Summary
Her demonstrerer vi hvordan man setter opp en billig volt-amperemeter med programmerbare utgangsfrekvens som kan brukes med kommersielt tilgjengelige chopstick elektroder for transepitelial/endothelial elektriske motstandsmålinger.
Abstract
Transepitelial/endothelial elektrisk motstand (frivillig) har vært brukt siden 1980-tallet for å fastslå confluency og permeabilitet av in vitro barriere modellsystemer. I de fleste tilfeller er chopstick elektroder brukes til å bestemme den elektriske impedans mellom øvre og nedre rom i en cellekultur filter sett system som inneholder cellulære monolagere. Filter membranen gjør det mulig for cellene å følge, polariserer og samhandle ved å bygge tette veikryss. Denne teknikken har blitt beskrevet med en rekke forskjellige cellelinjer (f. eks, celler av blod-hjerne-barriere, blod-spinalvæske barriere, eller Gastrointestinal og lunge skrift). FRIVILLIG måle enheter kan lett fås fra ulike laboratorie utstyrsleverandører. Men det er mer kostnadseffektive og tilpassbare løsninger tenkelige hvis en passende voltammeter er selv-montert. Det overordnede målet med denne publikasjonen er å sette opp en pålitelig enhet med programmerbar utgangsfrekvens som kan brukes med kommersielt tilgjengelige chopstick elektroder for frivillig-måling.
Introduction
Epitel og endothelial celler fungerer som cellulære grenser, skille apikale og basolateral sider av kroppen. Hvis de er koblet sammen gjennom tette kryss, passiv substans diffusjon gjennom paracellular mellomrom er begrenset1, noe som resulterer i dannelsen av en selektivt gjennomtrengelig barriere. Flere kunstige barriere systemer har blitt utviklet2 bruker mikrovaskulær endothelial celler (HBMEC, Blood-Brain barriere3,4,5,6,7), akkord plexus epitelceller (HIBCPP/PCPEC, blod-spinalvæske barriere8,9,10,11,12,13,14), tykk adenokarsinom celler (caco-2, gastrointestinale modeller15), eller luftveis/alveolære cellelinjer (lunge modeller16,17). Disse systemene består vanligvis av celler dyrket i en monolag på gjennomtrengelig membraner (dvs. filter sette systemer) for å gi tilgang til apikale og basolateral sider. Det er viktig at integriteten til modell systemet matcher in vivo-forholdene. Derfor har flere teknikker er utviklet for å analysere barrierefunksjon ved å måle paracellular diffusjon av Tracer forbindelser på tvers av celle laget. Disse stoffene inkluderer radiolabeled sukrose, Dye-merket albumin, FITC-merket inulin, eller Dye-merket dextrans2. Kjemiske fargestoffer kan imidlertid gjøre celler ubrukelige for videre eksperimenter. For å overvåke barriere systemer invasivt, måling av transepitelial/transendothelial elektrisk motstand (frivillig) over en mobil monolag kan brukes2,18,19. Fordi bipolar elektrode systemer er påvirket av elektroden polarisering impedans på elektroden-elektrolytt grensesnitt, tetrapolar målinger er vanligvis brukt til å overvinne denne begrensningen20. Den underliggende teknikken er en fire-Terminal sensing (4T) som først ble beskrevet i 1861 av William Thomson (Lord Kelvin)21. I korte trekk er strømmen injisert med et par strømførende elektroder, mens et ekstra par spenningssensor elektroder brukes til å måle spenningsfall20. I dag, såkalte chopstick elektroder består av et par doble elektroder, som hver inneholder en sølv/sølv-klorid pellet for måling av spenning og en sølv elektrode for bestått strøm2. Den elektriske impedans måles mellom apikale og basolateral rommet med celle laget i mellom (figur 1). En firkantbølge signal med en frekvens på typisk 12,5 Hz påføres på de ytre elektrodene og den resulterende vekselstrøm (AC) målt. I tillegg måles den potensielle dråpe over celle laget av det andre (indre) elektrode paret. Elektrisk impedans beregnes deretter i henhold til ohm ' s lov. FRIVILLIG verdier er normalisert ved å multiplisere impedans og celle lag overflateareal og er vanligvis uttrykt som Ω ∙ cm2.
Det finnes systemer der celler og elektroder er ordnet på en mer sofistikert måte, men er også basert på 4T måle prinsippet og kan brukes med samme måle enheter. EndOhm-systemer, for eksempel, der filteret er satt inn, inneholder et kammer og lokk med et par konsentriske elektroder med samme struktur som chopstick elektroden. Formen på elektrodene gjør det mulig for en mer ensartet nåværende tetthet flyt over membranen, og dermed redusere variasjon mellom målingene. Enda mer kompleks (men også mer nøyaktig) er en ussing kammer, der et celle lag skiller to kamre fylt med ringer løsning22. Kammeret i seg selv kan være gasset med oksygen, CO2, eller N2, og rørt eller supplert med eksperimentelle stoffer. Som ion transport over celle laget oppstår, en potensiell forskjell kan måles ved to spennings-sensing elektroder nær vevet. Denne spenningen avbrytes av to strømførende elektroder plassert ved siden av celle laget. Den målte strøm vil da gi netto ion transport og transepitelial motstand, noe som reflekterer barriere integritet, kan bestemmes22. Frivillig måling kan også påføres på Body-on-a-chip systemer som representerer barriere-vev modeller23,24. Disse systemene etterligner i vivo forhold i cellene og ofte består av flere typer celler, stablet oppå hverandre i lag.
Følgende protokoll forklarer hvordan du setter opp en kostnadseffektiv og pålitelig voltammeter med programmerbar utgangsfrekvens som produserer ingen statistisk signifikante forskjeller i frivillig sammenlignet med kommersielt tilgjengelige målesystemer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. montering av grunnleggende volt-amperemeter for frivillig-måling
- Forbered en standard USB-lader som 5 V DC strømforsyning, en USB-skjøteledning, en microcontroller som vil bli brukt som en programmerbar firkantet bølge generator, to standard multimetre som er i stand til å måle vekselstrøm og spenning som root Mean Square ( True-RMS), fire kabler med banan plugger, en telefon skjøteledning med en RJ14 kvinnelig kontakt inkludert seks pinner med den indre fire kablet (6P4C), to korte kabler, en glans Terminal, en 120 kΩ pre-motstand, wire end ferrules, og lodding ører. Verktøyene som kreves er en isolasjon stripper, en krymping verktøy, og en loddebolt.
- Først kobler du USB-utvidelsen til microcontroller bord.
- Strip slutten isolasjon av to korte kabler. Lodde en side per kabel enten direkte til pinner 0 og 2 av microcontroller eller til lodding ører, som igjen er avkuttet på de respektive pinnene. Krympe de andre endene til wire enden ferrules og koble dem til en glans terminal som avbildet i figur 1.
- Koble banan pluggene til multimetre. Strip og klemme den andre enden av hver av de fire kablene.
- Skjær telefon forlengelsesledningen i to deler og Demonter og klem lederne på siden som inneholder hunn-kontakten. Sjekk for kontinuitet av dirigenter og pinner.
- Den første multimeter vil bli brukt til å måle strøm i μA (Merk at AC-modus må settes eksplisitt). Koble den i en serie med en 120 kΩ pre-motstand til pinner fem og seks av RJ14 kontakten, tilsvarende den ytre elektroden paret av chopstick elektroden.
- Til slutt, koble den andre multimeter, som vil bli brukt til å måle transepitelial spenningsfall i mV, via glans terminalen til pinner tre og fire av RJ14-kontakten, tilsvarende den indre elektroden paret av chopstick elektroden.
- Monter installasjonen i et chassis hvis du ønsker det.
2. programmere microcontroller
- Endre den angitte kildekoden (Tilleggskode fil 1) etter behov. I det gitte skjemaet vil pins 0 og 2 veksle mellom bakken og + 5 V med 40 MS halv tid for pendling. Således vil en firkantbølge signal med en amplitude på 5 V og en frekvens på ca 12,5 Hz bli generert. Det virkelig verdier kanskje avviker på grunn av det unøyaktig av det microcontroller ' tid emitter.
- Koble microcontroller til en stasjonær datamaskin via en USB-port og Last opp kildekoden med matchende programvare25.
3. opptak av spennings oscillograms (valgfritt)
- Bypass pins fem og seks av RJ14 kontakten med en 1 kΩ test motstand og koble til et oscilloskop.
- Kontroller frekvensen, topp spenningen og bølgeformen. Digitalisere og Eksporter dataene.
- Om ønskelig kan du ta opp oscillograms fra en referanse enhet (EVOM) og de selv monterte voltammeter for sammenligning.
Merk: i dette tilfellet ble dataene registrert med et digitalt lagringsområde HM 208. Å være en svært grunnleggende digitalt oscilloskop, kan bildet være internt digitalisert (frossen), men måtte tegnes ved hjelp av en analog PM 8143 X-Y-opptaker. Bildet ble senere skannet.
4. celle dyrking og frivillig-måling
- Seed Human akkord plexus papilloma (HIBCPP) celler på cellekultur filter innsatser med en pore størrelse på 3 μm i DMEM/F12 (se tabell over materialer) som inneholder 10% fosterets kalv serum9. Vokse cellene ved 37 ° c i en vann mettet atmosfære som inneholder 5% CO2 som beskrevet av Dinner et al.9.
- Når filtrene når en impedans på 70 Ω ∙ cm2, Bytt til serum-fri DMEM/F12 og definere Timepoint som dag 0.
- Koble elektroden til RJ14-porten på den selv monterte voltammeter og koble til USB-strømforsyningen. Angi henholdsvis multimetre til VEKSELSTRØMS modus (mV) og VEKSELstrøms modus (μA).
- Alternativt kan du koble elektroden til en kommersielt tilgjengelig referanse enhet og slå den på i henhold til produsentens anvisninger.
- Sterilisere elektroden i 80% etanol i 10 min og likevekt i riktig medium for ytterligere 10 min.
- Sett elektroden i begge rom av et cellekultur filter sett system (den lengre delen av elektroden i det nedre rommet og den korteste delen i det øvre rommet) som inneholder et HIBCPP celle lag inntil måleverdiene forblir konstante.
- For en referanse enhet, Merk impedans direkte eller beregne impedans i henhold til ohm ' s lov (R = U/I) for de selv monterte voltammeter. Vær oppmerksom på at elektrode vinkelen påvirker målingene.
- Gjenta frivillig-målingen (trinn 3 − 6) fra dag 0 til dag 4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
For å sammenligne driften av en selv montert voltammeter med sin kommersielt tilgjengelige motstykke, ble en spennings oscillogram av begge enhetene registrert.
Som vist i figur 2A, genererte referanse instrumentet et firkantet bølge signal med en amplitude på 80 mv og en tid med pendling på 80 MS, som tilsvarer en frekvens på 12,5 Hz, når den brukes på Last med en 1 kΩ test motstand.
I kontrast byttet microcontroller til den selv monterte enheten forsyningsspenningen til et firkantet bølge signal med en amplitude på 5 V (figur 2B) hvis ingen pre-motstand ble satt i. Det ble klart at den resulterende strømmen ødelegger enhver barrierefunksjon og gjelder ikke for cellekultur eksperimenter (data ikke vist). En ytterligere sak er at i dette oppsettet en 1 kΩ test motstanden forårsaket en overbelastning med en resulterende nedgang på spenning (figur 2B). I tillegg var effektiv bevegelse tiden av microcontroller var 60 MS (frekvens = 16,7 Hz) og dermed forskjellig fra programmert forsinkelse tid på grunn av unøyaktigheter i tiden emitter. Hvis en 120 kΩ-preresistor ble installert, ble amplituden redusert til en verdi på 40 mV, som var egnet for cellekultur (figur 2C). Som sett i oscillogram var signal-til-støy-forholdet betydelig svekket (figur 2C), men påvirket ikke målingene merkbart.
Begge enhetene ble brukt til å bestemme impedans på en kunstig blod-spinalvæske barriere (forenklet krets diagram vist i figur 2D). HIBCPP celler ble dyrket på cellekultur filter inserts og frivillig ble målt over 6 dager: starter en dag før cellene ble flyttet til serum-frie forhold (dag-1) og opp til 4 dager etter endring av medium (dag 4). Alle målinger ble gjort i quadruplicates ved hjelp av fire HIBCPP filtre forberedt på samme måte. Lignende verdier ble innhentet for referanse instrumentet og de selv monterte voltammeter (Figur 3). Målingene var reproduserbar, og standardavvik var innenfor samme område. FRIVILLIG verdier varierte fra 20 − 550 Ω ∙ cm2. Ved hjelp av 0,33 cm2 filtre tilsvarer dette en absolutt impedans på 83 − 1660 Ω.
Figur 1: layout diagram av en grunnleggende volt-amperemeter for frivillig måling. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: Oscillograms-og målings oppsett. (A) kommersielt tilgjengelig EVOM. (B) selv-montert voltammeter uten pre-motstand. (C) selv-montert voltammeter med 120 kΩ pre-motstand. (D) kretsskjema for målings oppsett. Merk at C-elektroden bare vises i de elektriske kretsene når bipolare systemer brukes. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Bilde 3: frivillig målinger av HIBCPP celle lag på cellekultur filter innsatser før du bytter til serum fritt kultur medium (dag-1), på dagen for veksling (dag 0), og opptil 4 dager etter (dager 1 − 4). Feilfelt angir standardavviket for de fire HIBCPP-filtrene som ble klargjort på samme måte. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Tilleggskode fil 1. Vennligst klikk her for å laste ned denne filen.
Tilleggskode fil 2. Vennligst klikk her for å laste ned denne filen.
Tilleggskode fil 3. Vennligst klikk her for å laste ned denne filen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Før en selv laget voltammeter kan brukes i en daglig rutine, er det viktig å sjekke enheten for riktig funksjon. I vårt tilfelle var en halv tid for pendling av 40 MS (12,5 Hz) programmert, men den effektive pendling tiden viste seg å være 60 MS (16,7 Hz). Dette unøyaktigheter i microcontroller tid emitter hadde ingen merkbar innvirkning på frivillig målinger. Det kan være best å finne den faktiske frekvensen ved hjelp av frekvensinnstillingen for en av multimetre. Hvis det blir funnet avvik, kan kildekoden justeres i henhold til dette. Videre anbefales det sterkt å kontrollere om en test motstand eller andre definerte oppsett gir korrekte og reproduserbar resultater. Hvis du arbeider med kunstige cellulære barriere systemer, kan det være best å alltid relatere molekyl Flux med impedans måling.
I dette tilfellet ble anvendt strøm begrenset ved hjelp av en 120 kΩ pre-motstand. Forutsatt at typiske frivillig-verdier varierer fra 100 Ω − 2000 Ω, kan spenningsfall over celle laget beregnes til 4 − 83 mV. En frivillig på 1 kΩ ble simulert av en test motstand, og den resulterende potensielle fall ble bekreftet å være 40 mV (figur 2C).
Kommersielt tilgjengelige enheter ofte gi et Måleområde bytte for å veksle pre-motstanden og dermed begrense utgangsstrømmen til ulike verdier. I dette tilfellet er det mulig å installere ulike pre-motstander eller til og med erstatte motstanden med en potensiometer.
Det viste oppsettet representerer et kostnadseffektivt alternativ til kommersielt tilgjengelige instrumenter for frivillig-måling. Verdier som har blitt målt med de selv monterte voltammeter, var sammenlignbare med referanseenheten over et bredt spekter. Det samme gjelder for standardavvikene. Støyen i firkantbølge signalet påvirket ikke målingene merkbart. Protokollen kan støtte forskere som er begrenset av begrensede økonomiske ressurser eller som ønsker å utføre foreløpige eksperimenter til lave kostnader.
Videre kan microcontroller enkelt programmeres til forskjellige utgangs frekvenser. Dette kan være fordelaktig, da den tilsynelatende impedans består av Rmedium, Rfrivillig, så vel som kapasitet Ccelle lag26 (figur 2D). I tillegg Celektrode vises hvis bipolar systemer brukes, mens innflytelsen fra elektroden polarisering impedans er redusert i tetrapolar systemer. Dette betyr at den målte impedans vil bli dominert av Rfrivillig at lave frekvenser og, i Bipolar systemer, av kapasiteten på elektrodene, mens ved høye frekvenser den totale impedans konvergerer til motstanden av mediet26, 27i det. I mellom er impedans påvirket av C Cell-laget, som er derfor tilgjengelig ved hjelp av elektrisk impedans spektroskopi28.
Vi tilbyr to (ikke-testet) eksempel koder for å gi en pekepinn på hvordan enheten kan optimaliseres eller omprogrammeres for ulike applikasjoner. Først en svært grunnleggende impedans spektroskopi kunne realiseres ved å alternerende output frekvensen i 20 sekunders intervaller mellom 12,5, 500 og 5000 Hz (supplerende koding fil 2). I dette tilfellet kan en tetrapolar20,28 eller bipolar27 elektrode brukes. Anvendt frekvens kan vises ved den innebygde multimeter (eller en skjerm eller LED koblet til microcontroller). For det andre kan enheten brukes til å måle konduktivitet av buffere og medier. Dette gjøres vanligvis ved hjelp av tetrapolar elektroder med høye frekvenser i en rekke 1-110kHz. Koden i supplerende koding fil 3 inneholder ingen forsinkelsestid og (med vår enhet) genererte en frekvens på ca 70kHz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingen konkurrerende økonomiske interesser eller andre interessekonflikter.
Acknowledgments
Forfatterne vil gjerne takke Herman Liggesmeyer og Marvin bende for deres faglige råd i electrotechnics og informatikk.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 120 kOhm resistor | General (generic) equipment | ||
| Banana plug cables | General (generic) equipment | ||
| Cables | General (generic) equipment | ||
| Chopstick electrode | Merck Millicell | MERSSTX01 | |
| Chopstick electrode (alternative) | WPI World Precision Instruments | STX2 | |
| Crimping tool | General tool | ||
| Digispark / ATtiny85 | AZ-Delivery Vertriebs GmbH | Digispark Rev.3 Kickstarter | |
| DMEM:F12 | Gibco (Thermo Fisher) | 31330038 | |
| Fetal calf serum (FCS)/Fetal Bovine Serum (FBS) | Life Technologies | 10270106 | |
| Filter inserts 3µm translucent | Greiner Bioone | 662631 | |
| HIBCPP | Hiroshi Ishikawa / Horst Schroten | ||
| Insulation stripper | General tool | ||
| Luster terminal | General (generic) equipment | ||
| Oscilloscope | HAMEG | Digital Storage Scope HM 208 | |
| Plotter | PHILIPS | PM 8143 X-Y recorder | |
| Software Arduino | https://www.arduino.cc | Arduino 1.8.9 | |
| Soldering iron | General tool | ||
| Soldering lugs | General (generic) equipment | ||
| Telephone cable with RJ14 (6P4C) connector | General (generic) equipment | ||
| Test resistor | Merck Millicell | MERSSTX04 | |
| True-RMS multimeters | VOLTCRAFT | VC185 | |
| USB charger | General (generic) equipment | ||
| USB extension cord | General (generic) equipment | ||
| Voltohmmeter for TEER measurement | WPI World Precision Instruments | EVOM | |
| Voltohmmeter for TEER measurement (alternative) | Merck Millicell | ERS | |
| Wire end ferrules | General (generic) equipment |
References
- Matter, K., Balda, M. S. Functional analysis of tight junctions. Methods. 30, 228-234 (2003).
- Srinivasan, B., et al. TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems. Journal of Laboratory Automation. 20, 107-126 (2015).
- Daniels, B. P., et al. Immortalized human cerebral microvascular endothelial cells maintain the properties of primary cells in an in vitro model of immune migration across the blood brain barrier. Journal of Neuroscience Methods. 212, 173-179 (2013).
- Weksler, B. B., et al. Blood-brain barrier-specific properties of a human adult brain endothelial cell line. Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 19, 1872-1874 (2005).
- Lippmann, E. S., Al-Ahmad, A., Azarin, S. M., Palecek, S. P., Shusta, E. V. A retinoic acid-enhanced, multicellular human blood-brain barrier model derived from stem cell sources. Scientific Reports. 4, 4160 (2014).
- Stins, M. F., Badger, J., Sik Kim, K. Bacterial invasion and transcytosis in transfected human brain microvascular endothelial cells. Microbial Pathogenesis. 30, 19-28 (2001).
- Muruganandam, A., Herx, L. M., Monette, R., Durkin, J. P., Stanimirovic, D. B. Development of immortalized human cerebromicrovascular endothelial cell line as an in vitro model of the human blood-brain barrier. Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 11, 1187-1197 (1997).
- Ishiwata, I., et al. Establishment and characterization of a human malignant choroids plexus papilloma cell line (HIBCPP). Human Cell. 18, 67-72 (2005).
- Dinner, S., et al. A Choroid Plexus Epithelial Cell-based Model of the Human Blood-Cerebrospinal Fluid Barrier to Study Bacterial Infection from the Basolateral Side. Journal of Visualized Experiments. , (2016).
- Schwerk, C., et al. Polar invasion and translocation of Neisseria meningitidis and Streptococcus suis in a novel human model of the blood-cerebrospinal fluid barrier. PLoS One. 7, e30069 (2012).
- Tenenbaum, T., et al. Polar bacterial invasion and translocation of Streptococcus suis across the blood-cerebrospinal fluid barrier in vitro. Cellular Microbiology. 11, 323-336 (2009).
- Gath, U., Hakvoort, A., Wegener, J., Decker, S., Galla, H. J. Porcine choroid plexus cells in culture: expression of polarized phenotype, maintenance of barrier properties and apical secretion of CSF-components. European Journal of Cell Biology. 74, 68-78 (1997).
- Haselbach, M., Wegener, J., Decker, S., Engelbertz, C., Galla, H. J. Porcine Choroid plexus epithelial cells in culture: regulation of barrier properties and transport processes. Microscopy Research and Technique. 52, 137-152 (2001).
- Strazielle, N., Ghersi-Egea, J. F. Physiology of blood-brain interfaces in relation to brain disposition of small compounds and macromolecules. Molecular Pharmaceutics. 10, 1473-1491 (2013).
- Hilgendorf, C., et al. Caco-2 versus Caco-2/HT29-MTX co-cultured cell lines: permeabilities via diffusion, inside- and outside-directed carrier-mediated transport. Journal of Pharmaceutical Sciences. 89, 63-75 (2000).
- Mathia, N. R., et al. Permeability characteristics of calu-3 human bronchial epithelial cells: in vitro-in vivo correlation to predict lung absorption in rats. Journal of Drug Targeting. 10, 31-40 (2002).
- Fuchs, S., et al. Differentiation of human alveolar epithelial cells in primary culture: morphological characterization and synthesis of caveolin-1 and surfactant protein-C. Cell and Tissue Research. 311, 31-45 (2003).
- Furie, M. B., Cramer, E. B., Naprstek, B. L., Silverstein, S. C. Cultured endothelial cell monolayers that restrict the transendothelial passage of macromolecules and electrical current. The Journal of Cell Biology. 98, 1033-1041 (1984).
- Hidalgo, I. J., Raub, T. J., Borchardt, R. T. Characterization of the human colon carcinoma cell line (Caco-2) as a model system for intestinal epithelial permeability. Gastroenterology. 96, 736-749 (1989).
- Yeste, J., et al. Geometric correction factor for transepithelial electrical resistance measurements in Transwell and microfluidic cell cultures. Journal of Physics D Applied Physics. 49 (37), 3754 (2016).
- Northrup, E. VI: The Measurement of Low Resistance. Methods of Measuring Electrical Resistance. , McGraw-Hill. 100-131 (1912).
- Li, H., Sheppard, D. N., Hug, M. J. Transepithelial electrical measurements with the Ussing chamber. Journal of Cystic Fibrosis. 3 (Suppl 2), 123-126 (2004).
- Griep, L. M., et al. BBB on chip: microfluidic platform to mechanically and biochemically modulate blood-brain barrier function. Biomedical Microdevices. 15, 145-150 (2013).
- Esch, M. B., et al. On chip porous polymer membranes for integration of gastrointestinal tract epithelium with microfluidic 'body-on-a-chip' devices. Biomedical Microdevices. 14, 895-906 (2012).
- Arduino IDE. Arduino Web Editor. , https://www.arduino.cc/en/Main/Software (2019).
- Benson, K., Cramer, S., Galla, H. J. Impedance-based cell monitoring: barrier properties and beyond. Fluids and Barriers of the CNS. 10, 5 (2013).
- Hufnagl, M. Time Resolved Transepithelial Impedance Spectroscopy Of Caco 2 Monolayers Relying on Lithographically Patterned Basolateral Electrode Cell Arrays. , University of Vienna. (2010).
- Guimerà, A., Gabriel, G., Parramon, D., Calderón, E., Villa, R. Portable 4 Wire Bioimpedance Meter with Bluetooth Link. World Congress on Medical Physics and Biomedical Engineering. International Federation of Medical and Biological Engineering Proceedings. Dössel, O., Schlegel, W. C. 25/7, Springer. Berlin, Heidelberg. (2009).
