Summary
En ny metod presenteras för att inducera kronisk torra ögonsjukdom hos kaniner genom kirurgiskt avlägsnande av alla orbital lacrimal körtlar. Denna metod, skild från de som tidigare rapporterats, producerar en stabil, reproducerbar modell av vattenhaltiga bristfällig torra öga väl lämpad för att studera tår fysiologi och patofysiologi och okulär Therapeutics.
Abstract
Torra ögonsjukdom (DED) är en komplex sjukdom med flera etiologier och varierande symtom, med okulär ytinflammation som dess viktigaste patofysiologiska steg. Trots framsteg i vår förståelse av DED, betydande kunskapsluckor kvarstår. Framstegen är delvis begränsade på grund av bristen på informativa djurmodeller. Författarna rapporterade nyligen om en metod för DED induceras genom att injicera alla orbital lacrimal körtel (LG) vävnader med lektin Concanavalin a. Här rapporterar vi en ny modell av vatten-bristfällig DED baserat på kirurgisk resektion av alla orbital LG (dacryoadenektomi) vävnader. Båda metoderna använder kaniner på grund av deras likhet med mänskliga ögon när det gäller storlek och struktur av den okulära ytan. En vecka efter avlägsnande av nictiterande membran, orbital överlägsen LG opererades bort under anestesi, följt av avlägsnande av palpebrala överlägsen LG, och slutligen avlägsnande av sämre LG. Dacryoadenektomi inducerad svår DED, framgår av en markant minskning i tår bryta upp tid test och Schirmer ' s tår test, och signifikant ökad tår osmolaritet och Rose Bengal färgning. Dacryoadenektomi-inducerad DED varade i minst åtta veckor. Det fanns inga komplikationer och djur tolererade förfarandet väl. Tekniken kan behärskas relativt lätt av dem med adekvat kirurgisk erfarenhet och uppskattning av den relevanta kanin anatomi. Eftersom denna modell recapitulates funktionerna i humant vatten-bristfällig DED, är det lämpligt för studier av okulär yta homeostas, DED, och kandidat Therapeutics.
Introduction
Tårar krävs för att skydda den okulära ytan och för upprätthållandet av de optiska egenskaperna hos hornhinnan. De består av tre skikt: en inre mucin beläggning, en mellersta vatten komponent, och en lipid overlay1. Mucin lagrar produceras huvudsakligen i bägare celler av bindhinnan, den aqueous komponenten huvudsakligen i lacrimal körtlar (LGS) och lipidlagrar huvudsakligen i de meibomian körtlarna1,2. Den orbital LGs är den viktigaste källan för vattenhaltiga komponenten av tårar och för många av de proteiner som skyddar ytan från bakteriell attack3. Okulär ytsjukdomar uppstå när den vattenhaltiga tår produktionen minskar under en kritisk nivå, beröva epiteliala ytor i ögat av vatten komponenten och avgörande tår beståndsdelar inklusive tillväxtfaktorer, lysozym, och Laktoferrin. I fall av minskad tårproduktion av LGs, konjunktival och hornhinnan vävnader genomgår anpassningar för att kompensera för den förändrade miljön.
Förstå bidraget av tår komponent som härrör från orbital LGs och den okulära ytans kompenserande mekanismer när detta saknas påverkar vår uppskattning av fysiologi och patofysiologi i främre segmentet av ögat och, mer allmänt, hälsa och sjukdom i hela världen. Experimentellt förhållningssätt till dessa frågor kräver en informativ djurmodell. Följaktligen har flera grupper försökt att utveckla djurmodeller där orbital LGs avlägsnas, vilket underlättar bedömningen av tårarnas roll i okulär hälsa. En sådan modell rapporterades nyligen för musen4. Kaninen erbjuder dock många distinkta fördelar jämfört med gnagare modeller inklusive liknande anatomiska och histologiska strukturer av LG, och kanske ännu viktigare, liknande storlek och yta av hornhinnan och konjunktival vävnader jämfört med deras mänskliga motsvarigheter3.
Skapandet av vattenhaltiga bristfällig torra ögonsjukdom (DED) genom kirurgisk resektion av LG vävnad i kaniner är inte ny. Många rapporter beskriver resektion av LG vävnader med varierande framgång återspeglas i varierande förändringar i tår produktionen mätt med Schirmers tår test5,6,7,8. En grundlig förståelse av den relevanta anatomin av kanin och klarhet om anatomiska terminologi är till stor hjälp för att reproducera denna metod. En grundlig översikt av båda anges nedan.
Anatomi av lacrimal körtlar
Kaninen har två orbital LGs: den större sämre LG (ILG) och den mindre överlägsna LG (SLG; Figur 1). Den ILG sträcker sig längs sämre och bakre aspekt av orbital RIM. Med undantag av varierande storlek, den främre delen av ILG har en ganska enhetlig uppsvällda utseende som kan ses som en förhöjning i huden under jordklotet (figur 2). På grund av dess karakteristiska utseende i förhållande till resten av körteln, det kallas "huvudet" av ILG. En del av huvudet sveper runt och ligger på utsidan av zygomatic benet. Detta fungerar som ett användbart landmärke på ultraljud biomikroskopi att vägleda injektioner i ILG. Resten av huvudet bor medialt9 i omloppet.
På grund av det karakteristiska utseendet på den resterande delen av ILG, som är lång och tunn, detta segment kallas "svansen." Svansen löper längs sämre orbital RIM, från chefen för ILG till orbital rim där det slutar med variabel anatomi på sämre och bakre orbital RIM (figur 3A). Svansen ligger djupt (medial) till zygomatic benet separeras från orbital innehållet av en fascian band för de flesta av dess kurs tills den når den bakre kanten av omloppsbana där det återigen sträcker ut över utsidan av zygomatic benet. Den ILG får sin blodtillförsel från grenar av halspulsådern.
Den SLG har två komponenter som motsvarar den mänskliga. En är palpebrala överlägsen LG (pslg), som bor i den övre bakre ögonlocket mediala till böjd plattan. Det verkar uppsvälld i naturen och har många punktat öppningar att dränera vattenlösning tår vätska som är lättare att se när täckt med 2% fluorescein (figur 3B).
Den andra är orbital överlägsen LG (OSLG), bosatt i en medial position i den överlägsna omloppsbana (figur 3C). På grund av sin position nära mittlinjen av skallen, det har varit omöjligt att framgångsrikt identifiera den med hjälp av externa kirurgiska metoder från den temporala eller sämre omloppsbana. I färskt obduktion prover eller kirurgiska fall, denna körtel kan prolapsed genom den bakre incisure ligger i dorsala ytan av skallen när milda mediala trycket appliceras på jorden. Framfall av denna körtelvävnad kan dokumenteras med ultraljud biomicroscopy.
PSLGEN och OSLGEN är sammanhängande strukturerar. Den oslg är en tubuloalveolar struktur vars duktal arkitektur coalesces i de viktigaste utsöndringskanalen. Denna kanal passerar under Supra-orbital åsen och går i övre locket vävnader avslutande i PSLG. Längs utsöndringskanalen, Glandulär vävnad överensstämmer med de ursprungliga beskrivningarna av Davis har identifierats10 (figur 3D).
En anteckning om terminologi
Utmärkta och omfattande anatomiska beskrivningar använder olika terminologi också. Den klassiska orbital anatomi av Davis definierar bara en övre och lägre LG10. Men hans beskrivning av den övre LG tydligt Detaljer de delar mer specifikt definieras här som PSLG och OSLG, medan hans beskrivning av den lägre LG Detaljer de delar som definieras här som huvudet och svansen av ILG. En nyare och grundlig anatomisk Atlas11 definierar dessa vävnader som zygomatic körtel och tillbehöret LG. Termen "lacrimal körtel" används här för att omfatta de nämnda PSLG och OSLG. Denna terminologi är bättre lämpad för att reproducera denna metod utan onödig förvirring.
Protocol
Alla studier på ryggradsdjur slutfördes i enlighet med och efterlevnad av alla relevanta föreskrifter och institutionella riktlinjer. Alla studier godkändes av den institutionella Review Board of Stony Brook University och utförs i enlighet med föreningen för forskning i vision och oftalmologi (ARVO) uttalande för användning av djur i oftalmisk och vision forskning.
1. djur och bostäder
- Använd nya zeeländska vita (NZW) kaniner som väger 2 − 3 kg.
- Hus kaniner individuellt i en strikt kontrollerad miljö: temperatur (65 ± 5 ° f), luftfuktighet (45 ± 5%), och belysning (12 h på/av cykel).
Obs: på grund av aggressiva beteenden ofta utställda mellan kaniner som är grupp-inrymt, hålla djur i enskilda burar för att förhindra oavsiktlig ögonskada. - Ge kaniner obegränsad tillgång till standard kanin Chow och vatten.
- Ge inga andra Dietary enrichments för att förhindra oavsiktlig vitamin A tillskott som kan påverka torra ögon.
- Acclimate kaniner minst två veckor innan du registrerar DED parametrar.
2. avlägsnande av nictiterande membran
Obs: för enkelhetens skull beskrivs tekniken för det högra ögat nedan. Slutför den här proceduren på det vänstra ögat på ett identiskt sätt.
- Ta bort det nictiterande membranet bilateralt under acklimatisperioden (vanligtvis den första veckan).
- Placera kanin i en lämpligt storlek fasthållnings påse.
- Administrera en subkutan injektion av Acepromazin (1 mg/kg) över axlarna med hjälp av en 1 cc spruta och 26 G nål för att stillsam kaninen. Slutpunkten för denna milda sedering är när djuret upprätthåller ett avslappnat huvudläge utan normala skannings rörelser och öronen inte längre är helt upprätt.
- Använd en mikropipett och applicera 25 μL konserverings fritt lidokain (1%) till ögat. Sätt i en tråd locket spekulum mellan ögonlocken.
- Ta tag i det nictiterande membranet i spetsen med 0,3 tång (eller motsvarande) och dra den över hornhinnans yta. Injicera 1% lidokain med 1:100000 adrenalin i Subkonjunktival utrymme av nictiterande membran med en 26 G nål. Injicera cirka 0,3 ml för att bilda en blygsam storlek av blåsa över det nictiterande membranet. Injektionsvolymer över 1 mL är väl inom ett säkert dosintervall för kaniner (2 − 4 mg/kg).
- Ta bort tråden Speculum. Vänta ca 5 min för lidokain och epinefrin att träda i kraft. Under denna tid, utföra samma förfarande i andra ögat.
- Byt ut tråd locket. Greppa och förläng nictiterande membran över hornhinnans yta med hjälp av 0,3 pinps. Skär membranet vid basen med tenotomy sax eller motsvarande.
Anmärkning: blödning är vanligtvis minimal, men hålla en hög temperatur batteri diatermi enhet i närheten och använda som behövs för att minimera blödning. Direkt tryck över snitt basen av nictiterande membran kan också användas för att stoppa små blödningar om det inträffar. - Ta bort tråd locket Speculum. Placera aktuell antibiotika salva (neomycin, polymyxin, bacitracin, och hydrokortison) över hornhinnan ytan.
- Utför ett identiskt förfarande för det andra ögat som anges i protokollet.
- Placera djuren tillbaka i enskilda burar och låt läka i minst en vecka, eller tills konjunktival ytan har läkt helt ur klinisk synvinkel, innan du utför ytterligare analyser eller interventioner.
Obs: fullständig klinisk läkning indikeras av en brist på svullnad, injektion eller flytningar från konjunktival ytorna. Djuren bör hålla ögonen öppna normalt, utan närvaro av skyddande ptos.
3. mätning av torra ögon parametrar och insamling av tår prov
- Mät följande DED parametrar, som lämpar sig för experimentella protokollet: tår osmolaritet, tår break-up tid, Schirmer ' s tår test, och Rose Bengal färgning. Utför dem som tidigare beskrivits12, med ett team av minst två utredare.
Obs: ett team på minst två utredare möjliggör effektiv mätning av större grupper av djur (6 eller fler) runt samma Klock tid och därmed förhindra eventuell dygnsvariation från att påverka resultaten.
4. kirurgisk beredning och anestesi
- Lätt lugnande djur placeras i en besöks påse med subkutan Acepromazin som ovan (1 mg/kg).
- Ta bort all päls på ansiktet och dorsala ytan av skallen för att visualisera de kirurgiska landmärken.
- Trim päls med skärande saxar lämnar resterande fin päls ca 1 mm i längd (figur 4A, vänster).
- Ta bort all kvarvarande päls med mild hårborttagnings kräm enligt tillverkarens anvisningar (figur 4a, höger).
- Markera kirurgiska snitt platser med en kirurgisk penna.
- Identifiera snittet platsen över den bakre incisure genom att tillämpa mediala trycket till Globen orsakar en liten utbuktning att utvecklas i huden över den bakre incisure från framfall av OSLG.
- Gör en linjär 2 cm markering i främre/bakre riktningen på huden över den dorsala ytan av skallen direkt över denna webbplats med en kirurgisk märkpenna.
- När du planerar snittet för avlägsnande av ILG, markera en lång, krökt linje runt ögat (1 cm från sämre och temporal locket marginalen) sträcker sig från den bakre (temporala) omloppsbana till främre (medial) canthus. Gör markeringen sträcker sig längs den bakre omloppsbana till nivån för den mediala Cantus eller bara överlägsen detta (figur 4B). I vissa dissektioner, snitt för att ta bort OSLG och ILG kommer att anslutas.
Obs: när du utför bilateral kirurgi, markera båda banorna vid denna tidpunkt.
- Trimma en lapp av päls 2 till 3 cm bred med saxar över den laterala ytan av varje lår för att tillåta placering av en monopolär diatermi tallrik.
- Applicera ultraljud gel för att säkerställa god elektrisk kontakt med monopolär diatermi plattan.
- Placera en 25 G intravenös (IV) kateter i en av de marginella venerna i örat för att administrera mediciner eller vätskor om det behövs.
- Ge subkutan xylazin (1 mg/kg) och IV ketamin (15 mg/kg) för den initiala induktion av anestesi (genom IV tillgång).
Anmärkning: om kanin är Sedated i förväg med Acepromazin tillräcklig för att behålla den Endpoint som beskrivs i steg 2,3, Använd gasmask sedering med isofluran som ett alternativ. - Placera en larynx mask luftvägarna hålls på plats med hjälp av ett elastiskt band eller snöre för att säkra och bibehålla luftvägarna.
- Anslut masken till anestesi maskinen med syre flöde inställt på 1 L/min.
- Ställ isofluran på 5% initialt och sedan minska som tolererad baserat på nivån av djurens sedering.
- Behåll isofluran vid eller över 2% tills såret stängs.
Notera: Bedöm nivån av sedering genom övervakning av andningsfrekvens och rörelser som svar på kirurgiska eller smärtsamma stimuli. Öka anestesidjupet om andningsfrekvensen ökar över 10 andetag per minut, om kaninen börjar tugga på luftvägsunderhållaren, eller om några rörelser som svar på smärtsamma stimuli observeras.
- Övervaka pulsoximetri, kapnografi, blodtryck, rektal kroppstemperatur och hjärtfrekvens med hjälp av en övervakningsenhet med flera parametrar eller andra lämpliga enheter.
- Övervaka vitals kontinuerligt under förfarandet och spela in varje 10 till 15 min.
- Placera kaninen på operationssalen (eller) bord över en värmedyna för att förhindra hypotermi. Luta bordet i en omvänd Trendelenburg position på cirka 30 ° för att minimera blödning.
- Förbered det kirurgiska området med en povidon-jod lösning utspädd till halv-styrka med sterilt vatten och drapera så att upprätthålla ett sterilt fält.
5. komplett kirurgisk dacryoadenektomi
Obs: den kompletta kirurgiska dacryoadenektomi, som beskrivs häri, gjordes med hjälp av 0,3 vävnad forceps, tenotomy sax, icke-tandad vävnad forceps, och sax. Dessa instrument kan bytas med liknande instrument som utför samma funktion baserat på kirurgens preferens.
- Ta bort OSLG först.
- Infiltrera snitt platser (kirurgisk märkning penna linjer och övre bakre locket) med en 50:50 blandning av 2% lidokain med 1:100000 epinefrin och 0,5% bupivakain med en 5 CC spruta med en 30 G nål (figur 5a).
Obs: sprutan och nålstorleken är inte kritiska. - Använd en Colorado nål ansluten till en elektrokirurgisk enhet för att göra huden snitt längs de kirurgiska markeringar. Inställningarna kan variera beroende på kliniskt svar och är vanligtvis mellan 10 till 15 enheter för både snitt och koagulation (figur 5B).
- Applicera motsatta spänningar över huden snitt för att separera vävnaderna och exponera den underliggande frontoscutularis muskelfibrer.
- Applicera mediala trycket på jorden för att underlätta visualisering av OSLG, ses utbuktning vävnad ligger bara mediala eller djupt till frontoscutularis muskelfibrer. Om det behövs, flytta dessa muskelfibrer till sidan för att exponera den underliggande incisure.
- Med tandad tång (0,3) och capsulotomi sax, försiktigt dra tillbaka och skär den fibrösa kapseln överliggande oslg. OSLG har vanligtvis en blek solbränna färg (figur 5C).
- Med hjälp av tandade eller icke-tandade tång, greppa OSLG körtelvävnad och försiktigt dra ut den genom den överlägsna incisure med hjälp av en "hand över hand" teknik. Skär små, fibrösa band med capsulotomi sax för att frigöra körteln från dess position i omloppsbana (figur 5D).
Obs: eftersom OSLG körtelvävnad avlägsnas, kommer det att börja sammanfalla i en stor tub-liknande struktur (huvudsakliga utsöndringsrör kanal). - När körteln har tagits bort så fullständigt som möjligt, använda generösa diatermi med Colorado nål för att skapa vävnad röding, trunkera körteln inom det begynnande så djupt som möjligt. Detta kommer senare att fungera som en bekräftande landmärke under avlägsnande av PSLG.
- Infiltrera snitt platser (kirurgisk märkning penna linjer och övre bakre locket) med en 50:50 blandning av 2% lidokain med 1:100000 epinefrin och 0,5% bupivakain med en 5 CC spruta med en 30 G nål (figur 5a).
- Ta bort PSLG.
- Evert det övre ögonlocket med en bomulls tippad applikator. Den uppsvällda änden av pslg är oftast lätt synlig.
Anmärkning: i vissa anatomiska dissektioner kan det vara möjligt att visualisera de viktigaste utsöndringskanalerna som en blek linjär struktur ca 1 eller 2 mm bred. - Engagera PSLG med tandad tång (0,3) och dra tillbaka den från ögonlocket ytan medan du använder capsulotomi sax för att skära runt sin bas separera den från den underliggande Tarsus (figur 6A).
- Kontrollera måttlig blödning med monopolär cautery.
- Applicera kontinuerligt dragkraft på den separerade vävnaden för att bibehålla ett vävnads plan för dissektion. Detta gör att den huvudsakliga utsöndringskanalen av SLG tas bort också (figur 6B).
Obs: eftersom dissektion utförs, kommer det vanligtvis förskott till den överlägsna orbital rim där det är möjligt att se de diatermi märkena kvar från avlägsnande av de mer överlägsna och medialt belägna oslg.
- Evert det övre ögonlocket med en bomulls tippad applikator. Den uppsvällda änden av pslg är oftast lätt synlig.
- Resect ILG.
- Låt minst 5 min för lokalbedövning att träda i kraft.
- Incise huden, den depressor muskeln i sämre palpebra, den zygomaticolabial del av zygomatic muskeln, och orbicularis muskler med Colorado microdissection nål och separera som för OSLG i avsnitt 5,1.
- Upprätthålla hemostas med monopolär cautery.
- Som snittet bärs djupare genom huden märkning, leta efter glans av en fascian plan över zygomatic ben eller ytliga delen av tugg muskeln. Vid denna punkt, underhålla vävnaden planet och bära det fint mot orbitalfälgen med hjälp av Colorado nål för kapning (figur 7A).
Anmärkning: för att identifiera ILG, är det lättast att utföra denna del av dissektion över huvudet av ILG som är typiskt sämre än den främre limbus i ögat. - Efter identifiering och av kapseln kring ILG, identifiera Tan vävnad av ILG. Endast den främre delen av ILG huvudet kommer att vara synlig (figur 7B). Men huvudet kan följas medialt eftersom det passerar under zygomatic bågen och övergångar i svansen (figur 7C).
- Använd tenotomy sax för att skära orbital septum längs sämre RIM utsätta mer bakre delen av ILG svans. När vävnaden planet identifieras, förlänga dissektion posteriort längs hela snitt linjen (figur 7D).
Obs: kanalen av ILG passerar genom de lägre fibrösa bindväv att komma in i sämre konjunktival utrymme i den temporala aspekten av locket. Vid den bakre kanten, svansen av ILG kan ha varierande anatomiska konfigurationer. Ibland slutar sämre än den bakre (lateral) canthus, medan det i andra dissektioner det sträcker sig mer fint runt den temporala omloppsbana. - Använd extrem försiktighet för att förhindra oavsiktliga skador på blodtillförseln, som ILG mottar från grenar av halspulsådern. Blodtillförseln kan ses under denna del av dissektion (figur 7E).
- I de fall där svansen slutar under den bakre (lateral) canthus, det kan vara nödvändigt att bisekera den temporala delen av frontoscutular muskeln att exponera svansen av ILG, som ligger längs zygomatic benet.
- När hela ILG har isolerats och utsatts, ta bort den. På grund av sin stora storlek, är det ofta bättre att skära körteln i hälften med sax och ta bort huvudet separat från svansen.
- Fortsätt mycket försiktigt när du tar bort huvudet av ILG som ligger omedelbart intill en stor venös sinus i omloppsbana. Även blödning från denna struktur under kirurgiska resektion har inte inträffat, har riklig hemostatiska aids närvarande för att mildra denna risk.
- Efter avlägsnande av alla körtelvävnad, Stäng den djupa bindväv planet med flera avbröt 5-0 etylentereftalat suturer. Stäng de ytliga musklerna och huden med en rinnande 6-0 Polyglactin 910 suturen (figur 7F) med hjälp av 0,3 Tissue pincett och en nål förare.
6. postprocedurell vård
- Undrape djuren och rengöra kirurgiska platser med sterilt vatten.
- Tillämpa topikal oftalmologiska antibiotika och steroid salva (neomycin, polymyxin, bacitracin, och hydrokortison) till snitt. Fortsätt med detta program två gånger om dagen i 2 dagar.
- Ge en subkutan injektion av 20 mL normal saltlösning över skulderbladen med en 26 G nål.
- Ge subkutan buprenorfin 0,01 mg/kg eller ketoprofen 3 mg/kg för smärtkontroll med en 1 ml spruta och 30 G nål.
Observera: djuren ska återvända till sitt normala intag av kosten och aktiviteter inom 1 − 2 dagar. Kaniner bör utvärderas minst en gång i veckan för kliniska tecken på infektion, vilket framgår av progressiv svullnad, smärta, erytem, Calor eller varig urladdning över snittet platser. Djur måste också observeras för att se till att de inte börjar repa snitt platser/sutur linjer. Trimning alla klor före dacryoadenektomi kan vara till hjälp i detta avseende. Om du repar snitt linjerna observeras, kan standard skyddande kragar användas för att förhindra självskador. - Vända anestesi.
- Ta bort luftvägsunderhållaren efter att djuret reagerar på stimuli och börjar Visa spontan tugga men innan den ansvarige för luftvägarna kan skadas.
- Övervaka djuren i cirka 1 − 2 timmar eller tills de har återhämtat sig helt från anestesi, vilket framgår av spontan förflyttning i deras burar.
- Bedöm djuren för smärta och behandla på lämpligt sätt.
- Låt djuren återhämta sig i minst 1 vecka efter operationen innan du gör några kliniska åtgärder av DED.
Representative Results
Den kompletta dacryoadenektomi metod som beskrivs här utfördes på 8 djur. Det kräver en måttlig grad av kirurgisk skicklighet. Kirurgisk tid medelvärde ca 2,2 h för bilateral kirurgi, exklusive avlägsnande av nictiterande membran, som gjordes separat och krävde < 10 minuter. Det fanns inga dödsfall eller Intraoperativa komplikationer och ingen kanin krävde något hemostatiskt stöd än blygsam cautery.
Vår kirurgiska Approach inducerade med framgång torra ögon i alla ögon. Detta bekräftades av en panel av kliniska och laboratorie markörer av DED (tabell 1). Under de 8 veckorna av observation, den genomsnittliga TBUT dämpades av mer än 75% av preoperativa nivåer (p < 0,0001 för alla tidspunkter). På samma sätt minskade Schirmers tår test med cirka 50%, återstående så för 8 veckors observation; Det visade ingen tendens till återhämtning under uppföljningsperioden. Postoperativt, tår osmolaritet visade en 10% ökning förenlig med DED, ihållande i minst 8 veckor postoperativt. Rose Bengalen färgning av hornhinnan ökade också och visade inte tecken på återhämtning under 8 veckors uppföljning (figur 8). Alla ögon som genomgår fullständig dacryoadenektomi visade markant minskning av bägaren cell nummer och epitelial förändringar förenliga med torra ögon (konjunktival exponering cytologi).
Figur 1: kanin lacrimal körtel anatomi (höger öga). Orbital överlägsen lacrimal körtel (OSLG) består av en större orbital del och mindre palpebrala komponent. Den större sämre lacrimal körtel (ILG) består av främre/huvud och posterior/svans portioner. Koordinataxlar visar den terminologi som används för alla beskrivningar av orienteringen som används i texten. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: placering av chefen för ILG. Den laterala vyn av den högra sidan efter avlägsnande av päls. En utbuktning i huden kontur (indikeras av tjocka pilar) sämre än den främre omloppsbana indikerar placeringen av chefen för ILG som ligger på utsidan av zygomatic benet på denna plats. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: orbital lacrimal körtlar. (A) rätt sämre lacrimal körtel (ILG) efter färgning med Evans blå färgämne som visar närheten av svansen på ILG (röd pil) bara mediala till zygomatic benet (svart pil) och sämre till Globen. B) tårproduktion från den palpebrala överlägsna lacrimal körtel (PSLG). Time-lapse bilder tagna efter topikal applicering av 2% fluorescein. Vatten vätska som härrör från PSLG späda den initialt mörkblå eller svart fluorescein färgämne vrida den ljust gul grön (liknande Seidel testning). (C) position orbital SLG (oslg) i kanin skalle, liggande nära mittlinjen av skallen (prickig linje) inom den bakre incisure (pil). Evans Blue Dye injicerades i OSLG och palpebrala överlägsen lacrimal körtel. Dhistologisk sektion genom den huvudsakliga utsöndringskanalen i oslg omgiven av en liten mängd körtelvävnad (pil) ses i denna histopatologiska tvärsnitt färgas med hematoxylin och eosin färgämnen tas genom den bakre (temporala) aspekt av övre högra ögonlocket. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4: förberedelse av kirurgisk plats. (A) övre vänstra panelen: borttagning av lång päls med saxar. All resterande fin päls avlägsnas därefter med en mild hårborttagnings kräm. Övre högra panelen: Final utseende efter fullständig päls avlägsnande som gör det möjligt för kirurgisk märkning och hög kvalitet ultraljud av ILG som skall utföras. B) lämpliga kirurgiska märkningar av den högra periorbitalregionen visas. i det här exemplet har snitt för att ta bort oslg och ILG varit anslutna för att skapa en lång krökt snitt. Placeringen av den bakre incisure indikeras av ett litet hash-märke på krökt snitt webbplats markering (pil). Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5: avlägsnande av OSLG. (A) kirurgiska platser är infiltrerade med bedövningsmedel med hjälp av en 50:50 kombination av 2% lidokain med 1:100000 epinefrin och 0,5% bupivacaine, som injiceras i det övre locket och längs snittlinjer för att minimera obehag under förfarandet. (B) en Colorado microdissection nål används för att incisera huden och ytliga muskel lagren längs de pre-märkta kirurgiska snitt platser. Skonsam dragning över såret appliceras för att hjälpa till att skapa dissektionsplanen. Den lilla Pinpoint Burns (pil) gjordes med Colorado Needle på lika långt punkter längs snitt linjen för att hjälpa optimalt justera vävnaderna under såret stängning. (C) oslg exponeras efter vävnader överliggande den bakre incisure har mobiliserats (Arrow). Kapseln i körteln har incised. Den OSLG kan prolapsed genom att tillämpa mediala trycket på jorden underlätta dess avlägsnande. (D) tång används för att engagera oslg och försiktigt ta bort den från dess djupare position inom omloppsbana genom den bakre incisure. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 6: avlägsnande av palpebrala överlägsen lacrimal körtel (PSLG) och utsöndringskanal. (A) efter Eversion av det övre ögonlocket, är den uppsvällda delen av PSLG engagerad med tång och dissekeras av Tarsus med hjälp av saxar. Dragkraft appliceras på PSLG med tång är avgörande för att bibehålla det kirurgiska planet. (B) dissektion av PSLG och den huvudsakliga lacrimal kanalen transporteras fint mot orbitalfälgen med hjälp av skarp dissektion och kontinuerlig dragning på körteln och kanal vävnader för att bibehålla lämpliga kirurgiska planet. Dissektion bör gå vidare till den punkt där OSLG togs bort. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 7: borttagande av ILG. (A) huden och ytliga muskler är anskurna tills fascian planet överliggande den zygomatic ben eller ytliga delen av tugg muskeln uppnås. Chefen för ILG vanligtvis är tydligt som en liten bula som ligger under den främre limbus. B) den fibrösa kapseln i ILG är inciserad med sax som exponerar ILG. När kapseln är incised, de djupare delarna av körteln kan lätt avlägsnas. (C) den mest externa delen av ILG huvudet som ligger på zygomatic benet har exponerats och reflekteras anteriorly visar den underliggande zygomatic benet. (D) snitt av orbitalseptum längs den sämre kanten exponerar svansen på ILG. (E) en gren av den yttre halspulsådern matar svansen på ILG (pil). F) utseende efter stängning av hud snitt efter fullständig dacryoadenektomi. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 8: rosa bengalisk färgning av horn hinnytan. Externt fotografi som visar framträdande färgning, mest anmärkningsvärt på näs kvadranten. Alla ögon som genomgår fullständig dacryoadenektomi utvecklat liknande förändringar som var uppenbara genom 1 vecka efter operationen och kvarstod i minst 6 veckor. Notera, ljusreflex från ringen blixten visar distorsion från en torr okulär yta som visar hur torra ögat kan negativt påverka synen. Vänligen klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Dacryoadenektomi | ||
| medelvärde ± SEM; n = 16 ögon | ||
| Originalplan | Vecka 2 | |
| Rivnings tid, s | 60,0 ± 0,0 | 4,5 ± 1,2 |
| p < 0,0001 | ||
| Tår osmolaritet, mOsm | 291,2 ± 3,7 | 315,3 ± 5,5 |
| p = 0,001 | ||
| Schirmer avrivnings prov, mm | 18,3 ± 1,3 | 10,5 ± 1,6 |
| p = 0,0006 | ||
| Rose Bengal, modifierat NEI-Poäng | 0,0 ± 0,0 | 4,28 ± 0,6 |
| p < 0,0001 | ||
| Drivs vs. baslinje: Dacryoadenektomi: tBut, p < 0,0001; tår osmolaritet, p < 0,001; Schirmer Avrivningsförsök, p < 0,0006); och Rose Bengal. | ||
Tabell 1: parametrar för torra ögon på postoperativ vecka 2.
Discussion
DED klassificeras i två större grupper baserat på effekten på tår film stabilitet: vattenhaltigt bristfällig (minskad produktion av vatten komponenten i tårfilmen; ~ 20% av DED) och evaporativ (ökad avdunstning av tårfilmen; ~ 50% av DED). Cirka 30% av de patienter som fått patienterna visar tecken på både (blandat). Inflammation är kärna ur mekanismen av DED till som dess olika etiologir konvergerar13,14. Våra metod modeller vattenhaltiga-bristfällig DED.
Som tidigare nämnts, viktiga första stegen i reproducera vår metod är en uppskattning av de fina punkterna i anatomin i omloppsbanor lacrimal körtlar (LGs) av kanin och undvika förvirring genom varierande och ibland motstridiga anatomiska terminologi. Den anatomiska atlasen av Popesko et al.11 är mycket noggrann. För de mindre bekväma med anatomi kanin, dissektion av obduktion prover ger enkel förtrogenhet med dessa strukturer och aids deras kirurgiska avlägsnande i levande exemplar.
Viktiga råd om djur boende och acklimatisering har givits i vår följeslagare publikation12. Samma artikel presenterar också användbara kommentarer för testmetoder parametrarna för DED används i båda metoderna.
I motsats till den tidigare metoden12, kräver detta en högre nivå av kirurgisk skicklighet på grund av omfattningen och mer invasiva arten av de tekniker som behövs för att ta bort LGS. Den största risken under dessa omsektioner är katastrofal blödning orsakad av skadade stora fartyg som är i närheten av LGs såsom grenar av halspulsådern. Detta undviks genom att tillräckligt visualisera varje LG och dess marginaler inom det kirurgiska området. Slutligen, övernitiska avlägsnande av nictiterande membran kan leda till framfall av Harderian körtel, som kan störa tår film bedömning.
Försiktighet bör iakttas för att minimera mängden av konjunktival störningar med avlägsnande av PSLG, en ny aspekt av vår metod som förbättrar reproducerbarhet och ökar svårighetsgraden av DED. Det är förvånansvärt lätt att fastställa dissektion planet och bära den tillbaka till den överlägsna orbital Ridge så länge dragkraft appliceras på vävnaderna. Det är lugnande att kunna se de diatermi märkena från trunkering av oslg; de bekräftar fullständig avlägsnande av den huvudsakliga utsöndringskanalen av körteln.
Avlägsnande av ILG i sin helhet presenterar utmaningar också. Isolera huvudet av körteln först, eftersom detta är den enklaste delen att visualisera. Hela huvudet av körtel vävnaden separerar lätt från omgivande vävnader; emellertid, viss försiktighet måste användas för att förhindra skador på den stora venösa sinus, som ligger mediala till chefen för ILG. Svansen på ILG kan sedan följas tillbaka när den passerar under zygomatic benet. Majoriteten av svansen är lätt att isolera. Men den mest bakre aspekten av svansen kan visa sig vara mer utmanande på grund av varierande anatomi och dess närhet till en medelstor gren av halspulsådern. Noggrann dissektion bör tillåta alla marginaler av ILG ses tydligt, underlätta dess fullständiga avlägsnande. Prövaren bör vara beredd att bära dissektion mer fint i fall där svansen av körteln slutar under laterala canthus, som förklaras i den tidigare diskussionen om anatomi lacrimal körtlar. Notera, författarna har aldrig kunnat identifiera någon del av oslg när dissekera den ILG genom en krökt snitt längs den temporala och sämre klot. Även om detta kan vara tekniskt möjligt, att kirurgisk metod medför en alltför hög risk för allvarlig blödning. Närmar sig OSLG genom den bakre incisure bevisar mycket säkrare.
Den utsöndringskanalen av ILG kan ses tränga igenom den sämre fascian planet som passerar in i nedre konjunktival fornix. Ibland, små lobules av glandular-förekommer vävnad ses här också och kan tas bort noggrant.
Det är till stor hjälp att bibehålla ordningen på LG resektion som presenteras här. Om ILGEN tas bort först, blir isoleringen av OSLGEN tekniskt långt svårare. Den främsta orsaken är att OSLG, efter avlägsnande av ILG, inte lätt kan förlapsed och därmed identifieras.
En stor fördel med vår modell är att det kan vara "modulärt". Med andra ord, graden av DED induceras av dacryoadenektomi kan kalibreras för att tillgodose experimentella behov. Till exempel skulle resektion av alla LGs orsaka maximal DED, men resektion av endast SLG skulle orsaka den mildaste formen av DED och resektion av endast ILG skulle generera sjukdom av mellanliggande svårighetsgrad.
Vår strategi, som recapitulates den distinkta patofysiologiska händelse av minskad tårproduktion erbjuder ytterligare fördelar jämfört med redan rapporterade metoder. Kortfattat, ingen annan kirurgisk modell elimineras tårproduktion av alla orbital LGS5,6,7,15,16; inklusive parasympatiska denervering av LGS17, och farmakologisk dämpning av tårproduktion18,19, med de två sistnämnda har sina off-Target effekter som betydande confounders. Slutligen, denna modell minimerar de viktigaste prövaren beroende bias, nämligen ofullständig resektion av LGs, eftersom den kirurgiska tekniken ger deras kompletta visualisering; Detta är hjälpt av det faktum att ingen hemostas, andra än cautery, krävs.
Prövaren bör vara medveten om att fullständig resektion av alla orbital LGs inte genererar fullständig frånvaro av tårar, och till exempel, bör Schirmers tår test värden närmar sig noll inte förväntas. Detta beror på det faktum att det finns alltid andra källor till tår vätska såsom tillbehör LGS av wolfring och Krause och plasmaläckage från konjunktival fartyg20,21,22. Ur experimentell synvinkel bör detta ses som en positiv aspekt av metoden eftersom den bibehåller den okulära ytan. komplett xeroftalmi skulle helt förstöra hornhinnan förneka nyttan av modellen. Dessutom, i sin nuvarande utförande, erbjuder denna modell ett utmärkt tillfälle att studera sådana kompenserande mekanismer och vätske transporter över dessa mindre avdelningar.
Sammanfattningsvis presenteras här är detaljerna i en roman och mångsidig metod för att inducera aqueous-bristfällig DED som lämpar sig för studier av tår fysiologi, patogenesen av DED och studiet av terapeutiska medel som utvecklas för denna indikation.
Disclosures
Författarna deklarerar inga konkurrerande intressen förutom BR som har en aktieposition i Medicon Pharmaceuticals, Inc. och Apis Therapeutics, LLC; och LH, en anställd hos Medicon Pharmaceuticals, Inc. med en aktieposition i Apis Therapeutics, LLC.
Acknowledgments
Vi erkänner det ekonomiska stödet från en riktad forskningsmöjligheter bidrag från Stony Brook University School of Medicine och ett forskningsanslag från Medicon Pharmaceuticals, Inc., Setauket, NY. Vi tackar Michele McTernan för redaktionellt stöd.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| acepromazine, Aceproinj | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NDC11695-0079-8 | 0.1ml/kg subcutaneously injection for rabbit sedation |
| anesthesia vaporizer | VetEquip, Pleasanton, CA | Item # 911103 | Protocol 4.8 |
| animal restraining bag | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | Jorvet J0170 | Use appropriately sized bag. |
| bupivacaine, 0.5% | Hospira Inc, Lake Forest IL | NDC: 0409-1162-02 | Mixed 50:50 with 2% lidocaine with 1:100,000 epinephrine for infiltration of incision sites, protocol 5.1 |
| buprenorphine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | 0.01 mg/kg, for postprocedural care, 6.1.4 | |
| cautery unit, high-temperature, battery-powered | Medline Industries Inc, Northfield, IL | REF ESCT001 | Keep on hand in case of bleeding, protocol 2.7 |
| clipper, Wahl Mini Arco | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | No. 022573 | Cordless shears for fur removal, protocol 4.2 |
| Colorado needle | Stryker Craniomaxillofacial, Kalamazoo, MI | N103A | Use with electrosurgical unit to make incisions, protocol 5.1 & 5.3 |
| electrosurgical unit with monopolar cautery plate | Valleylab, Boulder, CO | Force FXc | Use with electrosurgical unit to make incisions, protocol 5.1 & 5.3 |
| fluorescein, Ak-Fluor 10% | AKRON, Lake Forest, IL | NDC17478-253 | Dilute to 0.2% with PBS to measure TBUT, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| foceps, curved dressing | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | Storz E1406 | delicate serrated dressing forceps |
| forceps, 0.3 | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | ET6319 | For removal of nictating membrane, protocol 2.5 |
| forceps, Bishop Harmon | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | E1500-C | Use toothed forceps for dacryoadenectomy, protocol 5.1 & 5.2 |
| hair remover lotion, Nair | Widely available | Softening Baby oil | Dipilitory cream for sensitive skin, protocol 4.2 |
| isoflurane | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | 29405 | Possible alternative sedation, protocol 4.7 |
| IV catheter, Terumo Surflo ETFE 24-gauge | Terumo, Tokyo, Japan; available from Fisher Sci., VWR, McKesson, etc. | SR-OX2419CA | 25-gauge for smaller rabbits; protocol 4.6 |
| ketamine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NDC 11695-0701-1; NADA 200-055 | 15 mg/kg, protocol 4.7 |
| ketoprofen | Hospira, Inc., Lake Forest, IL | 3 mg/kg, for postprocedural care, 6.1.4 | |
| laryngeal mask airway | Docsinnovent Ltd, London, UK | Vgel R3 | Protocol 4.8 |
| lid speculum, wire | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | Barraquer SUH01 | For removal of nictating membrane, protocol 2.4 |
| lidocaine 2% with epinephrine 1:100,000; 50:50 mixture | Hospira Inc, Lake Forest IL | NDC 0409-3182-02 | Pre-treat before removal of nictating membranes, protocol 2.4 |
| lidocaine, preservative-free | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | L5647 | 1% in PBS for anesthesia agent, for application to eye, protocol 2.4 |
| micropipette | Eppendorf | Research Plus 100 uL | For application of preservative-free lidocaine to eye, protocol 2.4 |
| micropipette tips | World Wide Medical Products | 41071052 | For application of preservative-free lidocaine to eye, protocol 2.4 |
| monitoring device, multi-parameter | SurgiVet, Waukesha, WI | V9201 | For monitoring of vitals, protocol 4.9 |
| needle, 26-gauge | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 305115 | For injection of lidocaine/epinephrine, protocol 2.3 & 2.5 |
| needle, 30-gauge | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 305106 | For infiltration of incision sites; syringe and needle size are not critical, protocol 5.1 |
| osmolarity tips | TearLab Corp., San Diego, CA | #100003 REV R | Measure tear osmolarity measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| osmometer, TearLab | TearLab Corp., San Diego, CA | Model#200000W REV A | Measure tear osmolarity, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| povidone-iodine solution | Medline Industries Inc, Northfield, IL | PVP Prep Solution, NDC: 53329-939-04, REF MDS 093944 | To maintain sterile field, protocol 4.11 |
| rabbit, New Zealand White | Charles River Labs, Waltham, MA (NZW) | 2-3 kg | Research animals |
| Rose bengal stain | Amcon Laboratories Inc., St. Louis, MO | NDC51801-004-40 | 1% in PBS, for staining the ocular surface, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| saline, normal | B. Braun Medical, Irvine, CA | REF R5200-01 | For postprocedural care, protocol 6.1.3 |
| Schirmer Tear Test strips | Eaglevision, Katena products. Denville, NJ | AX13613 | Measure tear production, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| scissors, Vannas | McKesson Medical-Surgical, San Francisco, CA | Miltex 2-130 | Capsulotomy scissors for dacryoadenectomy, protocol 5.1 & 5.2 |
| scissors, Westcott tenotomy | McKesson Medical-Surgical, San Francisco, CA | Miltex 18-1480 | For removal of nictating membrane, protocol 2.7 |
| sedation gas mask | DRE Veterinary, Louisville, KY | #1381 | Possible alternative sedation, protocol 4.7 |
| surgical marking pen | Medical Action Industries, Arden, ND | REF 115 | Protocol 4.2 |
| sutures, 5-0 Mersilene | Ethicon US, LLC | Ethylene terephthalate sutures, used for deep connective tissue closure, protocol 5.3.11 | |
| sutures, Vicryl 6-0 | Ethicon US, LLC | Polyglactin 910 sutures, used for superficial muscle and skin closure, protocol 5.3.11 | |
| syringe, 1 cc | BD, Franklin Lakes, NJ | ref 309659 | For injection of lidocaine/epinephrine, protocol 2.3 & 2.5 |
| syringe, 5 cc | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 309603 | For infiltration of incision sites; syringe and needle size are not critical, protocol 5.1 |
| tissue forceps, 0.8mm Graefe | Roboz Surgical Store, Gaithersburg, MD | RS-5150 | Curved Weck forceps |
| topical antibiotic ointment (neomycin, polymyxin, bacitracin, and hydrocortisone) | Bausch and Lomb, Tampa, FL | NDC 24208-785-55 | Applied after removal of nictating membrane, protocol 2.8, and for postprocedural care, protocol 6.1.2 |
| ultrasound gel | Parker Laboratories, Inc., Fairfield, NJ | Aquasonic 100 | To ensure electrical contact with monopolar cautery plate, protocol 4.5 |
| xylazine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NADA: 139-236 | 1 mg/kg, protocol 4.7 |
References
- Gillan, W. D. H. Tear biochemistry: A review. South African Optometrist. 69 (2), 100-106 (2010).
- Conrady, C. D., Joos, Z. P., Patel, B. C. Review: The Lacrimal Gland and Its Role in Dry Eye. Journal of Ophthalmology. 2016, 7542929 (2016).
- Schechter, J. E., Warren, D. W., Mircheff, A. K. A lacrimal gland is a lacrimal gland, but rodents' and rabbits' are not human. Ocular Surface. 8 (3), 111-134 (2010).
- Shinomiya, K., Ueta, M., Kinoshita, S. A new dry eye mouse model produced by exorbital and intraorbital lacrimal gland excision. Scientific Reports. 8 (1), 1483 (2018).
- Bhattacharya, D., et al. Tear Production After Bilateral Main Lacrimal Gland Resection in Rabbits. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (13), 7774-7783 (2015).
- Chen, Z. Y., Liang, Q. F., Yu, G. Y. Establishment of a rabbit model for keratoconjunctivitis sicca. Cornea. 30 (9), 1024-1029 (2011).
- Li, N., et al. Establishment of the mild, moderate and severe dry eye models using three methods in rabbits. BioMed Central Ophthalmology. 13, 50 (2013).
- Honkanen, R., et al. A New Rabbit Model of Chronic Dry Eye Disease Induced by Complete Surgical Dacryoadenectomy. Current Eye Research. , 1-10 (2019).
- Nisha, S., Deepak, K. An Insight Into Ophthalmic Drug Delivery System. International Journal of Pharmaceutical Studies and Research. 3 (2), 9-13 (2012).
- Davis, F. A. The Anatomy and Histology of the Eye and Orbit of the Rabbit. Transactions of the American Ophthalmological Society. 27, (1929).
- Popesko, P., Rajitova, V., Horak, J. Rabbit - Guinea Pig. A Colour Atlas of the Anatomy of Small Laboratory Animals. 1, Saunders. Philadelphia, PA. (1992).
- Honkanen, R. A., Huang, L., Rigas, B. A rabbit model of aqueous-deficient dry eye disease induced by concanavalin A injection into the lacrimal glands: Application to drug efficacy studies. Journal of Visualized Experiments. , e59631 (2019).
- Wei, Y., Asbell, P. A. The core mechanism of dry eye disease is inflammation. Eye & Contact Lens. 40 (4), 248-256 (2014).
- Pflugfelder, S. C., de Paiva, C. S. The Pathophysiology of Dry Eye Disease: What We Know and Future Directions for Research. Ophthalmology. 124 (11S), S4-S13 (2017).
- Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Gray, K. L. A new rabbit model for keratoconjunctivitis sicca. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 28 (2), 225-228 (1987).
- Odaka, A., et al. Efficacy of retinol palmitate eye drops for dry eye in rabbits with lacrimal gland resection. Clinical Ophthalmology. 6, 1585-1593 (2012).
- Toshida, H., Nguyen, D. H., Beuerman, R. W., Murakami, A. Evaluation of novel dry eye model: preganglionic parasympathetic denervation in rabbit. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4468-4475 (2007).
- Burgalassi, S., Panichi, L., Chetoni, P., Saettone, M. F., Boldrini, E. Development of a simple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tear substitutes. Ophthalmic Research. 31 (3), 229-235 (1999).
- Xiong, C., et al. A rabbit dry eye model induced by topical medication of a preservative benzalkonium chloride. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 49 (5), 1850-1856 (2008).
- Shiue, M. H., et al. Pharmacological modulation of fluid secretion in the pigmented rabbit conjunctiva. Life Science. 66 (7), 105 (2000).
- Li, Y., et al. Rabbit conjunctival epithelium transports fluid, and P2Y2(2) receptor agonists stimulate Cl(-) and fluid secretion. American Journal of Physiology: Cell Physiology. 281 (2), C595-C602 (2001).
- Dartt, D. A. Regulation of mucin and fluid secretion by conjunctival epithelial cells. Progress in Retinal and Eye Research. 21 (6), 555-576 (2002).
