Summary
Här visar vi hur man ställer in en billig volt-amperemeter med programmerbara utdata frekvens som kan användas med kommersiellt tillgängliga chopstick elektroder för transepitelial/endoteliala mätningar elektriskt motstånd.
Abstract
Transsepitelial/endothelial elektriskt motstånd (TEER) har använts sedan 1980-talet för att bestämma confluency och permeabilitet av in vitro-barriär modellsystem. I de flesta fall, chopstick elektroder används för att bestämma den elektriska impedansen mellan det övre och undre facket i en cellkultur filter infoga system som innehåller cellulära monolayers. Filtret membranet gör att cellerna att fästa, polarisera, och interagera genom att bygga snäva korsningar. Denna teknik har beskrivits med en mängd olika cellinjer (t. ex. celler i blod-hjärnbarriären, blod-cerebrospinalvätska barriär, eller gastrointestinala och pulmonell tarmkanalen). TEER mätanordningar kan lätt erhållas från olika leverantörer av laboratorieutrustning. Det finns dock mer kostnadseffektiva och anpassningsbara lösningar tänkbara om en lämplig voltammeter är självmonterad. Det övergripande syftet med denna publikation är att ställa in en tillförlitlig enhet med programmerbar utgångsfrekvens som kan användas med kommersiellt tillgängliga chopstick elektroder för TEER mätning.
Introduction
Epitelial och endotelceller fungerar som cellulära gränser, separera apikala och basolaterala sidor av kroppen. Om de är anslutna genom täta korsningar, passiv substans diffusion genom paracellulära utrymmen är begränsad1, vilket resulterar i bildandet av en selektivt permeabel barriär. Flera konstgjorda barriär system har utvecklats2 använda mikrovaskulära endotelceller (hbmec, blod-hjärnbarriären3,4,5,6,7), plexus koroidea epitelceller (hibcpp/pcpec, blod-cerebrospinalvätska barriär8,9,10,11,12,13,14), adenocarcinom i kolorektal (Caco-2, gastrointestinala modeller15), eller luftvägarna/alveolära cellinjer (pulmonella modeller16,17). Dessa system består vanligtvis av celler som odlas i en enskiktslager på permeabla membran (dvs., filter infoga system) för att ge tillgång till den apikala och basolaterala sidor. Det är viktigt att modell systemets integritet överensstämmer med in vivo-villkoren. Därför har flera tekniker utvecklats för att analysera barriärfunktion genom att mäta paracellulär diffusion av spårämnen över cell skiktet. Dessa ämnen inkluderar radiomärkt sackaros, Dye-märkt albumin, FITC-märkta inulin, eller Dye-märkt dextrans2. Men kemiska färgämnen kan göra celler oanvändbara för ytterligare experiment. För att övervaka barriär system noninvasively, mätning av transepitelial/transendothelial elektriskt motstånd (TEER) över en cellulär enskiktslager kan användas2,18,19. Eftersom bipolär elektrod system påverkas av elektroden polarisering impedansen vid elektrod-elektrolyt gränssnitt, tetrapolära mätningar används i allmänhet för att övervinna denna begränsning20. Den underutnings teknik är en fyra-terminal avkänning (4T) som först beskrevs i 1861 av William Thomson (Lord Kelvin)21. I korthet injiceras strömmen av ett par strömbärande elektroder medan ett andra par spännings Avkännings elektroder används för att mäta spänningsfallet20. Numera, så kallade chopstick elektroder består av ett par dubbla elektroder, vardera innehåller en Silver/Silver-klorid pellet för mätning av spänning och en silver elektrod för att passera nuvarande2. Den elektriska impedansen mäts mellan det apikala och det basolaterala facket med cell skiktet däremellan (figur 1). En fyrkantig vågsignal med en frekvens av typiskt 12,5 Hz appliceras på de yttre elektroderna och den resulterande växelströmmen (AC) mätt. Dessutom mäts potentiell droppe över cell skiktet med det andra (inre) elektrod paret. Elektrisk impedans beräknas sedan enligt Ohms lag. TEER värden normaliseras genom att multiplicera impedans och cell lager yta och uttrycks vanligen som Ω ∙ cm2.
Det finns system där celler och elektroder är ordnade på ett mer sofistikerat sätt, men är också baserade på 4T-mätprincipen och kan användas med samma mätutrustning. EndOhm system, till exempel, där filtret är insatt, innehåller en kammare och mössa med ett par koncentriska elektroder med samma struktur som chopstick elektroden. Elektrodernas form möjliggör en jämnare strömtäthet över membranet, vilket minskar variationen mellan avläsningarna. Ännu mer komplex (men också mer exakt) är en Ussing kammare, där ett cellskikt separerar två kammare fyllda med Ringers lösning22. Kammaren själv kan gasas med syre, CO2, eller N2, och rörs eller kompletteras med experimentella substanser. Eftersom jontransporten över cell skiktet sker kan en potentiell skillnad mätas med två spännings Avkännings elektroder nära vävnaden. Denna spänning avbryts av två strömbärande elektroder placerade bredvid cell skiktet. Den uppmätta strömmen kommer då att ge netto jontransporten och transepitelial resistens, som återspeglar barriär integritet, kan bestämmas22. TEER mätning kan också appliceras på Body-on-a-chip system som representerar barriär-vävnadsmodeller23,24. Dessa system efterliknar in vivo förhållanden i cellerna och består ofta av flera typer av celler, staplade ovanpå varandra i lager.
Följande protokoll förklarar hur man ställer in en kostnadseffektiv och tillförlitlig voltameter med programmerbar utgångsfrekvens som inte ger några statistiskt signifikanta skillnader i TEER jämfört med kommersiellt tillgängliga mätsystem.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. montering av en grundläggande volt-amperemeter för TEER mätning
- Förbered en vanlig USB-laddare som 5 V DC strömförsörjning, en USB förlängningssladd, en mikrokontroller som kommer att användas som en programmerbar kvadrat våg generator, två standard multimetrar som kan mäta växelström och spänning som root mean Square ( True-RMS), fyra kablar med Banana pluggar, en telefon förlängningssladd med en RJ14 hona kontakt med sex stift med de fyra inre kabelanslutna (6P4C), två korta kablar, en Luster Terminal, en 120 kΩ för resistor, änd hylsklar, och lödning klackarna. De verktyg som krävs är en isolerings Strippa, ett Crimpverktyg och en lödkolv.
- Anslut först USB-förlängningen till mikrokontroller-kortet.
- Band isoleringen av två korta kablar. Lödtenn en sida per kabel antingen direkt till stift 0 och 2 i mikrokontroller eller till lödning LUGs, som i sin tur klipps på respektive stift. Crimp de andra ändarna till änd hylsvavlar och Anslut dem till en Luster Terminal som avbildas i figur 1.
- Länka banan kontakterna till multimetrar. Band och Crimp den andra änden av var och en av de fyra kablarna.
- Skär telefon förlängningssladden i två delar och demontera och Crimp ledarna för den sida som innehåller honkontakt. Kontrollera om ledarna och stiften är kontinuerliga.
- Den första multimetern kommer att användas för att mäta ström i μA (Observera att AC-läget måste anges explicit). Anslut den i en serie med en 120 kΩ pre-resistor till stift fem och sex av RJ14-kontakten, motsvarande den yttre elektrodpar av chopstick elektroden.
- Slutligen, länka den andra multimeter, som kommer att användas för att mäta transepitelial spänningsfall i mV, via Luster terminalen till stift tre och fyra av RJ14 kontakten, som motsvarar den inre elektrodpar av chopstick elektrod.
- Montera installationen i ett chassi om så önskas.
2. programmering av mikrokontroller
- Ändra den angivna källkoden (kompletterande kodnings fil 1) efter behov. I given form, stift 0 och 2 kommer alternera mellan marken och + 5 V med 40 MS halvtid av svängning. Således kommer en fyrkantig våg signal med en amplitud på 5 V och en frekvens på cirka 12,5 Hz genereras. De verkliga värdena kan skilja sig åt på grund av felaktigheter i mikrokontrollantens tid EMITTER.
- Anslut mikrokontroller till en stationär dator via en USB-port och ladda upp källkoden med matchande programvara25.
3. inspelning av spänningsoscillogram (tillval)
- Bypass stift fem och sex av RJ14 kontakten med en 1 kΩ test motstånd och ansluta till ett oscilloskop.
- Kontrollera frekvens, topp spänning och vågform. Digitalisera och exportera data.
- Om så önskas, spela in Oscillogram från en referens enhet (EVOM) och den egenmonterade voltammeter för jämförelse.
ANMÄRKNINGAR: i det här fallet registrerades data med ett digitalt lagrings omfång HM 208. Att vara en mycket grundläggande digitala oscilloskop, kan bilden vara internt digitaliseras (fryst) men måste ritas med en analog PM 8143 X-Y Recorder. Bilden skannades därefter.
4. cell odling och TEER mätning
- Utsäde mänskliga choroid plexus papillom (HIBCPP) celler på cellodling filter skär med en porstorlek på 3 μm i DMEM/F12 (se tabell över material) som innehåller 10% fetalt kalv serum9. Odla cellerna vid 37 ° c i en vattenmättad atmosfär som innehåller 5% CO2 som beskrivs av Dinner et al.9.
- När filtren når en impedans på 70 Ω ∙ cm2, Byt till SERUMFRITT DMEM/F12 och definiera tidspunkten som dag 0.
- Anslut elektroden till RJ14-porten på den egenmonterade voltametern och koppla in USB-strömtillförseln. Ställ in multimetrar till AC Voltage mode (mV) och AC Current mode (μA), respektive.
- Alternativt kan du ansluta elektroden till en kommersiellt tillgänglig referens enhet och slå på enligt tillverkarens anvisningar.
- Sterilisera elektroden i 80% etanol i 10 min och jämvikt i lämpligt medium för ytterligare 10 min.
- Placera elektroden i båda delarna av ett cellkultur filter skärsystem (den längre delen av elektroden i det undre facket och den kortare delen i det övre facket) som innehåller ett HIBCPP-cellskikt tills mätvärdena förblir konstanta.
- För en referens anordning, notera impedansen direkt eller beräkna impedansen enligt Ohms lag (R = U/I) för den självmonterade voltammeter. Tänk på att elektrod vinkeln påverkar mätningarna.
- Upprepa TEER mätningen (steg 3 − 6) från dag 0 till dag 4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
För att jämföra driften av en självmonterad voltameter med dess kommersiellt tillgängliga motsvarighet, spelades en spänningsoscillogram av båda enheterna in.
Som visas i figur 2a, genererade referensinstrumentet en fyrkantig vågsignal med en amplitud på 80 MV och en svängning tid på 80 MS, vilket motsvarar en frekvens på 12,5 Hz, vid drift på belastning med en 1 kΩ test resistor.
Däremot bytte mikrokontrollern av den egenmonterade enheten matningsspänningen till en fyrkantig vågsignal med en amplitud på 5 V (figur 2B) om ingen för resistor var inställd. Det blev uppenbart att den resulterande strömmen förstör någon barriärfunktion och är inte tillämplig för cellkultur experiment (data som inte visas). Ytterligare en fråga är att i denna inställning en 1 kΩ test motstånd orsakat en överbelastning med en resulterande nedgång av spänning (figur 2B). Dessutom var den effektiva svängning tiden för mikrokontroller 60 ms (frekvens = 16,7 Hz) och därmed skilde sig från den programmerade fördröjningstiden på grund av felaktigheter i tid sändaren. Om en 120 kΩ preresistor installerades, minskade amplituden till ett värde av 40 mV, som var lämplig för cellodling (figur 2C). Som framgår av oscillogrammet var signal-brus-förhållandet avsevärt nedsatt (figur 2C) men påverkade inte mätningarna märkbart.
Båda enheterna användes för att bestämma impedansen hos en konstgjord blod-cerebrospinalvätska barriär (förenklat kretsschema visas i figur 2D). HIBCPP celler odlades på cellodling filter skär och TEER mättes över 6 dagar: börjar en dag innan cellerna flyttades till serum fria villkor (dag-1) och upp till 4 dagar efter byte av medium (dag 4). Alla mätningar gjordes i fyrdubblat med hjälp av fyra HIBCPP-filter som förberetts på samma sätt. Liknande värden erhölls för referensinstrumentet och den självmonterade voltammetern (figur 3). Mätningarna var reproducerbara och standardavvikelserna var inom samma område. -Värdena varierade från 20 − 550 Ω ∙ cm2. Med 0,33 cm2 filter motsvarar detta en absolut impedans på 83 − 1660 Ω.
Figur 1: Layoutdiagram över en grundläggande volt-amperemeter för TEER mätning. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Bild 2: Oscillogram och mätningsinställningar. (A) kommersiellt tillgänglig EVOm. Bsjälvmonterad voltameter utan för resistor. Csjälvmonterad voltameter med 120 kΩ för resistor. (D) Kretsschema för Mät inställning. Observera att C-elektroden endast visas i de elektriska kretsarna när bipolär system används. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: TEER mätningar av HIBCPP cellskikt på cellodling filter infogar innan du byter till serum fria odlingssubstrat (dag-1), på dagen för växling (dag 0), och upp till 4 dagar efter (dagar 1 − 4). Felstaplar anger standardavvikelsen för de fyra HIBCPP-filtren som har förberetts på samma sätt. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Kompletterande kodnings fil 1. Vänligen klicka här för att ladda ner denna fil.
Kompletterande kodnings fil 2. Vänligen klicka här för att ladda ner denna fil.
Kompletterande kodnings fil 3. Vänligen klicka här för att ladda ner denna fil.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Innan en egentillverkad voltammeter kan användas i en daglig rutin, är det viktigt att kontrolleraenheten för korrekt funktion. I vårt fall, en halvtid av svängning av 40 MS (12,5 Hz) programmerades, men den effektiva svängning tiden visade sig vara 60 ms (16,7 Hz). Denna felaktigheter i MicroController ' s Time EMITTER hade ingen detekterbar inverkan på TEER mätningar. Det kan vara bäst att bestämma den faktiska frekvensen med hjälp av frekvensinställningen för en av multimetrarna. Om någon avvikelse hittas kan källkoden justeras i enlighet med detta. Vidare rekommenderas det starkt att kontrollera om ett test motstånd eller andra definierade inställningar ger korrekta och reproducerbara resultat. Om du arbetar med konstgjorda cellulära barriär system, det kan vara bäst att alltid korrelera molekyl Flux med impedans mätning.
I detta fall begränsades den tillämpade strömmen med hjälp av en 120 kΩ pre-resistor. Om man antar att typiska TEER-värden sträcker sig från 100 Ω − 2000 Ω kan spänningsfallet över cell skiktet beräknas till 4 − 83 mV. En TEER av 1 kΩ simulerades av ett test motstånd och den resulterande potentiella minskningen bekräftades vara 40 MV (figur 2C).
Kommersiellt tillgängliga enheter ger ofta en Mät områdes omkopplare för att växla för resistorn och därmed begränsa utgångsströmmen till olika värden. I detta fall är det möjligt att installera olika pre-resistorer eller att ens ersätta motstånd med en potentiometer.
Den visade inställningen är ett kostnadseffektivt alternativ till kommersiellt tillgängliga instrument för TEER mätning. Värden som har mätts med den egenmonterade voltammetern var jämförbara med referens anordningen över ett brett spektrum. Detsamma gäller för standardavvikelserna. Bullret i kvadratvågsignalen påverkade inte mätningarna särskilt. Protokollet kan stödja forskare som är begränsade av begränsade ekonomiska resurser eller som vill utföra preliminära experiment till låga kostnader.
Dessutom kan mikrokontrollern enkelt programmeras till olika utgångs frekvenser. Detta kan vara fördelaktigt eftersom den skenbara impedansen består av R-medel, r-TEER, samt kapaciteten C-cellskikt26 (figur 2D). Dessutom, C-elektroden visas om bipolär system används, medan påverkan från elektroden polarisering impedansen reduceras i tetrapolära system. Detta innebär att den uppmätta impedansen kommer att domineras av RTEER vid låga frekvenser och, i bipolära system, av elektrodernas kapacitet, medan den totala impedansen vid höga frekvenser konvergerar till mediets motstånd26. 27. Däremellan påverkas impedansen av C-cellskiktet, som därför är tillgängligt med hjälp av elektrisk impedansspektroskopi28.
Vi tillhandahåller två (oprövade) exempel koder för att ge en uppfattning om hur enheten kan optimeras eller omprogrammeras för olika program. För det första kan en mycket grundläggande impedansspektroskopi realiseras genom att alternera den utgående frekvensen i 20 sekunders intervaller mellan 12,5, 500 och 5000 Hz (kompletterande kodnings fil 2). I detta fall kan en tetrapolär20,28 eller bipolär27 elektrod användas. Tillämpad frekvens kan visas av inbyggd multimeter (eller någon bildskärm eller LED-ansluten till mikrokontroller). För det andra kan enheten användas för att mäta konduktivitet av buffertar och media. Detta görs vanligtvis med hjälp av tetrapolära elektroder med höga frekvenser i en räckvidd på 1-110kHz. Koden i kompletterande kodnings fil 3 innehåller ingen fördröjningstid och (med vår enhet) genererade en frekvens på cirka 70kHz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inga konkurrerande ekonomiska intressen eller andra intressekonflikter.
Acknowledgments
Författarna vill tacka Herman Liggesmeyer och Marvin Bende för deras expertråd inom elektroteknik och informatik.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 120 kOhm resistor | General (generic) equipment | ||
| Banana plug cables | General (generic) equipment | ||
| Cables | General (generic) equipment | ||
| Chopstick electrode | Merck Millicell | MERSSTX01 | |
| Chopstick electrode (alternative) | WPI World Precision Instruments | STX2 | |
| Crimping tool | General tool | ||
| Digispark / ATtiny85 | AZ-Delivery Vertriebs GmbH | Digispark Rev.3 Kickstarter | |
| DMEM:F12 | Gibco (Thermo Fisher) | 31330038 | |
| Fetal calf serum (FCS)/Fetal Bovine Serum (FBS) | Life Technologies | 10270106 | |
| Filter inserts 3µm translucent | Greiner Bioone | 662631 | |
| HIBCPP | Hiroshi Ishikawa / Horst Schroten | ||
| Insulation stripper | General tool | ||
| Luster terminal | General (generic) equipment | ||
| Oscilloscope | HAMEG | Digital Storage Scope HM 208 | |
| Plotter | PHILIPS | PM 8143 X-Y recorder | |
| Software Arduino | https://www.arduino.cc | Arduino 1.8.9 | |
| Soldering iron | General tool | ||
| Soldering lugs | General (generic) equipment | ||
| Telephone cable with RJ14 (6P4C) connector | General (generic) equipment | ||
| Test resistor | Merck Millicell | MERSSTX04 | |
| True-RMS multimeters | VOLTCRAFT | VC185 | |
| USB charger | General (generic) equipment | ||
| USB extension cord | General (generic) equipment | ||
| Voltohmmeter for TEER measurement | WPI World Precision Instruments | EVOM | |
| Voltohmmeter for TEER measurement (alternative) | Merck Millicell | ERS | |
| Wire end ferrules | General (generic) equipment |
References
- Matter, K., Balda, M. S. Functional analysis of tight junctions. Methods. 30, 228-234 (2003).
- Srinivasan, B., et al. TEER measurement techniques for in vitro barrier model systems. Journal of Laboratory Automation. 20, 107-126 (2015).
- Daniels, B. P., et al. Immortalized human cerebral microvascular endothelial cells maintain the properties of primary cells in an in vitro model of immune migration across the blood brain barrier. Journal of Neuroscience Methods. 212, 173-179 (2013).
- Weksler, B. B., et al. Blood-brain barrier-specific properties of a human adult brain endothelial cell line. Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 19, 1872-1874 (2005).
- Lippmann, E. S., Al-Ahmad, A., Azarin, S. M., Palecek, S. P., Shusta, E. V. A retinoic acid-enhanced, multicellular human blood-brain barrier model derived from stem cell sources. Scientific Reports. 4, 4160 (2014).
- Stins, M. F., Badger, J., Sik Kim, K. Bacterial invasion and transcytosis in transfected human brain microvascular endothelial cells. Microbial Pathogenesis. 30, 19-28 (2001).
- Muruganandam, A., Herx, L. M., Monette, R., Durkin, J. P., Stanimirovic, D. B. Development of immortalized human cerebromicrovascular endothelial cell line as an in vitro model of the human blood-brain barrier. Federation of American Societies for Experimental Biology Journal. 11, 1187-1197 (1997).
- Ishiwata, I., et al. Establishment and characterization of a human malignant choroids plexus papilloma cell line (HIBCPP). Human Cell. 18, 67-72 (2005).
- Dinner, S., et al. A Choroid Plexus Epithelial Cell-based Model of the Human Blood-Cerebrospinal Fluid Barrier to Study Bacterial Infection from the Basolateral Side. Journal of Visualized Experiments. , (2016).
- Schwerk, C., et al. Polar invasion and translocation of Neisseria meningitidis and Streptococcus suis in a novel human model of the blood-cerebrospinal fluid barrier. PLoS One. 7, e30069 (2012).
- Tenenbaum, T., et al. Polar bacterial invasion and translocation of Streptococcus suis across the blood-cerebrospinal fluid barrier in vitro. Cellular Microbiology. 11, 323-336 (2009).
- Gath, U., Hakvoort, A., Wegener, J., Decker, S., Galla, H. J. Porcine choroid plexus cells in culture: expression of polarized phenotype, maintenance of barrier properties and apical secretion of CSF-components. European Journal of Cell Biology. 74, 68-78 (1997).
- Haselbach, M., Wegener, J., Decker, S., Engelbertz, C., Galla, H. J. Porcine Choroid plexus epithelial cells in culture: regulation of barrier properties and transport processes. Microscopy Research and Technique. 52, 137-152 (2001).
- Strazielle, N., Ghersi-Egea, J. F. Physiology of blood-brain interfaces in relation to brain disposition of small compounds and macromolecules. Molecular Pharmaceutics. 10, 1473-1491 (2013).
- Hilgendorf, C., et al. Caco-2 versus Caco-2/HT29-MTX co-cultured cell lines: permeabilities via diffusion, inside- and outside-directed carrier-mediated transport. Journal of Pharmaceutical Sciences. 89, 63-75 (2000).
- Mathia, N. R., et al. Permeability characteristics of calu-3 human bronchial epithelial cells: in vitro-in vivo correlation to predict lung absorption in rats. Journal of Drug Targeting. 10, 31-40 (2002).
- Fuchs, S., et al. Differentiation of human alveolar epithelial cells in primary culture: morphological characterization and synthesis of caveolin-1 and surfactant protein-C. Cell and Tissue Research. 311, 31-45 (2003).
- Furie, M. B., Cramer, E. B., Naprstek, B. L., Silverstein, S. C. Cultured endothelial cell monolayers that restrict the transendothelial passage of macromolecules and electrical current. The Journal of Cell Biology. 98, 1033-1041 (1984).
- Hidalgo, I. J., Raub, T. J., Borchardt, R. T. Characterization of the human colon carcinoma cell line (Caco-2) as a model system for intestinal epithelial permeability. Gastroenterology. 96, 736-749 (1989).
- Yeste, J., et al. Geometric correction factor for transepithelial electrical resistance measurements in Transwell and microfluidic cell cultures. Journal of Physics D Applied Physics. 49 (37), 3754 (2016).
- Northrup, E. VI: The Measurement of Low Resistance. Methods of Measuring Electrical Resistance. , McGraw-Hill. 100-131 (1912).
- Li, H., Sheppard, D. N., Hug, M. J. Transepithelial electrical measurements with the Ussing chamber. Journal of Cystic Fibrosis. 3 (Suppl 2), 123-126 (2004).
- Griep, L. M., et al. BBB on chip: microfluidic platform to mechanically and biochemically modulate blood-brain barrier function. Biomedical Microdevices. 15, 145-150 (2013).
- Esch, M. B., et al. On chip porous polymer membranes for integration of gastrointestinal tract epithelium with microfluidic 'body-on-a-chip' devices. Biomedical Microdevices. 14, 895-906 (2012).
- Arduino IDE. Arduino Web Editor. , https://www.arduino.cc/en/Main/Software (2019).
- Benson, K., Cramer, S., Galla, H. J. Impedance-based cell monitoring: barrier properties and beyond. Fluids and Barriers of the CNS. 10, 5 (2013).
- Hufnagl, M. Time Resolved Transepithelial Impedance Spectroscopy Of Caco 2 Monolayers Relying on Lithographically Patterned Basolateral Electrode Cell Arrays. , University of Vienna. (2010).
- Guimerà, A., Gabriel, G., Parramon, D., Calderón, E., Villa, R. Portable 4 Wire Bioimpedance Meter with Bluetooth Link. World Congress on Medical Physics and Biomedical Engineering. International Federation of Medical and Biological Engineering Proceedings. Dössel, O., Schlegel, W. C. 25/7, Springer. Berlin, Heidelberg. (2009).
