Summary
En ny tilnærming er presentert for å indusere kronisk tørr øyesykdom hos kaniner ved kirurgisk å fjerne alle orbital lacrimal kjertler. Denne metoden, skiller seg fra de tidligere rapportert, produserer en stabil, reproduserbar modell av vandig mangelfulle tørre øyne godt egnet til å studere tåre fysiologi og patofysiologi og øye terapi.
Abstract
Tørre øyne sykdom (DED) er en kompleks sykdom med flere årsaker og variable symptomer, har øye overflate betennelse som sin nøkkel patofysiologisk trinn. Til tross for fremskritt i vår forståelse av DED, betydelig kunnskap hullene gjenstår. Fremskritt er begrenset delvis på grunn av mangel på informative dyremodeller. Forfatterne nylig rapportert om en metode for DED indusert ved å injisere alle orbital lacrimal kjertel (LG) vev med Lektiner concanavalin A. Her rapporterer vi en roman modell av vandig-mangelfull DED basert på kirurgiske reseksjon av alle orbital LG (dacryoadenectomy) vev. Begge to metoder bruk kanin med hensyn til deres likheten å Human Eyes inne pris av nummeret og struktur av det øye overflate. En uke etter fjerning av nictitating membran, orbital overlegne LG ble kirurgisk fjernet under anestesi, etterfulgt av fjerning av palpebral overlegen LG, og til slutt fjerning av dårligere LG. Dacryoadenectomy indusert alvorlig DED, dokumentert av en markert reduksjon i tåre bryte opp tid test og Schirmer ' s tåre test, og betydelig økt tåre OSMOLARITETSSYSTEM og steg Bengal farging. Dacryoadenectomy-indusert DED varte i minst åtte uker. Det var ingen komplikasjoner og dyr tolerert prosedyren godt. Teknikken kan mestrer relativt lett av dem med tilstrekkelig kirurgisk erfaring og styrking av relevante kanin anatomi. Siden denne modellen viser funksjonene i menneskets vandig-mangelfull DED, er det egnet for studier av øyeoverflaten homeostase, DED, og kandidat legemiddel selskap.
Introduction
Tårer er nødvendig for beskyttelse av øyeoverflaten og for vedlikehold av de optiske egenskapene til hornhinnen. De består av tre lag: en indre mucin belegg, en middel vandig komponent, og en lipid overlay1. Den mucin laget produseres hovedsakelig i begeret celler av conjunctiva, den vandige komponenten overveiende i lacrimal kjertler (LGs), og lipid laget overveiende i meibomian kjertler1,2. Orbital LGs er hovedkilden for den vandige komponenten av tårer og for mange av proteiner som beskytter overflaten mot bakteriell angrep3. Øyes overflate sykdommer passes på når den vandige tåre produksjonen er redusert under et kritisk nivå, frata epitel overflater i øyet av den vandige komponent og avgjørende tåre bestanddeler inkludert vekstfaktorer, lysozyme, og Laktoferrin. I tilfeller av redusert tåreproduksjon av LGs, konjunktival og hornhinnen vev gjennomgår tilpasninger for å kompensere for det endrede miljøet.
Forstå bidraget av tåre komponenten avledet fra orbital LGs og øyeoverflaten kompenserende mekanismer når dette mangler påvirker vår styrking av fysiologi og patofysiologi av fremre segmentet av øyet og, mer generelt, av helse og sykdom i hele verden. Den eksperimentelle tilnærmingen til disse spørsmålene krever en informativ dyremodell. Følgelig har flere grupper forsøkt å utvikle dyremodeller der orbital LGs er fjernet, og dermed tilrettelegge vurderingen av rollen som tårer i øye helse. En slik modell ble nylig rapportert for musen4. Kaninen tilbyder, imidlertid, mange adskilt fordeler over gnager modeller inkluderer lignende anatomisk og histologic strukturer av det LG, og muligens flere betydelig, lignende størrelse og overflate område av det hornhinnen og konjunktival vev når sammenlignet med deres Human motpartene3.
Opprettelse av vandig mangelfull tørr øyesykdom (DED) av kirurgiske reseksjon av LG vev i kaniner er ikke nytt. Tallrike rapporter beskriver reseksjon av LG vev med varierende suksess gjenspeiles i variable endringer i tåreproduksjon målt ved Schirmer ' s Tear test5,6,7,8. En grundig forståelse av den relevante anatomi av kaninen og klarhet om anatomisk terminologi er svært nyttig i å reprodusere denne metoden. Nedenfor finner du en grundig oversikt over begge deler.
Anatomi av lacrimal kjertler
Kaninen har to orbital LGs: den større underlegne LG (ILG) og den mindre overlegne LG (SLG; Figur 1). Den ILG strekker seg langs dårligere og bakre aspekt av orbital rim. Med unntak av variabel størrelse, den fremre delen av ILG har en ganske ensartet oppsvulmede utseende som kan sees som en protuberance i huden under kloden (figur 2). På grunn av sin karakteristiske utseende i forhold til resten av kjertel, er det referert til som "hodet" av ILG. En del av hodet brytes rundt og ligger på den ytre overflaten av zygomatic bein. Dette fungerer som et nyttig landemerke på ultralyd biomikroskopi å veilede injeksjoner i ILG. Resten av hodet ligger mer anteriort9 i bane.
På grunn av den karakteristiske utseendet på den resterende delen av ILG, som er lang og tynn, er dette segmentet referert til som "halen." Halen går langs underlegne orbital rim, fra hodet av ILG til orbital rim der det opphører med variabel anatomi ved dårligere og bakre orbital rim (Figur 3A). Halen ligger dypt (midtre) til zygomatic bein atskilt fra orbital innholdet av en fascial band for det meste av sin kurs til den når bakre kant av banen der den igjen strekker seg ut over den ytre overflaten av zygomatic bein. Den ILG mottar sin blodtilførsel fra grener av hals puls arterien.
SLG har to komponenter som er analoge til det menneskelige. Den ene er den palpebral overlegen LG (PSLG), som ligger i den øvre bakre øyelokket midtre til tarsal plate. Det ser ut oppsvulmede i naturen og har mange punktat åpninger som drenerer vandig tårevæske som er lettere sett når dekket med 2% fluorescein (Figur 3B).
Den andre er orbital overlegen LG (OSLG), bosatt i en midtre posisjon i overlegen bane (Figur 3C). På grunn av sin posisjon i nærheten av midtlinjen av skallen, har det vært umulig å identifisere den ved hjelp av eksterne kirurgiske tilnærminger fra den timelige eller underlegne bane. I fersk obduksjon prøver eller kirurgiske tilfeller, kan denne kjertel bli prolapsed gjennom bakre incisure plassert i rygg overflaten av skallen når milde midtre trykket er brukt på kloden. Prolaps av dette kjertel vevet kan dokumenteres med ultralyd biomikroskopi.
PSLG og OSLG er sammenhengende strukturer. Den OSLG er en tubuloalveolar struktur som ductal arkitektur coalesces inn i hoved excretory duct. Denne kanalen passerer under Supra-orbital Ridge og kjører i øvre lokk vev avslutte i PSLG. Langs excretory duct, kjertel vev i samsvar med de opprinnelige beskrivelsene av Davis har blitt identifisert10 (Figur 3D).
En merknad om terminologi
Gode og omfattende anatomiske beskrivelser bruke varierende terminologi også. Den klassiske orbital anatomi av Davis definerer bare en øvre og nedre LG10. Men hans beskrivelse av den øvre LG tydelig detaljer delene mer spesifikt definert her som PSLG og OSLG, mens hans beskrivelse av den nedre LG detaljene delene definert her som hode og hale av ILG. En nyere og grundig anatomiske Atlas11 definerer disse vev som zygomatic kjertel og tilbehøret LG. Begrepet "lacrimal kjertel" er brukt her for å utgjøre de nevnte PSLG og OSLG. Denne terminologien er bedre egnet for å reprodusere denne metoden uten unødig forvirring.
Protocol
Alle dyrestudier fra virveldyr ble gjennomført i samsvar med alle relevante regulatoriske og institusjonelle retningslinjer. Alle studier ble godkjent av den institusjonelle gjennomgang Board of Stony Brook University og utført i samsvar med foreningen for forskning i Vision og Oftalmologi (ARVO) uttalelse for bruk av dyr i øye og visjon forskning.
1. dyr og bolig
- Bruk New Zealand hvit (NZW) kaniner som veier 2 − 3 kg.
- Hus kaniner individuelt i et strengt kontrollert miljø: temperatur (65 ± 5 ° f), fuktighet (45 ± 5%), og belysning (12 timer på/av syklus).
NOTE på grunn av aggressiv opptreden ofte forevise imellom kanin det er gruppe-huset, oppbevare dyrene inne individ burene å forhindre utilsiktet øye skaden. - Gir kanin ubegrenset adgang å målestokk kanin Chow og vann.
- Gi ingen andre kosttilskudd elementene for å hindre utilsiktet vitamin A kosttilskudd som kan påvirke tørre øyne.
- Acclimate kaniner minst to uker før innspillingen DED parametere.
2. fjerning av nictitating membran
Merk: for enkelhets skyld er teknikken for høyre øye beskrevet nedenfor. Fullfør denne prosedyren på venstre øye på samme måte.
- Fjern nictitating membran bilateralt i løpet av acclimation perioden (vanligvis den første uken).
- Plasser kanin i en passende størrelse begrensende pose.
- Administrer en subkutan injeksjon av acepromazine (1 mg/kg) over skuldrene ved hjelp av en 1 cc sprøyte og 26 G nål for å sedate kaninen. Endepunktet for denne milde sedasjon er når dyret opprettholder en avslappet hode posisjon uten normal skanning bevegelser og ørene er ikke lenger helt oppreist.
- Ved hjelp av en micropipette, Påfør 25 μL av konserveringsmiddel fri lidokain (1%) for øyet. Sett et wire lokk på mellom øyelokkene.
- Ta tak i nictitating membranen på toppen med 0,3 tang (eller tilsvarende) og trekk den over hornhinnen overflaten. Injiser 1% lidokain med 1:100000 adrenalin i Subkonjunktival plass i nictitating membranen ved hjelp av en 26 G nål. Injiser ca. 0,3 mL for å danne en beskjeden størrelse bleb over nictitating membranen. Injeksjons volumer over 1 mL er godt innenfor et sikkert doseringsområde for kaniner (2 − 4 mg/kg).
- Fjern tråden. Vent ca 5 min for lidokain og adrenalin skal tre i kraft. I løpet av denne tiden, utføre samme prosedyre i andre øyet.
- Sett på igjen wire lokket. Grip og forlenge nictitating membranen over hornhinnen overflaten ved hjelp 0,3 tang. Skjær membranen på sin base med Tenotomy saks eller tilsvarende.
Merk: blødning er vanligvis minimal, men hold en høy temperatur batteri cauterization enhet i nærheten og bruk etter behov for å minimere blødning. Direkte trykk over klippe sokkelen på nictitating membranen kan også brukes til å stoppe småblødninger hvis det oppstår. - Fjern wire lokket. Plasser aktuelle antibiotika salve (Neomycin, polymyxin, bacitracin, og Hydrocortisone) over hornhinnen overflaten.
- Utfør en identisk prosedyre til det andre øyet som indikert av protokollen.
- Sted dyrene rygg inne individ burene og tillate å gro sammen for det vil si ettall uke, eller til det konjunktival overflate har gro sammen absolutt fra en klinisk standpunktet, tidligere utføre alle fremme analyser eller inngrep.
Merk: fullstendig klinisk helbredelse indikeres av manglende hevelse, injeksjon eller utflod fra konjunktival overflater. Dyr bør holde øynene åpne normalt, uten tilstedeværelse av beskyttende ptosis.
3. måling av tørre øye parametre og Oppsamling av tåre prøver
- Mål følgende DED parametere, som passer til den eksperimentelle protokollen: rive OSMOLARITETSSYSTEM, rive break-up tid, Schirmer ' s tåre test, og steg Bengal farging. Utfør dem som tidligere beskrevet12, med et team på minst to etterforskere.
Merk: et team på minst to etterforskere gjør det mulig for effektiv måling av større grupper av dyr (6 eller mer) rundt samme klokke tid og dermed hindre mulig døgn variasjon fra påvirker resultatene.
4. kirurgisk forberedelse og anestesi
- Lett sedate dyr plassert i en begrensende pose med subkutan acepromazine som ovenfor (1 mg/kg).
- Fjern all pels på ansiktet og rygg flaten av skallen for å visualisere de kirurgiske landemerkene.
- Trim pels med skjæring sakser forlate resterende fin pels ca 1 mm i lengde (Figur 4A, venstre).
- Fjern all rester av pelsen med mild riktige krem etter produsentens anvisninger (Figur 4A, høyre).
- Merk kirurgiske snitt områder med en kirurgisk penn.
- Identifiser innsnitt området over bakre incisure ved å bruke midtre trykk til kloden forårsaker en liten bule å utvikle seg i huden over bakre incisure fra prolaps av OSLG.
- Lag en lineær 2 cm merke i fremre/bakre retning på huden over rygg overflaten av skallen direkte over dette området med en kirurgisk merkepenn.
- Når du planlegger snittet for fjerning av ILG, markerer en lang, krumlinjet linje rundt øyet (1 cm fra den underlegne og timelige lokk margin) som strekker seg fra bakre (Temporal) bane til fremre (midtre) canthus. Gjør merkingen strekke seg langs bakre bane til nivået på midtre canthus eller bare overlegen dette (Figur 4B). I noen dissections, snittene for å fjerne OSLG og ILG vil bli koblet til.
Merk: Merk begge banene på dette tidspunktet når du utfører bilateral kirurgi.
- Trim en patch av pels 2 til 3 cm bred med sakser over den laterale overflaten av hvert lår for å tillate plassering av en monopolar cauterization plate.
- Påfør ultralyd gel for å sikre god elektrisk kontakt med den monopolar cauterization platen.
- Plasser et 25 G intravenøs (IV) kateter i en av de marginale venene i øret for å administrere medikamenter eller væsker ved behov.
- Gi subkutan xylazine (1 mg/kg) og IV ketamin (15 mg/kg) for innledende induksjon av anestesi (gjennom IV-tilgang).
Merk: hvis kaninen er bedøvet på forhånd med acepromazine tilstrekkelig til å beholde endepunktet beskrevet i trinn 2,3, bruk gass maske sedasjon med isoflurane som et alternativ. - Plasser en laryngeal maske luftveiene som holdes på plass ved hjelp av et elastisk bånd eller en streng for å sikre og vedlikeholde luftveiene.
- Koble masken til anestesi maskinen med oksygentilførsel satt til 1 L/min.
- Sett isoflurane på 5% i utgangspunktet, og deretter redusere som tolerert basert på nivået av animalsk sedasjon.
- Oppretthold isoflurane på eller over 2% til endelig sår lukking.
Merk: vurdere nivået av sedasjon ved å overvåke for respirasjonsfrekvens og bevegelser som svar på kirurgiske eller smertefulle stimuli. Øk dybden av anestesi hvis respirasjonsfrekvensen øker over 10 åndedrag per minutt, hvis kaninen begynner å tygge på luftveiene vedlikeholder, eller hvis noen bevegelser som svar på smertefulle stimuli er observert.
- Overvåk puls oksymetri, capnography, blodtrykk, rektal kroppstemperatur og hjertefrekvens ved hjelp av en multi-parameter overvåkingsenhet eller andre egnede enheter.
- Overvåk vitals kontinuerlig under prosedyren og ta opp hver 10 til 15 min.
- Plasser kaninen på operasjonsstuen (eller) bordet over en oppvarming pad for å hindre nedkjøling. Vipp bordet i en omvendt Trendelenburg-posisjon ved ca. 30 ° for å minimere blødning.
- Klargjør operasjonsområdet med en povidon-jod-løsning fortynnet til halv styrke med sterilt vann og til å opprettholde et sterilt felt.
5. komplett kirurgisk dacryoadenectomy
Merk: den komplette kirurgiske dacryoadenectomy, som beskrevet her, ble gjort ved hjelp 0,3 vev tang, Tenotomy saks, ikke-tenner vev tang, og saks. Disse instrumentene kan byttes med lignende instrumenter som utfører samme funksjon basert på kirurg preferanse.
- Fjern OSLG først.
- Infiltrere innsnitt nettsteder (kirurgisk merking penn linjer og øvre bakre lokk) med en 50:50 blanding av 2% lidokain med 1:100000 adrenalin og 0,5% bupivakain ved hjelp av en 5 CC sprøyte med en 30 G nål (figur 5a).
Merk: sprøyte-og nåle størrelse er ikke avgjørende. - Bruk en Colorado nål koblet til en elektro enhet for å gjøre huden snitt langs kirurgiske markeringer. Innstillingene kan variere basert på klinisk respons, og er vanligvis mellom 10 og 15 enheter for både kutt og propp (figur 5B).
- Påfør motstanderens spenning over huden snitt for å skille vev og utsette underliggende frontoscutularis muskelfibre.
- Påfør midtre Trykk på kloden for å hjelpe visualisering av OSLG, sett på som svulmende vev ligger bare midtre eller dyp til frontoscutularis muskelfibre. Om nødvendig, flytte disse muskelfibre til side for å avdekke den underliggende incisure.
- Med tann tang (0,3) og kapsuloptomi saks, forsiktig trekke og kutte fiber kapselen overliggende den OSLG. Den OSLG vanligvis har en blek Tan farge (figur 5C).
- Bruke tenner eller ikke-tann tang, ta tak i OSLG kjertel vev og forsiktig trekke det ut gjennom overlegen incisure ved hjelp av en "hånd over hånd" teknikk. Skjær små, fiber band ved hjelp av kapsuloptomi saks for å frigjøre kjertel fra sin posisjon i bane (figur 5D).
Merk: som OSLG kjertel vevet er fjernet, vil det begynne å samle seg inn i en stor tube-lignende struktur (Main excretory duct). - Når kjertelen har blitt fjernet så fullstendig som mulig, bruk sjenerøse cauterization med Colorado nål for å skape vev røye, å avkorte kjertelen i incisure så dypt som mulig. Dette vil senere tjene som et bekreftende landemerke under fjerning av PSLG.
- Infiltrere innsnitt nettsteder (kirurgisk merking penn linjer og øvre bakre lokk) med en 50:50 blanding av 2% lidokain med 1:100000 adrenalin og 0,5% bupivakain ved hjelp av en 5 CC sprøyte med en 30 G nål (figur 5a).
- Fjern PSLG.
- Evert øvre øyelokk ved hjelp av en bomulls-tippet applikator. Den oppsvulmede enden av PSLG er vanligvis lett synlig.
Merk: i noen anatomiske dissections, kan det være mulig å visualisere de viktigste excretory duct som en blek lineær struktur ca 1 eller 2 mm bred. - Engasjere PSLG med tann tang (0,3) og trekke den fra øyelokket overflaten mens du bruker kapsuloptomi saks for å skjære rundt sin base skille den fra den underliggende Tarsus (figur 6A).
- Kontroller moderat blødning med monopolar cauterization.
- Påfør kontinuerlig trekkraft på det separerte vevet for å opprettholde et vev plan for disseksjon. Dette vil tillate de viktigste excretory duct av SLG skal fjernes også (figur 6B).
Merk: som disseksjon utføres, vil det vanligvis forhånd til overlegen orbital rim der det er mulig å se cauterization merkene igjen fra fjerning av de mer overlegne og anteriort plassert OSLG.
- Evert øvre øyelokk ved hjelp av en bomulls-tippet applikator. Den oppsvulmede enden av PSLG er vanligvis lett synlig.
- Resect den ILG.
- Tillat minst 5 min for lokal bedøvelse skal tre i kraft.
- Incise huden, det depressor muskelen av det underlegne palpebra, det zygomaticolabial del av det zygomatic muskelen, og orbicularis muskelen med det Colorado microdissection nål og separat idet for det OSLG inne avdeling 5,1.
- Oppretthold hemostase med monopolar cauterization.
- Som snittet er gjennomført dypere gjennom huden merking, se etter glans av en fascial fly over zygomatic bein eller overfladisk del av masseter muskelen. På dette punktet, opprettholde vevet flyet og bære den superiorly mot orbital rim ved hjelp av Colorado nålen for kutting (figur 7A).
Merk: for å identifisere ILG, er det enklest å utføre denne delen av disseksjon over hodet av ILG som vanligvis er dårligere enn den fremre limbus av øyet. - Etter å identifisere og incising kapselen rundt ILG, identifisere Tan vev av ILG. Bare den fremre delen av ILG hodet vil være synlig (figur 7B). Imidlertid kan hodet følges anteriort som passerer under zygomatic buen og overganger inn i halen (figur 7C).
- Bruk Tenotomy saks for å kutte orbital septum langs dårligere rim utsette mer bakre del av ILG halen. Når vevet flyet er identifisert, forlenge disseksjon posteriort langs hele snittlinjen (figur 7D).
Merk: kanalen av ILG passerer gjennom nedre fiber bindevev å gå inn i mindreverdig konjunktival plass i det timelige aspektet av lokket. På bakre rim, halen av ILG kan ha varierende anatomiske konfigurasjoner. Noen ganger er det opphører dårligere enn bakre (lateral) canthus, mens i andre dissections det strekker seg mer superiorly rundt Temporal bane. - Bruk ekstrem forsiktighet for å hindre utilsiktet skade på blodtilførselen, som ILG mottar fra grener av hals puls arterien. Blodtilførselen kan sees i denne delen av disseksjon (figur 7E).
- I tilfeller der halen opphører under bakre (lateral) canthus, kan det være nødvendig å halvere den timelige delen av frontoscutular muskelen å utsette halen av ILG, som ligger langs zygomatic beinet.
- Etter hele ILG har blitt isolert og eksponert, fjerne den. På grunn av sin store størrelse, er det ofte å foretrekke å kutte kjertel i halv med saks og ta hodet separat fra halen.
- Fortsett veldig forsiktig når du fjerner hodet av ILG som det ligger umiddelbart ved siden av en stor venøs sinus i bane. Selv om blødning fra denne strukturen under kirurgisk reseksjoner har ikke skjedd, har rikelig hemostatic hjelpemidler til stede for å redusere denne risikoen.
- Etter fjerning av alle kjertel vev, lukke dype bindevev flyet med flere avbrutte 5-0 etylen polyetylentereftalat sting. Lukk overfladiske muskler og hud med en løpende 6-0 polyglactin 910 Sutur (figur 7F) ved hjelp av 0,3 vev tang og en nål sjåfør.
6. Postprocedural omsorg
- Undrape dyrene og rens operasjons plassene med sterilt vann.
- Påfør aktuelle øyen antibiotika og steroid salve (Neomycin, polymyxin, bacitracin, og Hydrocortisone) til snittene. Fortsett dette programmet to ganger om dagen i 2 dager.
- Gi en subkutan injeksjon på 20 mL normal saltvann over skulderbladene ved hjelp av en 26 G nål.
- Gi subkutan buprenorfin 0,01 mg/kg eller ketoprofen 3 mg/kg for smerte kontroll ved hjelp av en 1 cc sprøyte og 30 G nål.
Merk: dyr skal gå tilbake til sitt normale inntak og aktiviteter innen 1 − 2 dager. Kaniner bør evalueres minst ukentlig for kliniske tegn på infeksjon som dokumentert av progressiv hevelse, smerte, erythema, calor eller purulent utflod over snittet nettsteder. Dyr må også observeres for å sikre at de ikke begynner å klø i innsnitt nettsteder/Sutur linjer. Trimming alle klør før dacryoadenectomy kan være nyttig i denne forbindelse. Hvis skrape snittet linjene er observert, standard beskyttende krage kan brukes til å hindre selvskading. - Reversere anestesi.
- Fjern holde ren for luftveiene etter at dyret reagerer på stimuli og begynner å vise spontan tygge men før luftveiene vedlikeholder kan være skadet.
- Monitor dyr for ca 1 − 2 t eller til de har helt utvinnes fra anestesi som dokumentert av spontan bevegelse i burene.
- Vurdere dyr for smerte og behandle hensiktsmessig.
- Tillat dyr å utvinne i minst 1 uke etter operasjonen før du gjør noen kliniske tiltak av DED.
Representative Results
Den komplette dacryoadenectomy metoden beskrevet her ble utført på 8 dyr. Det krever en moderat grad av kirurgiske ferdigheter. Kirurgisk tid gjennomsnitt ca 2,2 h for bilateral kirurgi, unntatt fjerning av nictitating membran, som ble gjort separat og nødvendig < 10 minutter. Der var nei ulykker eller intraoperativ komplikasjoner og nei kanin krevde alle hemostatic hjelp annet enn beskjeden cauterization.
Vår kirurgiske tilnærming vellykket indusert tørt øye i alle øyne. Dette ble bekreftet av et panel av kliniske og laboratorie markører av DED (tabell 1). I løpet av de 8 ukene med observasjon, den gjennomsnittlige TBUT ble undertrykt av mer enn 75% av preoperativ nivåer (p < 0,0001 for alle tidspunkt poeng). Tilsvarende er Schirmer ' s tåre test redusert med ca 50%, resterende så for 8 uker observasjon; Det viste ingen trend for utvinning under oppfølgingsperioden. Postoperativt, rive OSMOLARITETSSYSTEM viste en 10% økning i samsvar med DED, opprettholdes i minst 8 uker postoperativt. Rose Bengal farging av hornhinnen også økt og viste ikke tegn til bedring i løpet av 8 uker med oppfølging (Figur 8). Alle øyne gjennomgår komplett dacryoadenectomy viste markert reduksjon i begeret celle tall og epitel endringer i samsvar med tørre øyne (konjunktival inntrykk cytologi).
Figur 1: Rabbit lacrimal kjertel anatomi (høyre øye). Orbital overlegne lacrimal kjertel (OSLG) består av en større bane del og mindre palpebral komponent. Den større underlegne lacrimal kjertel (ILG) består av fremre/hode og bakre/hale porsjoner. Koordinat akser viser terminologien som brukes for alle beskrivelser av retningen som brukes i teksten. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2: plassering av leder av ilg. Den laterale visning av høyre ansikt etter fjerning av pels. En bule i huden kontur (indikert med tykke piler) dårligere enn den fremre bane indikerer plasseringen av hodet av ILG som ligger på den eksterne overflaten av zygomatic benet på dette stedet. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: orbital lacrimal kjertler. (A) rett mindreverdig lacrimal KJERTEL (ilg) etter farging med Evans blå fargestoff som viser nærheten til HALEN av ilg (rød pil) bare midtre til zygomatic bein (svart pil) og dårligere til kloden. (B) rive produksjon fra palpebral overlegen lacrimal KJERTEL (PSLG). Time-lapse bilder tatt etter aktuell anvendelse av 2% fluorescein. Vandig væske som kommer fra PSLG utvanner den opprinnelige mørkeblå eller svart fluorescein fargestoff snu den lyse gul grønn (tilsvarende Seidel testing). (C) plassering av orbital Slg (OSLG) i kanin skallen, liggende nær midtlinjen av skallen (stiplet linje) innenfor bakre incisure (pil). Evans blå fargestoff ble injisert i OSLG og palpebral overlegen lacrimal kjertel. (D) histologi delen gjennom de viktigste excretory DUCT av OSLG omgitt av en liten mengde av kjertel vev (pil) er sett i denne histopathologic tverrsnitt beiset med hematoksylin og eosin fargestoffer tatt gjennom bakre (Temporal) aspekt av øvre høyre øyelokk. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: klargjøring av kirurgiske områder. (A) øvre venstre panel: fjerning av lang pels med sakser. Alle restoljen fin fur er heretter fjernet med en mild riktige kremen. Øvre høyre panel: Final utseende etter fullstendig pels fjerning som gjør det mulig for kirurgisk merking og høy kvalitet ultralyd av ILG skal utføres. (B) egnede kirurgiske markeringer av høyre periorbital regionen er vist; i dette eksempelet har snittene for å fjerne OSLG og ILG vært koblet til å skape en lang krumlinjet snitt. Plasseringen av bakre incisure er indikert av en liten hash merke på krumlinjet innsnitt området merking (pil). Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 5: fjerning av OSLG. (A) kirurgiske nettsteder er infiltrere med bedøvelse ved hjelp av en 50:50 kombinasjon av 2% lidokain med 1:100000 adrenalin og 0,5% bupivakain, som injiseres i øvre lokk og langs snittet linjer for å minimere ubehag under inngrepet. (B) en Colorado microdissection nål brukes til å incise huden og overfladiske muskel lag langs pre-merket kirurgiske snitt nettsteder. Lett grep over såret påføres for å bidra til å skape disseksjon flyet. Den lille finne brannskader (pil) ble gjort med Colorado nålen på like langt punkter langs snittlinjen for å hjelpe optimalt justere vev under såret nedleggelse. (C) OSLG er eksponert etter vev overliggende de bakre incisure har blitt mobilisert (pil). Kapselen av kjertelen har blitt radert. OSLG kan bli prolapsed ved å påføre press på kloden for å lette fjerningen. (D) tang brukes til å engasjere OSLG og forsiktig fjerne den fra sin dypere posisjon i bane gjennom bakre incisure. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 6: fjerning av palpebral overlegen lacrimal kjertel (PSLG) og excretory duct. (A) etter eversion av øvre øyelokk, er den oppsvulmede delen av PSLG engasjert med tang og dissekert av Tarsus ved hjelp av saks. Traction påføres PSLG med tang er avgjørende for å opprettholde det kirurgiske planet. (B) DISSEKSJON av PSLG og de viktigste lacrimal duct er gjennomført superiorly mot orbital rim ved hjelp av skarpe disseksjon og kontinuerlig trekkraft på kjertel og duct vev for å opprettholde riktig kirurgisk plan. Disseksjon skal fortsette til det punktet der OSLG ble fjernet. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 7: fjerning av ilg. (A) huden og overfladisk muskel er radert til fascial flyet overliggende zygomatic benet eller overfladisk del av masseter muskelen er nådd. Leder av ILG vanligvis er klart tydelig som en liten bule ligger under den fremre limbus. (B) den fiber KAPSEL av ilg er radert med saks utsette ilg. Når kapselen er radert, kan de dypere delene av kjertelen enkelt fjernes. (C) den mest eksterne delen av ilg hodet som ligger på zygomatic benet har vært eksponert og reflektert anteriort viser underliggende zygomatic bein. (D) snitt av orbital septum langs dårligere rim eksponerer HALEN av ilg. (E) en gren av den eksterne halspulsåren strømmer HALEN på ilg (pil). (F) utseende etter lukking av hud snitt etter fullstendig dacryoadenectomy. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 8: Rose Bengal farging av hornhinnen overflaten. Eksternt bilde som viser fremtredende flekker, mest kjent på nese kvadrant. Alle øyne gjennomgår komplett dacryoadenectomy utviklet lignende endringer som var tydelig av 1 uke etter operasjonen og opprettholdt i minst 6 uker. Av notatet, lys refleks fra ringen blitsen viser forvrengning fra en tørr øye overflate demonstrere hvordan tørre øyne kan negativt påvirke synet. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Dacryoadenectomy | ||
| gjennomsnittlig ± SEM; n = 16 øyne | ||
| Opprinnelig plan | Uke 2 | |
| Rive break-up tid, s | 60,0 ± 0,0 | 4,5 ± 1,2 |
| p < 0,0001 | ||
| Rive OSMOLARITETSSYSTEM, mOsm | 291,2 ± 3,7 | 315,3 ± 5,5 |
| p = 0,001 | ||
| Schirmer rive test, mm | 18,3 ± 1,3 | 10,5 ± 1,6 |
| p = 0,0006 | ||
| Rose Bengal, modifisert NEI-poengsum | 0,0 ± 0,0 | 4,28 ± 0,6 |
| p < 0,0001 | ||
| Operert vs. Baseline: Dacryoadenectomy: TBUT, p < 0,0001; tåre OSMOLARITETSSYSTEM, p < 0,001; Schirmer tåre test, p < 0,0006); og Rose Bengal. | ||
Tabell 1: parametere for tørre øyne på postoperativ uke 2.
Discussion
DED er klassifisert i to store grupper basert på effekten på tåre film stabilitet: vandig mangelfull (redusert produksjon av den vandige komponenten av tårefilmen; ~ 20% av DED) og fordamping (økt fordampning av tårefilmen; ~ 50% av DED). Ca 30% av DED pasienter viser bevis for begge (blandet DED). Betennelse er kjernen mekanisme av Ded som dens varierte årsaker sammenfaller13,14. Vår metode modeller vandig-mangelfull DED.
Som tidligere nevnt, viktige første skritt i å reprodusere vår metode er en styrking av de fine punktene i anatomi av orbital lacrimal kjertler (LGs) av kaninen og unngå forvirring ved varierte og noen ganger motstridende anatomiske terminologi. Den anatomiske Atlas av Popesko et al.11 er svært grundig. For dem færre behagelig med det anatomi av kaninen, Disseksjon av obduksjon prøver skaffer lett fortrolighet med disse strukturer og hjelpemidler deres inngrep flytting inne leverprøver.
Kritisk råd om dyr bolig og acclimation har blitt gitt i vår ledsager publikasjon12. Den samme artikkelen presenterer også nyttige kommentarer for assaying parametrene av DED brukes i begge metoder.
I motsetning til den forrige metoden12, krever dette en høyere grad av kirurgisk dyktighet på grunn av omfanget og mer invasiv karakter av teknikkene som trengs for å fjerne LGs. Den største risikoen i disse reseksjoner er katastrofale blødninger forårsaket av skader store fartøy som er i umiddelbar nærhet til LGs som grener av hals puls arterien. Dette unngås ved tilstrekkelig visualisere hver LG og marginene innenfor operasjonsfeltet. Til slutt, overivrig fjerning av nictitating membranen kan føre til prolaps av Harderian kjertel, som kan forstyrre tåre film vurdering.
Forsiktighet bør utvises for å minimere mengden av konjunktival avbrudd med fjerning av PSLG, en roman aspekt av vår metode som forbedrer reproduserbarhet og forbedrer alvorlighetsgraden av DED. Det er overraskende enkelt å etablere disseksjon flyet og bære den tilbake til overlegen orbital Ridge så lenge trekkraft påføres vevet. Det er betryggende å kunne se de cauterization merkene fra avkorting av OSLG; de bekrefte fullstendig fjerning av de viktigste excretory duct av kjertel.
Fjerning av ILG i sin helhet presenterer utfordringer også. Isolere hodet av kjertel først, da dette er den enkleste delen å visualisere. Hele hodet av kjertel vevet skiller lett fra omkringliggende vev; imidlertid må noen forsiktighet brukes for å hindre skade på den store venøs sinus, som ligger midtre til leder av ILG. Halen av ILG kan deretter følges tilbake som den passerer under zygomatic bein. Flertallet av halen er lett å isolere. Imidlertid kan det mest bakre aspektet av halen være mer utfordrende på grunn av variabel anatomi og nærheten til en mellomstor gren av hals puls. Forsiktig disseksjon bør tillate alle marginer i ILG å bli sett klart, tilrettelegge dens fullstendig fjerning. Etterforsker bør være forberedt på å bære disseksjon mer superiorly i tilfeller der halen av kjertel endene under lateral canthus, som forklart i den tidligere diskusjonen av anatomi av lacrimal kjertler. Av notatet, har forfatterne aldri vært i stand til å identifisere noen del av OSLG når dissekere den ILG gjennom en krumlinjet innsnitt langs timelige og underlegne kloden. Selv om dette kan være teknisk mulig, den kirurgiske tilnærmingen bærer for høy risiko for alvorlige blødninger. Nærmer OSLG gjennom bakre incisure beviser langt tryggere.
Den excretory duct av ILG kan sees gjennomtrengende gjennom mindreverdig fascial flyet som den passerer inn i nedre konjunktival fornix. Noen ganger, små lobules av kjertel-vises vev blir sett her også, og kan bli forsiktig fjernet.
Det er en meget hjelpsom å vedlikeholde bestillingen av LG reseksjon idet forevist her over. Hvis ILG fjernes først, blir isolasjonen av OSLG teknisk langt vanskeligere. Hovedårsaken er at, etter fjerning av ILG, den OSLG kan ikke være lett prolapsed og dermed identifisert.
En betydelig fordel med vår modell er at det kan være "modulære". Med andre ord, graden av DED indusert av dacryoadenectomy kan kalibreres for å tjene eksperimentelle behov. For eksempel reseksjon av alle LGs ville føre til maksimal DED, men reseksjon av bare SLG ville føre til at mildeste form av DED og reseksjon av bare ILG ville generere sykdom av middels alvorlighetsgrad.
Vår tilnærming, som viser den distinkte patofysiologiske tilfelle av redusert tåreproduksjon gir ekstra fordeler sammenlignet med allerede rapporterte metoder. Kort sagt, ingen annen kirurgisk modell eliminert rive produksjonen av alle orbital LGs5,6,7,15,16; inkludert parasympatiske Denervation av LGs17, og farmakologiske undertrykkelse av tåreproduksjon18,19, med de to sistnevnte har sine off-målet effekter som betydelig confounders. Endelig, denne modellen minimerer de viktigste etterforsker-avhengige bias, nemlig ufullstendig reseksjon av LGs, siden kirurgisk teknikk gir sin komplette visualisering; Dette er hjulpet av det faktum at ingen hemostase, annet enn cauterization, er nødvendig.
Etterforsker bør være bevisste på at fullstendig reseksjon av alle orbital LGs ikke genererer fullstendig fravær av tårer, og, for eksempel, Schirmer ' s tåre testverdier nærmer seg null bør ikke forventes. Dette skyldes det faktum at det alltid er andre kilder til tårevæske som tilbehøret LGs av Wolfring og Krause og plasma lekkasje fra konjunktival fartøy20,21,22. Fra et eksperimentelt synspunkt bør dette betraktes som en positiv del av metoden ettersom den opprettholder øyeoverflaten. komplett xerophthalmia ville helt ødelegge hornhinnen benektende nytten av modellen. I tillegg, i sin nåværende utførelse, tilbyr denne modellen en utmerket mulighet til å studere slike kompenserende mekanismer og væske transport på tvers av disse mindre avdelinger.
Avslutningsvis presenteres her er detaljene i en roman og allsidig metode for å indusere vandig-mangelfull DED som gir seg til studiet av tåre fysiologi, patogenesen av DED og studiet av terapeutiske agenter som utvikles for denne indikasjonen.
Disclosures
Forfatterne erklærer ingen konkurrerende interesser unntatt BR som har en egenkapital posisjon i medicon Pharmaceuticals, Inc. og APIer terapi, LLC; og LH, en ansatt i medicon Pharmaceuticals, Inc. med en egenkapital posisjon i APIer legemiddel selskap, LLC.
Acknowledgments
Vi erkjenner den økonomiske støtten fra en målrettet forskningsmuligheter stipend fra Stony Brook University School of Medicine og et forskningsstipend fra medicon Pharmaceuticals, Inc., Setauket, NY. Vi takker Michele McTernan for redaksjonell støtte.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| acepromazine, Aceproinj | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NDC11695-0079-8 | 0.1ml/kg subcutaneously injection for rabbit sedation |
| anesthesia vaporizer | VetEquip, Pleasanton, CA | Item # 911103 | Protocol 4.8 |
| animal restraining bag | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | Jorvet J0170 | Use appropriately sized bag. |
| bupivacaine, 0.5% | Hospira Inc, Lake Forest IL | NDC: 0409-1162-02 | Mixed 50:50 with 2% lidocaine with 1:100,000 epinephrine for infiltration of incision sites, protocol 5.1 |
| buprenorphine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | 0.01 mg/kg, for postprocedural care, 6.1.4 | |
| cautery unit, high-temperature, battery-powered | Medline Industries Inc, Northfield, IL | REF ESCT001 | Keep on hand in case of bleeding, protocol 2.7 |
| clipper, Wahl Mini Arco | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | No. 022573 | Cordless shears for fur removal, protocol 4.2 |
| Colorado needle | Stryker Craniomaxillofacial, Kalamazoo, MI | N103A | Use with electrosurgical unit to make incisions, protocol 5.1 & 5.3 |
| electrosurgical unit with monopolar cautery plate | Valleylab, Boulder, CO | Force FXc | Use with electrosurgical unit to make incisions, protocol 5.1 & 5.3 |
| fluorescein, Ak-Fluor 10% | AKRON, Lake Forest, IL | NDC17478-253 | Dilute to 0.2% with PBS to measure TBUT, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| foceps, curved dressing | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | Storz E1406 | delicate serrated dressing forceps |
| forceps, 0.3 | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | ET6319 | For removal of nictating membrane, protocol 2.5 |
| forceps, Bishop Harmon | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | E1500-C | Use toothed forceps for dacryoadenectomy, protocol 5.1 & 5.2 |
| hair remover lotion, Nair | Widely available | Softening Baby oil | Dipilitory cream for sensitive skin, protocol 4.2 |
| isoflurane | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | 29405 | Possible alternative sedation, protocol 4.7 |
| IV catheter, Terumo Surflo ETFE 24-gauge | Terumo, Tokyo, Japan; available from Fisher Sci., VWR, McKesson, etc. | SR-OX2419CA | 25-gauge for smaller rabbits; protocol 4.6 |
| ketamine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NDC 11695-0701-1; NADA 200-055 | 15 mg/kg, protocol 4.7 |
| ketoprofen | Hospira, Inc., Lake Forest, IL | 3 mg/kg, for postprocedural care, 6.1.4 | |
| laryngeal mask airway | Docsinnovent Ltd, London, UK | Vgel R3 | Protocol 4.8 |
| lid speculum, wire | Bausch and Lomb (Storz), Bridgewater, NJ | Barraquer SUH01 | For removal of nictating membrane, protocol 2.4 |
| lidocaine 2% with epinephrine 1:100,000; 50:50 mixture | Hospira Inc, Lake Forest IL | NDC 0409-3182-02 | Pre-treat before removal of nictating membranes, protocol 2.4 |
| lidocaine, preservative-free | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | L5647 | 1% in PBS for anesthesia agent, for application to eye, protocol 2.4 |
| micropipette | Eppendorf | Research Plus 100 uL | For application of preservative-free lidocaine to eye, protocol 2.4 |
| micropipette tips | World Wide Medical Products | 41071052 | For application of preservative-free lidocaine to eye, protocol 2.4 |
| monitoring device, multi-parameter | SurgiVet, Waukesha, WI | V9201 | For monitoring of vitals, protocol 4.9 |
| needle, 26-gauge | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 305115 | For injection of lidocaine/epinephrine, protocol 2.3 & 2.5 |
| needle, 30-gauge | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 305106 | For infiltration of incision sites; syringe and needle size are not critical, protocol 5.1 |
| osmolarity tips | TearLab Corp., San Diego, CA | #100003 REV R | Measure tear osmolarity measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| osmometer, TearLab | TearLab Corp., San Diego, CA | Model#200000W REV A | Measure tear osmolarity, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| povidone-iodine solution | Medline Industries Inc, Northfield, IL | PVP Prep Solution, NDC: 53329-939-04, REF MDS 093944 | To maintain sterile field, protocol 4.11 |
| rabbit, New Zealand White | Charles River Labs, Waltham, MA (NZW) | 2-3 kg | Research animals |
| Rose bengal stain | Amcon Laboratories Inc., St. Louis, MO | NDC51801-004-40 | 1% in PBS, for staining the ocular surface, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| saline, normal | B. Braun Medical, Irvine, CA | REF R5200-01 | For postprocedural care, protocol 6.1.3 |
| Schirmer Tear Test strips | Eaglevision, Katena products. Denville, NJ | AX13613 | Measure tear production, measurement of dry eye parameters, protocol 3.1 |
| scissors, Vannas | McKesson Medical-Surgical, San Francisco, CA | Miltex 2-130 | Capsulotomy scissors for dacryoadenectomy, protocol 5.1 & 5.2 |
| scissors, Westcott tenotomy | McKesson Medical-Surgical, San Francisco, CA | Miltex 18-1480 | For removal of nictating membrane, protocol 2.7 |
| sedation gas mask | DRE Veterinary, Louisville, KY | #1381 | Possible alternative sedation, protocol 4.7 |
| surgical marking pen | Medical Action Industries, Arden, ND | REF 115 | Protocol 4.2 |
| sutures, 5-0 Mersilene | Ethicon US, LLC | Ethylene terephthalate sutures, used for deep connective tissue closure, protocol 5.3.11 | |
| sutures, Vicryl 6-0 | Ethicon US, LLC | Polyglactin 910 sutures, used for superficial muscle and skin closure, protocol 5.3.11 | |
| syringe, 1 cc | BD, Franklin Lakes, NJ | ref 309659 | For injection of lidocaine/epinephrine, protocol 2.3 & 2.5 |
| syringe, 5 cc | BD, Franklin Lakes, NJ | REF 309603 | For infiltration of incision sites; syringe and needle size are not critical, protocol 5.1 |
| tissue forceps, 0.8mm Graefe | Roboz Surgical Store, Gaithersburg, MD | RS-5150 | Curved Weck forceps |
| topical antibiotic ointment (neomycin, polymyxin, bacitracin, and hydrocortisone) | Bausch and Lomb, Tampa, FL | NDC 24208-785-55 | Applied after removal of nictating membrane, protocol 2.8, and for postprocedural care, protocol 6.1.2 |
| ultrasound gel | Parker Laboratories, Inc., Fairfield, NJ | Aquasonic 100 | To ensure electrical contact with monopolar cautery plate, protocol 4.5 |
| xylazine | Henry Schein Animal Health, Dublin, OH | NADA: 139-236 | 1 mg/kg, protocol 4.7 |
References
- Gillan, W. D. H. Tear biochemistry: A review. South African Optometrist. 69 (2), 100-106 (2010).
- Conrady, C. D., Joos, Z. P., Patel, B. C. Review: The Lacrimal Gland and Its Role in Dry Eye. Journal of Ophthalmology. 2016, 7542929 (2016).
- Schechter, J. E., Warren, D. W., Mircheff, A. K. A lacrimal gland is a lacrimal gland, but rodents' and rabbits' are not human. Ocular Surface. 8 (3), 111-134 (2010).
- Shinomiya, K., Ueta, M., Kinoshita, S. A new dry eye mouse model produced by exorbital and intraorbital lacrimal gland excision. Scientific Reports. 8 (1), 1483 (2018).
- Bhattacharya, D., et al. Tear Production After Bilateral Main Lacrimal Gland Resection in Rabbits. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 56 (13), 7774-7783 (2015).
- Chen, Z. Y., Liang, Q. F., Yu, G. Y. Establishment of a rabbit model for keratoconjunctivitis sicca. Cornea. 30 (9), 1024-1029 (2011).
- Li, N., et al. Establishment of the mild, moderate and severe dry eye models using three methods in rabbits. BioMed Central Ophthalmology. 13, 50 (2013).
- Honkanen, R., et al. A New Rabbit Model of Chronic Dry Eye Disease Induced by Complete Surgical Dacryoadenectomy. Current Eye Research. , 1-10 (2019).
- Nisha, S., Deepak, K. An Insight Into Ophthalmic Drug Delivery System. International Journal of Pharmaceutical Studies and Research. 3 (2), 9-13 (2012).
- Davis, F. A. The Anatomy and Histology of the Eye and Orbit of the Rabbit. Transactions of the American Ophthalmological Society. 27, (1929).
- Popesko, P., Rajitova, V., Horak, J. Rabbit - Guinea Pig. A Colour Atlas of the Anatomy of Small Laboratory Animals. 1, Saunders. Philadelphia, PA. (1992).
- Honkanen, R. A., Huang, L., Rigas, B. A rabbit model of aqueous-deficient dry eye disease induced by concanavalin A injection into the lacrimal glands: Application to drug efficacy studies. Journal of Visualized Experiments. , e59631 (2019).
- Wei, Y., Asbell, P. A. The core mechanism of dry eye disease is inflammation. Eye & Contact Lens. 40 (4), 248-256 (2014).
- Pflugfelder, S. C., de Paiva, C. S. The Pathophysiology of Dry Eye Disease: What We Know and Future Directions for Research. Ophthalmology. 124 (11S), S4-S13 (2017).
- Gilbard, J. P., Rossi, S. R., Gray, K. L. A new rabbit model for keratoconjunctivitis sicca. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 28 (2), 225-228 (1987).
- Odaka, A., et al. Efficacy of retinol palmitate eye drops for dry eye in rabbits with lacrimal gland resection. Clinical Ophthalmology. 6, 1585-1593 (2012).
- Toshida, H., Nguyen, D. H., Beuerman, R. W., Murakami, A. Evaluation of novel dry eye model: preganglionic parasympathetic denervation in rabbit. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 48 (10), 4468-4475 (2007).
- Burgalassi, S., Panichi, L., Chetoni, P., Saettone, M. F., Boldrini, E. Development of a simple dry eye model in the albino rabbit and evaluation of some tear substitutes. Ophthalmic Research. 31 (3), 229-235 (1999).
- Xiong, C., et al. A rabbit dry eye model induced by topical medication of a preservative benzalkonium chloride. Investigative Ophthalmology and Visual Science. 49 (5), 1850-1856 (2008).
- Shiue, M. H., et al. Pharmacological modulation of fluid secretion in the pigmented rabbit conjunctiva. Life Science. 66 (7), 105 (2000).
- Li, Y., et al. Rabbit conjunctival epithelium transports fluid, and P2Y2(2) receptor agonists stimulate Cl(-) and fluid secretion. American Journal of Physiology: Cell Physiology. 281 (2), C595-C602 (2001).
- Dartt, D. A. Regulation of mucin and fluid secretion by conjunctival epithelial cells. Progress in Retinal and Eye Research. 21 (6), 555-576 (2002).
