Summary
वर्तमान लेख आइसोलोरिक 2:1 आंतरायिक उपवास के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करने की रक्षा और मोटापे और बिगड़ा ग्लूकोज चयापचय के खिलाफ जंगली प्रकार और ob/ob चूहों में इलाज ।
Abstract
आंतरायिक उपवास (आईएफ), आवधिक ऊर्जा प्रतिबंध से जुड़े एक आहार हस्तक्षेप, कई लाभ प्रदान करने और मेटाबोलिक असामान्यताओं का प्रतिकार करने के लिए माना गया है। अब तक, उपवास और भोजन अवधि की अलग-अलग अवधि के साथ विभिन्न प्रकार के यदि मॉडल ों का दस्तावेजीकरण किया गया है। हालांकि, परिणामों की व्याख्या चुनौतीपूर्ण है, क्योंकि इनमें से कई मॉडलों में समय और कैलोरी-प्रतिबंध रणनीतियों दोनों से बहुकारक योगदान शामिल हैं। उदाहरण के लिए, वैकल्पिक दिन उपवास मॉडल, जो अक्सर एक कृंतक यदि आहार के रूप में उपयोग किया जाता है, के परिणामस्वरूप अंडरफीडिंग हो सकता है, यह सुझाव देता है कि इस हस्तक्षेप से स्वास्थ्य लाभ की संभावना कैलोरी प्रतिबंध और उपवास-पुनर्भोजन चक्र दोनों के माध्यम से मध्यस्थता की जाती है। हाल ही में, यह सफलतापूर्वक प्रदर्शन किया गया है कि 2:1 IF, जिसमें 2 दिन का उपवास शामिल है, जिसके बाद 2 दिन का भोजन किया गया है, समग्र गरमी के सेवन में कमी के बिना आहार-प्रेरित मोटापा और मेटाबोलिक सुधारों के खिलाफ सुरक्षा प्रदान कर सकता है। यहां प्रस्तुत चूहों में हस्तक्षेप इस आइसोलोरिक 2:1 का एक प्रोटोकॉल है। इसके अलावा वर्णित एक जोड़ी खिला (पीएफ) प्रोटोकॉल ऐसे हाइपरफैगिया के रूप में बदल खाने व्यवहार के साथ एक माउस मॉडल की जांच करने के लिए आवश्यक है । 2:1 यदि आहार का उपयोग करना, यह प्रदर्शित किया जाता है कि आइसोलोरिक यदि शरीर के वजन को कम करता है, ग्लूकोज होमोस्टोसिस में सुधार होता है, और ऊर्जा व्यय को ऊंचा करता है। इस प्रकार, यह आहार विभिन्न रोग स्थितियों पर आईएफ के स्वास्थ्य प्रभावों की जांच करने के लिए उपयोगी हो सकता है।
Introduction
आधुनिक जीवन शैली लंबे समय तक दैनिक भोजन के सेवन के समय और कम उपवास अवधि1के साथ जुड़ा हुआ है । यह वर्तमान वैश्विक मोटापा महामारी के लिए योगदान देता है, मेटाबोलिक मनुष्यों में देखा नुकसान के साथ । पूरे मानव इतिहास में उपवास का अभ्यास किया गया है, और इसके विविध स्वास्थ्य लाभों में लंबे समय तक उम्र, ऑक्सीडेटिव क्षति को कम करना और अनुकूलित ऊर्जा होमोस्टोसिस2,3शामिल हैं। उपवास का अभ्यास करने के कई तरीकों में, आवधिक ऊर्जा अभाव, जिसे आंतरायिक उपवास (आईएफ) कहा जाता है, एक लोकप्रिय आहार विधि है जो अपने आसान और सरल आहार के कारण सामान्य आबादी द्वारा व्यापक रूप से अभ्यास की जाती है। प्रीक्लिनिकल और नैदानिक मॉडलों में हाल के अध्ययनों से पता चला है कि यदि लंबे समय तक उपवास और गरमी प्रतिबंध के बराबर स्वास्थ्य लाभ प्रदान कर सकते हैं, सुझाव है कि अगर मोटापा और चयापचय रोगोंकेलिए एक संभावित चिकित्सीय रणनीति हो सकती है2,3,4,5।
यदि उपवास अवधि और आवृत्ति के संदर्भ में रेजीडेंस भिन्न होते हैं। वैकल्पिक दिन उपवास (यानी, 1 दिन खिला/1 दिन उपवास; 1:1 IF) सबसे अधिक इस्तेमाल किया गया है अगर कृंतक में आहार मोटापा, हृदय रोगों, न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों, आदि पर अपने लाभकारी स्वास्थ्य प्रभावों का अध्ययन करने के लिए2,3। हालांकि, जैसा कि पिछले अध्ययनों में दिखाया गया है6,7,और आगे मशीनी हमारी ऊर्जा सेवन विश्लेषण8,1:1 यदि अंडरफीडिंग (~ 80%) ऊर्जा हानि की भरपाई के लिए पर्याप्त भोजन समय की कमी के कारण। यह स्पष्ट नहीं है कि 1:1 द्वारा प्रदत्त स्वास्थ्य लाभ कैलोरी प्रतिबंध या खाने के पैटर्न के संशोधन से मध्यस्थता कर रहे हैं । इसलिए, एक नया यदि आहार विकसित किया गया है और यहां दिखाया गया है, जिसमें 2 दिन का भोजन/1 दिन उपवास (2:1 IF) पैटर्न शामिल है, जो चूहों को भोजन के सेवन की भरपाई के लिए पर्याप्त समय प्रदान करता है (~ 99%) और शरीर का वजन। इसके बाद इन चूहों की तुलना विज्ञापन लिमिटम (अल) समूह से की जाती है । यह आहार जंगली प्रकार के चूहों में कैलोरी कमी के अभाव में आइसोक्लोरिक के प्रभावों की जांच में सक्षम बनाता है।
इसके विपरीत, एक माउस मॉडल में जो बदल खिला व्यवहार प्रदर्शित करता है, अल फीडिंग 2:1 आईएफ के प्रभावों की तुलना और जांच करने के लिए एक उचित नियंत्रण स्थिति नहीं हो सकती है। उदाहरण के लिए, के बाद से ob/ob चूहों (मोटापे के लिए एक आमतौर पर इस्तेमाल किया आनुवंशिक मॉडल) भूख और तृप्ति को विनियमित लेप्टिन की कमी के कारण हाइपरफैगिया प्रदर्शन, 2:1 अगर प्रदर्शन ~20% के साथ उन ओबी की तुलना में गरमी का सेवन कम/ इस प्रकार, ओबी/ओबी चूहों में यदि के प्रभावों की ठीक से जांच करने और तुलना करने के लिए, उपयुक्त नियंत्रण के रूप में एक जोड़ी-फीडिंग समूह को नियोजित करने की आवश्यकता है ।
कुल मिलाकर, एक जोड़ी-फीडिंग नियंत्रण का उपयोग सहित आइसोक्यूलोरिक 2:1 आईएफ करने के लिए एक व्यापक प्रोटोकॉल प्रदान किया जाता है। यह आगे प्रदर्शित किया जाता है कि आइसोलोरिक 2:1 यदि चूहों को उच्च वसा वाले आहार-प्रेरित मोटापा और/या दोनों जंगली प्रकार और ओबी/ओबी चूहों में मेटाबोलिक रोग से बचाता है । इस प्रोटोकॉल का उपयोग न्यूरोलॉजिकल विकारों, हृदय रोगों और कैंसर सहित विभिन्न रोग स्थितियों पर 2:1 आईएफ के लाभकारी स्वास्थ्य प्रभावों की जांच करने के लिए किया जा सकता है।
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Protocol
यहां सभी तरीकों और प्रोटोकॉल को ओटावा विश्वविद्यालय के एनिमल केयर एंड वेटनरी सर्विस (ACVS) और सेंटर फॉर फेनोजेनोमिक्स (टीसीपी) में एनिमल केयर कमेटियों द्वारा मंजूरी दी गई है और एनिमल केयर पर कनाडाई काउंसिल के मानकों के अनुरूप है । यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि यहां वर्णित सभी प्रक्रियाओं को संस्थागत और सरकारी अनुमोदन के साथ-साथ उन कर्मचारियों द्वारा किया जाना चाहिए जो तकनीकी रूप से कुशल हैं । सभी चूहों को तापमान में मानक निकाल पिंजरों में रखे गए थे-और आर्द्रता नियंत्रित कमरे 12 h/12 h प्रकाश/अंधेरे चक्र (21-22 डिग्री सेल्सियस, सामान्य आवास के लिए 30%-60% आर्द्रता) और पानी तक मुफ्त पहुंच के साथ । पुरुष C57BL/6J और ओबी/ओबी चूहों जैक्सन प्रयोगशाला से प्राप्त किए गए थे ।
1. 2:1 आइसोक्यूलोरिक अगर आहार
- दुबला और आहार प्रेरित मोटापा माउस मॉडल के लिए, या तो एक सामान्य आहार (17% वसा, एनडी) या उच्च वसा आहार (45% वसा, एचएफडी) तैयार करें।
नोट: 60% एचएफडी का उपयोग गंभीर आहार-प्रेरित मोटापे को प्रेरित करने के लिए किया जा सकता है; फिर भी, भोजन गोली की कोमलता के कारण, दैनिक भोजन के सेवन को सही ढंग से मापना अपेक्षाकृत मुश्किल है। एक स्वचालित निरंतर माप प्रणाली कई प्रकार के आहार के लिए बहुमुखी प्रतिभा में सुधार कर सकती है। - क्रमशः स्केल और इकोएमआरआई का उपयोग करके प्रत्येक माउस के 7 सप्ताह की उम्र में बेसलाइन शरीर के वजन और शरीर की संरचना को मापें।
नोट: शरीर संरचना माप के लिए धारा 3 को देखें। - शरीर के वजन और शरीर की संरचना के परिणामों के आधार पर, बेतरतीब ढंग से और समान रूप से 7 सप्ताह पुराने पुरुष C57BL/6J चूहों को दो समूहों में विभाजित करें: विज्ञापन लिमिटम (एएल) और आंतरायिक उपवास (आईएफ) समूह ।
- प्रति पिंजरे में दो से तीन चूहों रखें और पीने के पानी तक मुफ्त पहुंच सुनिश्चित करें।
नोट: पिंजरे प्रति चूहों की संख्या भोजन सेवन व्यवहार को प्रभावित कर सकती है। अध्ययन के दौरान सभी समूहों में प्रति पिंजरे चूहों की समान संख्या बनाए रखने की सिफारिश की जाती है। - यदि आहार शुरू करने से पहले नए पिंजरे के वातावरण और आहार के लिए अनुकूलन के 1 सप्ताह प्रदान करते हैं ।
- उपवास अवधि: 12:00 बजे ताजा बिस्तर के साथ चूहों को एक साफ पिंजरे में ले जाएं। अल समूह को भोजन की एक तौला राशि प्रदान करते समय, आईएफ समूह के लिए भोजन न जोड़ें।
नोट: प्रत्येक उपवास चक्र के लिए, यह सुनिश्चित करने के लिए कि दोनों समूहों को समय से निपटने के एक ही राशि के संपर्क में है दोनों अल और अगर समूहों के लिए पिंजरों को बदलने के लिए महत्वपूर्ण है । - 24 घंटे के बाद, दोनों समूहों में चूहों के वजन और अल पिंजरों में बचे हुए भोजन को मापें।
नोट: खाद्य हॉपर और पिंजरे के नीचे पर भोजन के टुकड़ों का वजन शामिल करना सुनिश्चित करें, खासकर एचएफडी का उपयोग करते समय, क्योंकि चूहे अक्सर हॉपर से छोटे छर्रों या भोजन के टुकड़ों को हटा देते हैं और उन्हें घोंसला साइटों के पास रखते हैं। प्रत्येक 2:1 चक्र (3 दिनों) के अंत में प्रति माउस औसत ऊर्जा का सेवन लगभग 35 किलो कैलोरी है, जो सामान्य आहार (3.3 किलोकैलोरी/ग्राम) के लिए ~ 10 ग्राम और एचएफडी (4.73 किलोकैलोरी/जी) के लिए ~ 7 ग्राम के बराबर है। - भोजन अवधि: अल और आईएफ समूहों दोनों के लिए 12:00 बजे भोजन की एक तौला राशि प्रदान करते हैं ।
- भोजन प्रदान करने के 48 घंटे के बाद, बचे हुए भोजन और चूहों के वजन को मापें।
- अध्ययन की अवधि के लिए चरण 1.6-1.10 दोहराएं (उदाहरणके लिए, 16 सप्ताह)।
2. जोड़ी-फीडिंग (पीएफ) नियंत्रण समूह
नोट: एक यदि प्रयोग के लिए जिसमें परिवर्तित भोजन व्यवहार माउस मॉडल (उदाहरण के लिए, ओबी/ओबी चूहों में हाइपरफैगिया) में मनाया जाता है, तो यदि उचित कैलोरी-स्वतंत्र तुलना के लिए नियंत्रण के रूप में एक जोड़ी-फीडिंग समूह होना आवश्यक है।
- पीएफ कंट्रोल ग्रुप के लिए, प्रयोग शेड्यूल को चौंका देता है ताकि यदि समूह द्वारा खपत किए गए भोजन की एक ही राशि पीएफ समूह(चित्रा 2)को दी जाए।
- 2 दिनों की पुनर्भरण अवधि में यदि समूह द्वारा उपभोग किए जाने वाले भोजन की मात्रा को मापें।
- यदि समूह में खपत भोजन की इस राशि को समान रूप से तीन अनुपात में विभाजित करें और इसे रोजाना 12:00 बजे पीएफ समूह को उपलब्ध कराएं ।
नोट: दैनिक भोजन की एक समान राशि प्रदान करना महत्वपूर्ण है। हाइपरफैगिया वाले चूहों के मामले में, यदि जोड़ी-खिलाया चूहों को एक बार में अपनी स्वैच्छिक खपत से कम भोजन की मात्रा प्रदान की जाती है, तो वे संभवतः सभी प्रदान किए गए भोजन का उपभोग करेंगे और प्रभावी रूप से उपवास करेंगे। यह तब यदि-इलाज चूहों की उचित तुलना को रोक सकता है और परिणाम को चकित कर सकता है। - अध्ययन की अवधि के लिए चरण 2.1-2.3 दोहराएं।
3. बॉडी कंपोजीशन एनालिसिस
नोट: चूंकि लंबे समय तक यदि चूहों में शरीर के वजन को प्रभावित करता है, तो शरीर की संरचना को उचित चक्रों (जैसे, हर 3 या 4 चक्र) पर मापा जा सकता है, जिसमें जीवित, गैर-एनेस्थेटाइज्ड चूहों में वसा और दुबला द्रव्यमान की मात्रा निर्धारित करने के लिए शरीर की संरचना विश्लेषक का उपयोग किया जा सकता है।
- बॉडी कंपोजीशन एनालाइजर चालू करें।
नोट: कार्यक्रम शुरू करने से पहले, मशीन को गर्म करने के लिए कम से कम 2-3 घंटे के लिए छोड़ दें। - इसकी माप सटीकता का परीक्षण करने के लिए शरीर संरचना विश्लेषक पर एक सिस्टम परीक्षण चलाएं। यदि आवश्यक हो, तो कैनोला तेल और पानी के नमूनों का उपयोग करके सिस्टम को कैलिब्रेट करें।
- प्रत्येक माउस के शरीर के वजन को मापें।
- माउस को एक छोटे जानवर साइलिंड्रिक धारक में रखें।
- माप के दौरान माउस के शारीरिक आंदोलन को बाधित करने के लिए एक परिसीमन डालें और धारक को शरीर संरचना विश्लेषक में रखें।
- स्कैनिंग कार्यक्रम चलाएं।
नोट: इसका विश्लेषण करने में लगभग 90-120 एस लगते हैं। - माप के बाद, उपकरण से धारक को हटा दें और माउस को पिंजरे में वापस लाएं।
नोट: पिछले प्रकाशन9में एक अधिक विस्तृत प्रोटोकॉल पाया जा सकता है।
4. ग्लूकोज और इंसुलिन सहिष्णुता परीक्षण
- ग्लूकोज सहिष्णुता परीक्षण (जीटीटी) के लिए, उपवास के अधीन होने से पहले प्रत्येक माउस के शरीर के वजन और शरीर की संरचना को मापने और आसान और तेजी से अनुक्रमण के लिए एक स्थायी मार्कर के साथ पूंछ को चिह्नित करें।
- रात भर उपवास के लिए 7:00 बजे भोजन के बिना नए पिंजरों में चूहों रखें ।
नोट: रात भर उपवास मानक प्रोटोकॉल है, फिर भी माउस फिजियोलॉजी (उदाहरण के लिए, लंबे उपवास10,11),छोटे उपवास (~ 6 एच) के बाद ग्लूकोज उपयोग में वृद्धि के कारण आईटीटी के लिए वर्णित किया जा सकता है। - उपवास के बाद 14-16 घंटे (अगले सुबह में 9:00 बजे), प्रत्येक माउस के शरीर के वजन और शरीर की संरचना को मापने और शरीर के वजन के आधार पर ग्लूकोज खुराक की मात्रा की गणना करें।
नोट: मोटापे से ग्रस्त चूहों में ग्लूकोज असहिष्णुता के अधिक अनुमान से बचने के लिए, शरीर की संरचना विश्लेषण से प्राप्त दुबला द्रव्यमान ग्लूकोज खुराक12,13की गणना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। - प्रत्येक माउस के लिए, साफ सर्जिकल कैंची का उपयोग करप (0.5-1.0 मिमी) की नोक काटें। रक्त की पहली बूंद को पोंछने के बाद, पूंछ से रक्त की एक ताजा बूंद खींचें और ग्लूकोमीटर के साथ बेसलाइन उपवास रक्त ग्लूकोज स्तर को मापें।
नोट: जीटीटी या आईटीटी के दौरान हर रक्त ग्लूकोज माप के लिए अतिरिक्त पूंछ काटने की आवश्यकता नहीं है। घाव को रक्त की एक बूंद खींचने के लिए धुंध के साथ abrading द्वारा तरोताजा किया जा सकता है। - ग्लूकोज (1 मिलीग्राम/जी शरीर के वजन) के एक इंट्रापेरिटोनियल (यानी) इंजेक्शन के लिए चूहों विषय ।
नोट: प्रयोग के उद्देश्य के आधार पर (उदाहरणके लिए, इनक्रेटिन प्रभावों की जांच करना), ग्लूकोज का मौखिक प्रशासन मौखिक गावज द्वारा किया जा सकता है। मौखिक जीटीटी (ओजीटीटी) के लिए प्रोटोकॉल एक अन्य अध्ययन14में पाया जा सकता है। - 0, 5, 15, 30, 60, और 120 में ग्लूकोज इंजेक्शन पर पूंछ से रक्त ग्लूकोज उपाय।
- जीटीटी खत्म करने के बाद पर्याप्त मात्रा में भोजन उपलब्ध कराएं।
- इंसुलिन सहिष्णुता परीक्षण (आईटीटी) के लिए, सुबह 9:00 बजे भोजन निकालें।
नोट: चूंकि जीटीटी और आईटीटी दोनों चूहों के लिए तनाव-उत्प्रेरण अनुभव हैं जो रक्त शर्करा के स्तर को ऊंचा कर सकते हैं और शरीर विज्ञान को बदल सकते हैं, इसलिए जीटीटी प्रयोग के बाद कम से कम 2-3 दिनों की वसूली प्रदान करने के बाद आईटीटी करने की सिफारिश की जाती है। - 6 घंटे (3:00 बजे) के लिए उपवास के बाद, पूंछ से बेसलाइन रक्त ग्लूकोज उपाय के रूप में कदम ४.४ में वर्णित है ।
- इंसुलिन के i.p. इंजेक्शन के लिए चूहों विषय (०.६५ mU/शरीर के वजन के जी) ।
- 0, 15, 30, 60, 90, और 120 मिन पोस्ट इंसुलिन इंजेक्शन पर पूंछ से रक्त ग्लूकोज उपाय।
- आईटीटी खत्म करने के बाद, पर्याप्त मात्रा में भोजन प्रदान करें।
5. अप्रत्यक्ष कैलोरीमेट्री
नोट: यदि-इलाज चूहों के ऊर्जा चयापचय को आगे आईएफ के एक चक्र पर अप्रत्यक्ष कैलोरीमेट्री के माध्यम से मूल्यांकन किया जा सकता है। इससे ऑक्सीजन की खपत (वीओ2),कार्बन डाइऑक्साइड उत्पादन (वीसीओ2),श्वसन विनिमय अनुपात (आरईआर), और गर्मी (केकल/एच) को मापे जाएंगे ।
- प्रयोग चलाने से पहले अप्रत्यक्ष कैलोरीमीटर प्रणाली की शक्ति को कम से कम 2 घंटे चालू करें।
नोट: यह सिस्टम वार्म-अप सटीक माप के लिए महत्वपूर्ण है। - साफ बिस्तर के साथ पिंजरों को तैयार करें, पानी की बोतलें भरें, और भोजन हॉपर के लिए चाउ की पूर्व तौला राशि जोड़ें।
- ड्रेइरिट और लाइम सोडा की स्थिति की जांच करें। यदि ड्रेरिट का एक रंग संकेतक गुलाबी दिखाई देता है, जो इंगित करता है कि ड्रेरिट ने उच्च मात्रा में नमी को अवशोषित कर लिया है, तो ताजा ड्रेरिट के साथ प्रतिस्थापित या शीर्ष करना आवश्यक है।
- विशिष्ट संरचना (0.5% सीओ2,20.5% ओ2)के साथ गैस का उपयोग करके सिस्टम को कैलिब्रेट करें।
- प्रत्येक माउस के शरीर के वजन और शरीर की संरचना को मापें, जिसका उपयोग वीओ2 और वीसीओ2 डेटा को सामान्य करने के लिए किया जाएगा।
- धीरे-धीरे प्रति पिंजरे में एक माउस रखें।
- मेटाबोलिक पिंजरों को इकट्ठा करें, उन्हें तापमान नियंत्रित पर्यावरण कक्ष में रखें, और गैस लाइनों और गतिविधि सेंसर केबल से कनेक्ट करें।
- सॉफ्टवेयर का उपयोग करके उपयुक्त प्रयोगात्मक मापदंडों को जोड़कर प्रयोग प्रोफ़ाइल स्थापित करने के बाद, माप के लिए कार्यक्रम चलाएं। पहले दिन के माप का उद्देश्य अनुकूलन की अवधि प्रदान करना और बेसलाइन ऊर्जा चयापचय को मापना है।
- अगले दिन 12:00 बजे, चूहों को हॉपर और पिंजरे के नीचे से भोजन और टुकड़ों को हटाकर 24 घंटे के उपवास के अधीन करें। यदि आवश्यक हो, तो साफ बिस्तर से बदलें।
- 24 घंटे के बाद, रिफीडिंग अवधि के लिए भोजन हॉपर में चाउ की पूर्व-तौला गई मात्रा जोड़ें।
- अगले 48 एच के लिए उपाय करने के लिए जारी रखें नियमित रूप से जांच करें कि क्या सिस्टम हार्डवेयर या सॉफ्टवेयर रुकावट के बिना चल रहा है।
- माप को पूरा करने के बाद, कार्यक्रम को समाप्त करें और चूहों को उनके मूल पिंजरों में वापस लाएं। भोजन के सेवन की जांच करने के लिए बचे हुए भोजन की मात्रा को मापें।
- अप्रत्यक्ष कैलोरीमेट्री के लिए विस्तृत प्रोटोकॉल पिछले अध्ययन9में पाया जा सकता है ।
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Representative Results
चित्रा 1 24 घंटे उपवास और 1:1 और 2:1 आंतरायिक उपवास के बीच तुलना के बाद खिला विश्लेषण से पता चलता है । 24 घंटे उपवास अवधि के परिणामस्वरूप शरीर के वजन में ~ 10% की कमी आई, जो 2 दिनों के पुनर्भरण के बाद पूरी तरह से बरामद की गई(चित्रा 1ए)। 24 घंटे उपवास अवधि ने बाद के 2 दिनों के दौरान हाइपरफैगिया को फिर से खिलाने के लिए प्रेरित किया(चित्र ा 1बी)। फिर भी, 1:1 वैकल्पिक दिन उपवास और 2:1 आंतरायिक उपवास के बीच ऊर्जा सेवन की तुलना से पता चला कि 1:1 में पुनर्भरण अवधि के 1 दिन यदि पर्याप्त नहीं था (~ 80%) अल हालत(चित्रा 1सी)की तुलना में उपवास से गरमी नुकसान की भरपाई करने के लिए । दूसरी ओर, 2:1 आईएफ में पुनर्भोजन के 2 दिनों के दौरान 99% ऊर्जा सेवन पूरी तरह से मुआवजा दिया गया था। यह आहार आइसोक्लोरिक के प्रभावों की जांच में सक्षम बनाता है यदि जो कैलोरी सेवन अंतर से स्वतंत्र हैं।
चित्रा 2 आइसोक्यूलोरिक 2:1 आईएफ और पीएफ रेजीडेंस के लिए एक योजनाबद्ध समय रेखा दिखाता है। गरमी के सेवन में अंतर को कम करने के लिए, वैकल्पिक दिन उपवास6,7में किए गए एक अवलोकन, इस प्रोटोकॉल ने एक नया यदि आहार की स्थापना की जिसमें 2 दिन का भोजन और 1 दिन उपवास अवधि (2:1 IF)8शामिल है, जिसने जंगली प्रकार के चूहों में आइसोक्लोरिक आईएफ के स्वास्थ्य प्रभावों की जांच को सक्षम किया। हालांकि, ओबी/ओबी चूहों में, जो हाइपरफैगिक व्यवहार का प्रदर्शन किया, 2:1 अगर इलाज ओबी/ओबी चूहों एक 21% गरमी का सेवन कमी दिखाया, ओबी की तुलना में/ चूंकि यह एक उचित गरमी-स्वतंत्र तुलना को रोकता है, एक पीएफ नियंत्रण समूह है कि एक ही गरमी का सेवन बनाए रखा के रूप में अगर इलाज ob/ob चूहों का इस्तेमाल किया गया था । संक्षेप में, 2:1 में खिलाने के 2 दिनों के दौरान खपत भोजन की कुल राशि अगर चूहों को समान रूप से तीन दैनिक मात्रा में विभाजित किया गया था, तो पीएफ समूह को प्रदान की गई ।
2:1 के मेटाबोलिक परिणामों पर एक व्यापक सिंहावलोकन के लिए यदि, हमने एएल, आईएफ और पीएफ इन बॉडी वेट, फूड सेवन और वाइल्ड-टाइप में बॉडी कंपीटिशन और सामान्य आहार (एनडी) और एचएफडी के तहत ओबी/ओचूहों के प्रभावों की तुलना की । अल की तुलना में, यदि उपचार के कारण भोजन के सेवन में महत्वपूर्ण अंतर के बिना एनडी-फेड और एचएफडी-फेड डब्ल्यूटी चूहों में शरीर के वजन में वृद्धि हुई(चित्रा 3ए, बी)। शरीर संरचना विश्लेषण से पता चला है कि यदि विशेष रूप से जंगली प्रकार के चूहों(चित्रा 3सी)में दुबला द्रव्यमान में परिवर्तन के बिना वसा द्रव्यमान कम हो जाता है। यह संभव है कि एक थोड़ा, हालांकि महत्वपूर्ण नहीं है, कम संचित ऊर्जा का सेवन अगर कार्यक्रम के 16 सप्ताह से अधिक अगर जानवरों के कम शरीर के वजन में परिणाम सकता है । हालांकि, अगर जोड़ी खिला आहार के साथ प्रयोग की पुष्टि की है कि अगर द्वारा शरीर के वजन में कमी बदल ऊर्जा का सेवन(चित्रा 3डी, ई)के कारण नहीं था । जंगली प्रकार के जानवरों के विपरीत, ओबी/ओबी चूहों के शरीर का वजन आईएफ (ओबी-आईएफ) के अधीन ओबी-अल चूहों(चित्रा 3जी)की तुलना में कम था । यह ओबी/ओबी चूहों के हाइपरफैगिया (अत्यधिक भोजन) के कारण है, जिससे हल्का अधिक (21%) आईएफ-इलाज किए गए जानवरों(चित्रा 3एच)की तुलना में अल चूहों में भोजन का सेवन। इसलिए, विशेष रूप से एक गरमी-स्वतंत्र तरीके से यदि के मेटाबोलिक प्रभाव की जांच करने के लिए, एक जोड़ी-फीडिंग नियंत्रण समूह कार्यरत था। हालांकि, जंगली प्रकार चूहों8के विपरीत, ओबी-पीएफ चूहों शरीर के वजन और शरीर संरचना15 (चित्रा 3I)में ओबी-आईएफ चूहों की तुलना में अविवेच्य थे। इन परिणामों से पता चलता है कि लेप्टिन की संभावना आइसोकॉलोरिक में फंसाया जाता है अगर चूहों में शरीर के वजन में कमी मध्यस्थता ।
इसोक्यूलोरिक आईएफ द्वारा प्रदत्त प्रमुख मेटाबोलिक लाभ बेहतर ग्लूकोज होमोस्टोसिस है। जैसा कि चित्रा 4ए, बी, सी, डी,एचएफडी-आईएफ चूहों में दिखाया गया है ग्लूकोज होमोस्टोसिस में एक महत्वपूर्ण सुधार का प्रदर्शन किया। जीटीटी से पता चला है कि रक्त ग्लूकोज अधिक तेजी से अगर इलाज चूहों में मंजूरी दे दी है, जबकि आईटीटी एचएफडी में उच्च इंसुलिन संवेदनशीलता का पता चला-अगर चूहों, एचएफडी-अल या HFD-पीएफ चूहों की तुलना में । अप्रत्याशित रूप से, यदि मध्यस्थता वजन में कमी में विफलताओं के बावजूद, ओबी-आईएफ जानवरों ने ओबी-पीएफ चूहों(चित्रा 4ई)की तुलना में जीटीटी में छोटे ग्लूकोज यात्रा के साथ ग्लूकोज हैंडलिंग में काफी सुधार किया, जबकि इंसुलिन संवेदनशीलता ओबी-आईएफ और ओबी-पीएफ चूहों(चित्रा 4एफ)के बीच अविवेच्य थी। ओबी-यदि चूहों में यह बेहतर ग्लूकोज होमोस्टोसिस की संभावना ग्लूकागन जैसे पेप्टाइड-1 (जीएलपी-1) और ग्लूकोज-उत्तेजित इंसुलिन स्राव (डेटा नहीं दिखाया गया)15के प्लाज्मा स्तर में वृद्धि से मध्यस्थता की जाती है। कुल मिलाकर, इस 2:1 प्रोटोकॉल और उचित गरमी-स्वतंत्र पीएफ नियंत्रण का उपयोग करके, हमने आइसोक्लोरिक आईएफ के मेटाबोलिक लाभों को जंगली प्रकार और ओबी/ओबी चूहों में दिखाया ।
जंगली प्रकार के चूहों में यदि के मेटाबोलिक प्रभावों में से एक उच्च कुल O2 खपत है, जिसका उपयोग ऊर्जा व्यय(चित्रा 5ए, बी)का अनुमान लगाने के लिए किया जाता है। ओ2 खपत में यह ऊंचाई केवल यदि चूहों में खिला अवधि के दौरान पाया गया था, लेकिन उपवास अवधि नहीं, अल चूहों की तुलना में । बढ़ी हुई ऊर्जा व्यय को काफी हद तक वसा युक्त थर्मोजेनेसिस द्वारा मध्यस्थता की गई थी, जैसे सफेद एडीपोस ऊतकों का भूराकरण और भूरे रंग के एडीपोस ऊतकों की सक्रियता (डेटा नहीं दिखाया गया)8,16। यदि मध्यस्थता एडीपोज थर्मोजेनेसिस संभवतः यह बताएगा कि अल चूहों की तुलना में भोजन के सेवन में कोई अंतर नहीं होने से कम शरीर के वजन को प्रदर्शित करने के लिए जंगली प्रकार के चूहे कैसे हैं। दूसरी ओर, अगर ओबी/ओबी चूहों(चित्रा 5सी-डी)में O2 खपत को बढ़ाने में विफल रहा है, और यहां तक कि उपवास की अवधि के दौरान ऊर्जा व्यय में कमी आई । लगातार, यदि प्रेरित एडीपोज थर्मोजेनेसिस को ओबी/ओबी चूहों (डेटा नहीं दिखाया गया) में पूरी तरह से समाप्त कर दिया गया था। ये डेटा यदि की संभावित सीमा का सुझाव देते हैं क्योंकि यह विभिन्न आनुवंशिक और पर्यावरणीय पृष्ठभूमि वाले व्यक्तियों के लिए अलग तरह से काम कर सकता है।
चित्रा 1: 24 घंटे उपवास और 1:1 और 2:1 के बीच तुलना के बाद विश्लेषण खिला । (A)24 घंटे उपवास (एन = 10) से पहले और बाद में चूहों के दैनिक शरीर के वजन में परिवर्तन होता है। (ख)24 घंटे उपवास से पहले और बाद में दैनिक ऊर्जा का सेवन (एन = 5 पिंजरे; 2 चूहे प्रति पिंजरे)। (ग)वैकल्पिक दिन उपवास के बीच ऊर्जा सेवन की तुलना(यानी, 1 दिन खिला/1 दिन उपवास, 1:1 IF) और 2:1 रुक-रुक कर उपवास (यानी 2 दिन खिला/1 दिन उपवास)। 1:1 यदि आहार में, भोजन के सेवन के बाद के 1 दिन के दौरान भोजन का सेवन केवल ~ 80% की भरपाई की गई थी, जबकि भोजन के 2 दिनों में भोजन का सेवन किया गया था। दूसरी ओर, ऊर्जा का सेवन का ९९% हासिल किया गया था जब पुनर्भरण के 2 दिन दिए गए थे, कि खिला के 3 दिनों की तुलना में । डेटा मतलब ± एसईएम के रूप में व्यक्त कर रहे हैं। यह आंकड़ा किम एट अल8से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया था । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 2: आइसोलोरिक 2:1 यदि आहार का योजनाबद्ध चित्रण। पीएफ नियंत्रण के लिए, यदि इलाज चूहों द्वारा खिलाने के 2 दिनों के दौरान खपत भोजन की मात्रा को तीन बराबर भागों में विभाजित किया जाता है, जो फिर अगले चक्र के दौरान पीएफ चूहों को दैनिक प्रदान किया जाता है। अल = विज्ञापन लिमिटम; पीएफ = जोड़ी-फीडिंग। इस आंकड़े का एक हिस्सा किम एट अल8से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया था । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 3: अल, अगर, और शरीर के वजन पर पीएफ प्रभाव की तुलना, भोजन का सेवन, और जंगली प्रकार और ob/ob चूहों के बीच शरीर की संरचना । (ए, बी, सी) यदि आहार के 16 सप्ताह के दौरान सामान्य आहार (एनडी) या उच्च वसा आहार (एचएफडी) के तहत अल या आईएफ-उपचारित जंगली प्रकार के चूहों में शरीर का वजन, भोजन का सेवन, और शरीर की संरचना। डेटा मतलब ± SEM के रूप में व्यक्त कर रहे हैं । (ND-AL: n = 7; ND-IF: n = 8; एचएफडी-अल: एन = 7; और एचएफडी-आईएफ: एन = 8); छात्र-न्यूमैन-केल्स पोस्ट-होदर विश्लेषण के साथ एक या दो तरह से ANOVA; **पी एंड एलटी; 0.01 बनाम. एचएफडी-एएल (डी, ई, एफ)शरीर का वजन, भोजन का सेवन, और पीएफ बनाम यदि चूहों में शरीर की संरचना आईएफ आहार के 12 हफ्तों के दौरान उच्च वसा आहार (एचएफडी) से खिलाया जाता है। (पीएफ: n = 6 और यदि: n = 6); दो पूंछ अपेयर छात्र की टी-टेस्ट; * पी एंड एलटी; 0.05 बनाम. एचएफडी-पीएफ; एनएस = महत्वपूर्ण नहीं है। (जी, एच, मैं) शरीर के वजन, भोजन का सेवन, और अल, पीएफ, या यदि में शरीर संरचना ओबी/ओबी चूहों सामान्य चाउ के साथ खिलाया (ओबी-अल: एन = 4; ओबी-पीएफ: एन = 7; ओबी-आई: एन = 6); ओबी-एएल बनाम। ओबी-पीएफ: *पी एंड एलटी; 0.05; ओबी-एएल बनाम। ओबी-आई: * पी एंड एलटी; 0.05; ओबी-पीएफ बनाम। ओबी-आई. पैनल ए-एफ किम एट अल8से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया । पैनल जी-मैं किम एट अल15से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 4: दोनों जंगली प्रकार और ओबी/ओबी चूहों में अगर द्वारा ग्लूकोज homeostasis में सुधार हुआ । (ए, बी) एफएफडी-एएल और एचएफडी-आईएफडी-आईएफ में इंट्रापेरिटोनियल जीटीटी और आईटीटी- यदि आहार के 16 सप्ताह बाद जंगली प्रकार के चूहे। इनसेट वक्र (AUC) के तहत क्षेत्र से पता चलता है; * पी एंड एलटी; 0.05 बनाम एचएफडी-एएल.(सी, डी)जीटीटी और आईटीटी एचएफडी-पीएफ में एचएफडी-आईएफ की तुलना में 12 हफ्तों के बाद जंगली प्रकार के चूहे हैं। इनसेट AUC से पता चलता है; * पी एंड एलटी; 0.05 बनाम एचएफडी-पीएफ। ( ओबी-आईएफ मेंई, एफ)जीटीटी और आईटीटी ने 16 हफ्तों के बाद ओबी-पीएफ चूहों की तुलना में आईएफ रेजिमेन। इनसेट में एयूसी (* पी एंड एलटी; ०.०५ बनाम ) को दिखाया गयाहै । ओबी-पीएफ) । पैनल ए-डी किम एट अल8से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया । पैनल ई और एफ किम एट अल15से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
चित्रा 5: यदि इलाज जंगली प्रकार और ओबी/ओबी चूहों में ऊर्जा व्यय विश्लेषण । (क)2:1 के एक चक्र के दौरान ओ2 खपत के निशान यदि जंगली प्रकार के चूहों में(यानी, 1 दिन उपवास 2 दिनों के भोजन के बाद)। (ख)उपवास, भोजन, और 2:1 आईएफ के एक चक्र के दौरान प्रति घंटे O2 खपत का औसत। डेटा के रूप में व्यक्त कर रहे है मतलब ± SEM (HFD-AL: n = 6; और HFD-IF: n = 12); * पी एंड एलटी; 0.05 बनाम. एचएफडी-अल.(सी)ओ2 खपत 2:1 के एक चक्र के दौरान ओबी/ओबी चूहों के निशान । (D)उपवास, खिलाने, और 2:1 के एक चक्र के दौरान प्रति घंटे O2 खपत का औसत (ओबी-पीएफ: एन = 7; ओबी-आई: एन = 6); * पी एंड एलटी; 0.05 बनाम. ओबी-पीएफ. पैनल बी को किम एट अल8से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया था । पैनल सी और डी किम एट अल15से अनुमति के साथ पुन: पेश किया गया । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।
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Discussion
यह अच्छी तरह से प्रलेखित किया गया है कि यदि मनुष्यों और पशुओं दोनों में विभिन्न रोगों पर लाभकारी स्वास्थ्य प्रभाव प्रदान करताहै तो 8, 15,16,17,18,19। ऑटोफैगी और आंत माइक्रोबायोम जैसे इसके अंतर्निहित तंत्र को हाल ही में स्पष्ट किया गया है । प्रस्तुत प्रोटोकॉल एक आइसोलोरिक 2:1 अगर आहार प्रेरित मोटापा और संबद्ध चयापचय रोग के खिलाफ अगर के कैलोरी स्वतंत्र चयापचय लाभ की जांच के लिए चूहों में आहार का वर्णन करता है । वैकल्पिक दिन उपवास (1:1 IF) प्रोटोकॉल के विपरीत जिसके परिणामस्वरूप समग्र कैलोरी सेवन6,7में कमी आती है, 2:1 में पुनर्भरण के 1 दिन और प्रदान करते हैं यदि आहार जंगली प्रकार के चूहों में आइसोक्लोरिक स्थिति के रखरखाव को सक्षम बनाता है।
इसके अतिरिक्त, 1:1 यदि की तुलना में, 2:1 यदि आहार चूहों20 में संभावित उपवास-मध्यस्थता तनाव या अकर्मण्यता को कम कर सकता है और एक लोकप्रिय आहार विधि, 5:2 आहार2के बराबर भी है। यद्यपि इसके प्रभावों का परीक्षण नहीं किया गया है, लेकिन आहार को पुनर्भोजन के अतिरिक्त दिनों (जैसे, 3:1 या 4:1 आईएफ) प्रदान करके संशोधित किया जा सकता है। इसके अलावा, प्रस्तुत किए गए इस प्रोटोकॉल को आसानी से एक प्रति घंटा-पैमाने पर समा-प्रतिबंधित फीडिंग (टीआरएफ) में समायोजित किया जा सकता है, जिसमें सक्रिय चरण21के दौरान भोजन तक पहुंच प्रति दिन 8 घंटे तक सीमित है, जो एक आइसोलोरिक आहार आहार प्राप्त करने और एचएफडी-प्रेरित मोटापे और मधुमेह19,21,22के खिलाफ मेटाबोलिक लाभ प्रदान करने के लिए जाना जाता है।
जैसा कि फीडिंग विश्लेषण(चित्रा 1बी)में दिखाया गया है, उपवास के 24 घंटे के तुरंत बाद हाइपरफैगस्टिक व्यवहार जंगली प्रकार के चूहों में धीरे-धीरे कम हो जाता है, जो आइसोलोरिक आईएफ को सक्षम बनाता है। हालांकि, इस आइसोलोरिक स्थिति को ओबी/ओबी चूहों में प्राप्त नहीं किया जा सकता है, क्योंकि उनमें लेप्टिन सिग्नलिंग-मध्यस्थतृप्ति और ऊर्जा चयापचय की कमी है, जिससे निरंतर हाइपरफैगिक फेनोटाइप23,24होता है। इसलिए, यदि प्रयोग करने से पहले, ब्याज के माउस मॉडल के खिला व्यवहार की जांच करने की सिफारिश की जाती है। हाइपरफैगस्टिक माउस मॉडल (जैसे, ओबी/ओबी, डीबी,सिम1 +/-/-/-)24,25,26का उपयोग करके यदि के प्रभावों की जांच करने के लिए, जैसा कि इस प्रोटोकॉल में वर्णित है, उचित तुलना करने के लिए एक जोड़ी-फीडिंग समूह को आइसोलोरिक प्रायोगिक नियंत्रण के रूप में रोजगार महत्वपूर्ण है । यह भी सावधान योजना की आवश्यकता है जब एक हाइपोफेगिक फेनोटाइप के साथ एक माउस मॉडल का परीक्षण (जैसे, मेलानिन युक्त हार्मोन KO चूहों)27।
यदि अध्ययन आवास तापमान है, जो चूहों में विभिन्न शारीरिक और व्यवहार मापदंडों को प्रभावित करता है, तो विचार करने के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है। विशेष रूप से, ठंड जोखिम (4-6 डिग्री सेल्सियस) काफी कोर शरीर के तापमान को बनाए रखने के लिए ऊर्जा का सेवन बढ़ जाती है28। इसके विपरीत, थर्मोन्यूट्रल स्थितियों (30 डिग्री सेल्सियस) में जिसके तहत गर्मी की हानि से गर्मी का लाभ संतुलित होता है, खाद्य खपत में कटौती स्पष्ट रूप से8कम हो जाती है। मेटाबोलिक परिणामों के संबंध में, कोल्ड एक्सपोजर थर्मोजेनेसिस को प्रेरित करता है, जो थर्मोन्यूट्रल स्थिति से बाधित होता है। इसलिए, यह उम्मीद की जाती है कि आवास तापमान यदि और उचित भोजन के मेटाबोलिक फेनोटाइप को प्रभावित करता है: इसोक्यूलोरिक आईएफ को प्राप्त करने के लिए उपवास अनुपात।
दरअसल, यह पहले से प्रदर्शित किया गया है कि आइसोलोरिक 2:1 अगर थर्मोन्यूट्रल स्थितियों में प्राप्त किया जा सकता है, आहार में बेहतर चयापचय स्वास्थ्य के लिए अग्रणी मोटापा प्रेरित और खाद्य सेवन में अंतर के बिना चयापचय रोग8। हालांकि, आइसोकलिक यदि ठंडे तापमान पर 2:1 अनुपात के साथ प्राप्त नहीं किया जा सकता है क्योंकि ठंडे जोखिम के तहत चूहों एक हाइपरफैगस्टिक फेनोटाइप दिखाएगा, जो आईएफ समूह में अंडरफीडिंग की ओर जाता है। चूंकि ठंडी जोखिम और यदि तुलनीय मेटाबोलिक परिणामों और तंत्रों (यानी, थर्मोजेनेसिस और बेहतर ग्लूकोज होमोस्टोसिस) प्रदर्शित करते हैं जो मोटापे से लड़ने में मदद करते हैं, तो मेटाबोलिक प्रभाव को अधिकतम करने के लिए इन दो हस्तक्षेपों के संयोजन में रुचि है। इसलिए, इसका ठीक से परीक्षण करने के लिए, यदि प्रयोग चलाने से पहले खिला विश्लेषण करना और ठंडे एक्सपोजर के तहत जोड़ी-फीडिंग नियंत्रण समूह का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है।
अन्य कारक जो संभावित रूप से यदि अध्ययनों के परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं, उनमें आवास घनत्व शामिल है। पिछले अध्ययन के समान है, जो अधिक घनी रखे चूहों29में कम भोजन की खपत से पता चला, पांच के एक पिंजरे से चूहों दो (अप्रकाशित परिणाम) के एक पिंजरे से उन लोगों की तुलना में काफी कम भोजन का सेवन किया । इसके अलावा, यह प्रदर्शित किया गया है कि आवास घनत्व परिवेश के तापमान को काफी प्रभावित करता है, क्योंकि एक पिंजरे आवास के अंदर तापमान पांच चूहों एक से दो चूहों30के आवास की तुलना में 1-2 डिग्री सेल्सियस अधिक है। हालांकि इस अध्ययन से निष्कर्ष निकाला गया कि आवास घनत्व ने भोजन के सेवन (5 सप्ताह तक जांच) को काफी प्रभावित नहीं किया, 12-16 सप्ताह तक चलने वाले एक यदि अध्ययन में, आवास घनत्व से प्रभावित पिंजरे के अंदर तापमान अभी भी भोजन के सेवन और ऊर्जा चयापचय को प्रभावित कर सकता है। एक साथ, पिंजरे में रखे चूहों की एक ही संख्या रखना और एक अध्ययन के दौरान प्रति पिंजरे की संख्या को कम करना महत्वपूर्ण है।
संक्षेप में, यह रिपोर्ट चूहों में आइसोक्यूलोरिक 2:1 यदि परीक्षण के लिए एक सरल और प्रजनन प्रोटोकॉल दिखाती है। हालांकि वर्तमान अध्ययन आहार प्रेरित मोटापा और चयापचय रोग में यदि के चयापचय लाभों पर केंद्रित है, यह आसानी से इसप्रकार के हृदय के रूप में अंय शर्तों के खिलाफ आइसोकालोरिक के सुरक्षात्मक और चिकित्सीय प्रभाव की जांच करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है और न्यूरोलॉजिकल बीमारियां।
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Disclosures
लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।
Acknowledgments
के-एचके को हार्ट एंड स्ट्रोक फाउंडेशन ऑफ कनाडा ग्रांट-इन-एड (जी-18-0022213), जे पी बिकेल फाउंडेशन और यूनिवर्सिटी ऑफ ओटावा हार्ट इंस्टीट्यूट स्टार्ट-अप फंड द्वारा समर्थित किया गया था; एच-केएस को कनाडा के स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (पीजेटी-162083), रूबेन और हेलेन डेनिस स्कॉलर और सन लाइफ फाइनेंशियल न्यू अन्वेषक पुरस्कार से मधुमेह अनुसंधान के लिए Banting & सर्वश्रेष्ठ मधुमेह केंद्र (BBDC) और प्राकृतिक विज्ञान से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था और कनाडा की इंजीनियरिंग रिसर्च काउंसिल (एनएसईआरसी) (आरजीपिन-2016-06610) । आरवाईके को यूनिवर्सिटी ऑफ ओटावा कार्डियोलॉजी रिसर्च एंडोमेंट फंड से फेलोशिप का समर्थन मिला था । जेएचएल को एनएसईआरसी डॉक्टोरल स्कॉलरशिप और ओंटारियो ग्रेजुएट स्कॉलरशिप ने सपोर्ट किया था । Y.O. को विज्ञान और प्रौद्योगिकी में UOHI संपन्न स्नातक पुरस्कार और महारानी एलिजाबेथ द्वितीय स्नातक छात्रवृत्ति द्वारा समर्थित किया गया था ।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Comprehensive Lab Animal Monitoring System (CLAMS) | Columbus Instruments | Indirect calorimeter | |
| D-(+)-Glucose solution | Sigma-Aldrich | G8769 | For GTT |
| EchoMRI 3-in-1 | EchoMRI | EchoMRI 3-in-1 | Body composition analysis |
| Glucometer and strips | Bayer | Contour NEXT | These are for GTT and ITT experiments |
| High Fat Diet (45% Kcal% fat) | Research Diets Inc. | #D12451 | 3.3 Kcal/g |
| High Fat Diet (60% Kcal% fat) | Research Diets Inc. | #D12452 | 4.73 Kcal/g |
| Insulin | El Lilly | Humulin R | For ITT |
| Mouse Strain: B6.Cg-Lepob/J | The Jackson Laboratory | #000632 | Ob/Ob mouse |
| Mouse Strain: C57BL/6J | The Jackson Laboratory | #000664 | |
| Normal chow (17% Kcal% fat) | Harlan | #2918 | |
| Scale | Mettler Toledo | Body weight and food intake measurement |
References
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