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Slatted फ़्लोरिंग पर रखे गए सूअरों में सार्थक पर्यावरण संवर्धन और मापने Saliva Cortisol प्रदान करना

doi: 10.3791/60070 Published: September 30, 2019

Summary

इस प्रोटोकॉल दर्शाता है कि कैसे सूअरों जो उनके जीवन के विभिन्न चरणों के दौरान slatted फर्श पर रखे हैं के लिए व्यावहारिक सार्थक पर्यावरण संवर्धन प्रदान करने के लिए, और कैसे की माप के लिए एक गैर इनवेसिव तरीके से लार के नमूने इकट्ठा करने के लिए कोर्टिसोल सांद्रता, तीव्र तनाव के लिए एक biomarker के रूप में.

Abstract

सूअर का मांस दुनिया भर में सबसे अधिक खपत मांस के रूप में, सूअर उद्योग में पशुओं के कल्याण तेजी से एक प्रमुख सार्वजनिक चिंता का विषय बन गया है, जो एक पर्याप्त दबाव ग्राहकों, विधायकों और अन्य हितधारकों से आ रही लगाता है, प्रबंधन में परिवर्तन करने के लिए इन जानवरों की भलाई में सुधार। कई अध्ययनों से पता चला है कि सूअरों को पर्यावरण संवर्धन प्रदान करने के लिए उन्हें इस तरह के पक्ष और खोज के रूप में अपने प्राकृतिक व्यवहार व्यक्त करने के लिए अनुमति देता है, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से farrowing से पहले नेस्टिंग, और कम तनाव और बेहतर उत्पादन के साथ जुड़ा हुआ है और कल्याण. हालांकि, पर्यावरण संवर्धन प्रदान करते समय कई विचारों को ध्यान में रखा जाना चाहिए, जैसे फर्श, जल निकासी और सीवेज सिस्टम के प्रकार, जीवन में सूअरों का चरण, सामग्री, साथ ही कलम के भीतर इसकी फांसी विधि, ऊंचाई और स्थान। इस पत्र के उद्देश्य हैं (1) कैसे सूअरों जो उनके जीवन के विभिन्न चरणों के दौरान slatted फर्श पर रखे हैं के लिए एक अपेक्षाकृत सरल और व्यावहारिक सार्थक पर्यावरण संवर्धन प्रदान करने के लिए पर पद्धतिगत जानकारी देने के लिए, और (2) प्रदर्शित कैसे कोर्टिसोल सांद्रता की माप के लिए लार के नमूने इकट्ठा करने के लिए, तीव्र तनाव के लिए एक biomarker के रूप में. प्रोटोकॉल जूट, कपास रस्सियों, रैक में पुआल के उपयोग के बारे में जानकारी शामिल है, साथ ही chewable सिलिकॉन चिपक जाती उपकरणों farrowing और स्तनपान, weaners और फिनिशर की कलम में पर्यावरण संवर्धन के रूप में. इसके अलावा, कोर्टिसोल सांद्रता विश्लेषण के लिए एक गैर इनवेसिव लार नमूने संग्रह के लिए कपास रस्सी का उपयोग विस्तृत है। प्रदान की प्रोटोकॉल दोनों अनुसंधान और औद्योगिक सूअर खेती में, पशु कल्याण में सुधार और निगरानी करने के लिए लक्ष्य पेशेवरों के लिए प्रासंगिक हैं।

Introduction

पोर्क दुनिया भर में सबसे अधिक खपत मांस है , 1.3 अरब से अधिक सूअरों को उठाया जा रहा है और हर साल1,2वध किया जा रहा है . हाल के वर्षों में, सूअर उद्योग में पशुओं के कल्याण तेजी से एक प्रमुख सार्वजनिक चिंता का विषय बन गया है, जो पर्याप्त दबाव लगाता है, ग्राहकों, विधायकों और अन्य हितधारकों से आ रही है, प्रबंधन परिवर्तन करने के लिए अच्छी तरह से किया जा रहा में सुधार इन जानवरों. कई अध्ययनों से पता चला है कि सूअरों को पर्यावरण संवर्धन प्रदान कम तनाव और बेहतर उत्पादन और कल्याण के साथ जुड़ा हुआ है, क्योंकि यह सूअरों को अपने प्राकृतिक व्यवहार व्यक्त करने की अनुमति देता है, जैसे पक्ष और खोज, साथ ही नेस्टिंग से पहले 3,4,5,6,7.

सूअर बुद्धिमान जानवर माना जाता है, और एक अत्यधिक जिज्ञासु प्रकृति है; इस प्रकार, यदि एक उपयुक्त वातावरण प्रदान नहीं किया जाता है, सूअरों की संभावना कलम साथियों के प्रति त्रिविम व्यवहार और प्रत्यक्ष हेरफेर सामाजिक व्यवहार है, जो पूंछ काटने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं, साथ ही अन्य चोटों और तनाव8,9प्रदर्शित करेगा. इसलिए, एक सार्थक पर्यावरण संवर्धन प्रदान पेशेवरों द्वारा सलाह दी जाती है, और कुछ देशों में भी नियमों औरकानूनों द्वारा लगाया, जैसे यूरोपीय संघ परिषद के निर्देश 2008/

सार्थक पर्यावरण संवर्धन प्रदान करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है; यह उनके जीवन के प्रत्येक चरण में सूअरों की प्राकृतिक व्यवहार की जरूरतों को पूरा करना चाहिए, साथ ही साथ ध्यान में व्यावहारिक और तकनीकी सीमाओं को ले लो. दूर करने से पहले, घोंसले की सामग्री प्रदान करने के लिए कम farrowing अवधि के साथ ही farrowing के दौरान और स्तनपान अवधि के दौरान नवजात piglets के उच्च जीवित रहने की दर के साथ जुड़ा हुआ है. इसके अलावा, पर्यावरण संवर्धन के साथ मुक्त कलम में, मातृ व्यवहार में सुधार हुआ है , साथ ही पिगलेट्स के संज्ञानात्मक प्रदर्शन और वजनमें 3,10,11, 12,13. weaning के बाद, अलग कूड़े या कलम से सूअरों (weaners, बढ़ रही है या फिनिशर) समूह तनावपूर्ण हो सकता है और अन्य कलम साथियों के प्रति आक्रामकता का कारण बन सकता है, जो चोटों के लिए नेतृत्व कर सकते हैं14,15. इसलिए, जब अपरिचित सूअरों मिश्रण, सार्थक पर्यावरण संवर्धन प्रदान संभावित हताशा और आक्रामकता या पक्ष व्यवहार के पुनर्निर्देशन से उत्पन्न अवांछित व्यवहार की घटना को कम कर सकते हैं.

यूरोपीय संघ के निर्देश 2008/120/EC के अनुसार (2001/93/EC में स्थापित), यह आवश्यक है कि सूअरों सामग्री की पर्याप्त मात्रा के लिए स्थायी पहुँच है, उचित जांच और हेरफेर गतिविधियों, जैसे पुआल, घास, लकड़ी के रूप में सक्षम करने के लिए, sawdust, मशरूम खाद, पीट या इन5,6का एक मिश्रण . हालांकि, इन सामग्रियों का उपयोग कई खेतों पर प्रबंधनीय हो सकता है, क्योंकि यह जल निकासी और सीवेज सिस्टम की रुकावट का कारण बन सकता है, विशेष रूप से slatted फर्श के साथ खेतों पर। फिर भी, यूरोपीय संघ परिषद के निर्देश के अनुसार, किसानों वैकल्पिक संवर्धन सामग्री प्रदान कर सकते हैं, जब तक यह सूअरों उचित जांच और हेरफेर गतिविधियों प्रदर्शन करने की अनुमति देता है.

पर्यावरण संवर्धन की कमी संभावित हताशा और तनाव के लिए नेतृत्व कर सकतेहैं 3, जो hypothalamic पिट्यूटरी अधिवृक्क (HPA) अक्ष को सक्रिय कर सकते हैं. सूअरों में, साथ ही मनुष्यों और अन्य जानवरों में, तनाव आम तौर पर पिट्यूटरी ग्रंथि से adrenocorticotropic हार्मोन (ACTH) के स्राव की ओर जाता है. ACTH अधिवृक्क प्रांतस्था पर अपने रिसेप्टर्स करने के लिए बांधता है और glucocorticoid कोर्टिसोल के अधिवृक्क रिहाई को उत्तेजित करता है, जो तनाव का एक प्रमुख biomarker के रूप में माना जाता है और रक्त में मापा जा सकता है, मूत्र, लार और बाल. लार कोर्टिसोल तीव्र तनाव के लिए एक मार्कर है, क्योंकि यह रक्त4में जैविक रूप से सक्रिय एकाग्रता को दर्शाता है। यह एक गैर इनवेसिव नमूना संग्रह का लाभ है, जानवरों की हैंडलिंग के बिना, कपास रस्सियों के माध्यम से पर्यावरण संवर्धन के रूप में प्रदान की16,17. बाल कोर्टिसोल पुरानी तनाव के लिए एक मार्कर के रूप में इस्तेमाल किया जा रहा है, कोर्टिसोल समय के साथ बालों में जमा हो जाता है और निकाला जा सकता है और मापा जा सकताहै 18,19; हालांकि, यह पशु से निपटने की आवश्यकता है, दोहराया नमूना की संख्या बाल विकास दर द्वारा सीमित है, और विश्लेषण अधिक बोझिल है क्योंकि यह लंबी निष्कर्षण प्रक्रिया की आवश्यकता होती है. फिर भी, दोनों लार और बाल कोर्टिसोल गधे पशु कल्याण के लिए पूरक जानकारी प्रदान कर सकते हैं.

इस पत्र के उद्देश्य हैं (1) कैसे सूअरों जो उनके जीवन के विभिन्न चरणों के दौरान slatted फर्श पर रखे हैं के लिए अपेक्षाकृत सरल और व्यावहारिक सार्थक पर्यावरण संवर्धन प्रदान करने के लिए पर पद्धतिगत जानकारी देने के लिए (दूर और स्तनपान, फिनिशर के लिए weaners), और (2) कैसे गैर-आक्रामक कोर्टिसोल सांद्रता की माप के लिए लार के नमूने इकट्ठा करने के लिए प्रदर्शित करने के लिए, तीव्र तनाव के लिए एक biomarker के रूप में.

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Protocol

अध्ययन प्रोटोकॉल नैतिक रूप से हिब्रू विश्वविद्यालय के संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (एमडी-16-14754-2) द्वारा अनुमोदित किया गया था. अध्ययन के दौरान आयोजित किया गया था 2017, Lahav पशु अनुसंधान संस्थान और यरूशलेम, इसराइल के हिब्रू विश्वविद्यालय में.

1. farrowing और स्तनपान अवधि के दौरान पर्यावरण संवर्धन प्रोटोकॉल

नोट: इस अध्ययन में, sows farrowing/lactation कलम में रखे गए थे, एक सीमित समय के लिए संयम के तहत, 3-5 दिनों से पहले की उम्मीद farrowing तारीख से पहले और अप करने के लिए 10 दिन के बाद farrowing; इसके बाद, कारावास की सलाखों को हटा दिया गया था, ताकि स्वू और उसके पिगलेटों के बीच मुक्त आवाजाही और बातचीत की अनुमति दी जा सके (चित्र 1में चित्रित किया गया)। हालांकि, निम्नलिखित प्रोटोकॉल भी पारंपरिक farrowing बक्से, जिसमें बोना पूरे स्तनपान अवधि में रोका जाता है के लिए उपयुक्त है.

  1. बोना में ले जाया जाता है इससे पहले कि farrowing कलम में संवर्धन सामग्री (जूट और कपास रस्सियों) लटका, क्रम में farrowing से पहले बोना घोंसले की तरह व्यवहार की अनुमति देने के लिए.
  2. प्रत्येक farrowing कलम के लिए, जूट के दो टुकड़े (20 सेमी चौड़ा, एक मीटर लंबी), और 100% प्राकृतिक, uncolored कपास रस्सियों (2-3 सेमी व्यास में) के दो टुकड़े, लगभग एक मीटर लंबी प्रत्येक तैयार करते हैं.
  3. जूट और कपास की रस्सियों (डबल ओवरहैंड गाँठ) को कलम/क्रेट्स की छड़ों से बाँधें, जैसा कि चित्र 1में दिखाया गया है, इसके मध्य से, प्रत्येक टुकड़े के दो मुक्त सिरों को फर्श की ओर लटकादिया जा सकता है। जूट और कपास की रस्सियों की गाँठों की ऊँचाई बोई हुई कंधे से कम होनी चाहिए, जबकि इसके मुक्त छोर मंजिल के ऊपर हैं (चित्र 1ब्-ब्)।
  4. बोने आम तौर पर जूट और कपास रस्सियों में रुचि रखते हैं; वे अक्सर खींच और यह चबाना. इसलिए, बदलें या सामग्री फिर से भरना जब गंदा या समाप्त हो गया।
    नोट: इस अध्ययन में, सामग्री हर 4-5 दिनों का निरीक्षण किया गया, और बदल दिया या जब जरूरत refilled.
  5. पिगलेट पैदा होने के बाद, जूट और कपास की रस्सियों को लटकाएं ताकि वे एक सुरक्षित स्थान पर बोए और उसके पिगलेट दोनों के लिए पहुंच सकें। आमतौर पर, जब सामग्री दोनों के लिए पहुँच योग्य हैं, piglets एक बहुत ही कम उम्र से अपने बांधों की नकल.
    नोट: एक अतिरिक्त के रूप में, कटा हुआ कागज भी slatted फर्श पर, farrowing सूअर और piglets के लिए पर्यावरण संवर्धन के रूप में प्रदान किया जा सकता है. हालांकि, जल निकासी और सीवेज सिस्टम की संगतता, विशिष्ट खेत पर गंभीर रूप से जांच की जानी चाहिए।

2. weaners के लिए पर्यावरण संवर्धन प्रोटोकॉल (जब पुआल प्रदान नहीं किया जा सकता है)

नोट: इस अध्ययन में, weaning के बाद, प्रत्येक दो litters weaners की एक कलम में बांटा गया. इष्टतम रूप से, समूहों वध तक स्थिर रहना चाहिए, मिश्रण या कलम में नए कलम साथियों शुरू करने के बिना, पदानुक्रम से संबंधित संघर्ष और चोटों से बचने के लिए. कलम में अंतरिक्ष भत्ता यूरोपीय परिषद के निर्देश 2008/120/EC और इजरायल के कानून के अनुसार था, प्रति समूह लगभग 20 सूअरों के साथ, और 0.3 मीटर प्रति सुअर उपलब्ध unobstructed मंजिल क्षेत्र के2. तकनीकी कारणों से, weaners के लिए पुआल प्रदान नहीं किया जा सकता है, यहां तक कि रैक में नहीं. जब पुआल प्रदान किया जा सकता है, वध करने के लिए weaning से फिनिशर प्रोटोकॉल का उपयोग करें, प्रोटोकॉल अनुभाग 3 में विस्तृत के रूप में.

  1. प्रत्येक कलम के लिए, 100% प्राकृतिक, बिना रंग की कपास रस्सियों, व्यास में 2-3 सेमी की एक मीटर लंबी टुकड़े तैयार; हर 10 सूअरों के लिए कम से कम एक टुकड़ा. कपास की रस्सियों को छत से या फांसी के खंभे से लटकाई गई चेन से बाँधें (दीवार से दूरी बनाने के लिए), जैसा कि चित्र 2में दिखाया गया है।
    1. अधिमानतः कलम के "सक्रिय" क्षेत्र के केंद्र में रस्सियों की स्थिति, फीडर और पीने के करीब है, और कलम की दीवार से दूर (केरूप में चित्र 2में चिह्नित ) 360 डिग्री का उपयोग की अनुमति है, जो के कारण आक्रामक व्यवहार को रोकने की उम्मीद है प्रतियोगिता.
  2. एक ऊंचाई है जो सूअरों को आसानी से अपने मुंह के साथ यह तक पहुँचने के लिए अनुमति देता है पर रस्सियों लटका. आमतौर पर, गाँठ सूअरों के कंधे से कम होनी चाहिए, जबकि रस्सियों के मुक्त सिरों को फर्श के ठीक ऊपर होना चाहिए, इसे छूए बिना (चित्र 2)।
  3. गंदे या समाप्त होने पर रस्सियों को बदलें या फिर से भरें।
    नोट: इस अध्ययन सामग्री में हर 4-5 दिनों का निरीक्षण किया गया, और जब जरूरत की जगह या फिर से भर दिया.
  4. सूती रस्सियों के अतिरिक्त, चबाने योग्य सिलिकॉन स्टिक या समान चबाने योग्य उपकरण प्रदान करें (चित्र 2)। प्रयुक्त उपकरण (सामग्री की तालिकादेखें ) में चार चबाने योग्य छड़ें होती हैं जो कम से कम चार सूअरों को एक साथ डिवाइस के साथ बातचीत करने की अनुमति देती हैं। हर 10 से 15 सूअरों के लिए एक उपकरण प्रदान करें।
  5. छत से एक श्रृंखला के साथ chewable डिवाइस लटका (किट में शामिल) डिवाइस झूल आंदोलन की अनुमति देने के लिए; यह गतिविधि और सूअरों को चुनौती बढ़ जाती है, और भी अधिक सूअरों एक बार में भाग लेने के लिए अनुमति देता है.
    1. डिवाइस को पेन के सक्रिय क्षेत्र के केंद्र में रखें, पेन की दीवारों से दूर 360 डिग्री एक्सेस की अनुमति दें, जिससे प्रतिस्पर्धा के कारण आक्रामक व्यवहार को रोकने की उम्मीद है. सिलिकॉन स्टिक्स का अंत फर्श से 10 से 20 सेमी की ऊंचाई पर होना चाहिए।
  6. जब समाप्त या गंदा सिलिकॉन चिपक जाती है बदलें.
    नोट: इस अध्ययन में सिलिकॉन चिपक जाती है केवल जब weaners कलम से फिनिशर कलम के लिए ले जाया गया बदला जा करने के लिए आवश्यक है।

3. फिनिशर के लिए पर्यावरण संवर्धन प्रोटोकॉल

नोट: जब पुआल पूरी अवधि के दौरान प्रदान किया जा सकता है, वध तक weaning से इस प्रोटोकॉल का उपयोग शुरू, बजाय फिनिशर कलम में ही.

  1. प्रत्येक कलम को रैक में, फांसी के जाल में या किसी मीनार में, जैसा कि चित्र 2में दिखाया गया है, के साथ प्रत्येक पेन प्रदान करें। जब इस तरह के उपकरणों में प्रदान की, पुआल की केवल छोटी मात्रा में एक समय में सूअरों के लिए उपलब्ध हैं, और यह सबसे चबाया जा रहा है. इसलिए, इस संवर्धन slatted फर्श पर इस्तेमाल किया जा सकता है, जब पुआल बिस्तर के रूप में प्रदान नहीं किया जा सकता है.
    नोट: इस अध्ययन में भूसा वाणिज्यिक रैकों में प्रदान किया गया था (चित्र 2)।
  2. एक ऊंचाई है जो सभी सूअरों के लिए पहुँच योग्य है पर पुआल रैक लटका, आमतौर पर सिर्फ कंधे के स्तर से नीचे. उन्हें संभव के रूप में कई सूअरों के लिए सबसे आसान पहुँच के साथ दीवार के लिए संलग्न, अधिमानतः "सक्रिय क्षेत्र" के भीतर. सुनिश्चित करें कि रैक ठीक से कर रहे हैं और सुरक्षित रूप से दीवार के लिए सुरक्षित डिवाइस टूटना और चोटों से बचने के लिए।
  3. सुनिश्चित करें कि रैक पूरी तरह से शुरुआत में पुआल से भर रहे हैं; ताजा पुआल की एक अतिरिक्त छोटी राशि हर 1-3 दिन जोड़ा जा सकता है. वैकल्पिक रूप से फिर से भरना जब रैक खाली है, आम तौर पर हर 7-10 दिन.
    नोट: लंबे भूसे कटा पुआल से बेहतर है समूह में आक्रामकता को कम करने के लिए और पक्ष और20की खोज के लिए सूअरव्यवहार की जरूरतों को पूरा करने के लिए.
  4. जब लागू हो, एक संग्रह ट्रे या रैक के नीचे एक चटाई रखने पर विचार करें, जब फर्श slatted है, बिखरे हुए जा रहा है और जल निकासी और सीवेज सिस्टम को अवरुद्ध करने से पुआल से बचने के लिए (चित्र 2ग). चूंकि पुआल मुख्य रूप से उनके पक्ष और अन्वेषणात्मक व्यवहार को पूरा करने के लिए सूअरों के लिए प्रदान की जाती है, एक चटाई कुछ मुक्त पुआल की उपस्थिति जमीनी स्तर पर पता लगाया जा करने के लिए अनुमति दे सकते हैं।
  5. पुआल के अलावा, chewable उपकरणों प्रदान करते हैं, के रूप में अनुभाग 2 में विस्तृत.
  6. जब कपास रस्सियों लार संग्रह के लिए उपयोग किया जाता है, के रूप में अगले खंड में विस्तृत, लार संग्रह के बाद कलम में रस्सियों छोड़, एक अतिरिक्त संवर्धन के रूप में. अन्य कपास रस्सियों भी प्रदान किया जा सकता है, के रूप में अनुभाग 2 में विस्तृत.

4. कोर्टिसोल सांद्रता विश्लेषण के लिए लार नमूने संग्रह

नोट: यह खंड जानकारी प्रदान करता है कैसे गैर-आक्रामक कोर्टिसोल एकाग्रता विश्लेषण के लिए लार इकट्ठा करने के लिए, तीव्र तनाव के लिए एक biomarker के रूप में; हालांकि, लार के नमूने भी अन्य biomarkers के विश्लेषण के लिए और यहां तक कि संभावित रोगजनकों की जांच के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसके अलावा, बाल कोर्टिसोल मापा जाना चाहिए जब लागू.

  1. दिन के एक ही समय के लिए लार नमूने की योजना, पूर्वाग्रह से बचने के लिए, के रूप में कोर्टिसोल स्राव शारीरिक circadian लय के कारण दिन के साथ बदलता है, या21खिला के कारण. नमूना आम तौर पर खिलाने से पहले आसान है, अधिमानतः दिन के दूसरे खिला से पहले.
  2. बिना रंग का, 100% कपास रस्सी (2-3 सेमी व्यास में) का प्रयोग करें। एक रस्सी आम तौर पर प्रति 12-15 सूअरों की जरूरत है.
    नोट: इस अध्ययन में, वाणिज्यिक, किट का उपयोग करने के लिए तैयार लार के नमूने के संग्रह के लिए इस्तेमाल किया गया.
  3. रस्सी को पेन के केंद्र के पास बाँधें, पेन की दीवार से दूर। सुनिश्चित करें कि रस्सी जो फांसी के लिए प्रयोग किया जाता है (सूती रस्सी और पट्टी के बीच) सूअरों द्वारा चबाने के लिए पहुँच योग्य नहीं है, और यह कि कपास रस्सियों के मुक्त सिरों फर्श स्पर्श नहीं करते, स्वच्छता कारणों के लिए (चित्र 3) .
  4. उपलब्ध चबाने योग्य सतह को बढ़ाने के लिए रस्सी के मुक्त अंत को खोलना (चित्र 3ठ)।
  5. 15-30 मिनट के लिए लटका रस्सी छोड़ दो. आमतौर पर, सूअरों नए प्रदान की रस्सियों में रुचि रखते हैं और इस समय के दौरान चबाना होगा. आमतौर पर, सूअरों के विशाल बहुमत रस्सी दृष्टिकोण होगा.
  6. रस्सी से लार निकालने के लिए, रस्सी के मुक्त भाग को एक बाँझ प्लास्टिक बैग में डाल दिया (जैसा कि चित्र 3डीमें सचित्र है ) और बैग के बाहर से दबाव लागू करके रस्सी निचोड़, ऊपर से नीचे तक, जब तक पर्याप्त तरल (सुझाव पर कम से कम 2 एमएल) बैग के तल पर जमा (चित्र 3ई),और फिर बैग से रस्सी को हटा दें।
    नोट: इस अध्ययन में एक 30 सेमी x 40 सेमी बैग किट में शामिल किया गया था. यदि संभव हो तो, इस कदम को फांसी कॉर्ड काटने के बिना कलम में किया जाना चाहिए. इस तरह, लार निष्कर्षण आमतौर पर आसान है, और रस्सियों एक संवर्धन के रूप में कलम में छोड़ दिया जा सकता है. यदि पर्याप्त लार नहीं है, एक wringer इस्तेमाल किया जा सकता है (इस अध्ययन में आवश्यक नहीं था).
  7. एक बाँझ ट्यूब में बैग से लार हस्तांतरण करने के लिए, रस्सी बाहर खींच और ध्यान से एक 50 एमएल बाँझ प्लास्टिक ट्यूब के ऊपर बैग के नीचे कोने में कटौती (हालांकि केवल 400 $L आमतौर पर डुप्लिकेट में प्रत्येक विश्लेषण के लिए आवश्यक है, कम से कम 2 मिलीलीटर collectio के लिए सिफारिश कर रहे हैं द; चित्र 3) ट्यूब सील, और यह एक स्थायी मार्कर या एक पूर्व तैयार स्टीकर (पशु/
  8. बर्फ पैक के साथ एक अछूता कंटेनर में लार के नमूने स्टोर जब तक प्रयोगशाला को दिया.
  9. प्रयोगशाला में, सेंट्रीफ्यूज लार नमूने जब तक गंदगी अलग किया जा सकता है (के लिए 8 मिनट 3000 x ग्रामपर). साफ लार सुविधा के लिए छोटी मात्रा (उदाहरण के लिए, 2 एमएल पेंच टोपी फ्रीजर ट्यूब) के पूर्व चिह्नित बाँझ ट्यूबों में एक साफ डिस्पोजेबल पाश्चर पिपेट के साथ स्थानांतरित किया जाना चाहिए। नमूनों का तुरंत विश्लेषण किया जा सकता है, या विश्लेषण तक -20 डिग्री सेल्सियस या नीचे के तापमान पर जमे हुए रखा जा सकता है।
  10. कोर्टिसोल एकाग्रता विश्लेषण से पहले, प्रासंगिक नमूने पहचान की पुष्टि की जानी चाहिए, और नमूने कमरे के तापमान पर thawed किया जाना चाहिए अगर जमे हुए. धीरे से प्रत्येक नमूना मिश्रण, और फिर यह विश्लेषण से पहले फिर से centrifuge संभव बचे हुए गंदगी है कि परख के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं हटाने के लिए (8 3000 x gपर मिनट).
  11. एक मान्य परख के साथ कोर्टिसोल सांद्रता विश्लेषण प्रदर्शन, विशिष्ट किट प्रोटोकॉल के अनुसार.
    नोट: इस अध्ययन में, लार कोर्टिसोल के नमूने निर्माता के दिशा निर्देशों के अनुसार एंजाइम से जुड़े इम्यूनोसमोरेन्ट परख द्वारा डुप्लिकेट में मापा गया था। सूअरों कि पहले संवर्धन के रूप में रस्सियों के साथ प्रदान किए गए थे के लिए, लार इकट्ठा बहुत आसान हो जाएगा के रूप में सूअरों रस्सियों में उच्च रुचि दिखाने के लिए. हालांकि, सूअरों कि रस्सियों के साथ अपरिचित हैं के लिए, यह प्रशिक्षण के लिए समय लग सकता है; इस प्रकार, पर्याप्त लार इकट्ठा पहली बार से संभव नहीं हो सकता है. यदि आवश्यक हो, रस्सियों प्रशिक्षण के लिए सेब के रस में भीग जा सकता है (जाहिर है, ऐसे मामले में, लार विश्लेषण के लिए इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है). यदि लार के नमूने व्यक्तिगत रूप से रखे सूअरों से की जरूरत है, संग्रह एक समूह से अधिक चुनौतीपूर्ण हो सकता है, और सेब का रस भिगो रस्सियों के साथ प्रशिक्षण सत्र आम तौर पर आवश्यक हैं. नकल की वजह से एक दूसरे के बगल में एक व्यक्तियों के नमूने द्वारा संग्रह रस्सियों के चबाने को भी प्रोत्साहित किया जा सकता है।

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Representative Results

वर्तमान अध्ययन में, 16 कूड़े (170 piglets) बेतरतीब ढंग से दो उपचार समूहों में आवंटित किए गए; एक समूह में, पर्यावरण संवर्धन आठ litters के लिए प्रदान किया गया था ("समृद्ध समूह", प्रोटोकॉल अनुभाग 1-3 में वर्णित के रूप में), जबकि यह अन्य आठ litters ("गैर समृद्ध समूह") के लिए प्रदान नहीं किया गया था. रोने के बाद, हर दो कूड़े-कचरे को करीब 20 सूअरों के एक समूह में बांटा गया। लार नमूने एकत्र किए गए और प्रत्येक कलम में हर दो सप्ताह कोर्टिसोल सांद्रता के लिए विश्लेषण किया गया, जैसा कि प्रोटोकॉल अनुभाग 4 में वर्णित है।

इस अध्ययन में, जब ठीक से प्रदान की, सूअर, piglets और सूअरों सभी संवर्धन उपकरणों में रुचि दिखाई. बोवनी से पहले जूट और कपास की रस्सियों का इस्तेमाल किया जाता था, जब उपलब्ध कराया जाता है। स्तनपान अवधि के दौरान, जब जूट और कपास रस्सियों दोनों बांध और उसके piglets के लिए पहुँच रहे थे, piglets 2-3 दिन की उम्र से अपने बांधों की नकल; हालांकि, जब सामग्री बोना के लिए पहुँच योग्य नहीं थे, piglets बाद में सामग्री का उपयोग शुरू कर दिया, आम तौर पर उम्र के एक सप्ताह से अधिक के बाद. स्तनपान और weaners कलम में, जूट और कपास रस्सियों आमतौर पर बदल दिया गया था या हर 4-5 दिन refilled, जबकि chewable सिलिकॉन छड़ें केवल एक बार बदल दिया गया था, जब सूअर weaners कलम से फिनिशर कलम के लिए ले जाया गया, 70 दिनों की उम्र में. फिनिशर्स की कलम में, कोई जल निकासी और सीवेज रुकावटों को दर्ज नहीं किया गया था।

पूरी अवधि के दौरान मरने के लिए बाधाओं जब तक वध समृद्ध समूह की तुलना में गैर समृद्ध समूह में piglets/pigs के बीच काफी अधिक था (या $ 3.38, 95% CI $ 1.05-10.83; पी $ 0.004). लार कोर्टिसोल के नमूने सफलतापूर्वक अध्ययन के दौरान हर दो सप्ताह में एकत्र किए गए थे, बस दिन के दूसरे भोजन से पहले. समृद्ध समूह में सूअरों शुरू से ही कपास रस्सियों इकट्ठा लार में उच्च रुचि दिखाई; हालांकि, प्रारंभिक संग्रह में गैर समृद्ध समूह लार मात्रा में आम तौर पर कम (2-10 एमएल) थे, लेकिन दूसरे या तीसरे संग्रह सत्र से यह समूहों के बीच समान था. आमतौर पर, 30-40 एमएल से बड़ा एक मात्रा आसानी से प्रत्येक रस्सी से निकाला गया था। विश्लेषण तक नमूनों को जमे हुए (-80 डिग्री सेल्सियस) संग्रहीत किया गया था। Cortisol सांद्रता, के रूप में ELISA द्वारा मापा, समग्र काफी समृद्ध सूअरों में कम थे, के रूप में गैर समृद्ध सूअरों की तुलना में (P $ 0.0044; चित्र 4) .

Figure 1
चित्र 1: farrowing और स्तनपान अवधि के दौरान पर्यावरण संवर्धन. (ए) बनाया farrowing कलम चित्रण जो कारावास सलाखों के दो चरणों को दर्शाता है, या तो जब बोना रोका जाता है (चरण आर) या कारावास सलाखों के बाद हटा रहे हैं (चरण एफ) मुक्त आंदोलन और बोना और उसके बीच बातचीत की अनुमति देने के लिए piglets. जूट और कपास रस्सियों के लिए सुझाए गए स्थानों से पहले और farrowing के बाद क्रमशः हरे और नीले रंग में चिह्नित कर रहे हैं. (ख)एक सूअर और उसके पिगलेट की छवियाँ कपास की रस्सियों (सीआर) और जूट (जे) के साथ बातचीत करती हैं जो पर्यावरण संवर्धन के रूप में एक फरोइंग/लैक्टेशन पेन में प्रदान की जाती हैं। कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 2
चित्र 2: weaners और फिनिशर के लिए पर्यावरण संवर्धन. (ए)"सक्रिय क्षेत्र" (ब्लू एक्स) में पर्यावरण सामग्री को लटकाने के लिए सुझाए गए स्थानों का प्रदर्शन करने वाले पेन का एक योजनाबद्ध चित्रण। (बी-सी) सुझाव के रूप में समृद्ध सूअरों की छवियाँ. (बी) weaners कलम में, कपास रस्सियों (सीआर) पर्यावरण संवर्धन के रूप में या लार नमूने संग्रह के लिए प्रदान की छत से या एक पोल से लटका संग्रह (पी) यह कलम की दीवार से दूरी, chewable सिलिकॉन चिपक तीज डिवाइस (बीआर) छत से एक श्रृंखला द्वारा लटका ( एचसी)। (सी) फिनिशर्स की कलम में, पुआल एक रैक (एसआर), एक पुआल टॉवर (एसटी) या एक पुआल टोकरी (एसबी) में प्रदान की जाती है; एक चटाई (एम) इन पुआल उपकरणों में से प्रत्येक के नीचे slatted फर्श को कवर कर सकते हैं. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 3
चित्र 3: कपास रस्सियों का उपयोग कर लार नमूना प्रक्रिया। (-एफ) लार नमूने के लिए छह मुख्य चरणों सचित्र हैं: रस्सी फांसी, रस्सी के मुक्त अंत unraveling, सूअरों यह चबाने के लिए अनुमति देता है, एक प्लास्टिक की थैली में रस्सी से लार निष्कर्षण और फिर यह एक प्लास्टिक ट्यूब को स्थानांतरित. कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.

Figure 4
चित्रा 4: लार कोर्टिसोल समृद्ध और गैर समृद्ध सूअरों में सांद्रता. लार के नमूने हर दो सप्ताह कपास रस्सियों का उपयोग कर एकत्र किए गए थे, कलम के स्तर पर, weaning से वध करने के लिए, समृद्ध और गैर समृद्ध सूअरों से; कोर्टिसोल सांद्रता एलिसा द्वारा मापा गया. इस विश्लेषण के लिए, सभी नमूनों को ध्यान में नमूना तिथि लेने के बिना, प्रति समूह एक साथ संकुल थे. Cortisol सांद्रता समृद्ध समूह में काफी कम थे, गैर समृद्ध समूह की तुलना में (मैन व्हिटनी परीक्षण; पी $ 0.0044). परिणाम मतलब के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं - SEM. कृपया यहाँ क्लिक करें इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए.

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Discussion

इसमें, हम कैसे सूअरों जो उनके जीवन के विभिन्न चरणों के दौरान slatted फर्श पर रखे हैं के लिए सरल और व्यावहारिक पर्यावरण संवर्धन प्रदान करने के लिए विवरण प्रोटोकॉल का वर्णन, और कैसे गैर इनवेसिव कोर्टिसोल की माप के लिए लार के नमूने इकट्ठा करने के लिए सांद्रता, तीव्र तनाव के लिए एक biomarker के रूप में. एक बिस्तर के रूप में स्ट्रॉ सूअरों के लिए सबसे उपयुक्त पर्यावरण संवर्धन में से एक के रूप में माना जाता है, लेकिन slatted फर्श पर अव्यावहारिक हो सकता है. हालांकि, इस तरह के जूट, कपास रस्सियों, रैक में पुआल, और chewable उपकरणों के रूप में अपेक्षाकृत सस्ती विकल्प व्यावहारिक रूप से और सुरक्षित रूप से लागू किया जा सकता है।

इस अध्ययन में लार कोर्टिसोल सांद्रता की रेंज पिछले प्रकाशनों17,22,23के बराबर है . समृद्ध और गैर समृद्ध जानवरों के बीच लार कोर्टिसोल सांद्रता में महत्वपूर्ण अंतर, परिकल्पना के अनुसार है कि पर्यावरण संवर्धन एक बिंदु नमूने पर सूअरों में तीव्र तनाव को कम कर सकते हैं, जैसा कि पिछले अध्ययनों में दिखाया गया है, कम से कम एक निश्चित उम्र तक , जब तक circadian लय लंबे समय तक लंबे समय तक लंबे समय तक तनाव24,25से क्षतिग्रस्त नहीं है . के रूप में उल्लेख किया, कोर्टिसोल रक्त में मापा जा सकता है, मूत्र, और लार तीव्र तनाव के लिए मार्कर के रूप में, और बालों में पुराने तनाव के लिए एक मार्कर के रूप में. बाल कोर्टिसोल को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल पहले Meyers एट अल द्वारा वर्णित किया गया था और पशु कल्याण19का आकलन करते समय प्रासंगिक हो सकता है . हालांकि, जब तीव्र तनाव के लिए मार्करों की तलाश में, एक विचार करना चाहिए कि किसी भी नमूना, अपने आप में, पशु हैंडलिंग या प्रक्रिया के दौरान कारण दर्द के कारण कोर्टिसोल रिलीज में वृद्धि हो सकती है16,26. इसलिए, गैर इनवेसिव लार नमूना, के रूप में वर्तमान अध्ययन में सुझाव दिया, एक प्रासंगिक तरीका है, जो कोर्टिसोल विश्लेषण के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, साथ ही अन्य biomarkers के विश्लेषण के लिए और यहां तक कि संभावित रोगजनकों की स्क्रीनिंग के लिए27.

इस प्रोटोकॉल के अनुसार लार इकट्ठा करने में मुख्य चुनौतियों हो सकता है जब यह सूअरों कि रस्सियों के साथ अपरिचित हैं से इकट्ठा, के रूप में वे रस्सियों चबाने से बचने के लिए हो सकता है, और इसलिए, प्रशिक्षण की जरूरत हो सकती है. सेब के रस में भिगोए हुए रस्सियों का उपयोग करके प्रशिक्षण किया जा सकता है (ऐसे मामलों में, उन लार के नमूनों का विश्लेषण के लिए उपयोग नहीं किया जा सकता)। यदि लार के नमूने व्यक्तिगत रूप से रखे सूअरों से की जरूरत है, संग्रह भी एक समूह से अधिक चुनौतीपूर्ण हो सकता है, और सेब का रस भिगो रस्सियों के साथ प्रशिक्षण सत्र आम तौर पर आवश्यक हैं. नकल की वजह से एक दूसरे के बगल में व्यक्तियों के नमूने द्वारा रस्सियों चबाने को भी प्रोत्साहित किया जा सकता है। युवा piglets के प्रशिक्षण के लिए, रस्सियों उनकी माँ के लिए पहुँच योग्य होना करने के लिए सीखने और जल्दी चबाने को प्रोत्साहित करने के लिए लटका दिया जाना चाहिए. एक और संभव बाधा जब संवर्धन के लिए या लार संग्रह के लिए कपास रस्सियों का उपयोग कर रहा है कि यह कुछ ब्रांडों के कान टैग में पकड़ा जा सकता है. यदि ऐसा होता है, या तो कान टैग या संवर्धन विधि को बदला जा करने के लिए है।

कपास रस्सियों का उपयोग समूह स्तर पर लार कोर्टिसोल एकाग्रता को मापने की अनुमति देता है, जो इस हार्मोन के लिए लागू स्क्रीनिंग प्रदान करता है. इस संग्रह विधि का एक संभावित नुकसान यह है कि यह समूह में सभी व्यक्तियों का एक प्रतिनिधि माप नहीं हो सकता है, क्योंकि यह प्रत्येक व्यक्ति सुअर से रस्सी में अवशोषित लार की मात्रा से प्रभावित होता है। आदेश में इस नुकसान को कम करने के लिए, यह पर्याप्त संख्या में रस्सियों प्रदान करने के लिए सलाह दी जाती है, पर्याप्त संग्रह समय की अनुमति देने के लिए, साथ ही कई दोहराया संग्रह प्रदर्शन करने के लिए. व्यक्तिगत रूप से नमूना की मौजूदा विधि की तुलना में, संग्रह ही सूअरों के लिए तनावपूर्ण नहीं है, क्योंकि यह एक पर्यावरण संवर्धन के रूप में दिया जाता है, सूअरों से निपटने के बिना.

संक्षेप में, सूअरों पर्यावरण की दृष्टि से सभी जीवन चरणों में समृद्ध किया जा सकता है, यहां तक कि slatted फर्श पर, जूट का उपयोग कर, कपास रस्सियों, रैक में पुआल और chewable उपकरणों. संवर्धन के प्रकार, फांसी विधि, साथ ही कलम के भीतर ऊंचाई और स्थान, उनकी प्रभावशीलता के लिए महत्वपूर्ण हैं. कपास topes द्वारा लार संग्रह के बारे में, समय और फांसी सिफारिशों सफल नमूने के लिए महत्वपूर्ण हैं. इन प्रोटोकॉल में सुधार और पशु कल्याण की निगरानी करने के लिए लक्ष्य पेशेवरों के लिए प्रासंगिक हैं, दोनों अनुसंधान और औद्योगिक सूअर खेती में.

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Disclosures

लेखकों को खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.

Acknowledgments

हम अपने खेत में अनुसंधान के संचालन के लिए और अध्ययन के दौरान मूल्यवान तकनीकी सहायता प्रदान करने के लिए खेत की टीम के लिए Lahav CRO धन्यवाद. अध्ययन इसराइल के मुख्य वैज्ञानिक, कृषि और ग्रामीण विकास मंत्रालय द्वारा वित्त पोषित किया गया.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bite-Rite Ikadan System USA Inc. Consider ordering additional replaceable silicone sticks
ELISA; Saliva Cortisol Kit DRG International Inc. NJ, USA Slv2930
HALM 60/80 CM W. Domino A/S, DK 49084/ 85
TEGO Swine Oral Fluids Kit ITL BioMedical, USA A100930 Including everything needed for the saliva sampling protcol

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References

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Slatted फ़्लोरिंग पर रखे गए सूअरों में सार्थक पर्यावरण संवर्धन और मापने Saliva Cortisol प्रदान करना
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Morgan, L., Raz, T. Providing Meaningful Environmental Enrichment and Measuring Saliva Cortisol in Pigs Housed on Slatted Flooring. J. Vis. Exp. (151), e60070, doi:10.3791/60070 (2019).More

Morgan, L., Raz, T. Providing Meaningful Environmental Enrichment and Measuring Saliva Cortisol in Pigs Housed on Slatted Flooring. J. Vis. Exp. (151), e60070, doi:10.3791/60070 (2019).

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