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पेरिडवेंटिशियल चिकित्सकीय अनुप्रयोग के साथ एक चूहा कैरोटिड धमनी दबाव-नियंत्रित सेगमेंटल बैलून इंजरी

Published: July 9, 2020 doi: 10.3791/60473
Automatic Translation
1,2,3,5, 1,2,3,4,5
1Department of Surgery, Division of Vascular Surgery, University of North Carolina at Chapel Hill, 2Center for Nanotechnology in Drug Delivery, University of North Carolina at Chapel Hill, 3Curriculum in Toxicology & Environmental Medicine, University of North Carolina at Chapel Hill, 4Department of Cell Biology & Physiology, University of North Carolina at Chapel Hill, 5McAllister Heart Institute, University of North Carolina at Chapel Hill

Summary

चूहा कैरोटिड धमनी गुब्बारा चोट एथेरोस्क्लेरोटिक जहाजों में रक्त प्रवाह को बहाल करने के लिए किए गए नैदानिक एंजियोप्लास्टी प्रक्रिया की नकल करती है। यह मॉडल धमनी की दीवार को डिस्टर्ब करके धमनी चोट प्रतिक्रिया को प्रेरित करता है, और एंडोथेलियल कोशिकाओं की इंटिमल परत को कम करता है, अंततः रीमॉडलिंग और एक इंटिमल हाइपरप्लास्टिक प्रतिक्रिया का कारण बनता है।

Abstract

हृदय रोग एथेरोस्क्लेरोसिस के कारण भाग में, दुनिया भर में मौत और विकलांगता का प्रमुख कारण बना हुआ है । एथेरोस्क्लेरोटिक पट्टिका धमनियों में चमकदार सतह क्षेत्र को संकरी कर देती है जिससे अंगों और डिस्टल ऊतकों में पर्याप्त रक्त प्रवाह कम हो जाता है। चिकित्सकीय रूप से, रीवैस्कुलराइजेशन प्रक्रियाएं जैसे गुब्बारा एंजियोप्लास्टी के साथ या बिना स्टेंट प्लेसमेंट का उद्देश्य रक्त प्रवाह को बहाल करना है। यद्यपि ये प्रक्रियाएं पट्टिका के बोझ को कम करके रक्त प्रवाह को फिर से स्थापित करती हैं, वे पोत की दीवार को नुकसान पहुंचाती हैं, जो धमनी उपचार प्रतिक्रिया शुरू करती है। लंबे समय तक उपचार प्रतिक्रिया धमनी रेस्टेनोसिस, या फिर से संकुचित होने का कारण बनती है, अंततः इन पुनर्संवहन प्रक्रियाओं की दीर्घकालिक सफलता को सीमित करती है। इसलिए, प्रीक्लिनिकल पशु मॉडल रेटेनोसिस ड्राइविंग रोगविज्ञान तंत्र का विश्लेषण करने के लिए अभिन्न हैं, और उपन्यास चिकित्सीय रणनीतियों का परीक्षण करने का अवसर प्रदान करते हैं। मुरीन मॉडल बड़े पशु मॉडलों की तुलना में सस्ता और काम करना आसान है। गुब्बारा या तार की चोट मुरीन मॉडल में उपयोग किए जाने वाले दो आमतौर पर स्वीकार किए जाते हैं चोट के तौर-तरीके हैं। विशेष रूप से गुब्बारा चोट मॉडल नैदानिक एंजियोप्लास्टी प्रक्रिया की नकल करते हैं और रेटेनोसिस के विकास के लिए धमनी को पर्याप्त नुकसान पहुंचाते हैं। इसके साथ ही हम संशोधित, दबाव नियंत्रित चूहा कैरोटिड धमनी गुब्बारा चोट मॉडल का विश्लेषण करने और हिस्टोलॉजिकल रूप से प्रदर्शन करने के लिए शल्य चिकित्सा विवरण का वर्णन करते हैं। इसके अतिरिक्त, यह प्रोटोकॉल इस बात पर प्रकाश डालता है कि नियोनिटमल हाइपरप्लासिया को बाधित करने के लिए चिकित्सीय के स्थानीय पेरिडवेंशियल एप्लिकेशन का उपयोग कैसे किया जा सकता है। अंत में, हम तीन आयामों में धमनी की चोट की इमेजिंग और कल्पना के लिए एक उपन्यास दृष्टिकोण के रूप में प्रकाश शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी प्रस्तुत करते हैं।

Introduction

हृदय रोग (सीवीडी) दुनिया भर में मौत का प्रमुख कारण बना हुआ है1। एथेरोस्क्लेरोसिस अधिकांश सीवीडी से संबंधित रुग्णता और मृत्यु दर का अंतर्निहित कारण है। एथेरोस्क्लेरोसिस धमनियों के अंदर पट्टिका का निर्माण है जिसके परिणामस्वरूप एक संकुचित ल्यूमेन होता है, जो अंगों और डिस्टल ऊतकों के लिए उचित रक्त परफ्यूजन में बाधा डालता है2। गंभीर एथेरोस्क्लेरोसिस के इलाज के लिए नैदानिक हस्तक्षेपों में स्टेंट प्लेसमेंट के साथ या बिना गुब्बारा एंजियोप्लास्टी शामिल है। इस हस्तक्षेप में पट्टिका की साइट पर एक गुब्बारा कैथेटर को आगे बढ़ाना, और गुब्बारे को धमनी की दीवार पर पट्टिका को सेक करने के लिए फुलाने, चमकदार क्षेत्र को चौड़ा करना शामिल है। हालांकि, यह प्रक्रिया धमनी चोट प्रतिक्रिया 3 शुरू करने वालीधमनीको नुकसान पहुंचाती है। इस चोट प्रतिक्रिया के लंबे समय तक सक्रियण से धमनी रेस्टेनोसिस, या फिर से संकुचित होता है, जो नियोनिटमल हाइपरप्लासिया और पोत रीमॉडलिंग के लिए माध्यमिक होता है। एंजियोप्लास्टी के दौरान इंटिमल परत को एंडोथेलियल कोशिकाओं से छुटकारा दिया जाता है जिससे तत्काल प्लेटलेट भर्ती और स्थानीय सूजन होती है। स्थानीय सिग्नलिंग संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं (वीएसएमसी) और एडवेंटियल फाइब्रोब्लास्ट में फेनोटाइपिक परिवर्तनों को प्रेरित करता है। इससे वीएसएमसी और फाइब्रोब्लास्ट का प्रवास और प्रसार होता है, जिससे ल्यूमेन में अंदर की ओर जाता है, जिससे नियोनिटमल हाइपरप्लासिया4,5 होजाताहै। परिसंचारी जनक कोशिकाओं और प्रतिरक्षा कोशिकाओं को भी रेटेनोसिस 6 की समग्र मात्रा में योगदानदेतेहैं । जहां लागू हो, ड्रग-एल्यूटिंग स्टेंट (डीईएस) रेस्टेनोसिस7को बाधित करने के लिए वर्तमान मानक हैं। डेस धमनी री-एंडोथेलियलाइजेशन को रोकते हैं, हालांकि, इस प्रकार एक प्रो-थ्रोम्बोटिक वातावरण बनाता है जिसके परिणामस्वरूप देर से स्टेंट थ्रोम्बोसिस8हो सकता है। इसलिए, पशु मॉडल रेस्टेनोसिस के रोगविज्ञान को समझने और पुनर्संवहन प्रक्रियाओं की प्रभावकारिता को लम्बा करने के लिए बेहतर चिकित्सीय रणनीतियों को विकसित करने के लिए अभिन्न अंग हैं।

इस विकृति का अध्ययन करने के लिए कई बड़े और छोटे पशु मॉडल 9 का उपयोग कियाजाता है। इनमें गुब्बारे की चोट3,10 या तार की चोट11 धमनी के चमकदार पक्ष के साथ-साथ धमनी के चारों ओर आंशिक लिगेशन12 या कफ प्लेसमेंट13 शामिल हैं । गुब्बारा और तार की चोट दोनों धमनी की एंडोथेलियल परत को कम करते हैं, जो एंजियोप्लास्टी के बाद चिकित्सकीय रूप से होता है। विशेष रूप से, गुब्बारा-चोट मॉडल नैदानिक सेटिंग (यानी, गुब्बारा कैथेटर) के समान उपकरणों का उपयोग करते हैं। गुब्बारे की चोट चूहे के मॉडल में सबसे अच्छा प्रदर्शन किया जाता है, क्योंकि चूहा धमनियों व्यावसायिक रूप से उपलब्ध गुब्बारे कैथेटर के लिए एक उपयुक्त आकार हैं। इसके साथ ही हम एक दबाव नियंत्रित खंडीय धमनी चोट, चूहा कैरोटिड धमनी गुब्बारा चोट का एक अच्छी तरह से स्थापित, संशोधित संस्करण का वर्णन करते हैं। यह दबाव-नियंत्रित दृष्टिकोण नैदानिक एंजियोप्लास्टी प्रक्रिया की बारीकी से नकल करता है, और चोट14, 15के दो सप्ताह बाद प्रजनन योग्य नियोनिटमल हाइपरप्लासिया गठन की अनुमति देता है। इसके अतिरिक्त, इस दबाव नियंत्रित धमनी चोट सर्जरी16के बाद 2 सप्ताह तक पूर्ण एंडोथेलियल परत बहाली में परिणाम है । यह सीधे मूल गुब्बारे की चोट मॉडल के विपरीत है, जिसे Clowes द्वारा वर्णित किया गया है, जहां एंडोथेलियल परत कभी भी पूर्ण कवरेज3पर नहीं लौटती है।

सर्जरी के बाद, चिकित्सा विज्ञान के लिए लागू किया जा सकता है या कई दृष्टिकोण के माध्यम से घायल धमनी की ओर निर्देशित । यहां वर्णित विधि एक प्लेरोनिक जेल समाधान में एम्बेडेड एक छोटे अणु के पेरिडवेंशियल एप्लिकेशन का उपयोग करती है। विशेष रूप से, हम चोट के तुरंत बाद धमनी में 100 माइक्रोनम सिनेमिक एल्डिहाइड का समाधान लागू करते हैं ताकि नियोनिटमल हाइपरप्लासियागठन 15को बाधित किया जा सके। Pluronic-F127 एक गैर विषैले, थर्मो-रिवर्सिबल जेल एक नियंत्रित तरीके से स्थानीय रूप से दवाओं को वितरित करने में सक्षम है17। इस बीच, धमनी की चोट स्थानीय है, इसलिए स्थानीय प्रशासन ऑफ-टारगेट प्रभावों को कम करते हुए एक सक्रिय सिद्धांत का परीक्षण करने की अनुमति देता है। फिर भी, इस विधि का उपयोग करके चिकित्सीय का प्रभावी वितरण छोटे अणु या जीवविज्ञान के रसायन पर निर्भर करेगा।

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Protocol

यहां वर्णित सभी तरीकों को चैपल हिल स्थित उत्तरी कैरोलिना विश्वविद्यालय की संस्थागत पशु देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है ।

1. प्रीऑपरेटिव प्रक्रियाएं

  1. सर्जिकल उपकरणों को स्टरलाइज करें। सर्जरी से पहले सभी सर्जिकल उपकरणों को ऑटोक्लेव करें। यदि एक ही दिन कई सर्जरी प्रदर्शन, एक सूखी मनका स्टरलाइजर का उपयोग कर सर्जरी के बीच उपकरणों बंध्याकरण ।
  2. 25% प्लूरोनिक-127 जेल (बाँझ आसुत पानी में पतला) में चिकित्सीय तैयार करें।
  3. इन्सफ्लेटर के लिए एक 2F Fogarty गुब्बारा कैथेटर की स्थापना की और एक 1 एमएल खारा समाधान से भरा सिरिंज में कैथेटर के गुब्बारे अंत जगह है ।
  4. चूहे को 5% आइसोफ्लाणे वाले कक्ष में रखकर संज्ञाहरण को प्रेरित करें।
    1. चूहे को चैंबर से निकालें और चूहे के वजन को रिकॉर्ड करें। वेंट्रल गर्दन क्षेत्र पर फर दाढ़ी बनाने के लिए बाल कतरनी का उपयोग करें।
    2. संज्ञाहरण के प्रेरण को सुनिश्चित करने के लिए चूहे को 5% आइसोफ्लुन के साथ वापस कक्ष में रखें।
  5. चूहे को एक शल्य मंच पर रखें, चेहरे को नाक शंकु में डालें ताकि चूहा चेहरा सर्जन की ओर हो।
    1. इनहेलेशनल एनेस्थीसिया को 1.5% आइसोफ्लुएंज में कम करें। सभी चार फुट पर एक पैर की अंगुली चुटकी पलटा द्वारा संज्ञाहरण की गहराई सत्यापित करें ।
    2. सर्जिकल मंच के लिए नीचे सभी चार पैर टेप ।
  6. गर्मी दीपक चालू करें।
  7. वायुमार्ग स्राव को कम करने के लिए एट्रोपाइन (0.01 मिलीग्राम/किलो) को चमड़े के साथ इंजेक्ट करें।
  8. रोगनिरोधी दर्द प्रबंधन के लिए कारप्रोफेन (5 मिलीग्राम/किलो) को कम से कम इंजेक्ट करें। यदि प्रयोग के लिए विरोधी भड़काऊ दवाएं स्वीकार्य नहीं हैं तो चरण 3.2.2 और 3.2.3 का उल्लेख है।
  9. सर्जरी के दौरान कॉर्निया को सूखने से रोकने के लिए बाँझ कपास झाड़ू का उपयोग करके दोनों आंखों पर स्नेहक आंखों का मरहम लगाएं।
  10. चीरा साइट को स्टरलाइज करने के लिए मुंडा क्षेत्र के केंद्र से बीटाडीन के बाद 70% एथिल अल्कोहल के बीच बारी-बारी से एक परिपत्र गति में गर्दन को तीन बार झाड़ू लगाएं।
  11. चीरा लाइन एस.c 0.25% bupivacaine के साथ घुसपैठ।
  12. बाँझ शल्य चिकित्सा उपकरणों और आपूर्ति से निपटने से पहले बाँझ सर्जिकल दस्ताने पर रखो।
  13. एक बाँझ सर्जिकल शीट पर सभी ऑटोक्लेव सर्जिकल उपकरणों को बाहर रखें।
  14. बाँझ 7-0 प्रोलीन सीवन के तीन स्वतंत्र 1 इंच किस्में काटें।
  15. सर्जिकल शीट पर कॉटन झाड़ू और जाली रखें।
  16. एक बाँझ सर्जिकल शीट के साथ चूहे को कपड़ा करें जो केवल निष्फल गर्दन क्षेत्र को उजागर करता है।
  17. शीट में एक अतिरिक्त छोटे खोलने को काटें जो नाक शंकु के हिस्से को उजागर करता है। यह चोट के दौरान गुब्बारा कैथेटर नीचे टेप के लिए साइट होगी ।

2. ऑपरेटिव प्रक्रियाएं

  1. पूरी शल्य प्रक्रिया के दौरान, श्वसन दर की निगरानी करके संज्ञाहरण की गहराई का आकलन करें (दर लगातार और सामान्य समझा जाना चाहिए) साथ ही हर 15 मिनट में अंगुली चुटकी द्वारा। यदि श्वसन दर बढ़ जाती है या अंगुली चुटकी के लिए एक प्रतिक्रिया है, तो सर्जिकल हेरफेर को थामने और २.५% तक isoflurane वृद्धि ।
  2. आम कैरोटिड धमनी (सीसीए) का पर्दाफाश करें।
    1. चूहे के जबड़े की हड्डियों के बीच एक सतही, सीधे, अनुदैर्ध्य नेकलाइन चीरा बनाएं। चीरा लंबाई में लगभग 1.5-2 सेमी होगा।
    2. मांसपेशियों की परत के उजागर होने तक त्वचा के नीचे संयोजी ऊतक के माध्यम से एक चीरा बनाएं। मांसपेशियों के ऊतकों तक पहुंचने के लिए त्वचा के नीचे लार ग्रंथियों को विस्थापित करें।
    3. स्पष्ट रूप से मांसपेशियों की परत और संयोजी ऊतक के बीच बंद कैंची डालने और त्वचा को ऊपर की ओर खींचते समय कैंची को धीरे से खोलकर कनेक्टिव ऊतक को मांसपेशियों से अलग करें।
  3. दो सतही मांसपेशियों के लंबवत चलने वाली तीसरी मांसपेशी (ओमोहॉयड) तक श्वासनली के बाईं ओर दो दृश्यमान मांसपेशियों (स्टर्नोहाइड्र और स्टर्नोमास्टोइड) को काटना।
  4. श्वासनली के ऊपर चलने वाली देशांतरीय मांसपेशी (स्टर्नोओहाइड्र) से इस लंबवत मांसपेशी (ओमोहॉयड) को अलग करने वाली खिड़की बनाने के लिए संदंश का उपयोग करें। धीरे से श्वासनली को कुंद आघात को रोकने के लिए इस जुदाई प्रदर्शन करते हैं।
  5. लंबवत मांसपेशियों के नीचे संदंश तक पहुंचें और दो देशांतर मांसपेशियों को अलग करने और सीसीए का पर्दाफाश करने के लिए कटौती करें।
  6. सीसीए का विच्छेदन करें।
    1. आंतरिक कैरोटिड धमनी (आईसीए) और बाहरी कैरोटिड धमनी (ईसीए) के उजागर होने तक विभाजन के पास सीसीए को विच्छेदन करें।
    2. बेहतर थायराइड धमनी (एसटीए) को विच्छेदन करें, जो ईसीए से शाखाओं में है।
    3. प्री-कट प्रोलीन टांके का उपयोग करके, एसटीए और ईसीए को उनके संबंधित विभाजन के पास लिगेट करें। सीवन के बहुमत को गाँठ के एक तरफ छोड़ दें और प्रत्येक सीवन को घुमावदार हीमोस्टेट के साथ पकड़ें।
    4. आईसीए के चारों ओर विच्छेदन समाप्त करें, आईसीए के नीचे और उसके आसपास संदंश तक पहुंचें, और डिस्टल नियंत्रण प्राप्त करने के लिए एक गैर-कुचल संवहनी क्लैंप का उपयोग करें। आईसीए के साथ मिलकर ऑक्सीपिटल धमनी को क्लैंप करें।
    5. सीसीए के समीपस्थ को विभाजन के लिए विच्छेदन करें, सीसीए से वेगस तंत्रिका को अलग करना सुनिश्चित करें।
    6. सीसीए के नीचे और उसके आसपास संदंश तक पहुंचें और समीपस्थ नियंत्रण प्राप्त करने के लिए एक गैर-कुचल संवहनी क्लैंप का उपयोग करें। विभाजन से कम से कम 5 मिमी क्लैंप रखें।
  7. गुब्बारे की चोट का प्रदर्शन करें।
    1. ईसीए और बेहतर शाखा के बीच विभाजन का पर्दाफाश करने के लिए प्रत्येक लिगाटेड धमनी शाखा को रखने वाले घुमावदार हेमोस्टैट्स को पैंतरेबाज़ी करें।
    2. विभाजन पर धीरे-धीरे ऊतक को काटना और फिर माइक्रोडिसेक्शन कैंची का उपयोग करके ईसीए और बेहतर शाखा के बीच एक धमनी चीरा बनाएं।
    3. सीसीए से बाहर सभी रक्त धक्का और धमनी साइट को साफ करने के लिए एक कपास झाड़ू का प्रयोग करें ।
    4. आर्टेरियोटॉमी के माध्यम से अनइंफ्लेटेड गुब्बारा कैथेटर डालें और सीसीए में आगे बढ़ें जब तक कि गुब्बारे का समीपस्थ अंत विभाजन से पहले न हो जाए।
    5. नाक शंकु को टेप कैथेटर तो गुब्बारा मुद्रास्फीति के दौरान धमनी से बाहर पर्ची नहीं है ।
    6. धीरे-धीरे गुब्बारे को दबाव के 5 वायुमंडल में फुलाएं और धमनी की चोट को प्रेरित करने के लिए सीसीए में 5 मिनट के लिए छोड़ दें। सुनिश्चित करें कि दबाव पूरे 5 मिनट के लिए स्थिर रहता है।
    7. 5 मिनट के बाद, गुब्बारे को डिफ्लेट करें और धीरे-धीरे धमनी के माध्यम से सीसीए से हटा दें।
    8. सीसीए पर शिकंजा कसने पर धीरे-धीरे निचोड़ कर सीसीए को फ्लश करें। क्लैंप न हटाएं।
    9. ईसीए समीपस्थ को आर्टेरियोटॉमी में लिगेट करें और फिर आईसीए को सीसीए के माध्यम से रक्त प्रवाह बहाल करने के लिए सीसीए और आईसीए से क्लैंप हटा दें। सुनिश्चित करें कि धमनी के आसपास कोई दिखाई नहीं दे रहा है और सीसीए स्पंदन कर रहा है।
  8. घायल सीसीए के साथ अकेले चिकित्सकीय या प्लूरोनिक जेल वाहन के 100 माइक्रोन लागू करें। ऐसा करें सीसीए के बाईं ओर 50 माइक्रोन और फिर घायल धमनी की कोटिंग सुनिश्चित करने के लिए सीसीए के दाईं ओर 50 माइक्रोन लगाएं।
  9. घाव स्थल को बंद करें।
    1. अतिरिक्त प्रोलीन टांके काटें।
    2. कनेक्टिव ऊतक के साथ बाधित 4-0 या 6-0 विक्रिल परतों का उपयोग करके घाव को बंद करें।
    3. त्वचा के साथ 4-0 नायलॉन सीवन चलाने का उपयोग कर घाव को बंद खत्म करें।

3. पश्चात प्रक्रियाएं

  1. चूहे को एक हीटिंग लैंप के नीचे आधे पिंजरे के साथ एक साफ पिंजरे में अकेले रखें और तब तक निगरानी करें जब तक कि चूहा स्टर्नल रेक्यूम्बेंसी बनाए रखने के लिए पर्याप्त चेतना प्राप्त न करे। चूहे को एक अलग पिंजरे में रखें जब तक कि जानवर अपने मूल पिंजरे में वापस स्थानांतरित करने से पहले पूरी तरह से सतर्क और मोबाइल न हो जाए।
  2. अगले तीन दिनों के लिए दैनिक चूहे की निगरानी करें और फिर इच्छामृत्यु तक प्रति सप्ताह तीन बार। आइसोफ्लुने ओवरडोज का उपयोग करके इच्छामृत्यु और नीचे वर्णित द्विपक्षीय थोराकोटॉमी के बाद।
    1. पश्चात दर्द के स्तर की पहचान करने के लिए नेशनल सेंटर फॉर रिप्लेसमेंट रिफाइनमेंट एंड रिडक्शन ऑफ एनिमल्स इन रिसर्च (NC3Rs) ग्रिमासे स्केल का उपयोग करें। यदि कोई जानवर दर्द का सामना कर रहा है या किसी भी न्यूरोलॉजिक समझौता विकसित करता है, तो तुरंत बलिदान करें।
    2. जिन जानवरों को कारप्रोफेन नहीं मिलता है, उनके पीने के पानी में एसिटामिनोफेन 6 मिलीग्राम/एमएल का प्रशासन ४८ घंटे के बाद सर्जरी के माध्यम से सर्जरी से पहले 24 घंटे । एसीटामिनोफेन न्यूनतम विरोधी भड़काऊ प्रभावों के साथ एनाल्जेसिया प्रदान करता है।
    3. वैकल्पिक रूप से, न्यूनतम विरोधी भड़काऊ प्रभावों के साथ अन्य एनाल्जेसिया रणनीतियों का उपयोग किया जा सकता है, जैसे कि बुप्रेनोरफिन या बुप्रेनोरफिन विस्तारित रिलीज। अपने संस्थान में पशु चिकित्सा टीम से परामर्श करें।

4. ऊतक फसल और इमेजिंग

  1. सर्जरी के दो सप्ताह बाद, संज्ञाहरण (5% आइसोफ्लाणे) के ओवरडोज से चूहे को इच्छामृत्यु दें। वैकल्पिक रूप से, धमनी चोट प्रतिक्रिया के विभिन्न पहलुओं का विश्लेषण करने के लिए पहले के समय बिंदु पर चूहों को इच्छामृत्यु दें।
    1. एक बार सांस लेना बंद हो जाता है इच्छामृत्यु की एक माध्यमिक विधि के रूप में द्विपक्षीय थोराकोटॉमी प्रदर्शन करते हैं ।
  2. पेट के माध्यम से एक पार्श्व चीरा बनाओ, और फिर डायाफ्राम और पसलियों के माध्यम से ऊपर की ओर काट, वक्ष गुहा को उजागर।
  3. धमनियों को पर्फ्यूज और ठीक करें।
    1. बाएं वेंट्रिकल के माध्यम से गुरुत्वाकर्षण परफ्यूजन-फिक्सेशन सिस्टम से जुड़े 18 जी कैनुला डालें। बेंचटॉप (120 सेमी ऊंचाई, 91 ± 3 एमएमएचजी के बराबर) के सापेक्ष परफ्यूजन सिस्टम की ऊंचाई को चिह्नित करके चूहों के बीच बराबर दबाव बनाए रखें।
    2. एक घुमावदार हीमोस्टेट का उपयोग करके वेंट्रिकल के साथ कैनुला को क्लैंप करें।
    3. सही एट्रियम में कटौती करें, संवहनी सर्किट खोलें, और पीबीएस के साथ परफ्यूजन शुरू करें और इसके बाद 2-4% पैराफॉर्मलडिहाइड (लगभग 250 एमएल प्रत्येक)।
    4. बलिदान के दिन, या बलिदान से पहले सबसे अधिक रात को PBS में पतला पैराफॉर्मलडिहाइड तैयार करें। यदि बलिदान के दिन तैयारी कर रहे हैं, तो यह सुनिश्चित करें कि पैराफॉर्मलडिहाइड परफ्यूजन शुरू करने से पहले कमरे के तापमान में ठंडा हो गया है। 4 डिग्री सेल्सियस पर पैराफॉर्मलडिहाइड स्टोर करें।
  4. फिक्सेशन के बाद, बाएं और दाएं कैरोटिड धमनियों को निकालें और 2-4% पैराफॉर्मलडिहाइड में 2 घंटे के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  5. धमनियों को 30% सुक्रोज में स्थानांतरित करें और रात भर 4 डिग्री सेल्सियस पर स्टोर करें।
  6. 16-24 घंटे के बाद, इष्टतम काटने के तापमान (OCT) यौगिक में धमनियों को एम्बेड करें और अक्टूबर-एम्बेडेड धमनी ब्लॉकों को फ्रीज करें।
    1. 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर अक्टूबर में स्थिति धमनियों । अक्टूबर से भरे क्रायोमोल्ड के विमान के समानांतर धमनी रखें, जो क्रायोमोल्ड के पक्ष को चिह्नित करता है जिससे धमनी विभाजन का सामना करना पड़ रहा है। तरल नाइट्रोजन में स्नैप-फ्रीज।
    2. -80 डिग्री सेल्सियस पर लंबे समय तक जमे हुए ब्लॉक स्टोर करें।
  7. क्रायोस्टेट का उपयोग करके खंड जमे हुए ब्लॉक।
    1. विभाजन से शुरू होने वाले स्लाइड 1 के साथ, प्रति स्लाइड छह 5 माइक्रोन मोटी धमनी क्रॉस सेक्शन एकत्र करें।
    2. हाइपरप्लासिया तक जमे हुए ब्लॉकों को अब दिखाई नहीं दिया (लगभग 100 स्लाइड)।
  8. हेमटॉक्सीलिन और ईओसिन (एच एंड ई) दाग स्लाइड18
    1. विभाजन से शुरू होने वाली पूरी धमनी के साथ हर दस स्लाइड्स में से एक को धुंधला करके चोट का क्षेत्र ढूंढें (उदाहरण के लिए, स्लाइड 1, 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 और 100)।
    2. चोट की साइट के आसपास दाग अतिरिक्त स्लाइड पीक ऑक्लूज़न के साथ स्लाइड खोजने के लिए (उदाहरण के लिए, स्लाइड 20, 30, और ४० दिखाई हाइपरप्लासिया था, इस प्रकार दाग स्लाइड 15, 25, ३५, और ४५) ।
    3. दाग और चोटी occlusion स्लाइड से पहले और समान दूरी पर स्लाइड के साथ स्लाइड की मात्रा से पहले और पीक ऑक्सीटेशन स्लाइड के बाद (जैसे, पीक ऑक्सीक्लूशन स्लाइड ३५ पर पाया, तो दाग और स्लाइड 25, ४५, आदि की मात्रा) प्रति चूहा की कुल के लिए ।
  9. प्रकाश शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी इमेजिंग के लिए, चरण 4.4 में निर्धारण के बाद 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर धमनियों को स्टोर करें।
    1. 3 दिनों के लिए पतला (पीएच 7.4) में खरगोश विरोधी सीडी 31 प्राथमिक एंटीबॉडी के 1:500 कमजोर पड़ने के साथ धमनी की जांच करें। फिर 1:500 एंटी-खरगोश एलेक्सा फ्लोर 647 माध्यमिक एंटीबॉडी के 1:500 कमजोर पड़ने के साथ धमनी को 2 दिनों के लिए19दिनों तक काउंटरटेन करें।
    2. iDISCO +20का उपयोग कर धमनी साफ साफ करें ।
    3. धमनी को हल्की शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप21का उपयोग करके छवि दें । सॉफ्टवेयर (जैसे, Imaris)19का उपयोग कर छवियों को प्रस्तुत करें ।
  10. नियोटिमल हाइपरप्लासिया की मात्रा। यदि संभव हो तो अंधे तरीके से मात्रात्मक रूप से करें।
    1. ऊपर निर्धारित 3-10 स्लाइड्स (चरण 4.8.3) में से प्रत्येक पर एक धमनी के एंटीलिस्ट लैमिना (ईएल) की परिधि का पता लगाने के लिए इमेजजे सॉफ्टवेयर का उपयोग करें।
    2. इमेजजे में प्रत्येक ट्रेस किए गए क्षेत्र के क्षेत्र की मात्रा निर्धारित करें और इन मूल्यों का निर्यात करें। इंटिमा ट्रेस ल्यूमेन क्षेत्र की पैदावार करता है, आईईएल ट्रेस आईईएल क्षेत्र की पैदावार करता है, और ईईएल ट्रेस ईईएल क्षेत्र की पैदावार करता है।
    3. औसत चोट (% ऑक्सीलेशन, इंटिमा: मीडिया (आई: एम) अनुपात, नियोइनटिमल हाइपरप्लासिया) प्रति चूहा कैरोटिड धमनी प्राप्त करने के लिए 3-10 स्लाइड से प्राप्त मूल्यों का औसत।
      नेओनिटमल हाइपरप्लासिया = आईईएल क्षेत्र - लुमेन क्षेत्र
      Equation 1
      Equation 2

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Representative Results

चित्रा 1 इस सर्जरी को करने के लिए उपयोग की जाने वाली सभी सामग्रियों और सर्जिकल उपकरणों को दिखाता है। हेमटॉक्सीलिन और ईओसिन (एच एंड ई) दो सप्ताह के घायल धमनी क्रॉस वर्गों के धुंधला होने से नियोइनटमल हाइपरप्लासिया के स्पष्ट दृश्य की अनुमति देता है। चित्रा 2 एक स्वस्थ, घायल, और इलाज धमनी के एच और ई दाग धमनी पार वर्गों के प्रतिनिधि छवियों से पता चलता है । चित्र 2 यह भी रेखांकित करता है कि इमेजजे का उपयोग करके घायल धमनी में नियोनिटमल हाइपरप्लासिया के स्तर को कैसे निर्धारित किया जाए, एक व्यापक रूप से उपयोग किया जाने वाला छवि प्रसंस्करण सॉफ्टवेयर। इस दृष्टिकोण का उपयोग करके, नियोंटिमा की परिधि, साथ ही आंतरिक और बाहरी लोचदार लैमिना को संबंधित क्षेत्रों की मात्रा निर्धारित करने के लिए पता लगाया जाता है। दबाव नियंत्रित सेगमेंटल इंजरी विधि हम 0.29 (2 अलग-अलग सर्जन और एन = 11 चूहों) के मानक विचलन के साथ 0.80 के मीडिया अनुपात में एक इंटिमा में परिणामों का वर्णन करते हैं। प्लूरोनिक में सीए के पेरिडवेंशियल एप्लिकेशन के साथ उपचार के परिणामस्वरूप नियोनिटमल हाइपरप्लासिया का अवरोध होता है, जैसा कि हमने पहले दिखाया है (प्रतिशत ऑक्सीकरण में 61% की कमी)15।

चित्रा 3 ईसीए और एसटीए के विभाजन पर एक इष्टतम धमनी बनाने के लिए एक उदाहरण प्रदान करता है। अंत में, चित्रा 4 दिखाता है कि धमनी की लंबाई के साथ चोट के पूरे क्षेत्र की कल्पना करने के लिए प्रकाश शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का उपयोग कैसे किया जा सकता है। CD31 को इंगल परत अस्तर एंडोथेलियल कोशिकाओं की कल्पना करने के लिए धुंधला निश्चित धमनियों पर किया जा सकता है। इसके बाद धमनियों को 1% एगर उठे में एम्बेडेड किया जा सकता है और नमूना20के अपवर्तक सूचकांक को समरूप बनाने के लिए iDISCO + विधि का उपयोग करके मंजूरी दे दी जा सकती है। फिर धमनियों को प्रकाश शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोप में चित्रित किया जा सकता है और छवियों को आई: एम अनुपात की मात्रा के लिए सॉफ्टवेयर का उपयोग करके प्रदान किया जा सकता है। इस दृष्टिकोण का उपयोग करते हुए, हमने 0.86 का आई:एम अनुपात प्राप्त किया, जो एच एंड ई परिणामों के साथ समझौते में है।

धारा संख्या हवाला
10 वर्ग 27
8 वर्ग 28
6-10 वर्ग 29
6 वर्ग 30
5 वर्ग 31
3 वर्ग 32

तालिका 1. आमतौर पर हाइपरप्लासिया विश्लेषण के लिए धमनी क्रॉस-सेक्शन की संख्या का उपयोग किया जाता है।

Figure 1
चित्रा 1. सर्जिकल उपकरणों और उपकरणों। घड़ी की ओर क्रम में छवि के ऊपरी बाएं कोने में शुरू:(A)कपास झाड़ू; (ख)बीटाडीन समाधान; (ग)धुंध; (घ)70% एथिल अल्कोहल समाधान; (ई)सुई के साथ 1cc सीरिंज; (एफ)एट्रोपाइन; (जी)रिट्रैक्टर्स; तुला कागज क्लिप यहां इस्तेमाल किया; (ज)रिमाडिल; (I)माइक्रो-सेरिफाइन क्लैंप लगाने वाले संदंश; (जम्मू)सुई धारक; (K)4-0 नायलॉन सीवन; (L)4-0 विक्रिल सीवन; (एम)बाँझ पर्दे; (N)मेयो कैंची; (O)मानक संदंश; (पी)ठीक घुमावदार संदंश; (Q)माइक्रोडिसेक्शन कैंची; (R)माइक्रो सेरेफिन क्लैंप; (S)ठीक कैंची; (टी)टी-पिन; (यू)घुमावदार हीमोस्टेट्स; (V)तीन 7-0 प्रोलीन टांके लगभग 1 इंच के लिए कटौती; (डब्ल्यू)25% प्लेरोनिक-127 जेल के 100 माइक्रोल; (X)लुब्रिकेंट आंख मरहम; (Y)बाँझ खारा समाधान में 2 फ्रेंच गुब्बारा एम्बोलेक्टॉमी कैथेटर; (Z)इंसफलेटर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 2
चित्रा 2। हेमटॉक्सीलिन और ईओसिन (एच एंड ई) रैट कैरोटिड धमनी क्रॉस सेक्शन का धुंधला और विश्लेषण। (A)स्वस्थ, अघायल सही कैरोटिड धमनी का क्रॉस सेक्शन । IEL = आंतरिक लोचदार लैमिना, ईएल = बाहरी लोचदार लैमिना। (ख)दो सप्ताह के घायल बाएं कैरोटिड धमनी का क्रॉस सेक्शन प्लूरोनिक-एफ127 वाहन के साथ इलाज किया गया । (ग)दो सप्ताह के घायल बाएं कैरोटिड धमनी के क्रॉस सेक्शन का इलाज १०० μM cinnamic aldehyde के साथ किया गया । स्केल बार = 100 माइक्रोन (डी)चोट की मात्रा के लिए जमे हुए धमनियों की खंडीय योजनाबद्ध। स्लाइड 1 विभाजन पर शुरू होता है और छह धमनी वर्ग 5 चौड़ाई में μm प्रति स्लाइड लिया जाता है । सेक्शनिंग आमतौर पर 70 स्लाइड करना जारी रखता है क्योंकि चोट आमतौर पर इस स्लाइड से पहले होती है। (ई)घायल बाएं कैरोटिड धमनी के क्रॉस सेक्शन को प्लोनिक वाहन(बी)के साथ इलाज किया गया । अंतरतम काली रेखा नियोनिटमा को चिह्नित करती है और चमकदार क्षेत्र को चित्रित करती है। मध्य पीली रेखा आंतरिक लोचदार लैमिना, या ट्यूनिका इंटिमा के क्षेत्र को चित्रित करती है। बाहरी नीली रेखा बाहरी लोचदार लैमिना, या ट्यूनिका एडवेंटिटिया के क्षेत्र को चित्रित करती है। स्केल बार = 100 माइक्रोन (एफ)गणना प्रतिशत पोत ऑक्सीलेशन और इंटिमा को मापने के लिए उपयोग की जाती है: मीडिया (आई:एम) अनुपात(ई)से प्राप्त माप के आधार पर। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 3
चित्र 3। आर्टेरियोटॉमी निर्माण। एक उचित धमनी बनाने के लिए कदम का उदाहरण, और एक झूठी पथ से परहेज। सीसीए = कॉमन कैरोटिड आर्टरी, ईसीए = एक्सटर्नल कैरोटिड आर्टरी, आईसीए = इंटरनल कैरोटिड आर्टरी, ओए = ऑक्सीपिटल आर्टरी, एसटीए = सुपीरियर थायराइड आर्टरी। ईसीए और एसटीए शाखाओं के बीच विभाजन को अलग करें। इस विभाजन को तब तक विच्छेदन करें जब तक कि क्षेत्र एक उज्जवल रंग में न बदल जाए, जो धमनी की दीवार के पतले होने का संकेत देता है, और फिर माइक्रोडिसेक्शन कैंची का उपयोग करके एक धमनी पैदा करता है। गुब्बारे के सम्मिलन में सहायता करने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करके धमनी को उठाएं। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

Figure 4
चित्र 4. धमनी की चोट की कल्पना करने के लिए प्रकाश शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी। नीचे एक प्रतिनिधि ट्रांसवर्स अनुभाग के साथ 14 सप्ताह पुराने स्प्राग डावले चूहे से आम कैरोटिड धमनी की लंबाई के साथ देशांतर पार अनुभाग। धमनियों CD31 के साथ दाग रहे है और AF647 के साथ जवाबी दाग । (A)स्वस्थ, अघायल सही कैरोटिड धमनी के क्रॉस सेक्शन । सफेद = CD31, ग्रीन = लोचदार Lamina, एल = Lumen, स्केल बार = 200-500 μm.(B)घायल के पार वर्गों, छोड़ दिया कैरोटिड धमनी Pluronic-F127 वाहन के साथ इलाज किया । एरोहेड नियोनिटमल हाइपरप्लासिया के क्षेत्रों को इंगित करते हैं। (ग)इंटिमा टू मीडिया (आई:एम) अघायल और घायल कैरोटिड धमनी का अनुपात, प्रत्येक समूह (एन = 1) के लिए नोट किए गए सटीक मूल्य के साथ। कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें ।

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Discussion

चूहा कैरोटिड धमनी गुब्बारा चोट सबसे बड़े पैमाने पर इस्तेमाल किया और restenosis पशु मॉडल का अध्ययन में से एक है । दोनों मूल गुब्बारा चोट मॉडल3 और संशोधित दबाव नियंत्रित खंडीय चोट भिन्नता10 ने धमनी की चोट प्रतिक्रिया के कई पहलुओं को सूचित किया है जो मनुष्यों में भी होता है, कुछ सीमाओं के साथ कि फाइब्रिन-समृद्ध थ्रोम्बस शायद ही कभी विकसित होता है और हाइपरकोलेस्टेरमिक खरगोश या पोर्सिन मॉडल9,22जैसे अन्य चोट मॉडलों की तुलना में स्थानीय सूजन कम होती है। धमनी चोट प्रतिक्रिया के विभिन्न पहलुओं की मात्रा और विश्लेषण करने के लिए चूहों को विभिन्न समय-बिंदुओं पर भी बलिदान किया जा सकता है। उदाहरण के लिए, पहले के समय बिंदुओं का उपयोग कोशिका प्रसार, संवहनी चिकनी मांसपेशियों की कोशिकाओं के फेनोटाइपिक स्विच और प्रारंभिक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया जैसे चोट के लिए प्रारंभिक प्रतिक्रिया के पहलुओं का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है। हमने पहले यह दर्शाया है कि ल्यूकोसिट घुसपैठ और सेल प्रसार 3 दिन से 1 सप्ताह16के बीच अधिकतम होता है . मध्यवर्ती समय बिंदुओं का उपयोग पुनः एंडोथेलियलाइजेशन की दर का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। दो सप्ताह का समय बिंदु नियोनिटमल हाइपरप्लासिया को मापने के लिए सबसे पहले सुझाए गए समय बिंदु है क्योंकि धमनी ज्यादातर इस बिंदु16पर फिर से एंडोथेलाइज्ड है। इस मॉडल का अनुवाद करने के लिए एक प्रमुख सीमा यह है कि चोट एक स्वस्थ धमनी में की जाती है, जबकि यह प्रक्रिया एथेरोस्क्लेरोटिक रोग के रोगियों में होती है। यह सीमा उपलब्ध चूहे एथेरोस्क्लेरोसिस मॉडल23 , 24की पिछली कमी के कारण भाग में मौजूद है । हालांकि, जीन संपादन प्रौद्योगिकियों में प्रगति ने विश्वसनीय एथेरोस्क्लेरोटिक चूहा मॉडल24के विकास के लिए अनुमति दी है, जो रेटेनोसिस के रोगविज्ञान का अध्ययन करने में उपन्यास अंतर्दृष्टि प्राप्त कर सकता है।

तुलनात्मक रूप से, पुरुष चूहों को मादा चूहों की तुलना में अधिक मजबूत चोट होती है, जो आमतौर पर एस्ट्रोजन25के सुरक्षात्मक प्रभाव के कारण संभवतः कम नियोटिंमल हाइपरप्लासिया विकसित होते हैं। हालांकि, वर्णित मॉडल अभी भी महिलाओं में धमनी उपचार का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है। 300-400 ग्राम के बीच 12-16 सप्ताह की उम्र बढ़ने वाले नर चूहों सबसे मजबूत और प्रजनन योग्य नियोइनटिमल गठन करते हैं। 12 सप्ताह से कम उम्र के चूहों का उपयोग किया जा सकता है; हालांकि, इन छोटे चूहों की धमनियों 2F गुब्बारे के लिए बहुत छोटी हो सकती है आसानी से चूहे तनाव के आधार पर धमनी में प्रवेश करने के लिए । 200 ग्राम के तहत वजन चूहों को इस मॉडल के साथ संचालित नहीं किया जाना चाहिए क्योंकि गुब्बारा आसानी से आर्टेरियोटॉमी के माध्यम से फिट नहीं होता है और वास्तव में धमनी को फाड़ सकता है यदि मजबूर किया जाता है। इसके अतिरिक्त, 16 सप्ताह से अधिक उम्र के चूहों का उपयोग करने से नियोइनटिमल गठन में एक चर प्रतिक्रिया हो सकती है। इस चोट मॉडल को करने के लिए विभिन्न चूहे उपभेदों का उपयोग किया जा सकता है, जिसमें स्प्राग डावले चूहों का अक्सर पूरे साहित्य में उपयोग किया जाता है26। सर्जरी शुरू करने के लिए, पहले जबड़े की हड्डियों के लिए महसूस करके और मिडलाइन खोजने के लिए चूहे की नाक का उपयोग करके गर्दन में चीरा साइट का उचित संरेखण और अभिविन्यास प्राप्त करें। प्रारंभिक चीरा के बाद, ऊतक को तब तक विच्छेदन करें जब तक कि एक दूसरे के समानांतर चलने वाली दो देशांतर मांसपेशियों (स्टर्नोहॉयड और स्टर्नोमास्टोइड) की कल्पना न की जाए। सिर की ओर, ऑपरेशन विंडो की निचली सीमा के रूप में गर्दन की मांसपेशी (मालिश करने वाले) का उपयोग करें। समानांतर मांसपेशियों को अलग करें, जो शरीर की ओर दौड़ते हैं, एक दूसरे से जब तक कि इन दोनों के लंबवत चलने वाली मांसपेशी कल्पना न कर दी जाती है। लंबवत मांसपेशियों को काटने से कैरोटिड धमनी को उजागर करते हुए दो समानांतर मांसपेशियों के आसान रिऐक्शन की अनुमति मिलेगी। चूंकि शरीर रचना विज्ञान प्रत्येक जानवर से थोड़ा भिन्न हो सकता है, उनकी स्थिति के साथ, एक छोटी धमनी शाखा हो सकती है जो आईसीए के शीर्ष पर टिकी हुई है। इस छोटी सी शाखा आईसीए के साथ एक साथ क्लैंप किया जा सकता है; हालांकि, जब इस छोटी शाखा पर शिकंजा नहीं कसा जाता है तो प्रक्रिया को करने के साथ कोई मुद्दा नहीं होना चाहिए। इसके अतिरिक्त, किसी भी क्लैंपिंग और टांका लगाने से पहले आईसीए और सीसीए दोनों से वेगस तंत्रिका को दूर करना सुनिश्चित करें। इस बिंदु पर कोमल होना और तंत्रिका क्षति से बचना महत्वपूर्ण है। यदि जानवर क्लैंप लगाने के बाद झटकता है जो धातु क्लैंप के संपर्क में आने वाले वेगस तंत्रिका की प्रतिक्रिया हो सकती है; क्लैंप को पुनः समायोजित करने पर विचार करें।

यकीनन पूरी प्रक्रिया का सबसे पेचीदा कदम धमनी बना रहा है। इसका कारण यह है कि एक 'झूठी' धमनी बनाना संभव है, और इस 'झूठी' आर्टेरियोटॉमी के माध्यम से एक गुब्बारा डालने से गुब्बारा वास्तव में धमनी के अंदर के बजाय धमनी से ऊपर चलने का कारण बनेगा। यदि ऐसा होता है, तो सीसीए में विभाजन के करीब एक नया आर्टेरियोटॉमी बनाना एक संभावित समाधान है, लेकिन अगर गुब्बारे को धमनी में मजबूर किया गया था, तो सर्जरी बचाव योग्य नहीं हो सकती है। 'झूठी' धमनी(चित्रा 3)को रोकने के लिए, ईसीए और एसटीए विभाजन पर एडवेंटियल परत को ठीक संदंश का उपयोग करके विच्छेदन करें जब तक कि उपस्थिति आस-पास के क्षेत्रों की तुलना में काफी हद तक लाल न हो जाए, और धमनी का वह हिस्सा बाहर निकलता दिखाई देता है। बाद में, विभाजन पर मंजूरी दे दी क्षेत्र में कैंची का एक शूल डालने और फिर काटने के द्वारा जल्दी से धमनी बनाने के लिए माइक्रो कैंची का उपयोग करें । आर्टेरियोटॉमी बनाने के बाद, धमनी के उद्घाटन को उठाने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करें और गुब्बारे को लुमेन में धकेलें। गुब्बारा धमनी के माध्यम से और सीसीए में आसानी से स्लाइड करना चाहिए। चूहे की स्थिति के आधार पर यह सीसीए में गुब्बारे कैथेटर का मार्गदर्शन करते हुए सीसीए के बाहर धीरे-धीरे ऊपर की ओर खींचने के लिए ठीक संदंश का उपयोग करके गुब्बारे का मार्गदर्शन करने में सहायक हो सकता है। गुब्बारे को सीसीए में डालने के बाद कैथेटर को नीचे टेप करें ताकि गुब्बारा धमनी से बाहर न निकल जाए क्योंकि इसे फुलाया जा रहा है ।

चिकित्सकीय के Periadventitial आवेदन केवल चोट की साइट पर स्थानीय और निर्देशित दवा वितरण के लिए अनुमति देता है । यह दृष्टिकोण मौखिक, इंट्रापेरिटोनियल या नसों में प्रशासन द्वारा व्यवस्थित रूप से वितरित की गई किसी चीज की तुलना में संभावित ऑफ-टारगेट प्रभावों के साथ-साथ सीमाओं को कम करता है। Pluronic-F127 थर्मो-रिवर्सिबल है, जिसका अर्थ है कि यह ठंडे तापमान पर तरल और कमरे के तापमान पर जैल है। यह चिकित्सकीय को आसानी से प्लूरोनिक जैल से पहले तरल समाधान में तैयार करने की अनुमति देता है, जबकि जेल को चोट के तुरंत बाद धमनी पर समान रूप से लागू किया जा सकता है। जबकि सीसीए के शीर्ष आसानी से प्रभावी ढंग से चोट के पूरे क्षेत्र को कवर करने के लिए सुलभ है सीसीए धीरे सीसीए के नीचे भाग कोट करने के लिए उठाया जाना चाहिए । हालांकि, शोधकर्ताओं को इलाज जानवरों के बीच संभावित परिवर्तनशीलता के लिए उचित रूप से अध्ययन को शक्ति सुनिश्चित करने की जरूरत है । यह अपेक्षित प्रभाव आकार का अनुमान है और परिणाम के मानक विचलन के लिए उचित रूप से अध्ययन सत्ता महत्वपूर्ण है । प्रसव की पेरिडवेंटीशियल विधि की सीमा यह है कि यह एक चिकित्सकीय रूप से प्रासंगिक दृष्टिकोण नहीं है क्योंकि एंजियोप्लास्टी के दौरान रोगी की धमनी उजागर नहीं होती है, जिसे एक स्थायी प्रक्रिया के रूप में किया जाता है। फिर भी , पेरिडवेंटिकल एप्लिकेशन15,27 , 28 , 29,30चोट के स्थल पर स्थानीय रूप से वितरित अणुओं औरजीवविज्ञानोंके प्रारंभिक परीक्षण के लिए अनुमतिदेताहै।

नियोनिटमल हाइपरप्लासिया की मात्रा निर्धारित करने की वर्तमान मानक विधि एच एंड ई दाग स्लाइड के मॉर्फोमेट्रिक विश्लेषण पर आधारित है। घायल कैरोटिड धमनी शारीरिक रूप से 5 माइक्रोन स्लाइस में स्लाइड पर खंडित है । इन स्लाइडों तो एच एंड ई का उपयोग कर दाग रहे हैं और छवियों को एक प्रकाश माइक्रोस्कोप का उपयोग कर लिया जाता है। इमेजजे सॉफ्टवेयर का उपयोग तब इंटिमा, आंतरिक लैमिना और बाहरी लैमिना द्वारा सीमित क्षेत्रों और परिधि को मापने के लिए किया जाता है। हालांकि हमने हाइपरप्लासिया 19 की मात्रा निर्धारित करने के लिए10स्लाइडों का उपयोग करके बढ़ी हुई परिशुद्धता की सूचना दी है, लेकिन साहित्य में इस बारे में कोई आम सहमति मौजूद नहीं है कि कितनी स्लाइड मापने के लिए, रिपोर्ट की गई पद्धति 3 से 10 समान स्थान वर्गों(तालिका 1) 32,33,34,35,36से भिन्न होती है। 0.29 (एन = 11) के मानक विचलन के साथ 0.8 का आई: एम अनुपात इस पद्धति (रेंज: 0.54-1.51) का उपयोग करके उम्मीद की जा सकती है। हमने और अन्य लोगों ने पहले प्रकाश शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी (एलएसएफएम) की सूचना दी है, जो धमनी की चोट19,37की कल्पना करने के लिए एक उपन्यास दृष्टिकोण प्रदान करता है। एलएसएफएम एक्स, वाई और जेड प्लेन में पूरे कैरोटिड धमनी की इमेजिंग की अनुमति देता है। एलएसएफएम ऑप्टिकल स्लाइसिंग के लिए विश्लेषण के लिए धमनी क्रॉस-सेक्शन उत्पन्न करने की अनुमति देता है, जो पारंपरिक हिस्टोलॉजिकल दृष्टिकोण19,37की तुलना में हाइपरप्लासिया (भिन्नता का गुणांक: एलएसएफएम बनाम 41% द्वारा 28%) के अधिक सटीक अनुमानों को उत्पन्न करता है। जैसा कि चित्रा 4में देखा गया है, एलएसएफएम (0.86, एन = 1) द्वारा प्राप्त आई: एम अनुपात शास्त्रीय हिस्टोलॉजिकल विश्लेषण (0.8 ± 0.29) के माध्यम से प्राप्त परिणामों के बराबर है।

अंत में, दबाव नियंत्रित सेगमेंटल चोट धमनी चोट प्रतिक्रिया को पुनः प्राप्त करती है जो नैदानिक पुनर्संवहन प्रक्रियाओं के बाद होती है, जिससे यह रेटेनोसिस के रोगविज्ञान का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श मॉडल बनता है। पेरिडवेंटिशियल ड्रग एप्लिकेशन स्थानीय दवा वितरण की चिकित्सीय प्रभावकारिता को बताने के लिए एक उपयोगी सबूत-अवधारणा वितरण विधि है, और लक्षित प्रणालीगत दवा वितरण दृष्टिकोणों के विकास को सूचित कर सकता है।

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Disclosures

लेखक घोषणा करते हैं कि इस पांडुलिपि के प्रकाशन के संबंध में हितों का कोई टकराव नहीं है।

Acknowledgments

एनई.B को राष्ट्रीय पर्यावरण स्वास्थ्य विज्ञान संस्थान (5T32ES007126-35, 2018) और अमेरिकन हार्ट एसोसिएशन प्री-डॉक्टोरल फेलोशिप (20PRE35120321) से प्रशिक्षण अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था। ईएस .M.B एक KL2 विद्वान आंशिक रूप से यूएनसी नैदानिक और ट्रांसलेशनल साइंस अवार्ड-K12 स्कॉलर्स प्रोग्राम (KL2TR002490, 2018), और नेशनल हार्ट, फेफड़े, और रक्त संस्थान (K01HL145354) द्वारा समर्थित था। लेखक एलएसएफएम के साथ सहायता करने के लिए यूएनसी माइक्रोस्कोपी सेवा प्रयोगशाला के डॉ पाब्लो एरियल का शुक्रिया अदा करते हैं । माइक्रोस्कोपी सेवा प्रयोगशाला में लाइट शीट फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी का प्रदर्शन किया गया। माइक्रोस्कोपी सेवा प्रयोगशाला, पैथोलॉजी और प्रयोगशाला चिकित्सा विभाग, UNC Lineberger व्यापक कैंसर केंद्र के लिए P30 CA016086 कैंसर सेंटर कोर सहायता अनुदान द्वारा भाग में समर्थित है ।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
1 mL Syringe Fisher 14955450
1 mL Syringe with needle BD 309626
2 French Fogarty Balloon Embolectomy Catheter Edwards LifeSciences 120602F
4-0 Ethilon (Nylon) Suture Ethicon Inc 662H
4-0 Vicryl Suture Ethicon Inc J214H
7-0 Prolene Suture Ethicon Inc 8800H
70% ethyl alcohol
Anti-Rabbit Alexa Fluor 647 Thermo Fisher Scientific A21245
Atropine Sulfate Vedco Inc for veterinary use
Cotton Swabs Puritan 806-WC
Curved Hemostats Fine Science Tools 13009-12
Fine Curved Forceps Fine Science Tools 11203-25
Fine Scissors Fine Science Tools 14090-11
Gauze Covidien 2252
IHC-Tek Diluent (pH 7.4) IHC World IW-1000
Insufflator Merit Medical IN4130
Iodine solution
Lubricating Eye Ointment Dechra for veterinary use
Mayo Scissors Fine Science Tools 14010-15
Micro Serrefines Fine Science Tools 18055-05
Microdissection Scissors Fine Science Tools 15004-08
Micro-Serrefine Clamp Applying Forceps Fine Science Tools 18057-14
Needle Holder Fine Science Tools 12003-15
Pluronic-127 (diluted in sterile water) Sigma-Aldrich P2443 25% prepared
Rabbit Anti-CD31 Abcam ab28364
Retractor Bent paper clips work well
Rimadyl (Carprofen) Zoetis Inc for veterinary use
Saline solution
Standard Forceps Fine Science Tools 11006-12
Sterile Drape Dynarex 4410
T-Pins

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References

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Buglak, N. E., Bahnson, E. S. M. A Rat Carotid Artery Pressure-Controlled Segmental Balloon Injury with Periadventitial Therapeutic Application. J. Vis. Exp. (161), e60473, doi:10.3791/60473 (2020).

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