후 일.
(a)상이한 실험군에서 정규화된 굴곡카르피 방사형 근육 무게를 묘사한 박스 플롯, **p&0.01; p&0.001. (B) Sham 및 절제 실험 그룹에서 좌우 근육의 사진. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
| 매개 변수 | 매개 변수 유의성 | 샴 그룹 | 절제 그룹 | NG 그룹 |
| 신경 자극 임계값 (%) | CMAP 또는 가시적인 근육 수축을 생성하는 데 필요한 최소한의 신경 섬유가 있기 때문에 신경 재생의평가(12) | 281.63 ± 271.65 | 5359.98 ± 3466.52 | 2108.12 ± 2115.13 |
| 모터 자극 임계값(%) | CMAP 또는 가시적인 근육 수축을 생성하는 데 필요한 최소한의 신경 섬유가 있기 때문에 신경 재생의평가(12) | 462.52 ± 118.91 | 1694.10 ± 503.24 | 1249.50 ± 503.24 |
| 대기 시간(%) | 가장 빠른 신경 섬유에서 신경 전도 속도의 평가, 즉 가장 큰 골수화 섬유 를 말하는44 | 113.55 ± 25.04 | 해당/A | 132.80 ± 69.95 |
| 신경 근육 전달 속도 (%) | 가장 빠른 신경 섬유에서 신경 전도 속도의 평가, 즉 가장 큰 골수화 섬유 를 말하는44 | 92.01 ± 20.88 | 해당/A | 91.30 ± 26.51 |
| CmAP 진폭(%) | 재인두 모터 유닛 수 평가34 | 110.63 ±45.66 | 해당/A | 41.60 ± 24.84 |
| CmAP 지속 시간(%) | 근육 내산화의 동기화의 평가, 이는 근육 의 정도에 따라 근육 재원화 및 내분모터 섬유의 수질화44,,45 | 101.12 ± 23.92 | 해당/A | 151.06 ± 54.52 |
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NG,신경 이식 CmAP,화합물 근육 활동 잠재력. 해당 되지않는 모든 매개 변수는 평균 반대 값의 백분율로 표시됩니다. 숫자 변수는 평균 ± 표준 편차로 표현됩니다. |
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표 1: 실험의 끝에 전기 신경 근학 평가.
Discussion
이 논문은 쥐에서 MN 병변 및 수리의 다른 모형을 만드는 프로토콜을 제출합니다. 추가적으로, 몇몇 비침범성 행동 시험 및 생리적인 측정을 사용하여 이 신경의 기능적인 회복을 평가하는 방법을 보여줍니다.
특히, 이 논문에 기술된 몇 가지 기능적 시험, 즉 사다리 달리기 테스트 및 로프 테스트는 음식 보상51,,52,,53을획득할 것으로 예상되는 쥐의 의지에 크게 의존한다. 특정 쥐 균주는51,,52,,53의이 유형의 시험에서 재현 가능하게 훈련하고 수행하는 것이 더 의무적이라는 점에 유의해야합니다. 예를 들어, 루이스 랫트는 훈련 단계와 이후에51,,52,,53모두에서 이러한 시험에서 저조한 성능을 발휘한다.
쥐 하우징은 실험 동물이 기능 시험19에존재하는 일부 요소에 익숙해 질 수 있도록하는 것 외에도, 그들의 자연적인 탐구 행동과 일치하여 충분한 이동의 자유를 허용해야한다. 따라서 이동의 더 높은 자유를 허용하는 다양한 형태의 하우징이 표시됩니다. 큰 케이지는 나중에 기능 테스트 (예 : 로프 및 사다리)에 사용되는 농축 요소로 개인화됩니다.
틀림없이, 이러한 농축 원소는 통합된 러닝 휠및 개별 훈련 구체를 가진 케이지뿐만 아니라 말초 신경계에서 수술된 인간 환자에게 제공되는 것과 유사한 수술 후 물리 치료의 형태를제공한다(10).
중요한 것은, 몇몇 저자는 피하 조직 및 근육 근막을 무뚝뚝하게 또는 숫자 15 메스로 깨끗한 절단에 의해 해부하는 것을 옹호하더라도, 이 구조물을 해부할 때 thermocautery의 사용은 수술 후 혈종의 리스크를 극소화하기 위하여 추천됩니다.
쥐에서 말초 신경 수리의 다른 양상, 즉 축축성 재생, 표적 회복 및 기능 적 회복을 테스트하기 위해 수많은 검사가 고안되었으며, 그 중 일부는 본 연구의 범위를 벗어난29,,54,,55,,56. 예를 들어, 운동학 분석29,,36,,55 및 조직체학 평가29,,36,,57은 여러 저자에 의해 널리 사용된다. 또한 이러한 테스트 중 몇 가지는 효율성 및/또는 재현성을 최대화하기 위한 변형을 포함합니다54. 예를 들어, 기계적 algismetry(즉, 기계적 고통스러운 자극에 대한 반응의 평가)는 본 논문에 기재된 바와 같이 주어진 폰 프레이 필라멘트를 사용하여 정성적으로 평가될 수 있거나, 또는 반정적으로 연속적으로 강한 폰 프레이 필라멘트를 사용하거나, 또는 인출 반응이 관찰될 때까지 증가압력을 가하는 전자 장치를 사용하여30,,54.
유사하게, 몇몇 저자는 쥐에 있는 앞다리 신경 수선평가를 걷기 궤도 분석을 이용하더라도, 그밖 저자는 단 하나 MN 병변이 수시로 발인쇄10,,58,,59에있는 재현가능한 변경을 생성하지 못한다는 것을 주장합니다. 또한, 일부는 이러한 변화가 근육 회복에 비례하지 않을 수 있음을 밝혔다10,,60. 이를 염두에 두고, 일부 연구자들은 주로 분절 신경 재건 후가 아닌 네브 병변을 분쇄한 후 회복을 평가할 때 포발에 보행 트랙 분석의 사용을 옹호했다,10, 50,50,61.
파악 테스트는 MN16,,27에의해 제어되는 근육의 운동 회복을 평가하는 데 널리 사용됩니다. 이 시험을 통해 얻은 데이터의 균일성과 재현성을 보장하기 위해 Bertelli 등16에서 제안한 잘 확립된 방법을 사용하여 파악 테스트를 적용하는 것이 좋습니다. 그러나, 현재의 프로토콜은 과도한 스트레스11,,27을방지하기 위해 반대쪽 발을 일상적으로 움직이지 않는다는 점에서 다릅니다. 또한 다른 저자는 부상되지 않은 발을 고정 한 후 동력계 또는 스케일27,56을사용하여 파악 테스트를 정량적으로 평가한다는 점에 유의해야합니다. 그러나, 이러한 정량적 평가는 연구원이 쥐의꼬리(26)에적용하는 강도에 의해 영향을 받을 수 있다. 더욱이, 디지털 굴곡 근육에 의해 생성된 강도(쥐의 MN과 잡는 시험의 대상체9)에의해 생성된 강도와 손목 굴곡에 의해 생성된 강도로부터 구별하기 어렵고, 이는 척골신경으로부터,10,그 내성을 받는 굴곡 카르피 척골을포함한다. 이러한 잠재적 편견을 우회하기 위해, 이 프로토콜은 일반적으로 인간에서 근력을 등급화하는 데 사용되는 의학 연구 위원회 규모와 유사한 서수 척도를 사용10,,11,,62. 대안적으로, 다른 저자는 비디오 분석 및 비디오 기반 채점시스템(11,,63)을이용한 파악에 대한 상세한 평가를 기술했다.
Sciatic 신경에 비해 MN을 사용하는 잠재적인 단점은 후자의 신경에 관하여 더 많은 양의 정보를 사용할 수 있다는 것입니다. 이는, 차례로, MN으로 얻은 데이터를 이전의 실험 작업의 그것과 비교하는 것을 더 어렵게 만들 수 있다46,,48,,64. 또한, Sciatic 신경에 비해 MN의 작은 크기는 외과조작을더 어렵게8,12,,27,,56,,65.
본 백서에 기재된 방법론과는 달리, 전기신경근사 평가는 팔 및 더너영역(51)에배치된 경피적 단극성 전극을 사용하여 수행될 수 있다. 덜 침습적임에도 불구하고, 이 방법은 팔부위9,51에서척골 신경의 비용 모방의 가능성으로 인해 잠재적 인 혼란의 위험을 수반한다.
대부분의 저자는 쥐에 사용되는 모든 테스트가 일치하는 결과를 제공하는 것을 동의, 말초 신경 수리는 요인의 복잡한 배열에 따라 달라집니다, 신경 생존을 포함, 축삭 연신 및 가지 치기, 시냅토 발생, 탈지 감각 기관과 모터 단위의 성공적인 탈환, 뇌 가소성7,,10,,50,,66, 67.66,
마지막으로, 설치류 모델의 중요한 주의 사항은 쥐 말초 신경이 최종 장기에 훨씬 가깝고 상동 인간 구조보다 훨씬 작은 단면적을 가지고 있다는 점에 유의해야합니다. 그러나, 이러한 크기 차이는 설치류에서 더 빠른 실험 데이터를 보장하며, 인간과 비교하여 쥐의 전반적인 더 나은 결과는68로예상된다. 실제로, 몇몇 저자는 인간에게 설치류를 사용하여 말초 신경 복구에서 얻은 실험 데이터를 추정하는 것을 시도할 때 주의를 이용해야 한다는 것을경고합니다 7,,69. 영장류 모델은 더 비교70간주됩니다. 그럼에도 불구하고, 그들의 사용은 윤리적, 물류 및 예산 제약 을 괴롭히는 것과 관련이 있습니다71.
비록 자막 신경말초 신경 연구에서 가장 일반적으로 사용되는 신경이지만, 쥐 MN은 여러 가지 장점을 제시한다. 예를 들어, MN 병변은 영향을받는 발11,,12,,16,,56의공동 계약 및 자동 절단의 작은 발생률과 연관된다. 크게, sciatic 신경 transection에 후속 자동 절제술은 쥐의 11-70%를 괴롭습니다. 이로 인해 좌골지수와 같은 전류 평가가 불가능할 수 있습니다14. 이는, 차례로, 주어진 통계적 전력을 획득하는 데 필요한 동물의 수를 추정하여 번거롭게한다(15).
또한 MN이 근막신경보다 짧기 때문에,신경 회복이58, 72,73,,,74,,75,,76으로더 빨리 관찰된다.73 또한, MN은 근육 덩어리에 의해 커버되지 않습니다, 그것의 해부는 기술적으로 더 쉽게 심막 신경의 그것 보다는16. 추가적으로, MN은 무기에 있는 척골 신경에 평행한 경로를 가지고 있습니다. 따라서, 척골 신경은 MN 부상을 복구하기위한 신경 이식편으로 쉽게 사용할 수 있습니다. 마지막으로, 인간에서, 대부분의 말초 신경 병변은 쥐77,,78에서이신경의 사용을 더 지원하는 상지에서 발생합니다.
틀림없이, 설치류는 말초 신경 수리 의 영역에서 가장 일반적으로 사용되는 실험 동물(48,,79)이다. 도시된 바와 같이, 랫트 MN은 말초 신경 병변 및 수리의 편리한 모델이다. 사실, 모터와 감각 회복을 평가하는 데 사용할 수있는 여러 표준화 된 전략이 있으며, 결과36, 46,60,,8080,81,82의쉬운 비교를 허용합니다.81 이러한 방법의 대부분은 비 침습적, 매일 평가를 허용.
또한 물리 치료는 말초 신경 부상에서 회복하는 환자의 치료 기준의 일부입니다. 이 논문에서 입증된 바와 같이, MN부상에제출된 쥐에 수술 후 물리 치료와 같은 환경을 제공하는 여러 전략이 있다4,5. 따라서, 이 모델은 임상 시나리오를 복제하는 데 특히 적합하며, 인간 종12,,27,48,,56,,58,,,83에대한 결과의 외삽을 용이하게한다.
이 백서에 나타난 바와 같이, 쥐의 MN 모델에서 모터 및 감각 회복을 평가하기 위해 여러 표준화된 전략을 사용할 수 있습니다. 이들의 대다수는 빈번한 평가를 허용하는 비침범성 절차입니다. 더욱이, 인간 종에 있는 대부분의 말초 신경 병변이 상지에서 생기기 때문에, 언급한 실험적인 물리 치료 조정은 임상 문맥에서 복구를 더 적당히 모방할 수 있습니다. 틀림없이, 이것은 인간 종에 결과의 추정을 촉진 할 수 있습니다, 더 쥐에이 신경의 사용을 검증.
Disclosures
저자는 공개 할 것이 없다.
Acknowledgments
디오고 카살은 고급 의학 교육 프로그램으로부터 보조금을 받았으며, 이 프로그램은 포르투갈의 Fundação Calouste Gulbenkian, Fundação Champalimaud, Ministério da Saúde e Fundação para a Ciência e Tecnologia가 후원합니다. 저자는 그림 1의일러스트 그림에 대한 씨 필리페 프랑코에 매우 감사드립니다 . 저자는 비디오 촬영 및 편집에 씨 알베르토 세베리노의 기술적 인 도움에 감사드립니다. 마지막으로, 저자는 동물 획득 및 유지 보수에 관련된 모든 물류 측면에서 그녀의 도움을 사라 마르케스 씨에게 감사드립니다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetaminophen | Amazon | https://www.amazon.com/Childrens-Tylenol-grape-flavor-ages/dp/B0051VVVZG | |
| Acland clamps | Fine Science Tools | 00398 V | http://www.merciansurgical.com/aclandclamps.pdf |
| Acland Single Clamps B-1V (Pair) | Fine Science Tools | 396 | http://www.merciansurgical.com |
| Biogel Surgical Gloves | Medex Supply | 30465 | https://www.medexsupply.com |
| BSL Analysis | BIOPAC Systems | https://www.biopac.com/ | |
| Castroviejo needle holders | Fine Science Tools | 12565-14 | http://s-and-t.ne |
| Clamp applicator | Fine Science Tools | CAF-4 | http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf |
| Constante voltage stimulator | BIOPAC Systems | STM200 | https://www.biopac.com/product/constant-voltage-stimulator-unipolar-pulse/ |
| Cutasept skin disinfectant | Bode Chemie | http://www.productcatalogue.bode-chemie.com/products/skin/cutasept_f.php | |
| Dafilon 10-0 | G1118099 | http://www.bbraun.com/cps/rde/xchg/bbraun-com/hs.xsl/products.html?prid=PRID00000816 | |
| Derf Needle Holders 12 cm TC | Fine Science Tools | 703DE12 | http://www.merciansurgical.com |
| Dry heat sterilizer | Quirumed | 2432 | http://www.quirumed.com/pt/material-de-esterilizac-o/esterilizadores |
| Dynamometer | SAUTER | FH5 | https://www.sauter.eu/shop/en/measuring-instruments/force-measurement/FH-S/ |
| Electroneuromiography setup | BIOPAC Systems | MP36 | https://www.biopac.com/product/biopac-student-lab-basic-systems/ |
| Ethilon 5-0 | W1618 | http://www.farlamedical.co.uk/ | |
| FLIR Software | FLIR | ||
| Graeffe forceps 0.8 mm tips curved | Fine Science Tools | 11052-10 | http://www.finescience.de |
| Graph paper | Ambar | ||
| Heat Lamp HL-1 | Harvard Apparatus | 727562 | https://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/haisku3_10001_11051_39108_-1_HAI_ProductDetail_N_37610_37611_37613 |
| Heparin Sodium Solution (Heparin LEO 10000IU/ml) | Universal Drugstore | http://www.universaldrugstore.com/medications/Heparin+LEO/10000IU%2Fml | |
| High-Temperature Cautery | Fine Science Tools | AA03 | http://www.boviemedical.com/products_aaroncauteries_high.asp |
| Homeothermic Blanket System with Flexible Probe | Harvard Apparatus | 507220F | https://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/haisku3_10001_11051_39108_-1_HAI_ProductDetail_N_37610_37611_37613 |
| Infrared camera | FLIR | E6 | http://www.flir.eu/instruments/e6-wifi/ |
| Instrapac - Adson Toothed Forceps (Extra Fine) | Fine Science Tools | 7973 | http://www.millermedicalsupplies.com |
| Iris Scissors 11.5 cm Curves EASY-CUT | Fine Science Tools | EA7613-11 | http://www.merciansurgical.com |
| Ketamine hydrochloride/xylazine hydrochloride solution | Sigma- Aldrich | K113 | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/k113?lang=pt®ion=PT |
| Lacri-lube Eye Ointment 5g | Express Chemist | LAC101F | http://www.expresschemist.co.uk/lacri-lube-eye-ointment-5g.html |
| Mayo Scissors 14 cm Straight Chamfered Blades EASY-CUT | Fine Science Tools | EA7652-14 | http://www.merciansurgical.com |
| Meloxicam | Recropharma | Mobic | https://www.recropharma.com/product-pipeline/meloxicam |
| Methylene Blue solution | Sigma- Aldrich | https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product | |
| Micro Jewellers Forceps 11 cm straight 00108 | Fine Science Tools | JF-5 | http://www.merciansurgical.com |
| Micro Jewellers Forceps 11cm angulated 00109 | Fine Science Tools | JFA-5b | http://www.merciansurgical.com |
| Micro retractor | Fine Science Tools | RS-6540 | http://www.finescience.de |
| Micro Scissors Round Handles 15 cm Straight | Fine Science Tools | 67 | http://www.merciansurgical.com |
| Micro-vessel dilators 11 cm 0.3 mm tips 00124 | Fine Science Tools | D-5a.2 | http://www.merciansurgical.com |
| Monosyn 5-0 | 15423BR | http://www.mcfarlanemedical.com.au/15423BR/SUTURE-MONOSYN-5_or_0-16MM-70CM-(C0023423)-BOX_or_36/pd.php | |
| Normal saline for irrigation | Hospira, Inc. | 0409-6138-22 | http://www.hospira.com/en/search?q=sodium+chloride+irrigation%2C+usp&fq=contentType%3AProducts |
| Operating microscope | Leica Surgical Microsystems | http://www.leica-microsystems.com/products/surgical-microscopes/ | |
| Skin Skribe Surgical Skin Marker | Moore Medical | 31456 | https://www.mooremedical.com/index.cfm?/Skin-Skribe-Surgical-Skin-Marker/&PG=CTL&CS=HOM&FN=ProductDetail&PID=1740&spx=1 |
| Snacks | Versele-Laga | Complete Crock-Berry | http://www.versele-laga.com/en/complete/products/complete-crock-berry |
| Straight mosquito forcep | Fine Science Tools | 91308-12 | http://www.finescience.de |
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