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Behavior

दोहराव फैलाना दर्दनाक मस्तिष्क चोट के एक माउस मॉडल में पोस्ट दर्दनाक मिर्गी उत्प्रेरण

Published: February 10, 2020 doi: 10.3791/60360
Automatic Translation
1, 1,2,3
1Fralin Biomedical Research Institute at Virginia Tech Carilion, 2School of Neuroscience, Virginia Tech, 3Department of Biological Sciences, Virginia Tech

Summary

यह व्यवस्थित प्रोटोकॉल दोहराव हल्के दर्दनाक मस्तिष्क की चोट के बाद पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के एक नए पशु मॉडल का वर्णन करता है। पहले भाग एक संशोधित वजन ड्रॉप मॉडल का उपयोग कर दर्दनाक मस्तिष्क चोट प्रेरण के लिए कदम विवरण । दूसरा भाग एकल और बहु-चैनल इलेक्ट्रोएन्सेफेलोग्राफिक डेटा अधिग्रहण प्रणालियों के लिए सर्जिकल दृष्टिकोण पर निर्देश प्रदान करता है।

Abstract

दर्दनाक मस्तिष्क की चोट (टीबीआई) अधिग्रहीत मिर्गी का एक प्रमुख कारण है। टीबीआई के परिणामस्वरूप फोकल या डिस्टर्ब ब्रेन इंजरी हो सकती है। फोकल इंजरी प्रत्यक्ष यांत्रिक बलों का परिणाम है, कभी-कभी कपाल के माध्यम से प्रवेश करना, मस्तिष्क के ऊतकों में प्रत्यक्ष घाव पैदा करना। ये कॉन्टेशन, लेसनेस और नकसीर वाले क्षेत्रों के रूप में ब्रेन इमेजिंग के दौरान दिखाई देते हैं। फोकल घाव न्यूरोनल मौत और ग्लियल निशान गठन को प्रेरित करते हैं और टीबीआई को उठाने वाले सभी लोगों के 20%−25% में मौजूद होते हैं। हालांकि, टीबीआई के अधिकांश मामलों में, चोट त्वरण-मंदी बलों और बाद के ऊतकों के बाल काटने के कारण होती है, जिसके परिणामस्वरूप नॉनफोकल, डिफ्यूज क्षति होती है। टीबीआई रोगियों की एक उपजनसंख्या महीनों या वर्षों की विलंबता अवधि के बाद पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी (पीटीई) विकसित होती रहती है। वर्तमान में, यह भविष्यवाणी करना असंभव है कि कौन से रोगी पीटीई विकसित करेंगे, और पीटीई रोगियों में दौरे नियंत्रण के लिए चुनौतीपूर्ण हैं, आगे अनुसंधान की आवश्यकता है। हाल ही में जब तक, क्षेत्र केवल दो पशु/मान्य सहज पोस्ट दर्दनाक बरामदगी के साथ कृंतक मॉडल तक ही सीमित था, दोनों प्रांतस्था में बड़े पैमाने पर ऊतक हानि के साथ बड़े फोकल घावों के साथ पेश और कई बार उपकॉर्टिकल संरचनाओं । इन दृष्टिकोणों के विपरीत, यह निर्धारित किया गया था कि संशोधित वजन ड्रॉप मॉडल का उपयोग करके प्रेरित टीबीआई को फैलाना सहज आक्षेप और गैर-आक्षेप बरामदगी के विकास को शुरू करने के लिए पर्याप्त है, यहां तक कि फोकल घावों या ऊतक हानि के अभाव में भी। अधिग्रहीत पोस्ट दर्दनाक मिर्गी के साथ मानव रोगियों के समान, इस मॉडल को जब्ती शुरुआत से पहले चोट के बाद एक विलंबता अवधि के साथ प्रस्तुत करता है । इस प्रोटोकॉल में, समुदाय को पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी का एक नया मॉडल प्रदान किया जाएगा, जिसमें कई महीनों के दौरान लगातार दीर्घकालिक वीडियो-इलेक्ट्रोएंसेफेलोग्राफिक पशु निगरानी के बाद फैलाना गैर-घाव टीबीआई को कैसे प्रेरित किया जाए। यह प्रोटोकॉल पशु हैंडलिंग, वजन ड्रॉप प्रक्रिया, दो अधिग्रहण प्रणालियों के लिए इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट, और सर्जरी, पश्चात निगरानी और डेटा अधिग्रहण के प्रत्येक चरण के दौरान सामना की जाने वाली लगातार चुनौतियों का विस्तार करेगा।

Introduction

हर साल टीबीआई दुनिया भर में अनुमानित 60 मिलियन लोगों को प्रभावित करता है। प्रभावित व्यक्तियों को मिर्गी के विकास का उच्च खतरा होता है, जो प्रारंभिक चोट के वर्षों बाद प्रकट हो सकता है। हालांकि गंभीर टीबीआई मिर्गी के उच्च जोखिम से जुड़े होते हैं, लेकिन हल्के टीबीआई भी मिर्गी1,2,3,4के विकास की एक व्यक्ति की संभावना को बढ़ाता है। सभी टीबीआई को फोकल, डिफ्यूज या दोनों के संयोजन के रूप में वर्गीकृत किया जा सकता है। मस्तिष्क की चोट को फैलाना, कई में मौजूद नहीं तो सभी TBIs, त्वरण-मंदी और घूर्णन बलों के कारण एक दूसरे के खिलाफ विभिन्न घनत्व बाल काटना के मस्तिष्क ऊतकों का परिणाम है । परिभाषा के अनुसार, फैलाना चोट केवल हल्के/निर्णायक गैर मर्मज्ञ मस्तिष्क की चोट में अलगाव में होता है, जिसमें कोई मस्तिष्क घावों की गणना टोमोग्राफी स्कैन5पर दिखाई दे रहे हैं ।

वर्तमान में उन रोगियों के प्रबंधन में दो महत्वपूर्ण समस्याएं हैं, जिनके पास दर्दनाक मिर्गी (पीटीई) के बाद विकसित होने का खतरा है, या हैं। पहला यह है कि एक बार पीटीई प्रकट हो जाने के बाद, दौरे उपलब्ध मिर्गी रोधी दवाओं (एईडी)6के लिए प्रतिरोधी होते हैं। दूसरे, एईडी एपिपिप्टोजेनेसिस को रोकने में समान रूप से अप्रभावी हैं, और कोई प्रभावी वैकल्पिक चिकित्सीय दृष्टिकोण नहीं हैं। इस घाटे को दूर करने और उपचार के लिए बेहतर चिकित्सीय लक्ष्य ों और उम्मीदवारों को खोजने के लिए, पीटीई6की जड़ में नए सेलुलर और आणविक तंत्र का पता लगाना आवश्यक होगा।

पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी की प्रमुख विशेषताओं में से एक प्रारंभिक दर्दनाक घटना और सहज, अकारण, आवर्ती दौरे की शुरुआत के बीच अव्यक्त अवधि है। इस लौकिक खिड़की के भीतर होने वाली घटनाएं शोधकर्ताओं के लिए एक प्राकृतिक ध्यान केंद्रित हैं, क्योंकि इस बार विंडो पीटीई के उपचार और रोकथाम की अनुमति दे सकती है। पशु मॉडल सबसे अधिक इस शोध के लिए उपयोग किया जाता है क्योंकि वे कई अलग लाभ प्रदान करते हैं, जिनमें से कम नहीं है कि मानव रोगियों की निरंतर निगरानी समय के इतने संभावित लंबे समय तक दोनों अव्यावहारिक और महंगी होगी। इसके अतिरिक्त, एपिपिप्टोजेनेसिस की जड़ में सेलुलर और आणविक तंत्र केवल पशु मॉडल में पता लगाया जा सकता है।

सहज पोस्ट-ट्रॉमेटिक दौरे और मिर्गी वाले पशु मॉडलों को उन मॉडलों पर पसंद किया जाता है जहां टीबीआई के बाद कम शारीरिक रूप से प्रासंगिक साधनों द्वारा दौरे को प्रेरित किया जाता है, जैसे कि केमोकोनवल्सेंट या विद्युत उत्तेजना द्वारा तीव्रता से, लंबे समय से, या जलाने से। सहज पोस्ट-ट्रॉमेटिक जब्ती मॉडल परीक्षण कैसे टीबीआई स्वस्थ मस्तिष्क नेटवर्क को संशोधित करता है जिससे एपिपिप्टोजेनेसिस होता है। टीबीआई के बाद अतिरिक्त उत्तेजना का उपयोग करके अध्ययन का आकलन कैसे टीबीआई के संपर्क में आने से जब्ती सीमा कम हो जाती है और दौरे के लिए संवेदनशीलता को प्रभावित करता है। रासायनिक रूप से या विद्युत उत्तेजना के साथ प्रेरित दौरे वाले पशु मॉडलों के फायदे एईडी के लिए अपवर्तकता के विशिष्ट तंत्र और मौजूदा और उपन्यास एईडीएस की प्रभावकारिता का परीक्षण कर रहे हैं। फिर भी, मनुष्यों के लिए इन आंकड़ों की प्रासंगिकता और अनुवाद की डिग्री निम्नलिखित के कारण अस्पष्ट7 हो सकती है: 1) जब्ती तंत्र अकेले टीबीआई द्वारा प्रेरित लोगों से अलग हो सकता है; 2) इन मॉडलों के सभी सहज दौरे के लिए नेतृत्व नहीं7; 3) आक्षेप एजेंट द्वारा ही बनाए गए घावों, इसके वितरण के लिए आवश्यक कैनुला के साथ, या गहराई संरचनाओं में इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट उत्तेजक द्वारा (जैसे, हिप्पोकैम्पस या amygdala) पहले से ही बढ़ी हुई जब्ती संवेदनशीलता और यहां तक कि हिप्पोकैम्पल epileptiform क्षेत्र क्षमता7पैदा कर सकता है । इसके अलावा, कुछ आक्षेप एजेंट (यानी, कैनिक एसिड) प्रत्यक्ष हिप्पोकैम्पल घावों और काठिन्य का उत्पादन करते हैं, जो टीबीआई को फैलाने के बाद विशिष्ट नहीं है।

हाल ही में जब तक, पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के केवल दो पशु मॉडल मौजूद थे: नियंत्रित कॉर्टिकल प्रभाव (सीसीआई, फोकल) या द्रव टक्कर की चोट (एफपीआई, फोकल और फैलाना)8। दोनों मॉडलों के परिणामस्वरूप ऊतक हानि, नकसीर और कृंतक8में ग्लियोसिस के साथ बड़े फोकल घाव होते हैं। ये मॉडल बड़े फोकल घावों द्वारा प्रेरित पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी की नकल करते हैं। हाल ही में एक अध्ययन से पता चला है कि बार-बार (3x) फैलाना टीबीआई चूहों में सहज दौरे और मिर्गी के विकास के लिए भी फोकलघावों 9की अनुपस्थिति में पर्याप्त है, पुष्टि सहज आवर्ती दौरे के साथ एक तिहाई कृंतक पीटीई मॉडल जोड़ना। यह नया मॉडल फैलाना टीबीआई द्वारा प्रेरित सेलुलर और आणविक परिवर्तनों की नकल करता है, जो हल्के, निर्णायक टीबीआई के साथ मानव आबादी का बेहतर प्रतिनिधित्व करता है। इस मॉडल में, जब्ती की शुरुआत से पहले तीन सप्ताह या उससे अधिक की अव्यक्त अवधि और देर से, सहज, आवर्ती बरामदगी पोस्ट-ट्रॉमेटिक एपिपिटोजेनेसिस के मूल कारणों की जांच करने की अनुमति देती है, जब्ती शुरुआत के बाद निवारक दृष्टिकोणों और नए चिकित्सीय उम्मीदवारों की प्रभावकारिता का परीक्षण करती है, और पोस्ट-ट्रॉमेटिक एपिप्टोजेनेसिस के बायोमार्कर के विकास की क्षमता होती है क्योंकि लगभग आधे जानवर पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी विकसित करते हैं।

पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के अध्ययन के लिए पशु मॉडल का चुनाव वैज्ञानिक प्रश्न, मस्तिष्क की चोट के प्रकार की जांच पर निर्भर करता है, और अंतर्निहित सेलुलर और आणविक तंत्र निर्धारित करने के लिए किन उपकरणों का उपयोग किया जाएगा। अंततः, पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के किसी भी मॉडल को टीबीआई के बाद सहज दौरे के उद्भव और टीबीआई जानवरों के सबसेट में एक प्रारंभिक विलंबता अवधि दोनों को प्रदर्शित करना चाहिए, क्योंकि टीबीआई को उठाने वाले सभी मरीज मिर्गी विकसित करने के लिए नहीं जाते हैं । ऐसा करने के लिए, इस प्रोटोकॉल में एक साथ वीडियो अधिग्रहण के साथ इलेक्ट्रोएंसेफलोग्राफी (ईईजी) का उपयोग किया जाता है। डेटा अधिग्रहण हार्डवेयर और दृष्टिकोण के पीछे तकनीकी पहलुओं को समझना सटीक डेटा व्याख्या के लिए महत्वपूर्ण है। महत्वपूर्ण हार्डवेयर पहलुओं में रिकॉर्डिंग सिस्टम का प्रकार, इलेक्ट्रोड (स्क्रू या वायर लीड) का प्रकार और सामग्री जो वे बने होते हैं, सिंक्रोनाइज्ड वीडियो अधिग्रहण (ईईजी सिस्टम या तीसरे पक्ष के हिस्से के रूप में), और कंप्यूटर सिस्टम के गुण शामिल हैं। अध्ययन लक्ष्य, ईईजी घटनाओं, आगे विश्लेषण विधि और डेटा भंडारण की स्थिरता के आधार पर किसी भी प्रकार की प्रणाली में उचित अधिग्रहण पैरामीटर निर्धारित करना अनिवार्य है। अंत में, इलेक्ट्रोड विन्यास (असेंबल) की विधि पर विचार किया जाना चाहिए, क्योंकि प्रत्येक के फायदे और नुकसान हैं और डेटा व्याख्या को प्रभावित करेंगे।

यह प्रोटोकॉल विवरण कैसे संशोधित Marmarou वजन ड्रॉप मॉडल10,11 का उपयोग करने के लिए चूहों में सहज, अकारण, आवर्ती बरामदगी के परिणामस्वरूप फैलाना चोट प्रेरित करने के लिए, एक एकल और बहु चैनल सतत प्राप्त करने के लिए शल्य चिकित्सा दृष्टिकोण का वर्णन करता है, और सिंक्रोनाइज्ड वीडियो EEG एकाधिकार, द्विध्रुवी, या मिश्रित असेंबल का उपयोग कर ।

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Protocol

इस प्रोटोकॉल में वर्णित सभी पशु प्रक्रियाओं को वर्जीनिया टेक की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (आईएसीयूसी) के अनुसार और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों ' प्रयोगशाला जानवरों की देखभाल और उपयोग के लिए गाइड ' के अनुपालन में किया गया था .

1. पशु हैंडलिंग प्रोटोकॉल

नोट: इस प्रोटोकॉल का उद्देश्य आगमन के बाद एक विक्रेता से सुविधा के लिए आदेश दिए गए जानवरों को आदत बनाना और उन्हें प्रयोगकर्ता द्वारा संभाला जा रहा है। यह तनाव और चिंता को कम करके पशु भलाई में सुधार करता है और कुछ प्रक्रियाओं को सरल बनाता है जिसमें टीबीआई को प्रेरित करने, ऑपरेटिव निगरानी के बाद और जानवर को अधिग्रहण प्रणाली से जोड़ने सहित जानवरों को संभालने की आवश्यकता होती है ।

  1. जब कई जानवरों विक्रेता से प्राप्त कर रहे हैं, कान टैग और बेतरतीब ढंग से उन्हें एक प्रयोगात्मक समूह (टीबीआई) या नियंत्रण समूह (नकली सर्जरी) के लिए आवंटित करते हुए उन्हें 2−5 जानवरों के पिंजरों में संयोजन। हाउस टीबीआई जानवरों को नकली जानवरों से अलग क्योंकि नकली चूहे कभी-कभार चूहों की ओर आक्रामक रूप से कार्य करते हैं जो टीबीआई से गुजरे थे।
  2. 1 दिन (कान टैगिंग के बाद 24−48 घंटे) हैंडलिंग: पशु कान टैग, जन्म तिथि, हैंडलिंग की तारीख, हैंडलिंग के दिनों में पशु वजन, हैंडलिंग की अवधि, और टिप्पणियों और टिप्पणियों के लिए एक अनुभाग लॉगिंग के लिए एक चार्ट तैयार करें।
  3. धीरे-धीरे दोनों हाथों का उपयोग करके जानवर को कप करें। पूंछ से जानवर को पकड़ो नहीं क्योंकि यह रक्षा तंत्र और तनाव प्रतिक्रिया को प्रेरित करता है।
  4. जानवर के कान टैग की जांच और रिकॉर्ड करें।
  5. जानवर को वजन पैमाने पर कंटेनर में रखें और वजन रिकॉर्ड करें।
  6. धीरे-धीरे जानवर को दोनों हाथों से फिर से कप करें और इसे 1 मिनट के लिए संभालें, जिससे यह हाथों के भीतर स्थानांतरित और पता लगाने की अनुमति देता है। प्रक्रिया कक्ष में एक बेंच पर ऐसा करें और जानवर को फर्श पर न छोड़ने के लिए सावधान रहें।
  7. हैंडलिंग के 1 मिन के बाद, जानवर को वापस अपने पिंजरे में रखें।
  8. पिंजरे में अन्य जानवरों के लिए चरण 1.3−1.7 दोहराएं।
  9. हैंडलिंग 2 दिन (अगले दिन): चरण 1.2−1.5 दोहराएं।
  10. धीरे-धीरे जानवर को दोनों हाथों से फिर से कप करें और इसे 2 मिनट के लिए संभालें, जिससे यह हाथों के भीतर स्थानांतरित और पता लगाने की अनुमति देता है। प्रक्रिया कक्ष में एक बेंच पर ऐसा करें और जानवर को फर्श पर न छोड़ने के लिए सावधान रहें।
  11. हैंडलिंग के 2 मिन के बाद, जानवर को वापस अपने पिंजरे में रखें।
  12. पिंजरे में अन्य जानवरों के लिए चरण 1.10−1.11 दोहराएं।
  13. हैंडलिंग दिन 3 (अगले दिन): चरण 1.2−1.5 दोहराएं।
  14. धीरे-धीरे जानवर को दोनों हाथों से फिर से कप करें और इसे 4 मिनट के लिए संभालें, जिससे यह हाथों के भीतर स्थानांतरित और पता लगाने की अनुमति देता है। प्रक्रिया कक्ष में एक बेंच पर ऐसा करें और जानवर को फर्श पर न छोड़ने के लिए सावधान रहें।
  15. हैंडलिंग के 4 मिन के बाद, जानवर को वापस अपने पिंजरे में रखें।
  16. पिंजरे में अन्य जानवरों के लिए चरण 1.14−1.15 दोहराएं।
  17. हैंडलिंग दिन 4 (नियंत्रण दिवस, 1 दिन से निपटने से 1 सप्ताह): चरण 1.2−1.5 दोहराएं।
  18. धीरे-धीरे जानवर को दोनों हाथों से फिर से कप करें और इसे 4 मिनट के लिए संभालें, जिससे यह हाथों के भीतर स्थानांतरित और पता लगाने की अनुमति देता है। प्रक्रिया कक्ष में एक बेंच पर ऐसा करें और जानवर को फर्श पर न छोड़ने के लिए सावधान रहें।
  19. 4 मिन हैंडलिंग के बाद, जानवर को वापस अपने पिंजरे में रखें।
  20. पिंजरे में अन्य जानवरों के लिए चरण 1.18-1.19 दोहराएं।
    नोट: नियंत्रण हैंडलिंग दिन तीन दिन की हैंडलिंग प्रोटोकॉल के बाद शांत व्यवहार की अवधारण का परीक्षण करता है।

2. वजन ड्रॉप प्रक्रिया

  1. माउस को इंडक्शन चैंबर में रखें। ऑक्सीजन और वैक्यूम दोनों के प्रवाह को 1 एल/मिन और आइसोफ्लोरीन गैस का स्तर 3%−5% तक सेट करें । 5 मिन के लिए माउस को एनेस्थेटाइज़ करें।
  2. माउस को इंडक्शन चैंबर से निकालकर फोम पैड पर रखें। एक अंगूठी या पूंछ चुटकी के लिए एक प्रतिक्रिया के अभाव के लिए परीक्षण करें।
  3. एक एनाल्जेसिक (0.1 मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोरफिन) को चमड़े से प्रशासित करें। यदि ईईजी सर्जरी उसी दिन की जाती है, तो गैर-स्टेरॉयड विरोधी भड़काऊ कार्प्रोफेन (5 मिलीग्राम/किलो) के संयोजन में बुप्रेनोरफिन को नीचे प्रशासित करें।
  4. सोडियम लैक्टेट समाधान (जानवर के वजन के प्रति ग्राम 3 μL) को पिछले प्रभाव से पहले या बाद में नीचे प्रशासित करें। सोडियम लैक्टेट समाधान एक ही इंजेक्शन में त्वरित प्रशासन के लिए एनाल्जेसिक के साथ मिलाया जा सकता है।
    नोट: सोडियम लैक्टेट समाधान में सोडियम क्लोराइड, पोटेशियम क्लोराइड, कैल्शियम क्लोराइड और पानी में सोडियम लैक्टेट का मिश्रण होता है। यह कदम तरल पदार्थ और इलेक्ट्रोलाइट्स को बदलने में मदद करता है, वसूली में सहायता करता है।
  5. वजन ड्रॉप ट्यूब के नीचे माउस के सिर की स्थिति(चित्रा 1ए)और आंखों और कानों की रेखा के बीच, सिर के केंद्र में एक फ्लैट स्टेनलेस स्टील डिस्क (1.3 सेमी व्यास, 1 मिमी मोटी और 880 मिलीग्राम वजन) रखें।
    नोट: यह खोपड़ी की सतह के पार प्रभाव को अलग करता है(चित्रा 1बी)।
  6. 50 सेमी की ऊंचाई से 100 ग्राम वजन रॉड छोड़ने के लिए वजन ड्रॉप ट्यूब में पिन निकालें। नियंत्रण चूहों के लिए नकली चोट को प्रेरित करने के लिए, पिन और वजन ड्रॉप की आकस्मिक रिहाई को रोकने के लिए ट्यूब से वजन रॉड को हटा दें।
    नोट: जानवर के सिर फ्लैट तैनात किया जाना चाहिए, ताकि रॉड मुक्त डिस्क की पूरी सतह पर गिर जाता है ।
  7. एक बाँझ पॉलीलाइन शोषक तौलिया के साथ कवर एक हीटिंग पैड पर वसूली के लिए अपनी पीठ पर बेहोश जानवर रखें । दक्षिणपंथी पलटा वसूली समय (यानी, समय यह माउस अपनी पीठ से सही करने के लिए लेता है) बेहोश बिताए समय के लिए एक readout के रूप में मापा जा सकता है ।
  8. जब जानवर होश में आ जाता है, तो इसे एक साफ पिंजरे में रखें जिसे एक हीटिंग पैड पर गर्म किया गया है, रिकवरी जेल और कुछ गीले चाउ टुकड़ों के साथ 45 मिन के लिए ठीक हो जाए। सुनिश्चित करें कि पर्याप्त कूड़े हैं ताकि पिंजरे गरम न हो जाएं। जानवर को ओवरहीटिंग माउस को बहुत ठंडा होने की अनुमति देने के रूप में वसूली के लिए एक बाधा के रूप में साबित हो सकता है।
  9. 45 मिन के बाद, दो बार चरण 2.1−2.8 दोहराएं, चरण 2.3 (यानी, एनाल्जेसिक और एंटी-भड़काऊ दवाओं का प्रशासन)।
  10. यदि ईईजी इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण सर्जरी उसी दिन की जाती है तो जानवरों को 1−2 घंटे के लिए ठीक होने दें।

3. ईईजी इलेक्ट्रोड के प्रत्यारोपण के लिए सर्जिकल क्षेत्र की तैयारी

नोट: सर्जरी से पहले सर्जिकल उपकरण और शिकंजा को ऑटोक्लेव करें। जानवर, गैर-बाँझ सामग्री, और जानवरों को संभालने के बीच में 70% इथेनॉल के साथ छिड़काव और रगड़ करके सर्जिकल दस्ताने साफ करें। जानवरों के बीच बीड स्टरलाइजर (सामग्री की तालिकादेखें) में 2−3 मिनट के लिए सर्जिकल उपकरणों को स्टरलाइज करें। स्टीरियोटैक्टिक उपकरण में एक नया जानवर रखने से पहले बाँझ कपड़ा बदलें। सुनिश्चित करें कि शल्य चिकित्सा क्षेत्र सर्जरी के लिए सभी आवश्यक घटक शामिल हैं(चित्रा 2)। इस मॉडल में टीबीआई को प्रेरित करने के लिए एक आक्रामक शल्य प्रक्रिया के अभाव में कई फायदे हैं: 1) इलेक्ट्रोड का प्रत्यारोपण लचीला है और टीबीआई के रूप में या समय की एक निर्धारित अवधि के बाद उसी दिन किया जा सकता है; 2) जानवर की वसूली का समय तेज है; 3) कपाल बरकरार रहता है, अधिक सतह क्षेत्र और इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपित करने के लिए लचीलापन की अनुमति ।

  1. 5 मिन के लिए एक इंडक्शन चैंबर में 3%−5% आइसोफ्लोरीन गैस में माउस को एनेस्थेटाइज़ करें।
  2. माउस को इंडक्शन चैंबर से स्टीरियोटैक्टिक उपकरण में स्थानांतरित करें और इसे नाक शंकु से जुड़े आइसोफ्लोरान गैस और वैक्यूम ट्यूबों के साथ एक हीटिंग पैड पर बाँझ कपड़े पर रखें।
  3. सर्जरी के दौरान शरीर का तापमान 37 डिग्री सेल्सियस पर बनाए रखें। तापमान सेंसर रखें ताकि यह माउस की छाती या पेट की दीवार से संपर्क बनाता है।
  4. कान की सलाखों का उपयोग कर जगह में जानवर के सिर को ठीक करें।
  5. सर्जिकल विमान में 1.5%−3.5% आइसोफ्लोरीन या ~ 60 सांस/मिन पर संज्ञाहरण बनाए रखें (अंगूठी या पूंछ चुटकी के लिए कोई प्रतिक्रिया के साथ)।
  6. जानवर की आंखों पर आंख का मरहम लगाएं ताकि उन्हें सर्जरी के दौरान चिकनाई बनाए रखा जा सके।
  7. एनाल्जेसिक (०.१ मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोरफिन) और गैर-स्टेरॉयड विरोधी भड़काऊ दवा (5 मिलीग्राम/किलो कार्प्रोफेन) का मिश्रण एक ही इंजेक्शन में तब तक प्रशासित करें जब तक कि टीबीआई को दिन के दौरान पहले नहीं किया जाता, जिस स्थिति में जानवर को पहले से ही एनाल्जेसिक और एंटी-भड़काऊ प्राप्त होता है ।
    नोट: Buprenorphine फिर से प्रशासित किया जाना चाहिए अगर पहली टीबीआई और ईईजी प्लेसमेंट सर्जरी के बीच समय 8 घंटे से अधिक है या यदि जानवर पहले प्रशासन के बाद दर्द 8 घंटे के लक्षण प्रदर्शित करता है, लेकिन यह कार्प्रोफेन के अलावा बिना दिया जाना चाहिए ।
  8. जानवर में तरल पदार्थ और इलेक्ट्रोलाइट्स को बदलने के लिए सोडियम लैक्टेट समाधान (जानवर के वजन का 3 μL प्रति ग्राम) का प्रबंध करें।
    नोटः अगर टीबीआई के तुरंत बाद सर्जरी की जाती है तो इस स्टेप को ठीक से टाइम करना होगा । सोडियम लैक्टेट समाधान हर 2 घंटे प्रशासित किया जाना चाहिए, जबकि जानवर प्रक्रियाओं से गुजरता है और सर्जरी के बाद एक बार, पिछले इंजेक्शन से 2 एच।
  9. बालों को हटाने वाली क्रीम का इस्तेमाल करते हुए बालों को खोपड़ी से निकालें।
  10. चीरा बनाने से पहले, पोविडोन-आयोडीन सर्जिकल एंटीसेप्टिक समाधान के साथ खोपड़ी की त्वचा को कीटाणुरहित करें और एक परिपत्र गति 3x (हर बार 20 एस प्रति समाधान) में बाँझ धुंध पैड के साथ बारी-बारी झाड़ू में 70% इथेनॉल।
  11. स्केलपेल का उपयोग करके, सिर के ठीक ऊपर से सिर के पीछे तक खोपड़ी मिडलाइन पर एक रोस्ट्रल-कौडल चीरा बनाएं। खोपड़ी खोलने की यह विधि खोपड़ी को काटने पर पसंद की जाती है, क्योंकि त्वचा फ्लैप को ईईजी-कैप के ऊपर या उसके आसपास सील किया जा सकता है जो अधिक स्थिरता प्रदान करता है।
    नोट: 3-ईईजी हेडमाउंट के प्रत्यारोपण के लिए खोपड़ी तैयार करते समय, खोपड़ी को काटना आवश्यक है, क्योंकि हेडमाउंट का आकार हेडमाउंट के ऊपर त्वचा फ्लैप को बंद करने की अनुमति नहीं देगा।
  12. खोली गई त्वचा सीमाओं पर छोटे हेमोस्टेट लगाने से चीरा के क्षेत्र का विस्तार करें। यदि चीरा के बाद कोई रक्तस्राव होता है, तो बाँझ कपास धुंध या झाड़ू से साफ करें।
  13. धीरे-धीरे एक स्केलपेल ब्लेड के साथ पेरियोस्टेम (यानी, कपाल की हड्डी पर पतली झिल्ली) को हटा दें। यदि इस चरण के दौरान कोई रक्तस्राव होता है, तो एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ रक्तस्राव साइट पर तब तक दबाएं जब तक कि यह बंद न हो जाए।
  14. हाइड्रोजन पेरोक्साइड के साथ कपाल को साफ करने के लिए बाँझ कपास झाड़ू का उपयोग करें, लेकिन उजागर कपाल क्षेत्र के आसपास के नरम ऊतक को छूने से बचें। इस कदम को तब तक दोहराएं जब तक कि किसी भी नरम ऊतक से कपाल साफ न हो जाए और एक सफ़ेद उपस्थिति न हो।
  15. एक बाँझ धुंध या कपास झाड़ू के साथ कपाल सूखी।
    नोट: इलेक्ट्रोड और दंत सीमेंट के उचित निर्धारण के लिए कदम 3.12−3.15 महत्वपूर्ण हैं। किसी भी नरम ऊतक, गैर-cauterized रक्तस्राव, और मलबे संक्रमण, अस्थिर हेडमाउंट निर्धारण, विकृत या अनुपस्थित संकेत, और सर्जरी के बाद कई दिनों या हफ्तों के भीतर प्रत्यारोपण के नुकसान का कारण बन सकता है।

4. इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट

  1. सिंगल ईईजी (1ईईजी) चैनल हेडमाउंट को इंप्लांट करें।
    नोट: स्टीरियोटैक्टिक निर्देशांक में संक्षिप्त निर्देशांक स्थानिक संबंधों का प्रतिनिधित्व करते हैं और जानवर के सिर पर दिए गए अभिविन्यास पर ब्रेगमा से लक्ष्य के मिलीमीटर में दूरी निर्दिष्ट करते हैं: पूर्वकाल-पीछे (एपी) और मध्यकालीन-पार्श्व (एमएल)। इस प्रोटोकॉल में पृष्ठीय-वेंट्रल लागू नहीं होता है क्योंकि सभी इलेक्ट्रोड मस्तिष्क के भीतर एक निश्चित संरचना के बजाय एपीड्यूरल स्पेस में रखे जाते हैं (चित्रा 3). विन + एक सक्रिय इलेक्ट्रोड है और विन- इसका संदर्भ इलेक्ट्रोड है।
    1. प्रदान की स्टीरियोटैक्टिक निर्देशांक12का उपयोग करके छह बर्र छेद (स्थिरता शिकंजा के लिए तीन और इलेक्ट्रोड के लिए तीन) बनाने के लिए ~5,000−6,000 राउंड प्रति मिन (आरपीएम) पर स्टील बिट (0.5 मिमी, गोल, 1/4 इन) के साथ एक उच्च गति ड्रिल का उपयोग करें। दो पूर्वकाल शिकंजा के लिए: एपी = +1.5 मिमी, एमएल = ± 1.5 मिमी; एक पीछे पेंच के लिए: एपी = -5.2 मिमी, एमएल = -1.5 मिमी; जमीन इलेक्ट्रोड के लिए: एपी = -5.2 मिमी, एमएल = +1.5 मिमी; रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड के लिए: एपी = -2.3 मिमी, एमएल = ± 2.7 मिमी, विन + के साथ दाईं ओर और विन- बाईं ओर।
    2. सिर के चरण की बढ़ी हुई स्थिरता के लिए तीन शिकंजा जोड़ें। पेचकश का उपयोग करके, शिकंजा 1−1.5 x प्रत्येक को कपाल में स्थिर रूप से तय करने के लिए बदल दें।
      नोट: शिकंजा गहरा रखने से मस्तिष्क को नुकसान होगा।
    3. 1ईईजी हेडमाउंट को स्टीरियोटैक्टिक होल्डर आर्म में डालें और हेडमाउंट की स्थिति बना लें ताकि तीन इलेक्ट्रोड कपाल मिडलाइन के साथ स्थित हों। इस कॉन्फ़िगरेशन में हेडमाउंट के शीर्ष पर ग्राउंड इलेक्ट्रोड और इसके संबंधित उद्घाटन में पीठ में है, बीच में विन + इलेक्ट्रोड, और सामने में विन-इलेक्ट्रोड। एक निशान एक स्थायी मार्कर के साथ हेडमाउंट पर बनाया जा सकता है।
    4. प्रत्येक इलेक्ट्रोड 90 डिग्री मोड़ ताकि प्रत्येक तार का अंत नीचे की ओर झुक जाए और इसी बर्र छेद के ऊपर स्थित हो। फिर, तार के उस हिस्से की 1 मिमी लंबाई को मापें जो अब बर्र छेद के लंबवत है और अतिरिक्त को ट्रिम करें(चित्रा 3)। इससे इलेक्ट्रोड का एपीड्यूरल प्लेसमेंट सुनिश्चित होगा। इलेक्ट्रोड को ड्यूरा मेटर सतह को बमुश्किल छूना चाहिए।
    5. हेडमाउंट को कम करें और संबंधित बर्र होल से मेल खाने के लिए तीनों इलेक्ट्रोड को एडजस्ट करें। एपीड्यूरल रिकॉर्डिंग के लिए, इलेक्ट्रोड को ऊपर रखा जाना चाहिए या ड्यूरा मेटर को मुश्किल से छूना चाहिए।
    6. सॉल्वेंट की कई बूंदों के साथ पाउडर के आधा स्कूप मिलाकर आवेदन के लिए डेंटल सीमेंट तैयार करें। एक मिश्रण स्पैटुला का उपयोग करें और तब तक हिलाएं जब तक कि अंतिम मिश्रण पुट्टी की तरह, चिपचिपा लेकिन निंदनीय न हो, और जानवर के कपाल पर रखे जाने पर ठीक से गाढ़ा होने के लिए काफी कठोर हो।
    7. सभी शिकंजा और इलेक्ट्रोड को कवर दंत सीमेंट मिश्रण लागू करें और इसे जमना के लिए ~ 3−5 मिन इंतजार करें। सुनिश्चित करें कि प्लास्टिक आसन को दंत सीमेंट से कवर न करें, क्योंकि इससे जानवर को तार के साथ कम्यूटर से जोड़ना असंभव हो जाएगा।
    8. त्वचा फ्लैप पकड़े हुए हेमोस्टेट जारी करें और प्लास्टिक आसन के चारों ओर त्वचा फ्लैप को जोड़कर चीरा बंद करें। त्वचा फ्लैप को सील करने के लिए ऊतक चिपकने वाली (सामग्री की तालिकादेखें) की कई बूंदें लागू करें।
    9. संक्रमण से बचने के लिए इंप्लांट के आसपास के क्षेत्र में क्लोरहेक्सीडीन एंटीसेप्टिक लगाएं। यदि टीबीआई इंडक्शन के दौरान दिए गए सोडियम लैक्टेट समाधान के पिछले इंजेक्शन के बाद जानवर 2 घंटे से अधिक समय तक संज्ञाहरण के अधीन है, तो एक और इंजेक्शन को नीचे प्रशासित करें। जानवर के उचित जलयोजन को बनाए रखने के लिए, इंजेक्शन को हर 2 एच दोहराएं जो जानवर संज्ञाहरण के तहत खर्च करता है।
    10. सर्जरी के बाद पिछले इंजेक्शन के बाद सोडियम लैक्टेट सॉल्यूशन 2 एच का फाइनल इंजेक्शन दें। यदि सर्जरी 2 घंटे से कम लंबी है, तो पहले इंजेक्शन से सोडियम लैक्टेट समाधान 2 एच की अंतिम रिकवरी खुराक का प्रशासन करें।
    11. स्टीरियोटैक्टिक उपकरण से जानवर को निकालें और भविष्य की निगरानी के लिए एक संदर्भ के रूप में ईईजी सर्जरी के बाद जानवर के वजन को मापने। इंप्लांट के कारण जानवर का वजन सर्जरी से पहले से ज्यादा होगा।
    12. जानवर को रिकवरी के लिए गर्म हीटिंग पैड पर साफ पिंजरे में रखें।
  2. दो ईईजी और एक ईएमजी (2EEG/1EMG) चैनलहेडमाउंट प्रत्यारोपित करें।
    1. हेडमाउंट के प्लेसमेंट के लिए एक मील का पत्थर के रूप में ब्रेग्मा का उपयोग करें। ऊतक चिपकने वाला (सामग्री की तालिकादेखें) की एक छोटी राशि 2EEG/1EMG हेडमाउंट के नीचे की ओर लागू करें, चार पेंच छेद से बचने और कपाल की सतह पर 2EEG/1EMG हेडमाउंट जगह है ।
      नोट: इस हेडमाउंट के प्लेसमेंट के लिए कोई विशिष्ट निर्देशांक नहीं हैं। हेडमाउंट 8 मिमी लंबा और 5 मिमी चौड़ा है, जो अधिकांश कपाल सतह को कवर करता है। ब्रीगमा के लिए अपने फ्रंट एज के साथ हेडमाउंट को पोजिशनिंग करना इष्टतम है और अच्छी सिग्नल गुणवत्ता प्रदान करता है। ऊतक चिपकने वाले इलाज की बूंद से पहले त्वरित मैनुअल प्लेसमेंट आवश्यक है। ऊतक गोंद के लिए लगभग 5 मिन पूरी तरह से इलाज करने की अनुमति दें।
    2. हेडमाउंट में चार उद्घाटन के माध्यम से शिकंजा के लिए पायलट छेद बनाने के लिए एक बाँझ 23 जी सुई का प्रयोग करें। इसे पूरा करने के लिए, धीरे-धीरे सुई को धक्का दें और धीरे-धीरे तब तक घुमाएं जब तक कि सुई की नोक मस्तिष्क को नुकसान पहुंचाए बिना खोपड़ी में प्रवेश न करे। एक बाँझ कपास झाड़ू का उपयोग कर पायलट छेद से किसी भी खून बह रहा निकालें।
    3. पायलट छेद में शिकंजा में 0.10 डालें और खोपड़ी में प्रत्येक तय होने तक उन्हें घुमाएं। यह पेंच लंबाई का आधा तक हो सकता है, लेकिन पूरी लंबाई नहीं, क्योंकि इससे ड्यूरा मेटर और कॉर्टेक्स को नुकसान होगा। यदि हेडमाउंट तैनात है ताकि खोपड़ी की सतह और हेडमाउंट के पीछे के छोर के बीच एक अंतर है पीछे के हिस्से में शिकंजा में दो 0.12 का उपयोग करें।
    4. दो घटक एपॉक्सी (सिल्वर-एपॉक्सी) ट्विन-पैक थैली के किनारों पर छोटे उद्घाटन करें। एक डबल-तरफा स्पैटुला लें और थैली से प्रत्येक घटक की एक छोटी और बराबर मात्रा को स्कूप करने और उन्हें एक साथ मिलाने के लिए प्रत्येक पक्ष का उपयोग करें। एक सर्जरी के लिए पर्याप्त केवल एक छोटी राशि का उपयोग करें, क्योंकि मिश्रण 20 मिनट के भीतर जम जाता है। सुखाने को रोकने के लिए थैली के किनारों को सील करें।
      नोट: चांदी-एपॉक्सी पेंच और हेडमाउंट के बीच उचित विद्युत संपर्क के लिए अनुमति देता है और शिकंजा की स्थिरता को बढ़ाता है।
    5. पेचहेड और स्क्रू होल के बीच इस मिश्रण की एक छोटी राशि लागू करें, फिर प्रत्येक पेंच को तब तक कसें जब तक कि उसका सिर प्रत्यारोपण के आधार पर न हो जाए। सुनिश्चित करें कि कोई चांदी-epoxy दो शिकंजा के बीच संपर्क कर रहा है क्योंकि प्रत्येक पेंच एक व्यक्तिगत इलेक्ट्रोड के रूप में कार्य करता है और, एक सटीक संकेत सुनिश्चित करने के लिए, यह अंय पेंच के साथ संपर्क नहीं करना चाहिए ।
    6. यदि चांदी-एपॉक्सी मिश्रण गलत था, तो कनेक्शन को अलग करने के लिए अतिरिक्त को ध्यान से स्कूप करने के लिए कुछ दूसरी बार खिड़की है। ध्यान से दोनों EMG हेडमाउंट के पीछे किनारे से जाता है मोड़ जानवर के सिर और गर्दन के समोच्च का पालन करें, और फिर उन्हें nuchal मांसपेशियों में डालें।
    7. सॉल्वेंट की कई बूंदों के साथ पाउडर के आधा स्कूप मिलाकर आवेदन के लिए डेंटल सीमेंट तैयार करें। एक मिश्रण स्पैटुला का उपयोग करें और तब तक हिलाएं जब तक कि अंतिम मिश्रण पुट्टी की तरह, चिपचिपा लेकिन निंदनीय न हो, और जानवर के कपाल पर रखे जाने पर ठीक से गाढ़ा होने के लिए काफी कठोर हो।
    8. छह पिन छेद को कवर करने से बचते हुए पूरे हेडमाउंट को कवर करने वाले दंत सीमेंट मिश्रण को लागू करें, क्योंकि इससे प्री-एम्पलीफायर को जोड़ना असंभव हो जाएगा। सीमेंट जमना के लिए ~ 3−5 मिन रुको। सुनिश्चित करें कि त्वचा दंत सीमेंट के साथ हेडमाउंट के लिए सील नहीं है।
    9. त्वचा फ्लैप पकड़े हुए हेमोस्टेट जारी करें और प्लास्टिक आसन के चारों ओर त्वचा फ्लैप को जोड़कर चीरा बंद करें। त्वचा फ्लैप को सील करने के लिए ऊतक चिपकने की कई बूंदें लागू करें।
      नोट: यदि ईएमजी तार लीड को सीधा करने के लिए अनुमति देने के लिए त्वचा का चीरा लंबे समय तक बनाया गया था, तो त्वचा को ऊतक चिपकने वाले या सुताए जा सकता है। ऊतक चिपकने के साथ त्वचा को सील करना आमतौर पर पर्याप्त होता है। हालांकि, यदि चीरा के पोस्ट-ऑपरेटिव मॉनिटरिंग खोलने के दौरान देखा जाता है, तो इसके बजाय टांके की सिफारिश की जाती है।
    10. संक्रमण से बचने के लिए इंप्लांट के आसपास के क्षेत्र में क्लोरहेक्सीडीन एंटीसेप्टिक लगाएं। सोडियम लैक्टेट समाधान (जानवर के वजन के प्रति ग्राम 3 μL) को तरल पदार्थ और इलेक्ट्रोलाइट्स को बदलने के लिए नीचे ले जहाँ जानवर पिछले इंजेक्शन के बाद 2 घंटे से अधिक समय तक संज्ञाहरण के अधीन है।
    11. स्टीरियोटैक्टिक उपकरण से जानवर को निकालें और भविष्य की निगरानी के लिए एक संदर्भ के रूप में ईईजी सर्जरी के बाद जानवर के वजन को मापने। इंप्लांट के कारण जानवर का वजन सर्जरी से पहले से ज्यादा होगा।
    12. वसूली जेल और वसूली के लिए कुछ गीला चाउ टुकड़े के साथ, एक गर्म हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में जानवर रखें।
  3. एक तीन ईईजी चैनल (3ईईजी) हेडमाउंट प्रत्यारोपित करें।
    1. प्रदान किए गए स्टीरियोटैक्टिक निर्देशांक12का उपयोग करके छह बर्र छेद (स्थिरता शिकंजा के लिए तीन और इलेक्ट्रोड के लिए तीन) बनाने के लिए ~ 5,000−6,000 आरपीएम पर स्टील बिट (0.5 मिमी, राउंड, 1/4) के साथ हाई-स्पीड ड्रिल का उपयोग करें। ईईजी 1 और ईईजी 2 के लिए जमीन और सामान्य संदर्भ के लिए: एपी = 5.2 मिमी, एमएल = ± 1.5 मिमी; EEG1 और EEG2 के लिए: एपी = -3.0 मिमी, एमएल = ± 3.0 मिमी; स्वतंत्र EEG3 के लिए: एपी =-1.4 मिमी, एमएल = ± 1.5 मिमी।
    2. छह स्क्रू इलेक्ट्रोड को बर्र होल में रखें।
      नोट: शिकंजा को गहरा रखने से मस्तिष्क को महत्वपूर्ण नुकसान होगा। स्क्रू इलेक्ट्रोड हेडमाउंट की बेहतर स्थिरता प्रदान करते हैं।
    3. सॉल्वेंट की कई बूंदों के साथ पाउडर के आधा स्कूप मिलाकर आवेदन के लिए डेंटल सीमेंट तैयार करें। एक मिश्रण स्पैटुला का उपयोग करें और तब तक हिलाएं जब तक कि अंतिम मिश्रण पुट्टी की तरह, चिपचिपा लेकिन निंदनीय न हो, और जानवर के कपाल पर रखे जाने पर ठीक से गाढ़ा होने के लिए काफी कठोर हो।
    4. कपाल की पूरी उजागर सतह और प्रत्येक स्क्रू इलेक्ट्रोड को कवर करने वाले दंत सीमेंट मिश्रण लागू करें। सुनिश्चित करें कि त्वचा दंत सीमेंट के साथ हेडमाउंट के लिए सील नहीं है। सीमेंट को हल्का जमना के लिए ~ 1−2 मिन रुको। अगले कदम पर आगे बढ़ने से पहले पूर्ण ठोसकरण तक इंतजार करने की कोई जरूरत नहीं है ।
    5. इसे गर्म करने के लिए टांका लोहे को चालू करें। एक स्टीरियोटैक्टिक धारक हाथ में 3EEG हेडमाउंट रखें।
      नोट: हेडमाउंट की स्थिति है ताकि छह तार सीसा पदों तार की स्थिति से मेल खाता है प्रत्येक पेंच इलेक्ट्रोड की ओर जाता है ।
    6. हेडमाउंट को कम करें ताकि इसका वेंट्रल हिस्सा डेंटल सीमेंट के ऊपर रहे।
    7. प्रत्येक स्क्रू इलेक्ट्रोड से प्रत्येक लीड के तार को हेडमाउंट के संबंधित तार लीड के साथ मोड़ें।
      नोट: गलत तार सुराग घुमा डेटा व्याख्या जटिल या असंभव बना देगा ।
    8. सावधानी से कैंची का उपयोग कर के अतिरिक्त तार ट्रिम। उचित संकेत चालन के लिए तार की प्रत्येक मुड़ जोड़ी मिलाप।
      नोट: तारों की प्रत्येक जोड़ी को किसी अन्य जोड़ी के साथ संपर्क करना चाहिए, अन्यथा सिग्नल गुणवत्ता और डेटा व्याख्या से समझौता किया जाएगा।
    9. तार की प्रत्येक टांका जोड़ी को हेडमाउंट के चारों ओर मोड़ें, प्रत्येक जोड़ी के बीच संपर्क से बचें।
      नोट: यदि तार की ओर जाता है कम छंटनी नहीं कर रहे है पर्याप्त यह मुश्किल हो सकता है उंहें एक और तार को छूने के बिना हेडमाउंट के आसपास मोड़ । इस मामले में, एक जोड़ी को पहले मोड़ें, इसे दंत सीमेंट मिश्रण के साथ कवर करें, जमना करने के लिए ~ 1−2 मिन का इंतजार करें, फिर उसी फैशन में अगली जोड़ी के साथ आगे बढ़ें।
    10. दंत सीमेंट के साथ सभी तार को कवर खत्म करें जो केवल हेडमाउंट के काले हिस्से को उजागर कर रहा है।
      नोट: किसी भी दंत सीमेंट पाउडर या मिश्रण को हेडमाउंट के उजागर हिस्से के शीर्ष पर लागू न करने के लिए सावधान रहें क्योंकि छेद में कोई भी मलबा या सीमेंट संपर्क को अवरुद्ध कर देगा और या तो सिग्नल अनुपस्थिति या शोर का कारण बनेगा।
    11. त्वचा फ्लैप पकड़े हुए हेमोस्टट्स को छोड़ें। संक्रमण से बचने के लिए इंप्लांट के आसपास के क्षेत्र में क्लोरहेक्सीडीन एंटीसेप्टिक लगाएं।
    12. सोडियम लैक्टेट समाधान (जानवर के वजन के प्रति ग्राम 3 μL) को तरल पदार्थ और इलेक्ट्रोलाइट्स को बदलने के लिए नीचे ले जहाँ जानवर पिछले इंजेक्शन के बाद 2 घंटे से अधिक समय तक संज्ञाहरण के अधीन रहा है।
    13. स्टीरियोटैक्टिक उपकरण से जानवर को निकालें और भविष्य की निगरानी के लिए एक संदर्भ के रूप में ईईजी सर्जरी के बाद जानवर के वजन को मापने। इंप्लांट के कारण जानवर का वजन सर्जरी से पहले से ज्यादा होगा।
    14. वसूली जेल और वसूली के लिए कुछ गीला चाउ टुकड़े के साथ, एक गर्म हीटिंग पैड पर एक साफ पिंजरे में जानवर रखें।
      नोट: कपाल से किसी भी शेष नरम ऊतक को हटाने में हाइड्रोजन पेरोक्साइड एड्स।

5. अधिग्रहण प्रणाली से जानवरों को जोड़ना

  1. दोनों हाथों से जानवर को अधिग्रहण पिंजरे से हटाने के लिए कप करें और इसे एक फ्लैट सतह के साथ एक स्वच्छ क्षेत्र में स्थानांतरित करें, जैसे एक पशु हस्तांतरण स्टेशन (एटीएस)।
  2. धीरे-धीरे माउस को उसकी पीठ की त्वचा से पकड़ो। पूंछ से जानवर को न पकड़ें, क्योंकि इससे संकट होता है।
  3. ग्राउंड इलेक्ट्रोड के अनुरूप ईईजी हेडमाउंट में उद्घाटन की पहचान करें और उचित कनेक्शन के लिए तार के संबंधित पिन से मिलान करें।
    नोट: कम्यूटर से पशु हेडमाउंट तक तार का रिवर्स कनेक्शन इलेक्ट्रोड और संभावित रूप से विकृत तरंग रूपों से एक अलग पढ़ने में परिणाम होगा।
  4. जानवर को अधिग्रहण पिंजरे में लौटाएं और तार (ईईजी सिस्टम 1) या प्री-एम्पलीफायर (ईईजी सिस्टम 2) के दूसरे छोर को कम्यूटेटर से कनेक्ट करें।
    नोट: प्री-एम्पलीफायर (ईईजी सिस्टम 2) को कम्यूटेटर से तार से कनेक्ट करते समय, दोनों टेथर के सिरों पर सफेद निशान से मेल खाते हैं। रिवर्स कनेक्शन एम्पलीफायर के स्थायी नुकसान में परिणाम होगा और निर्माता द्वारा मरम्मत की आवश्यकता है, जो महंगे हैं।
  5. धीरे-धीरे जानवर को कम्यूटर से जोड़ने वाले तार को घुमाएं ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि तंत्र ठीक से काम करता है और जानवर स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित हो सकता है।

6. ईईजी डेटा अधिग्रहण सेटिंग्स

  1. ईईजी सिस्टम 1 अधिग्रहण पैरामीटर सेट करें।
    1. 500 हर्ट्ज के लिए नमूना दर निर्धारित करें; 5,000 हासिल; मोड नॉर्म 35 हर्ट्ज; एलपीएन बंद। 0.5 हर्ट्ज के लिए उच्च पास फिल्टर सेट करें।
      नोट: 100 हर्ट्ज (कम पास) बिल्ट-इन है और इसके लिए मैनुअल इनपुट की आवश्यकता नहीं है।
  2. ईईजी सिस्टम 2 अधिग्रहण पैरामीटर सेट करें।
    1. 600 हर्ट्ज के लिए नमूना दर निर्धारित करें; प्रीम्प गेन 100; लाभ 1 (EEG1,2)। 100 हर्ट्ज के लिए कम पास फिल्टर सेट करें।
      नोट: 1 हर्ट्ज (उच्च पास) बिल्ट-इन है और इसके लिए मैन्युअल इनपुट की आवश्यकता नहीं है।

7. वीडियो डेटा अधिग्रहण सेटिंग्स

  1. ईईजी सिस्टम 1 के लिए अधिग्रहण पैरामीटर सेट करें।
    नोट: एक साथ वीडियो डेटा प्राप्त करने के लिए एक तीसरे पक्ष के वीडियो अधिग्रहण प्रणाली की आवश्यकता है।
    1. उचित वीडियो गुणवत्ता के लिए 15 (न्यूनतम अनुशंसित) और 30 (अधिकतम उपलब्ध) के बीच फ्रेम दर निर्धारित करें। 640 x 640 पिक्सल तक रेजोल्यूशन सेट करें। H.264H के लिए संपीड़न के प्रकार सेट करें ।
  2. ईईजी सिस्टम 2 के लिए अधिग्रहण पैरामीटर सेट करें।
    नोट: यह ईईजी सिस्टम एक वीडियो सिस्टम और सॉफ्टवेयर प्रदान करता है जो चार जानवरों के लिए एक ही फ़ाइल में वीडियो और ईईजी डेटा को एक साथ सिंक्रोनाइज़ करता है (सामग्री की तालिकादेखें)।
    1. उचित वीडियो गुणवत्ता के लिए 15 (न्यूनतम अनुशंसित) और 30 (अधिकतम उपलब्ध) के बीच फ्रेम दर निर्धारित करें। 640 x 480 पिक्सल तक रेजोल्यूशन सेट करें। वेबएम फ़ाइल प्रारूप में संपीड़न के प्रकार निर्धारित करें।

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Representative Results

यहां उल्लिखित प्रोटोकॉल दोहराव फैलाना टीबीआई(चित्रा 1)के माउस मॉडल का उपयोग करके अलगाव (उदाहरण के लिए, अनुपस्थिति में एक फोकल घाव) में फैलाना चोट को शामिल करने की विधि का वर्णन करता है। चित्रा 1ए में वजन ड्रॉप डिवाइस और इसके घटकों(चित्रा 1ए, a1−a5)को दर्शाया गया है जो इस मॉडल में टीबीआई को शामिल करने के लिए उपयोग किया जाता है और प्रक्रिया के दौरान महत्वपूर्ण कदम(चित्रा 1बी, बी 1−बी 5)।

इस मॉडल की विशेषताओं में टीबीआई के परिणामस्वरूप मस्तिष्क को एक फोकल घाव की कमी, चेतना की हानि, उच्च जीवित रहने की दर, देर से जब्ती शुरुआत (टीबीआई के 1 सप्ताह) का उद्भव, और सहज, अकारण, आवर्ती बरामदगी शामिल हैं। टीबीआई के बाद कम से कम तीन सप्ताह की विलंबता अवधि के बाद टीबीआई चूहे।

यह प्रोटोकॉल एक स्वच्छ शल्य चिकित्सा क्षेत्र(चित्रा 2)की स्थापना के लिए विस्तृत प्रक्रियाओं को दर्शाता है, विभिन्न इलेक्ट्रोड सरणी(चित्रा 3)को प्रत्यारोपित करने के लिए एक कदम-दर-कदम दृष्टिकोण प्रदान करता है, और इस मॉडल में बरामदगी(चित्रा 4 और चित्रा 5)का पता लगाने के लिए दो अलग-अलग ईईजी अधिग्रहण प्रणालियों (सामग्री की तालिकादेखें) का उपयोग करने पर एक विस्तृत गाइड शामिल है। एक विशिष्ट जब्ती की स्पेक्ट्रल शक्ति 15 हर्ट्ज(चित्रा 4)पर एक चोटी के साथ 10 से 40 हर्ट्ज की आवृत्ति सीमा में उच्चतम घनत्व इंगित करती है। चूहों में अधिकांश दौरे आक्षेप हैं, जिनकी औसत अवधि 12−15 एस है। बरामदगी का केवल एक छोटा सा अंश अभ्यस्त है । या तो सिस्टम का उपयोग करने के फायदों और नुकसान की पूरी तरह से तुलना चर्चा अनुभाग में विस्तृत है। इसके अलावा, यह प्रोटोकॉल दोहराव वजन ड्रॉप टीबीआई के बाद जानवरों में जब्ती शुरू करने की समयसीमा को दर्शाता है, कुछ जानवरों में जब्ती क्लस्टरिंग दिखारहा है(चित्र6)जो रुक-रुककर रिकॉर्डिंग के बजाय निरंतर प्राप्त करने के महत्व पर जोर देता है, क्योंकि यह उन जानवरों की सटीक स्तरीकरण सुनिश्चित करेगा जो टीबीआई के बाद उन लोगों से सहज दौरे विकसित करते हैं जो ऐसा नहीं करते हैं। महत्वपूर्ण बात, यह प्रोटोकॉल पीटीई के कृंतक मॉडलों के फायदे और नुकसान और टीबीआई के बाद मनुष्यों की एक विशिष्ट आबादी का प्रतिनिधित्व करने की उनकी क्षमता पर भी चर्चा करता है।

Figure 1
चित्रा 1: दोहराव फैलाना टीबीआई का माउस मॉडल। (A)वजन ड्रॉप डिवाइस। (a1) वजन ड्रॉप ट्यूब। (a2) एक 100 ग्राम वजन रॉड। (a3) रॉड पकड़े पिन। (a4) यदि ऊंचाई बदलरहा है या वजन ड्रॉप ट्यूब से रॉड को हटाने के लिए रॉड को बढ़ाने के लिए स्ट्रिंग। (a5)। वजन ड्रॉप ट्यूब के नीचे जानवर रखने के लिए फोम पैड। (ख)वजन ड्रॉप प्रक्रिया। (b1) स्टेनलेस स्टील डिस्क आंखों और कानों की रेखा के बीच सिर के केंद्र में तैनात है। (b2 और b3) दृश्य पुष्टि के बाद कि जानवर का सिर फ्लैट स्थिति में है और फोम पैड स्थानांतरित कर दिया जाता है, वजन ड्रॉप ट्यूब के नीचे जानवर के सिर रखते हुए। (b4) स्टेनलेस स्टील डिस्क के केंद्र से टकराते हुए, वजन रॉड पकड़े पिन की रिहाई। (b5) माउस प्रभाव और चेतना के नुकसान के तुरंत बाद एक बाँझ तौलिया पर रखा जाता है समय यह जानवर को ठीक करने के लिए और सही ही लेता है मापने के द्वारा मूल्यांकन किया जाता है । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2: सर्जिकल फील्ड तैयारी और ईईजी इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट योजना। सभी आवश्यक भागों की उपलब्धता सुनिश्चित करने के लिए जानवर को एनेस्थेटाइजिंग करने से पहले सर्जरी और इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपण के लिए ऑटोक्लेव किए गए उपकरण और आवश्यक सामग्री तैयार की जाती है। यह एक बाँझ क्षेत्र है और गैर-बाँझ सामग्रियों के साथ इस क्षेत्र को दूषित नहीं करना अनिवार्य है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्रा 3: ईईजी सिस्टम 1 और 2 का उपयोग करके स्टीरियोटैक्टिक लैंडमार्क और इलेक्ट्रोड प्लेसमेंट का योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व। शीर्ष पैनल में इस प्रोटोकॉल में वर्णित तीन अलग-अलग हेडमाउंट प्रत्यारोपित करने के तरीकों को दर्शाया गया है। (A)सिंगल ईईजी चैनल, बाइपोलर असेंबल । (ख)कॉमन रेफरेंस, बाइपोलर असेंबल और एक ईएमजी-चैनल वाले दो ईईजी चैनल । (ग)एकाधिकार (चैनल 1−2) और बाइपोलर (चैनल 3) असेंबल का उपयोग करते हुए तीन ईईजी चैनल। नीचे पैनल शीर्ष पैनल के रूप में प्रत्यारोपित हेडमाउंट और शिकंजा दर्शाया गया है । दो उद्देश्यों के लिए इस प्रोटोकॉल में उपयोग किए जाने वाले तीन प्रकार के शिकंजा: स्थिरता शिकंजा (ईईजी सिस्टम 1) या स्थिरता और इलेक्ट्रोड (ईईजी सिस्टम 2) के रूप में। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्रा 4: ईईजी सिस्टम 1 का उपयोग करके अर्जित सहज जब्ती। शीर्ष पैनल 1EEG हेडमाउंट का उपयोग कर प्राप्त डेटा का उपयोग कर के बार वजन ड्रॉप टीबीआई के बाद 23 दिनों के एक माउस में एक सहज जब्ती को दर्शाया गया है । (A)प्री-इटाल (प्री-जब्ती) गतिविधि। (ख)इटाल (जब्ती) गतिविधि। (ग)पोस्ट-आईसीटीएल (जब्ती के बाद) अवसाद। नीचे पैनल: पावर स्पेक्ट्रम घनत्व कस्टम स्क्रिप्ट और सॉफ्टवेयर का उपयोग कर गणना की जाती है (सामग्री की तालिकादेखें)। मतलब शक्ति = युग के भीतर बिजली स्पेक्ट्रम कीऔसत शक्ति (इकाइयों: V 2/Hz) । औसत आवृत्ति = आवृत्ति जिस पर युग के भीतर कुल शक्ति का 50% तक पहुंच जाता है (इकाइयां: हर्ट्ज)। मतलब आवृत्ति = आवृत्ति जिस पर युग के भीतर औसत शक्ति (इकाइयों: हर्ट्ज) तक पहुंच जाती है। स्पेक्ट्रल एज = आवृत्ति जिसके नीचे युग के भीतर कुल शक्ति का उपयोगकर्ता-निर्दिष्ट प्रतिशत पहुंच जाता है (इकाइयां: हर्ट्ज)। पीक फ्रीक्वेंसी = आवृत्ति जिस पर युग के दौरान अधिकतम शक्ति होती है। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 5
चित्रा 5: ईईजी सिस्टम 2 का उपयोग करके अर्जित सहज दौरे। (A)बार-बार वजन ड्रॉप टीबीआई के 65 दिनों के बाद माउस में सहज गैर-आक्षेप (इलेक्ट्रोग्राफिक) जब्ती। 2EEG/1EMG हेडमाउंट का उपयोग कर प्राप्त डेटा। (ख)वजन ड्रॉप टीबीआई के 97 दिनों के बाद माउस में सहज आक्षेप जब्ती। 3ईईजी हेडमाउंट का उपयोग करके प्राप्त डेटा। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 6
चित्रा 6: बार-बार वजन ड्रॉप टीबीआई के बाद चूहों में जब्ती घटना समय रेखा। चोट के तीन सप्ताह बाद जल्द जब्ती देखी गई । कुछ जानवरों को एक ही दिन के भीतर बरामदगी के समूहों का विकास दौरे के बिना कई हफ्तों के बाद । टीबीआई के चार महीने बाद तक जानवरों की रिकॉर्डिंग की गई । कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

   

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Discussion

सीसीआई और एफपीआई मॉडल ों के विपरीत फोकल और फैलाना चोट के केंद्र या संयोजन को प्रेरित करते हुए, इस प्रोटोकॉल में वर्णित दोहराव फैलाना टीबीआई का मॉडल फोकल मस्तिष्क की चोट के अभाव में फैलाना चोट को शामिल करने की अनुमति देता है और इसके लिए खोपड़ी या कपाल उद्घाटन और संबंधित सूजन की आवश्यकता नहीं होती है। इस मॉडल में क्रैनिएक्टोमी की अनुपस्थिति का एक अतिरिक्त लाभ यह है कि यह न केवल पुरानी निरंतर ईईजी रिकॉर्डिंग के लिए इलेक्ट्रोड को प्रत्यारोपित करने की अनुमति देता है, बल्कि वीवो 2-फोटॉन इमेजिंग से पहले, तुरंत बाद, और बार-बार दिनों, हफ्तों और यहां तक कि टीबीआई के बाद भी महीनों बाद शांद्रा और रोबेल 201913में वर्णित है।

चाहे जो पशु मॉडल चुना जाता है, डेटा अधिग्रहण दृष्टिकोण अपनाया किसी भी सफल और व्यापक अध्ययन का एक महत्वपूर्ण तत्व है । पोस्ट-ट्रॉमेटिक मिर्गी के कृंतक मॉडल में दौरे की आवृत्ति कम14है, जो प्रति दिन 0.3−0.4 बरामदगी के बीचहै, 9,15,और पहली जब्ती से पहले अव्यक्त अवधि प्रारंभिक टीबीआई प्रक्रिया के महीनों के बाद भी दिनों या हफ्तों से महीनों तक कहीं भी चल सकती है। अंत में, गैर-दर्दनाक मॉडलों के विपरीत, जिनमें कम समय में बरामदगी की आम तौर पर अधिक घटना होती है, टीबीआई वाले औसतन केवल 9%−50% जानवरों को छह महीने8,16तक की अवधि में सहज दौरे होंगे। इससे पता चलता है कि सार्थक अध्ययनों के लिए निरंतर दीर्घकालिक वीडियो-ईईजी रिकॉर्डिंग की आवश्यकता होती है।

टीबीआई के प्रत्येक पशु मॉडल का व्यापक लक्ष्य पीटीई में पाए जाने वाले सेलुलर और आणविक तंत्रों की बेहतर जांच करने के लिए मानव रोगियों में पाए जाने वाले टीबीआई के विभिन्न रूपों को यथासंभव बारीकी से पुन: पेश करना है। इस प्रोटोकॉल में तकनीक चिकित्सकीय लक्ष्यों की खोज, प्रभावकारिता और नए निवारक और चिकित्सीय उम्मीदवारों की सहनीयता के परीक्षण, और विश्वसनीय बायोमार्कर या मिर्गी के भविष्यवक्ताओं के विकास के बाद की सुविधा के लिए मदद मिलेगी Tbi.

वजन ड्रॉप प्रक्रिया के दौरान संभावित चुनौतियां
क्योंकि सिर एक स्टीरियोटैक्टिक फ्रेम में तय नहीं है, अतिरिक्त देखभाल सिर और धातु की थाली की एक फ्लैट स्थिति सुनिश्चित करने के लिए लिया जाना चाहिए । यदि भारित रॉड धातु की प्लेट या सिर को कोण पर मारता है या यदि वजन माउस सिर के किनारे तक फिसल जाता है, तो चोट बायोमैकेनिक्स अलग होंगे, संभवतः मामूली या कोई चोट नहीं होती है। अतीत में, धातु की प्लेट परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए खोपड़ी से चिपकी हुई थी। हालांकि, वजन ड्रॉप के बाद माउस खोपड़ी से धातु की प्लेट और गोंद को हटाना, भले ही देखभाल के साथ प्रदर्शन किया गया हो, मेनिंग्स को नुकसान पहुंचाया गया हो, जिसके परिणामस्वरूप संवहनी क्षति और बाद में मस्तिष्क के ऊतकों को भी नुकसान हुआ। इसके अलावा, चीरा चिकित्सा की आवश्यकता है, संभवतः एक परिधीय प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया है, जो परिवर्तनशीलता शुरू हो सकता है शामिल । इन कारणों से यह खोपड़ी के लिए धातु की थाली चिपका छोड़ चुना गया था । जानवरों को दोहराया (यानी, इस प्रोटोकॉल में 3x) चोट के साथ मर सकता है। 25 ग्राम से नीचे शरीर के वजन वाले चूहे दोहराए गए प्रभावों को बर्दाश्त नहीं कर सकते हैं। जबकि एकल चोटों लगभग मृत्यु दर में परिणाम कभी नहीं, C57BL/6 जानवरों के 7% तक दोहराया प्रभावों के बाद मर जाते हैं9। कुछ जानवरों में मोटर घाटे को देखा जा सकता है। ये घाटे हिंदअंग पारेसिस या चाल असामान्यताओं के रूप में प्रकट होते हैं। यह आमतौर पर खराब वसूली के लिए एक शकुन कारक है और यह सिफारिश की जाती है कि जानवर को बलिदान किया जाए। दर्द या संकट के लक्षणों में वजन घटाने, खराब ग्रूमिंग, निर्जलीकरण, बढ़ी हुई चिंता, कम या अनुपस्थित अन्वेषणात्मक गतिविधि (हाइड्रोगेल/रिकवरी, चाउ और/या नेस्लेट अछूते रहते हैं) शामिल हैं । बचाव एनालजेसिया (०.१ मिलीग्राम/किलो बुप्रेनोरफिन) को टीबीआई से तीन दिनों के लिए हर 8 घंटे के लिए चमड़े के नीचे प्रशासित किया जा सकता है ताकि दर्द को कम किया जा सके और जानवर को मानवीय अंत बिंदु तक पहुंचने से रोका जा सके । जलयोजन के लिए दिन में दो बार चमड़े के नीचे सोडियम लैक्टेट समाधान (जानवर के वजन का 3 μL प्रति ग्राम) प्रशासित किया जा सकता है। टीबीआई के बाद आम तौर पर जानवर तीन दिनों के भीतर ठीक हो जाते हैं । प्रयोगात्मक प्रक्रियाओं के बाद पशु निगरानी के लिए पांच चरण शरीर की स्थिति स्कोर (बीसीएस) का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। चरणों में शामिल हैं (1) दुर्बल (कंकाल संरचनाएं बेहद प्रमुख हैं, कशेरुका बेहद खंडित); (2) अशर्त (कशेरुकी स्तंभ का विभाजन स्पष्ट है, पृष्ठीय श्रोणि हड्डियां आसानी से स्पष्ट हैं); (3) अच्छी तरह से वातानुकूलित (कशेरुकी और पृष्ठीय श्रोणि मामूली दबाव के साथ प्रमुख स्पष्ट नहीं हैं); (4) ओवर कंडिशन्ड (रीढ़ एक सतत स्तंभ है, कशेरुका केवल दृढ़ दबाव के साथ स्पष्ट); (5) मोटापे से ग्रस्त (माउस चिकनी और भारी है, हड्डियों की संरचना मांस और चमड़े के नीचे वसा गायब हो जाती है)। जब बीसीएस अपने पूर्व टीबीआई वजन की तुलना में वयस्क माउस में 1−2, 20% या उससे अधिक वजन घटाने होता है, तो दर्द या संकट के लक्षण एनाल्जेसिक, आत्म-विकृति के लक्षण, निर्जलीकरण के लक्षण, हाइपोथर्मिया, न्यूरोलॉजिक घाटे की उपस्थिति (असामान्य चाल या मोटर पैरासिस) द्वारा समाप्त नहीं किए जाते हैं। पदार्थ प्रशासन के कई संभावित परिणामों पर विचार किया जाना चाहिए । बुप्रेनोर्फिन इंजेक्शन इंजेक्शन 17 इंजेक्शन17के बाद 10 00 00 बजे अपने एनाल्जेसिक प्रभाव के पहले शिखर पर पहुंच जाता है । पहला प्रभाव बुप्रेनोरफिन प्रशासित होने के बाद सेकंड होता है, सुझाव देता है कि सही समय का पहला माप प्रभावित होने की संभावना नहीं है। हालांकि, इसे पूरी तरह से वेरिएबल के रूप में बाहर नहीं रखा जा सकता। इसलिए प्रयोगकर्ताओं को अपने निर्णय का प्रयोग करने की सलाह दी जाती है । यदि वजन ड्रॉप प्रक्रिया स्टीरियोटैक्टिक सर्जरी द्वारा अपनाई जाती है और कार्प्रोफेन प्रशासित किया जाता है तो यह ध्यान रखना महत्वपूर्ण है कि कार्प्रोफेन एक विरोधी भड़काऊ एजेंट है जो जब्ती की घटना को प्रभावित कर सकता है, इसलिए प्रयोगकर्ताओं को इसके उपयोग पर सावधानीपूर्वक विचार करने की सलाह दी जाती है।

सर्जरी के दौरान संभावित चुनौतियां
70% इथेनॉल के उपयोग के साथ संदूषण या संक्रमण का खतरा कम हो जाएगा, लेकिन इसके परिणामस्वरूप बाँझ स्थितियां नहीं होंगी। वैकल्पिक रूप से, बाँझ सर्जिकल दस्ताने का उपयोग किया जा सकता है। हालांकि, स्टीरियोटैक्टिक उपकरण अपने आप में बाँझ नहीं है, इसलिए किसी भी मैनुअल हेरफेर के परिणामस्वरूप दस्ताने की बाँझ स्थिति का नुकसान होगा। इसलिए, सर्जरी के दौरान किसी भी अस्टराइल सामग्री के संपर्क के बाद 70% इथेनॉल के साथ छिड़काव की आवश्यकता होती है। मस्तिष्क में कपाल के माध्यम से ड्रिलिंग मस्तिष्क के ऊतकों को नुकसान पहुंचाता है और विपुल रक्तस्राव का कारण बन सकता है। बर्र छेद बनाने में अत्यधिक सावधानी बरती जाती है। स्टीरियोटैक्टिक आर्म में हैंड ड्रिल को ठीक करना और धीरे-धीरे इसे मैन्युअल रूप से ड्रिलिंग करते समय छेद को ड्रिल करने पर पसंद किया जाता है। इलेक्ट्रोड और फिक्सेशन शिकंजा योजना से गहरा डूब सकता है, ड्यूरा मेटर (सबड्यूरल प्लेसमेंट) या कॉर्टेक्स (कॉर्टिकल प्लेसमेंट) को घायल कर सकता है। यह विपुल रक्तस्राव और एक फोकल घाव का कारण बन सकता है। प्रयोगकर्ता को सर्जरी के दौरान जानवर के ओवरहीटिंग से बचना चाहिए। यदि तापमान सेंसर सही ढंग से तय नहीं किया जाता है तो यह आवश्यक 37 डिग्री सेल्सियस तापमान को बनाए नहीं रखेगा, जिससे ओवरहीटिंग, जलने और कभी-कभी जानवर की मौत हो जाएगी। जानवर की आंखें सर्जरी के दौरान सूखी, चिड़चिड़े या क्षतिग्रस्त हो जाती हैं, अगर जानवर को स्टीरियोटैक्टिक उपकरण में रखा जाता है, चिकनाई नहीं की जाती है।

पश्चात निगरानी
प्रक्रिया या सर्जरी समाप्त होने के तुरंत बाद पश्चात निगरानी शुरू होती है। जानवर का निरीक्षण तब तक करें जब तक कि यह संज्ञाहरण से जाग न जाए और रक्तस्राव या पैरासिस सहित किसी भी सर्जरी से संबंधित जटिलताओं की उपस्थिति या अनुपस्थिति की तलाश न हो। यदि रक्तस्राव अधूरा चीरा बंद होने से मनाया जाता है, तो जानवर को एनेस्थेटाइज करें, क्लोरहेक्सिडीन के साथ रक्तस्राव स्थल को साफ करें, ऊपर वर्णित घाव बंद करें और जानवर को रिकवरी पिंजरे में वापस करें। सर्जरी के बाद लगभग 1−2 घंटे, जानवर को एनेस्थीसिया से पूरी तरह से जागना चाहिए, जिसमें पैरेसिस या दर्द के कोई संकेत नहीं होने के साथ पिंजरे में स्वतंत्र रूप से आगे बढ़ना चाहिए। जानवर खुद को संवारना शुरू कर देगा, यही वजह है कि जानवर को संवारने के दौरान इसे खोलने से रोकने के लिए चीरा लगाना जरूरी है। एक बार जानवर के बरामद होने के बाद, इसे पिंजरे/कक्ष में स्थानांतरित करें जिसका उपयोग ईईजी डेटा अधिग्रहण के लिए किया जाएगा। इससे जानवर को नए माहौल की आदत पड़ जाएगी। यह दीर्घकालिक रिकॉर्डिंग (महीनों) के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है। पशु पिंजरे में एक रिकवरी जेल (सामग्री की तालिकादेखें), गीला चाउ, एक नेस्लेऔर पानी की बोतल होनी चाहिए। इससे उचित वसूली होगी और जानवरों को पोषक तत्वों और पानी तक पहुंच मिलेगी। रोजाना जानवर की निगरानी जारी रखें। मूल्यांकन (क) दर्द या संकट के संकेत ों के लिए जानवर के व्यवहार का दृश्य निरीक्षण शामिल होना चाहिए, जिसमें वजन घटाने, खराब सौंदर्य, बढ़ी हुई चिंता, कम या अनुपस्थित अन्वेषणात्मक गतिविधि (हाइड्रोगेल/रिकवरी, चाउ और/या नेस्ले अछूता रहता है) और ईईजी प्रत्यारोपण के आसपास चीरा क्षेत्र का उचित उपचार; (ख) निर्जलीकरण और कुपोषण के संकेतों के लिए बीसीएस का आकलन; (ग) पशु का वजन। सोडियम लैक्टेट समाधान (जानवर के वजन के प्रति ग्राम 3 μL) को कम मात्रा में प्रशासित करें यदि जानवर निर्जलीकरण के लक्षण दिखाता है (सामग्री की तालिकादेखें)। यदि जानवर दर्द या संकट के लक्षण दिखाता है तो बुप्रेनोर्फिन (0.1 मिलीग्राम/किलो) को नीचे रखें। यदि दर्द के लक्षण जारी रहती है buprenorphine हर 8 एच प्रशासित किया जा सकता है निगरानी दिन में दो बार करने के लिए बढ़ा या अगर एक जानवर दर्द और/या संकट के लक्षण दिखा रहा है चाहिए । एक तार के माध्यम से अधिग्रहण प्रणाली से कनेक्ट करने से पहले ईईजी सर्जरी के बाद कम से कम तीन दिनों के लिए जानवर को ठीक होने की अनुमति दें। मानवीय अंत बिंदु मापदंड ऊपर वजन ड्रॉप प्रक्रिया के दौरान संभावित चुनौतियों के रूप में ही कर रहे हैं ।

अधिग्रहण प्रणालियों और हेडमाउंट के फायदे और नुकसान
एक ही ईईजी चैनल हेडमाउंट के साथ ईईजी सिस्टम 1 का मुख्य लाभ हार्डवेयर, घटकों और सेवा की अपेक्षाकृत कम लागत है। सरल और सीधा विन्यास भी उपयोगकर्ताओं को अपनी प्राथमिकताओं के लिए प्रणाली को अनुकूलित करने की अनुमति देता है। प्रत्येक अंतर एम्पलीफायर एक ईईजी चैनल प्रदान करता है, हालांकि कई अंतर एम्पलीफायरों को एक दूसरे के साथ जोड़ा जा सकता है, जिससे प्रत्येक जानवर के लिए चैनलों की संख्या बढ़ सकती है। इस प्रणाली में, प्रति पशु एक चैनल विन्यास का उपयोग एक साथ 20 जानवरों की पुरानी दीर्घकालिक ईईजी रिकॉर्डिंग प्राप्त करने के लिए किया गया था। पोस्ट-ट्रॉमेटिक दौरे आमतौर पर सामान्यीकृत होते हैं, और इलेक्ट्रोड के द्विपक्षीय द्विध्रुवी असेंबल के साथ इस प्रकार की एपिलेप्पफॉर्म गतिविधि का पता लगाना आसान होता है। हालांकि, इस दृष्टिकोण का नुकसान यह है कि मज़बूती से फोकलिटी, पार्श्वीकरण, या एपिब्लिफॉर्म गतिविधि के प्रचार का पता लगाना असंभव है, क्योंकि इसके लिए कई चैनलों की आवश्यकता होगी। एक और संभावित चुनौती समय के साथ एकल चैनल का शोर संदूषण हो सकता है, जो इसे जानवर से उपयोगी डेटा प्राप्त करने में असमर्थ प्रदान करता है। इसे दो या दो से अधिक अंतर एम्पलीफायरों के संयोजन से दूर किया जा सकता है, जो प्रति पशु चैनलों की संख्या को दोगुना करता है। अंत में, एक ही चैनल से प्राप्त डेटा संभावित कलाकृतियों से अलग होना कठिन है, और एपिपिफॉर्म गतिविधि जानवर के व्यवहार की वीडियो रिकॉर्डिंग द्वारा सबसे अच्छा समर्थित है। इस कारण से, सभी रिकॉर्डिंग ईईजी अधिग्रहण के साथ सिंक्रोनाइज्ड निरंतर वीडियो मॉनिटरिंग को संयुक्त करती हैं। इस प्रणाली और उसके सॉफ्टवेयर की एक सीमा यह है कि इसमें वीडियो अधिग्रहण प्रणाली शामिल नहीं है, और इसलिए सिंक्रोनस वीडियो प्राप्त करने के लिए एक कस्टम थर्ड-पार्टी सिस्टम की आवश्यकता होती है।

मल्टी-चैनल हेडमाउंट के साथ ईईजी सिस्टम 2 का प्रमुख लाभ एम्पलीफायर के लिए कम्यूटर के माध्यम से पारित होने से पहले प्रीम्पलीफायर (सामग्री की तालिकादेखें) द्वारा अधिग्रहीत संकेत के प्रीफ़िल्टरिंग के कारण सिग्नल की उच्च गुणवत्ता है। इस प्रणाली में एम्पलीफायर निम्नलिखित विन्यास ों में तीन चैनलों में डेटा के अधिग्रहण की अनुमति देते हैं: 2 ईईजी + 1 ईएमजी चैनल या तीन ईईजी चैनल (सामग्री की तालिकादेखें)। यह न केवल सामान्यीकृत गतिविधि का पता लगाने की अनुमति देता है बल्कि संभावित रूप से फोकल एपिलेप्टिफॉर्म गतिविधि भी है। एक और बड़ा लाभ यह है कि इस प्रणाली को विशेष रूप से पशु अनुसंधान के लिए डिजाइन किया गया था और इसलिए एक वीडियो रिकॉर्डिंग प्रणाली और सॉफ्टवेयर प्रदान करता है जो एक ही फ़ाइल में चार जानवरों के लिए ईईजी और वीडियो चैनलों को सिंक्रोनाइज़ करने में सक्षम है, जो विश्लेषण को ईईजी सिस्टम 1 की तुलना में आसान और अधिक सुविधाजनक बनाता है। इस प्रणाली का उपयोग किए गए हेडमाउंट के प्रकार के अलावा अन्य प्रणाली में किसी भी संशोधन के बिना जब्ती और नींद विश्लेषण के लिए डेटा के अधिग्रहण के लिए उपयोग करना आसान है। सर्किट बोर्ड के आकार और विन्यास के कारण 2EEG/1EMG हेडमाउंट केवल निश्चित स्थानों पर इलेक्ट्रोड प्रत्यारोपित करने की अनुमति देता है । 3ईईजी हेडमाउंट में तार के साथ स्क्रू इलेक्ट्रोड वांछित स्थान पर प्रत्यारोपित करने में लचीलापन की अनुमति देता है, जिसकी संभावना या तो एकाधिकार या द्विध्रुवी अधिग्रहण करने की संभावना है, जहां संदर्भ इलेक्ट्रोड रखा गया है। हालांकि, 3EEG हेडमाउंट के प्रत्यारोपण के लिए टांका की आवश्यकता होती है, जो सर्जरी के लिए अधिक कदम जोड़ता है और अतिरिक्त सावधानी और परिशुद्धता की आवश्यकता होती है। कनेक्टिंग टेथर्स और प्रीम्पलीफायर विशेष रूप से चूहों और अपरिपक्व चूहों जैसे छोटे कृंतकके लिए डिज़ाइन किए गए थे, और पतले, कम वजन वाले केबल हैं जो जानवर के सिर पर थोड़ा दबाव पैदा करते हैं। सिस्टम का एक नुकसान हार्डवेयर, सॉफ्टवेयर, वीडियो लाइसेंस और घटकों (यानी, प्रीएम्पलीफायर और हेडमाउंट) की अपेक्षाकृत उच्च लागत है।

ईईजी डेटा अधिग्रहण में महत्व और महत्वपूर्ण कदम
कम्यूटर में एक घूर्णन तंत्र होता है, जिससे पशु आंदोलन की दिशा के आधार पर तार को घुमाने की अनुमति होती है। यदि यह तंत्र विफल हो जाता है, तो जानवर का आंदोलन प्रतिबंधित हो जाएगा, जिसके परिणामस्वरूप ईईजी कैप को हटाया जा सकता है। नए इलेक्ट्रोड रखने के लिए बार-बार सर्जरी का प्रयास किया जा सकता है। हालांकि, यह चुनौतीपूर्ण या असंभव हो सकता है यदि पिछले ईईजी कैप को हटाने से खोपड़ी और मस्तिष्क को नुकसान होता है। ईईजी डेटा अधिग्रहण के लिए नमूना दर कम से कम 2−2.5 x ब्याज की उच्चतम आवृत्ति होनी चाहिए। उच्च नमूना दरों के परिणामस्वरूप फ़ाइल आकार में वृद्धि की कीमत पर डेटा का उच्च समाधान होता है, जिसे कई जानवरों की निरंतर रिकॉर्डिंग प्राप्त होने पर स्टोर करना और प्रक्रिया करना मुश्किल हो सकता है। इसलिए, नमूना दर को एक स्तर पर अनुकूलित करना आवश्यक है जो फ़ाइल आकार को कम करते हुए गुणवत्ता की हानि के बिना आवश्यक डेटा प्राप्त करने की अनुमति देता है।

वीडियो डेटा अधिग्रहण में महत्व और महत्वपूर्ण कदम
कृंतक में, मनुष्यों की तरह, पीटीई संबद्ध लक्षण विज्ञान और इलेक्ट्रोग्राफिक सहसंबंधित में व्यापक परिवर्तनशीलता के साथ प्रकट हो सकता है, जिससे ईईजी अधिग्रहण के दौरान एक साथ वीडियो प्राप्त करना आवश्यक हो जाता है ताकि देखी गई ईईजी घटनाओं की ठीक से व्याख्या और वर्गीकृत किया जा सके। सिंक्रोनाइज्ड वीडियो के अभाव में ईईजी डेटा की व्याख्या विशेष रूप से चुनौतीपूर्ण है जब एक भी ईईजी चैनल का उपयोग किया जाता है। इस मामले में, यह निर्धारित करना मुश्किल हो सकता है कि ईईजी तरंग एक विरूपण साक्ष्य है, जब तक कि अन्य साक्ष्य (वीडियो) जब्ती के रूप में वर्गीकरण का समर्थन नहीं करता है। मोशन कलाकृतियां जब्ती के इलेक्ट्रोग्राफिक पैटर्न के समान दिखाई दे सकती हैं। इसलिए, ईएमजी पुष्टि के साथ या बिना वीडियो एक आवश्यकता है। जबकि वीडियो रिकॉर्डिंग प्रकाश और अंधेरे दोनों चक्रों के दौरान किया जाता है, वीडियो की गुणवत्ता हमेशा अंधेरे घंटों के दौरान संतोषजनक और स्पष्ट नहीं हो सकती है। इसके अलावा अगर आइसीटीएल जैसी ईईजी इवेंट के दौरान जानवर को कैमरे से दूर कर दिया जाता है तो उसके व्यवहार का आकलन करना चुनौतीपूर्ण हो सकता है। उन मामलों में, ईईजी और वीडियो के अलावा इलेक्ट्रोमायोग्राफी (ईएमजी) संकेत प्राप्त करना मामूली व्यवहार दौरे (कम मोटर घटकों के साथ) के दौरान मांसपेशियों की गतिविधि के बारे में जानकारी प्रदान करके या ईईजी पर अनुपस्थिति जैसी स्पाइक-और-स्लो-वेव डिस्चार्ज के दौरान पशु आंदोलन की कमी की पुष्टि करके चुनौती को हल कर सकता है। ईएमजी चैनल के साथ संभावित चुनौतियां ईईजी चैनलों के साथ चुनौतियों के समान हैं, जैसे शोर संदूषण, इलेक्ट्रोड का गलत प्लेसमेंट, या रिकॉर्डिंग के लंबे समय तक इलेक्ट्रोड ढीला (या सतह संपर्क खोना) बन रहा है। ईईजी विश्लेषण के साथ वीडियो के उपयोग के दो उद्देश्य हैं: इस बात की पुष्टि करने के लिए कि ईईजी ईवेंट जानवर के आंदोलन (अन्वेषणात्मक व्यवहार, पीने, चबाने, खरोंच, खींच, सौंदर्य, या तेजी से/परिश्रम करने वाली श्वास) के कारण एक विरूपण साक्ष्य नहीं है और आक्षेप और गैर-आक्षेप बरामदगी के बीच अंतर करना है। आक्षेप या गैर आक्षेप बरामदगी की विशेषता के लिए एक संशोधित Racine पैमाने का उपयोग करने की सिफारिश की है । चरणों में शामिल है (0) किसी भी पहचाने जाने योग्य मोटर अभिव्यक्ति के बिना शुद्ध इलेक्ट्रोग्राफिक जब्ती; (1) ओरोफेशियल ऑटोमैटिक्स और सिर हिला; (2) फोरलिम्ब क्लोनिक झटका; (3) द्विपक्षीय अग्रअंग क्लोनस; (4) फोरलिंब क्लोनस और पालन; (5) पालन और गिरने के साथ फोरलिंब क्लोनस । प्रत्येक वीडियो चैनल स्पष्ट रूप से पिंजरे में जानवर के साथ पूरी सतह, एक पशु पहचान संख्या, पानी की बोतल टिप, भोजन, और आहार के साथ एक लेबल/ अंधेरे घंटों के दौरान वीडियो अधिग्रहण सुनिश्चित करने के लिए, एक अवरक्त रात स्रोत का उपयोग करें। (कुछ कैमरों में अंतर्निहित उपकरण हैं या अतिरिक्त भागों की आवश्यकता हो सकती है। सामग्री की तालिकादेखें) । फ्रेम प्रति सेकंड दर और छवि संकल्प समायोजित करें। उच्च फ्रेम दर और संकल्प बड़ी फ़ाइल आकार की कीमत पर आते हैं। लंबे समय तक पुराने निरंतर प्रयोगों के दौरान वीडियो प्राप्त करने के मुख्य नुकसान में बहुत बड़ी मात्रा में डेटा स्टोर करने की आवश्यकता और बड़ी फ़ाइलों को संसाधित करने में शामिल तकनीकी कठिनाइयां शामिल हैं। ईईजी के साथ व्यवहार डेटा की प्रभावी व्याख्या करने के लिए प्रयोगकर्ता की प्रवीणता पर भी विचार किया जाना चाहिए।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासा करने के लिए कुछ नहीं है ।

Acknowledgments

इस काम R01 NS105807/NS/NINDS NIH HHS/संयुक्त राज्य अमेरिका और इलाज के एक अनुदान इलाज के आधार पर संयुक्त राज्य अमेरिका सेना चिकित्सा अनुसंधान और Materiel कमान, रक्षा विभाग (DoD) से प्राप्त इलाज द्वारा समर्थित था, मनोवैज्ञानिक स्वास्थ्य और दर्दनाक मस्तिष्क चोट अनुसंधान कार्यक्रम के माध्यम से पुरस्कार नहीं । W81XWH-15-2-0069। पांडुलिपि को प्रूफरीडिंग के लिए इवान ज़ुधोक की बहुत सराहना की जाती है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
0.10" screw Pinnacle Technology Inc., KS, USA 8209 0.10 inch long stainless steel
0.10" screw Pinnacle Technology Inc., KS, USA 8403 0.10 inch long with pre-soldered wire lead
0.12" screw Pinnacle Technology Inc., KS, USA 8212 0.12 inch long stainless steel
1EEG headmount Invitro1 (subsidiary of Plastics One), VA, USA MS333/8-A/SPC 3 individually Teflon-insulated platinum iridium wire electrodes (twisted or untwisted, 0.005 inch diameter) extending below threaded plastic pedestal
2EEG/1EMG headmount Pinnacle Technology Inc., KS, USA 8201 2EEG/1EMG channels
3% hydrogen peroxide Pharmacy
3EEG headmount Pinnacle Technology Inc., KS, USA 8235-SM-C custom 6-Pin Connector for 3EEG channels
Buprenorphine Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., Spring Valley, NY, USA 060969
Buprenorphine Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., Spring Valley, NY, USA 060969
C57BL/6 mice Harlan/Envigo Laboratories Inc male, 12-16 weeks old
C57BL/6 mice The Jackson Laboratory male, 12-16 weeks old
Carprofen Zoetis Services LLC, Parsippany, NJ, USA 026357 NOTE: this drug is added during weight drop only if stereotactic electrode implantation will be performed on the same day
Chlorhexidine antiseptic Pharmacy
Dental cement and solvent kit Stoelting Co., USA 51459
Drill Foredom HP4-917
Drill bit Meisinger USA, LLC, USA HM1-005-HP 0.5 mm, Round, 1/4, Steel
Dry sterilizer Cellpoint Scientific, USA Germinator 500
EEG System 1 Biopac Systems, CA, USA
EEG System 2 Pinnacle Technology Inc., KS, USA
Ethanol ≥70% VWR, USA 71001-652 KOPTEC USP, Biotechnology Grade (140 Proof)
Eye ointment Pro Labs Ltd, USA Puralube Vet Ointment Sterile Ocular Lubricant available in general online stores and pharmacies
Fluriso liquid for inhalation anesthesia MWI Veterinary Supply Co., USA 502017
Hair removal product Church & Dwight Co., Inc., USA Nair cream
Isoflurane MWI Veterinary Supply Co., USA 502017
Povidone-iodine surgical solution Purdue Products, USA 004677 Betadine
Rimadyl/Carprofen Zoetis Services LLC, Parsippany, NJ, USA 026357
Solder Harware store
Soldering iron Weller, USA WP35 ST7 tip, 0.8mm
Stainless steel disc Custom made
Sterile cotton swabs
Sterile gauze pads Fisher Scientific, USA 22362178
Sterile poly-lined absorbent towels pads Cardinal Health, USA 3520
Tissue adhesive 3M Animal Care Products, USA 1469SB

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References

  1. Christensen, J., et al. Long-term risk of epilepsy after traumatic brain injury in children and young adults: a population-based cohort study. Lancet. 373 (9669), 1105-1110 (2009).
  2. Lowenstein, D. H. Epilepsy after head injury: an overview. Epilepsia. 50, Suppl 2 4-9 (2009).
  3. Ferguson, P. L., et al. A population-based study of risk of epilepsy after hospitalization for traumatic brain injury. Epilepsia. 51 (5), 891-898 (2010).
  4. Abou-Abbass, H., et al. Epidemiology and clinical characteristics of traumatic brain injury in Lebanon: A systematic review. Medicine (Baltimore). 95 (47), 5342 (2016).
  5. Management of Concussion/mTBI Working Group. VA/DoD Clinical Practice Guideline for Management of Concussion/Mild Traumatic Brain Injury. The Journal of Rehabilitation Research and Development. 46 (6), 1-68 (2009).
  6. Piccenna, L., Shears, G., O'Brien, T. J. Management of post-traumatic epilepsy: An evidence review over the last 5 years and future directions. Epilepsia Open. 2 (2), 123-144 (2017).
  7. Loscher, W., Brandt, C. Prevention or modification of epileptogenesis after brain insults: experimental approaches and translational research. Pharmacological Reviews. 62 (4), 668-700 (2010).
  8. Ostergard, T., Sweet, J., Kusyk, D., Herring, E., Miller, J. Animal models of post-traumatic epilepsy. Journal of Neuroscience Methods. 272, 50-55 (2016).
  9. Shandra, O., et al. Repetitive Diffuse Mild Traumatic Brain Injury Causes an Atypical Astrocyte Response and Spontaneous Recurrent Seizures. Journal of Neuroscience. 39 (10), 1944-1963 (2019).
  10. Foda, M. A., Marmarou, A. A new model of diffuse brain injury in rats. Part II: Morphological characterization. Journal of Neurosurgery. 80 (2), 301-313 (1994).
  11. Marmarou, A., et al. A new model of diffuse brain injury in rats. Part I: Pathophysiology and biomechanics. Journal of Neurosurgery. 80 (2), 291-300 (1994).
  12. Paxinos, G., Keith, B. J., Franklin, M. The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , Elsevier Science. (2007).
  13. Shandra, O., Robel, S. Imaging and Manipulating Astrocyte Function In Vivo in the Context of CNS Injury. Methods in Molecular Biology. 1938, 233-246 (2019).
  14. Pitkanen, A., Immonen, R. Epilepsy related to traumatic brain injury. Neurotherapeutics. 11 (2), 286-296 (2014).
  15. Kharatishvili, I., Nissinen, J. P., McIntosh, T. K., Pitkanen, A. A model of posttraumatic epilepsy induced by lateral fluid-percussion brain injury in rats. Neuroscience. 140 (2), 685-697 (2006).
  16. Pitkanen, A., Bolkvadze, T., Immonen, R. Anti-epileptogenesis in rodent post-traumatic epilepsy models. Neuroscience Letters. 497 (3), 163-171 (2011).
  17. Gades, N. M., Danneman, P. J., Wixson, S. K., Tolley, E. A. The magnitude and duration of the analgesic effect of morphine, butorphanol, and buprenorphine in rats and mice. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 39 (2), 8-13 (2000).

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व्यवहार अंक 156 टीबीआई मिर्गी दौरे एस्ट्रोग्लियोसिस ईईजी हल्के टीबीआई हिलाना फैलाना टीबीआई पोस्टट्रॉमेटिक मिर्गी
दोहराव फैलाना दर्दनाक मस्तिष्क चोट के एक माउस मॉडल में पोस्ट दर्दनाक मिर्गी उत्प्रेरण
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Shandra, O., Robel, S. Inducing… More

Shandra, O., Robel, S. Inducing Post-Traumatic Epilepsy in a Mouse Model of Repetitive Diffuse Traumatic Brain Injury. J. Vis. Exp. (156), e60360, doi:10.3791/60360 (2020).

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