Summary
这项工作提出了一个协议，以执行立体，神经外科植入微电极阵列在常见的马莫塞特。这种方法特别允许在自由行为的动物进行电生理记录，但可以很容易地适应该物种的任何其他类似的神经外科干预（例如，用于药物给药的管状或用于大脑刺激的电极）。
Abstract
马莫采斯（Callithrix jacchus）是小型非人类灵长类动物，在生物医学和临床前研究，包括神经科学中越来越受欢迎。从遗传学上讲，这些动物比啮齿动物更接近人类。它们还显示复杂的行为，包括广泛的发声和社交互动。这里，描述了一种有效的立体神经外科手术程序，用于在普通马莫塞特中植入记录电极阵列。该协议还详细说明了成功实施此类手术所需的动物护理术前和术后步骤。最后，该协议显示了一个在手术后1周内自由行为的人造肿瘤中局部场势和峰值活动记录的例子。总体而言，这种方法提供了一个机会，研究大脑功能在清醒和自由行为的黑猩猩。研究其他小型灵长类动物的研究人员可以很容易地使用同样的协议。此外，它可以很容易地修改，以允许其他需要植入物的研究，如刺激电极，显微注射，植入的异体或导管，或离散组织区域消融。
Introduction
常见的黑猩猩（Callithrix jacchus）正在作为包括神经科学在内的许多研究领域的重要模型有机体获得认可。这些新世界灵长类动物是啮齿动物和其他非人类灵长类动物（如风河猴）的重要补充动物模型。与啮齿动物一样，这些动物体积小，易于操作，与较大的NHP相比，照顾和繁殖1、2、3、4相对经济。此外，这些动物与其他NHPs1、2、3相比，具有结对和高肥度的倾向。与许多其他灵长类动物的一个优势是，现代分子生物学工具3，4，5，6，7和测序基因组2 ，3，4，5，8已经被用来基因改造它们。使用慢病毒5的敲门动物和使用锌指核酸酶（ZFNs）和转录活化剂样核酸酶（TALENS）7的淘汰动物都产生了可行的成因动物。
与啮齿动物相比，一个优点是，作为灵长类动物，黑猩猩在基因上更接近人类3，5，6，9，10，11。和人类一样，动物是白天的动物，它们依靠高度发达的视觉系统来指导它们的大部分行为。此外，黑猩猩表现出行为的复杂性，包括广泛的社会行为，如使用不同的发声3，使研究人员能够解决其他物种无法解决的问题。从神经科学的角度来看，黑猩猩有脑血管，不像更常用的河河猴9。此外，黑猩猩的中枢神经系统与人类相似，包括更发达的前额叶皮质9。总之，所有这些特征将黑猩猩定位为研究大脑在健康和疾病中功能的宝贵模型。
研究大脑功能的常用方法是通过立体神经外科在解剖特定位置植入电极。这允许在清醒和自由行动的动物12，13的不同目标区域的神经活动进行慢性记录。立体神经外科是许多研究领域中不可或缺的技术，因为它允许精确定位神经解剖区域。与猴和啮齿动物文献相比，描述动物的立体神经外科的已发表的研究较少，它们往往提供手术中涉及的步骤的稀疏细节。此外，那些更详细的重点是电生理记录的程序在头部约束动物14，15，16，17。
为了促进在神经科学研究中更广泛地采用黑猩猩作为模型有机体，目前的方法定义了该物种中成功的立体神经外科所需的具体步骤。除了植入记录阵列（如本方法所述），同样的技术可以适用于许多其他实验目的，包括植入刺激电极用于治疗疾病 18或因果驱动电路行为19;植入导管用于提取和定量神经递质20，注射试剂，包括诱导疾病模型12或电路追踪研究15;离散组织区域消融21;为光遗传学研究植入选择22;植入光学窗口进行皮质显微分析23;和植入电皮质学（ECoG）阵列24。因此，这个程序的总体目标是概述在自由行为的人造肿瘤中植入用于慢性电生理记录的微电极阵列的手术步骤。
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Protocol
动物实验是根据国家卫生研究院《实验室动物护理和使用指南》进行的，并经桑托斯杜蒙特研究所伦理委员会批准（第02/2015AAS议定书）。
1. 手术准备
- 将每个电极阵列连接到与要使用的立体框架兼容的电极支架上。
- 将一个电极支架连接到立体微操作器，并将一根微线设置为耳间坐标。如有必要，对附加电极阵列和支架重复此操作。
注：任何微线的间坐标可用于计算整个阵列的植入坐标，因为微线之间的相对距离是恒定的。当阵列具有不同长度的束时，最长导线的闭体坐标是设置闭间零最方便的。 - 将电极支架从立体微操作器上拆下，并在紫外线 （UV） 机柜中对组件（电极连接到电极支架）进行消毒至少 2 小时。
- 将 24 G 针连接到立体探针支架，将其连接到微操作器，并为针尖设置耳间坐标。
注：在手术之前，所有颅骨的坐标必须预定义为比阵列目标植入部位的前后方（AP）和平庸（ML）位置大200μm2的周长。使用 24 G 针探针支架组件根据零耳间坐标确定颅骨在颅骨中的位置。 - 将探头支架从微操作器上拆下，并在 UV 机柜中对组件进行消毒至少 2 小时。
- 收集 6⁄8 个钛或不锈钢螺钉。将一根接地线焊接到其中的一半。
- 组织和消毒手术所需的所有剩余仪器、设备和一次性用品。
2. 术前程序
注：本研究使用了两个成年雄性黑猩猩（卡利特里克斯·杰丘斯），重320~370克。在麻醉前，确保动物6小时没有进食。
- 用肌内注射阿托品（0.05毫克/千克）麻醉动物，以减少唾液和支气管分泌物。检查是否缺少踏板响应。
- 5分钟后在肌肉内涂抹氯胺酮（10⁄20毫克/千克）。
- 使用电动理发器修剪动物的头部。
- 作为常规镇痛药，在肌肉内施用曲马多（2毫克/千克）。
- 插管动物。
- 使用面罩，将马莫组暴露在1⁄2%氧中的无氧中，流速为1⁄5 L/min，以诱导深层麻醉。当动物被深度麻醉时，减少并维持异苯二苯并维持至1⁄3 L/min。
- 用胶带将弹性带固定在手术台上。
- 将黑猩猩置于一个苏帕因位置，头部朝向技师，并将弹性带放在马莫塞特的嘴部，放在其粪便后面。
注： 最好将头部定位，使背表面指向地面，其表面朝向技师。 - 使用棉签探头，拭子干燥马莫塞特的舌头，并抓住它一只手保持嘴张开。
- 在内切管的尖端喷洒10%利多卡因。
- 将未铐住的直径为 2.0 mm 的内切管插入气管，直到 4.0 厘米标记位于气管入口。
- 将管子连接到麻醉组件上，将人工呼吸机设置为 40 次呼吸/分钟，并确认胸部适当扩张和收缩。
注：此时，分路胶和氧气应通过内切管输送，而不是面罩。 - 从马莫塞特的口中取出弹性带，以便内切管可以贴在下颚上。
- 将动物头置于与立体框架一致的位置，并将动物的头部固定到立体框架中。
- 首先，将右耳杆的尖端插入动物的右听觉管。
- 接下来，将左耳杆的尖端插入左听觉管。
- 将动物的头部居中，置于立体框架的中心，并将耳杆固定到位。
- 将喉舌插入动物的嘴里，调整其高度，使其接触动物的味觉。同时，将轨道条放置在轨道骨骼的下表面。
- 确保轨道骨骼的下表面与耳条的中心水平对齐。
- 将便携式脉搏血氧仪连接到马莫塞特的手上。在手术期间，确保心率在154~180次/分钟（bpm）以内;通常心率超过200bpm意味着动物正在醒来。确保氧饱和度高于 95%。它有时可能会下降到90%，没有伤害。
注：如果心率降至154 bpm以下，减少单体。 - 将连接到温热加热垫的直肠温度探头置于 Usus 中，所需温度设置为 37°C。将此传感器贴在尾部，使其固定到位。
- 在眼睛上涂上无菌的眼科润滑剂。
- 在用手术场覆盖动物之前，用氯西丁和波维多碘清洁和消毒动物的头部。
注：在无菌条件下进行以下所有外科手术。
3. 手术程序
- 在预定切口部位涂抹局部镇痛下皮（例如，利多卡因 20 mg/mL，0.1 mL）。在头皮的中线切开。
- 露出并准备头骨表面。
- 小心地将时间肌肉从颅骨中分离出来。首先，使用手术刀切割筋膜插入头骨。然后，用穿孔的葡萄干轻轻地将时间肌肉与颅骨分开。
- 使用穿孔器从所有暴露的颅骨中取出穿孔。
- 如有必要，用无菌棉签控制出血。
- 用过氧化氢清洁骨表面。
- 通过在骨表面用浅毛刺孔标记颅角来划定颅骨切除术的位置。然后，使用最大速度（即 350，000 rpm）的牙科钻头钻出颅骨的周长。在钻孔时在头骨上加入几滴无菌盐水，以防止过热。测量颅内切除术的位置和电极植入物相对于耳间坐标的坐标。
- 将螺丝植入头骨。
- 将 6⁄8 个螺钉孔钻入颅骨。
- 植入螺钉，使每个接地线熔融螺钉都靠近未改变的螺钉（即没有连接接地线）。
- 围绕相邻的未改变的螺钉旋转每个接地线。
- 在接地线和每个螺钉之间添加一滴银漆。
- 使用带弯曲尖端的钳子（例如，麦克弗森钳子）取出颅骨中心骨骼。保持杜拉母体用无菌盐水水合。
- 拆下杜拉母体。使用无菌皮下针（25 或 26 G），斜面弯曲在大约 90° 时刺穿并提起 Dura 母体的表面，使之远离大脑表面。然后，用微剪刀切割杜拉母体。保持暴露的大脑用盐水水合。
注：如果观察到明显的硬膜出血，请使用浸泡在血栓25中的烧灼或无菌吸收胶胶海绵。 - 植入微电极阵列。
- 将灭菌电极支架和电极阵列连接到立体微操作器。
- 将微操作器定位，使电极位于所需的前向坐标和中位坐标处。
- 降低电极阵列，直到最长束的尖端接触大脑表面。
- 慢慢地将阵列插入脑组织，直到它到达多索文特拉坐标。
- 用小块无菌、吸水性明胶海绵覆盖裸露的皮层。
- 将牙丙烯酸涂在裸露的头骨、一个螺钉和电极上，将电极固定到头骨上。
- 拆下电极支架并将其从微操作器上拆下。
- 如有必要，使用附加阵列重复步骤 3.7 中的植入过程。
- 一起吹风并焊接独立阵列和螺钉的接地线。使用银色油漆在焊缝周围形成一座桥，以确保实现电气连接。
- 使用牙科丙烯酸，围绕阵列的横向范围制作一个坚固的头盖，并完全包裹接地线和任何暴露的头骨和螺钉。
- 如有必要，将支撑杆插入顶盖。这可以是一个坚固的塑料缸，像那些从棉签。用牙科丙烯酸密封到位。
注：这有助于将电生理电缆连接器固定到位，但根据所使用的设备，可能没有必要。在目前的方法中，类似的支撑杆贴在头部阶段，以便弹性带可以牢固地将头部级固定在连接器上。 - 缝合头盖周围的皮肤。
4. 术后恢复
- 在伤口周围涂抹防腐剂溶液（如氯西丁）。
- 关闭异苯可图的供给，但不要关闭氧气，并将动物从立体框架中取出。
- 将动物放在加热垫上，氧气通过内切管保持。
- 当观察到神经原反射的最初迹象（如喉痉挛）时，取出内切管。
- 继续用面罩供应氧气，直到动物出现麻醉恢复的明显迹象，如保护性反射、姿势和试图脱模。
- 将动物放入一个干净的笼子里，在恢复室中放置24-48小时，然后再将动物转移到其家笼。将每个植入的动物单独放置。
注：由于黑猩猩倾向于攀爬笼壁，使用带光滑墙壁的笼子，或用光滑的表面盖住笼子壁，以防止动物掉落。 - 在手术后的第一个小时，观察动物注意在笼子一侧是否有不适或头部接触不协调的迹象。
- 施用抗生素（例如，苯甲酮5毫克/千克，皮下，每天一次，5~7天），镇痛药（例如口服曲马多1毫克/千克，每8小时3~5天）和消炎药（如地沙松0.5~1.5毫克/千克，皮下，每天1~3天）.
注：手术成功后，动物将在3~5天内完全康复。
5. 自由行为的黑猩猩的慢性电生理记录
- 手术后至少1周开始电生理记录。
注：在开始所有实验程序至少1个月之前，先将动物安排给研究人员和实验环境。 - 在每期开始时，使用异胶（1⁄5 L/min，1% O2）对动物进行轻度麻醉。
注：遵循有关机构关于小灵长类动物镇类的指南。如果记录会话非常频繁，习惯动物处理，以便电缆可以连接没有麻醉。 - 将电极阵列连接到商业神经记录系统。
- 将动物放在实验室内。
注：此处使用的实验室是一个立方丙烯酸盒（0.45米 x 0.45米 x 0.45米），旨在评估自发运动活性26、27的量和模式。 - 等待30分钟，然后开始录音，以确保动物从麻醉中完全恢复。
注：Isoflurane有一个快速的开始和偏移作用，允许快速镇定和觉醒28。一旦异苯可勒的供给被关闭，动物就会开始醒来。动物在直立时是清醒的，可以在实验室里自由活动，而不会掉落。这需要不到 15 分钟。为确保没有任何镇静作用，在异胶停止后30分钟开始录音。 - 确认微电极阵列植入物的位置后，通过NISSL染色固定和切片组织29。
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Representative Results
本研究的目的是描述一个立体神经外科手术程序，用于在普通马莫塞特植入微电极阵列进行电生理记录。典型的手术（从麻醉诱导到麻醉恢复）将持续约5~7小时，具体取决于植入的阵列数量。在这里，两个阵列是对称地植入的，一个在每个大脑半球。每个阵列包含 32 条不锈钢微线，这些微线排列在 7 个束中，针对基底神经质-皮质瘤电路的多个结构（图 1），但电极设计和目标脑区域可能因实验。手术成功和术后手术后，动物应在3~5天内完全康复。如果阵列已经接地并正确植入，则有可能在建立成熟的胶质性疤痕之前，在数周或数月内记录自由行为动物的尖峰（图2A）和局部场势（图2B）13，30.例如，本文所述实验范式中收集的电生理数据已有效地用于研究基底神经质-皮质瘤回路不同区域在自发、地面的同步活动。帕金森氏症模型26的动量。
最后，成功的手术还包括将阵列植入目标结构。非侵入性成像方法，如MRI或断层扫描可以在手术后和开始实验记录之前进行。只有制造特定的植入物与此类技术兼容，并且研究人员能够使用适当的小型动物设备，才能使用这种方法。终极确认也可以进行死后。包含电极轨道的Nissl染色部分可用于精确确定每个植入微线的位置（图3）。请注意，冠状部分的电极轨迹在组织中显示为撕裂。因此，在进行切片时必须格外小心，以减少创建混淆解释的伪影的机会。
图1：用于在小型灵长类动物中植入的微电极阵列。该阵列由32条不锈钢微线组成。电线直径为50微米，分为7个束，旨在达到以下区域：原运动皮层（M1）、普塔门（Put）、牛斑（Cd）、球状苍白（GPe）、腹侧和腹侧侧双体核（VPL），以及亚耳核（STN）。每个束中的电极间距为300μm。间束间距取决于每个大脑区域的目标坐标。有关微电极阵列设计和制造的更详细信息，请参阅尼科尔利斯31、莱休和尼科尔利斯32和Dizirasa等人33。比例尺 = 5 毫米。请点击此处查看此图的较大版本。
图2：手术成功后具有代表性的电生理结果。左侧面板显示从一个电极记录的两个神经元（黄色和绿色波形）的尖峰活动。右侧面板显示从 14 个电极记录的局部场电位振荡。请点击此处查看此图的较大版本。
图3：Nissl染色组织部分演示电极轨道。这一部分（前方坐标，相对于耳间线：+8.0，根据Paxinos和Watson34的地图集）描绘了一个电极轨道与尖端在普塔门，如黑色三角形所示。比例尺 = 1 毫米。请点击此处查看此图的较大版本。
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Discussion
这项工作提供了在马莫塞特大脑中植入微电极记录阵列所涉及的过程的详细描述。当在其他小型灵长类动物中植入电极时，无论是自制的还是商用的电极，都可以很容易地使用同样的方案。此外，它可以很容易地适应其他实验目的，需要精确定位大脑结构。因此，该协议在立体坐标和颅骨钻孔技术方面故意含糊不清，因为这些方面可能变化最大。例如，为了植入手术中使用的阵列，颅骨切除术在每个半球打开两个大小合适的窗户。然而，当植入坚固的，个别结构，如导管，既不需要这个或切除术是必要的。相反，一个简单的毛刺孔到杜拉的水平就足够了。同样，当涉及非电植入物时，无需将螺钉接地。因此，可以省略手术协议中的步骤 3.9。相反，牙科丙烯酸可用于简单地覆盖暴露的头骨、植入物和螺钉。
无论立体神经外科的具体实验目标如何，成功实施给定程序很大程度上都围绕着良好的手术实践。这意味着，在无菌条件下进行手术时，必须遵循严格的规程，以防止术后感染35。一些最关键的时刻是诱导和去除麻醉。因此，在整个外科手术中必须监测动物的生命体征（心率、血氧饱和度和体温）。如果心率下降，同时导致氧饱和度下降，请确认胸部正常充气和放气，否则与呼吸机的连接可能有故障。可以尝试恢复心率和氧饱和度的第一件事是降低胶质浓度。如果这不能解决问题，阿托品可以施用肌肉内，以提高心率，并试图稳定动物。这必须非常谨慎，因为以前的经验表明，心率超过200 bpm，没有足够的异二苯会唤醒动物。
与啮齿动物不同，在灵长类动物中，所有坐标通常都是相对于耳间坐标测量的，而不是胸膜和羔羊34。因此，在立体仪器中固定动物头部之前，测量电极阵列和其他探头的耳间零坐标非常重要。此外，在人造骨中，水平平面被定义为穿过轨道骨的下边缘和外听觉肉的中心的平面。因此，在立体框架中固定头部之前，将轨道骨骼的下表面与耳条的中心对齐非常重要。此外，黑猩猩的时态肌肉覆盖了颅骨的广阔区域。因此，许多神经靶点要求在这种肌肉下或非常接近于此肌肉进行颅骨手术。由于这些肌肉是重要的马莫塞特通信38，外科医生必须缓慢和仔细地分离这种肌肉从颅骨，以尽量减少损害。
熟悉啮齿动物或黑猩猩的行为工作的研究人员应该意识到在自由行为NhPs中进行电生理学时的几个限制。首先，在目前的安排和其他涉及高密度阵列或多个阵列，很可能需要诱导光麻醉将连接电缆连接器，即使在适当的习惯。这一程序，虽然在NIH和其他国家的监管准则范围内，应谨慎执行，以减少精神和身体压力的黑猩猩。此外，在开始数据采集之前，研究人员必须确保动物从麻醉中完全恢复，否则麻醉可能会混淆数据39。另一个相关的限制是电缆本身的物理存在。虽然无线记录解决方案正在变得可用40，更常见的有线选项对动物施加了物理限制。最后，所使用的实验室也将限制马莫塞特的行为范围。与啮齿动物不同，黑猩猩表现出独特的行为（例如攀爬），根据所使用的实验室，这些行为是不可能的。
材料科学和工程的进步正在导致新的神经界面41。有效的神经外科手术，如本手稿中描述的程序，将允许研究人员实施这些新和即将推出的工具在黑猩猩。结合分子生物学3、4、5的同步发展，人造肿瘤具有研究神经科学中重要的基础和临床问题的潜力。
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Disclosures
作者没有什么可透露的。
Acknowledgments
作者感谢贝尔纳多·路易斯在拍摄和编辑方面提供的技术协助。这项工作得到了桑托斯杜蒙特研究所、巴西教育部和高等高级学院的支持。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Equipments | |||
| 683 Small Animal Ventilator | Harvard Apparatus, Inc. | 55-0000 | |
| Anesthesia Assembly | BRASMED | COLIBRI | |
| Barber Clippers | Mundial | HC-SERIES | |
| Dental Drill | Norgen | B07-201-M1KG | |
| Homeothermic Heating Pad and Monitor | Harvard Apparatus, Inc. | 50-7212 | |
| Marmoset Stereotaxic Frame | Narishige Scientific Instrument Lab | SR-6C-HT | |
| Patient Monitor and Pulse Oximeter | Bionet Co., Ltd | BM3 | |
| Stereotaxic Micromanipulator | Narishige Scientific Instrument Lab | SM-15R | |
| Surgical Microscope | Opto | SM PLUS IBZ | |
| Instruments | |||
| Allis tissue forceps | Sklar | 36-2275 | |
| Alm Retractor, rounded point, 4x4 teeth | Rhosse | RH11078 | |
| Angled McPherson Forceps | Oftalmologiabr | 11301A | |
| Curved Surgial Scissors | Harvard Apparatus, Inc. | 72-8422 | |
| Curved Tissue Forceps | Sklar | 47-1186 | |
| Delicate Dissection forceps | WPI | WP5015 | |
| Dental Drill Bit | Microdont | ISO.806.314.001.524.010 | |
| Essring Tissue Forceps | Sklar | 19-2460 | |
| FG 1/4 Dental Drill Bit | Microdont | ISO.700.314.001.006.005 | |
| Halsey Needle Holder | WPI | 15926-G | |
| Halstead Mosquito forceps | WPI | 503724-12 | |
| Hemostatic Forceps, Straight | Sklar | 17-1260 | |
| Jewler Forceps | Sklar | 66-7436 | |
| McPherson-Vannas Optathalmic microscissor, 3 mm point | Argos Instrumental | ARGOS-4004 | |
| Pereosteal Raspatory | Golgran | 38-1 | |
| Scalpal Handle | Harvard Apparatus, Inc. | 72-8354 | |
| Screwdrivers | Eurotool | SCR-830.00 | |
| Sodering Iron | Hikari | 21K006 | |
| Surgical Scissor | Harvard Apparatus, Inc. | 72-8400 | |
| Toothed forceps | WPI | 501266-G | |
| Disposables/Single Use | |||
| 1 ml sterile syringe with 26 G needle | Descarpack | 7898283812785 | |
| 130 cm x 140 cm surgical field, presterilized | ProtDesc | 7898467276344 | |
| 24G Needle, presterilized | Descarpack | 7898283812846 | |
| 50 cm x 50 cm surgical field, presterilized | Esterili-med | 110100236 | |
| Cotton Tipped Probes, Presterilized | Jiangsu Suyun Medical Materials Co. LTD | 23007 | |
| Cotton tipped Qutips | Higie Topp | 7898095296063 | |
| Electrode Array | Home made | ||
| Endotracheal tube without cuff, internal diameter 2.0 mm, outer diameter 2.9 mm | Solidor | 7898913077201 | |
| Tinned copper wire, 0.15 mm diameter | |||
| M1.4x3 Stainless steel screws | USMICROSCREW | M14-30M-SS-P | |
| Medical Tape | Missner | 7896544910102 | |
| Nylon surgical sutures | Shalon | N540CTI25 | |
| Scalpal Blade, presterilized | AdvantiVe | 1037 | |
| solder | Kester | SN63PB37 | |
| Sterile Saline 0.9% | Isofarma | 7898361700041 | |
| Sterile Surgical Gloves | Maxitex | 7898949349051 | |
| Sterile Surgical Gown | ProtDesc | 7898467281208 | |
| Surgical Gauze, 15 cm x 26 cm presterilized | Héika | 7898488470315 | |
| Gelfoam | Pfizer | ||
| Drugs/Chemicals | |||
| 0.25mg/ml Atropine | Isofarma | ||
| 10% Lidocaine Spray | Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda. | 7896676405644 | |
| 2.5% Enrofloxacino veterinary antibiotic | Chemitec | 0137-02 | |
| Dexametasona Veterinary Anti inflammatory | MSD | R06177091A-00-15 | |
| Hydrogen Peroxide | Farmax | 7896902211537 | |
| Isoflourane | BioChimico | 7897406113068 | |
| Jet Acrylic polymerization solution | Artigos Odontológicos Clássico | ||
| Jet Auto Polymerizing Acrylic | Artigos Odontológicos Clássico | ||
| Ketamine 10% | Syntec | ||
| Lidocaine and Phenylephrine 1.8 ml local anesthetic | SS White | 7892525041049 | |
| Povidone-Iodine solutiom | Farmax | 7896902234093 | |
| Riohex 2% surgical Soap | Rioquímica | 7897780209418 | |
| Silver Paint | SPI Supplies | 05002-AB | |
| Tramadol chloride 50 mg/ml | União Química | 7896006245452 | |
| Refresh gel (polyacrylic acid) | Allergan |
References
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