Summary
Questo protocollo dimostra come utilizzare il software Auto-CHO per la sintesi gerarchica e programmabile di oligosaccharides. Descrive anche la procedura generale per gli esperimenti di determinazione RRV e la glicosilazione di SSEA-4.
Abstract
Questo articolo presenta un protocollo sperimentale generale per la sintesi programmabile di oligosaccharide e dimostra come utilizzare il software Auto-CHO per generare potenziali soluzioni sintetiche. L'approccio programmabile di sintesi di oligosaccharide è progettato per potenziare la sintesi rapida di oligosaccharide di grandi quantità utilizzando blocchi costitutivi del tioglicoside (BBL) con l'ordine sequenziale appropriato dei valori di reattività relativi (RRV). Auto-CHO è un software multipiattaforma con un'interfaccia utente grafica che fornisce possibili soluzioni sintetiche per la sintesi programmabile di oligosaccharide monopot ricercando una libreria BBL (contenente circa 150 bbL convalidate e >50.000 BBL virtuali) con RRV stimati con precisione per regressione vettoriale di supporto. L'algoritmo per la sintesi gerarchica di un piatto è stato implementato in Auto-CHO e utilizza frammenti generati da reazioni one-pot come nuovi BBL. Inoltre, Auto-CHO consente agli utenti di fornire feedback per bbL virtuali per mantenere quelli preziosi per un ulteriore utilizzo. In questo lavoro viene dimostrata la sintesi one-pot dell'antigene embrionale 4 (SSEA-4), che è un pennarello flessibile di cellule staminali embrionali umane, in questo lavoro.
Introduction
I carboidrati sono onnipresenti in natura1,2, ma la loro presenza e modalità di azione rimangono un territorio inesplorato, principalmente a causa del difficile accesso a questa classe di molecole3. A differenza della sintesi automatizzata di oligopeptidi e oligonucleotidi, lo sviluppo della sintesi automatizzata degli oligosaccaridi rimane un compito formidabile e i progressi sono stati relativamente lenti.
Per affrontare questo problema, Wong et al. ha sviluppato il primo metodo automatizzato per la sintesi di oligosaccarides utilizzando un programma software programmabile chiamato Optimer4, che guida la selezione di BBL da una libreria di 50 BBL per un monopiatto sequenziale Reazioni. Ogni BBL è stato progettato e sintetizzato con reattività ben definita sintonizzata da vari gruppi di protezione. Utilizzando questo approccio, le complessità di protezione della manipolazione e della purificazione intermedia possono essere ridotte al minimo durante la sintesi, che sono state considerate le questioni più difficili da superare nello sviluppo della sintesi automatizzata. Nonostante questo progresso, il metodo è ancora abbastanza limitato, come il numero di BBL è troppo piccolo e il programma Optimer in grado di gestire solo alcuni piccoli oligosaccharides. Per oligosaccharides più complessi che richiedono più BBL e passaggi multipli di reazioni one-pot e condensa di frammenti, è stata sviluppata una versione aggiornata del programma software, Auto-CHO5.
In Auto-CHO, sono stati aggiunti più di 50.000 BBL con reattività definita nella libreria BBL, tra cui 154 sintetici e 50.000 virtuali. Questi BBL sono stati progettati dall'apprendimento automatico sulla base di proprietà di base, spostamenti chimici NMR calcolati6,7, e descrittori molecolari8, che influenzano la struttura e la reattività dei BBL. Con questo programma aggiornato e un nuovo set di BBL disponibili, la capacità di sintesi viene espansa e, come dimostrato, diversi oligosaccharidi di interesse possono essere rapidamente preparati. Si ritiene che questo nuovo sviluppo faciliterà la sintesi di oligosaccharides per lo studio dei loro ruoli in vari processi biologici e il loro impatto sulle strutture e le funzioni di glicoproteine e glicolididi. Si pensa anche che questo lavoro andrà a beneficio della comunità della glicoscience in modo significativo, dato che questo metodo è a disposizione della comunità di ricerca gratuitamente. La sintesi del marcatore essenziale di cellule staminali embrionali umane, SSEA-45, è dimostrata in questo lavoro.
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Protocol
1. Manipolazione del software Auto-CHO
- Installazione di Java Runtime Environment: assicurati che Java Runtime Environment (JRE) sia stato installato nel dispositivo. Se JRE è stato installato, andare al passaggio successivo, "inizializzazione del software"; in caso contrario, scaricare e installare JRE in base al sistema operativo dell'utente disponibile all'indirizzo:
- Inizializzazione del software: accedere al sito Web Auto-CHO all'indirizzo
- Per gli utenti di Windows, decomprimere il file Auto-CHO_Windows.zip e fare doppio clic su Auto-CHO.jar nella cartella Auto-CHO_Windows per avviare il programma.
NOTA: l'utente deve installare il software di decompressione, ad esempio 7-zip, disponibile all'indirizzo - Per gli utenti di macOS, fare clic con il pulsante destro del mouse su Auto-CHO.jar e scegliere Apri per avviare il programma.
- Per gli utenti Ubuntu:
- Installare libcanberra-gtk utilizzando il seguente comando:
- sudo apt-get install libcanberra-gtk - Modificare l'autorizzazione di accesso di Auto-CHO_Ubuntu.sh:
chmod 755 Auto-CHO_Ubuntu.sh - Eseguire il programma Auto-CHO:
./Auto-CHO_Ubuntu.sh
- Installare libcanberra-gtk utilizzando il seguente comando:
- Per gli utenti di Windows, decomprimere il file Auto-CHO_Windows.zip e fare doppio clic su Auto-CHO.jar nella cartella Auto-CHO_Windows per avviare il programma.
- Immettere la struttura glicana desiderata. Scegliere se disegnare una struttura glicana o leggere un file di struttura esistente.
- Input mediante disegno:
- Fare clic su Edit Glycan di GlycanBuilder9,10 (Figura 1, btn1; Figura 2A) o l'area fare clic qui per modificare la destinazione sintetica per disegnare e modificare la struttura della query da GlycanBuilder. Le informazioni di collegamento e chiralità non devono essere ignorate. Fare clic sui pulsanti Globo-H, SSEA-4o OligoLacNAc (Figura 1, esempi) per visualizzare gli esempi.
- Selezionare il file Esportazione in formati di sequenza Esportazione in GlycoCT condensata per salvare la struttura modificata (opzionale).
- Chiudere la finestra di dialogo GlycanBuilder per completare la modifica.
- Inserire leggendo un file:
- Fare clic su Edit Glycan di GlycanBuilder (Figura 1, btn1; Figura 2A) o l'area Fare clic qui per modificare la destinazione sintetica per modificare la struttura della query.
- Selezionare il file Importa da formati di sequenza per scegliere il file della struttura della query con il formato corrispondente.
- Input mediante disegno:
- Impostazioni dei parametri di ricerca (facoltativo).
- Definire i parametri di ricerca nella scheda "Impostazioni parametri"(Figura 1, tab2) per ottenere risultati di ricerca ragionevoli.
nota:
Soglia di RRV di alta classe deve essere un numero reale e 0.
Soglia di classe media RRV deve essere un numero reale e 0.
Soglia di RRV di alta classe deve essere >Soglia di classe media RRV.
Numero di frammento massimo deve essere un numero intero e 1.
Numero BBL in un frammento deve essere un numero intero e tra 1 e 3.
Numero massimo BBL in un frammento deve essere un numero intero e tra 1 e 3.
Numero massimo BBL in un frammento deve essere numeroMin BBL in un frammento.
Min Donatore/Accettatore RRV La differenza deve essere un numero reale positivo.
Min Donor/Acceptor RRV Ratio deve essere un numero reale positivo.
Max Donor/Acceptor RRV Ratio deve essere un numero reale positivo.
Max Donor/Acceptor RRV Ratio deve essere >Min Donor/Acceptor RRV Ratio. - Fare clic sul pulsante OK per abilitare le nuove impostazioni.
- Definire i parametri di ricerca nella scheda "Impostazioni parametri"(Figura 1, tab2) per ottenere risultati di ricerca ragionevoli.
- Selezionare la libreria di blocchi predefiniti(Figura 1, tab5). L'impostazione predefinita prevede la ricerca solo nella libreria sperimentale. Se si desidera eseguire la ricerca nelle librerie sperimentali e virtuali, attenersi alla seguente procedura.
- Selezionare la scheda Libreria di blocchi predefiniti virtuali (Figura 2C, scheda5). I blocchi di costruzione sperimentali e virtuali possono lavorare insieme per migliorare la capacità di ricerca di Auto-CHO. Attualmente, Auto-CHO fornisce più di 50.000 blocchi predefiniti virtuali con RRV previsti nella libreria.
- Selezionare Usa librerie sperimentali e virtuali e applicare il filtro per visualizzare i blocchi predefiniti virtuali con determinati criteri. Fare clic sul pulsante Mostra BBL virtuali selezionati (Figura 2C, btn5) per visualizzare solo i blocchi predefiniti virtuali selezionati.
- Fare clic sul pulsante Mostra BBL virtuali filtrati (Figura 2C, btn6) per visualizzare solo i blocchi predefiniti virtuali con determinati criteri definiti dall'utente.
- Fare clic sul pulsante Mostra tutti i BBL virtuali (Figura 2C, btn7) per visualizzare tutti i blocchi predefiniti virtuali disponibili e reimpostare il filtro.
- Controllare uno o più blocchi predefiniti virtuali desiderati che l'utente desidera utilizzare per la ricerca.
- Selezionare la scheda Struttura query (Figura 1,scheda1) e fare clic sul pulsante Cerca libreria di blocchi predefiniti (Figura 1, btn2) per trovare le soluzioni sintetiche one-pot per la struttura di query. Quindi, confermare le impostazioni dei parametri.
- Eseguire ricerche nel visualizzatore di risultati.
NOTA: il risultato della ricerca viene visualizzato nella scheda Visualizzazione dei risultati ( Figura1, tab6). Gli accettatori finali di riduzione di diversi numeri di residuo vengono visualizzati nella colonna Riduzione end acceptor (Figura 1, visualizzatore1).- Selezionare un accettatore di fascia e ridurre e le soluzioni vengono visualizzate nell'elenco delle soluzioni sintetiche (Figura 1, visualizzatore2). I frammenti sono illustrati nell'elenco dei frammenti (Figura 1, viewer3) per suggerire quanti frammenti devono essere utilizzati nella sintesi.
NOTA: Il sistema fornisce informazioni dettagliate di ogni frammento, tra cui il RRV del frammento, resa computazionale e quale gruppo di protezione deve essere deprotetto per il successivo uso del frammento nella reazione one-pot. I blocchi predefiniti utilizzati per assemblare il frammento selezionato sono illustrati nel visualizzatore4 della figura 1. Il visualizzatore5 di Figura 1 visualizza anche le informazioni di connessione frammento. - Visualizzare e controllare le strutture chimiche e le informazioni dettagliate dei blocchi predefiniti selezionati nelle regioni rispettivamente della struttura chimica di Building Block e Building Block Browser,per i blocchi di costruzione sperimentali (Figura 1, tab4).
- Selezionare un accettatore di fascia e ridurre e le soluzioni vengono visualizzate nell'elenco delle soluzioni sintetiche (Figura 1, visualizzatore2). I frammenti sono illustrati nell'elenco dei frammenti (Figura 1, viewer3) per suggerire quanti frammenti devono essere utilizzati nella sintesi.
- Eseguire l'output del risultato della ricerca in testo (facoltativo).
- Selezionare la scheda Testo risultato (Figura 1, tab7).
- Fare clic su Salva testo risultato (Figura 2B, btn4) e scegliere la destinazione del file di testo.
- Feedback per i blocchi predefiniti virtuali (facoltativo).
NOTA: il feedback può essere fornito sui blocchi predefiniti virtuali tramite il questionario online. Il feedback può aiutare la community a mantenere utili blocchi fondamentali virtuali e rimuovere quelli inefficaci.- Selezionare la scheda Blocco predefinito virtuale (Figura 1, tab5).
- Fare clic sul collegamento Per valutare il blocco predefinito virtuale di cui si desidera valutare o commentare nella colonna Feedback.
- Compila il modulo di feedback dopo che il sistema ha aperto una pagina web e la invia.
NOTA: non modificare l'ID BBL virtuale.
2. Esperimenti di determinazione RRV
- In un flaasso rotondo da 10 mL, unire i due donatori tiogilli (0,02 mmol di ciascuno: Dr4 è il donatore di riferimento con NOto RRV; Dx1 è la molecola donatrice di RRV sconosciuto), metanolo assoluto (0,10 mmol) e Drierite in diclorometano (DCM, 1,0 mL), quindi mescolare a temperatura ambiente (RT) per 1 ora.
- Prendere un'aliquota di questa miscela (30 gradi centigradi) e iniettare la miscela nella cromatografia liquida ad alte prestazioni (HPLC) in tre iniezioni separate (10 -L per ogni iniezione). Misurare il coefficiente (a) tra l'assorbimento (A) e la concentrazione della molecola del donatore [D] nelle condizioni di separazione della linea di base (acetato di etere/n-Hexane - 20/80).
- Aggiungere nella miscela di reazione una soluzione di 0,5 M N-Iodosuccinimide (NIS) in acetonitrile (40 ,L, 0,02 mmol), seguita dall'aggiunta di una soluzione di acido trifluoromethanesulfonico da 0,1 M (TfOH) (20 , 0,002 mmol) e mescolare la miscela a RT per 2 h.
- Diluire la miscela di reazione con DCM (4,0 mL), filtrare e lavare con thiosulfate di sodio saturo contenente il 10% di carbonato di idrogeno di sodio (2x con volume di 5 mL ciascuno). Estrarre lo strato acquoso con DCM (3x con 5 mL). Unire tutto lo strato organico, lavarlo con 5 mL di salamoia e asciugarlo con circa 200 mg di solfato di magnesio anidro.
- Agitare leggermente la miscela per 30 s, filtrarla attraverso un imbuto con una carta da filtro scanalata per rimuovere il solfato di magnesio, quindi raccogliere il filtrato in un flacone rotondo-bottom da 25 ml. Rimuovere il solvente utilizzando un evaporatore rotante.
- Sciogliere il residuo in DCM (1,0 mL). Prendere un'aliquota di questa miscela (30 gradi centigradi) e iniettarla in HPLC in tre iniezioni separate (10 gradi per ogni iniezione). Misurare le concentrazioni dei donatori rimanenti ([Dx] e [Dref]) mediante HPLC nelle stesse condizioni di separazione (ether acetato/n-Hexane - 20/80) (Aref)t - 24417.0, (Ax)t 23546,3.
- Misurare la reattività relativa tra Dx1 e Dr4, kx1/kr4 , 0,0932. In base al valore di reattività relativo di Dr4, il valore di reattività relativo di Dx1 è 3.
N.B.: a : A/[D], (Aref)0 , 74530.1,(A)0 , 26143.0. k x/kref (ln[Dx]t - ln[Dx]0)/(ln[Dref]t - ln[Dref]0) : (ln[A x]t - ln[Ax]0)/(ln[Aref]t - ln[Aref]0) - 0,0932.
3. Glicosilation one-pot di SSEA-4
- Mettere una fiaschetta rotonda da 10 mL sotto vuoto, asciugarla a fiamma e lasciare raffreddare il pallone su RT mentre è ancora sotto vuoto. Rimuovere il setto di gomma per aggiungere una miscela di donatore disaccharide 1 (38 mg, 1,1 eq., 0,057 mmol), il primo accettatore 2 (40 mg, 1,0 eq., 0.053 mmol) e una barra magnetica rivestita di Teflon nel pallone.
- Trasferire 100 mg di setacci molecolari in polvere 4 in un fiaschetatore rotondo-fondo da 5 mL. Tenere questa fiaschetta sotto vuoto, asciugarla a fiamma e lasciare raffreddare il pallone in RT mentre è ancora sotto vuoto. Trasferire i setacci a 4 molecolari appena essiccati nel primo flacone che contiene il materiale di partenza.
- Trasferire 1 mL di DCM appena essiccato nel pallone. Mescolare la miscela di reazione per 1 h a RT e poi metterlo a una temperatura di -40 gradi centigradi. Trasferire il NIS (13 mg, 1.1 eq., 0.057 mmol) nel pallone.
- Iniettare TfOH (34 , 0,3 eq., 0,017 mmol, 0,5 M in etere) nella fiaschetta attraverso il setto utilizzando una siringa di micro-volume a -40 gradi centigradi. Continuare a mescolare a -40 gradi centigradi per 3 h.
- Dopo che il primo accettatore 2 è quasi consumato, iniettare la soluzione di accettatore 3 in DCM nel pallone attraverso il setto.
- Riscaldare la miscela di reazione fino a -20 gradi centigradi e trasferire NIS (19 mg, 1,6 eq., 0,083 mmol) nel pallone. Iniettare TfOH (34 , 0,3 eq., 0,017 mmol, 0,5 M in etere) nel flacone attraverso il setto a -20 gradi centigradi. Continuare a mescolare a -20 gradi centigradi per 3 h.
- Dopo che il prodotto della reazione del primo passo viene consumato, placare la reazione iniettando due equivalenti di ammina di trietilo. Rimuovere i setacci molecolari attraverso un imbuto filtrato pieno di Celite, raccogliere il filtrato in un pallone rotondo-fondo da 25 ml e lavare ulteriormente il filtro con 10 mL di DCM.
- Trasferire il filtrato in un imbuto separatore e lavarlo con tiosulto di sodio acquoso saturo contenente 10% NaHCO3 (2x con 10 mL ciascuno). Estrarre lo strato acquoso con DCM (3x con 10 mL). Unire gli strati organici e lavare il composto con salamoia (10 mL) e asciugarlo aggiungendo anhydrous MgSO4. Filtrarlo e raccogliere il filtrato in una fiaschetta rotonda-bottom da 100 ml.
- Rimuovere il solvente utilizzando un evaporatore rotante. Sciogliere la miscela grezza con circa 1 mL di DCM e caricarla sopra il letto di silice. Elutare il prodotto con una miscela di acetato etilico e toluene (EtOAc/toluene, 1/4 a 1/2) e raccogliere le frazioni.
- Rimuovere il solvente utilizzando un evaporatore rotante. Asciugare i residui sotto pressione ridotta per dare derivato SSEA-4 completamente protetto 4 (74 mg, 50% a base di accettatore 2) come schiuma bianca.
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Representative Results
Il risultato della ricerca Auto-CHO in base alle impostazioni dei parametri di default indica che SSEA-4 può essere sintetizzato da una reazione un pot [2 x 1 x 3]. Figura 3 Mostra lo screenshot del software del risultato di ricerca SSEA-4. Quando viene selezionato un tipo di fine riduzione trisaccore (Figura 3, etichetta 1), il programma mostra quattro possibili soluzioni per la query. La prima soluzione ha un frammento (Figura 3, etichetta 2) e il rendimento calcolato è di circa il 94%. Il frammento può essere sintetizzato da due BBL (Figura 3, etichetta 3). Il RRV del primo disaccharide BBL è 1462 e il RRV del secondo monosaccago è 32,0. L'etichetta 4 della figura 3 mostra la struttura chimica del primo BBL suggerito utilizzato nella reazione one-pot. L'esperimento one-pot mostra che SSEA-4 può essere sintetizzato con successo nel 43% di rendimento da questo suggerimento (Figura 4) ed è stato dimostrato anche nel lavoro precedente5. Le procedure sperimentali di dettaglio e la caratterizzazione dei composti menzionati, in particolare SSEA-4, si trovano nel riferimento citato5.
Figura 1: Schermata Auto-CHO. Gli utenti possono modificare la struttura del glicano di query, sfogliare le informazioni sui blocchi di costruzione sperimentali e virtuali e visualizzare le soluzioni sintetiche one-pot fornite dal software. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: screenshot parziali del software Auto-CHO. (A) Fare clic sul pulsante "Modifica Glycan di GlycanBuilder" (btn1) nella scheda "Struttura query" (scheda1) e il sistema apre la finestra di dialogo GlycanBuilder. (B) Selezionare "Testo risultato" (tab7) e fare clic su "Salva testo risultato" (btn4) per salvare i risultati della ricerca di testo. (C) Selezionare "Virtual Building Block Library" (tab5) e controllare i blocchi predefiniti virtuali desiderabili per la ricerca filtrando le opzioni. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Blueprint sintetico one-pot fornito dal programma Auto-CHO. Etichetta 1: Conduttore di estremità ridotto. Etichetta 2: Frammento. Etichetta 3: Blocco predefinito del frammento. Etichetta 4: Struttura chimica del blocco predefinito selezionato. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4: La strategia sintetica a un vaso [2 x 1 x 3] per SSEA-4. SSEA-4 può essere sintetizzato da tre unità suggerite da Auto-CHO: il blocco predefinito di disaccharide sialyl 1 (RRV-1,462), il blocco predefinito monosaccharide 2 (RRV-32.0) e la riduzione dell'acceleratore di estremità 3 (RRV-0). Questa cifra è stata modificata dalla nostra precedente pubblicazione5 con autorizzazione (sotto una licenza internazionale Creative Commons Attribution 4.0: http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/). Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
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Discussion
Il software Auto-CHO è stato sviluppato per aiutare i chimici a procedere gerarchica e programmabile sintesi one-pot di oligosaccharides5. Auto-CHO è stato costruito da linguaggio di programmazione Java. Si tratta di un software GUI e multipiattaforma, che attualmente supporta Windows, macOS e Ubuntu. Il software può essere scaricato gratuitamente per il sito Auto-CHO all'indirizzo
La libreria BBL di Auto-CHO contiene 154 BBL sperimentali e più di 50.000 BBL virtuali con RRV stimati con precisione. Tutte le ricerche di libreria vengono elaborate nel computer locale e non viene raccolta alcuna struttura di query dagli utenti. Poiché Auto-CHO non può garantire il successo della sintesi ad alto rendimento tra i BBL virtuali forniti dal programma (a causa di molti vincoli strutturali o fattori sconosciuti nelle reazioni chimiche), Auto-CHO fornisce un questionario di feedback online per i BBL virtuali. Si ritiene che il feedback degli utenti dalla comunità di ricerca può aiutare a mantenere preziosi BBL virtuali ed eliminare quelli inadatti. Un indirizzo e-mail è fornito per assistenza tecnica nel manuale dell'utente del software. Gli utenti possono contattare questo indirizzo se incontrano domande tecniche o problemi.
Qui vengono fornite due strategie di ricerca. Per le impostazioni dei parametri (sezione 1.4), si consiglia di impostare i parametri con criteri più rigorosi all'inizio. Se Auto-CHO non restituisce soluzioni sintetiche soddisfatte, si consiglia di utilizzare parametri più flessibili nella successiva esecuzione della ricerca. Per la selezione della libreria BBL (sezione 1.5), si consiglia di cercare la libreria sperimentale solo in un primo momento. Se il software non restituisce alcuna soluzione adatta, si consiglia di cercare librerie sperimentali e virtuali nelle seguenti iterazioni.
In sintesi, questo protocollo dimostra il funzionamento del software Auto-CHO e l'uso di Auto-CHO per la sintesi one-pot della molecola SSEA-4. Inoltre, viene descritto il protocollo programmabile one-pot. Auto-CHO è la GUI e il software open-source con libreria include BBL convalidati e virtuali, e supporta la sintesi gerarchica one-pot di oligosaccharides. Si ritiene che questo software può beneficiare la comunità di ricerca e oligosaccharides più essenziali possono essere sintetizzati da reazioni one-pot attraverso Auto-CHO per ulteriori ricerche.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Acknowledgments
Questo lavoro è stato sostenuto da Academia Sinica, tra cui il Summit Program, Ministry of Science and Technology [MOST 104-0210-01-09-02, MOST 105-0210-01-13-01, MOST 106-0210-01-15-02], e NSF (1664283).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acetonitrile | Sigma-Aldrich | 75-05-8 | |
| Anhydrous magnesium sulfate | Sigma-Aldrich | 7487-88-9 | |
| Cerium ammonium molybdate | TCI | C1794 | |
| Dichloromethane | Sigma-Aldrich | 75-09-2 | |
| Drierite | Sigma-Aldrich | 7778-18-9 | |
| Ethyl acetate | Sigma-Aldrich | 141-78-6 | |
| Methanol | Sigma-Aldrich | 67-56-1 | |
| Molecular sieves 4 Å | Sigma-Aldrich | ||
| n-Hexane | Sigma-Aldrich | 110-54-3 | |
| N-Iodosuccinimide | Sigma-Aldrich | 516-12-1 | |
| Sodium bicarbonate | Sigma-Aldrich | 144-55-8 | |
| Sodium thiosulfate | Sigma-Aldrich | 10102-17-7 | |
| Toluene | Sigma-Aldrich | 108-88-3 | |
| Trifluoromethanesulfonic acid | Sigma-Aldrich | 1493-13-6 |
References
- Apweiler, R., Hermjakob, H., Sharon, N. On the frequency of protein glycosylation, as deduced from analysis of the SWISS-PROT database. Biochimica Et Biophysica Acta. 1473 (1), 4-8 (1999).
- Sears, P., Wong, C. -H. Toward Automated Synthesis of Oligosaccharides and Glycoproteins. Science. 291 (5512), 2344-2350 (2001).
- Kulkarni, S. S., et al. “One-Pot” Protection, Glycosylation, and Protection-Glycosylation Strategies of Carbohydrates. Chemical Reviews. 118 (17), 8025-8104 (2018).
- Zhang, Z., et al. Programmable One-Pot Oligosaccharide Synthesis. Journal of the American Chemical Society. 121 (4), 734-753 (1999).
- Cheng, C. -W., et al. Hierarchical and programmable one-pot synthesis of oligosaccharides. Nature Communications. 9 (1), 5202 (2018).
- ChemDraw. , PerkinElmer Informatics. (2019).
- Cheeseman, J. R., Frisch, Æ Predicting magnetic properties with chemdraw and gaussian. , (2000).
- Yap, C. W. PaDEL-descriptor: An open source software to calculate molecular descriptors and fingerprints. Journal of Computational Chemistry. 32 (7), 1466-1474 (2011).
- Ceroni, A., Dell, A., Haslam, S. M. The GlycanBuilder: a fast, intuitive and flexible software tool for building and displaying glycan structures. Source Code for Biology and Medicine. 2, 3 (2007).
- Damerell, D., et al. The GlycanBuilder and GlycoWorkbench glycoinformatics tools: updates and new developments. Biological Chemistry. 393 (11), 1357-1362 (2012).
