Summary
Aqui, a tecnologia micróbios induzida da precipitação da calcita (micp) é apresentada para melhorar Propriedades do solo pela imersão.
Abstract
O objetivo deste artigo é desenvolver um método de imersão para melhorar a precipitação de calcita induzida microbialmente (MICP) amostras tratadas. Um reator de lote foi montado para mergulhar amostras de solo em meio de cimentação. Os meios da cimentação podem livremente difundir nas amostras do solo no reator do grupo em vez dos meios do cimentação que estão sendo injetados. Um molde flexível do contato cheio, um molde cheio rígido do contato, e um molde cored do tijolo foram usados para preparar suportes diferentes da amostra do solo. Fibras sintéticas e fibras naturais foram selecionadas para reforçar as amostras de solo tratadas com MICP. O CaCO precipitado3 em diferentes áreas das amostras tratadas com micp foi medido. Os resultados da distribuição do CaCO3 demonstraram que o caco3 precipitado foi distribuído uniformemente na amostra de solo pelo método de imersão.
Introduction
Como uma tecnologia biológica da melhoria de terra, a precipitação microbialmente induzida da calcita (MICP) é capaz de melhorar Propriedades da engenharia do solo. Foi usado para realçar a força, a rigidez, e a permeabilidade do solo. A técnica de micp tem ganhado muita atenção para a melhoria do solo no mundo1,2,3,4. A precipitação do carbonato ocorre naturalmente e pode ser induzida por organismos não patogénicos que são nativos ao ambiente do solo5. A reação biogeoquímica do micp é impulsionada pela existência de bactérias ureolíticas, ureia e uma solução rica em cálcio5,6. A Bacillus de sporosarcina é uma enzima de urease altamente ativa que catalisa a rede de reação em direção à precipitação da calcita7,8. O processo de hidrólise da ureia produz amônio dissolvido (NH4 +) e carbonato inorgânico (co32-). Os íons carbonáticos reagem com íons de cálcio para precipitar como cristais de carbonato de cálcio. As reações de hidrólise da ureia são mostradas aqui:
O CaCO precipitado3 pode lig as partículas da areia junto para melhorar as propriedades da engenharia do solo micp-Tratado. A técnica de micp tem sido aplicada em diversas aplicações, como a melhora da força e rigidez do solo, reparo de concreto e remediação ambiental9,10,11,12, 13 anos de , 14 anos de , quinze anos.
Zhao et al.16 desenvolveram um método de imersão para preparar amostras tratadas com micp. Um molde flexível do contato cheio feito do geotêxtil foi usado neste método. O CaCO precipitado3 distribuiu uniformemente ao longo de suas amostras tratadas com micp. Bu et al.17 desenvolveram um molde de contato completo rígido para preparar amostras de feixe tratadas com micp por meio de um método de imersão. A amostra tratada com MICP preparada por este método usando um molde de contato completo rígido pode formar a forma de feixe adequado. A amostra tratada com MICP foi dividida em quatro e os teores de CaCO3 foram medidos. O teor de CaCO3 variou de 8,4 ± 1,5% a 9,4 ± 1,2% em peso, o que indicou que o caco3 distribuiu uniformemente nas amostras tratadas com micp pelo método de imersão. Estas amostras tratadas com MICP também obtiveram melhores propriedades mecânicas. Esses bioespécimes tratados com MICP atingiram uma força de flexão de 950 kPa, semelhante à de 20-25% de amostras tratadas com cimento (600-1300 kPa). Li et al.10 adicionaram fibra discreta distribuída aleatoriamente no solo arenoso e trataram o solo pelo método de imersão do micp. Encontraram que a força de cisalhamento, a ductilidade, e a tensão da falha do solo MICP-tratado foram realçadas obviamente adicionando a fibra apropriada.
O método de imersão para o micp tem sido melhorado continuamente10,16,17. Este método pode ser usado para preparar amostras de solo tratadas com MICP e materiais de construção pré-fabricados tratados com MICP, como tijolos e vigas. As dimensões diferentes da geometria do molde da preparação da amostra foram desenvolvidas. As fibras foram adicionadas nas amostras tratadas com MICP para aprimorar suas propriedades. Este protocolo detalhado foi pretendido documentar os métodos da imersão para o tratamento de MICP.
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Protocol
Nota: todo o material relevante utilizado nos seguintes procedimentos não é perigoso. Equipamentos de proteção individual (óculos de segurança, luvas, jaleco, calças de corpo inteiro, sapatos fechados) ainda são necessários.
1. preparação de solução de bactérias
- Preparação do meio de crescimento (NH4-Ye Medium)
Nota: os componentes de meios de crescimento por litro de água deionizada são: 20 g de extrato de levedura; 10 g de (NH4)2so4; e tampão Tris 0,13 M (pH 9,0).- Autoclave ingredientes separadamente.
- Dissolver 20 g de extrato de levedura, e 10 g de (NH4)2então4 em 1 L de água deionizada contendo 0,13 M de tampão Tris.
- Misture os componentes em conjunto usando agitador magnético pós-esterilização.
- Procedimento de propagação de esporosarcina Bacillus
Nota: Utilize tubos de centrifugação de 50 mL neste experimento.- Descongelar as bactérias congeladas em um frasco.
- Abra o frasco.
- Transfira 0,1 mL de suspensão de bactérias para um tubo de centrifugação com 10 mL de meio de crescimento fresco. Misture bem à mão (a taxa de inoculação é 1:100). Repita 5 suspensões bacterianas mais com meio de crescimento. Prepare um tubo de controle apenas com 10 de meio de crescimento fresco no interior.
Nota: o crioprotectante utilizado no procedimento de congelamento/secagem pode inibir o crescimento no tubo primário. As tampas dos tubos foram apertadas frouxamente a fim manter a condição aeróbia. - Incubar todos os tubos em uma coqueteleira a 200 rpm a 30 ° c por 48 a 72 horas. Parar a incubação se o meio de crescimento torna-se turva após 48 h. caso contrário, estender a incubação para o máximo de 72 h.
- Centrifugue os tubos com bactérias e meio de crescimento em 4.000 x g por 20 min.
- Retire o sobrenadante, substitua com 25 mL de meio de crescimento fresco, e misture bem usando uma máquina vortex.
- Repita os passos 1.2.3-1.2.6 duas vezes para estimular plenamente a atividade das bactérias.
- Use a suspensão dos tubos na etapa 1.2.7 para inocular mais tubos com 25 mL de meio de crescimento para melhorar a cultura de bactérias (taxa de inoculação é 1:100).
- Incubar todos os tubos em uma coqueteleira a 200 rpm a 30 ° c por 48 horas.
- Centrifugue os tubos com bactérias e meio de crescimento em 4.000 x g por 20 min.
- Retire o sobrenadante, substitua com o meio de crescimento fresco, e misture bem usando uma máquina vortex.
- Ajuste a concentração de bactérias usando um meio de crescimento fresco antes dos experimentos de MICP. Calcule a concentração de bactérias por densidade óptica da suspensão a 600 nm, que foi medido usando um espectrofotômetro. O OD600 neste experimento foi de 0,6.
2. preparação dos meios de cementação
Nota: a mídia de cementação é usada para fornecer produtos químicos para induzir a precipitação da calcita durante o tratamento de MICP. A relação ureia-CA2 + molar é 1:1. Os componentes químicos dos meios de cementação são mostrados na tabela 1. O procedimento a seguir é para 20 L de meios de cementação com 0,5 M ca.
- Prepare 20 L de água em uma caixa de plástico.
- Dissolver 200 g de NH4Cl, 60 g de caldo nutriente, 42,4 g de NaHCO3, 600 g de ureia e 1470 g de CAcl2 ∙2h2o no 20 L de água destilada. Misture bem usando a haste de agitação.
3. preparação de moldes
- Preparação do molde flexível de contato completo (FCFM)
Nota: o molde flexível do contato cheio é feito do geotêxtil. O geotêxtil tem uma força elástica da garra de 1.689 N, uma força de rasgo trapezoidal de 667 N, um tamanho aparente da abertura de 0,15 milímetros, uma taxa de fluxo de água de 34 milímetros/s, uma espessura de 1,51 milímetros, e uma massa da unidade de 200 g/m2. O tamanho do molde pode ser variado para preparar tamanhos diferentes da amostra (por exemplo, amostra não confinada do teste da compressão ou amostra direta do teste da tesoura).- Como a FCFM consiste em uma parte anular, um fundo e uma tampa, corte o geotêxtil em partes constituintes da FCFM.
- Costurar as três partes da FCFM em conjunto, como mostrado na Figura 1.
- Preparação do molde de contato completo rígido (RFCM) para bio-tijolos
Nota: o molde cheio rígido do contato consiste em uma camada flexível e em um suporte rígido. A camada flexível é feita do mesmo geotêxtil que o FCFM. O suporte rígido é feito de uma folha perfurada do Polypropylene com os furos escalonada do diâmetro de 6,35 milímetros distribuídos na folha perfurada polipropileno e a distância do afastamento entre furos adjacentes é 9,53 milímetros. Um molde consiste em três câmaras e o tamanho de cada câmara é de 177,8 mm de comprimento, 76,2 mm de largura e 38,1 mm de altura. O tamanho de RFCM pode ser variado para preparar o tamanho de amostra diferente. Os furos no suporte rígido permitem o fluxo dos meios da cimentação através da camada flexível livremente.- Prepare a folha perfurada de polipropileno para peças constituintes do suporte rígido.
- Monte os pedaços de suporte rígido usando parafusos e porcas de plástico.
- Prepare as partes constituintes da camada flexível de geotêxtil. A camada flexível consiste em uma parte inferior e uma tampa.
- Coloque a parte inferior da camada flexível no suporte rígido.
- Uma vez que a areia é adicionada no molde, coloc a tampa da camada flexível e repare costurando na parte superior da amostra da areia como mostrado em Figura 2.
- Preparação do molde oco do tijolo
Nota: o molde oco do tijolo inclui um suporte rígido, uma camada flexível, e os tubos do cartão. O tamanho do tubo de papelão é 60 mm x 140 mm x 60 mm. Três câmaras são incluídas em um molde e o tamanho de cada câmara do molde é 177,8 milímetros do comprimento, 76,2 milímetros na largura e 38,1 milímetros na altura neste procedimento.- Prepare a folha perfurada de polipropileno para as peças constituintes do suporte rígido.
- Perfure furos na parte inferior da parte rígida do suporte. O tamanho dos furos é 61 milímetros no diâmetro. A localização dos furos em cada câmara é mostrada na Figura 3a.
- Monte as peças do suporte rígido usando parafusos e porcas de plástico.
- Monte os tubos de papelão nos furos perfurados na parte inferior do suporte rígido.
- Prepare as partes constituintes da camada flexível de geotêxtil. A camada flexível consiste em uma parte inferior e uma tampa. Furos também são necessários na camada flexível no mesmo local de tubos de papelão.
- Uma vez que a areia é adicionada no molde, coloc a tampa da camada flexível e repare costurando na parte superior da amostra da areia como mostrado em Figura 3b.
4. preparação do reator de lote
Nota: o reator mostrado na Figura 4 consiste em uma caixa plástica, em meios da cimentação, em uma prateleira suportada amostra, e em bombas de ar. As amostras de solo podem mergulhar inteiramente nos meios da cimentação quando os meios da cimentação podem livremente difundir nas amostras do solo por este método. A bomba de ar no reator fornece o oxigênio para bactérias. Para determinar os efeitos da oferta de oxigênio diferente no tratamento com micp catalisada por esporosarcina Bacillus, Li et al. 201718 realizaram testes de contraste em três condições diferentes: uma condição aerada, uma condição restrita ao ar e uma condição ao ar livre. Eles descobriram que uma condição bem oxigenada é essencial para melhorar os processos de MICP catalisada por bactérias aeróbias.
- Conecte a bomba de ar com o suprimento de ar usando uma mangueira plástica.
- Coloque a bomba de ar na caixa de plástico.
- Despeje a mídia de cementação na caixa de plástico.
5. preparação de amostras de solos
- Preparação da amostra de solo tratada com MICP
Nota: a areia de Ottawa (99,7% quartzo) é usada nos experimentos. A areia é uniforme com um tamanho de partícula mediano de 0,46 milímetros e nenhumas multas são incluídas. É classificada como areia mal graduada com base no sistema unificado de solos classificados (USCS).- Adicionar areia seca em moldes pelo método de pluviação do ar (FCFM, RFCM, molde de tijolo oco) para atingir uma condição mediana densa (Dr na faixa de aproximadamente 42 – 55%, e densidade de areia seca na faixa de 1,58 – 1,64 g/cm3).
Nota: o peso da areia varia de acordo com diferentes tipos de moldes: 145 ± 5 g de areia para a amostra de teste UCS, que é de 38,6 mm de diâmetro e 76,2 mm de altura. - Coloque a tampa na parte superior das amostras e fixe-a costurando.
- Despeje a solução de bactérias com um valor de densidade óptica fixa através da cobertura de geotêxtil permeável nas amostras e certifique-se de que eles estão saturados.
Nota: a quantidade de solução de bactérias variou de acordo com diferentes amostras: 50 mL de solução de bactérias para uma amostra de teste UCS, que é de 38,6 mm de diâmetro e 76,2 mm de altura. - Coloque amostras na prateleira suportada por amostra, como mostrado na Figura 5a.
- Mergulhe a prateleira inteira no reator do grupo enchido com meios do cimentação.
- Ligue o suprimento de ar e ajuste a saída de ar para manter 100% de saturação de ar. Aguarde 7 dias de reação de MICP.
- Tirar as amostras do reator como mostrado na Figura 5b.
- Retire as amostras cortando o molde flexível do contato cheio ou desmoldagem o suporte rígido e então cortando a camada flexível.
- Lave as amostras com água para remover a solução residual no espaço dos poros.
- Coloque as amostras no forno de 105 ° c por 48 h até que seus pesos permaneçam constantes. As amostras podem ser testadas ou tratadas adicionalmente após a secagem do forno.
- Adicionar areia seca em moldes pelo método de pluviação do ar (FCFM, RFCM, molde de tijolo oco) para atingir uma condição mediana densa (Dr na faixa de aproximadamente 42 – 55%, e densidade de areia seca na faixa de 1,58 – 1,64 g/cm3).
- Preparação de amostra de solo tratada com fibra reforçada com MICP
Nota: a fibra sintética (veja a tabela de materiais) e a fibra natural da palma como mostrado na Figura 6 são usadas nestes procedimentos.- Para a fibra sintética, misture o conteúdo proposto de fibras e 900 g de areia seca em pequenos incrementos à mão para obter uma mistura uniforme. O conteúdo de fibra neste experimento é fixado como 0,3% em peso da areia seca.
- Para a fibra de palma natural, distribuir 760 g de areia em quatro partes iguais. Adicione estas quatro partes de areia e três camadas de fibra em RFCM em intervalos.
- Repita o mesmo procedimento que as etapas 5.1.2 — 5.1.10 para obter a amostra tratada por MICP.
- Preparação de tijolos tratados com cimento com tratamento de superfície biológica
Nota: o cimento Portland (tipo I/II) com gravidade específica de 3,15 é utilizado como agente de cimentação para as amostras tratadas com cimento neste experimento. O ganho adiantado da força deste cimento permitiu os vários tempos de cura variou de 7 a 21 dias. A proporção de cimento adicionado neste procedimento é de 10% em peso de areia seca.- Misture 900 g de areia, 90 g de cimento e 200 mL de água para obter uma mistura uniforme.
- Adicione a mistura ao molde rígido. O tamanho do molde rígido é de 177,8 mm de comprimento, 76,2 mm de largura e 38,1 mm de altura.
- Cure por 7 dias em uma umidade constante de 100% e temperatura constante de 25 ° c.
- Coloc amostras no forno de 105 ° c por 48 horas até que seus pesos permaneçam constantes.
- Repita o mesmo procedimento que as etapas 5.1.3 — 5.1.8.
- Coloc amostras no forno de 105 ° c por 48 horas até que seus pesos permaneçam constantes. As amostras podem ser testadas ou tratadas adicionalmente após a secagem do forno.
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Representative Results
A Figura 7 mostra a distribuição do caco3 precipitado em toda a amostra tratada com micp. A amostra tratada com MICP foi dividida em três áreas distintas. O conteúdo de CaCO3 em cada área foi testado pelo método de lavagem ácida. Para dissolver os carbonatos precipitados, as amostras tratadas com MICP secas foram lavadas em solução de HCl (0,1 M), depois enxaguadas, escorridas e secas ao forno por 48 horas. O valor de diferença entre as massas de amostras antes e após a lavagem ácida foi considerado como a massa dos carbonatos precipitados nas amostras tratadas com MICP. O conteúdo do CaCO3 é indicado como percentagem do peso da amostra. O teor de CaCO3 da amostra tratada com micp pelo método de imersão variou de 9,0% a 9,5%. Os resultados indicaram que o CaCO3 precipitado foi distribuído uniformemente em toda a amostra de solo. Enquanto Martinez et al. 201319 realizaram experimentos em colunas de areia de 50 cm de comprimento por um método de injeção em laboratório, eles descobriram que a calcita distribuída de forma não uniforme ao longo da coluna de areia tratada com micp. A maioria da calcita precipitou perto da coluna afluente e impediu a reação do cimentação na seção mais profunda da coluna.
As curvas tensão-deformação de bio-tijolo reforçado com três camadas de fibra de palmeira e bio-tijolo não reforçado obtido usando um teste de quatro pontos é mostrada na Figura 8. A resistência à flexão de bio-tijolo não reforçado foi de 1.150 kPa, enquanto que a do bio-tijolo reforçado foi de 980 kPa. Suas forças flexura eram similares, mas a tensão da flexura foi melhorada significativamente pela adição da fibra da palma. Esses resultados indicam que a fibra de palmeira pode contribuir para a melhora da ductilidade.
Figura 1: molde flexível de contato completo para testes de cisalhamento diretos.
Os moldes flexíveis do contato cheio foram feitos do geotêxtil. O geotêxtil era um polipropileno, fibra de grampo e material não tecido perfurado agulha. O molde cilindro-dado forma teve um diâmetro de 62 milímetros e uma altura de 26 milímetros. estale por favor aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: preparação da amostra de bio-tijolos.
Molde montado para o tijolo; 
Areia adicionada no molde; 
Tampa flexível adicionada na parte superior da amostra de areia. O molde cheio rígido do contato consiste em uma camada flexível e em um suporte rígido. A camada flexível foi feita de geotêxtil, e o suporte rígido foi feito de uma folha perfurada de polipropileno. O molde consistiu em três câmaras e o tamanho de cada câmara era 177,8 milímetros do comprimento, 76,2 milímetros na largura e 38,1 milímetros na altura. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: moldes de tijolos corados.
(a) distribuição dos furos em uma câmara do molde; (b) preparação da amostra de tijolos bio-cored montou o molde para o tijolo cored; Areia adicionada no molde; Tampa flexível adicionada na parte superior da amostra de areia. O molde de tijolo cored incluiu um suporte rígido, uma camada flexível, e tubos de papelão. O tamanho do tubo de papelão foi 60 mm x 140 mm x 60 mm. Três câmaras foram incluídas em um molde e o tamanho de cada câmara do molde era 177,8 milímetros do comprimento, 76,2 milímetros na largura e 38,1 milímetros na altura. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: esboço do reator de lote para o MICP.
Todas as amostras foram preparadas em um reator de tanque completamente agitado. O reator do grupo incluiu uma caixa plástica para conter amostras do solo e meios da cimentação, um misturador magnético para manter o uniforme da solução, e uma bomba de ar para fornecer o oxigênio para bactérias. Uma característica principal deste método é permitir que as amostras do solo imergem inteiramente nos meios do cimentação e para permitir que os meios da cimentação penetrem livremente nas amostras do solo. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 5: amostras de solo colocadas na prateleira suportada.
(a) antes das reacções de micp; (b) após as reacções de micp. As amostras do bio-tijolo foram preparadas com o molde cheio do contato. Uma cobertura de geotêxtil foi aplicada na parte superior do molde. Cada bio-tijolo tinha um tamanho de 177,8 mm de comprimento, 76,2 mm de largura e 38,1 mm de altura. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 6: (a) fibra sintética; (b) fibra natural da palma.
A fibra sintética era uma fibra multifilamento do polypropylene do homopolímero com uma gravidade específica de 0,91. É quimicamente inerte com alta resistência ao Sal ácido. O comprimento e a espessura das fibras utilizadas neste estudo foram de 12 e 0,1 mm, respectivamente, com uma proporção de 120 entre o comprimento e a espessura da fibra. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 7: distribuição do CaCO3 em três áreas da amostra tratada com micp.
Três zonas foram divididas na amostra. Em cada zona, a quantidade de CaCO3 precipitado foi mensurada e calculada como percentual em peso. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 8: estresse flexura em função da deformação flexura para o bio-tijolo não reforçado e fibra de palmeira reforçada com o tratamento micp.
A resistência à flexão de bio-tijolo não reforçado foi de 1.150 kPa, enquanto que a do bio-tijolo reforçado foi de 980 kPa. A estirpe flexura foi melhorada significativamente pela adição de fibra de palmeira. Esses resultados indicam que a fibra de palmeira pode contribuir para a melhora da ductilidade. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
| Química | Concentração de meios de cementação (g/L) | |||
| 0,25 M CA | 0,5 M CA | 1 M CA | 1,5 M CA | |
| NH4CL | 10 | 10 | 10 | 10 |
| Caldo de nutrientes | 3 | 3 | 3 | 3 |
| NaHCO3 | 2,12 | 2,12 | 2,12 | 2,12 |
| Uréia | 15 | 30 | 60 | 90 |
| CaCl2∙ 2h2O | 36,8 | 73,5 | 147 | 220,5 |
Tabela 1: componentes químicos dos meios de cementação. Os produtos químicos foram utilizados para preparar quatro concentrações de meios de cementação em 0,25 M CA, 0,5 M CA, 1 M CA e 1,5 M ca. A relação ureia-CA2 + molar foi fixada em 1:1.
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Discussion
A técnica de MICP por imersão foi apresentada neste trabalho. As amostras de solo foram imersas no reator de lote para serem totalmente penetrado por meio de cimentação no processo MICP. Neste método, um molde flexível do contato cheio, um molde cheio rígido do contato, e um molde cored do tijolo foram aplicados para preparar amostras MICP-tratadas.
Os moldes diferentes podem ser projetados para exigências diferentes da geometria. A estrutura fibrosa do geotêxtil aumentou a área de contato entre a areia e a cimentação, o que efetivamente aumentou a penetração dos meios de cementação em amostras de solo. As grandes quantidades de poros do geotêxtil também permitiram mais precipitação ocorrendo dentro do molde para melhorar a força de amostras tratadas com MICP. As propriedades do solo de amostras tratadas com MICP, como o teor de força e calcita, foram muito aprimoradas com o uso desses moldes no método de imersão. O método de imersão mostrou uma vantagem na preparação de materiais de construção pré-fabricados, como bio-tijolos e bio tijolos ocos. A fibra sintética e a fibra natural podem ser adicionadas no solo para realçar as amostras MICP-tratadas. A adição da fibra é uma maneira apropriada de melhorar materiais pré-fabricados de MICP-tratados. A técnica de MICP com método da imersão pode ser aplicada para executar o tratamento de superfície para tijolos cimento-tratados para melhorar suas propriedades, tais como o aumento da durabilidade de materiais cimento-tratados reduzindo sua permeabilidade. No entanto, esse método de imersão é difícil de implementar no campo devido à limitação de seu funcionamento, pesquisas futuras sobre como usar esse método no local são necessárias para aplicar esse método no campo.
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Disclosures
Não temos nada a revelar.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado pela Fundação Nacional de ciência Grant n º 1531382 e MarTREC.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ammonium Chloride, >99% | Bio-world | 40100196-3 (705033) | |
| Ammonium Sulfate | Bio-world | 30635330-3 | |
| Calcium Chloride Dihydrate, >99% | Bio-world | 40300016-3 (705111) | |
| Nutrient Broth | Bio-world | 30620056-3 | |
| Sodium Bicarbonate, >99% | Bio-world | 41900068-3 (705727) | |
| Sporosarcina pasteurii | American Type Culture Collection | ATCC 11859 | |
| Synthetic fiber | FIBERMESH | Fibermesh 150e3 | |
| Tris-Base, Biotechnology Grade, >99.7% | Bio-world | 42020309-2 (730205) | |
| Urea, USP Grade, >99% | Bio-world | 42100008-2 (705986) | |
| Yeast Extract | Bio-world | 30620096-3 (760095) |
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