Summary
En roman tilgang er præsenteret for at inducere kronisk tør øjensygdom i kaniner ved kirurgisk fjernelse alle orbital lacrimal kirtler. Denne metode, der adskiller sig fra de tidligere rapporterede, producerer en stabil, reproducerbar model af vandig mangelfuld tørre øjne velegnet til at studere tåre fysiologi og patofysiologi og okulær Therapeutics.
Abstract
Tør øjensygdom (DED) er en kompleks sygdom med flere ætiologier og variable symptomer, der har okulær overflade betændelse som dens centrale patofysiologiske trin. Trods fremskridt i vores forståelse af DED, er betydelige videnhuller tilbage. Forskud er begrænset til dels på grund af manglen på informative dyremodeller. Forfatterne for nylig rapporterede om en metode til DED induceret ved at injicere alle orbital lacrimal kirtel (LG) væv med lektin concanavalin a. Her rapporterer vi en ny model af vandig-mangelfuld baseret på kirurgisk resektion af alle orbital LG (dacryoadenectomy) væv. Begge metoder bruger kaniner på grund af deres lighed med menneskelige øjne med hensyn til størrelse og struktur af den okulære overflade. En uge efter fjernelse af nictitating membran, orbital Superior LG blev kirurgisk fjernet under anæstesi, efterfulgt af fjernelse af øjenspalten Superior LG, og endelig fjernelse af ringere LG. dacryoadenektomi induceret svær DED, dokumenteret ved en markant reduktion i tåre break up time test og schirmers tåre test, og signifikant øget tåre osmolaritet og rose bengal farvning. Dacryoadenektomi-induceret DED varede mindst otte uger. Der var ingen komplikationer og dyr tolereret proceduren godt. Teknikken kan beherskes relativt let af dem med tilstrækkelig kirurgisk erfaring og påskønnelse af den relevante kanin anatomi. Da denne model rekapitulerer funktionerne i human vandig-mangelfuld, det er egnet til undersøgelser af okulær overflade homøostase, DED, og kandidat Therapeutics.
Introduction
Der kræves tårer for at beskytte den okulære overflade og for at opretholde cornea ' optiske egenskaber. De består af tre lag: en indre mucin belægning, en middel vandig komponent, og en lipid overlay1. Mucin lag produceres overvejende i Flammernes Pokal celler i conjunctiva, den vandige komponent overvejende i lacrimal kirtler (LGS), og lipid lag overvejende i meibomian kirtler1,2. De orbital LGs er den vigtigste kilde til den vandige del af tårer og for mange af de proteiner, der beskytter overfladen fra bakterielle angreb3. Øjen overflade sygdomme opstå, når den vandige tåreproduktion er faldet under et kritisk niveau, fratager epiteliale overflader af øjet af den vandige komponent og afgørende tåre bestanddele, herunder vækstfaktorer, Lysozym, og lactoferrin. I tilfælde af nedsat tåreproduktion foretaget af LGs, undergår konjunktival-og cornea-vævet justeringer for at kompensere for det ændrede miljø.
Forstå bidraget fra tåre komponenten afledt af de orbital LGs og den okulære overfladens kompenserende mekanismer, når dette mangler påvirker vores påskønnelse af fysiologi og Patofysiologi af det forreste segment af øjet og mere generelt af sundhed og sygdom i hele kloden. Den eksperimentelle tilgang til disse spørgsmål kræver en informativ dyremodel. Derfor har flere grupper forsøgt at udvikle dyremodeller, hvor de orbital LGs fjernes, hvilket letter vurderingen af den rolle, som tårer i okulær sundhed spiller. En sådan model blev for nylig rapporteret for mus4. Kaninen tilbyder imidlertid mange forskellige fordele i forhold til gnaver modeller, herunder lignende anatomiske og histologiske strukturer af LG, og måske endnu vigtigere, lignende størrelse og overfladeareal af hornhinden og konjunktival væv i forhold til deres menneskelige modparter3.
Skabelse af vandig mangelfuld tør øjensygdom (DED) ved kirurgisk resektion af LG væv i kaniner er ikke nyt. Talrige rapporter beskriver resektion af LG væv med varierende succes afspejles i variable ændringer i tåreproduktion målt ved schirmers tåre test5,6,7,8. En grundig forståelse af den relevante anatomi af kanin og klarhed om den anatomiske terminologi er meget nyttige i at reproducere denne metode. En grundig oversigt over begge er angivet nedenfor.
Anatomi af lacrimal kirtler
Kaninen har to orbital LGs: den større ringere LG (ILG) og den mindre Superior LG (SLG; Figur 1). Den ILG strækker sig langs den ringere og posterior aspekt af orbital fælgen. Med undtagelse af variabel størrelse, den forreste del af ILG har en temmelig ensartet løgformet udseende, der kan ses som en protuberance i huden under kloden (figur 2). På grund af sin karakteristiske udseende i forhold til resten af kirtel, er det omtales som "hoved" af ILG. En del af hovedet ombrydes rundt og ligger på den udvendige overflade af zygomatic Bone. Dette tjener som en nyttig milepæl på ultralyd biomicroskopi til at guide injektioner i ILG. Resten af hovedet bor mere medialt9 i kredsløb.
På grund af den karakteristiske udseende af den resterende del af ILG, som er lang og tynd, omtales dette segment som "halen". Halen løber langs den ringere orbital fælg, fra lederen af ILG til den orbital fælg, hvor det ender med variabel anatomi på ringere og posterior orbital fælg (figur 3A). Halen ligger dybt (medial) til den zygomatiske knogle adskilt fra det orbital indhold af en fascial band for det meste af sin kurs, indtil den når den bageste rand af kredsløb, hvor det igen strækker sig ud over den udvendige overflade af zygomatic knogle. ILG modtager blodforsyningen fra grene af halspulsåren.
SLG har to komponenter svarende til det menneskelige. Den ene er øjenspalten Superior LG (pslg), som ligger i det øvre posterior øjenlåg mediale til haseleddet pladen. Det synes løgformet i naturen og har talrige punktformig åbninger, der dræner vandig tårevæske, der er mere let ses, når dækket med 2% fluorescein (figur 3B).
Den anden er den orbital Superior LG (OSLG), der bor i en mediale position i den overlegne kredsløb (figur 3C). På grund af sin position nær midterlinjen af kraniet, har det været umuligt at med held identificere det ved hjælp af eksterne kirurgiske tilgange fra den tidsmæssige eller ringere kredsløb. I friske nekropsy prøver eller kirurgiske tilfælde, denne kirtel kan være prolapsed gennem den posterior incisure placeret i rygens overflade af kraniet, når blid mediale tryk påføres på kloden. Prolaps af dette glandulært væv kan dokumenteres med ultralyd biomicroskopi.
PSLG og OSLG er sammenhængende strukturer. Den oslg er en tubuloalveolær struktur, hvis duktalt arkitektur geometri i de vigtigste ekskretionsorganerne kanal. Denne kanal passerer under den over-orbital højderyg og løber i det øvre låg væv, som afsluttes i PSLG. Langs ekskretionsorganerne kanal, glandulær væv i overensstemmelse med de oprindelige beskrivelser af Davis er blevet identificeret10 (figur 3D).
En bemærkning om terminologi
Fremragende og omfattende anatomiske beskrivelser bruger varierende terminologi samt. Den klassiske Orbital anatomi af Davis definerer kun en øvre og nedre LG10. Men hans beskrivelse af den øvre LG klart detaljer de dele mere specifikt defineret her som PSLG og OSLG, mens hans beskrivelse af den nedre LG detaljer de portioner defineret her som hoved og hale af ILG. En nyere og grundig anatomisk Atlas11 definerer disse væv som zygomatic kirtel og tilbehøret LG. Udtrykket "lacrimal kirtel" anvendes her til at omfatte førnævnte PSLG og OSLG. Denne terminologi er bedre egnet til at gengive denne metode uden unødig forvirring.
Protocol
Alle undersøgelser af hvirveldyr blev afsluttet i overensstemmelse med alle relevante lovgivningsmæssige og institutionelle retningslinjer. Alle undersøgelser blev godkendt af den institutionelle revision bestyrelsen for Stony Brook University og udført i overensstemmelse med Association for forskning i vision og oftalmologi (ARVO) erklæring om anvendelse af dyr i oftalmisk og vision forskning.
1. dyr og boliger
- Brug newzealandsk hvide kaniner (NZW), som vejer 2 − 3 kg.
- House kaniner individuelt i et strengt kontrolleret miljø: temperatur (65 ± 5 °F), fugtighed (45 ± 5%) og belysning (12 timer on/off cyklus).
Bemærk: på grund af aggressiv adfærd ofte udstillet mellem kaniner, der er gruppe-opstaldet, holde dyr i individuelle bure for at forhindre utilsigtet okulær skade. - Giv kaniner ubegrænset adgang til standard kanin Chow og vand.
- Giver ingen andre kosten beridelser for at forhindre utilsigtet vitamin A tilskud, som kan påvirke tørre øjne.
- Akklime kaniner mindst to uger før optagelse af parametre.
2. fjernelse af den nictiterende membran
Bemærk: for nemheds skyld er teknikken for det højre øje beskrevet nedenfor. Udfør denne procedure på det venstre øje på samme måde.
- Fjern den nictiterende membran bilateralt i løbet af akklikalationsperioden (sædvanligvis den første uge).
- Placer kanin i en passende størrelse fastholdelses pose.
- Giv en subkutan injektion af Acepromazin (1 mg/kg) over skuldrene ved hjælp af en 1 CC-sprøjte og 26 G kanyle for at sedere kaninen. Endepunktet for denne milde sedation er, når dyret opretholder en afslappet hovedposition uden normale scannings bevægelser, og dets ører ikke længere er helt oprejst.
- Ved hjælp af en mikropipette påføres 25 μL konserveringsmiddel-fri lidocain (1%) til øjet. Indsæt et trådlåg speculum mellem øjenlåg.
- Tag fat om den nictiterende membran i spidsen med 0,3 pincet (eller tilsvarende), og træk den over overfladen på hornhinden. Injicer 1% lidocain med 1:100000 adrenalin i subkonjunktival rummet af den nictiterende membran ved hjælp af en 26 G nål. Injicer ca. 0,3 mL for at danne en moderat bleb over den nictiterende membran. Injektionsvolumener over 1 mL er godt inden for et sikkert dosisområde for kaniner (2 − 4 mg/kg).
- Fjern trådspekulum. Vent ca. 5 min for lidocain og adrenalin til at træde i kraft. I løbet af denne tid, udføre den samme procedure i de andre øje.
- Udskift trådlåget speculum. Tag fat i og Forlæng den nictiterende membran over overfladen af hornhinden ved hjælp af 0,3 pincet. Skær membranen ved sin base med tenotomi saks eller tilsvarende.
Bemærk: blødning er normalt minimal, men holde en høj temperatur batteri Cautery enhed i nærheden og bruge efter behov for at minimere blødning. Direkte tryk over den afskårne base af nictitating membranen kan også bruges til at stoppe små blødninger, hvis det sker. - Fjern trådlåget speculum. Placer aktuel antibiotika salve (neomycin, polymyxin, bacitracin og hydrocortison) over overfladen af hornhinden.
- Udfør en identisk procedure til den anden øje som angivet i protokollen.
- Placer dyrene tilbage i de enkelte bure, og lad dem helbrede i mindst en uge, eller indtil konjunktival overfladen er helet helt fra et klinisk synspunkt, før der udføres yderligere undersøgelser eller indgreb.
Bemærk: komplet klinisk helbredelse er indiceret ved manglende hævelse, injektion eller udledning fra konjunktival overflader. Dyrene bør holde øjnene åbne normalt uden tilstedeværelsen af beskyttende ptose.
3. måling af tørre øjen parametre og opsamling af tåre prøver
- Mål følgende DED parametre, som er relevante for forsøgsprotokollen: tåre osmolaritet, rive break-up tid, schirmers tåre test, og rose bengal farvning. Udføre dem som tidligere beskrevet12, med et hold på mindst to efterforskere.
Bemærk: et hold på mindst to efterforskere giver mulighed for en effektiv måling af større grupper af dyr (6 eller flere) omkring samme ur tid og dermed forhindre mulige cirkadiske variation fra påvirker resultater.
4. kirurgisk forberedelse og anæstesi
- Let adstadige dyr anbragt i en fastholdelses pose med subkutan Acepromazin som ovenfor (1 mg/kg).
- Fjern alle pels på ansigtet og dorsale overflade af kraniet for at visualisere de kirurgiske landemærker.
- Trim pels med skære sakse forlader resterende fine pels omkring 1 mm i længden (figur 4A, venstre).
- Fjern al rest pels ved hjælp af mild depilatory creme efter producentens anvisninger (figur 4A, højre).
- Mark kirurgiske incisionsites med en kirurgisk pen.
- Identificer incisionstedet over den bageste incisure ved at anvende mediale tryk til kloden forårsager en lille bule til at udvikle sig i huden over den posterior incisure fra prolaps af OSLG.
- Lav et lineært 2 cm-mærke i den forreste/bageste retning på huden over overfladen af kraniet direkte over dette sted med en kirurgisk mærknings kuglepen.
- Ved planlægning af snittet for fjernelse af ILG, markere en lang, krum linje omkring øjet (1 cm fra den nedre og tidsmæssige låg margin) strækker sig fra den bageste (temporale) kredsløb til forreste (medial) canthus. Gør mærkningen strækker sig langs den bageste kredsløb til niveauet af den mediale canthus eller bare overlegen i denne (figur 4B). I nogle dissektioner vil indsnit til at fjerne OSLG og ILG være forbundet.
Bemærk: når du udfører bilateral kirurgi, markere begge kredsløb på dette tidspunkt.
- Trim et plaster af pels 2 til 3 cm bred med sakse over den laterale overflade af hvert lår for at tillade placering af en monopolære kautery plade.
- Påfør ultralyd gel for at sikre god elektrisk kontakt med monopolære Cautery pladen.
- Placer et 25 G intravenøst (IV) kateter i en af de marginale vener i øret for at administrere medicin eller væsker, hvis det er nødvendigt.
- Give subkutan xylazin (1 mg/kg) og IV ketamin (15 mg/kg) for den indledende induktion af anæstesi (gennem IV adgang).
Bemærk: Hvis kaninen er bedret på forhånd med Acepromazin tilstrækkelig til at fastholde endepunktet beskrevet i trin 2,3, skal du bruge gasmaske sedation med isofluran som et alternativ. - Placer en larynx maske luftveje holdt på plads ved hjælp af et elastik eller snor for at sikre og vedligeholde luftvejene.
- Forbind masken til anæstesi maskinen med oxygen flow indstillet til 1 L/min.
- Sæt isofluran på 5% i første omgang og derefter reducere som tolereret baseret på niveauet af animalsk sedation.
- Opretholde isofluran på eller over 2% indtil endelig sårlukning.
Bemærk: Vurder niveauet af sedation ved at monitorere for respirationshastighed og bevægelser som reaktion på kirurgiske eller smertefulde stimuli. Forøg dybden af anæstesi, hvis respirationshastigheden stiger over 10 vejrtrækninger i minuttet, hvis kaninen begynder at tygge på luftvejene vedligeholdere, eller hvis nogen bevægelser som reaktion på smertefulde stimuli observeres.
- Overvåg pulsoximetri, capnografi, blodtryk, rektal kropstemperatur og puls ved hjælp af en multi-parameter overvågningsanordning eller andre passende anordninger.
- Overvåg Vitals kontinuerligt under proceduren og Optag hver 10 til 15 min.
- Placer kaninen på operationsstuen (eller) bord over en varmepude for at forhindre hypotermi. VIP bordet i en omvendt Trendelenburg position ved ca. 30 ° for at minimere blødning.
- Forbered operationsområdet med en povidon-jod opløsning fortyndet til halv styrke med sterilt vand og drapere for at opretholde et sterilt felt.
5. komplet kirurgisk dacryoadenektomi
Bemærk: den komplette kirurgiske dacryoadenektomi, som beskrevet heri, blev udført ved hjælp af 0,3 vævs pincet, tenotomi saks, ikke-tandede vævs tang og saks. Disse instrumenter kan udskiftes med lignende instrumenter, der udfører den samme funktion baseret på kirurg præference.
- Fjern OSLG først.
- Infiltrere incisionsites (kirurgisk mærkning pen linjer og øvre posterior låg) med en 50:50 blanding af 2% lidocain med 1:100000 adrenalin og 0,5% bupivacaine ved hjælp af en 5 cc sprøjte med en 30 G nål (figur 5a).
Bemærk: sprøjte og nålestørrelse er ikke kritiske. - Brug en Colorado nål forbundet til en elektrokirurgisk enhed for at gøre huden indsnit langs de kirurgiske markeringer. Indstillingerne kan variere afhængigt af klinisk respons og er typisk mellem 10 og 15 enheder for både snit og koagulation (figur 5B).
- Påfør modstående spændinger på tværs af huden indsnit at adskille væv og udsætte de underliggende frontoscutularis muskelfibre.
- Påfør mediale Tryk på kloden for at støtte visualisering af OSLG, set som udbuling væv placeret bare mediale eller dybt til frontoscutularis muskelfibre. Hvis det er nødvendigt, flytte disse muskelfibre til siden for at udsætte den underliggende incisure.
- Med tandede pincet (0,3) og kapløktomi saks, forsigtigt trække og skære den fibrøse kapsel overliggende OSLG. OSLG har typisk en bleg Tan farve (figur 5C).
- Ved hjælp af tandede eller ikke-tandede pincet, forstå OSLG kirtel vævet og forsigtigt trække det ud gennem den overlegne incisure ved hjælp af en "hånd overhånd" teknik. Skær små, fibrøse bånd ved hjælp af kapløktomi saks for at frigøre kirtel fra sin position i kredsløbet (figur 5D).
Bemærk: som OSLG kirtel væv fjernes, det vil begynde at samle sig i en stor tube-lignende struktur (vigtigste ekskretionsorganerne kanal). - Når kirtel er blevet fjernet så fuldstændigt som muligt, bruge generøs Cautery med Colorado nål til at skabe væv char, afkorte kirtel i incisure så dybt som muligt. Dette vil senere tjene som en bekræftende milepæl under fjernelsen af PSLG.
- Infiltrere incisionsites (kirurgisk mærkning pen linjer og øvre posterior låg) med en 50:50 blanding af 2% lidocain med 1:100000 adrenalin og 0,5% bupivacaine ved hjælp af en 5 cc sprøjte med en 30 G nål (figur 5a).
- Fjern PSLG.
- Det øvre øjenlåg ved hjælp af en vattippet applikator. Den løgformet ende af pslg er normalt let synlig.
Bemærk: i nogle anatomiske dissektioner kan det være muligt at visualisere hoved udskillelseskanalen som en bleg lineær struktur omkring 1 eller 2 mm bred. - Brug PSLG med tandede pincet (0,3), og træk det tilbage fra øjenlågs overfladen, mens du bruger kapløktomi saks til at skære omkring sin base, der adskiller den fra den underliggende Tarsus (figur 6A).
- Kontrollere moderat blødning med den monopolære kautery.
- Påfør kontinuerlig trækkraft på det separerede væv for at opretholde et vævs plan for dissektion. Dette vil gøre det muligt at fjerne hoved udskillelseskanalen i SLG også (figur 6B).
Bemærk: da dissektion udføres, vil det typisk frem til den overlegne orbital fælg, hvor det er muligt at se de kautery mærker, der er tilbage fra fjernelsen af de mere overlegne og overarms placeret oslg.
- Det øvre øjenlåg ved hjælp af en vattippet applikator. Den løgformet ende af pslg er normalt let synlig.
- Resect ILG.
- Lad mindst 5 min for den lokale bedøvelse til at træde i kraft.
- Incise huden, depressivt musklen af den ringere palpebra, den zygomaticolabiale del af zygomatic muskel, og musculus muskel med Colorado microdissection nål og adskilt som for oslg i afsnit 5,1.
- Opretholde hæmostase med den monopolære Cautery.
- Da snittet er gennemført dybere gennem huden mærkning, kigge efter glans af en fascial plan over zygomatic knogle eller overfladisk del af tygge musklen. På dette tidspunkt, vedligeholde vævs planet og bære det overlegent mod den orbital fælg ved hjælp af Colorado nål til skæring (figur 7A).
Bemærk: med henblik på at identificere ILG er det nemmest at udføre denne del af dissektion overhovedet af ILG, som typisk er ringere end øjets forreste limbus. - Efter at identificere og incising kapslen omkring ILG, identificere den Tan væv af ILG. Kun den forreste del af ILG-hovedet vil være synlig (figur 7B). Men hovedet kan følges medielt, da det passerer under zygomatic Arch og overgange i halen (figur 7C).
- Brug tenotomi saks til at skære den orbital septum langs den ringere fælg udsætter den mere posterior del af ILG hale. Når vævs planet er identificeret, forlænges dissektionens bagtil langs heleincisionslinien(figur 7D).
Bemærk: kanalen af ILG passerer gennem det nedre fibrøse bindevæv at indtaste den ringere konjunktival plads i det tidsmæssige aspekt af låget. Ved den bageste rand kan halen af ILG have varierende anatomiske konfigurationer. Nogle gange ophører det ringere end den bageste (lateral) canthus, mens der i andre dissektioner det strækker sig mere overlegent omkring den tidsmæssige kredsløb. - Brug ekstrem omhu for at forhindre utilsigtet beskadigelse af blodforsyningen, som ILG modtager fra grene af halspulsåren. Blodforsyningen kan ses i denne del af dissektion (figur 7E).
- I tilfælde, hvor halen ophører under den bageste (lateral) canthus, kan det være nødvendigt at krydser den tidsmæssige del af frontoscutular musklen til at udsætte halen af ILG, som ligger langs zygomatic knogle.
- Efter hele ILG er blevet isoleret og eksponeret, fjerne det. På grund af sin store størrelse, er det ofte at foretrække at skære kirtel i halve med saks og fjerne hovedet separat fra halen.
- Fortsæt meget forsigtigt, når du fjerner hovedet af ILG, da det ligger umiddelbart støder op til en stor venøs sinus i kredsløb. Selv om blødning fra denne struktur under kirurgiske-resektioner ikke har fundet sted, har rigelig hæmostatiske hjælpemidler til stede for at afbøde denne risiko.
- Efter fjernelse af alle kirtel væv, lukke det dybe bindevæv plan med flere afbrudt 5-0 ethylenterephthalatsuturer. Luk de overfladiske muskler og hud med en løbe 6-0 afpolyglactin 910 sutur (figur 7F) ved hjælp af 0,3 væv pincet og en nål driver.
6. behandling efter procedure
- Undrape dyrene og rense de kirurgiske steder med sterilt vand.
- Anvende aktuel oftalmisk antibiotikum og steroid salve (neomycin, polymyxin, bacitracin, og hydrocortison) til incisionerne. Fortsæt dette program to gange om dagen i 2 dage.
- Der gives en subkutan injektion af 20 mL normalt saltvand over skulderbladene med en 26 G nål.
- Giv subkutan buprenorphin 0,01 mg/kg eller ketoprofen 3 mg/kg til smertekontrol ved hjælp af en 1 CC sprøjte og 30 G nål.
Bemærk: dyrene skal vende tilbage til deres normale indtagelse i kosten og aktiviteter inden for 1 − 2 dage. Kaniner skal evalueres mindst en gang om ugen for kliniske tegn på infektion, hvilket fremgår af progressiv hævelse, smerte, erythema, brændværdi eller purulent udledning over incisionstederne. Dyrene skal også observeres for at sikre, at de ikke begynder at ridse incisionsites/sutur linjer. Trimning alle kløer forud for dacryoadenektomi kan være nyttige i denne henseende. Hvis der ses ridser i indsnit linjerne, kan der anvendes standard beskyttende kraver til at forhindre selv skade. - Vend anæstesi.
- Fjern luftvejene, når dyret reagerer på stimuli og begynder at vise spontan tygning, men før luftvejs vedligeholderen kan blive beskadiget.
- Overvåge dyrene i ca. 1 − 2 timer, eller indtil de er helt genoprettet fra anæstesi, som det fremgår af spontan bevægelse i deres bure.
- Vurder dyrene for smerte og Behandl passende.
- Lad dyrene komme sig i mindst 1 uge efter operationen, før de foretager kliniske målinger af DED.
Representative Results
Den komplette dacryoadenectomy metode, der er beskrevet her, blev udført på 8 dyr. Det kræver en moderat grad af kirurgisk dygtighed. Kirurgisk tid i gennemsnit omkring 2,2 h for bilateral kirurgi, bortset fra fjernelse af nictitating membran, som blev udført separat og kræves < 10 minutter. Der var ingen dødsfald eller intraoperativ komplikationer og ingen kanin krævede nogen hæmostatisk støtte end beskeden Cautery.
Vores kirurgiske tilgang med succes induceret tørt øje i alle øjne. Dette blev bekræftet af et panel af kliniske og laboratoriemarkører af DED (tabel 1). I løbet af de 8 ugers observation blev den gennemsnitlige TBUT undertrykt med mere end 75% af det præoperative niveau (p < 0,0001 for alle tidspunkter). På samme måde faldt schirmers tåre test med ca. 50%, mens de forblev så for de 8 ugers observation; den viste ingen tendens til bedring i opfølgningsperioden. Postoperativt, tåre osmolaritet viste en 10% stigning i overensstemmelse med DED, opretholdt i mindst 8 uger postoperativt. Rose bengal farvning af hornhinden steg også og viste ikke tegn på bedring i løbet af de 8 ugers opfølgning (figur 8). Alle øjne gennemgår komplet dacryoadenektomi viste markant reduktion i Flammernes Pokal cellenumre og epiteliale ændringer i overensstemmelse med tørre øjne (konjunktival indtryk cytologi).
Figur 1: kanin lacrimal kirtel anatomi (højre øje). Den orbital Superior lacrimal kirtel (oslg) består af en større orbital del og mindre øjenspalten komponent. Den større ringere lacrimal kirtel (ILG) består af anterior/hoved og posterior/hale portioner. Koordinatakser viser den terminologi, der bruges til alle beskrivelser af retningen, der bruges i teksten. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: placering af lederen af ILG. Den laterale visning af højre ansigt efter fjernelse af pels. En bule i huden kontur (indikeret med tykke pile) ringere end den forreste kredsløb indikerer placeringen af lederen af ILG, der ligger på den udvendige overflade af zygomatic knogle på dette sted. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3: de orbital lacrimal kirtler. (A) den rigtige ringere lacrimal kirtel (ILG) efter farvning med Evans blå farvestof viser nærhed af halen af ILG (rød pil) bare mediale til zygomatic knogle (sort pil) og ringere end kloden. B) rive produktionen fra den øjenspalten overlegne lacrimal kirtel (pslg). Time-lapse fotos taget efter topikal påføring af 2% fluorescein. Vandig væske stammer fra PSLG fortynder den oprindeligt mørkeblå eller sort fluorescein farvestof dreje det lyse gule grøn (svarende til Seidel test). (C) placering af ORBITAL SLG (oslg) i kanin kraniet, liggende tæt på midterlinjen af kraniet (stiplet linje) inden for posterior incisure (pil). Evans Blue Dye blev sprøjtet ind i oslg og øjenspalten Superior lacrimal kirtel. (D) histologi sektion gennem de vigtigste ekskretionsorganerne kanalen af OSLG omgivet af en lille mængde af glandulært væv (pil) ses i dette histopatologiske tværsnit farvet med hematoxylinlegemer og eosin farvestoffer taget gennem den bageste (temporale) aspekt af det øvre højre øjenlåg. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4: forberedelse af operationsstedet. A) øverste venstre panel: fjernelse af lang pels med sakse. Alle resterende fine pels er efterfølgende fjernet med en mild depilatory creme. Øverste højre panel: endelige udseende efter komplet pels fjernelse, der giver mulighed for kirurgisk mærkning og høj kvalitet ultralyd af ILG skal udføres. B) der vises passende kirurgiske mærkninger af den højre periorbitalt region i dette eksempel er indsnit til at fjerne oslg og ILG blevet forbundet for at skabe en lang krum incision. Placeringen af den posterior incisure er angivet med et lille hash mærke på krum incisionsite mærkning (pil). Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 5: fjernelse af OSLG. (A) kirurgiske steder er infiltreret med bedøvelsesmiddel ved hjælp af en 50:50 kombination af 2% lidocain med 1:100000 adrenalin og 0,5% bupivacaine, som injiceres i det øvre låg og langs indsnit linjer for at minimere ubehag under proceduren. (B) en Colorado microdissection nål bruges til at incise huden og overfladiske muskellag langs de præ-mærkede kirurgiske incisionsites. Forsigtigt greb på tværs af såret påføres for at hjælpe med at skabe dissektion flyet. Den lille Pinpoint Burns (pil) blev lavet med Colorado nål på ækvidistant punkter langs incisionline for at hjælpe optimalt justere væv under sårlukning. C) OSLG eksponeres efter væv, der ligger over den bageste incisure er blevet mobiliseret (Arrow). Kapslen af kirtel er blevet indskåret. Den OSLG kan være prolapsed ved at anvende mediale Tryk på kloden lette dens fjernelse. D) pincet anvendes til at engagere oslg og forsigtigt fjerne det fra sin dybere position i kredsløb gennem den bageste incisure. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 6: fjernelse af øjenspalten Superior lacrimal kirtel (pslg) og udskillelsesrør. (A) efter eversion af det øvre øjenlåg er den bulbøse del af PSLG forlovet med pincet og dissekeret af Tarsus ved hjælp af en saks. Trækkraft til PSLG med pincet er afgørende for at opretholde det kirurgiske plan. (B) dissektion af pslg og den vigtigste lacrimal kanal er overført overlegent mod orbital fælg ved hjælp af skarpe dissektion og kontinuerlig trækkraft på kirtel og Duct væv til at opretholde passende kirurgisk plan. Dissektion skal gå videre til det punkt, hvor oslg blev fjernet. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 7: fjernelse af ILG. A) huden og den overfladiske muskel er indskåret, indtil det fascial plan, der ligger over den zygomatiske knogle eller den overfladiske del af massetermusklen, er nået. Lederen af ILG er normalt tydeligt tydelig som en lille bule placeret under den forreste limbus. B) ilg's fiber kapsel indsnit med en saks, der udsætter ILG. Når kapslen er indskåret, kan de dybere dele af kirtlen let fjernes. C) den mest udvendige del af ILG-hovedet, som ligger på den zygomatiske knogle, er blevet eksponeret og reflekteret anteriorly, der viser den underliggende zygomatiske knogle. (D) indsnit i den orbital septum langs den ringere fælg udsætter halen af ILG. (E) en gren af den eksterne halspulsåre føder halen af ILG (pil). F) udseende efter lukning af hudindsnit, når det er komplet dacryoadenektomi. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 8: rosen bengalsk farvning af hornhindeoverfladen. Eksternt fotografi viser fremtrædende farvning, mest bemærkelsesværdige på nasal kvadrant. Alle øjne gennemgår komplet dacryoadenektomi udviklet lignende ændringer, der var tydeligt ved 1 uge efter operationen og vedholdende i mindst 6 uger. Bemærk, at lysrefleksen fra ring blitzen viser forvrængning fra en tør okulær overflade, der viser, hvordan tørt øje kan påvirke synet negativt. Venligst klik her for at se en større version af dette tal.
| Dacryoadenektomi | ||
| Gennemsnitlig ± SEM; n = 16 øjne | ||
| Oprindelige | Uge 2 | |
| Ælde break-up tid, s | 60,0 ± 0,0 | 4,5 ± 1,2 |
| p < 0,0001 | ||
| Tåre osmolaritet, mOsm | 291,2 ± 3,7 | 315,3 ± 5,5 |
| p = 0,001 | ||
| Schirmer tåre test, mm | 18,3 ± 1,3 | 10,5 ± 1,6 |
| p = 0,0006 | ||
| Rosen Bengalen, modificeret NEI-score | 0,0 ± 0,0 | 4,28 ± 0,6 |
| p < 0,0001 | ||
| Drives imod baseline: Dacryoadenektomi: tBut, p < 0,0001; tåre osmolaritet, p < 0,001; Schirmer tåre test, p < 0,0006); og rosen Bengalen. | ||
Tabel 1: tørre øjne parametre på postoperative uge 2.
Discussion
DED er klassificeret i to store grupper baseret på effekten på tåre film stabilitet: vandig mangelfuld (nedsat produktion af den vandige del af tåre filmen; ~ 20% af DED) og fordampnings middel (øget fordampning af tåre filmen; ~ 50% af DED). Omkring 30% af de DED patienter viser tegn på både (blandet). Inflammation er kernen mekanisme af DED, som dens forskellige ætiologier konvergerer13,14. Vores metode modeller vandig-mangelfuld.
Som tidligere nævnt, vigtige første skridt i at reproducere vores metode er en påskønnelse af de fine punkter i anatomi af orbital lacrimal kirtler (LGs) af kanin og undgå forvirring ved varieret og undertiden modstridende anatomiske terminologi. Det anatomiske Atlas af Popesko et al.11 er yderst grundig. For de mindre komfortable med anatomi af kanin, dissektion af nekropsy prøver giver let kendskab til disse strukturer og aids deres kirurgisk fjernelse i levende enheder.
Vigtige råd om husdyravl og akklikalering er blevet givet i vores ledsagende publikation12. Den samme artikel præsenterer også nyttige kommentarer til at bestemmelse parametrene for DED anvendes i begge metoder.
I modsætning til den tidligere metode12, denne ene kræver en højere grad af kirurgisk dygtighed på grund af omfanget og mere invasive karakter af de teknikker, der er nødvendige for at fjerne LGS. Den største risiko under disse-resektioner er katastrofal blødning forårsaget af skader store fartøjer, der er i umiddelbar nærhed af LGS såsom grene af halspulsåren. Dette undgås ved at visualisere hver LG og dens margener i det kirurgiske felt. Endelig, overivrige fjernelse af nictitating membran kunne føre til prolaps af Harderian kirtel, som kan forstyrre tåre film vurdering.
Der bør udvises forsigtighed for at minimere mængden af konjunktival forstyrrelse med fjernelsen af PSLG, et nyt aspekt af vores metode, der forbedrer reproducerbarhed og øger sværhedsgraden af DED. Det er overraskende nemt at etablere dissektion flyet og bære det tilbage til den overlegne orbital højderyg, så længe trækkraft påføres vævet. Det er beroligende at kunne se årsags mærkerne fra trunkering af OSLG; de bekræfter den fuldstændige fjernelse af de vigtigste ekskretionsorganerne kanalen af kirtel.
Fjernelse af ILG i sin helhed præsenterer også udfordringer. Isoler hovedet af kirtlen først, da dette er den nemmeste del at visualisere. Hele lederen af kirtel vævet adskiller let fra de omgivende væv; Men, nogle pleje skal bruges til at forhindre skader på den store venøse sinus, som ligger mediale til lederen af ILG. Halen af ILG kan derefter følges tilbage, da den passerer under zygomatic Bone. Størstedelen af halen er let at isolere. Men det mest bageste aspekt af halen kan vise sig mere udfordrende på grund af variabel anatomi og dens nærhed til en mellemstor gren af halspulsåren. Omhyggelig dissektion bør tillade alle marginer af ILG at blive set klart, lette dens fuldstændig fjernelse. Investigator bør være parat til at bære dissektion mere overlegent i tilfælde, hvor halen af kirtel ender under den laterale canthus, som forklaret i den tidligere diskussion af anatomi af lacrimal kirtler. Af note, forfatterne har aldrig været i stand til at identificere nogen del af oslg, når dissekere ILG gennem en krum indsnit langs den tidsmæssige og ringere kloden. Selv om dette kan være teknisk muligt, denne kirurgiske tilgang indebærer en for høj risiko for alvorlig blødning. Nærmer sig OSLG gennem den posterior incisure viser langt sikrere.
Ekskretionskanalen af ILG kan ses trænge gennem den ringere fascial plan, da den passerer ind i den nedre konjunktival fornix. Lejlighedsvis, små lobuler af glandular-optræder væv ses her så godt og kan fjernes forsigtigt.
Det er meget nyttigt at opretholde rækkefølgen af LG resektion som præsenteret her. Hvis ILG fjernes først, bliver det teknisk langt vanskeligere at isolere OSLG. Den væsentligste årsag er, at OSLG efter fjernelse af ILG ikke let kan gennemføres og derved identificeres.
En betydelig fordel ved vores model er, at det kan være "modulært". Med andre ord, graden af DED induceret af dacryoadenektomi kan kalibreres til at tjene eksperimentelle behov. For eksempel ville resektion af alle LGs forårsage maksimal DED, men resektion af kun SLG ville forårsage den mildeste form af DED og resektion af kun ILG ville generere sygdom i mellem sværhedsgrad.
Vores tilgang, som rekapitulerer den særskilte patofysiologiske begivenhed af reduceret tåreproduktion giver yderligere fordele i forhold til allerede rapporterede metoder. Kort, ingen anden kirurgisk model elimineret tåreproduktion af alle orbital LGS5,6,7,15,16; herunder parasympatisk denervering af LGS17, og farmakologisk undertrykkelse af tåreproduktion18,19, med de to sidstnævnte har deres off-Target virkninger som signifikante confounders. Endelig minimerer denne model den vigtigste investigator-afhængige bias, nemlig den ufuldstændige resektion af LGs, da den kirurgiske teknik giver deres komplette visualisering; Dette er hjulpet af det faktum, at ingen hæmostase, bortset fra kautery, er påkrævet.
Investigator bør være bevidste om, at komplet resektion af alle orbital LGs ikke genererer fuldstændig fravær af tårer, og for eksempel, schirmers tåre testværdier nærmer sig nul bør ikke forventes. Dette skyldes det faktum, at der altid er andre kilder til tårevæske såsom tilbehøret LGS af wolfring og Krause og plasma lækage fra konjunktival fartøjer20,21,22. Fra et eksperimentelt synspunkt, bør dette ses som et positivt aspekt af metoden, da det bevarer den okulære overflade; komplet xeroftalmi ville helt ødelægge hornhinden negerende nytten af modellen. Desuden, i sin nuværende udførelsesform, denne model giver en glimrende mulighed for at studere sådanne kompenserende mekanismer og flydende transport på tværs af disse mindre rum.
Afslutningsvis, præsenteret her er detaljerne i en roman og alsidig metode til inducerende vandig-mangelfuld, der egner sig til studiet af tåre fysiologi, patogenesen af DED og studiet af terapeutiske agenser, der udvikles til denne indikation.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen konkurrerende interesser, bortset fra BR, der har en egenkapital position i Medicon Pharmaceuticals, Inc. og Apis Therapeutics, LLC; og LH, en ansat hos Medicon Pharmaceuticals, Inc. med en egenkapital position i Apis Therapeutics, LLC.
Acknowledgments
Vi anerkender den finansielle støtte fra en målrettet forskningsmuligheder Grant fra Stony Brook University School of Medicine og et forskningsstipendium fra Medicon Pharmaceuticals, Inc., Setauket, NY. Vi takker Michele McTernan for redaktionel støtte.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| acepromazine, Aceproinj | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NDC11695-0079-8 | 0.1ml/kg subcutaneously injection for rabbit sedation |
| anesthesia vaporizer | VetEquip, Pleasanton, CA | Item # 911103 | Protocol 4.8 |
| animal restraining bag | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | Jorvet J0170 | Use appropriately sized bag. |
| bupivacaine, 0.5% | Hospira Inc, Lake Forest IL | NDC: 0409-1162-02 | Mixed 50:50 with 2% lidocaine with 1:100,000 epinephrine for infiltration of incision sites, protocol 5.1 |
| buprenorphine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | 0.01 mg/kg, for postprocedural care, 6.1.4 | |
| cautery unit, high-temperature, battery-powered | Medline Industries Inc, Northfield, IL | REF ESCT001 | Keep on hand in case of bleeding, protocol 2.7 |
| clipper, Wahl Mini Arco | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | No. 022573 | Cordless shears for fur removal, protocol 4.2 |
| Colorado needle | Stryker Craniomaxillofacial, Kalamazoo, MI | N103A | Use with electrosurgical unit to make incisions, protocol 5.1 & 5.3 |
| electrosurgical unit with monopolar cautery plate | Valleylab, Boulder, CO | Force FXc | Use with electrosurgical unit to make incisions, protocol 5.1 & 5.3 |
| fluorescein, Ak-Fluor 10% | AKRON, Lake Forest, IL | NDC17478-253 | Dilute to 0.2% with PBS to measure TBUT, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| foceps, curved dressing | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | Storz E1406 | delicate serrated dressing forceps |
| forceps, 0.3 | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | ET6319 | For removal of nictating membrane, protocol 2.5 |
| forceps, Bishop Harmon | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | E1500-C | Use toothed forceps for dacryoadenectomy, protocol 5.1 & 5.2 |
| hair remover lotion, Nair | Widely available | Softening Baby oil | Dipilitory cream for sensitive skin, protocol 4.2 |
| isoflurane | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | 29405 | Possible alternative sedation, protocol 4.7 |
| IV catheter, Terumo Surflo ETFE 24-gauge | Terumo, Tokyo, Japan; available from Fisher Sci., VWR, McKesson, etc. | SR-OX2419CA | 25-gauge for smaller rabbits; protocol 4.6 |
| ketamine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NDC 11695-0701-1; NADA 200-055 | 15 mg/kg, protocol 4.7 |
| ketoprofen | Hospira, Inc., Lake Forest, IL | 3 mg/kg, for postprocedural care, 6.1.4 | |
| laryngeal mask airway | Docsinnovent Ltd, London, UK | Vgel R3 | Protocol 4.8 |
| lid speculum, wire | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | Barraquer SUH01 | For removal of nictating membrane, protocol 2.4 |
| lidocaine 2% with epinephrine 1:100,000; 50:50 mixture | Hospira Inc, Lake Forest IL | NDC 0409-3182-02 | Pre-treat before removal of nictating membranes, protocol 2.4 |
| lidocaine, preservative-free | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | L5647 | 1% in PBS for anesthesia agent, for application to eye, protocol 2.4 |
| micropipette | Eppendorf | Research Plus 100 uL | For application of preservative-free lidocaine to eye, protocol 2.4 |
| micropipette tips | World Wide Medical Products | 41071052 | For application of preservative-free lidocaine to eye, protocol 2.4 |
| monitoring device, multi-parameter | SurgiVet, Waukesha, WI | V9201 | For monitoring of vitals, protocol 4.9 |
| needle, 26-gauge | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 305115 | For injection of lidocaine/epinephrine, protocol 2.3 & 2.5 |
| needle, 30-gauge | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 305106 | For infiltration of incision sites; syringe and needle size are not critical, protocol 5.1 |
| osmolarity tips | TearLab Corp., San Diego, CA | #100003 REV R | Measure tear osmolarity measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| osmometer, TearLab | TearLab Corp., San Diego, CA | Model#200000W REV A | Measure tear osmolarity, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| povidone-iodine solution | Medline Industries Inc, Northfield, IL | PVP Prep Solution, NDC: 53329-939-04, REF MDS 093944 | To maintain sterile field, protocol 4.11 |
| rabbit, New Zealand White | Charles River Labs, Waltham, MA (NZW) | 2-3 kg | Research animals |
| Rose bengal stain | Amcon Laboratories Inc., St. Louis, MO | NDC51801-004-40 | 1% in PBS, for staining the ocular surface, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| saline, normal | B. Braun Medical, Irvine, CA | REF R5200-01 | For postprocedural care, protocol 6.1.3 |
| Schirmer Tear Test strips | Eaglevision, Katena products. Denville, NJ | AX13613 | Measure tear production, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| scissors, Vannas | McKesson Medical-Surgical, San Francisco, CA | Miltex 2-130 | Capsulotomy scissors for dacryoadenectomy, protocol 5.1 & 5.2 |
| scissors, Westcott tenotomy | McKesson Medical-Surgical, San Francisco, CA | Miltex 18-1480 | For removal of nictating membrane, protocol 2.7 |
| sedation gas mask | DRE Veterinary, Louisville, KY | #1381 | Possible alternative sedation, protocol 4.7 |
| surgical marking pen | Medical Action Industries, Arden, ND | REF 115 | Protocol 4.2 |
| sutures, 5-0 Mersilene | Ethicon US, LLC | Ethylene terephthalate sutures, used for deep connective tissue closure, protocol 5.3.11 | |
| sutures, Vicryl 6-0 | Ethicon US, LLC | Polyglactin 910 sutures, used for superficial muscle and skin closure, protocol 5.3.11 | |
| syringe, 1 cc | BD, Franklin Lakes, NJ | ref 309659 | For injection of lidocaine/epinephrine, protocol 2.3 & 2.5 |
| syringe, 5 cc | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 309603 | For infiltration of incision sites; syringe and needle size are not critical, protocol 5.1 |
| tissue forceps, 0.8mm Graefe | Roboz Surgical Store, Gaithersburg, MD | RS-5150 | Curved Weck forceps |
| topical antibiotic ointment (neomycin, polymyxin, bacitracin, and hydrocortisone) | Bausch and Lomb, Tampa, FL | NDC 24208-785-55 | Applied after removal of nictating membrane, protocol 2.8, and for postprocedural care, protocol 6.1.2 |
| ultrasound gel | Parker Laboratories, Inc., Fairfield, NJ | Aquasonic 100 | To ensure electrical contact with monopolar cautery plate, protocol 4.5 |
| xylazine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NADA: 139-236 | 1 mg/kg, protocol 4.7 |
References
- Gillan, W. D. H. Tear biochemistry: A review. South African Optometrist. 69 (2), 100-106 (2010).
- Conrady, C. D., Joos, Z. P., Patel, B. C. Review: The Lacrimal Gland and Its Role in Dry Eye. Journal of Ophthalmology. 2016, 7542929 (2016).
- Schechter, J. E., Warren, D. W., Mircheff, A. K. A lacrimal gland is a lacrimal gland, but rodents' and rabbits' are not human. Ocular Surface. 8 (3), 111-134 (2010).
- Shinomiya, K., Ueta, M., Kinoshita, S. A new dry eye mouse model produced by exorbital and intraorbital lacrimal gland excision. Scientific Reports. 8 (1), 1483 (2018).
- Bhattacharya, D., et al. Tear Production After Bilateral Main Lacrimal Gland Resection in Rabbits. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (13), 7774-7783 (2015).
- Chen, Z. Y., Liang, Q. F., Yu, G. Y. Establishment of a rabbit model for keratoconjunctivitis sicca. Cornea. 30 (9), 1024-1029 (2011).
- Li, N., et al. Establishment of the mild, moderate and severe dry eye models using three methods in rabbits. BioMed Central Ophthalmology. 13, 50 (2013).
- Honkanen, R., et al. A New Rabbit Model of Chronic Dry Eye Disease Induced by Complete Surgical Dacryoadenectomy. Current Eye Research. , 1-10 (2019).
- Nisha, S., Deepak, K. An Insight Into Ophthalmic Drug Delivery System. International Journal of Pharmaceutical Studies and Research. 3 (2), 9-13 (2012).
- Davis, F. A. The Anatomy and Histology of the Eye and Orbit of the Rabbit. Transactions of the American Ophthalmological Society. 27, (1929).
- Popesko, P., Rajitova, V., Horak, J. Rabbit - Guinea Pig. A Colour Atlas of the Anatomy of Small Laboratory Animals. 1, Saunders. Philadelphia, PA. (1992).
- Honkanen, R. A., Huang, L., Rigas, B. A rabbit model of aqueous-deficient dry eye disease induced by concanavalin A injection into the lacrimal glands: Application to drug efficacy studies. Journal of Visualized Experiments. , e59631 (2019).
- Wei, Y., Asbell, P. A. The core mechanism of dry eye disease is inflammation. Eye & Contact Lens. 40 (4), 248-256 (2014).
- Pflugfelder, S. C., de Paiva, C. S. The Pathophysiology of Dry Eye Disease: What We Know and Future Directions for Research. Ophthalmology. 124 (11S), S4-S13 (2017).
- Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Gray, K. L. A new rabbit model for keratoconjunctivitis sicca. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 28 (2), 225-228 (1987).
- Odaka, A., et al. Efficacy of retinol palmitate eye drops for dry eye in rabbits with lacrimal gland resection. Clinical Ophthalmology. 6, 1585-1593 (2012).
- Toshida, H., Nguyen, D. H., Beuerman, R. W., Murakami, A. Evaluation of novel dry eye model: preganglionic parasympathetic denervation in rabbit. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4468-4475 (2007).
- Burgalassi, S., Panichi, L., Chetoni, P., Saettone, M. F., Boldrini, E. Development of a simple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tear substitutes. Ophthalmic Research. 31 (3), 229-235 (1999).
- Xiong, C., et al. A rabbit dry eye model induced by topical medication of a preservative benzalkonium chloride. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 49 (5), 1850-1856 (2008).
- Shiue, M. H., et al. Pharmacological modulation of fluid secretion in the pigmented rabbit conjunctiva. Life Science. 66 (7), 105 (2000).
- Li, Y., et al. Rabbit conjunctival epithelium transports fluid, and P2Y2(2) receptor agonists stimulate Cl(-) and fluid secretion. American Journal of Physiology: Cell Physiology. 281 (2), C595-C602 (2001).
- Dartt, D. A. Regulation of mucin and fluid secretion by conjunctival epithelial cells. Progress in Retinal and Eye Research. 21 (6), 555-576 (2002).
