Neuroscience

उम्र बढ़ने वाले दिमाग को इकट्ठा करने, संसाधित करने और विशेषता के लिए Abbiategrasso ब्रेन बैंक प्रोटोकॉल

Published: June 3, 2020 doi: 10.3791/60296

Tino Emanuele Poloni*^1,4, Valentina Medici*¹, Arenn Faye Carlos¹, Annalisa Davin², Arcangelo Ceretti¹, Michela Mangieri¹, Paola Cassini^1,4, Roberta Vaccaro³, Daniele Zaccaria³, Simona Abbondanza³, Matteo Bordoni⁵, Valentina Fantini^2,6, Elena Fogato⁷, Cristina Cereda⁵, Mauro Ceroni⁸, Antonio Guaita^1,2,3

¹Department of Neurology and Neuropathology, Golgi-Cenci Foundation, ²Laboratory of Neurobiology and Neurogenetic, Golgi-Cenci Foundation, ³Department of Neuropsychology and Social Sciences, Golgi-Cenci Foundation, ⁴Department of Rehabilitation, ASP Golgi-Redaelli Geriatric Hospital, ⁵Genomic and Post-Genomic Center, IRCCS Mondino Foundation, ⁶Department of Brain and Behavioral Sciences, University of Pavia, ⁷Department of Pathology, ASP Golgi-Redaelli Geriatric Hospital, ⁸Department of Neurological Science, IRCCS Mondino Foundation, University of Pavia

* These authors contributed equally

Summary

यह प्रोटोकॉल मस्तिष्क दान कार्यक्रम और दिमाग के उचित लक्षण वर्णन के माध्यम से व्यक्तिगत मस्तिष्क-उम्र बढ़ने वाले प्रक्षेप पथ को ट्रैक करने की एक विधि का वर्णन करता है। मस्तिष्क दाताओं धारावाहिक बहु आयामी आकलन सहित एक दीर्घकालिक देशांतर अध्ययन में शामिल हैं । प्रोटोकॉल में मस्तिष्क प्रसंस्करण और एक सटीक नैदानिक पद्धति का विस्तृत विवरण शामिल है।

Abstract

लगातार बढ़ती आबादी में, न्यूरोडीजेनेरेटिव विकारों की व्यापकता बढ़ने की उम्मीद है। रोग तंत्र को समझना निवारक और उपचारात्मक उपायों को खोजने की कुंजी है। इस लक्ष्य को प्राप्त करने के लिए सबसे प्रभावी तरीका रोगग्रस्त और स्वस्थ मस्तिष्क ऊतक की सीधी परीक्षा के माध्यम से है। लेखकों को प्राप्त करने के लिए एक प्रोटोकॉल मौजूद है, प्रक्रिया, विशेषता और अच्छी गुणवत्ता मस्तिष्क ऊतक एक पूर्वाह्न मस्तिष्क दान कार्यक्रम में पंजीकृत व्यक्तियों द्वारा दान की दुकान । दान कार्यक्रम में लोगों के लिए एक आमने-सामने सहानुभूति दृष्टिकोण, पूरक नैदानिक, जैविक, सामाजिक और जीवन शैली की जानकारी का संग्रह और सामान्य उम्र बढ़ने और संज्ञानात्मक गिरावट के व्यक्तिगत प्रक्षेप पथ को ट्रैक करने के लिए समय के साथ धारावाहिक बहु-आयामी आकलन शामिल हैं। चूंकि कई न्यूरोलॉजिकल बीमारियां विषम हैं, इसलिए हमारा मस्तिष्क बैंक ताजा नमूनों को टुकड़ा करने के लिए एक अनूठा प्रोटोकॉल प्रदान करता है। दोनों गोलार्द्धों के मस्तिष्क खंडों को वैकल्पिक रूप से जमे हुए (-80 डिग्री सेल्सियस पर) या फॉर्मेलिन में तय किया जाता है; एक गोलार्द्ध पर एक निश्चित टुकड़ा दूसरे गोलार्द्ध पर जमे हुए एक से मेल खाता है। इस दृष्टिकोण के साथ, सभी जमे हुए सामग्री का एक पूर्ण हिस्टोलॉजिकल लक्षण वर्णन प्राप्त किया जा सकता है, और ओमिक्स अध्ययन दोनों गोलार्द्धों से हिस्टोलॉजिकल रूप से अच्छी तरह से परिभाषित ऊतकों पर किया जा सकता है इस प्रकार न्यूरोडीजेनेरेटिव रोग तंत्र का अधिक पूर्ण मूल्यांकन प्रदान करता है। इन रोगों का सही और निश्चित निदान केवल न्यूरोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन के साथ नैदानिक सिंड्रोम के संयोजन से प्राप्त किया जा सकता है, जो अक्सर रोगजनकता की व्याख्या करने के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण एटियोलॉजिकल सुराग जोड़ता है। यह विधि समय लेने वाली, महंगी और सीमित हो सकती है क्योंकि यह केवल एक सीमित भौगोलिक क्षेत्र को कवर करती है। इसकी सीमाओं के बावजूद, यह प्रदान करता है लक्षण वर्णन के उच्च डिग्री पुरस्कृत किया जा सकता है । हमारा अंतिम लक्ष्य न्यूरोपैथोलॉजिकल रूप से सत्यापित महामारी विज्ञान अध्ययन के महत्व पर जोर देते हुए, पहला इतालवी ब्रेन बैंक स्थापित करना है।

Introduction

डब्ल्यूएचओ के अनुसार, लगभग ५०,०००,००० लोग वर्तमान में डिमेंशिया से पीड़ित हैं, एक आंकड़ा जो २०५० तक ट्रिपल होने का अनुमान है । अल्जाइमर रोग डिमेंशिया का प्रमुख कारण है, जिसके बाद सेरेब्रोवैस्कुलर रोग और उम्र से संबंधित अन्य न्यूरोडीजेनेरेटिव विकार हैं। २०१७ में, डब्ल्यूएचओ ने डिमेंशिया के बारे में जागरूकता बढ़ाने और इसके खिलाफ एक वैश्विक कार्य योजना को प्रोत्साहित करने के लिए ग्लोबल डिमेंशिया वेधशाला विकसित की¹। प्रत्येक व्यक्ति का अपना मस्तिष्क उम्र बढ़ने का प्रक्षेपवक्र होता है, इसलिए न्यूरोडीजेनेरेटिव बीमारियों के रोगजनन की जटिलता के कारण इलाज की खोज चुनौतीपूर्ण हो सकती है। शायद, प्रत्येक व्यक्ति के पास मस्तिष्क के ऊतकों में लिखे गए रोगजनकों के पास व्यक्तिगत दृष्टिकोण की आवश्यकता होती है। इस प्रकार, मस्तिष्क के ऊतकों का अध्ययन न्यूरोडिजेनरेशन के तंत्र को समझने की कुंजी होगी।

तंत्रिका विज्ञान के इतिहास को पीछे मुड़कर देखते हुए, हमें पता है कि मानव मस्तिष्क की सीधी परीक्षा के बिना सबसे प्रभावशाली और अभूतपूर्व खोजें कभी नहीं हो सकती थीं। समय के दौरान, मस्तिष्क के ऊतकों का अध्ययन करने के स्रोत कच्चे विच्छेदन, यादृच्छिक ' मौका मुठभेड़ों ' से बदल गया है और, कुछ मामलों में, अवैध व्यापार, संगठित मस्तिष्क संग्रह और रणनीतिक आधुनिक मस्तिष्क बैंकों के लिए । कई नैतिक पहलुओं पर विचार अतीत के मस्तिष्क संग्रह से आधुनिक मस्तिष्क बैंकों में अंतर मुख्य कारकों में से एक है । पहले वास्तविक आधुनिक मस्तिष्क बैंकों (BBs) 20 वीं सदी के उत्तरार्ध में^{स्थापित} किए गए थे । निकोलस कोर्सेलिस और वालेस टूरेलोटे को आधुनिक मस्तिष्क बैंकिंग का अग्रणी माना जा सकता है। ब्रिटेन में, कॉर्सेलिस ने विभिन्न मानसिक और तंत्रिका संबंधी विकारों से प्रभावित 1000 अच्छी^तरहसे प्रलेखित दिमाग पर एक संग्रह इकट्ठा किया। इसके अलावा, कोर्सेलिस ने जैव रासायनिक परीक्षण 3 के लिए बर्फ में ताजा मस्तिष्क ऊतक को^{संरक्षित}करने की आवश्यकता को प्रकट करने में मदद की। इस बीच संयुक्त राज्य अमेरिका में, वालेस टूटेलोटे ने संभावित मस्तिष्क दाताओं की याचना को सुविधाजनक बनाने के लिए पूर्वाह्न मस्तिष्क दान कार्यक्रम शुरू किए और यह सुनिश्चित किया कि एकत्र किए गए दिमाग एक पूर्ण चिकित्सा और तंत्रिका विज्ञान के इतिहास के साथ हैं^4,^,⁵। मस्तिष्क संग्रह और आधुनिक BBs के एक ऐतिहासिक सिंहावलोकन के लिए, कार्लोस एट अल देखें । ⁶.

तो, हमें अभी भी मानव दिमाग की आवश्यकता क्यों है? मस्तिष्क रोगों को केवल न्यूरोपैथोलॉजिकल जांच के बाद एक निश्चित निदान दिया जा सकता है। न्यूरोपैथोलॉजी नैदानिक निदान को चुनौती देती है, और नैदानिक लक्षणों की सही व्याख्या और नए सिंड्रोमिक वेरिएंट के हिस्टोलॉजिकल ठिकानों की खोज की कुंजी है। दरअसल, निदान रोग चित्र के आधार पर नए सिरे से परिभाषित किया जा सकता है। फिर भी, अभिनव न्यूरोइमेजिंग तकनीकों के हालिया विकास के कारण पिछले दशकों में शव परीक्षण दर में गिरावट आई है । ब्रेन इमेजिंग के माध्यम से, मस्तिष्क में रूपात्मक, कार्यात्मक और मेटाबोलिक परिवर्तन, साथ ही प्रोटीन की सीमा को वीवो मेंमूल्यांकन किया जा सकता है। हालांकि, वीवो न्यूरोइमेजिंग और अन्य बायोमार्कर अध्ययनों में केवल रोग चित्र का "अनुमान" दे सकते हैं क्योंकि वे सूक्ष्म सेलुलर और आणविक परिवर्तनों का पता लगाने में असमर्थ हैं। आणविक इमेजिंग में प्रगति और नए बायोमार्कर, लक्ष्य अणुओं, और ट्रेसर⁷ (जैसे, एमिलॉयड, ताऊ, माइक्रोग्लियल ट्रेसर) की खोज मानव मस्तिष्क को नैदानिक मूल्यांकन और बायोमार्कर परीक्षण से प्राप्त डेटा की व्याख्या के लिए और भी अपरिहार्य प्रदान करती है। इसके अलावा, ओमिक्स टेक्नोलॉजीज (जीनोमिक्स, एपिजेनोमिक्स, ट्रांसक्रिप्टोमिक्स, मेटाबोलोमिक्स, प्रोटेओमिक्स, लिपिडोमिक्स, आदि), ताजा और जमे हुए मस्तिष्क के ऊतकों पर प्रदर्शन किया, रोग तंत्र को समझने और जोखिम जीन, उपन्यास नैदानिक और शकुन मार्कर की खोज के लिए नई संभावनाओं को खोला, और संभावित दवा लक्ष्य^8,^,^,^9,^10,^,^{11, 12,}¹¹^,^13,^,^14,^,^15,^,^16,^,^17,^,^18,^,^19,^,^20,^,^21,^,^{22, 23}^,²³.^,

इन उद्देश्यों के लिए, आधुनिक बीबीएस अच्छी तरह से विशेषता, उच्च गुणवत्ता वाले मस्तिष्क ऊतकों को वैज्ञानिक समुदाय^3,^,²⁴के लिए उपलब्ध कराते हैं। बीबीए द्वारा आपूर्ति किए गए दिमाग को पूर्ण नैदानिक इतिहास के साथ होना चाहिए। बीबी की गतिविधि में निम्नलिखित शामिल हैं: (1) मस्तिष्क दान कार्यक्रमों के लिए रोगग्रस्त और स्वस्थ व्यक्तियों की मान्यता और भर्ती; आदर्श स्थिति एक पूर्ण नैदानिक, जीवन शैली और सामाजिक इतिहास, और बायोमार्कर प्रोफाइल प्राप्त करने के लिए जीवन भर में दानदाताओं के एक बहु-अनुशासनात्मक अनुवर्ती कार्रवाई को प्राप्त करने के लिए होगी; वास्तव में, संज्ञानात्मक रिजर्व और मस्तिष्क संरचना जीवन शैली और सामाजिक-शैक्षिक कारकों पर निर्भर करती है^25,^,^26,इसलिए ये जानकारी हाथ में कुल डेटा को समृद्ध करती है। (2) मस्तिष्क का अधिग्रहण (सेरेब्रम, सेरिबैलम और मस्तिष्क स्टेम से मिलकर) और संबंधित ऊतकों (जैसे, रीढ़ की हड्डी, कपाल नसों और गंगलिया, आदि) दाता के निधन के बाद, सभी मानकीकृत कानूनी और नैतिक नियमों को देख रहे हैं । (3) मस्तिष्क के उपयुक्त प्रसंस्करण (विच्छेदन, निर्धारण, ठंड) के रूप में एक मानकीकृत ऑपरेटिव प्रोटोकॉल में परिभाषित, उच्च गुणवत्ता वाले ऊतक प्राप्त करने के लिए और बहुविषयक अनुसंधान में भविष्य के उपयोग के लिए अनुमति देने के लिए । (4) विस्तृत न्यूरोपैथोलॉजिकल लक्षण वर्णन एक अंतिम निश्चित निदान प्रदान करते हैं। (5) अनुसंधान समुदाय के लिए ऊतक सामग्री का भंडारण और वितरण^27,^,²⁸।

सभी बीबीए जमे हुए और फॉर्मेलिन-फिक्स्ड-पैराफिन एम्बेडेड ऊतकों दोनों को स्टोर करते हैं। हर बीबी का अपना प्रोटोकॉल होता है। विशेष अध्ययनों को छोड़कर, जैसे बायोमेडिकल रिसर्च इंस्टीट्यूट (न्यू जर्सी)²⁹ के बिहेमिफेरिक कटिंग प्रोटोकॉल और सेरेब्रोवैस्कुलर पैथोलॉजी³⁰के Deramecourt के अध्ययन, दुनिया में सबसे बड़ी BBs बस मिडलाइन (sagittal विमान) के साथ सेरेब्रम, सेरिबैलम और ब्रेनस्टेम में कटौती । एक आधा ताजा विच्छेदन और फिर जैव रासायनिक अध्ययन के लिए जमे हुए है, जबकि दूसरे को हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन के लिए फॉर्मेलिन में तय किया जाता है । इसलिए, प्रत्येक गोलार्द्ध पर जैव रासायनिक और हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण अलग से आयोजित किए जाते हैं। यह निर्णय एकवचन बैंक 31 ,^,^,^{32, 33,}^34,^,^,³⁵पर निर्भर करता है कि किस पक्ष में फिक्स्ड या फ्रोजन (लेटलतीन) है।³⁴³⁵ जैसा कि कई न्यूरोलॉजिकल बीमारियां विषम हैं, हमारी बीबी ताजा दिमाग को टुकड़ा करने के लिए एक अनूठा प्रोटोकॉल प्रदान करती है: ब्रेनस्टेम के आसन्न खंड और प्रत्येक गोलार्द्ध बारी-बारी से तय और जमे हुए हैं; एक गोलार्द्ध पर एक निश्चित टुकड़ा दूसरे गोलार्द्ध पर जमे हुए एक से मेल खाता है। इस विधि के माध्यम से, मस्तिष्क के ऊतकों का उपयोग अनुकूलित किया जाता है, और दोनों गोलार्द्धों के सभी क्षेत्रों से हिस्टोलॉजिकल और बायोकेमिकल जानकारी प्राप्त करने और तुलना करने की संभावना के साथ सभी जमे हुए सामग्री का एक पूर्ण हिस्टोलॉजिकल लक्षण वर्णन प्राप्त किया जा सकता है।

हमारे ब्रेन बैंक परियोजना का फ्रेम अबियापेटग्रासो शहर है। Abbiategrasso उत्तरी इटली में मिलान शहर के 22 किमी दक्षिण पश्चिम के बारे में एक छोटा सा शहर है । इसकी आबादी करीब 32,600 लोगों की है। यह गोलगी-सेंसी (जीसी) फाउंडेशन काघर है । जीसी फाउंडेशन एक बड़े पुनर्वास बुढ़ापे अस्पताल (एएसपी Golgi-Redaelli) का हिस्सा है, और एक संस्थान उम्र बढ़ने और बुजुर्गों की देखभाल के बारे में अनुसंधान पर ध्यान केंद्रित कर रहा है । विशेष रूप से, यह मानसिक उम्र बढ़ने, इसे प्रभावित करने वाले सामाजिक और व्यवहार कारकों, और जीव विज्ञान और विकृति अंतर्निहित उम्र-निर्भर न्यूरोकॉग्निटिव विकारों (एनसीडी) का अध्ययन करने पर केंद्रित है। 2009 में, जीसी फाउंडेशन ने 1321 प्रतिभागियों के साथ एक नया देशांतर अध्ययन शुरू किया (1644 पात्र विषयों में से: 80.3% की प्रारंभिक प्रतिक्रिया दर) 1935 और 1939 के बीच पैदा हुआ (70-75 वर्ष के बीच आयु वर्ग), कोकेशियान जातीयता का, एक ही छोटे भौगोलिक क्षेत्र में रहते हैं। इस अध्ययन को InveCe.Ab (Invecchiamento Cerebrale Abbiategrasso;अंग्रेजी में: ब्रेन एजिंग Abbiategrasso, ClinicalTrials.gov, NCT01345110) कहा जाता था और वर्तमान में चल रहा है । InveCe.Ab को अधिकतम एकरूपता और कम से कम परिवर्तनशीलता के साथ एक पलटन प्राप्त करने की योजना बनाई गई है ताकि डिमेंशिया की घटनाओं, व्यापकता और प्राकृतिक इतिहास का आकलन किया जा सके, साथ ही इसके संभावित जोखिम या सुरक्षात्मक कारकों के साथ, जिसमें व्यवहार, मनोसामाजिक, नैदानिक और जैविक चर³⁶शामिल हैं। पलटन की विशेषताएं चित्रा 1 और तालिका 1में दिखाई गई हैं। महामारी विज्ञान के आंकड़े यूरोपीय आबादी^{३७, ३८}^,³⁸ और InveCe.Ab प्रतिभागियों में मनोभ्रंश प्रवृत्ति के अनुरूप हैं, जो सामान्य उम्र बढ़ने से न्यूरोकॉग्निटिव विकारों तक प्रक्षेपवक्र का अध्ययन करने के लिए एक अच्छे मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं । दरअसल, सजातीय आबादी को पर्याप्त सांख्यिकीय शक्ति तक पहुंचने के लिए कम विषयों की आवश्यकता होती है । InveCe.Ab पद्धति पहले से ही कहीं और^३६ की सूचना दी गई है, लेकिन यह आवधिक जांच के माध्यम से अपने बहुआयामी दृष्टिकोण को रेखांकित करने के लिए महत्वपूर्ण है (हर 2-3 साल) सहित मूल्यांकन के एक ही सेट का उपयोग कर: रक्त नमूना (मेटाबोलिक पैनल, होमोसिस्टीन और विटामिन, डीएनए निष्कर्षण प्रोफाइल Apolipoprotein ई (APOE) और अनुभूति और उंर बढ़ने से संबंधित अन्य आनुवंशिक बहुरूपता), मानववंशीय माप (वजन, ऊंचाई और कमर), बात करते हुए परीक्षण (दोहरी कार्य परीक्षण), मूल्यांकन जीवन शैली (भूमध्य आहार पालन, शारीरिक गतिविधि और संज्ञानात्मक सगाई के स्तर) और सामाजिक कारकों (सामाजिक भागीदारी, अकेलापन), एक न्यूरोप्सी इस तरह के देशांतर डेटा की तुलना पोस्टमॉर्टम न्यूरोपैथोलॉजिकल डेटा से करना शोध के लिए महत्वपूर्ण होगा । इसलिए, हमारी टीम और विशेष रूप से डॉ मिशेला मंजीरी ने ऊपर उल्लिखित न्यूरोपैथोलॉजिकल दृष्टिकोण की कल्पना की। २०१४ के बाद से और दूसरे अनुवर्ती के दौरान, InveCe.Ab प्रतिभागियों को अपने दिमाग दान करने के लिए कहा गया था, और इस तरह Abbiategrasso ब्रेन बैंक (एबीबी)के जंम के बारे में लाने । एबीबी के मुख्य दानदाता InveCe.Ab प्रतिभागी हैं लेकिन एबीबी अब अन्य स्वयंसेवक दानदाताओं के लिए खुला है । वे एएसपी गोलगी-रेडेली के मरीज हैं, जो विभिन्न न्यूरोलॉजिकल बीमारियों या वयस्क स्वयंसेवकों से पीड़ित कई रोगियों के लिए घर हैं जो एबीबी परियोजना के बारे में सीखते हैं और एक ही भौगोलिक क्षेत्र (Abbiategrasso और परिवेश) से संबंधित हैं । सभी दानदाताओं को एक ही मूल्यांकन प्रोटोकॉल से गुजरना पड़ता है।

लेखक सामान्य उम्र बढ़ने के व्यक्तिगत प्रक्षेप-पथ और एनसीडी की संभावित प्रगति को ट्रैक करने और ऐसे दानदाताओं से प्राप्त दिमाग को सही ढंग से प्रबंधित करने, संसाधित करने और इसके लिए एक विधि का प्रस्ताव करते हैं। इसके अलावा, हमारा उद्देश्य मस्तिष्क की भलाई के बारे में आवधिक न्यूरोलॉजिकल आकलन, सेमिनार और शैक्षिक गतिविधियों में व्यक्तियों से मिलना और संलग्न करना और अनुसंधान उद्देश्यों के लिए मस्तिष्क दान के बारे में उनकी जागरूकता बढ़ाना है।

Protocol

हमारी संस्था की मानव अनुसंधान आचार समिति और बीएनई आचार संहिता के अनुरूप, एबीबी नैतिक मानकों^39,^,⁴⁰के बाद अपनी गतिविधियों का प्रदर्शन करता है। मस्तिष्क संचयन प्रक्रिया को इनवेस के अध्ययन³⁶के संदर्भ में पाविया विश्वविद्यालय की आचार समिति द्वारा प्रस्तुत और अनुमोदित किया गया था। अध्ययन प्रक्रियाएं १९६४ की हेलसिंकी की घोषणा और निम्नलिखित संशोधनों में उल्लिखित सिद्धांतों के अनुसार थीं । सहमति फार्म पूर्ण और आसानी से समझ से बाहर है। दान कार्यक्रम में शामिल होना एक व्यक्तिगत निर्णय है, और पूरी जागरूकता की आवश्यकता है। यदि किसी व्यक्ति को सहमति फार्म पर हस्ताक्षर करने के लिए सक्षम नहीं समझा जाता है, तो कानूनी अभिभावक या अगले-परिजन (एनओके) से प्राधिकरण की आवश्यकता होती है। तालिका 2 मस्तिष्क दान के लिए शामिल किए जाने और बहिष्कार मानदंडों की रिपोर्ट करता है। यह शोध फेडराजिओन अल्जाइमर इटालिया की देखरेख में किया गया।

1. मस्तिष्क दान कार्यक्रम के लिए भर्ती

उन विषयों को बुलाएं जिन्होंने मस्तिष्क दान में रुचि व्यक्त की थी और उनके एनओके और/या कानूनी अभिभावक को परियोजना (दान कार्यक्रम का दायरा; मस्तिष्क हटाने, संरक्षण, उपयोग और वितरण की प्रक्रिया) पेश करने के लिए, किसी भी समय कार्यक्रम से हटने का अधिकार, गुमनामी की सुरक्षा, और अनुवर्ती रणनीतियों । अतिरिक्त बायोमार्कर जांच और आनुवंशिक परीक्षणों की संभावना पर चर्चा करें। संभावित दाता या उसके NOK की इच्छाओं को परिणामों के बारे में सूचित किया जाना ध्यान दें ।
दोनों फाउंडेशन और दाता के लिए वित्तीय लाभ की कमी सहित सभी आर्थिक पहलुओं की व्याख्या (दिमाग दान और परोपकारी वितरित कर रहे हैं) । उन्हें सूचित करें कि एबीबी शरीर परिवहन की लागत को कवर करता है, जबकि परिवार अंतिम संस्कार, दफन या दाह संस्कार के लोगों को शामिल करता है ।
स्वीकृति के मामले में, दान कार्यक्रम में भाग लेने के लिए सहमति के हस्ताक्षर प्राप्त करें। गुमनामी की गारंटी के लिए दाता को एक व्यक्तिगत संख्यात्मक कोड दें। देशांतर अध्ययन में भाग लेने वालों की पहचान संख्या लिखें और मस्तिष्क बैंक के लिए एक और कोड प्रदान करने के लिए आसानी से दानदाताओं के दो उपसमूहों (प्रतिभागियों या देशांतर अध्ययन में गैर प्रतिभागियों; तालिका 3देखें) ।
दाता को एक पहचान कार्ड दें जो दाता के रूप में अपनी स्थिति घोषित करता है और उसकी मृत्यु के ब्रेन बैंक को सूचित करने के लिए टेलीफोन नंबर (उपलब्ध 24/7) प्रदर्शित करता है।

2. दाता मूल्यांकन और धारावाहिक अनुवर्ती

नोट: यह केवल कुछ के लिए सहमति देने के लिए संभव है, और सभी नहीं, नीचे उल्लिखित परीक्षाओं की । सभी नैदानिक मूल्यांकन एक न्यूरोलॉजिस्ट, न्यूरोलॉजी में विशेषज्ञता के साथ एक बुढ़ापे और 3 मनोवैज्ञानिक सहित एक ही टीम द्वारा किया जाता है । यदि नए लक्षण विकसित होते हैं या संज्ञानात्मक गिरावट बढ़ती है, तो अनुवर्ती कार्यों के बीच समय अंतराल को छोटा किया जा सकता है।

InveCe.Ab अध्ययन के मामले में, स्वायत्तता की डिग्री (एडीएल, आईडीएल), व्यक्तिगत आदतों, सामाजिक और जीवनशैली कारकों सहित एक जीवन शैली-सामाजिक प्रश्नावली प्राप्त करें जो मानसिक कार्यों को प्रभावित कर सकते हैं। आनुवंशिक, संक्रमित, विषाक्त, मेटाबोलिक, ऑटोइम्यून, हृदय, दर्दनाक, अपक्षयी, नियोप्लास्टिक, और न्यूरोलॉजिकल रोगों के बारे में जानकारी के साथ परिवार, चिकित्सा और तंत्रिका संबंधी इतिहास एकत्र करें। पिछले नैदानिक परीक्षा लीजिए और औषधीय उपचार की सूची।
कपाल नसों समारोह, fundus oculi, दृश्य क्षेत्र, मांसपेशियों की ताकत और टोन, संवेदनशीलता, कण्डरा सजगता, बाहरी और आदिम सजगता, मेनिंगियल संकेत, मुद्रा, चाल, आंदोलनों, समन्वय, स्फिंकेरिक कार्यों, और फोकल या Babinski संकेत के किसी भी उपस्थिति के लिए परीक्षण सहित एक व्यापक न्यूरो मोटर मूल्यांकन बाहर ले । भाषा, मानसिक स्थिति और व्यवहार में किसी भी परिवर्तन का मूल्यांकन करें।
वैश्विक अनुभूति और विशिष्ट संज्ञानात्मक डोमेन का एक पूर्ण न्यूरोसाइकोलॉजिकल मूल्यांकन सहित एक व्यापक न्यूरो-संज्ञानात्मक मूल्यांकन करें: मौखिक और दृश्य स्मृति, ध्यान, साइकोमोटर गति, भाषा, अर्थ स्मृति, कार्यकारी कार्य, और विसुस्पाटियल क्षमताएं (विवरण के लिएतालिका 4)। अवसाद (सीईएस-डी स्केल) की उपस्थिति पर विचार करें।
रक्त नमूना प्राप्त करें जिसका उपयोग रक्त रसायन विश्लेषण(तालिका 5)और डीएनए, प्लाज्मा और परिधीय रक्त मोनोन्यूक्लियर कोशिकाओं (पीबीएमसी) दोनों के लिए किया जाता है। APOE जेनोटीपिंग (rs429358 और rs7412) (InveCe.Ab प्रतिभागियों में एक अधिक व्यापक आनुवंशिक प्रोफाइलिंग निर्धारित किया गया है; तालिका 6देखें) निर्धारित करें । मात्रात्मक विश्लेषण (क्यूईईजी) के लिए ईसीजी (कार्डियक परिवर्तन, एट्रियल फिब्रिलेशन) और एक आराम राज्य इलेक्ट्रोएंसेफेलोग्राम रजिस्टर करें।
सेरेब्रोस्पाइनल फ्लूइड (सीएसएफ) ताऊ, फॉस्फो-ताऊ और एमिलॉयड, और ब्रेन इमेजिंग (वीवो डिजनरेशन, इस्केमिया या सूजन में पता लगाने के लिए एमआरआई) सहित वैकल्पिक बायोमार्कर परीक्षण पर विचार करें; मेटाबोलिक विफलता का पता लगाने के लिए एफडीजी-पीईटी; पीआईबी-पीईटी अल्जाइमर रोग विज्ञान से संबंधित मस्तिष्क एमिलॉयडोसिस का पता लगाने के लिए)।
ब्रेन डोनर के बाद के चेक-अप प्रोग्राम की योजना बनाएं। विभिन्न आयु समूहों के अनुसार समय अंतराल निर्धारित करें (64 वर्ष तक: हर 10 साल, 65-74 वर्ष: हर 3 साल, 75 साल से: हर 2 साल में)।
डीएसएम-वी के अनुसार एक नैदानिक निदान और/या एक न्यूरोकॉग्निटिव निदान आवंटित करें । नैदानिक मनोभ्रंश रेटिंग (सीडीआर) स्कोर के साथ नैदानिक मनोभ्रंश मचान वर्गीकृत। मृत्यु से पहले अंतिम अवधि में सीडीआर अपडेट करें।
पेपर के समान रेखांकन रूप से एक डेटाबेस तैयार करें। ब्रेन बैंक डेटाबेस में सभी एकत्र डेटा डालें। किसी भी गलतियों की जांच करने के लिए किसी अन्य क्लर्क द्वारा संशोधन की योजना बनाएं।

3. मृत्यु और मस्तिष्क को हटाने का समय

नोट: इतालवी कानून स्थापित करता है कि asystole मौत की पुष्टि करने के लिए 20 मिनट से अधिक समय तक पिछले चाहिए । कम से कम 20 मिनट (नाम की थापरोग्राफी) के लिए एक फ्लैट इलेक्ट्रोकार्डियोग्राम (ईसीजी) का पंजीकरण मृत्यु के 24 घंटे (डीपीआर 285/90 कला) के भीतर एक शव परीक्षण के लिए अनुमति देता है। 8 और कानून एन 578 दिसंबर 29, 1993)। <24 h का पोस्टमॉर्टम टाइम समग्र ऊतक गुणवत्ता को संरक्षित करने के लिए एक अच्छा लक्ष्य है। पोस्टमॉर्टम समय और जीटी;30 घंटे के मामले में शव परीक्षण रद्द कर दिया जाता है (तालिका 2देखें)। ऑटोप्सी टीम एक पैथोलॉजिस्ट, एक न्यूरोलॉजिस्ट और/या एक न्यूरोबायोलॉजिस्ट, एक नर्स, एक शारीरिक कक्ष तकनीशियन और किसी भी प्रशिक्षु छात्रों से बना है; पहले दो टीम के सदस्य न्यूरोपैथोलॉजिकल डायग्नोसिस भी करते हैं। शव हैंडलिंग और विच्छेदन के दौरान, उपयुक्त कपड़ों (कोट, दस्ताने, चश्मा और हेयरनेट) का उपयोग अनिवार्य है। इस खंड में, हम आम तौर पर हमारी प्रयोगशाला में उपयोग किए जाने वाले मुख्य उपकरणों और उपकरणों का वर्णन करते हैं। पाठक अपने विवेक से उपयोग किए जाने वाले साधनों का चयन कर सकते हैं। यहां उपयोग की गई सामग्रियों के विस्तृत विवरण के लिए, कृपया सामग्री की तालिकादेखें।

सुनिश्चित करें कि परिवार द्वारा चुना अंतिम संस्कार एजेंसी एबीबी सुविधाओं के लिए शरीर लाता है । थानोग्राफी करें जिसके दौरान कार्डियक एक्टिविटी नदारद होनी चाहिए। यदि हां, तो मृत्यु प्रमाण पत्र पर हस्ताक्षर करें और शव परीक्षण प्रक्रियाएं शुरू करें।
शव को शव कक्ष तक पहुंचाया। सिर के सबसे व्यापक हिस्से के स्तर पर खोपड़ी की परिधि को मापें। एंटेरोपोस्टेरियर व्यास (एपीडी) प्राप्त करने के लिए नैशन से आयन तक उपाय करें, जबकि एक कान से दूसरे कान की दूरी ट्रांसवर्स व्यास (टीडी) की पैदावार देती है। सूत्र का उपयोग कर सेफेलिक इंडेक्स (सीआई) की गणना करें: सीआई = टीडी/एपीडी एक्स 100।
एक तेज स्केलपेल का उपयोग करके, कोरोनल विमान पर एक खोपड़ी चीरा बनाएं, एक तरफ मास्टोइड प्रक्रिया की नोक से दूसरी तरफ, वर्टेक्स के ऊपर से गुजरते हुए। बालों, त्वचा और चमड़े के नीचे के ऊतकों के माध्यम से काटें और खोपड़ी के दो गुंबदों को ध्यान से नीचे खोपड़ी से अलग करें। जब तक पीले सुपरऑर्बिटल वसा दिखाई न दें और खोपड़ी को पूर्वकाल में प्रतिबिंबित न करें तब तक चीरा करें। दूसरे भाग को पीछे खींचें।
स्केलपेल और संदंश का उपयोग करके, प्रत्येक पक्ष पर लौकिक मांसपेशी का एक छोटा सा नमूना लें, 4% फॉर्मलडिहाइड में से एक डालें और दूसरे को फ्रीज करें (धारा 7 देखें)।
ललाट की ओर वी-कट के बाद एक विद्युत देखा का उपयोग करके खोपड़ी को काटें। खोपड़ी निकालें और मेनिंग्स को काट लें। ड्यूरा के नमूना टुकड़े दोनों 4% फॉर्मलडिहाइड और फ्रोजन (सेक्शन 7 देखें) में तय किए जाते हैं।
तीसरे वेंट्रिकल तक पहुंचने के लिए कॉर्पस कैलोसम के माध्यम से 20 जी 3.5 सुई डालकर सीएसएफ के लगभग 10 एमएल प्राप्त करें। सीएसएफ की उपस्थिति, रंग और टर्बिडिटी का आकलन करें और पीएच को मापें। फिर, प्रत्येक के बारे में 1 मिलियन के 10 एलिकोट्स बनाएं और उन्हें -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
मस्तिष्क को नाजुक रूप से दोनों ललाट पालि पर खींच लें और दोनों ऑप्टिक नसों इनफंडीबुलम, आंतरिक कैरोटिड धमनियों (आईसीए) और तीसरे, चौथे, पांचवें और छठे कपाल नसों को काट लें। पीछे के खात तक पहुंचने के लिए टेंटोरियम काटें और कशेरुकी धमनियों और निचले कपाल नसों को काट लें। मेडुला के सबसे कौडल हिस्से को काटने के लिए, फोर्पैल को फॉरमेन मैग्नम के माध्यम से जितना संभव हो उतना गहरा डालें। इस बिंदु पर, पूरे मस्तिष्क को धीरे से हटा दें।
स्केलपेल के साथ, मेकेल की गुफा पर हड्डी को छेदें और दोनों तरफ से गैसेरियन गैंगलियन प्राप्त करें। एक गैंगलियन को 4% फॉर्मलडिहाइड में ठीक करें और दूसरे को फ्रीज करें (सेक्शन 7 देखें)। पिट्यूटरी ग्रंथि को हटाने के लिए सर्जिकल मैलेट और छेनी का उपयोग करके बोनी सेला टर्किका को फ्रैक्चर करें और फिर इसे 4% फॉर्मलडिहाइड में ठीक करें।
स्थूल परिवर्तन और संवहनी परिवर्तन के लिए खोपड़ी और पूरे मस्तिष्क का निरीक्षण करें। एक मापने वाले टेप के साथ, मस्तिष्क को ट्रांसवर्स और एंटेरोपोस्टेर व्यास प्राप्त करने के उपाय करें। इच्छा के सर्कल की देखभाल के साथ पुनः प्राप्त करें और शारीरिक वेरिएंट, घावों या पोत स्टेनोसिस की उपस्थिति के लिए इसे स्थूल (चित्रा 2E) का आकलन करें।
उत्तलता से 2-4 सेमी 2 के सोएनोमीनिंग्स के^1-2 टुकड़े लें और उन्हें पूर्ण उच्च ग्लूकोज डल्बेको के संशोधित ईगल मीडिया (डीएमईएम) संस्कृति माध्यम में 4 डिग्री सेल्सियस पर संरक्षित करें जिसमें 20% भ्रूण गोजातीय सीरम (एफबीएस), 1% पेन/स्ट्रेप, 1% ग्लूटामीन और 1% गैर-आवश्यक अमीनोएसिड (जैसा कि पहले प्रकाशित किया गया था, कुछ संशोधनों के साथ)⁴¹.
1. फाइब्रोब्लास्ट संस्कृतियों को प्राप्त करने के लिए, लेप्टोमेनिंग्स को 10 सेमी पेट्री डिश पर रखें और हर बार तरल को त्यागने के लिए फॉस्फेट बफर नमकीन (पीबीएस) के साथ दो बार धोएं।
2. एक स्केलपेल और एक पिपेट टिप का उपयोग करके, लेप्टोमिनिंग्स को लगभग 2 या 3 मिमी के छोटे टुकड़ों में काट लें, बीज 3-4 टुकड़े एक 6-अच्छी तरह से प्लेट के प्रत्येक कुएं में पहले 0.5% पर जिलेटिन के साथ लेपित होते हैं और प्रत्येक को 1% एम्फोटेरिसिन बी के साथ पूरक पूर्ण मध्यम के साथ भरते हैं (संस्कृति की नसबंदी की गारंटी के लिए बायोसेफेट कैबिनेट में प्रसंस्करण का संचालन करते हैं)।
3. प्लेट को कम से कम एक सप्ताह के लिए 37 डिग्री सेल्सियस, 5% सीओ₂ इनक्यूबेटर में रखें और हर 3-4 दिनों में मध्यम खर्च किए गए परिवर्तन करें। जब अच्छी तरह से संगम के लगभग 70% पर होता है तो बाँझ 1x ट्राइपसिन के साथ कोशिकाओं को ट्रिपसिनाइज करें। लेप्टोमेनेनेल फाइब्रोब्लास्ट को T75 फ्लास्क में रखें और इसे 12 एमएल पूर्ण माध्यम से भरें। 5 दिनों के बाद एफबीएस के 900 माइक्रोन और डिमेथिल सल्फोक्साइड (डीएमएसओ) के 100 माइक्रोन में उन्हें ट्राइपसिनाइज और संरक्षित करें।
सेरेब्रम, सेरिबैलम और ब्रेनस्टेम को अलग और निरीक्षण करें और उन्हें व्यक्तिगत रूप से वजन करें। पीनियल ग्रंथि को उतारें और इसे 4% फॉर्मलडिहाइड में ठीक करें। घ्राण बल्ब और ऑप्टिक नसों को हटा दें, और प्रत्येक जोड़ी में से एक को ठीक या फ्रीज करें, स्वतंत्र रूप से पक्ष से। ऊतक व्यवधान को कम करने और ऊतक की कोमलता को कम करने के लिए विच्छेदन के लिए तैयार होने तक कम से कम 2-4 घंटे के लिए बर्फ में सेरेब्रम, सेरिबैलम और ब्रेनस्टेम रखें।
कटाई के बाद शव पर उचित ध्यान दें और देखभाल करें। एक सुपर चिपकने वाला गोंद का उपयोग कर हड्डी को फिर से संलग्न करें, और सर्जिकल सुई और गैर-अवशोषित टांके का उपयोग करके खोपड़ी को वापस सिलाई करें।
शव का धीरे-धीरे इलाज कराकर मृत व्यक्ति के प्रति सम्मान और कृतज्ञता दिखाएं। चेहरे को साफ और शेव करें, और बालों को धोएं और सुखा लें, क्योंकि शव को प्रियजनों को दिखाई देने वाले खुले ताबूत में रखा जाएगा।
नोट: शव का पुनर्घटन एक तकनीशियन द्वारा किया जाता है। यहां प्रोटोकॉल को रोका जा सकता है।

4. एबीबी विच्छेदन प्रोटोकॉल

नोट: एक ही रोगविज्ञानी और/या न्यूरोलॉजिस्ट एक धुएं हुड के नीचे ब्रेनस्टेम, सेरिबैलम और सेरेब्रम का टुकड़ा । एक न्यूरोबायोलॉजिस्ट सेक्शनिंग के बाद स्लाइस की व्यवस्था करता है। मस्तिष्क वर्गों को नहीं संभालने वाला एक प्रशिक्षु बाद के ऊतक प्रसंस्करण चरणों के दौरान गाइड के रूप में सेवा करने के लिए डेटाबेस में अपलोड की जाने वाली तस्वीरों के साथ पूरी प्रक्रिया को दस्तावेज करता है।

एक विच्छेदन चाकू का उपयोग करके, ब्रेनस्टेम स्वयंसली में कटौती करें और सब्स्तानटिया निग्रा (एसएन) को उजागर करने वाले दो स्लाइस प्राप्त करने के लिए बेहतर कोलिकुलस के माध्यम से रोस्ट्रल मिडब्रेन के स्तर पर पहली कटौती करें।
लगभग 10 वर्गों को प्राप्त करने के लिए 8 मिमी ब्रेनस्टेम स्लाइस प्राप्त करने के लिए बाकी कटौती करें। लोकस कोएरूलस (एलसी) का निरीक्षण करने के लिए चौथे वेंट्रिकल के बेहतर मार्जिन के पास रोस्ट्रल पोन से गुजरने वाली कटौती को शामिल करने के लिए सावधान रहें और चौथे वेंट्रिकल के अवर शीर्ष के ठीक ऊपर ध्वनिक स्ट्री के लिए कमतर मेडुला ओब्लोंडा के माध्यम से वागस (डीएमएनवी) के पृष्ठीय मोटर नाभिक सहित स्लाइस हैं।
सभी स्लाइस को बीएस (ब्रेनस्टेम) के रूप में एक रोस्ट्रोकाउडल अर्थों में नाम दें और इसके बाद वर्गों की पहचान करने के लिए अरबी नंबर ों का पालन करें। अंतिम ब्रेनस्टेम सेक्शन के बाद, पदनाम एससी (रीढ़ की हड्डी) का उपयोग करें और उसके बाद संख्या 1-एन। लगभग 2-4 एससी स्लाइस रीढ़ की हड्डी के मेटामर्स की संख्या के आधार पर प्राप्त किए जाते हैं(चित्रा 2एच-I)।
सभी वर्गों को तय करने या बारी-बारी से जमे रहने के लिए लेबल करें और फोटो आर्काइव(चित्रा 2)के लिए एक तस्वीर लें। फिर, नीचे वर्णित सभी स्लाइस को ठीक करें और फ्रीज करें (चरण 4.7 और 4.8)।
सगितुल विमान पर सेरिबैलम को काटें दो सेरिबेलर गोलार्द्धों को वर्मिस के स्तर पर अलग करने के लिए। प्रत्येक गोलार्द्ध(चित्रा 2एफ-जी)से 5 स्लाइस प्राप्त करने के लिए sagittal अनुभागिंग प्रदर्शन करते हैं ।
सीबीआर या सीबीएल (क्रमशः दाएं और बाएं सेरिबैलम के लिए) के रूप में vermis से सभी स्लाइस का नाम दें और वर्गों की पहचान करने के लिए अरबी नंबरों का उपयोग करें। सभी वर्गों को निश्चित या बारी-बारी से जमे हुए लेबल करें और संग्रह(चित्रा 2)के लिए एक तस्वीर लें। फिर, नीचे वर्णित सभी स्लाइस को ठीक करें और फ्रीज करें।
कॉर्पस कैलोसम(चित्रा 2ए-बी)के माध्यम से सेरेब्रम के दो गोलार्द्धों को अलग करें और उन्हें कोरोनल विमान पर अकेले टुकड़ा करें। ऑप्टिक चियाम और मैमिलरी निकायों के बीच से गुजरने वाले विमान में पहला कट बनाएं, ललाट पालि, लौकिक ध्रुव, पूर्वकाल सिंगुलेट, पूर्वकाल सिंगोलेट, पूर्वकाल कॉमिस्योर, मेनेर्ट और बेसल गंगलिया के नाभिक के माध्यम से।
दूसरा कट लगभग 1 सेमी पीछे मैमिलरी निकायों से गुजरता है और बेसल गैंगलिया, पूर्वकाल थैलेसीमिया, उपथैलेमस और एमिग्डाला को उजागर करता है। प्रत्येक गोलार्द्ध के लिए 15 से 20 वर्गों को प्राप्त करने के लिए 1 सेमी स्लाइस प्राप्त करने के लिए पूर्वकाल और पीछे के क्षेत्रों को विच्छेदन करने के लिए स्लाइसिंग जारी रखें।
स्लाइस को एक सपाट सतह पर सेट करें। उन्हें पूर्वोत्तर दिशा में अपनी मूल स्थिति का पालन करना, ललाट से ऑक्सीपिटल ध्रुव तक, पिछले टुकड़े के साथ निरंतर हिस्से के साथ ऊपर की ओर सामना करना पड़ रहा है।
दोनों गोलार्द्धों से वर्गों की तुलना करके, प्रत्येक गोलार्द्ध से वैकल्पिक वर्गों का चयन करने के लिए तय या जमे हुए सामग्री के रूप में बनाए रखा जाएगा । ललाट और लौकिक लोब्स, सिंगुल, बेसल गंगलिया, मेनिटस के नाभिक बेसलिस, एमिएग्डाला, थैलेसीमिया, हिप्पोकैम्पस और एंटोराइनल कॉर्टेक्स, ओसिपिटो-टेम्पोरल जाइरस, पैरिटल और ऑक्सीपिटल लोब्स सहित हिस्टोपैथोलॉजी के लिए तय और संसाधित किए जाने वाले मुख्य खंडों को पहचानें।
एल (बाएं) या आर (दाएं) के रूप में एंटेरोपोस्टर अर्थों में सभी स्लाइस का नाम अरबी नंबरों के बाद और एक लेबल डाल दिया कि क्या टुकड़ा तय किया जाना है या जमेहुए (चित्रा 2A-D)। अनुभागों की पहचान करने के लिए, फोटो संग्रह के लिए एक तस्वीर लें। फिर, सेक्शन 7 और 8 में वर्णित सभी स्लाइस को ठीक करें और फ्रीज करें।

5. मस्तिष्क और जहाजों निरीक्षण और स्थूल रोग मूल्यांकन (नग्न आंखों के साथ)

मेनिंगियल परिवर्तन, फैलाना या स्थानीयकृत कॉर्टिकल शोष, हिप्पोकैम्पस शोष, वेंट्रिकुलर इज़ाफ़ा, सेरिबेलर शोष, ब्रेनस्टेम शोष, सबस्टेनिया निगरा पल्लोर, सफेद पदार्थ परिवर्तन (प्रकार और स्थान निर्दिष्ट) पर विचार करते हुए एक सामान्य स्थूल परीक्षा करें।
एथेरोस्क्लेरोसिस और ऑक्सक्लयूशन पर विचार करते हुए विलीस के सर्कल की जांच करें। 50% से अधिक के स्टेनोसिस के बिना एथरोमा की उपस्थिति में स्कोर = 1 असाइन करें, स्कोर = 2 यदि कम से कम एक धमनी 50% या उससे अधिक ऑक्लेडेड है, तो स्कोर = 3 यदि दो या अधिक धमनियां 50% या उससे अधिक ऑक्लेडेड⁴²हैं। अन्य इंट्राक्रैनियल जहाजों में पैथोलॉजी की उपस्थिति या अनुपस्थिति का मूल्यांकन करें।
पैरान्चिमल वैस्कुलर घावों का पता लगाने के लिए, मस्तिष्क गोलार्द्धों, सेरिबैलम और ब्रेनस्टेम की जांच करें। कमियों के घावों (व्यास और एलटी; 10 मिमी), इस्कीमिक या रक्तस्रावी इंफार्च और नकसीर (व्यास और 10 मिमी) पर विचार करें। यदि मौजूद है, तो मिलीमीटर, संख्या और स्थान में आकार निर्दिष्ट करें। इसके अलावा, सबराक्नॉइड हेमरेज की उपस्थिति या अनुपस्थिति पर विचार करें।

6. ऊतक गुणवत्ता नियंत्रण

नोट: Agonal कारक स्कोर (AFS) 0 और 2 के बीच पर्वतमाला और ऊतक की गुणवत्ता के मूल्यांकन में महत्वपूर्ण है । एएफएस निर्धारित करने के लिए, मृत्यु के समय (विशेष रूप से मस्तिष्क एसिडोसिस का निर्धारण करने वाली स्थितियों) और agonal राज्य (अचानक मृत्यु या लंबे समय तक पीड़ा) की अवधि के आसपास होने वाली नैदानिक स्थितियों पर विचार करें। यदि एएफएस और जीटी; 1, मस्तिष्क के ऊतक इष्टतम गुणवत्ता⁴³के नहीं हो सकते हैं। मस्तिष्क और सीएसएफ पीएचपर भी विचार करें; यदि पीएच एंड एलटी; 6, मस्तिष्क ऊतक इष्टतम गुणवत्ता^43,^,⁴⁴का नहीं हो सकता है .

सत्यापित करें कि मौत उन स्थितियों के कारण हुई है जो हाइपोक्सिया, लंबी एसिडोसिस, मैकेनिकल वेंटिलेशन, बहु-अंग विफलता, तेज बुखार, गंभीर कपाल आघात, न्यूरोटॉक्सिक पदार्थों का घूस, गंभीर निर्जलीकरण, गंभीर हाइपोग्लाइसीमिया, मिर्गी की स्थिति और लंबे समय तक कोमा सहित मस्तिष्क के ऊतकों को नुकसान पहुंचा सकती हैं। यदि इनमें से एक शर्त मौजूद है, तो 1 बिंदु आवंटित करें।
agonal राज्य की अवधि सत्यापित करें(यदि मृत्यु 1 घंटे के भीतर होती है, तो मध्यवर्ती 1 और 24 घंटे के बीच होता है, धीमी गति से यदि agonal राज्य 1 दिन से अधिक रहता है)। यदि एक मध्यवर्ती या धीमी गति से मृत्यु होती है, तो 1 बिंदु आवंटित करें।
एएफएस स्कोर की गणना करें, और प्रत्येक पालि से और एक सेरिबेलर अनुभाग पर एक मस्तिष्क टुकड़ा पर एक सतह पीएच मीटर द्वारा एक इलेक्ट्रोड पीएच सुई और ऊतक पीएच द्वारा CSF पीएच को मापें।

7. ऊतक ठंड

सभी ऊतकों को 4 डिग्री सेल्सियस पर बर्फ में जमे रहने के लिए रखें। फिर, उन्हें जल्दी से फ्रीज करें। उन्हें एक प्रीफ्रॉज़न एल्यूमीनियम ट्रे पर रखें। उन्हें फ्लैट रखने के लिए एक इंटरलॉकिंग एल्यूमीनियम प्लेट के साथ कवर करें। उन्हें 3 मिनट के लिए -120 डिग्री सेल्सियस पर तरल नाइट्रोजन में रखो।
स्लाइस को उनके संबंधित पहचान कोड और स्लाइस नंबर के साथ लेबल किए गए प्लास्टिक बैग के अंदर रखें। प्लास्टिक की थैलियों को तीन क्रायोजेनिक बक्से (दाएं गोलार्द्ध, बाएं गोलार्द्ध और ब्रेनस्टेम के लिए) में विभाजित करें और -80 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।

8. ऊतक निर्धारण

स्लाइस को एक-एक करके धुंध में लपेटें, और स्लाइस को 10% फॉस्फेट बफर फॉर्मेलिन समाधान में रखें। 1 दिन के बाद, एक नए समाधान के साथ फॉर्मेलिन समाधान को प्रतिस्थापित करें। उन्हें 4 डिग्री सेल्सियस पर एक ठंडे कमरे में लगभग 5 दिनों के लिए छोड़ दें।
सभी स्लाइस को पूरे रखें और केवल हिप्पोकैम्पस और एमिग्डाला युक्त स्लाइस को दो भागों(चित्रा 3)में विभाजित करें। दोनों स्लाइस के ऊपरी हिस्से में फ्रंटल पालि (चित्र 3में R10a-L9a) शामिल होंगे; निचले हिस्सों में क्रमशः शामिल होंगे: (1) एमिग्डाला, लौकिक पालि और बेसल गैंगलिया (चित्रा 3बीमें एल9बी), और (2) हिप्पोकैम्पस और लौकिक पालि का हिस्सा (चित्रा 3एमें R10b)। यह विभिन्न संरचनाओं के बीच संबंध बनाए रखने के लिए किया जाता है।
क्रॉस लिंकिंग उत्पादों को धोने और हटाने के लिए कम से कम 2 दिनों के लिए फॉस्फेट बफर में सभी वर्गों को रखें।
नोट: प्रोटोकॉल यहां रोका जा सकता है ।

9. निर्जलीकरण, समाशोधन, पैराफिन एम्बेडिंग और स्लाइड तैयारी

एथिल अल्कोहल की बढ़ती सांद्रता 70% से 100%, जाइलीन और पिघले हुए पैराफिन मोम के दो सेट तैयार करें। निर्जलीकरण, समाशोधन प्रक्रिया और पैराफिन घुसपैठ के लिए स्वचालित प्रोसेसर में मस्तिष्क वर्गों प्लेस (मैक्रो (सेरेब्रम और सेरिबैलम स्लाइस) और सूक्ष्म नमूनों (ब्रेनस्टेम स्लाइस और अन्य छोटे नमूनों) के लिए दो अलग ऊतक प्रसंस्करण प्रोटोकॉल का उपयोग करें; तालिका 7)। एक धातु या प्लास्टिक मोल्ड पर पैराफिन मोम में ऊतक एम्बेड।
न्यूरोपैथोलॉजिकल लक्षण वर्णन⁴⁵ (तालिका 8)के लिए मोंटीन के सूचकांक को लागू करने वाली रुचि के सभी क्षेत्रों का मूल्यांकन करने के लिए स्लाइस करने के लिए अनुभागों का चयन करें। फिर, चयनित वर्गों को स्लाइस करें।
मैक्रोसेक्शन के लिए स्लेज माइक्रोटॉम और छोटे वर्गों के लिए रोटरी माइक्रोटॉम का उपयोग करें। हीमैटोक्सीलिन और ईओसिन (एच एंड ई) स्टेनिंग के लिए 5 माइक्रोन स्लाइस और अन्य स्टेनिंग और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री के लिए 8 माइक्रोन स्लाइस काटें। स्लाइस को तीन अलग-अलग तरह की हिस्टोलॉजिकल स्लाइड्स पर रखें: सबसे बड़े स्लाइस के लिए 8.5 सेमी x 11 सेमी, मीडियम स्लाइस के लिए 5 सेमी x 7.5 सेमी और सबसे छोटे लोगों के लिए क्लासिक 2.5 सेमी x 7.5 सेमी।
नोट: प्रोटोकॉल यहां रोका जा सकता है ।

10. डेपरफिनाइजेशन, हिस्टोलॉजिकल स्टेनिंग और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी)

जलीय डाई समाधान के साथ प्रतिक्रिया सक्षम करने के लिए deparaffinization प्रदर्शन करें। इसे जाइलीन का उपयोग करके और अल्कोहल एकाग्रता (हर कदम के लिए 5 मिनट) कम करना। आसुत पानी के साथ 5 मिनट के लिए रिहाइड्रेट करें।
वास्तुशिल्प और संरचनात्मक ऊतक असामान्यताओं, और सेलुलर आकृति विज्ञान का मूल्यांकन करने के लिए निम्नलिखित हिस्टोलॉजिकल स्टेनिंग्स का उपयोग करें: एच एंड ई (संवहनी सूक्ष्म घावों और सूजन के लिए), क्रेसिल वायलेट (एनआईएसएसएल; न्यूरोनल हानि के लिए), लक्सोल फास्ट ब्लू (एलएफबी; डेमेलिएशन के लिए), गैलियास (न्यूरिटिक प्लेक और न्यूरोपिल धागे के लिए)।
विशिष्ट लक्ष्य संरचनाओं की उपस्थिति को उजागर करने के लिए इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) का उपयोग करें। एंटी-न्यून और एंटी-जीएफएपी का उपयोग न्यूरोनल और ग्लियल डिब्बों की पहचान करने के लिए किया जाता है; 4G8, AT8, α-SYN और TDP-43 का उपयोग न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों(सामग्री की तालिका)में कुल प्रोटीन की पहचान करने के लिए किया जाता है।
1. 10 मिनट के लिए 3% एच₂O₂ के साथ प्रीट्रीट डेक्स्ड सेक्शन फिर पीबीएस में कुल्ला। 4G8, α-SYN, TDP-43 और NeuN एंटीजन के लिए साइट्रेट बफर 0.01 एम पीएच 6 (2, 1 और 2 मिनट के लिए क्रमिक रूप से माइक्रोवेव) के साथ पुनः प्राप्त उपचार करें; 4G8 और α-SYN के लिए 70% फॉर्मिक एसिड का उपयोग करें। 5% सामान्य बकरी सीरम में 30 मिनट के लिए प्रीइंक्यूबेट।
2. प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर इनक्यूबेट करें। दिन के बाद, कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए पीबीएस में 1:2 के कमजोर पड़ने पर माध्यमिक एंटीबॉडी (कल्पना + सिस्टम-एचआरपी लेबल बहुलक) के साथ इनक्यूबेशन से पहले पीबीएस में वर्गों कुल्ला ।
3. पीबीएस में कई बार धोएं और क्रोमोजन सिस्टम में डायामिनोबेन्जिडीन (लिक्विड डीएबी + सब्सट्रेट क्रोमोजेन सिस्टम) के साथ माइक्रोस्कोप (आवर्धन 4-10x) के तहत प्रतिक्रिया विकास को देखते हुए। अंत में पीबीएस में वर्गों को धोएं। डीपीएक्स बढ़ते के साथ हीमैटोक्सीलिन, डिहाइड्रेट और कवरलिप में अनुभागों को काउंटरटेन करें।
  नोट: तालिका 8 मानक प्रोटोकॉल का सारांश देती है। सभी वर्गों पर एच एंड ई धुंधला प्रदर्शन करते हैं, जबकि चयनित वर्गों पर विशेष/विशिष्ट दाग और प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है। चयनित मामलों में अतिरिक्त क्षेत्रों या प्रतिक्रियाओं की आवश्यकता होती है। सामग्री की तालिका आईएचसी के लिए उपयोग किए जाने वाले एंटीबॉडी का विवरण दिखाती है।

11. बेसिक न्यूरोपैथोलॉजिकल लक्षण वर्णन

नोट: गैर विशिष्ट मस्तिष्क ऊतक परिवर्तन, संवहनी विकृति, अल्जाइमर रोग (एडी) विकृति, गैर-एडी TAUopathies, सिन्यूक्लियिनोपैथी, टार डीएनए बाध्यकारी प्रोटीन (TDP-४३) विकृति और हिप्पोकैम्पस घावों का अध्ययन कर रहे हैं । कैमरे से जुड़ा ऑप्टिकल माइक्रोस्कोप का उपयोग पैरान्चिमल सूक्ष्म घावों का पता लगाने के लिए किया जाता है। हिस्टोलॉजिकल असेसमेंट न्यूरोपैथोलॉजी में प्रशिक्षित कर्मियों की एक ही टीम द्वारा किया जाता है, जिसमें न्यूरोलॉजी के प्रोफेसर, न्यूरोलॉजिस्ट और पैथोलॉजिस्ट शामिल हैं । यह एक संशोधित मोंटीन के दृष्टिकोण⁴⁵ (तालिका 8)पर भी आधारित है जिसमें शामिल हैं: (1) विषम गैर-एडी ताउपैथी जो ताऊ जमा से संबंधित फ्रंटो-टेम्पोरल लोब डिजनरेशन (एफटीएलडी) की विकृतिकारी पहचान का गठन करते हैं: पिक रोग, गैर धाराप्रवाह प्राथमिक प्रगतिशील Aphasia (ताऊ-nfPPA), प्रगतिशील सुपरन्यूक्लियर पाल्सी (पीएसपी)^४६,^,^४७ और कोर्टिको-बेसल डिजनरेशन (सीबीडी)^४८। इसके अलावा, गैर-एडी ताउपैथी में उम्र बढ़ने से संबंधित स्थितियां शामिल हैं और प्राथमिक आयु से संबंधित ताउपैथी (भाग)^49,उम्र से संबंधित ताऊ-ग्लियोपैथी (एआरटीएजी)^50,आर्गिरोफिलिक अनाज रोग⁴⁸जैसे कोई निश्चित नैदानिक महत्व नहीं है। (2) लेवी टाइप सिन्यूक्लिनोपैथी (एलटीएस) जो पार्किंसंस डिजीज (पीडी) और लेवी बॉडीज डिमेंशिया (एलबीडी) से संबंधित है । LTS के लिए खोज करने के लिए, निम्नलिखित पदानुक्रमित चरणों को लागू करें: पहले, घ्राण बल्ब, ब्रेनस्टेम, एमिग्डाला/अस्थायी प्रांतस्था; यदि पिछले क्षेत्र सकारात्मक हैं, तो लिम्बिक संरचनाओं (हिप्पोकैम्पल गठन, एंटोराहिनल कॉर्टेक्स, पूर्वकाल सिंगुलेट), मध्य ललाट जायरस, अवर पार्श्व लोबुल और ऑक्सीपिटल कॉर्टेक्स⁴⁵जोड़ें। यदि कॉर्टिकल एलबीडी की नैदानिक विशेषताएं मौजूद हैं (यानी, उतार-चढ़ाव और/या मतिभ्रम), पहले कदम के लिए लिम्बिक संरचनाओं और आइसोकॉर्टेक्स पर विचार करें । (3) टीडीपी-43 जमा,टीडीपी-43 जमा से संबंधित एफटीएलडी की पैथोलॉजिकल बानगी: फ्रंटो-टेम्पोरल डिमेंशिया (बीवीएफटीडी), अर्थ डिमेंशिया (एसडी या एसवीएफटीडी), टीडीपी-एनएफपीए और एफटीडी-मोटर न्यूरॉन डिजीज (एफटीडी-एमएनडी) का व्यवहार संस्करण। टीडीपी-43 के लिए आईएचसी निम्नलिखित वर्गों पर किया जाता है: एमिग्डाला, हिप्पोकैम्पस, एंटोराइनल कॉर्टेक्स और मिडिल फ्रंटल जाइरस; संदिग्ध नैदानिक एफटीएलडी वाले मामलों में, अन्य वर्गों⁵¹की जांच करने पर विचार करें ।

GFAP और NeuN के लिए एच एंड ई, एनआईएसएसएल, एलएफबी और आईएचसी का उपयोग करके चयनित वर्गों में गैर-विशिष्ट मस्तिष्क ऊतक परिवर्तनों का मूल्यांकन करें। न्यूरोनल रेरिफैक्शन, गुब्बारा न्यूरॉन्स, स्पॉन्जियोसिस, ग्लियोसिस, माइलिन हानि, भड़काऊ या ट्यूमर घुसपैठ की उपस्थिति या अनुपस्थिति पर विचार करें। इन परिवर्तनों के प्रचलित स्थान को निर्दिष्ट करें।
सूक्ष्म संवहनी घावोंका पता लगाने के लिए, कम से कम दो अर्धमंडलीय मैक्रो-सेक्शन (ललाट और अस्थायी लोब के साथ मैमिलरी निकायों (चारकॉट कट) से गुजरने सहित एच एंड ई और एलएफबी स्लाइड्स की जांच करें, बेसल गंगलिया, पूर्वकाल थैलेसीमिया, एमिग्डाला, और दूसरा ओसीपिटल पालि से गुजरता है), हिप्पोकैम्पस गठन का "जेनिकुलेट" अनुभाग, एक सेरिबेलर अनुभाग, और ब्रेनस्टेम के सभी तीन प्रमुख खंड (उपस्तंटिया निग्रा, लोकस कोरूलियस और डीएमएनवी के माध्यम से)।
1. आर्टेरियोलोस्क्लेरोसिस, लिपोहियालिनोसिस, पेरिवेंस्कुलर स्पेस फैलाव, सफेद पदार्थ हानि, लेप्टोमेनेनेरियल और/या पैरान्चिमल और/या केसिलरी सेरेब्रल एमिलॉयड एंजियोपैथी सहित छोटे पोत रोग का पता लगाएं । ग्रेडिंग (0-3) और प्रचलित स्थान^42,^,⁵²निर्दिष्ट करें। हीमोसाइड्रिन रिसाव, माइक्रोब्लेड और माइक्रोइनफेक्ट्स की उपस्थिति या अनुपस्थिति पर विचार करें।
2. पदानुक्रमित डेरामेकोर्ट की योजना (पोत दीवार परिवर्तन-छोटे पोत रोग-स्थूल इंफार्केक्ट) का उपयोग करके संज्ञानात्मक हानि के लिए संवहनी क्षति के योगदान का मूल्यांकन करें। इस मूल्यांकन के लिए एक ललाट और लौकिक पालि अनुभाग, बेसल गंगलिया और हिप्पोकैम्पस (स्कोर 0-20)³⁰पर विचार करें । इसके अलावा, इस संभावना का अनुमान लगाएं कि सेरेब्रल वैस्कुलर रोग ने वीसीइंग स्कोर (कम-मध्यवर्ती-उच्च) का उपयोग करके संज्ञानात्मक हानि में योगदान दिया, जो मध्यम से गंभीर आर्टेरियोस्क्लेरोसिस और एमिलॉयड एंजियोपैथी⁵³सहित ओसिस्पिटल लोब के अर्धमंडलीय स्थूल इंफार्क और छोटे पोत रोग पर विचार करके प्राप्त किया गया।
एमिलॉयड स्प्रेड के लिए आईएचसी (4G8) का उपयोग करके विज्ञापन पैथोलॉजी का मूल्यांकन करें। थाल के चरणों (1-5)^54,कुल एमिलॉयड स्कोरिंग (0-3)^45,और आकृति विज्ञान प्रति साइट (फैलाना, फोकल, कॉर्ड) को परिभाषित करें।
1. आईएचसी (एटी8) का उपयोग करके विज्ञापन ताऊ विकृति का मूल्यांकन करें और प्रति साइट प्रचलित आकृति विज्ञान (न्यूरोफिब्रिलरी उलझनों, न्यूरोपिल थ्रेड्स, न्यूरिटिक सजीले टुकड़े) का वर्णन करें। ब्रैक के चरण को परिभाषित करें (I-VI +; सकारात्मक संकेत ब्रैक के पदानुक्रम का पालन नहीं करने वाले हाइपरफॉस्फोरीलेटेड ताऊ पैथोलॉजी के अतिरिक्त क्षेत्रों की उपस्थिति को इंगित करता है)⁵⁵ और कुल स्कोरिंग (0-3)^45।
2. गैलियास स्टेनिंग और सीईएडी स्कोर (0-3)⁵⁶का उपयोग करके न्यूरिटिक सजीले टुकड़े का मूल्यांकन करें। फिर, एमाइलॉयड-बीBरौनक-सीईराड स्कोर (एबीसी स्कोर 0-3) का उपयोग करके एक विज्ञापन नैदानिक सिंड्रोम के अनुरूप न्यूरोपैथोलॉजिकल सुविधाओं की संभावना को परिभाषित करें: कोई भी-कम-मध्यवर्ती-उच्च^45।
प्रचलित स्थान और अजीब रूपात्मक चित्र निर्दिष्ट गैर-विज्ञापन ताऊ पैथोलॉजी की उपस्थिति या अनुपस्थिति को नोटिस करने के लिए AT8 आईएचसी का उपयोग करें। लौ के आकार या ग्लोबोस उलझनों, गोलाकार-गोलाकार समावेशन (यानी, पिक के शरीर)^57,न्यूरोपिल थ्रेड्स, डिस्ट्रोफिक न्यूराइट्स, आर्गिरोफिलिक अनाज जैसे न्यूरोनल समावेशन पर विचार करें; और ग्लियल समावेशन जैसे गुच्छेदार एस्ट्रोसाइट्स, कांटेदार एस्ट्रोसाइट्स, एस्ट्रोसाइटिक सजीले टुकड़े, कुंडलित निकाय, गोलाकार समावेशन^58,^,⁵⁹।
ऊपर नोट में क्षेत्रों पर LTS (लेवी निकायों, पीला शरीर और लेवी न्यूराइट्स) का पता लगाने के लिए α-syn IHC का उपयोग करें । सकारात्मकता के मामले में, घावों की गंभीरता का मूल्यांकन करने के लिए मैककीथ की ग्रेडिंग (0-4) लागू करें^60; फिर, समुद्र तट के चरणों (आई-IV) का उपयोग स्थलाकृतिक वितरण (घ्राण बल्ब, ब्रेनस्टेम प्रमुख, लिम्बिक प्रमुख, नियोकॉर्टिकल)⁶¹के लिए करें । एलबीडी और विज्ञापन पैथोलॉजी^{60, 61, 62}^,के बीच संबंधों को परिभाषित करने के लिए समुद्र तट और ब्रैक के^{चरणों}^,⁶²की तुलना करें।
ग्लियल साइटोप्लाज्मिक समावेशन (जीसीआई; गैर लेवी-प्रकार के ग्लियल सिन्यूक्लिनोपैथी) की उपस्थिति या अनुपस्थिति पर विचार करें जो मल्टीपल सिस्टम एट्रोफी (एमएसए) की पैथोलॉजिकल पहचान हैं और उनके प्रचलित स्थान⁶³निर्दिष्ट करते हैं।
ऊपर लिखे नोट में मौजूद इलाकों पर टीडीपी-43 जमा का पता लगाने के लिए टीडीपी-43 आईएचसी का इस्तेमाल करें। प्रति साइट प्रचलित आकृति विज्ञान की पहचान करें: न्यूरोनल साइटोप्लाज्मिक समावेशन (एनसीआई), डिट्रोफिक न्यूराइट्स समावेशन (डीएनएस), परमाणु समावेशन (एनआईआईएस)। पैटर्न को परिभाषित करें: ए (प्रमुख एनसीआई और डीएनएस: बीवीएफटीडी और एनएफपीए); बी (प्रमुख एनसीआइ: एफटीडी-एमएनडी); सी (प्रमुख लंबे डीएनएस: एसवीपीपीए और बीवीएफटीडी)^51,^,^64। विज्ञापन मामलों में टीडीपी-43 की उपस्थिति को परिभाषित करने के लिए नेल्सन की योजना का उपयोग^{करें 65,}^,⁶⁶.
सबीकुलम और सोममेर सेक्टर (CA1) से शुरू होने वाले हिप्पोकैम्पस का मूल्यांकन करें। राउमा के स्कोर (0-4): माइक्रोइंफेक्ट्स और मैक्रोइनफेक्ट्स के लिए क्रमशः 1-2 का उपयोग करें; 3-4 क्रमशः मध्यम और गंभीर न्यूरोनल हानि के अनुरूप, और हिप्पोकैम्पल शोष (हिप्पोकैम्पल स्क्लेरोसिस: एचएस)। रोग प्रोटीन जमा की उपस्थिति या अनुपस्थिति (आवृत्ति के घटने के क्रम में: पीटीएयू, टीडीपी-43, α-syn)⁶⁷इंगित करें।
न्यूरोपैथोलॉजिकल डायग्नोसिस को परिभाषित करें और डेटाबेस में सभी पैथोलॉजिकल डेटा दर्ज करें।
नोट: जिन कमरों में जैविक सामग्री और दानदाताओं के समझदार डेटा संग्रहीत किए जाते हैं, उन्हें हमेशा बंद कर दिया जाता है और सुरक्षा और गोपनीयता दोनों की गारंटी देने के लिए केवल अधिकृत कर्मियों को प्रवेश करने की अनुमति होती है । जमे हुए जैविक सामग्री को -80 डिग्री सेल्सियस पर लॉक फ्रीजर में संग्रहित किया जाता है, जबकि फॉर्मेलिन-फिक्स्ड पैराफिन-एम्बेडेड ऊतकों को कमरे के तापमान पर बंद कोठरी में संग्रहीत किया जाता है। ड्यूल मोटर फ्रीजर का इस्तेमाल किया जाता है और एक बैक-अप फ्रीजर भी मौजूद है । इसके अलावा, फ्रीजर हमेशा काम कर रहे है सुनिश्चित करने के लिए, वे एक 24/7 निगरानी प्रणाली है कि बंद एक अलार्म सेट के साथ प्रदान की जाती हैं । बिजली गुल होने की स्थिति में एक इमरजेंसी जनरेटर भी मौजूद है। प्रतिभागियों को उनकी गोपनीयता सुनिश्चित करने के लिए एक संख्यात्मक कोड के साथ अनाम किया जाता है; गैर-अधिकृत कर्मियों के लिए दानदाताओं की पहचान और उनके समझदार डेटा पर वापस जाना संभव नहीं है । सभी जानकारी पासवर्ड-संरक्षित डेटाबेस में एकत्र की जाती है; इसी तरह, इन डेटा की एक हार्ड कॉपी बंद अभिलेखागार में रखी जाती है।

Representative Results

मस्तिष्क दाताओं और मस्तिष्क संचयन डेटा
2014 में, दाता भर्ती दूसरे InveCe.Ab अनुवर्ती के दौरान शुरू हुई, जिसमें 1061 पात्र विषयों में से 1010 शामिल थे (प्रतिक्रिया दर: 93%; चित्रा 1)। InveCe.Ab देशांतर अध्ययन के संबंध में, 1010 प्रतिभागियों में से 290 (28.7%) दानदाताओं के रूप में पंजीकरण करने पर सहमत हुए (१६० पहले से ही पंजीकृत है और १३० जो पंजीकरण करने के लिए अपनी मंशा व्यक्त की) । शैक्षिक स्तर गैर दानदाताओं की तुलना में दानदाताओं में अधिक है (हमारे दानदाताओं के ६६% शिक्षा का एक मध्यम उच्च स्तर है: स्कूल के 8 या अधिक वर्षों), संस्कृति और शिक्षा के महत्व का संकेत है । कई "स्वस्थ" व्यक्तियों ने भी मस्तिष्क दान कार्यक्रम में रुचि दिखाई । हमारे "नियंत्रण" के अधिकांश स्वीकार करते है कि वे रोगग्रस्त और उनके रिश्तेदारों के साथ सहानुभूति कर सकते हैं, और किसी भी तरह न्यूरोलॉजिकल रोगों की एक बेहतर समझ के लिए अग्रणी अनुसंधान के लिए योगदान करना चाहते हैं । निस्वार्थ लोग हैं, जो नियमित रूप से जीवन के दौरान रक्त या मज्जा दान कार्यक्रमों में संलग्न मस्तिष्क दान के विचार के लिए और अधिक खुले हैं, के रूप में लोग हैं, जो पहले से ही मौत के बाद अंगदान करने के लिए सहमत हुए हैं । वे इस तथ्य से अवगत हैं कि भले ही जीवित प्राप्तकर्ता नहीं होगा, लेकिन उनका दान अनुसंधान के लिए बहुत महत्वपूर्ण होगा । मस्तिष्क दान में योगदान देने वाला एक अन्य कारक अंतिम संस्कार करने की प्राथमिकता है । वर्तमान में, एबीबी दाता आबादी में कुल 427 व्यक्ति (290 InveCe.Ab प्रतिभागी + 137 स्वयंसेवक या एएसपी गोलगी-रेडेली जराचिकित्सा अस्पताल के रोगी शामिल हैं), जिनमें से 75% 70 वर्ष या उससे अधिक उम्र के हैं। महिलाओं की स्पष्ट प्रधानता है (64%) और मानसिक रूप से अक्षुण्ण बुजुर्ग (लगभग 85%)। अब तक, 40 मृतक दानदाताओं (67% शव परीक्षण दर) में से 27 दिमाग काटे गए हैं; 13 विषयों को एबीबी को मौत की रिपोर्ट करने में विफलता, मस्तिष्क विनाश, खतरनाक संक्रमित रोगों और 1 सीजेडी मामले के लिए अग्रणी गंभीर चोटों सहित विभिन्न कारणों से ऑटोप्सी नहीं किया गया है; 4 विषयों ने उनकी सहमति रद्द कर दी है। अब तक, काटे गए 27 दिमागों में से 24 को एक निश्चित क्लिनिको-पैथोलॉजिकल निदान के साथ एक पूर्ण न्यूरोपैथोलॉजिकल लक्षण वर्णन प्राप्त हुआ, जबकि शेष 3 दिमाग अभी भी जांच के अधीन हैं(तालिका 3)। एबीबी से अतिरिक्त मस्तिष्क संचयन डेटा में शामिल हैं: मृत्यु पर औसत आयु (81 वर्ष); मतलब पोस्टमॉर्टम इंटरवल (10.37 घंटे); मतलब सीएसएफ पीएच (6.64); मतलब ऊतक पीएच (6.07); औसत मस्तिष्क वजन (1012.86 जीआर); एएफएस मृतक विषयों के 90% में 1 था।

न्यूरोफिजियोलॉजिकल बायोमार्कर (क्यूईजी)
क्यूईईजी बहुआयामी दृष्टिकोण का हिस्सा है। यह एक सीधी, गैर-आक्रामक और सस्ती विधि है, जिसमें हल्के न्यूरो-संज्ञानात्मक विकार (हल्के-एनसीडी या एमसीआई) से प्रमुख न्यूरो-संज्ञानात्मक विकार (मेजर-एनसीडी या डिमेंशिया) में रूपांतरण का पता लगाने की संभावना है। हमारे बहुआयामी दृष्टिकोण के माध्यम से, एक सादे QEEG परीक्षा का प्रदर्शन किया जाता है और डिमेंशिया के लिए बायोमार्कर के रूप में इसकी संभावित भूमिका का परीक्षण किया जाता है। ३६ मस्तिष्क दाताओं (18 सामान्य बुजुर्ग (NOLD), 11 हल्के-एनसीडी और 7 प्रमुख-एनसीडी की प्रारंभिक श्रृंखला पर हमारे डेटा; जिनमें से 9 एक निश्चित न्यूरोपैथोलॉजिकल निदान के साथ) से संकेत मिलता है कि हल्के एनसीडी (पी: 0,002) और NOLD (पी: 0,033) की तुलना में प्रमुख-एनसीडी में मतलब अल्फा ताल प्रतिशत काफी कम था। इसके विपरीत, धीमी ईईजी आवृत्तियों (theta/डेल्टा) NOLD की तुलना में प्रमुख-एनसीडी में काफी अधिक थे/हल्के-एनसीडी (चित्रा 4में उदाहरण के मामलों को देखें) । हमारी श्रृंखला में, ईईजी लय वितरण एटियोलॉजिकल निदान की परवाह किए बिना प्रमुख-एनडीसी रोगियों से NOLD/हल्के-एनसीडी विषयों में अंतर कर सकता है, यह सुझाव देता है कि मस्तिष्क लय घाव प्रकार की परवाह किए बिना अपक्षयी घावों के बोझ से प्रभावित होती है। दरअसल, 9 में से 7 जांच दिमाग मिश्रित विकृतियों के कारण पागलपन दिखाते हैं । विकृति की प्रकृति से संबंधित विशिष्टता कम प्रतीत होती है और मस्तिष्क विद्युत लय उनके आणविक प्रकृति (पोलोनी, एट अल. ईडी/पीडी 2019, लिस्बन, डेटा अप्रकाशित) की तुलना में घावों के बोझ और स्थलाकृति से अधिक प्रभावित प्रतीत होते हैं।

द्योतक मामले
एबीबी प्रोटोकॉल कुछ मामलों और शर्तों में उपयोगी और आवश्यक हो सकता है। एक उदाहरण असममित विकृति(चित्र 5) कीउपस्थिति है। हमारा प्रोटोकॉल इस प्रकार की विकृति की पहचान और उचित लक्षण वर्णन के लिए बहुत उपयुक्त है। अब तक, हम असममित भागीदारी के साथ 4 दिमाग की जांच की है, जिनमें से कुछ चित्रा 5में दिखाए गए हैं । स्थूल, दाईं ओर शोष(चित्रा 5ए)बाईं ओर (चित्रा 5बी)की तुलना में दाएं कोरोनल सेक्शन(चित्रा 5सी)में गंभीर वेंट्रिकुलर फैलाव के साथ एक मामले में मौजूदहै। एक और मामला सही गोलार्द्ध(चित्रा 5डी)के इनफारेक्ट को प्रदर्शित करता है और एक अन्य सही मैमिलरी बॉडी(चित्रा 5ई)का स्पष्ट शोष दिखाता है। सूक्ष्म स्तर पर, एफटीएलडी का एक मामला एक विषम टीडीपी-43 सकारात्मकता दिखाता है जो बाईं ओर(चित्रा 5एफ, जी)की तुलना में दाएं ललाट पक्ष में अधिक तीव्र है।

मैक्रोसेक्शन(चित्रा 6ए, सी)का उपयोग समग्र दृश्य प्राप्त करने के लिए किया जाता है। एलएफबी धुंधला 4G8 और AT8(चित्रा 6बी)दोनों के लिए myelin हानि (चित्रा 6डी)और आईएचसी की पहचान करने में मदद करता है नग्न आंखों के साथ गोलार्द्धों में इम्यूनोरेएक्टिविटी के वितरण का मूल्यांकन करने की अनुमतिदेताहै। एबीबी श्रृंखला में, संबंधित व्यक्तियों के दिमाग की तुलना में उपलब्ध हैं।

चित्रा 7में, होमोज़िगस जुड़वां बच्चों के दिमाग से वर्गों की सूक्ष्म छवियों को आसान तुलना के लिए साथ रखा जाता है (जुड़वां 1 (BB137): चित्रा 7ए, सी, ई, जी, आई, कश्मीर बनाम जुड़वां 2 (BB138: चित्रा 7B, D, F, H, J, L)। एक समान पिछले अध्ययन⁶⁸में, दोनों जुड़वां नैदानिक और न्यूरोपैथोलॉजिकल आकलन द्वारा तुलना की गई थी। जुड़वां कई etiologies के कारण प्रमुख-NCD के एक ही निदान की सूचना दी है, लेकिन वे दो साल के अलावा मर गया, ८३ की उंर में (मनोभ्रंश-७२ साल में शुरुआत) और ८५ (मनोभ्रंश-७६ साल में शुरुआत), क्रमशः । उनके दिमाग में बहुत ही न्यूरोपैथिक तस्वीर होती है, जिसमें एमिलॉयड एंजियोपैथी से जुड़ी उच्च विज्ञापन विकृति होती है। 4G8 इम्यूनोरेएक्टिविटी को पूरे कॉर्टेक्स(चित्रा 7ए, बी)और बेसल गैंगलिया(चित्रा 7सी, डी)में फैलाना, घने और कॉर्ड सजीले टुकड़े के साथ फैलाया जाता है। यह कॉर्टेक्स और सेरिबैलम(चित्रा 7ए, बी, जी-जे)के पैरान्चिमल और लेप्टोनेनेरियल दोनों जहाजों में भी स्पष्ट रूप से पता चला है। उच्च आवर्धन पर, कैपसीएए स्पष्ट रूप से स्पष्ट है(चित्र 7जी, एच)। AT8 इम्यूनोपोसिव सजीले टुकड़े, उलझनों और धागे दोनों दिमाग के पैरीटल कोर्टिस में फैलाना कर रहे हैं(चित्रा 7ई, एफ, एल)। एमिलॉयड और एनएफटी पैथोलॉजी बोझ के बारे में, जुड़वां 1 को थाल स्टेज 3 (मोंटीन ए 2) और एक ब्रैक स्टेज 5 (मोंटीन बी 3) माना जाता है, जबकि जुड़वां 2 को थाल स्टेज 5 (मोंटीन ए 3) और एक ब्रैक स्टेज 6 (मोंटीन बी 3) माना जाता है। वे शिक्षा और इसी तरह की जीवन शैली के एक ही साल था; हालांकि, एक (BB137) शादी कर ली थी और जल्द ही विधवा हो गई जबकि दूसरा सिंगल (BB138) था । उन्होंने एक ही शुरुआत और बीमारी के एक ही पाठ्यक्रम के साथ क्लिनिको-पैथोलॉजिकल परिवर्तनशीलता की विभिन्न डिग्री दिखाई लेकिन विभिन्न समय सीमा में। यह इस तथ्य की पुष्टि करता है कि, हालांकि आनुवंशिक घटक रोग के विकास में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है, एपिजेनेटिक और पर्यावरणीय घटक थोड़ा अलग अभिव्यक्तियों का निर्धारण करने में मौलिक हैं।

कुछ मामलों में, नैदानिक चित्र न्यूरोपैथोलॉजिकल सुविधाओं के अनुरूप नहीं है। चित्र 8में, दो अलग-अलग मामलों को चिकित्सकीय रूप से विज्ञापन मामलों के रूप में परिभाषित किया गया था; न्यूरोपैथोलॉजिकल विश्लेषण एक मध्यवर्ती विज्ञापन विकृति के अलावा, α-syn के लिए एक फैलाना सकारात्मकता दिखाते हैं। पहले मामले में, एक गंभीर एलटीएस (बीच IV) चित्र लेवी निकायों को पूरे जाइरस सिंगोली (चित्रा 8ए)और एसएन में न्यूरोमेलैनिन(चित्रा 8बी, सी)से घिरे साइटोप्लाज्मिक समावेशन के रूप मेंपाया जाता है। दूसरे मामले में, लेवी न्यूराइट्स से जुड़े लेवी निकायों को एमिग्डाला(चित्रा 8डी, ई)और मेनेर्ट के नाभिक(चित्रा 8एफ, जी)में लिम्बिक एलटीएस निदान का सुझाव देते हुए वितरित किया जाता है। दरअसल, उनकी आणविक प्रकृति के बजाय घावों की स्थलाकृति नैदानिक अभिव्यक्तियों का उत्पादन करती है।

चित्रा 1: Inve.Ce.Ab अध्ययन के प्रवाह चार्ट । बेसलाइन पर डिमेंशिया की समग्र व्यापकता 3% थी । अनुवर्ती कार्रवाई के दौरान, व्यापकता दर थी: 4.4% (1^st)^69,7.1% (2^nd),10.9% (3^rd)। आठ साल की घटना दर 15 पी/1000/वर्ष (९५% सीआई: 13-18 पी/1000/वर्ष) थी । दाता भर्ती २०१४ में शुरू (दूसरे अनुवर्ती के दौरान) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 2: सेरेब्रम (ए), सेरिबैलम (एफ) और ब्रेनस्टेम (एच) का विच्छेदन प्रोटोकॉल। विलिस और एकल गोलार्द्धों के सर्कल(ई)और(बी)में दिखाए गए हैं । सही(सी)और बाईं ओर(डी)के कोरोनल कटौती गिने और वैकल्पिक रूप से तय ("एफ") और जमे हुए ("सी") हैं । धनु सेरिबैलम सेक्शन(जी)और ब्रेनस्टेम अक्षीय वर्ग(I)दिखाए जाते हैं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 3: फिक्स्ड राइट (ए) और लेफ्ट (बी) फ्रंटो-टेम्पोरल पालि के कोरोनल स्लाइस दिखाए गए हैं ।
हिप्पोकैम्पस और लौकिक पालि (ए, R10b) सही टुकड़ा पर ललाट पालि (ए, R10a) से विभाजित हैं । विपरीत टुकड़ा पर, एमिग्डाला और बेसल गैंगलिया (बी, एल9बी) ललाट पालि (बी, एल 9ए) से विभाजित हैं। स्केल बार: 1.7 सेमी. कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4: एनओएलडी और प्रमुख-एनसीडी विषयों में सापेक्ष स्पेक्ट्रल बिजली वितरण। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 5: असममित विकृतियों के प्रतिनिधि चित्र। (A)पहला मामला: सही शोष के साथ मस्तिष्क । कोरोनल स्लाइस(बी)और(सी)दाएं तरफा वेंट्रिकुलर फैलाव को विशेष रूप से वर्ग 10-12 (सी, तीर) में स्पष्ट दिखाते हैं। वर्गों (बी) और (सी) में, "एफ" जमे हुए (इतालवी में: सीओंगेलाटो)के लिए निश्चित और "सी"के लिए खड़ा है। (घ)दूसरा मामला: सही गोलार्द्ध का गंभीर इनफारेक्ट। (ई)तीसरा मामला: सही मैमिलरी बॉडी (तीर) का शोष । (एफ, जी) चौथा मामला: सूक्ष्म छवियां फ्रंटोटेम्पोरल डिमेंशिया के मामले में बाएं एक (एफ) की तुलना में ललाट अधिकार प्रांतस्था (जी) में अधिक तीव्र टीडीपी-43 इम्यूनोएक्टिविटी दिखाती हैं। स्केल बार: 183 माइक्रोन (एफ, जी)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्र 6: मैक्रोसेक्शन। (A, C) फिक्स्ड फ्रंटो-टेम्पोरल लोब (ए) और ताजा पार्श्व पालि (सी) के कोरोनल स्लाइस। (ख)हिस्टोलॉजिकल फ्रंटो-टेम्पोरल सेक्शन इम्यूनोलेबल एटी8 एंटीबॉडी के साथ । इम्यूनोरेएक्टिविटी स्पष्ट रूप से कॉर्टेक्स पर वितरित की जाती है, लेकिन लौकिक पालि में अधिक तीव्र होती है। }Dहिस्टोलॉजिकल पैरीटल सेक्शन एलएफबी से सना हुआ है । तीर सफेद पदार्थ के डिमीलेशन के क्षेत्र को इंगित करता है। स्केल बार: 1.55 सेमी (बी, डी)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 7: जुड़वां। दो समरूप जुड़वां बच्चों के दिमाग के बीच तुलना: BB137 (ए, सी, ई, जी, मैं, कश्मीर) और BB138 (बी, डी, एफ, एच, जे, एल) । न्यूरोपैथोलॉजिकल तस्वीरें बहुत मिलती-जुलती हैं। (ए)और(ख)ओसीपिटल पालि में एमिलॉयड पट्टिका, लेप्टोमेनेनेरियल (तीर) और पैरान्चिमल (तीर) जहाजों के साथ फैलाना 4G8 सकारात्मकता दिखाते हैं । केशिलरी एमिलॉयड एंजियोपैथी (तारांकन) को उच्च आवर्धन(जी)और(एच)पर अच्छी तरह से पहचाना जाता है। 4G8 को बेसल गैंगलिया(सी, डी)और सेरिबैलम(I, J:तीर) के लेप्टोमीनिंगियल जहाजों के आसपास वितरित किया जाता है। AT8 इम्यूनोरेएक्टिविटी पार्शियल कॉर्टेक्स(ई, एफ)में उलझनों, धागे और सजीले टुकड़े (तीर) की पहचान करता है। Gallyas धुंधला(कश्मीर)AT8 एंटीबॉडी(एल)के रूप में neuritic सजीले टुकड़े से पता चलता है । स्केल बार: 470 माइक्रोन (ए-एफ; I-J); 90 माइक्रोन (जी-एच; कश्मीर-एल) । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 8: नैदानिक बनाम न्यूरोपैथोलॉजिकल निदान। इस आंकड़े में, दो अलग-अलग मामले सामने आते हैं जिनमें न्यूरोपैथोलॉजिकल निदान नैदानिक निदान से अलग होता है। α-syn के लिए इम्यूनोरेएक्टिविटी एक अप्रत्याशित परिणाम है। (A-C) पहला मामला: जाइरस सिंगोली (ए) एसएन (बी-तीर) में लेवी निकायों के सजातीय वितरण को दर्शाता है। एसएन के एक न्यूरॉन में, न्यूरोमेलैनिन से घिरा एक डबल लेवी शरीर (सी) दिखाया गया है। (घ-जी) दूसरा मामला: α-syn के लिए एक फैलाना सकारात्मकता एमिग्डाला (डी, ई) और मेनेर्ट नाभिक (एफ, जी) में पता लगाने योग्य है। सेलुलर निकायों और लेवी न्यूराइट्स (तारांकन) अच्छी तरह से चिह्नित हैं। स्केल बार: 154 माइक्रोन (ए, डी, एफ); 37 माइक्रोन (बी, ई, जी); 20 माइक्रोन (सी)। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

चित्रा 9: स्थानांतरण समझौता टेम्पलेट। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

		एन	%
लिंग	पुरुषों	607	45.9
लिंग	महिलाओं	714	54.1
जन्म पलटन	1935	236	17.8
	1936	219	16.6
	1937	264	20.0
	1938	305	23.1
	1939	297	22.5
वैवाहिक स्थिति	शादीशुदा	872	66.1
	सहवास	13	1.0
	अलग/तलाकशुदा	29	2.2
	विधवा	325	24.6
	एकल	80	6.1
प्राथमिक जीवन व्यवसाय	ब्लू कॉलर कार्यकर्ता	666	50.6
	सफेदपोश कार्यकर्ता	459	34.9
	गृहिणी	191	14.5
शिक्षा के वर्ष	≤5 साल	754	57.2
शिक्षा के वर्ष	5 साल	565	42.8

तालिका 1: InveCe.Ab अध्ययन प्रतिभागियों की सामाजिक-जनसांख्यिकीय विशेषताएं।

समावेशन मानदंड	बहिष्कार मापदंड
18 वर्ष और उससे अधिक आयु के सभी व्यक्ति	जो लोग स्पष्ट रूप से दान से इनकार करते हैं
अब्बीतेग्रासो के क्षेत्र के भीतर रहने वाले लोग	जो लोग लोम्बार्डी क्षेत्र से बाहर रहते हैं
स्वयंसेवक जो अपने दम पर सहमति देते हैं	संभावित दाता और NOKs के बीच विसंगतियों मस्तिष्क दान के बारे में इच्छाओं
NOK की अनुमति के साथ निर्णय लेने में असमर्थ विषय	ऐसी स्थितियां जो मस्तिष्क की स्थिरता को बहुत नष्ट कर देती हैं
एक प्राकृतिक कारण से मौत	जब तक कि प्रिन रोग की संभावना को बाहर नहीं रखा गया है, तब तक & 2 साल का नैदानिक पाठ्यक्रम
	हत्या या आत्महत्या की वजह से मौत, एक कोरोनर रिपोर्ट की जरूरत के साथ
	पोस्टमार्टम अंतराल और जीटी 30 घंटे

तालिका 2: मस्तिष्क दान के लिए मानदंड।

एन°	लिंग	कोड बीबी	कोड इनवेस	उम्र	एडू (वर्ष)	रोग संबंधी निदान	सीडीआर	एएफएस	प्रधानमंत्री (घंटे)	पीएच ऊतक	पीएच शराब	न्यूरोपैथोलॉजिकल डायग्नोसिस
1	एफ	बीबी 37		87	5	विज्ञापन (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	5	2	29	एन डी	एन डी	उच्च विज्ञापन पैथोलॉजी, मॉडरेट एसवीडी, टीडीपी 43 +, सीटीएक्स एलटीएस, एचएस
2	एफ	बीबी 105		94	5	विज्ञापन के कारण मेजर-एनसीडी	5	1	5	5.72	6.78	उच्च विज्ञापन पैथोलॉजी, हल्के एसवीडी, एचएस
3	एफ	बीबी 137		83	3	कई एटिओलॉजी (एडी-वीएडी) के कारण मेजर-एनसीडी	5	1	16	एन डी	एन डी	उच्च विज्ञापन पैथोलॉजी, मॉडरेट एसवीडी, ऑक्सीपिटल इनफार्क, सीएए-कैपेका
4	एम	बीबी 181		71	13	विज्ञापन (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	5	2	3	एन डी	एन डी	गंभीर एलटीएस (बीच चतुर्थ), मध्यवर्ती विज्ञापन पैथोलॉजी, माइल्डएसवीडी, एमकेएए
5	एम	बीबी 115	मैं 636	78	18	विज्ञापन के कारण मेजर-एनसीडी	5	1	6	एन डी	एन डी	मध्यवर्ती विज्ञापन, मॉडरेट एसवीडी, सूजन, आईएलबीडी (बीच आईआईए), एचएस
6	एफ	बीबी 23	मैं 65	79	3	संवहनी रोग के कारण मेजर-एनसीडी	5	1	14	एन डी	एन डी	गंभीर और व्यापक सीएए, मध्यवर्ती विज्ञापन विकृति
7	एम	बीबी 102	मैं 412	79	8	संवहनी रोग के कारण मेजर-एनसीडी	3	1	8	एन डी	एन डी	वैस्कुलर डिमेंशिया, आईएलबीडी
8	एम	बीबी 224	मैं 16	80	3	कई एटिओलॉजी के कारण मेजर-एनसीडी	5	1	11	एन डी	5.99	मॉडरेट एसवीडी, कम विज्ञापन पैथोलॉजी, आईएलबीडी (बीच आईआईए), एचएस
9	एफ	बीबी 47		78	5	मेजर-एनसीडी कई इटियोलॉजी (एलबीडी-वीएडी बीपीएसडी)	5	0	8	एन डी	एन डी	उच्च विज्ञापन पैथोलॉजी, बीजी ताऊ पैथोलॉजी, ARTAG, हल्के एसवीडी, एचएस
10	एफ	बीबी 153	मैं 965	79	5	हल्के एनसीडी (व्यापक मेटास्टेसिस के साथ पेट के कैंसर के कारण मौत)	0.5	1	8	एन डी	6.73	कम विज्ञापन पैथोलॉजी, मॉडरेट बीजी-एसवीडी
11	एम	बीबी 118	मैं 1211	79	13	NOLD (जिगर के कैंसर के कारण मौत)	0	2	3	एन डी	6.51	मॉडरेट एसवीडी
12	एम	बीबी 236	मैं 521	80	3	विज्ञापन (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	4	1	15	एन डी	6.15	उच्च विज्ञापन पैथोलॉजी, गंभीर बीजी-एसवीडी (कई माइक्रोबनेद), एचएस
13	एफ	बीबी 138		85	3	कई एटिओलॉजी (एडी-वीएडी बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	4	0	15	एन डी	6.75	उच्च विज्ञापन पैथोलॉजी, मॉडरेट एसवीडी, सीएए, लिम्बिक टीडीपी43
14	एम	बीबी 109	मैं 876	79	8	NOLD (ब्रेन ट्यूमर के कारण मौत - GBL)	0	1	16	एन डी	6.4	कम विज्ञापन पैथोलॉजी, आईएलबीडी (बीच IIa), हल्के एसवीडी
15	एफ	बीबी 271		84	8	विज्ञापन (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	4	1	2	एन डी	6.7	इंटरमीडिएट विज्ञापन, लिम्बिक एलटीएस, मॉडरेट बीजी-एसवीडी, एमकेएए, टीडीपी
16	एफ	बीबी 71	मैं 1080	79	8	NOLD (दिल की विफलता के कारण मौत)	0	0	6	एन डी	6.26	मॉडरेट बीजी-एसवीडी, आईएलबीडी, एमी टीडीपी, कम विज्ञापन
17	एफ	बीबी 189	मैं 858	80	5	विज्ञापन (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	3	0	20	एन डी	6.42	मध्यवर्ती विज्ञापन, CAA-capCAA, TDP43, उदारवादी बीजी-एसवीडी, एचएस
18	एफ	बीबी 278	मैं 924	80	5	एलबीडी (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	3	1	5	6.02	7.05	मध्यवर्ती विज्ञापन, लिम्बिक एलटीएस (बीच चतुर्थ), लिम्बिक टीडीपी, एचएस
19	एफ	बीबी 247		104	8	कई इटियोलॉजी (शायद मिश्रित विकृति) के कारण मेजर-एनसीडी	3	0	6	6.48	7.22	ताऊ पैथोलॉजी (भाग-ARTAG), एचएस
20	एम	बीबी 85	मैं 19	83	10	एलबीडी (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	3	1	9	6.26	7.3	गंभीर लिम्बिक एलटीएस, मध्यवर्ती विज्ञापन, मॉडरेट एसवीडी, गंभीर सीएए-कैपेका, एचएस
21	एफ	बीबी 14	मैं 222	82	8	कई एटिओलॉजी (एडी-वीएडी) के कारण मेजर-एनसीडी	2	1	11	5.59	6.4	इंटरमीडिएट विज्ञापन पैथोलॉजी, मॉडरेट एसवीडी
22	एफ	बीबी 282		76	8	मेजर फ्रंटोटेम्पोरल एनसीडी (एनएफपीपीए बीपीएसडी)	3	1	10	6.07	6.39	टीडीपी (टाइप ए), आईएलबीडी, मॉडरेट एसवीडी, कम विज्ञापन, एचएस
23	एफ	बीबी 154	मैं 1079	80	5	NOLD (व्यापक मेटास्टेसिस के साथ कैंसर के कारण मौत)	0	1	5	6.49	6.9	मॉडरेट एसवीडी, सीएए, कम एडी, लिम्बिक इंसेफेलाइटिस
24	एफ	बीबी 290		65	13	प्रमुख फ्रंटोटेम्पोरल एनसीडी (बीवीएफटीडी बीपीएसडी)	5	1	12	5.73	6.42	टीडीपी (टाइप ए)
25	एफ	बीबी 210		89	8	विज्ञापन (बीपीएसडी) के कारण मेजर-एनसीडी	5	1	15	5.94	6.4	प्रगति पर
26	एम	बीबी 293		75	18	मेजर फ्रंटोटेम्पोरल एनसीडी (बीवीएफटीडी बीपीएसडी)	5	1	8	6.14	6.83	प्रगति पर
27	एफ	बीबी 99	मैं 1370	79	9	NOLD (सेप्टिक सदमे के कारण मौत)	0	2	14	6.3	7.12	प्रगति पर
	M/F			मतलब	मतलब		मतलब	मतलब	मतलब	मतलब	मतलब
	0.5			81	7.7		3.2	1.0	10.4	6.1	6.6

तालिका 3: एबीबी श्रृंखला का नैदानिक/न्यूरोपैथोलॉजिकल निदान । बी बी: ब्रेन बैंक; edu (yrs): शैक्षिक वर्ष; सीडीआर: क्लीनिकल डिमेंशिया रेटिंग (0 = नो डिमेंशिया; 0.5 = हल्के संज्ञानात्मक हानि; 1= हल्के डिमेंशिया; 2 = मध्यम मनोभ्रंश; 3 = गंभीर मनोभ्रंश; 4 = बहुत गंभीर मनोभ्रंश; 5 = टर्मिनल डिमेंशिया); एएफएस: Agonal फैक्टर स्कोर; प्रधानमंत्री (hrs): पोस्टमार्टम का समय; nd: नहीं किया; M/F: पुरुष/महिलाएं; बीपीएसडी: डिमेंशिया के व्यवहार और मनोवैज्ञानिक लक्षण; VaD: संवहनी मनोभ्रंश; NOLD: सामान्य बुजुर्ग; GBL: ग्लियोब्लास्टोमा; NFPPA: गैर धाराप्रवाह प्राथमिक प्रगतिशील Aphasia; bvFTD: फ्रंटोटेम्पोरल डिमेंशिया का व्यवहार संस्करण; एसवीडी: छोटे पोत रोग; एलटीएस: लेवी प्रकार सिन्यूक्लिनोपैथी; एचएस: हिप्पोकैम्पल स्क्लेरोसिस; सीएए: सेरेब्रल एमिलॉयड एंजियोपैथी; कैपेका: केशिका सीएए; mCAA: मेनिंगियल सीएए; ILBD: आकस्मिक लेवी शरीर रोग; बीजी: बेसल गंगलिया; ARTAG: उम्र से संबंधित ताऊ खगोल-Gliopathy; भाग: प्राथमिक आयु से संबंधित TAUopathy; एमी: अमिग्डाला।

डोमेन	टेस्ट नाम
अवसाद	महामारी विज्ञान अध्ययन अवसाद स्केल (सीईएस-डी) के लिए केंद्र [2]
वैश्विक अनुभूति	मिनी मेंटल स्टेट एग्जामिनेशन (एमएमएसई) [1]
मौखिक और दृश्य स्मृति	फ्री और क्यूड चुनिंदा रिमझूवियों का टेस्ट [3]
	कोर्सी टेस्ट [4]
	रे-ओस्टरीथ कॉम्प्लेक्स फिगर (आरओसीएफ) रिकॉल [5]
ध्यान/साइकोमोटर गति	ट्रेल बनाने एक [6]
ध्यान/साइकोमोटर गति	ध्यान देने योग्य मैट्रिस [4]
भाषा अर्थ स्मृति	अर्थ मौखिक प्रवाह (रंग, जानवर, फल, शहर) [4]
कार्यकारी कार्य	ट्रेल बनाने बी [6]
कार्यकारी कार्य	रेवेन के रंगीन मैट्रिस [7]
विसुओस्पेटियाल क्षमताएं	घड़ी ड्राइंग टेस्ट (सीडीटी) [8]
	रे-ओस्टरीथ कॉम्प्लेक्स फिगर (आरओसीएफ) कॉपी [5]

तालिका 4: मस्तिष्क दाताओं के लिए न्यूरोसाइकोलॉजिकल मूल्यांकन।

चयापचयों

पूरा रक्त गिनती

कोलेस्ट्रॉल एचडीएल और एलडीएल

ट्राइग्लिसराइड्स

ग्लूकोज

ग्लाइकैटेड हीमोग्लोबिन (एचबीए1सी)

होमोसिस्टीन

कोबालामिन (विटामिन बी 12)

फोलेट

एल्बुमिन

यूरिया

क्रिएटिनिन

ट्रांसअमिनेस (एएलटी और ईएसटी)

गामा ग्लूटामिल ट्रांसफरेज

थायराइड उत्तेजक हार्मोन (टीएसएच)

विटामिन डी (25-हाइड्रोक्सी-विटामिन डी)

सी-रिएक्टिव प्रोटीन (सीआरपी)

इलेक्ट्रोलाइट्स

तालिका 5: मस्तिष्क दाताओं के लिए मेटाबोलिक पैनल।

जीन नाम	डीबीएसएनपी
एपोलीपोप्रोटीन ई (एपीओई)	रु429358
एपोलीपोप्रोटीन ई (एपीओई)	रु7412
कैटालस (कैट)	रु1001179
सुपरऑक्साइड डिस्म्यूट्स 2 (एसओडी 2)	रु4880
एंजियोटेंसिनोजेन (एजीटी)	रु699
सिरतुइन 2 (एसआईआरटी2)	रु10410544
बाहरी माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली 40 (TOMM40) का ट्रांसलोकेस	रु2075650
ब्रिजिंग इंटीग्रेटर 1 (BIN1)	रु7561528
कैटेकोल-ओ-मिथाइलट्रांसफेरेज (COMT)	रु4680
मेथिलीनेटट्राहाइड्रोफोलेट रिडक्टेस (एमटीएचएफआर)	रु1801133
मेथिलीनेटट्राहाइड्रोफोलेट रिडक्टेस (एमटीएचएफआर)	रु1801131
मस्तिष्क व्युत्पन्न न्यूरोट्रोफिक फैक्टर (बीडीएनएफ)	रु6265
सोल्यूट कैरियर परिवार 6, सदस्य 4 (SLC6A4 या 5HTT)	हाइड्रोक्सीट्रीप्टामाइन ट्रांसपोर्टर जीन से जुड़े बहुरूपिक क्षेत्र (5-एचटीटीएलपीआर)
सोल्यूट कैरियर परिवार 6, सदस्य 4 (SLC6A4 या 5HTT)	रु25531

तालिका 6: SNPs InveCe.Ab मस्तिष्क दाताओं के लिए विश्लेषण किया ।

प्रक्रिया	समाधान	अवधि
		मैक्रो नमूने	माइक्रो नमूने
निर्धारण	10% बफर फॉर्मलिन	4 डिग्री सेल्सियस पर 8 दिन	4 डिग्री सेल्सियस पर 8 दिन
धोने	फॉस्फेट बफर	कमरे के तापमान पर 2-15 दिन	कमरे के तापमान पर 2-15 दिन
धोने	एच₂ओ वॉश	2-3 घंटे, नल का पानी	2-3 घंटे, नल का पानी
निर्जलीकरण	एथिल अल्कोहल 70%	24 घंटे	8 घंटे
निर्जलीकरण	एथिल अल्कोहल 80%	24 घंटे	4 घंटे
निर्जलीकरण	एथिल अल्कोहल 90%	60 घंटे (आमतौर पर सप्ताहांत में)	4 घंटे
निर्जलीकरण	एथिल अल्कोहल 95%	12 घंटे	4 घंटे
निर्जलीकरण	एथिल अल्कोहल 95%	12 घंटे	4 घंटे
निर्जलीकरण	एथिल अल्कोहल 100%	6 घंटे	4 घंटे
निर्जलीकरण	एथिल अल्कोहल 100%	6 घंटे	4 घंटे
समाशोधन	जाइलीन I	12 घंटे	10 घंटे
समाशोधन	जाइलीन द्वितीय	12 घंटे	10 घंटे
घुसपैठ	पैराफिन I	12 घंटे	11 घंटे
घुसपैठ	पैराफिन द्वितीय	12 घंटे	11 घंटे
एम्बेडिंग	पैराफिन वैक्स

तालिका 7: एबीबी ऊतक प्रसंस्करण प्रोटोकॉल।

क्षेत्र	एच एंड ई	क्रेसिल वायलेट	एलएफबी	गैलियास	4जी8	एटी8	α-SYN	टीडीपी-43	न्यून	जीएफएपी
ब्रेनस्टेम
मेडुला- वागस के डॉरसल मोटर न्यूक्लियस	एक्स					एक्स	एक्स
पोन्स - लोकस कोरूलियस	एक्स					एक्स	एक्स
मिडब्रेन - सुस्तातिया निग्रा	एक्स				एक्स	एक्स	एक्स
सेरिबैलम
सेरिबेलर कॉर्टेक्स और डेंटेट न्यूक्लियस	एक्स	एक्स	एक्स		एक्स
सेरेब्रम
मध्य ललाट जायरस	एक्स	एक्स	एक्स		एक्स	एक्स	एक्स	एक्स
बेसल गंगलिया + मेनेर्ट के नाभिक	एक्स	एक्स	एक्स		एक्स				एक्स	एक्स
सिंगुलेट, पूर्वकाल	एक्स	एक्स	एक्स		एक्स		एक्स		एक्स	एक्स
एमिग्डाला	एक्स					एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स
थैलेसीमिया और सबथैलेमिक न्यूक्लियस	एक्स					एक्स
सुपीरियर और मिडिल टेम्पोरल जायरी	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स		एक्स	एक्स
हिप्पोकैम्पस और एंटोरिनल कॉर्टेक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स
अवर पार्श्व लोब्यूल	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स	एक्स
ऑक्सीपिटल कॉर्टेक्स	एक्स		एक्स		एक्स	एक्स	एक्स
घ्राण बल्ब	एक्स						एक्स

तालिका 8: मूल्यांकन क्षेत्र, धुंधला और इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री।

Discussion

प्रोटोकॉल में महत्वपूर्ण कदम
हमारा उद्देश्य देशांतर अवलोकन से प्राप्त विस्तृत इतिहास के साथ विषयों से आने वाले अच्छी गुणवत्ता वाले ऊतकों को प्राप्त करना, विशेषता और संग्रहीत करना है। इस लक्ष्य तक पहुंचने के लिए, निम्नलिखित प्रमुख पहलुओं से निपटना आवश्यक है। जैसा कि ऊपर वर्णित है, प्रोटोकॉल दानदाताओं की भर्ती के साथ शुरू होता है, जो पहला महत्वपूर्ण कदम है । फिर, यह आवश्यक है कि दानदाता अनुवर्ती कार्यक्रम जारी रखें और मस्तिष्क के वास्तविक दान तक समय के साथ परियोजना के आसंजन को बनाए रखें। मौत के समय एबीबी स्टाफ के लिए यह जरूरी है कि पर्याप्त टिश्यू क्वालिटी के लिए महत्वपूर्ण होने के नाते 24 घंटे के भीतर ऑटोप्सी टीम को बुलाने के लिए तुरंत अधिसूचित किया जाए । मस्तिष्क गोलार्द्धों के ताजा काटने के लिए एक स्थिर हाथ और एक विशिष्ट प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है। धीमी ठंड के कारण सेलुलर क्षति से बचने और क्रायोस्टेट और ओमिक्स के लिए अच्छी गुणवत्ता वाले स्लाइस प्राप्त करने के लिए, यह महत्वपूर्ण है कि वे जल्दी जमे हुए हैं। फॉर्मेलिन समाधान (1 मिमी/घंटा) के प्रवेश की गति को ध्यान में रखते हुए, ऊतक एंटीजेनिटी को संरक्षित करने के लिए एकल स्लाइस के भिगोने वाले समय को अपने न्यूनतम रखा जाता है।

विधि का निवारण
ऊपर उल्लिखित महत्वपूर्ण चरणों को संबोधित करने के लिए हम निम्नलिखित दृष्टिकोण प्रदान करते हैं। दाता भर्ती और अनुवर्ती अप करने के लिए पालन: ऐसे कई कारक हैं जो शरीर के आंकड़े, शुद्धता और अखंडता को नुकसान पहुंचाने की आशंका या मृत्यु के बाद दर्द महसूस करने की संभावना सहित मस्तिष्क दान में बाधा डालते हैं। कुछ लोगों को इस बात की भी चिंता है कि शव परीक्षण किया जा सकता है, जबकि वे अभी भी जीवित हैं⁷⁰^,⁷¹. अंतिम संस्कार की व्यवस्था में व्यवधान और वित्तीय बोझ के बारे में चिंताएं भी^{मौजूद}हैं । इसके अलावा, पोस्टमॉर्टम प्रक्रियाओं के बारे में ज्ञान की एक चिकित्सा कर्मियों की कमी और संभावित दाताओं या उनके NOK की चिंताओं को दूर करने में असमर्थता पंजीकरण को हतोत्साहित कर सकते हैं । इन सभी कारकों नामांकित प्रतिभागियों की एक कम संख्या और समय के साथ दाता हानि की एक उच्च संभावना के साथ जागरूकता का एक कम स्तर का उत्पादन कर सकते हैं । दरअसल, दाता भर्ती कार्यक्रम जागरूकता फैलाने, विश्वास पैदा करने और लोगों को पंजीकरण और अनुवर्ती भागीदारी की उच्च दरों को बनाए रखने के लिए समझाने में कुशल होना चाहिए । हमारे अनुभव में, यह संभावित दानदाताओं के सावधानीपूर्वक चयन और बीबी के उद्देश्यों की पूरी व्याख्या के माध्यम से किया जाता है। हम शैक्षिक गतिविधियों और एक सहानुभूति दोनों स्वस्थ लोगों और न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों और उनके परिवारों से प्रभावित लोगों की आशंका और जरूरतों को संबोधित दृष्टिकोण प्रदान करते हैं । हम पाते है कि संभावित दाताओं और अधिक अपनी सहमति देने की संभावना है जब व्यक्ति में संपर्क किया । आमने-सामने का दृष्टिकोण आपसी विश्वास और सम्मान के आधार पर एक संबंध बनाता है जो मस्तिष्क दान और अनुवर्ती आकलन के लिए पंजीकरण का एक उच्च प्रतिशत प्राप्त करने के लिए मौलिक है । नैतिकता की एक मजबूत भावना के साथ एक उच्च प्रशिक्षित स्टाफ पहले संभावित दाता दृष्टिकोण, मौत के बाद मस्तिष्क दान की संभावना पर चर्चा, न्यूरोसाइंटिफिक अनुसंधान के लिए मानव मस्तिष्क के ऊतकों के मूल्य बताते हैं, और पोस्टमॉर्टम प्रक्रियाओं के बारे में किसी भी संदेह को स्पष्ट करता है । मुंह के अनुकूल शब्द भी उतना ही महत्वपूर्ण है। मस्तिष्क संचयन के बाद, शव को फिर से संकलित करने के लिए उचित ध्यान और देखभाल दी जाती है। शव का धीरे-धीरे इलाज कराकर मृत व्यक्ति के प्रति सम्मान और कृतज्ञता दिखाना जरूरी है। कुछ महीनों बाद, परिवार के सदस्यों द्वारा अनुरोध किए जाने पर न्यूरोपैथोलॉजिकल विश्लेषण के परिणामों को संवाद करने के लिए एक बैठक निर्धारित की जाती है।

मृत्यु और मस्तिष्क संचयन का समय: जब व्यक्ति स्वीकार करता है, तो वे दाता बन जाते हैं और 24 घंटे/दिन, 7 दिन/सप्ताह (एएसपी गोलगी-रेडेली जराचिकित्सा अस्पताल का रिसेप्शन नंबर जो हमसे जुड़ा हुआ है) से संपर्क करने के लिए एक नंबर के साथ एक पहचान पत्र दिया जाता है । इसके अलावा, अस्पताल में भर्ती होने की स्थिति में उपयोग किए जाने वाले रिश्तेदारों को चिपकने वाला टैग दिया जाता है। क्षेत्र की अंतिम संस्कार एजेंसियों को पहले शव को एबीबी सुविधाओं में लाने के लिए सूचित किया गया था, जहां शव परीक्षण टीम को बुलाया जाता है । ऑटोप्सी टीम एक पैथोलॉजिस्ट, एक न्यूरोलॉजिस्ट और/या एक न्यूरोबायोलॉजिस्ट, और एक शारीरिक कक्ष तकनीशियन से बना है, जो हर दिन सुबह 6 बजे से 11 बजे तक कॉल पर हैं; कुछ प्रशिक्षु छात्रों को भी अक्सर सहायता और तस्वीरें लेने के लिए मौजूद हैं ।

ताजा काटने की प्रक्रियाओं की सटीकता और स्थिरता एक ही दो ऑपरेटरों (एक न्यूरोलॉजिस्ट और एक पैथोलॉजिस्ट) की भागीदारी से सुनिश्चित की जाती है जिन्होंने विधि विकसित की है और न्यूरोपैथोलॉजी में कई वर्षों का अनुभव है। जब स्लाइस ठंड, वे एक पूर्वजनित एल्यूमीनियम ट्रे पर डाल रहे है और एक इंटरलॉकिंग एल्यूमीनियम प्लेट के साथ कवर करने के लिए उंहें अच्छी तरह से फ्लैट रखने के लिए । इसके तुरंत बाद, उन्हें -80 डिग्री सेल्सियस पर भंडारण करने से पहले, 3 मिनट के लिए तरल नाइट्रोजन में डाल दिया जाता है। तय किए जाने वाले स्लाइस को व्यक्तिगत रूप से धुंध में लपेटा जाता है, और 10% फॉस्फेट बफर फॉर्मेलिन समाधान में भिगोया जाता है, जिसे एक दिन के बाद प्रतिस्थापित किया जाता है। बाद में, उन्हें 5 अतिरिक्त दिनों से अधिक नहीं औपचारिक रूप से रखा जाता है; हालांकि, यह देखते हुए कि फॉर्मेलिन समाधान 1 मिमी/दिन में प्रवेश करता है, हम भिगोने वाले समय को और छोटा करना चाहते हैं।

विधि की सीमाएं
यहां वर्णित अनुसंधान विधि केवल एक सीमित भौगोलिक क्षेत्र को शामिल करती है, और दान कार्यक्रम में शामिल व्यक्तियों के पास विशेषताएं होती हैं जो पूरी तरह से सामान्य आबादी का प्रतिनिधित्व नहीं करती हैं। हालांकि स्वीकार्य से अधिक, 24 घंटे तक एक पोस्टमॉर्टम अंतराल कुछ प्रोटीन संरचनाओं, एंजाइमों और मस्तिष्क के ऊतकों के आरएनए में परिवर्तन का उत्पादन कर सकते हैं । एएफएस और पीएच का निर्धारण ऊतक गुणवत्ता⁷³ का निर्धारण करने के लिए पूरी तरह से पर्याप्त नहीं हो सकता है और हम आरएनए अखंडता के आधार पर ऊतक की गुणवत्ता को प्रमाणित करने के अन्य तरीके विकसित कर रहे हैं।

माइक्रोटोम काटने की प्रक्रिया के संबंध में, हालांकि शारीरिक संबंधों के पुनर्निर्माण के लिए बहुत उपयोगी है, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि मैक्रोसेक्शन का उपयोग सरल नहीं है और कुछ तकनीकी कठिनाइयों को प्रस्तुत करता है। हमारी विधि चुनौतीपूर्ण और समय लेने वाली है। लागत काफी अधिक है और धन हमेशा आसान नहीं है । धन मुख्य रूप से सार्वजनिक (एएसपी गोलगी-रेडेली जेरियाट्रिक अस्पताल) और निजी संसाधनों (गोलगी-सेन्सी फाउंडेशन), निजी दान, गैर-लाभकारी संगठनों (जैसे "फेडराज़ीन अल्जाइमर इटालिया" से आता है) और अनुदान भागीदारी।

मौजूदा/वैकल्पिक तरीकों के संबंध में एबीबी विधि का महत्व
शुरुआत में, हमारे मस्तिष्क दान कार्यक्रम InveCe.Ab देशांतर अध्ययन में भाग लेने वाले व्यक्तियों को लक्षित किया । नतीजतन, दान किए गए दिमाग वर्षों में एकत्र किए गए विस्तृत नैदानिक, जैविक और सामाजिक जानकारी के साथ होते हैं। एबीबी की ताकत इस विशिष्ट मूल से ठीक निकला है । दरअसल, सामाजिक और आनुवंशिक रूप से संबंधित लोगों के एक समूह का अध्ययन जो जैविक विशेषताओं और पर्यावरण जोखिम साझा सांख्यिकीय विश्लेषण को बढ़ाता है । इसके अलावा, अध्ययन में निम्नलिखित लाभ शामिल हैं: 1) समुदाय की जरूरतों की देखभाल और प्रदान करना ("पूछने से पहले देने" का कार्य): लोगों को एक मुफ्त आवधिक जांच प्राप्त होती है जिसमें सामान्य व्यवसायी को सूचित किया जाता है, हमारे सचिव का एक टेलीफोन नंबर परामर्श के लिए प्रदान किया जाता है, और गंभीर रूप से विकलांग लोगों को घर पर दौरा किया जाता है; 2) प्रतिभागियों को उलझाने, सार्वजनिक भूमिकाओं और आवधिक सेमिनारों (मस्तिष्क स्वास्थ्य, मस्तिष्क दान और सामान्य स्वास्थ्य से संबंधित) के संगठन के माध्यम से शैक्षिक गतिविधियों में सामान्य चिकित्सकों के साथ लोगों को उलझाने, और विषयगत पाठ्यक्रमों की योजना (जैसे बुजुर्गों के लिए सूचना प्रौद्योगिकी उपकरणों का उपयोग); 3) लोगों से मिलना और आमने-सामने का नजरिया अपनाना। ये सभी तत्व एबीबी परियोजना की ताकत का गठन करते हैं । इसके अलावा, परियोजना शामिल चिकित्सा कर्मियों की नैदानिक क्षमताओं में सुधार करती है, क्योंकि वे दोनों एंटेमोरमेम असेसमेंट और पोस्टमॉर्टम न्यूरोपैथोलॉजिकल मूल्यांकनों में अनुभव प्राप्त करते हैं। इस संबंध में, हम अल्पसंख्यक वृद्धावस्था अनुसंधान अध्ययन के बहुत ही विचित्र अनुभव का उल्लेख करना चाहेंगे । इस अध्ययन में शिकागो क्षेत्र में रहने वाले अफ्रीकी अमेरिकियों की एक सीमित और चयनित संख्या शामिल थी (1,357 पात्र विषयों में से 784: 57% की प्रतिक्रिया दर)। प्रतिभागियों को सालाना घर पर जाकर ब्रेन डोनेशन प्रोग्राम में शामिल होने के लिए कहा गया । यह अध्ययन मस्तिष्क दान कार्यक्रम (७८४ प्रतिभागियों में से ३५२ दानदाताओं नामांकित किया गया: ४४%), हालांकि शव परीक्षण दर काफी संतोषजनक (५३%)^७४नहीं था के लिए सकारात्मक प्रतिक्रिया के उच्च प्रतिशत प्राप्त करने के लिए हमारे लिए कुछ समानताएं प्राप्त करने के साथ एक असामान्य दृष्टिकोण पर आधारित है । "अल्पसंख्यक उम्र बढ़ने अनुसंधान अध्ययन" की तरह, हम शैक्षिक गतिविधियों और एक सहानुभूति दृष्टिकोण प्रदान करते हैं, उत्कृष्ट परिणाम प्राप्त करते हैं। विशेष रूप से, हमारी प्रतिक्रिया दर 93% है, नामांकन प्रतिशत 28.7% है, और इस समय ऑटोप्सी दर 67% है। इन दरों से पता चलता है कि परियोजनाओं को सीधे लोगों को उलझाने दान का एक अधिक पर्याप्त प्रतिशत है । अन्य मस्तिष्क दान कार्यक्रम, संभावित दानदाताओं के साथ संबंध बनाने में कम ध्यान देने के साथ, आम तौर पर कम नामांकन प्रतिशत होता है, लगभग 10-15% या उससे कम^73,^,⁷⁵होता है।

न्यूरोपैथोलॉजिकल विश्लेषण के साथ कुछ पिछले पलटन अध्ययन समाप्त होते हैं। इसके अलावा, मस्तिष्क बैंकों और भंडार के बहुमत रोग केंद्रित है और वहां स्वस्थ दाताओं से "नियंत्रण" दिमाग की कमी है "रोगग्रस्त" दिमाग की संख्या की तुलना में । केवल सीमित संख्या में बीबीएस जनसंख्या अध्ययनों पर आधारित होते हैं , जिनमें रोगग्रस्त और सामान्य दोनों विषय होते हैं ताकि वृद्धावस्था पथ^{73 , 74}^,^{76 , 77}^,⁷⁸^,⁷⁹^,^,⁸⁰⁷⁹^का⁸⁰अध्ययन किया जा सके . संयुक्त राज्य अमेरिका⁷⁴ में "अल्पसंख्यक उम्र बढ़ने अनुसंधान अध्ययन" और फिनलैंड⁷⁶ में "द वैंटा 85 + अध्ययन" जैसे कुछ अध्ययन हमारे समान हैं लेकिन वे पलटन की समाप्ति के साथ बाहर निकलते हैं। इसके बजाय, एबीबी के दान कार्यक्रम को भविष्य में एक लंबे समय के लिए जारी रखने के अनुरूप है, संभावित दाताओं को सूचीबद्ध करने और InveCe.Ab देशांतर अध्ययन के अंत के बाद भी अनुवर्ती कार्यक्रम निर्धारित करना । यह दृष्टिकोण हमारी भर्ती विधि "सूर्य स्वास्थ्य अनुसंधान संस्थान (श्री) मस्तिष्क दान कार्यक्रम" जो एक सेवानिवृत्ति समुदाय^७३के उद्देश्य से है के समान बनाता है । मस्तिष्क दान के लिए श्री प्रोटोकॉल दुनिया में सबसे कम मतलब पोस्टमॉर्टम अंतराल (3.92 घंटे) के साथ बहुत कुशल है। दुनिया के सबसे बड़े बीबीएस के समान, श्री प्रोटोकॉल ने मिडलाइन (सैसिटल प्लेन) में सेरेब्रम, सेरिबैलम और ब्रेनस्टेम को काट दिया, फिर एक आधा ताजा विच्छेदित किया जाता है और जैव रासायनिक अध्ययन के लिए जमे हुए होता है, जबकि दूसरा हिस्टोपैथोलॉजिकल मूल्यांकन के लिए फॉर्मेलिन में तय किया जाता है। हालांकि, श्री विच्छेदन प्रोटोकॉल की ताकत में से एक पूरे गोलार्द्ध के बजाय व्यक्तिगत स्लाइस का निर्धारण है। दरअसल, सतह और कोर के बीच विभिन्न निर्धारण ढाल के कारण, पूरे गोलार्द्ध को स्थिर करना इष्टतम नहीं है। इसके अलावा, कॉर्टिकल प्रोटीन फॉर्मेलिन समाधान के लंबे समय तक संपर्क में रहने से प्रभावित हो सकते हैं। इस प्रकार, कारण है कि हम व्यक्तिगत स्लाइस को ठीक करने का फैसला किया।

निर्णय जो पक्ष तय या जमे हुए है, एकवचन बैंक पर निर्भर करता है (हमेशा एक ही, बेतरतीब ढंग से सौंपा या सौंपा के आधार पर कि विच्छेदन का दिन अजीब है या भी)^31,^,^{32, 33,}^,^34,^,³⁵.³³^, इसलिए, प्रत्येक गोलार्द्ध पर जैव रासायनिक और हिस्टोपैथोलॉजिकल विश्लेषण अलग से आयोजित किया जाता है। जैसा कि कई न्यूरोलॉजिकल बीमारियां विषम हैं, हमारी बीबी ताजा नमूनों को टुकड़ा करने के लिए एक अनूठा प्रोटोकॉल प्रदान करती है: ब्रेनस्टेम से वैकल्पिक वर्ग और सेरिबैलम और सेरेब्रम के प्रत्येक गोलार्द्ध से निश्चित या जमे हुए सामग्री के रूप में बनाए रखा जाता है; एक गोलार्द्ध पर एक निश्चित टुकड़ा दूसरे गोलार्द्ध पर जमे हुए एक से मेल खाता है। हमारी विधि सभी जमे हुए सामग्री का एक पूर्ण हिस्टोलॉजिकल लक्षण वर्णन प्राप्त करने और दोनों पक्षों के सभी क्षेत्रों से परिणामों की तुलना करने का अवसर देती है। जैसा कि परिचय में कहा गया है, वर्णित विधि हमें मस्तिष्क के ऊतकों से यथासंभव अधिक से अधिक जानकारी प्राप्त करने की अनुमति देती है। इसके अलावा, एबीबी की विधि लगभग सभी ज्ञात मस्तिष्क प्रोटीनोपैथी और संवहनी विकृति सहित एक बुनियादी लेकिन पूर्ण न्यूरोपैथोलॉजिकल लक्षण वर्णन करती है। संज्ञानात्मक हानि निर्धारित करने में संवहनी चोटों की विवादास्पद भूमिका के कारण, हमने संवहनी भार^30,^,⁵³के लिए डबल स्कोरिंग का उपयोग करने का निर्णय लिया।

जैसा कि प्रोटोकॉल में बताया गया है, हम एक बहुविषयक दृष्टिकोण का उपयोग करते हैं। हालांकि यह एक समय लेने वाली और परिश्रम विधि है, हमारा मानना है कि यह अनुसंधान के लिए कई फायदे प्रदान करता है । उदाहरण के लिए, पिछले काम में, हमने यह प्रदर्शित किया कि एपीओई-ε4 एलील से जुड़े उच्च tHcy प्रति से, या एमटीएचएफआर C677T टीटी, स्मृति हानि⁸¹के बजाय कार्यकारी डिस्फंक्शन से संबंधित हो सकते हैं। इसलिए, न्यूरोपैथोलॉजिकल स्तर पर इस विशेष आनुवंशिक प्रोफ़ाइल वाले विषयों का मूल्यांकन करना दिलचस्प हो सकता है। यह एक उदाहरण है कि कैसे इस तरह के गहन अनुवर्ती हमारे बैंक में एकत्र जैविक सामग्री की जांच के माध्यम से सत्यापन योग्य नए अनुसंधान परिकल्पना बनाने में उपयोगी है । हमारे दृष्टिकोण के लाभ का एक और प्रदर्शन मूल्यांकन हम नियमित रूप से प्रदर्शन के बीच QEEG के शामिल किए जाने, अपनी मौलिकता और उपयोग की सापेक्ष आसानी के लिए है । दरअसल, ईईजी कॉर्टिकल पिरामिड न्यूरॉन्स⁸²से संबंधित डेन्ड्राइट्स की विद्युत क्षमता को रिकॉर्ड करके सेरेब्रल कॉर्टेक्स की सिनैप्टिक गतिविधि का पता लगाता है। क्यूईईजी को कॉर्टिकल सिनैप्टिक गतिविधि के आकलन के लिए बायोमार्कर माना जा सकता है जो अनुभूति⁸³से संबंधित है। विशेष रूप से, मस्तिष्क के पीछे के हिस्से में अल्फा लय में कमी कम आवृत्तियों (थीटा और डेल्टा लय) की सामान्य वृद्धि के साथ कॉर्टिकल कनेक्शन टूटने से संबंधित रही है। यह विचार किया जाना चाहिए कि अधिकांश नैदानिक सहसंबंध अध्ययन एक नैदानिक निदान पर आधारित हैं जो केवल एक संभावित है और एक निश्चित निदान नहीं है⁸⁴^,85 ,⁸⁶^,^,⁸⁷.⁸⁶ क्यूईईजी और एलटीएस वेरिएंट^{88 , 89}^,के बीच सहसंबंध और एफटीएलडी और एडी⁸³के बीच⁸³अंतर की जांच करने के लिए केवल बहुत कम लक्षित अध्ययनों ने क्यूईजी डेटा की तुलना न्यूरोपैथोलॉजिकल पिक्चर से की है । न्यूरोपैथोलॉजिकल निदान की परिभाषा के साथ हमारे अध्ययन को समाप्त करके, मस्तिष्क विद्युत गतिविधि पर की गई टिप्पणियों की सही व्याख्या करना संभव है। इसके अलावा, प्रत्येक विषय में धारावाहिक QEEG प्रदर्शन हम अंतर-व्यक्तिगत ईईजी तरंगों प्रक्षेपवक्र और न्यूरोपैथोलॉजिकल तस्वीर के साथ उनके सहसंबंधों को ट्रैक कर सकते हैं। समय के साथ कॉर्टिकल विद्युत गतिविधि के व्यक्तिगत संशोधनों के बाद प्रारंभिक मनोभ्रंश के लिए एक बायोमार्कर के रूप में इसके अर्थ की बेहतर समझ हो सकती है।

भविष्य के अनुप्रयोगों और विधि की दिशा
ऊतक वितरण को लागू करना हमारे मुख्य संभावित लक्ष्यों में से एक है। ऐसा करने के लिए, हमने जीसी फाउंडेशन (जराचिकित्सा) के निदेशक, पाविया विश्वविद्यालय से न्यूरोलॉजी के अकादमिक, जीसी फाउंडेशन और जेरियाट्रिक अस्पताल एएसपी गोलगी-रेडेली दोनों से न्यूरोलॉजी के एक अकादमिक सहित एक वैज्ञानिक आयोग की स्थापना की। मस्तिष्क के ऊतकों, हिस्टोलॉजिकल स्लाइड्स और अन्य जैविक नमूनों का वितरण करते समय, यह याद रखना महत्वपूर्ण है कि दानदाता अनुसंधान के लिए दान के लिए सहमत हुए। इसलिए सामग्री का वितरण विवेकपूर्ण ढंग से होना चाहिए, जैसा कि बीएनई आचार संहिता^४०में वर्णित है । सामग्री के लिए अनुरोध प्रस्तुत करने वाले किसी भी पक्ष को आवश्यक नमूने के प्रकार और मात्रा का संकेत देना चाहिए, अनुसंधान परियोजना का विवरण प्रदान करना चाहिए और नमूनों का उपयोग कैसे किया जाएगा, और जब भी संभव हो, पिछले प्रकाशनों के सबूत की आपूर्ति (स्थानांतरण समझौते के लिए, चित्रा 9देखें)। ब्रेन बैंक वित्तीय लाभ के लिए काम नहीं करता है। इसलिए, शोधकर्ताओं द्वारा भुगतान की गई फीस केवल ऊतक खरीद, प्रसंस्करण, भंडारण और वितरण के खर्चों को कवर करना चाहिए।

एक्सोम अनुक्रमण और ओमिक्स तकनीकों जैसे प्रोटेओमिक्स और ट्रांसक्रिप्टोमिक्स के साथ मामलों का विश्लेषण शुरू करने की योजना गति में हैं। हमारी वैकल्पिक नमूना पद्धति ओमिक्स अध्ययन दोनों गोलार्द्धों से हिस्टोलॉजिकल रूप से अच्छी तरह से परिभाषित ऊतकों पर प्रदर्शन करने की अनुमति देगी। इस दृष्टिकोण के माध्यम से, एक ही गोलार्द्ध के विभिन्न मस्तिष्क क्षेत्रों में और अन्य गोलार्द्ध के संबंधित क्षेत्रों में जीन सक्रियण के पैटर्न की तुलना करना संभव होगा, और हिस्टोपैथोलॉजी के साथ जीन सक्रियण को सहसंबंधित करने में सक्षम होगा। इस क्षेत्र में, डीप लर्निंग एप्लीकेशंस बहुत रुचि रखते हैं, जिनमें हिस्टोलॉजिकल स्लाइड्स का कंप्यूटरीकृत विश्लेषण और क्लीनिकल, हिस्टोलॉजिकल और ओमिक्स डेटा का अत्याधुनिक सहसंबंध शामिल है । कई अलग-अलग चरों के साथ-साथ अन्य संभावित तकनीकी अनुप्रयोगों के बीच अन्य सहसंबंधों की पहचान की जा सकती है। दोनों गोलार्द्धों से जमे हुए सामग्री की उपलब्धता जीन सक्रियण और प्रोटीन वितरण की एक सटीक स्थलाकृति की अनुमति देगा । यह स्वस्थ विषयों में भी विशेष रुचि का होगा, यह देखते हुए कि मस्तिष्क के कार्यों और कुछ बीमारियों दोनों विषम हैं।

इसके अलावा, हम अच्छी तरह से विशेषता मस्तिष्क दाताओं से सेल संस्कृतियों प्राप्त कर सकते हैं । दरअसल, काटे गए दिमाग के लेप्टोमेनिंग्स से सेल संस्कृतियां जीवित कोशिकाओं की आपूर्ति करती हैं जिनका उपयोग रोग या उम्र बढ़ने के तंत्र की आगे की जांच के लिए किया जा सकता है, प्रेरित प्लुरिपोटेंट स्टेम सेल (आईपीएससी) तकनीक के माध्यम से जिसमें लेएटोमेनेल फाइब्रोब्लास्ट को फिर से प्रोग्राम करना और उन्हें उन्नत मॉडल⁹⁰में तंत्रिका कोशिकाओं में अंतर करना शामिल है।

दिमाग की उम्र के रूप में, परिवर्तन के विभिन्न प्रोफाइल आणविक, सेलुलर और ऊतक स्तर पर हो सकते हैं। हर मस्तिष्क अद्वितीय है। प्रत्येक आंतरिक और बाहरी तनाव का जवाब देने का अपना तरीका है; कुछ विरोध करते हैं जबकि अन्य झुकते हैं और अलग विकृतियों को प्रदर्शित करते हैं। नैदानिक प्रस्तुति और न्यूरोपैथोलॉजिकल चित्र के बीच विसंगतियां अक्सर मौजूद होती हैं क्योंकि घावों की स्थलाकृति, उनकी आणविक प्रकृति के बजाय, नैदानिक प्रस्तुति निर्धारित करती है। सही और निश्चित निदान केवल न्यूरोपैथोलॉजिकल निष्कर्षों के साथ नैदानिक सिंड्रोम के संयोजन से प्राप्त किया जा सकता है जो अक्सर रोगों के रोगजनकों को जानने के लिए आवश्यक महत्वपूर्ण एटियोलॉजिकल सुराग जोड़ते हैं। यूरोप में, न्यूरोपैथोलॉजिकल निदान के लिए एक मानक दृष्टिकोण बनाने का प्रयास है। हमारा नैदानिक प्रोटोकॉल मस्तिष्क बैंकिंग⁹¹के लिए न्यूरोपैथोलॉजिकल निदान पर हाल ही में प्रकाशित दिशा - निर्देशों का लगभग पूरी तरह से पालन करता है। यह हमें पहले इतालवी ब्रेन बैंक की स्थापना के संभावित लक्ष्य के साथ, अच्छी तरह से प्रलेखित मस्तिष्क ऊतक को इकट्ठा करने और साझा करने की अनुमति देगा। दरअसल, इटली में मस्तिष्क भंडार नहीं बल्कि पलटन अध्ययनों के आधार पर मस्तिष्क बैंक हैं। हमारा उद्देश्य मस्तिष्क ऊतक संचयन के लिए एक विधि विकसित करना है जिसे मोटे तौर पर इटली भर में लागू किया जा सकता है, एक नेटवर्क स्थापित करना है जो एक आम प्रोटोकॉल का उपयोग करता है और तुलनीय सामग्री साझा करता है। ऐसा करने के लिए, अन्य अनुसंधान केंद्रों की भागीदारी और एक विशिष्ट वेबसाइट का निर्माण भविष्य के लिए मुख्य उद्देश्यों में से एक है।

न्यूरोडीजेनेरेटिव रोगों की आणविक प्रकृति के विश्लेषण और बायोमार्कर पहचान के लिए अभिनव प्रौद्योगिकियों का लगातार उपयोग किया जा रहा है। इस संदर्भ में, अनुदैर्ध्य अध्ययनों के माध्यम से प्राप्त संज्ञानात्मक और वृद्धावस्था प्रक्षेप पथ के बारे में जानकारी के साथ दिमाग की आवश्यकता बढ़ जाएगी, जो न्यूरोपैथोलॉजिकल रूप से सत्यापित महामारी विज्ञान दृष्टिकोण⁹²के महत्व पर बल देगी।

Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

हम इस कार्य को डॉ एसएसए मिशेला मंजीरी को समर्पित करना चाहते हैं । इससे पहले कि वह समय से पहले मर गया, वह कल्पना की और Abbiategrasso ब्रेन बैंक परियोजना शुरू कर दिया ।

हम अपने मस्तिष्क दाताओं, जो उदारता से अपने शरीर के सबसे महान अंग दान अनुसंधान के लिए योगदान कर रहे है के लिए आभारी हैं; उनके बिना यह शोध संभव नहीं होगा।

हम एबीबी परियोजना में अपने बहुमूल्य काम के लिए वेलेरिया मरजागली के आभारी हैं ।

लेखक प्रो जोहानेस एटम्स, डॉ पाओलो फोसियानी और डॉ जियोर्जियो गियाकोन को उनके बहुमूल्य मार्गदर्शन और बुद्धिमान सलाह के लिए धन्यवाद देते हैं ।

हम परियोजना के दौरान उनकी बहुमूल्य मदद के लिए डॉ एसएसए एलिस सिर्रिनसिओन और मिस गिउलिया बोरटोन का शुक्रिया अदा करना चाहेंगे ।
उनके समर्थन के लिए श्रीमती तेरे Cassani के लिए कई धंयवाद और अपने सहयोग के लिए "Federazione अल्जाइमर इटालिया" ।
लेखक पाविया विश्वविद्यालय के जन स्वास्थ्य, प्रायोगिक और फोरेंसिक मेडिसिन विभाग के डॉ माटेओ मोरेटी और प्रो एंटोनियो मार्को मारिया ओस्कुलिटी के आभारी हैं ।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
50ml polypropilene conical tube 30x115mm	BD	405253
Anti-GFAP	Dako	Z0334	policlonal primary antibody (anti-rabbit); dilution = 1:1000
Anti-NeuN (A60)	Chemicon	MAB377	monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000
Anti-phospho TAU (AT8)	ThermoScientific	MN1020	monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:200
Anti-phospho TDP-43 (pS409/410-2)	CosmoBio	TIP-PTD-P02	policlonal primary antibody (anti-rabbit) ; dilution = 1:4000; pretreatment : Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6
Anti-α-SYN (KM51)	Novocastra	NCL-L-ASYN	monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:500; pretreatment: 1) Three step in microwave for 2 min-1 min-2 min with citrate buffer 0.01M pH 6 ; 2) 70% formic acid in H2O for 10 min
Anti-βamyloid (4G8)	BioLegend	800703	monoclonal primary antibody (anti-mouse); dilution = 1:1000; pretreatment : 70% formic acid in H2O for 10 min
Cutting board	BD	352070
DMEM High Glucose	Carlo Erba	FA30WL0101500	medium
Electrical saw with 5d blade	CEA	06.06.14/06.00.16
Electrode pH measure surface 12mm	CEA	70064.250 HHH
Electrode pH needle	Fisher Scientific	11796338
EnVision+System-HRP	Dako	K4001	secondary antibody (anti-mouse); dilution 1:2
EnVision+System-HRP	Dako	K4003	secondary antibody (anti-rabbit); dilution 1:2
Ethylether	SMI	8401530
Feather safety trimming knife blade 14cm	Fisher Scientific	11749798
Fetal Bovine Serum	Carlo Erba	FA30WS1810500	medium supplement; dilution = 20%
Forceps 15cm surgical or anatomical	Uvex	500XG
Gloves	CEA	01.28.14
Glue	Arcobaleno	2624000800002
Head supporter	Lacor	60456
L-Glutamine (100X)	Carlo Erba	FA30WX0550100	medium supplement; dilution = 1%
Measuring tape	CEABIS	CEATA34
Non adsorbable monofilament black polyamide	UHU Bostik	8000053131470
Non-Essential Amino Acids Solution (100X)	Life Technologies	11140050	medium supplement; dilution = 1%
Pen/Strept Solution (100X)	Carlo Erba	FA30WL0022100	medium supplement; dilution = 1%
Spinal needle quincke tipe point 20GA 3.50IN 0.9x90mm	CEA	03.06.16
Sterile scalpel with n°21 blade
Surgical basin	Olcelli Farmaceutica	A930857255
Surgical mallet and surgical cisel	CEA	79.68.88
Surgical scissor	CEA	27.08.45/79.68.64
	Feather	M130RC