Summary
Her presenterer vi en protokoll for å utføre en invasiv hemodynamisk vurdering av høyre ventrikkel og lungearterien i mus ved hjelp av en åpen-brystet kirurgi tilnærming.
Abstract
Pulmonal arteriell hypertensjon (PAH) er en kronisk og alvorlig hjertelidelse. Mus er en populær dyremodell som brukes til å etterligne denne sykdommen. Evalueringen av høyre ventrikkel trykk (RVP) og lunge arterietrykk (PAP) er imidlertid fortsatt teknisk utfordrende hos mus. RVP og PAP er vanskeligere å måle enn venstre ventrikkel Trykk på grunn av de anatomiske forskjellene mellom venstre og høyre hjerte systemer. I dette dokumentet beskriver vi en stabil rett hjerte hemodynamisk målemetode og validering ved hjelp av sunne og PAH mus. Denne metoden er basert på åpen brystet kirurgi og mekanisk ventilasjon støtte. Det er en komplisert prosedyre i forhold til lukkede bryst prosedyrer. Mens en godt trent kirurg er nødvendig for denne operasjonen, er fordelen med denne prosedyren at den kan generere både RVP-og PAP-parametere samtidig, så det er en foretrukket prosedyre for evalueringen av PAH-modeller.
Introduction
Pulmonal arteriell hypertensjon (PAH) er en kronisk og alvorlig hjertelidelse med høyde i lunge arterietrykk (PAP) og høyre ventrikkel trykk (RVP) som er forårsaket av cellulær spredning og fibrose i små lunge arterier 1. lunge arterie katetre, også kalt Swan-Ganz katetre2, brukes vanligvis i klinisk overvåkning av RVP og PAP. Videre har et trådløst PAP overvåkningssystem blitt brukt klinisk3,4,5. For å etterligne sykdommen for studier hos mus, brukes et hypoxic miljø for å simulere menneskelige kliniske manifestasjoner av PAH6. I evalueringen av PAP i dyr, store dyr er relativt lett å overvåke gjennom lungearterien katetre bruker samme teknikk som for menneskelige, men små dyr som rotter og mus er vanskelig å vurdere på grunn av deres lille kroppsstørrelse. Hemodynamisk måling av høyre ventrikkel system hos mus er mulig med en ultrasmall størrelse 1 fr kateter7. En metode for måling av RVP og PAP i mus er rapportert i litteraturen8,9, men metodikken mangler en detaljert beskrivelse. RVP og PAP er mer utfordrende å måle enn venstre ventrikkel Trykk på grunn av de anatomiske forskjellene mellom venstre og høyre hjerte systemer.
For å få både PAP-og RVP-parametrene i samme mus, beskriver vi en kirurgisk kirurgi BAS ert tilnærming for hjerte hemodynamisk målinger, dens validering med sunne og PAH mus, og hvordan du unngår å generere kunstige data i løpet av den kompliserte åpne kisten Kirurgi. Selv om denne teknikken er best utført av en godt trent kirurg, har den fordelen av å kunne vurdere PAP og RVP i samme mus.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
The Animal protokollen ble gjennomgått og godkjent av den institusjonelle dyr omsorg og bruk komité på Fuwai Hospital, kinesisk akademi for medisinsk vitenskap, Peking Union Medical College (NO. 0000287). Den eksperimentelle dyr ble plassert og matet i henhold til retningslinjene for dyrevelferd i Kina.
Merk: åtte-til 12-ukers-gamle mannlige C57BL mus ble plassert i et miljø med en 12 h mørk/12 h lys syklus. PAH-musene ble plassert i 4 uker under en oksygen konsentrasjon på 10%, opprettholdt av et oksygen styrt hypoksi kammer for å indusere pulmonal hypertensjon, og kontroll mus ble plassert i rom luft (21% oksygen) under identiske forhold. RVP-og PAP-målingene ble utført ved slutten av de fire ukene med hypoksi utfordring.
1. preoperativ forberedelse
- Sug opp trykket svinger kateteret (størrelse: 1 fr) i 0,9% saltvann ved romtemperatur i minst 30 minutter før hemodynamisk eksperimentet.
- Filter 2, 2, 2-Tribromoethanol løsning med 0,22 μm filter og oppbevares i 4-graders kjøleskap.
- Forbered rengjort kirurgi verktøy og forsyninger som hansker for kirurgi.
- Forbered 10 mL 1,0% fordøyelsesenzymer løsning for kateter rengjøring.
- Koble trykkgiver kateteret til et trykk volum system.
- Kalibrer trykk svingeren før du skaffer trykkmålinger for hver mus.
- Drei kalibrerings knotten til 0 mmHg og 25 mmHg for å sende et bekreftelses trykk signal til datainnsamlingsprogram varen, og Konfigurer kalibrerings innstillingen i programvaren.
- Drei knotten til svinger og Juster balanse knotten til null Baseline.
- Sett opp en standard stereomikroskopet og et temperaturstyrt lite dyr kirurgisk bord for kroppstemperatur vedlikehold under operasjonen.
- Sett opp et lys belysningssystem for mikrokirurgi for å gi nok lys over operasjonsområdet.
2. åpen brystet kirurgi og hemodynamisk måling
- Bedøve mus med 250 mg/kg 2, 2, 2-Tribromoethanol via intraperitoneal (IP) injeksjon. Om nødvendig, gjenta supplerende doser ved 1/3 til 1/2 av den opprinnelige dosen under inngrepet.
- Fjern brystet og halsen pels ved hjelp av en barbermaskin og hårfjerning lotion (figur 1a, 2a).
- Sikre hver mus i liggende posisjon på et temperatur kontrollert lite dyr kirurgisk bord for å opprettholde kroppstemperaturen (37 ° c) under operasjonen.
- Rengjør operasjonsstedet med 70% etanal.
- Når anestesi er i kraft, bekrefter tilstrekkelig anestesi induksjon ved hjelp av en tå knipe.
- Lag en midtlinjen innsnitt på halsen huden (figur 1a).
- Analysere skjelettmuskelen ved hjelp av buet tang og utsett luftrøret (figur 1B, 1C).
- Utfør intubering gjennom munnen med et modifisert 22 G intravenøs kappe kateter. Kontroller at slangen er i luftrøret ved hjelp av Tang (figur 1D).
- Koble slangen til en liten dyr Ventilator. Beregn og angi respirasjonsfrekvens og tidevanns volum basert på kroppsvekt i henhold til brukerhåndboken for ventilatoren10. Du kan for eksempel angi respirasjonsfrekvens på 133/min og tidevanns volum til 180 μL for en 30 g mus basert på den beskrevne beregningen.
- Sikre slangen for ventilasjon ved hjelp av tape.
- Bekreft tilstrekkelig anestesi induksjon ved hjelp av en tå knipe.
- Lag en midtlinjen snitt på brystet huden og nøye analysere brystet musklene ved hjelp av en cauterization verktøy (figur 2B, 2C).
- Skjær brystbenet med saks over midten og utsett bryst hulen (figur 2D).
- Forhindre blødning ved hjelp av cauterization verktøyet under åpen bryst kirurgi prosedyre.
- Utsett høyre ventrikkel med sårhaker (figur 2E).
- Sett inn det saltvanns trykket svinger kateteret gjennom en liten tunnel opprettet med en 25 G nål i høyre ventrikkel for å måle RVP (figur 2F og Figur 3a, 3c).
- Hold kateteret kabelen og krysse lunge ventilen i en koaksial måte med lungearterien. Observer trykkbølge formen og få et stabilt PAP-signal (Figur 3B, 3D).
- Ta opp hemodynamisk data ved hjelp av datainnsamlings systemet og programvaren.
- Etter de siste målingene, euthanize mus humant gjennom IP injeksjon av en overskytende dose av 2, 2, 2-Tribromoethanol løsning.
- Forsiktig fjerne kateteret fra høyre hjerte systemet og plasser i en 1 mL sprøyte inneholder 1% fordøyelsesenzymer løsning.
- Bruk destillert vann for å kontinuerlig skylle kateteret forsiktig og oppbevar den i den opprinnelige boksen.
3. data analyse for Hemodynamics
Merk: hemodynamisk data ble registrert og analysert ved hjelp av analyseprogramvare11 (tabell av materialer).
- For hver mus velger du minst 10 kontinuerlige og stabile hjerterytme sykluser uten støy for å få de gjennomsnittlige dataene for RVP-eller PAP-data for hver parameter.
- Bruk student t-test for å sammenligne de normale LUFTKONTROLL-og hypoksi gruppene. Merk: p < 0,05 ble betraktet som statistisk signifikant. Data presenteres som gjennomsnittet ± SD.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Trykkgiver kateteret ble satt inn i høyre ventrikkel (Figur 3A) gjennom en tunnel utvidet med en 25 G nål, og en typisk RVP bølgeform (Figur 3C) ble innhentet. Kateteret ble kontinuerlig justert og langsomt avansert og holdt i samme akse som lungearterien mens passerer gjennom lunge ventilen (Figur 3B). Når trykket sensor ble satt inn i lungearterien, en typisk PAP bølgeform med et karakteristisk dicrotic hakk dukket opp (Figur 3D). For å unngå generering av kunstige data, observerte vi om bølgeform hadde støy (Figur 4) eller om null nivået av kateteret hadde drev (figur 5). Hvis dette skjedde, ble rettelser gjort, og disse segmentene med støy ble ekskludert fra dataanalyse.
PAH er karakterisert ved en varig heving i PAP og RVP, forårsaket av økt motstand i små lunge arterier. PAH er definert av en gjennomsnittlig PAP på ≥ 25 mmHg ved hvile, målt i høyre hjerte catheterization på klinikken12. Vi målte RVP og PAP i musene med den induserte kroniske hypoksi (oppbevares ved 10% oksygen i 4 uker) eller en kontrollgruppe (oppbevares i normal luft). Resultatene er vist i figur 6. Sammenlignet med de i normal LUFTKONTROLL gruppe, systolisk PAP (figur 6A), diastolisk PAP (figur 6B), Mean PAP (figur 6C), og høyre ventrikkel systolisk trykk (figur 6D) ble alle betydelig økt i den kroniske hypoksi gruppen. Etterforskerne har også rapportert at sammenlignet med hypoksi alene, en kombinasjon av en VEGFR inhibitor med kronisk hypoksi i 3 uker for å indusere alvorlig PAH hos mus kan resultere i betydelig økt RVP13,18.
Figur 1: intubering for mekanisk ventilasjons støtte hos mus. (A) halsen pelsen er fjernet ved hjelp av hårfjerning lotion å få et rent område for kirurgi. En midtlinjen innsnitt er gjort på huden av nakken. (B) skjelettmuskelen som dekker luftrøret, utsettes. (C) skjelettmuskulaturen er rett ut dissekert å avdekke luftrøret. Den gule pilen indikerer luftrøret. (D) slangen (modifisert med et 22 G intravenøs kateter) settes inn i luftveiene, med plassering bekreftet ved hjelp av tang. Den gule pilen indikerer slangen inne i luftrøret. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: åpen-kiste kirurgi for hemodynamisk måling ved høyre ventrikkel system. (A) brystet pels fjernes ved hjelp av hårfjerning lotion å få et rent område for kirurgi. (B) en midtlinjen innsnitt er laget for å avdekke brystet skjelettlidelser muskler og brystbenet. (C) et cauterization-verktøy brukes for å minimere blødning under åpning av brystet (pilen indikerer cauterization spissen). (D) brystbenet kuttes langs midtlinjen (den gule strek linjen). (E) to sårhaker brukes til å avdekke hjertet (den øvre pilen indikerer rett atrieflimmer veggen, og den nedre pilen indikerer høyre ventrikkel fri vegg). (F) et trykk svinger kateter (den nedre pilen) settes inn i høyre ventrikkel kammer ved hjelp av en punktering verktøy (25 G størrelse nål, den øvre pilen) for å produsere en liten tunnel på høyre ventrikkel fri vegg. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: representative RVP-og PAP-kurver. Trykkgiver kateteret settes inn i det høyre ventrikkel kammeret (A) for å få i bølgeform (C). Trykket svinger kateteret går gjennom lunge ventilen og deretter forblir i lungearterien (B) for å generere PAP bølgeform. Pilene indikerer den karakteristiske dicrotic hakk på PAP bølgeform (D), som er et tegn på en lunge ventil lukking. RA = høyre Atrium, RV = høyre ventrikkel, PA = lungearterien, LV = venstre ventrikkel. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: RVP bølgeform støy forårsaket av berøring av trykksensor overflaten til ventrikkel veggen. Pil punktet viser en kraftig økning i trykket på RVP-kurven (den øvre kanalen), som samtidig gir en kunstig endring i dP/dt (den nedre kanalen). dP/dt er beregnet fra RVP. De stiplede linjene viser støy fra dP/dt. Hvis støyen er stadig til stede, justering av kateteret sensor posisjon i ventrikkel kan hindre støy. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: null drift av trykk svinger under RVP-målingen. Den venstre vinduet viser kunstig litt forhøyet end-diastolisk RVP. Det høyre utvidede vinduet viser økt diastolisk RVP (piler indikerer diastolisk RVP). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6: hypoksi-indusert pulmonal ARTERIE hypertensjon hos C57BL mus. (A) systolisk PAP (sPAP). (B) diastolisk PAP (dPAP). (C) Mean PAP (mPAP). (D) høyre ventrikkel systolisk trykk (RVSP). (E) og (F), representative PAP bølgeformer for kontroll og PAH mus henholdsvis *p < 0,05; Student t-test; kontrollgruppe n = 10; hypoksi gruppe n = 3. Data presenteres som gjennomsnittet ± SD. PAP = lunge arterietrykk, RVP = høyre ventrikkel trykk. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Tracheal intubering er det første viktige skrittet for åpne Brystoperasjoner. Det klassisk metoden av tracheal intubering for liten dyrene, som rotter eller mus, medfører gjør en T-formet innsnitt på luftrøret og direkte setter inn Y-type tracheal slangen inn i luftrøret. I praksis finner vi at denne metoden er ikke lett under drift. Y-type tracheal slangen er for stor for små dyr og danner en vinkel med luftrøret. Dermed er det vanskelig å feste slangen på plass. I tillegg, når intubering slangen tilfeldigvis kommer ut fra luftveiene under åpen-brystet kirurgi, det vanligvis resulterer i dyr død på grunn av tap av mekanisk ventilasjon støtte. Derfor endret vi metoden for endotrakeal intubering14 ved å lage et snitt på huden, som skiller muskellaget for å avdekke luftrøret (figur 1C), og direkte innsetting av tracheal slangen inn i luftveiene gjennom dyrets munn. Plassering av slangen i luftrøret kan enkelt bekreftes ved å klemme luftrøret ved hjelp av Tang (figur 1D). Etter å ha tatt av førings nålen og kun ved hjelp av kappe kateteret, brukes en 22 G intravenøs kateter som intubering slange. Slangen kan enkelt sikres etter intubering. Dette er en sikker måte å håndtere intubering under operasjonen, og kan betydelig forbedre suksessen rate av små dyr åpen-brystet kirurgi. Men denne metoden krever opplæring og praksis.
Den lukkede bryst tilnærmingen for høyre hjerte hemodynamisk måling er beskrevet i detalj15,16. En begrensning av den lukkede bryst metoden er at den kan brukes til å bare evaluere RVP, fordi kateteret ikke får tilgang til lungearterien hos mus. Vi bruker en midtlinjen bryst snitt der høyre ventrikkel fri vegg er plassert, like under brystbenet (figur 2D). Etter høyre ventrikkel catheterization for å få RVP, er det enkelt å sette inn kateteret i en koaksial måte med lungearterien for å få PAP (figur 2E). Når brystbenet er kuttet under åpen brystet kirurgi, en electrocoagulation verktøyet brukes til å unngå sternal kutte delen blødning for å hindre kunstig blodtrykk nedgang forårsaket av blodtap (figur 2C). Det er valgfritt for denne åpen brystet kirurgi for å bruke et P-V loop kateter for å få både RVP og voluminformasjon17. Imidlertid, det er en best å ikke bruk den å få PAP med hensyn til dens betydeligere størrelse. Selv om denne metoden er best utført av en godt trent kirurg, er det å foretrekke til lukket-brystet tilnærming fordi det gir mulighet for vedlikehold av tracheal intubering og forebygging av blødning under åpen brystet kirurgi for å unngå dyr død.
I tillegg er høyre ventrikkel fri vegg punktert med en 25 G eller mindre nål for å redusere motstanden under innsetting av kateteret inn i ventrikkel. Under catheterization må trykksensor overflaten ikke avvike fra kanten av nålen for å hindre utilsiktet skade på kateter sensoren ved den skarpe metalloverflaten. Det er å foretrekke å ikke bruke en stor nål til punktering av ventrikkel fri vegg, som det vanligvis fører til ytterligere blødning, og utilstrekkelig blod volum i omløp fører også til kunstig trykkdata.
På grunn av den lille volumet av ventrikkel og uregelmessig størrelse av høyre ventrikkel kammer i mus, trykksensoren på kateteret lett berører høyre ventrikkel fri vegg under høy hjerterytme rate. Dette genererer støy på ventrikkel trykk kurven (Figur 4), direkte påvirker ventrikkel trykk analyse. I dette tilfellet bør vinkelen og dybden på kateteret justeres til støyen forsvinner for å oppnå et jevnt ventrikkel trykkbølge form igjen.
Den lille størrelsen på 1 fr trykk svinger kateter7 gjør den til en svært presis, nøyaktig trykkgiver. Zero drift er generelt ikke oppleves under en standard kateter test i saltvann oppløsning in vitro med mindre kateteret er defekt eller skadet. I nærvær av kropps blod kan imidlertid blodkomponenter som overholder trykksensor overflaten føre til at kateteret gjennomgår null drift under et in vivo-eksperiment (figur 5). For å løse dette problemet, gjør vi følgende: midlertidig fjerne kateteret ut fra ventrikkel kammeret og plassere sensoren spissen av kateteret i varme 1,0% fordøyelsesenzymer løsning; ruge det å fordøye blodkomponenter festet til sensoren overflaten; og etter forsiktig tørke kateteret med saltvann-gjennomvåt gasbind, sette kateteret tilbake til ventrikkel kammeret for å få en stabil, ikke-null drift ventrikkel trykkbølge form.
Utarbeidelse av et trykkgiver kateter er også viktig for å oppnå stabile data. Trykksensor spissen på kateteret må være gjennomvåt i minst 30 min i 0,9% saltvann ved romtemperatur før in vivo-prosedyren for å opprettholde stabiliteten til kateteret. På denne måten kan de elektriske egenskapene til trykkgiver kateteret stabiliseres optimalt.
Endelig er hypoksi perioden levedyktig fra 3 til 4 uker for hypoksi-indusert hypertensjon modellen i mus6,14,17,18. Våre data viste at 4 ukers hypoksi kan indusere en stabil pulmonal hypertensjon modell i C57BL mus, og PAP og RVP nivåer er sammenlignbare med litteraturen. Videre studier er nødvendig for å ta opp hvor lenge PAH modellen kan opprettholdes hvis musene er satt tilbake i normoxic forhold for ulike hypoksi protokoller.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Denne forskningen er støttet av den videreutdanning og undervisning reform prosjekt av Peking Union Medical College (10023-2016-002-03), den Fuwai Hospital Youth Fund (2018-F09), og direktør fondet i Beijing nøkkel laboratorium for pre-klinisk forskning og Evaluering for kardiovaskulære implantat materialer (2018-PT2-ZR05).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 2,2,2-Tribromoethanol | Sigma-Aldrich | T48402-5G | For anesthesia |
| Animal temperature controller | Physitemp Instruments, Inc. | TCAT-2LV | For temperature control |
| Dissection forceps | Fine Science Tools, Inc. | 11274-20 | For surgery |
| Gemini Cautery System | Gemini | GEM 5917 | For surgery |
| Intravenous catheter (22G) | BD angiocath | 381123 | For intubation |
| LabChart 7.3 | ADInstruments | For data analysis | |
| Light illumination system | Olympus | For surgery | |
| Mikro-Tip catheter | Millar Instruments, Houston, TX | SPR-1000 | For pressure measurement |
| Millar Pressure-Volume Systems | Millar Instruments, Houston, TX | MVPS-300 | For pressure measurement |
| O2 Controller and Hypoxia chamber | Biospherix | ProOx 110 | For chronic hypoxia |
| PowerLab Data Acquisition System | ADInstruments | PowerLab 16/30 | For data recording |
| Scissors | Fine Science Tools, Inc. | 14084-08 | For surgery |
| Small animal ventilator | Harvard Apparatus | Mini-Vent 845 | For surgery |
| Stereomicroscope | Olympus | SZ61 | For surgery |
| Surgery tape | 3M | For surgery | |
| Terg-a-zyme enzyme | Sigma-Aldrich | Z273287-1EA | For catheter cleaning |
References
- Humbert, M., et al. Advances in therapeutic interventions for patients with pulmonary arterial hypertension. Circulation. 130 (24), 2189-2208 (2014).
- Chatterjee, K. The Swan-Ganz catheters: past, present, and future: a viewpoint. Circulation. 119 (1), 147-152 (2009).
- Adamson, P. B., et al. CHAMPION trial rationale and design: the long-term safety and clinical efficacy of a wireless pulmonary artery pressure monitoring system. Journal of Cardiac Failure. 17 (1), 3-10 (2011).
- Abraham, W. T., et al. Wireless pulmonary artery haemodynamic monitoring in chronic heart failure: a randomised controlled trial. The Lancet. 377 (9766), 658-666 (2011).
- Adamson, P. B., et al. Wireless pulmonary artery pressure monitoring guides management to reduce decompensation in heart failure with preserved ejection fraction. Circulation: Heart Failure. 7 (6), 935-944 (2014).
- Shatat, M. A., et al. Endothelial Kruppel-like Factor 4 modulates pulmonary arterial hypertension. American Journal of Respiratory Cell and Molecular Biology. 50 (3), 647-653 (2014).
- SPR-1000 Mouse Pressure Catheter. , Available from: https://millar.com/products/research/pressure/single-pressure-no-lumen/spr-1000 (2019).
- Tabima, D. M., Hacker, T. A., Chesler, N. C. Measuring right ventricular function in the normal and hypertensive mouse hearts using admittance-derived pressure-volume loops. American Journal of Physiology Heart and Circulatory Physiology. 299 (6), 2069-2075 (2010).
- Skuli, N., et al. Endothelial deletion of hypoxia-inducible factor-2alpha (HIF-2alpha) alters vascular function and tumor angiogenesis. Blood. 114 (2), 469-477 (2009).
- Harvard Inspira Advanced Safety Ventilator User's Manual. , Available from: http://www.harvardapparatus.com/media/harvard/pdf/Inspira_557058_9.pdf. (2019).
- LabChart. , Available from: https://www.adinstruments.com/products/labchart?creative=290739105773_keyword=labchart_matchtype=e_network=g_device=_gclid=CjwKCAjwxrzoBRBBEiwAbtX1n42I2S06KmccVncUHkmExU8KKOXXREyzx8bvTrxYMSze-ooE0atcbRoCliwQAvD_BwE (2019).
- Marius, M. H., et al. Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension. Journal of the American College of Cardiology. 62 (25), 42-50 (2013).
- Ciuclan, L., et al. A novel murine model of severe pulmonary arterial hypertension. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 184 (10), 1171-1182 (2011).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Chen, W. C., et al. Right ventricular systolic pressure measurements in combination with harvest of lung and immune tissue samples in mice. Journal of Visualized Experiments. (71), 50023 (2013).
- Ma, Z., Mao, L., Rajagopal, S. Hemodynamic characterization of rodent models of pulmonary arterial hypertension. Journal of Visualized Experiments. (110), 53335 (2016).
- Chen, M. Berberine attenuates hypoxia-induced pulmonary arterial hypertension via bone morphogenetic protein and transforming growth factor-β signaling. Journal of Cellular Physiology. , (2019).
- Bueno-Beti, C., Hadri, L., Hajjar, R. J., Sassi, Y. The Sugen 5416/Hypoxia mouse model of pulmonary arterial hypertension. Experimental Models of Cardiovascular Diseases. Methods in Molecular Biology. vol 1816. Ishikawa, K. , Humana Press. New York, NY. (2018).
