Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Клетки коронарного прародителя и растворимые биомаркеры в сердечно-сосудистом прогнозе после коронарной ангиопластики

doi: 10.3791/60504 Published: January 28, 2020

Summary

Развитие основных неблагоприятных сердечно-сосудистых событий, которые влияют на прогноз сердечно-сосудистой системы после коронарной ангиопластики, зависит от степени повреждения коронарной короны и сосудоску. Использование новых коронарных клеточных и растворимых биомаркеров, реактивных к повреждениям сосудов и ремонту, полезно для прогнозирования развития MACEs и прогноза.

Abstract

Основные неблагоприятные сердечно-сосудистые события (MACEs) негативно влияют на сердечно-сосудистый прогноз пациентов, перенесших коронарную ангиопластику из-за коронарной ишемической травмы. Степень коронарного повреждения и механизмы восстановления сосудов являются факторами, влияющими на дальнейшее развитие MACEs. Внутренние сосудистые особенности, такие как характеристики бляшки и сложность коронарных артерий, продемонстрировали прогностические данные для MACEs. Однако использование внутрикоронарных циркулирующих биомаркеров было постулировано как удобный метод ранней идентификации и прогноза MacEs, поскольку они более точно отражают динамические механизмы, связанные с повреждением коронарного состояния и ремонтом. Определение коронарных циркулирующих биомаркеров во время ангиопластики, таких как количество субпопуляций моноядерных клеток-прародителей (MpCs), а также концентрация растворимых молекул, отражающих воспаление, клеточную сцепку и ремонт, позволяет оценка будущих событий и прогноз MACEs 6 месяцев после коронарной ангиопластики. Этот метод подчеркивается его трансляционным характером и лучшей производительностью, чем периферическая кровь, циркулирующая биомаркерами относительно прогнозирования MACEs и его влияния на прогноз сердечно-сосудистой системы, который может быть применен для расслоения риска пациентов при ишемической болезни сердца, проводящей ангиопластику.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Коронарная ангиопластика и стентирование представляют собой процедуру спасения пациентов с ишемической болезнью сердца (CAD). Однако основные неблагоприятные сердечно-сосудистые события (MACEs), включая сердечно-сосудистую смерть, инфаркт миокарда, коронарный рестеноз, а также эпизоды стенокардии или декомпенсации сердечной недостаточности, могут произойти через несколько месяцев после коронарного вмешательства, что вызвало незапланированные визиты в больницу. MACEs являются общими во всем мире и их morbi-смертность высока1.

Коронарная ишемическая травма вызывает раннюю сосудистую реакцию и репаративные механизмы, включающие мобилизацию ПДК из-за их дифференциации и/или ангио-репаративного потенциала, а также выработку растворимых молекул, таких как межклеточные молекулы адгезии (ИКАМ), матричные металлопротеины (ММЗ) и реактивные виды кислорода, отражающие клеточную аднезию, рефреймирование тканей, рефреймирование тканей. Хотя внутренние сосудистые особенности, такие как характеристики бляшки и сложность коронарной артерии были использованы для прогнозирования MACEs, некоторые исследования показали, что биомаркеры, связанные с механизмами травмы и ремонта, происходящих в коронарном эндотелии может быть очень полезным для ранней идентификации и прогноза сердечно-сосудистых событий у пациентов с CAD представлены коронарной ангиопластики2,3,5.

Непрерывный интерес к пониманию механизмов, лежащих в основе травмы САПР и ремонта побудило исследователей изучить внутрикоронарные циркулирующие биомаркеры, потому что коронарная выборка более тесно отражает повреждения сосудов и ремонт6. Однако характеристики коронарных биомаркеров в исследованиях человека были скудными7,8,9. Таким образом, цель настоящего исследования состояла в том, чтобы описать метод определения количества коронарных циркулирующих ПДК и растворимых молекул, отражающих как сосудистые травмы, так и ремонт, и показать, связаны ли эти биомаркеры с MACEs и клиническим прогнозом пациентов САПР, которые прошли коронарную ангиопластику. Этот метод основан на использовании связанных с сосудистой, циркулирующих ПЧК и растворимых молекул, полученных путем отбора проб, наиболее близких к повреждению сосуда. Он также может быть полезен для клинических исследований для ишемии нижних конечностей, инсульт, васкулит, венозный тромбоз, и другие травмы, связанные с сосудистой травмы и ремонта.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Этот протокол отвечает институциональным руководящим принципам Комитета по этике исследований человека.

1. Коронарная ангиография, УЗИ и анализ крови

  1. Запросить базовую клиническую и демографическую информацию до коронарного вмешательства. Сбор данных человека: возраст, пол, текущее состояние курения, индекс массы тела (ИМТ), высокое кровяное давление, дислипидемия, сахарный диабет, лекарства, и указание на текущую коронарную ангиографию.
  2. Выполняйте коронарную ангиографию с помощью катетеризации сердца с использованием радиального подхода. Эта процедура должна проводиться в рамках флюороскопии руководства в гемодинамике комнате экспертами-кардиологами.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Определите бесценные сосуды. Для настоящего исследования, evaluable сосуды были определены как артерии с секциями больше, чем 1,5 мм и стеноз промена более 50%.
  3. Продвигай внутрисосудистый ультразвуковой катетер в интересуемый регион и записывай изображения. Используйте соответствующее программное обеспечение для определения местонахождения и измерения наименьшей области светящегося.
  4. Используйте коронарный катетер для сбора 10 мл крови из ближайшего к налету.
  5. После выписки пациента, график периодических медицинских оценок для последующей исследования конечных точек. Если телефонный контакт невозможен или визит врача задерживается более чем на 2 месяца, попросите уполномоченное лицо (ранее разработанное) проверить конечные точки исследования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Рассмотрим любой из следующих MACE: 1) сердечно-сосудистой смерти, 2) новый инфаркт миокарда, 3) нестабильный стенокардия, побуждающие незапланированный медицинский визит в течение 24 ч, 4) стентреста, как показано на коронарной ангиографии, 5) эпизоды декомпенсированной сердечная недостаточность, требующая клинического внимания.

2. Определение циркулирующих ПДК(рисунок 2)

  1. Обработка крови в течение 1 ч из коллекции. Передача 6 мл собранной крови в коническую трубку 15 мл и разбавить 1:1 (v/v) с 1x фосфатбуферным сольником (PBS), рН 7,4.
  2. Добавьте 2 мл градиента плотности среднего до трех пробирков. Тщательно перенесите три аликота разбавленной крови в каждую пробирку, содержащую среду градиента плотности.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Общий объем градиентной плотности средней и разбавленной крови не должен превышать трех четвертей максимальной емкости пробирки.
  3. Центрифуга на 1800 х г,4 кв кв 30 мин. Перенесите полосу на интерфейсе между слоями в новую трубку. Добавьте 2 мл PBS и центрифугу при 1800 х г,4 кв. м в течение 6 мин. Гранулы будут содержать MPCs.
  4. Вымойте гранулы несколько раз. Присвоить предыдущее решение и аккуратно resuspend клеточной гранулы в свежем PBS. Для последующих смылок, центрифуга на 1800 х г, 4 кв кв 2 мин. Повторите процесс 6x.
  5. Приостановите действие клеточной гранулы в 1 мл PBS. Смешайте 20 qL клеточной подвески с 0,4% трипан синий, разбавленный 1:1 (v/v). Нанесите каплю на гемоцитометр и посчитайте неокрашенные клетки под легким микроскопом.
  6. Приступить к определению ПДК. Этикетка 5 мл потока цитометрии труб и aliquot из 1 х 106 ячеек на трубку. Подготовьте соответствующие изотипные контрольные антитела. Центрифуга при 1800 х г,4 кв кв 6 мин и отбросить супернатант.
  7. Добавьте первичные антитела, разбавленные в 100 л инкубационного раствора антител, состоящего из 1x PBS (pH 7.4), 2 ММ этиленденадиаминететраацетической кислоты (ЭДТА), и 0,05% альбумина сыворотки крупного рогатого скота (BSA). Отдохните на 10 с и инкубировать в течение 20 минут при 4 градусах По Цельсию, с защитой от света. Протокол может быть приостановлен на этом этапе путем фиксации лимфоцитов в 4% параформальдегида в PBS и хранения образцов до 24 ч при 4 градусах Цельсия.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Окончательные концентрации первичных антител, используемых в настоящем протоколе, были CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50.
  8. Центрифуга при 1800 х г,4 кв кв 2 мин и отбросить супернатант. Повторное в 500 л 1x PBS (pH 7.4), 2 mM EDTA.
  9. Выполните анализ цитометрии потока. Используйте изотипные контрольные антитела для настройки фонового окрашивания. Затем выберите лимфоциты, распространяющиеся на участке FSC/SSC, пытаясь исключить остаточные гранулоциты, клеточный мусор и другие частицы, которые обычно расположены в нижней, левой распределенной на участке. Такое распределение считается 100%.
  10. Используйте ворота, содержащие большое количество клеток с общим иммунофенотипом CD45 и CD34. Для двойных положительных иммунофенотипов, используйтеворота, ранее идентифицирующие CD45 , CD34, с добавлением либо KDR (VEGFR-2), CD133 , или CD184. Определите субпопуляции MPC по их конкретным маркерам поверхности клеток. Отчет как процент закрытых событий.
  11. Определить основные субпопуляции ПДК. В настоящем исследовании основными иммунофенотипами были CD45cd34cd34, CD45-CD34-CD184,CD45-CD34 , CD134 , CD134
    ПРИМЕЧАНИЕ: Используемые маркеры поверхности клеток были CD45 (лимфоциты), CD34 (эндотелиальные и/или сосудистые клетки), KDR (VEGFR-2, мембранный маркер эндотелиальных клеток), CD133 (эндотелиальные клетки-протеиторы) и CD184 (гематопоитические стволовые клетки и эндотелиальные клетки).

3. Определение плазменных растворимых биомаркеров

  1. Используйте фермент-связанный иммуносорбентный анализ (ELISA) для определения концентрации SICAM-1 и MMP-9(рисунок 3,верхний ряд).
    1. Centrifuge образцы крови на 3000 х г,комнатная температура в течение 5 мин и собирать плазму.
    2. Пометьте стандарты, пробные трубки и контрольные трубки. Уравновесите предварительно покрытые колодцы в панели анализа, промыв 2x с стиральным буфером, предусмотренным в комплекте ELISA.
    3. Перенесите стандарты, образцы и элементы управления в скважины. Печать и инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 90 мин.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Не позволяйте скважины высохнуть полностью.
    4. Откажитесь от содержимого и добавьте антитела для обнаружения биотина. Печать и инкубировать при 37 градусах по Цельсию в течение 60 мин.
    5. Отбросьте содержимое и вымойте 3x. Печать доска и инкубировать последовательно с стрептавидин рабочий раствор следуют тетраметилбензидин субстрата при 37 градусов по Цельсию в течение 30 минут, светозащищенный. Вымойте 3x между инкубациями. Когда цвет развивается, добавьте стоп-решение и прочтите абсорбцию оптической плотности в микроплите ELISA reader.
  2. Используйте иммуномагнитный мультиплексный анализ для определения концентрации фактора некроза опухоли альфа (ТНФЗ) и интерлейкина 1 бета(IL-1)(рисунок 3, нижняя строка).
    1. Пометьте стандарты, пробные трубки и контрольные трубки.
    2. Вортекс магнитных бисерных флаконов на 30 с. Перенесите подвеску бисера в соответствующие по размеру трубки, а затем в колодцы в мультиплексирующей пластине. Периодический вихрь позволяет избежать осадков из бисера.
    3. Надежно вставьте ручную магнитную пластину шайбы. Подождите 2 минуты для шариков, чтобы накопить на дне каждого колодца и быстро инвертировать как ручной магнитной пластины шайбу и пластины сборки, над раковиной или отходов контейнера. Не забудьте использовать ручную магнитную пластину шайбу для поддержания бисера внутри колодцев.
    4. Добавьте 150 л буфера для мытья в каждую скважину и подождите 30 с, чтобы бусы накапливались на дне. Отбросьте содержимое в шаг3.2.3. Затем добавьте 25 юл универсального буфера асссе (предоставленного в комплекте), за которым последуют 25 юл подготовленных стандартов, образцов и элементов управления.
    5. Печать пластины и инкубировать в течение не менее 60 минут при комнатной температуре, светозащищенные, с постоянной тряски при 500 об/мин. Кроме того, инкубировать на ночь при 4 градусах Цельсия, светозащищенный, с постоянной тряской при 500 об/мин, если это возможно.
    6. Вымойте 2x, добавив 150 л буфера стирки и подождите 30 с. Отбросьте содержимое, вставив ручную магнитную шайбу пластины. Подождите 2 минуты и инвертировать над раковиной или контейнером отходов.
    7. Инкубировать последовательно с 25 л обнаружения антитела смеси следуют 25 ЗЛ стрептавидина-PE растворпри температуре 30 мин, герметичной и светозащищенной, с постоянной тряски при 500 об/мин. Вымойте 2x между инкубациями, как описано в шаге 3.2.6.
    8. Получить показания. Добавьте 120 зл и считывающий буфер. Печать пластины и инкубировать 5 мин при комнатной температуре, светозащищенный, с постоянной тряской при 500 об/мин. Выполнить чтение на мультиплексирования считыватель. Отрегулируйте параметры чтения в соответствии с каждым из них.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Коронарная, венозная синусовая и периферическая кровь были собраны у 52 пациентов, перенесших коронарную ангиографию(рисунок 1)и показали высокую распространенность гипертонии и дислипидемии. При клиническом последующем последующем исследовании 11 (21,1%) MACEs произошло через 6 месяцев после коронарной ангиографии: смерть (n No 1), стенокардия, требующая посещения больницы (n No 6), инфаркт миокарда (n No 2), и/или признаки сердечной недостаточности (n No 4).

Базовая коронарная концентрация большинства ПДК была значительно ниже у пациентов, которые разработали MACEs(Рисунок 4), с большим снижением субпопуляций MPC CD34иCD133 и CD45 CD34 cd133cd133 . Аналогичным образом, пациенты, которые разработали MACEs имели увеличенный базовый упор в коронарных количествах sICAM-1 и ниже MMP-9 (Таблица 1).

Коронарные ПДК (субпопуляции CD45-CD34иCD45 и CD45-CD34-CD133-CD184) и sICAM-1 (дихотомизированные по их медианным значениям) продемонстрировали прогностизивную способность к выживанию без MACE (рисунок 5).

Мы также охарактеризовали динамику растворимых биомаркеров в различных условиях, потому что очень мало информации о определении коронарной крови. Выражение фактора некроза опухоли альфа (ТНФЗ) показали вариации в зависимости от времени измерения (до или пост-ангиопластики) и расположения коронарной пробы на основе сравнения различных областей просвета в той же коронарной артерии с использованием внутрисосудистого ультразвука(рисунок 6).

Figure 1
Рисунок 1: Коронарная ангиография и сбор крови. На снимке показана катетеризация сердца с использованием радиального подхода, выполненная под руководством флюороскопии в гемодинамике помещения. Кардиологи оценивают коронарные сосуды во время ангиографии и собирают коронарную кровь из ближайшего к атероме бляшки и/или синусовой крови через катетер сердца непосредственно перед ангиопластикой воздушного шара. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 2
Рисунок 2: Подготовка образца крови и определение ПДК цитометрией потока. (A) Градиент плотности после центрифугации крови (синяя стрелка и полоса лимфоцитов). (B) Коллекция фазы лимфоцитов. (C) Washes с 1x PBS. (D) Центрифугация. (E) Пеллет формирования в нижней части пробирки. (F)Нагрузка подвески клетки Neubauer. (G) Количество лимфоцитов с помощью световой микроскопии. (H) Определение субпопуляций клеток по цитометрии потока. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 3
Рисунок 3: Иммуноанализы для определения растворимых в крови посредников. Верхний ряд: Иммуносорбент, связанный с ферментами (ELISA). На рисунке показано, как информация из образцов карты (ноутбук) была передана в программное обеспечение для начала показаний после подготовки образца, инкубации антител и стихов. Он также показывает развитие желтого цвета, либо в стандартных колодцах (левые колонны в налете) или в испытательных образцах (правые колонны в налете). Нижний ряд: Иммуномагнитный мультиплексирование. После подготовки образца, магнитной инкубации бис-антитела, и мойки, образец информации был передан в соответствующие иммуномагнитных мультиплексирования системы чтения программного обеспечения, и типичная стандартная кривая показана на экране. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 4
Рисунок 4: Коронарные циркулирующие моноядерные клетки-прародители (ПДК). Цифра показывает базовые% субпопуляций MPCs. (A) Представитель показания от потока цитометрии. (B) Количественная оценка субпопуляций % MPCs с цитометрией потока, нарисованные в соответствии с презентацией MACEs (я) - существенная разница, с p qlt; 0.05. Эта цифра была изменена с Суарес-Куэнка и др.10. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 5
Рисунок 5: Коронарные циркулирующие клеточные (ПДК), растворимые биомаркеры и прогноз. Цифра показывает базовые коронарные количества крови (A) % MPCs субпопуляций определяется поток цитометрии и (B) плазменной концентрации sICAM-1 определяется ELISA, как построен в соответствии с представлением MACEs в течение 6 месяцев наблюдения. Синая линия указывает количество людей со значениями риска для каждого биомаркера, таких как более низкие %MPCs или выше sICAM-1. sICAM-1 - растворимые межклеточные молекулы адгезии 1. Эта цифра была изменена из Суарес-Куэнка, и др.10. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Figure 6
Рисунок 6: Условия, определяющие изменчивость коронарных циркулирующих растворимых биомаркеров. На рисунке показаны изменения внутрикоронарной концентрации фактора некроза опухоли альфа (ТНФЗ), в зависимости от времени измерения (A: Pre-ангиопластика или B: Постангиопластика), а также расположение коронарной пробы (сравнение между двумя диаметрами коронарного проема при 3,5 мм отсечения, измеренном внутрисосудистым ультразвуком). (К) - злт; 0,05 разница биомаркеров, полученных предварительно по сравнению с постангиопластикой, и разница в выборке в местах диаметра коронарного проема 3,5 мм против йgt;3,5 мм. Эта цифра была изменена с Суарес-Куэнка и др.11. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть большую версию этой цифры.

Table 1
Таблица 1: Базовые биомаркеры растворимых в крови. (К) указывает на p qlt; 0.05 разница биомаркеров от коронарной крови против периферической циркуляции. (К) указывает на p zlt; 0.05, без MACE по сравнению с MACE; однохвостый независимый T-тест. Аббревиативы: sICAM-1 - растворимые межклеточные сточные сточные хэшеции молекулы 1; IL-1 - интерлейкин 1 бета-версия; MMP-9 - матричная металлопротеиназа 9.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Сбор крови из пораженной коронарной артерии может быть затруднен. Иногда коронарная артерия едва доступна. В этом случае, выборка из венозной синуса может быть альтернативой. Мы провели проверку, сравнивая циркулирующие биомаркеры в коронарной артерии против венозной синусовой синуса, без существенных различий. Однако эффективность циркулирующих биомаркеров была подтверждена только для коронарных проб. Таким образом, производительность биомаркеров, полученных из венозной синуса еще предстоит изучить.

Лучше всего обрабатывать образцы для ПДК в течение первых 3 ч после сбора крови. Таким образом, следует налажено хорошее общение между кардиологической группой и исследователями лаборатории. Во время изоляции ПДК следует принимать меры при сдаче образцов крови во время подготовки градиента плотности при мытье гранул ПДК. Наконец, для удобства, мы всегда передаем клетки в цитометрию трубки, добавить первичные антитела, исправить и хранить клетки на ночь при 4 градусах Цельсия, и выполнить поток цитометрии чтения на следующий день после. Что касается роли биомаркера циркулирующих ПДК, были предприняты важные усилия по стандартизации наиболее клинически полезных иммунофенотипов между клетками-предтенистами12,но одним из ограничений исследования может быть тот факт, что конкретные субпопуляции циркулирующих клеток-прародителей не были полностью охарактеризованы для всех клинических сценариев в рамках CAD или других сосудистых заболеваний. Таким образом, различные циркулирующие субпопуляции клеток-прародителей должны быть изучены в каждом исследовании.

При определении растворимых маркеров некоторые общие рекомендации для ELISA и мультиплексирования анализы включают в себя использование многоканального пипетки, хранение решений в нижней части каждого колодца, не касаясь боковых стенок, и избежать высыхания скважины во время ассе. Всегда проверяйте распределение образцов в пластине, особенно для мультиплексирования, чтобы избежать осадков магнитных бусин при постоянном вихре. Кроме того, убедитесь, что вставить нижнюю пластину в ручную магнитную пластину шайбу для поддержания магнитных бусин внутри колодцев, в противном случае образцы будут потеряны во время стиха.

Мы обнаружили, что коронарные циркулирующие ПДК, в основном из гематопогетического происхождения, а также sICAM-1 и MMP-9, были выдающимися биомаркерами для прогнозирования и прогноза MACE. Это согласуется с понятием, что воспалительные реакции и / или сосудистых посредники повреждения стимулируют самонаводящиеся сигналы для мобилизации ИПК и вербовки, содействие местного восстановления тканей4. Соответственно, мы обнаружили вариации в этих биомаркерах в нескольких условиях. Изменения в связи с ангиопластикой и/или расположением коронарной пробы могут быть объяснены эффектом воздействия на атеромазный налет во время ангиопластики, размером бляшки и высвобождением растворимых посредников, секвестрированных внутри бляшки в коронарный поток11. Увеличенный IL-1 ' последовательно включился в развитие металлического налета и клинических усложнений13.

Насколько нам известно, это первое исследование, перспективно оценивающее роль коронарных циркулирующих ПДК и растворимых посредников в сосудистых травмах и ремонте в качестве прогностический биомаркеров в популяции с CAD, представленной коронарной ангиопластике, в том числе характеристика изменений, связанных с ангиопластикой, расположением коронарных проб и сравнением коронарных и периферических проб. Мы считаем, что метод может быть легко установлен в любой больнице проведения коронарной ангиографии. Однако одно из ограничений состоит в том, что мы применяли эту методологию в основном у пациентов с хронической стабильной стенокардией, высвобожденных из отделения неотложной помощи.

Современные традиционные методы, используемые для прогнозирования или прогнозирования MAC в CAD, имеют умеренную прогностические способности. Растет интерес к поиску новых биомаркеров на основе патофизиологических механизмов, отвечающих за ремонт и регенерацию после Cad и ангиопластики. Такие биомаркеры показали аналогичную или лучшую прогностиюльную производительность по сравнению с традиционными методами3,4,5,14,15. Таким образом, мы считаем, что роль коронарных циркулирующих ПДК и растворимых посредников в прогнозировании риска для ВАК будет дополнительно изучена в будущих перспективных исследованиях.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Авторам нечего раскрывать.

Acknowledgments

Авторы благодарят поддержку институциональной программы E015; и Фондо Секторальный ФОССИС-КоНАСИТ, SALUD-2014-1-233947.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BSA Roche 10735086001 Bovine Serum Albumin (BSA) as a buffering agent, stabilizer, standard and for blending.
Calibration Beads Miltenyi Biotec / MACS #130-093-607 MACQuant calibration beads are supplied in aqueous solution containing 0.05% sodium azide. 3.5 ml for up to 100 tests
CD133/1 (AC133)-PE Milteny Biotec / MACS #130-080-801 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD184 (CXCR4)-PE-VIO770 Miltenyi Biotec / MACS #130-103-798 Monoclonal, Isotype recombinant human IgG1, conjugated
CD309 (VEGFR-2/KDR)-APC Miltenyi Biotec / MACS #130-093-601 Antibody conjugated to R-Phycoerythrin in PBS/EDTA buffer
CD34-FITC Miltenyi Biotec / MACS #130-081-001 The monoclonal antibody clone AC136 detecs a class III epitope of the CD34
CD45- VioBlue Miltenyi Biotec / MACS #130-092-880 Monoclonal CD45 Antibody, human conjugated
Conical Tubes Thermo SCIENTIFIC #339651 15ml conical centrifuge tubes
Cytometry Tubes FALCON Corning Brand #352052 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube. 12x75 style. Sterile.
EDTA BIO-RAD #161-0729 Heavy metals, (as Pb) <10ppm, Fe <0.01%, As <1ppm, Insolubles <0.005%
Improved Neubauer Without brand Without catalog number Hemocytometer for cell counting. (range 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Blood Collection Tubes BD Vacutainer #367863 Lilac plastic vacutainer tube (K2E) 10.8mg, 6 mL.
Lymphoprep Stemcell Technologies 01-63-12-002-A Sterile and checked on the presence of endotoxins. Density: 1.077±0.001g/mL
Paraformaldehyde SIGMA-ALDRICH #SZBF0920V Fixation of biological samples, (powder, 95%)
Pipette Transfer 1,3mL CRM Globe PF1016, PF1015 The transfer pipette is a tool that facilitates liquid transfer with greater accuracy.
Test Tubes KIMBLE CHASE 45060 13100 Heat-resistant test tubes. SIZE/CAP 13 x 100 mm

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Cassar, A., Holmes, D. R. Jr, Rihal, C. S., Gersh, B. J. Chronic coronary artery disease: diagnosis and management. Mayo Clinic Proceedings. 84, (12), 1130-1146 (2009).
  2. Regueiro, A., et al. Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: time-course after acute myocardial infarction and stroke. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).
  3. Sen, S., McDonald, S. P., Coates, P. T., Bonder, C. S. Endothelial progenitor cells: novel biomarker and promising cell therapy for cardiovascular disease. Clinical Science (Lond). 120, (7), 263-283 (2011).
  4. Samman Tahhan, A., et al. Progenitor Cells and Clinical Outcomes in Patients With Acute Coronary Syndromes. Circulation Research. 122, (11), 1565-1575 (2018).
  5. Tomulić, V., Gobić, D., Lulić, D., Židan, D., Zaputović, L. Soluble adhesion molecules in patients with acute coronary syndrome after percutaneous coronary intervention with drug-coated balloon, drug-eluting stent or bare metal stent. Medical Hypotheses. 95, 20-23 (2016).
  6. Jaumdally, R., Varma, C., Macfadyen, R. J., Lip, G. Y. Coronary sinus blood sampling: an insight into local cardiac pathophysiology and treatment? European Heart Journal. 28, (8), 929-940 (2007).
  7. Kremastinos, D. T., et al. Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty. International Journal of Cardiology. 53, (3), 227-232 (1996).
  8. Karube, N., et al. Measurement of cytokine levels by coronary sinus blood sampling during cardiac surgery with cardiopulmonary bypass. American Society for Artificial Internal Organs Journal. 42, (5), M787-M791 (1996).
  9. Truong, Q. A., et al. Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study. Heart Rhythm. 11, (12), 2167-2175 (2014).
  10. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23, (7), 4844-4849 (2019).
  11. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Relation of Coronary Artery Lumen with Baseline, Post-angioplasty Coronary Circulating Pro-Inflammatory Cytokines in Patients with Coronary Artery Disease. Angiology Open Access. 7, 01 (2019).
  12. Schmidt-Lucke, C., et al. Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol. PLoS One. 5, (1), e13790 (2010).
  13. Moyer, C. F., Sajuthi, D., Tulli, H., Williams, J. K. Synthesis of IL-1 alpha and IL-1 beta by arterial cells in atherosclerosis. American Journal of Pathology. 138, (4), 951-960 (1991).
  14. Morales-Portano, J. D., et al. Echocardiographic measurements of epicardial adipose tissue and comparative ability to predict adverse cardiovascular outcomes in patients with coronary artery disease. International Journal of Cardiovascular Imaging. 34, (9), 1429-1437 (2018).
  15. Huang, X., et al. Endothelial progenitor cells correlated with oxidative stress after mild traumatic brain injury. Yonsei Medical Journal. 58, (5), 1012-1017 (2017).
Клетки коронарного прародителя и растворимые биомаркеры в сердечно-сосудистом прогнозе после коронарной ангиопластики
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).More

Suárez-Cuenca, J. A., Robledo-Nolasco, R., Alcántara-Meléndez, M. A., Díaz-Hernandez, L. J., Vera-Gómez, E., Hernández-Patricio, A., Sánchez-Díaz, K. S., Gutiérrez-Buendía, J. A., Contreras-Ramos, A., Ruíz-Hernández, A. S., Pérez-Cabeza de Vaca, R., Mondragón-Terán, P. Coronary Progenitor Cells and Soluble Biomarkers in Cardiovascular Prognosis after Coronary Angioplasty. J. Vis. Exp. (155), e60504, doi:10.3791/60504 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter