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Biology

무혈 식단으로 무혈 모기를 후두

doi: 10.3791/60144 Published: January 31, 2020

Summary

무혈 인공 식단을 배합하여 아노헬레스 모기를 포로로 먹이는 프로토콜이 제시됩니다. 이 규정식은 척추동물 혈액에 유사한 성과가 있고 난족증과 계란 성숙을 시작하고 실행 가능한 성인 자손을 일으킵니다.

Abstract

말라리아 연구는 포로에 있는 모기(Anopheles 종)를 위한 대규모 사육 그리고 생산 조건을 요구합니다. 모기의 지속 가능하고 신뢰할 수있는 생산은 현재 신선한 척추 동물 혈액의 공급에 의해 억제된다. 혈액에 대한 대안은 혈액 공급 곤충에 의해 전달되는 말라리아 및 기타 벡터 매개 질병에 대한 효율적인 제어 전략을 촉진하는 데 필요합니다. 이 점을 염두에 두고 인공 액체 식단은 신선한 척추 동물 혈액의 대체품으로 공식화되었습니다. 본 명세서에서 우리는 혈액과 유사한 수유율을 제공하고 신선한 척추동물 혈액 식사의 생리적 효과를 모방하는 무혈액 인공 액체 식단을 보고합니다. 규정식은 Anopheles 모기의 난소 그리고 계란 성숙을 유도하고 또한 기능성 성인의 좋은 애벌레 생존 그리고 발달을 일으킵니다. 무혈 액체 식단은 포로생활에서 지속 가능한 모기 사육을 향한 중요한 진전이며 모기 식민지의 유지 보수 비용을 줄이고 신선한 척추 동물 혈액의 필요성을 제거할 것입니다.

Introduction

벡터 매개 질병은 전 세계적으로 수백만 명의 인간에게 영향을 미치고 매년 수백만 명의 사망을 초래합니다. 그(것)들은 감염된 호스트에게서 혈액을 먹을 때 취득한 질병 생성 미생물 (원생 동물, 바이러스)에 감염된 곤충에 의해 전달됩니다. 이어서, 감염된 벡터는 다음 혈액 식사 동안 새로운 숙주에게 병원체를 전달할 것이다. 말라리아는 Anopheles 모기의 몇몇 다른 종에 의해 전달되고 세계 인구의 40%에 영향을 미치는 치명적인 벡터 품어진질병입니다 1. 말라리아 protist 기생충은 400,000의 죽음 이상 에 책임 있고, 그 중 대부분은 5 세 이하 아이들입니다 (세계 보건 기구). 암컷 아노필레스 모기는 척추동물 혈액을 먹을 때 인간과 다른 동물 사이에 플라스모듐 속의 말라리아 기생충을 전달하며, 계란 생산 및 발달에 필요한단계2.

말라리아 및 기타 신흥 치명적인 모기 벡터 매개 질병의 박멸을위한 현재의 전략은 곤충에서 사육 된 많은 모기의 야생으로 방출을 포함하는 혁신적인 모기 제어 전략3,4,5의개발에 의존합니다. 그러나, 중요한 제한 요인은 효과적인 모기 사육 및 사육을 위한 신선한 혈액의 공급에 의존합니다. 척추 동물 혈액의 가변 구성은 모기 불임과 자손 적당에 부정적인 영향을 미칠 수 있으며 포로 사육 식민지의 신뢰성과 지속 가능성을 제한 할 수 있습니다. 모기 방출 및 통제 프로그램은 대규모 모기 생산 시스템과 대량의 척추 동물 혈액의 정기적 인 공급을 필요로한다. 이것은 모기 생산에 대한 주요 장애물이며 살아있는 동물의 사용과 관련된 일련의 윤리적 문제와 관련 까다로운 안전 규정으로 인한 물류 제한문제를 제기합니다. 이것은 모기 식민지의 유지 보수 및 보안의 비용을 높게 만들고 말라리아의 위협이 훨씬 더 큰 저소득 국가에서 특히 현재 모기 사육 관행의 지속 가능성에 도전합니다.

최근 연구는 척추동물 혈액식사를 모방하는 혈액대체제의 개발에 초점을 맞추고 있으나, 지금까지는6, 7,8,9에한정된 성공만이뤄지고있다. 성공적인 인공 식단은 (1) 전체 여성 모기 engorgement을 자극할 필요가 있고, (2) 트리거 vitellogenin 생산, (3) 실행 가능한 계란의 큰 배치를 생산하고, (4) 히스 자손10을생성한다. 또한, 인공 식단은 표준 구성을 가지고 있으므로 연구 및 제어 목적으로 모기의 생산을 위해 더 신뢰할 수 있습니다. 성공적인 무혈 식단은 Aedes 모기 (곤잘레스와 한센11에의해 검토됨)를 위해 개발되었지만 Anopheles spp. 기존 인공 식단에는 파고 자극제 (예 : ATP10),계란 성숙을위한 단백질 공급원6,12,탄수화물이 에너지의 원천으로, 아미노산 (aa)은 13 가지 의 원천이며, 아미노산 (aa)은13 가지 의 주요 생산 인자입니다. 인공 혈액 무료 다이어트 또한 콜레스테롤을 제공 해야15,계란 생산을 향상 시키는. 여기에서 우리는 여성 Anopheles 모기를 위한 인공 적인 무혈 식단을 설명하고 고품질 척추동물 혈액 식사에 일관되고 동등한 성과를 가지고 있다는 것을 보여줍니다.

Protocol

마우스는 IHMT 동물 집에서 수득하였다. 동물 실험은 포르투갈 법과 실험실 동물의 사용에 대한 지침에 따라 엄격하게 수행되었다. 디레카오-제랄 드 베테리나리아, 미니스테리오 다 아그리큘라 두 데센볼비멘토 농촌 e 다스 페스카스, 포르투갈은 모든 연구 프로토콜을 승인했다 (ID 승인: 023351 및 023355).

참고: 모든 수유 검사를 ~26°C에서 수행합니다.

1. 모기

  1. 26 °C에서 Anopheles coluzzii (전 Anopheles 감비아 M 형태) Yaoundé 균주 모기를 유지, 75% 습도 12 h:12 h빛에서: 어두운 주기. 결합을 보장하기 위해 표준 곤충 조건을 사용하여 모기를 집.
  2. 작은 물 용기에 모기 새끼를 수집합니다. 어른 모기가 나타나고 짝짓기를 할 수 있도록 모기 장 안에 용기를 놓습니다. 10% 포도당 공급 용액을 제공합니다. 출현 3 일 후 흡입구를 사용하여 재고 케이지에서 필요한 수의 모기를 수집합니다.
  3. 수유 시험 하루 전에 10 % 포도당 공급 용액을 제거하십시오.
    참고: 실험 기간 내내 3일된 모기를 사용하였다.

2. 모기 먹이주기

  1. 인공 액체 다이어트의 준비
    1. 층류 캐비닛에서 멸균 조건하에서 인공 액체 식단을 준비하십시오. 초기 액체 식단(i-liq_diet에 다음을 첨가하여 풍부한 액상 식단(r-liq_diet)을 준비한다. 덜베코의 수정된 독수리 배지 [L-글루타민을 가진 높은 포도당], 표 1참조: 0.55 g/L ATP, 1 g/L 콜레스테롤, 그리고 200 g/L 소 혈 청 알부민 (BSA). 모든 재료를 철저히 혼합하고 0.45 μm 마이크로 필터를 사용하여 여과하십시오.
      참고 : 다이어트를 저장하지 마십시오; 그들은 저장 될 때 품질을 잃게로 각 실험에 대한 재고 솔루션에서 갓 다이어트를 준비합니다. 식단의 구성 요소는 표 1에기재되어 있습니다.
  2. 마우스 혈액 수집
    1. 6-8주된 CD1 암컷마우스(근육근육)를케타민(120 mg/kg)과 자일라진(16 mg/kg)으로 자궁내 경로를 사용하여 마취시다.
    2. 마우스가 상이한 물리적 자극(예를 들어, 발가락 및 꼬리 핀치)에 반응하여 근육 반응을 보이지 않는 경우 심장펑크(그림 1)를수행한다.
    3. 혈전 형성을 방지하기 위해 1mg/mL 헤파린(나트륨 염)의 100 μL을 함유한 27G x 1/2°C(0.4 x 12 mm2)바늘로 멸균 된 1 mL 주사기를 사용하여 혈액을 수집하십시오. 수조를 사용하여 37 °C에서 혈액을 유지하십시오.
  3. 인공 수유
    1. 흡입기를 사용하여 스톡 케이지에서 약 30마리의 암컷 모기를 수집합니다.
    2. 암컷 모기를 500 mL 종이 컵에 옮기고 탈출할 수 없도록 미세한 모기장 그물망으로 덮습니다. 플라스틱 튜브에 연결된 유리 피더를 적용하여 각 컵의 상단으로 일정한 물 흐름을 유지합니다(그림2). 원통형 튜브 및 피더에 일정한 물 흐름을 제공하여 내부 온도가 약 37.5 °C로 유지되도록 합니다.
      참고: 표준 유리벨 인공 수유장치(16)를 사용하여 여성 모기에 제형식이 공급되었다.
    3. 파라핀 막막을 유리 피더의 입에 걸쳐 스트레칭하여 식사를 포함시킵니다.
    4. 수조를 사용하여 37°C에서 i-liq_diet r-liq_diet 미리 데운다. 유리 공급에 1 mL를 바하십시오. i-liq_diet, r-liq_diet 또는 신선한 마우스 혈액으로 어둠 속에서 모기를 60 분 동안 먹이세요. 26 °C에서 검사를 수행합니다.
  4. 공급 속도의 평가.
    1. 인공 수유 후, 30 초에 -20 °C에서 모기를 마취.
    2. 완전히 격분한 암컷 모기의 수를 기록한다(그림3)
      참고 : 먹이 모기의 비율은 먹이 성공을위한 프록시로 사용됩니다.

3. 삶의 역사 특성

  1. 계란 생산 및 불 임
    1. 브러시를 사용하여 완전히 응축된 암컷을 개별 케이지(20cm x 20cm x 20cm)로 옮김을 옮니다.
    2. 모기를 26 ± 1 °C, 75 % 습도 및 12 h : 12 h : 12 h 의 빛 : 10 % 포도당 광고 리비텀이있는 어두운 주기로 유지하십시오.
    3. 수유 후 48시간, 가습 된 여과지를 달걀 누워서 바닥에 추가합니다(그림 4). 핸드헬드 돋보기를 사용하여 계란 누워 종이를 추가 한 후 48 시간 및 72 시간에서 계란을 계산합니다. 계란을 수집하기 위해 증류수로 필터 종이를 홍수.
  2. 유충 사망률
    1. 계란을 증류수로 채워진 쟁반(23cm x 15cm x 6cm)에 넣습니다(그림5). 실험 중에 트레이의 수위를 일정하게 유지합니다.
    2. 트레이 당 약 13 mg의 생선 사료로 매일 애벌레에게 먹이주세요. 모든 복제 트레이에 유사한 공급 체제를 적용합니다.
    3. 죽은 번데기와 애벌레를 매일 제거하십시오. 모든 번데어가 성인으로 발전했을 때 실험을 마무리하고 성인 남성과 여성의 수를 계산합니다.
    4. 해칭 및 사망 날짜를 등록하고 사망률을 계산합니다.
  3. 근속 기간
    1. 각 다이어트 그룹의 F1 세대에서 성인 남성 15명과 성인 여성 15명 수컷과 암컷을 같은 케이지에 보관하십시오.
    2. 성인에게 10% 포도당 용액 광고 리비텀을 먹이게 하십시오. 죽은 성인을 매일 제거하십시오.
    3. 위에서 설명한 것과 동일한 온도, 습도, 광순환 조건 및 설탕 공급 체제에서 모기를 유지합니다.
    4. 사망 날짜를 등록하고 수명을 계산합니다.
  4. 날개 길이 측정
    1. 감기-마취 5 일 된 F1 성인 모기 (남성과 여성) 각 다이어트 그룹에서 -20 °C에서 90 s.
    2. 스테레오스코프 아래에서, 집게로 각 모기의 흉부들을 부드럽게 잡고 복부 쪽을 위로 놓습니다.
    3. 메스를 사용하여 두 날개를 수집하고 장착 매체의 건조 한 방울을 포함하는 깨끗한 현미경 슬라이드에 배치합니다. 20G 바늘의 도움으로 커버 슬립의 테두리에 추가 장착 매체를 추가하고 천천히 날개에 커버 슬립을 낮춥습니다.
    4. 마이크로미터를 사용하여 스테레오스코프로 날개 길이를 측정합니다(그림6).

Representative Results

아래에 설명된 결과는 초기 액체 식단(i-liq_diet) 또는 신선한 혈액 식사에 공급된 풍부한 인공 식사(r-liq_diet)와 모기를 공급한 여성 Anopheles 모기의 성과를 비교합니다. 이 식단은 도 7에도시된 회로도 프로토콜에 따라 테스트되었습니다. 본 명세서에 기재된 r-liq_diet 특허의 일부입니다(PCT/IB2019/052967).

완전히 응고 된 여성의 비율

r-liq_diet 공급된 암컷 모기의 수(89%) 혈액에 공급 된 여성의 수보다 상당히 높았다 (56%) (그림8).

여성스러움과 다산

첫 번째 gonotrophic 주기에 대 한 여성 fecundity 및 불 임 i-liq_diet 및 r-liq_diet 영양 품질을 평가 하는 데 사용 되었다. 평균 24 ±11 계란신선한 척추 동물 혈액에 공급 하는 여성에 의해 마련 되었다, 반면 r-liq_diet 먹이 암컷 25 ± 5 계란의 평균 을 마련(표 2). i-liq_diet 먹이를 준 암컷은 알을 낳는 것이 관찰되지 않았다.

F1 사망률

F1 모기의 적합성은 척추동물 혈액에 공급된 식민지 사이 또는 r-liq_diet 평가되었습니다. 유충, 번데기 및 성인 사망률이 기록되었다. 가변성(평균 [SEM]의 표준 오차)는 r-liq_diet 공급한 모기에 비해 혈액공급모기(도 9표 2)에서더 높았다. 혈액 또는 r-liq_diet 먹이 모기의 F1 세대는 비교 사망률 및 생존율을 했다.

F1 기대 수명

그것은 야생 성인 여성 모기가 한 달까지 살고 있지만 아마 1-2 주 이상 생존하지 않고 수컷이 약 일주일 동안 살고 꿀과 다른 설탕 소스에 독점적으로 공급하는 질병 통제 및 예방 센터에 의해 추정된다. 부모 음식 섭취량의 차이는 모기자손17의생존에 영향을 미칠 수 있다는 점에 유의하십시오. 우리의 실험에서, 성인 여성과 혈액에서 남성 (여성 24.5 ± 6.8; 남성 18.5 ± 6.9) 및 r-liq_diet (여성: 22.5 ± 8.1; 남성: 11.9 ± 6.9) 그룹은 유사한 평균 평균 수명을 가지고 있었다(표 3)여성에 비해 수명 증가 기간을 보였다.

F1 본체 사이즈

날개 길이는 성인의 신체 사이즈의 지표로 사용되었습니다. 다른 종에 비해, Anopheles 성인은 2.8 에 4.4 mm 날개 길이18사이 날개 길이를 가진 중소형 모기입니다. R-liq_diet 공급한 F1 Anopheles 모기의 성인 체크기는 예상 범위 내에 있었고, 혈액을 공급하는 곤충 모기와 유사하였다(그림10).

통계 분석

제시된 데이터는 적어도 3개의 독립적인 실험의 평균을 나타낸다(달리 명시되지 않는 한). 오류 막대는 SEM을 나타냅니다. 데이터가 가우시안 분포를 따랐을 때, 독립 그룹은 학생의 t 시험을 사용하여 비교되었고, 그렇지 않으면 Mann-Whitney 시험이 적용되었다. 인공 식이 공급 그룹 간의 차이는 피셔의 정확한 시험을 사용하여 분석되었고 P ≤ 0.05에서 유의한 것으로 간주되었다.

Figure 1
그림 1: 심장 내 천자에 의한 CD1 마우스 혈액 수집. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 2
그림 2: 표준 인공 공급 장치. 유리 피더에는 여성 아노페레스 모기에게 공급되는 r-liq_diet 포함되어 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 3
그림 3: 인공 수유 후 모기를 아노헬레스. 왼쪽에서 오른쪽으로: r-liq_diet 제공 된 완전히 engorged 여성, r-liq_diet 제공 된 비-engorged 여성, 남성, 그리고 마우스 혈액을 제공 했다 완전히 engorged 여성. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 4
그림 4: Anopheles 계란 r-liq_diet 가진 암컷의 사후 공급 48 시간 낳은. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 5
그림 5: L2 유충 단계는 계란으로부터 개발되어 여과지에서 수집되고 증류수를 함유하는 트레이에 놓였다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 6
그림 6: Anopheles coluzzii 여성 모기의 F1 세대에서 오른쪽 날개. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 7
그림 7: 인공 식단 테스트의 회로도 프로토콜. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 8
그림 8: 암컷 모기의 먹이 비율은 인공 식이요법이나 혈액을 먹였다. 별표는 r-액체와 i-액체 규정식 및 혈액 공급통제단을 공급한 모기 사이 중요한 다름을 표시합니다. 양면 피셔의 정확한 검사: ****P ≤ 0.0001 (상대 위험: 0.4828, 95% 자신감 수준 [CL]: 0.3776 받는 번째 0.6194) r-액체 다이어트 대 혈액에 대 한, *P = 0.0335 (상대 위험: 1.379, 95% CL: 1.044 에 대 한 혈액. 파란색: fed; 빨간색: 먹이. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 9
그림 9: F1 Anopheles coluzzii 모기의 사망률 및 남성/여성 비율에 제형화된 무혈 식사의 효과. 3개의 독립적인 실험이 각각 규정식 당 30개의 모기를 사용하여 수행되었습니다. 짝을 이루지 않은 t-검정은 혈액공급군과 r-liq_diet공급군(P값은 0.5047에서 0.8491로 다양함) 사이에 유의한 차이를 보이지 않았다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

Figure 10
그림 10: 날개 길이. 변두리 세타를 제외한 R4+5 정맥까지의 축 절개로부터의 거리를 날개 길이를 결정하는데 사용되었다. 크기는 각 식이 그룹(평균 ± SEM)에서 5명의 암컷 및 5명의 남성에 대해 평가되었다. 값은 평균 ± SEM. 연어: r-liq_diet; 빨간색: 척추혈액. 페어링되지 않은 t-검정; 여성 왼쪽 날개: t = 1.300, df = 8, P = 0.2298; 남성 왼쪽 날개: t = 2.400, df = 8, P = 0.0432; 여성 오른쪽 날개: t = 1.300, df = 8, P = 0.2298; 남성 오른쪽 날개: t = 2.277, df = 7, P = 0.0569. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

구성 요소 g /L
*아데노신 트리포스페이트 0.55
*소 세럼 알부민 200
*콜레스테롤 1
무수 염화칼슘 0.2
콜린 염화물 0.004
D 칼슘 판토텐산 (비타민 B5) 0.004
D-포도당 무수 4.5
페릭 질산염 비나하이드레이트 0.0001
엽산 0.004
글리신 0.03
이이노시톨 0.007
L-아르기닌 모노하이드로클로라이드 0.084
L-시스틴 디하이드로클로라이드 0.063
L-글루타민 0.584
L-히스티딘 모노하이드로클로라이드 모노하이드레이트 0.042
L-이솔루신 0.105
L-류신 0.105
L-리신 모노하이드로클로라이드 0.146
L-메티오닌 0.03
L-페닐알라닌 0.066
L-세린 0.042
L-스레오닌 0.095
L-트립토판 0.016
L-티로신 디소듐 염 이수산염 0.104
L-발린 0.094
황산 마그네슘 무수 0.098
니아신아마이드 (니코틴아미드) 0.004
페놀 레드 0.015
염화칼륨 0.4
피리독신 모노하이드로클로라이드 0.004
피루브산 나트륨 염 0.011
리보플라빈 (비타민 B2) 0.0004
중탄산나트륨 3.7
염화나트륨 6.4
나트륨 인산나트륨 모노베이직 무수 0.109
티아민 아모노하이드로염화물 (비타민 B1) 0.004
*r-liq_diet

표 1: i-액체 식이및 r-액체 식이의 조성물.

총 계란 수 (± SEM) 계란/암 (± SEM)
혈액 733 ± 330 24 ± 11
r-liq_diet 763 ± 164 25 ± 5
아이 liq_diet 0 0

표 2: 아노필레스 콜루지 암컷이 생산한 달걀 배치. 각각 30마리의 암컷 모기를 사용하여 각 실험 식단에 대해 3개의 독립적인 실험을 수행하였다.

여성 (일 ± SEM) 남성 (일 ± SEM)
혈액 24.5 ± 6.8 18.5 ± 6.9
r-liq_diet 22.5 ± 8.1 11.9 ± 6.9

표 3: F1 아노헬레스 모기의 평균 수명. 인위적으로 공급된 F0에서 F1 모기의 장수는 동일한 식이 그룹 (15 명의 암컷과 15 명의 남성이 뒤따랐다)에서 오는 각 모기의 출생과 사망 날짜를 기록하여 평가되었다. 결과는 규정식 단 당 평균 모기 수명 으로 표현됩니다.

Discussion

우리의 제형무혈 식단의 성공은 i-liq_diet 첨가된 모든 성분(설탕, 아미노산, 비타민 및 미량 원소가 풍부함)의 상승작용적 생리적 효과의 결과일 가능성이 높습니다: BSA (단백질 공급원), ATP (식균제) 및 콜레스테롤(지질 공급원). 개별 성분을 단독으로 liq_diet 보충하는 것은 계란 생산을 자극하는 데 효과적이지 않았다 (데이터는 도시되지 않음). 프로토콜의 한 가지 단점은 콜레스테롤과 같은 일부 구성 요소의 비용일 수 있습니다. 그럼에도 불구하고 곤충이19를 합성 할 수 없기 때문에 이 분자는 절지동물20에서노른자 합성 및 계란 성숙을 조절하는 ecdysteroid 호르몬의 전구체입니다. 콜레스테롤의 낮은 금액은 비용을 절감 하 고 인공 다이어트의 혜택을 증가 의 목적으로 필요한 수량을 최적화 하기 위해 테스트 해야 합니다.

방법의 또 다른 제한은 인공 식단이 재고 용액에서 신선하게 준비되어야한다는 것입니다. 미래에 우리의 공식화 된 식단은 Aedes aegypti 모기(21)의인공 혈액 식사 대체물인 SkitoSnackt와 유사한 건조 된 힘으로 준비 될 수 있습니다.

필요한 영양소를 공급하는 것 외에도, 인공 식사는 척추 동물신선한 혈액을 먹을 때와 같은 방식으로 먹이를 여성 모기를 유치하고 자극해야합니다. 본 명세서에 기재된 인공 무혈 식단은 척추동물 혈액 공급 군에 비해 완전히 응고된 여성 모기의 20% 증가를 초래하였다. 인공 식단이 신선한 혈액보다 모기에 더 매력적이고 매력적임을 확인하기 위해 olfactometer를 사용하여 이 간접적인 매력 측정을 더 명확히 할 수 있습니다.

유충 사망률에 대한 식단의 가장 큰 영향은 혈액에 공급된 모기에서 파생된 애벌레에 대해 관찰되었으며, 이는 안정적인 구성의 인공 식단이 신선한 혈액에 비해 사망률을 감소시키고 모기 번식 성공을 개선하는 데 기여할 수 있음을 시사합니다. 혈액 식사의 덜 예측 가능한 결과는 조성물17의 숙주 변화와 모기생리학(22)을방해할 수 있는 분자의 혈액에서의 존재로부터 발생할 수 있다. 앞의 사실은 신선한 혈액이없는 식단의 고품질 모기 사육의 장점을 강조합니다.

전반적으로 우리의 연구에서 마련된 계란의 평균 수는 일부 곤충에서 보고된 계란에 비해 낮았지만, 평균 난자 수는 인간의 혈액에 공급된 A. 감비아 실험실 사육 균주(22.6±5.5 난자/암컷)와 비교하였다. 신선한 혈액이나 인공 식에 먹이는 실험그룹(표 2)에서는인공 멤브레인 공급 시스템을 공식화한 식단으로 구현하는 것만으로도 아노페레스 모기 식민지를 유지 및 전파하기에 충분하다는 통계적 차이가 관찰되지 않았습니다.

인공 혈액이 없는 식사는 Aedes 식민지22를유지할 수 있지만, 아노헬레스 모기에 적용하면 제한적이거나 성공하지 못했다11. 최근, Anopheles 모기에 대 한 플라즈마 기반 인공 식사 설명했다 24 하지만 먹이 속도 및 생식 잠재력낮은. 우리의 결과는 우리의 공식화 된 r-liq_diet 표준 척추 동물 혈액 식사보다 유사하거나 더 나은 성능을 가지고 있기 때문에 최첨단 (곤잘레스와 한센11에의해 검토)에서 상당한 발전을 나타냅니다. 스토리지 안정성과 비용에 대한 추가 개선은 응용 프로그램의 범위를 넓히어야 합니다.

Disclosures

저자는 공개 할 것이 없다.

Acknowledgments

우리는 아노라 로페스 (IHMT-NOVA 동물 시설) 기술 지원에 감사드립니다, 조아나 고메스와 아나 카타리나 알베스 (IHMT-NOVA 곤충 시설) 아노헬레스 모기 식민지를 유지. 빌과 멜린다 게이츠 재단 (OPP1138841), Fundação 파라 Ciência e Tecnologia (UID / 멀티 / 04413/201, UID / 멀티 / 04326 / 2013, SFRH / BPD / 89811/2012, CEECIND/2012).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Adenosine 5'-triphosphate (ATP) disodium salt hydrate Sigma Aldrich A2383
BSA-Bovine Serum Albumin Sigma Aldrich A790G
Cholesterol MP Biomedicals 199342
Dulbecco's modified Eagle's medium (high glucose with L-glutamine) Lonza Bioscience BE12-604F
Entellan mounting medium Merck 1079610100
Glassfeeder Local glazier by design
Heparin Sodium Salt Pan Reac AppliChem A3004,0001
Imalgène 1000 Merial, Portugal 01MER122
Needle 20 G x 1" 0.9 x 25 mm needle Terumo Europe NN-2025R
Parafilm Sigma Aldrich P6543-1EA
Rompun Bayer, Portugal 7427831
Sterilization Millex-HV 0,45 Millipore SLHVR25KS
Syringe, 1ml, 27 G x ½" 0.4 x 12 mm needle Terumo Europe BS-NIN2713
Teich Mix Astra Pond Astra 4030733100957
Tetra Goldfish Flakes Tetra 4004218742642

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무혈 식단으로 무혈 모기를 후두
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Marques, J., Cardoso, J. C. R., Félix, R. C., Power, D. M., Silveira, H. A Blood-Free Diet to Rear Anopheline Mosquitoes. J. Vis. Exp. (155), e60144, doi:10.3791/60144 (2020).More

Marques, J., Cardoso, J. C. R., Félix, R. C., Power, D. M., Silveira, H. A Blood-Free Diet to Rear Anopheline Mosquitoes. J. Vis. Exp. (155), e60144, doi:10.3791/60144 (2020).

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