Summary
Demonstreret her er en effektiv og omkostningseffektiv metode til at rense, kultur, og differentiere hvide stof stamceller fra postnatal mus cerebellum.
Abstract
De fleste cerebellar neuroner skyldes to embryonale stilk nicher: en rhombic læbe niche, som genererer alle de cerebellar excitatoriske glutamatergic neuroner, og en ventrikulær zone niche, som genererer den hæmmende GABAergic Purkinje celler, som er neuroner, der udgør den dybe cerebellar kerner og Bergman glia. For nylig er en tredje stamcelle niche blevet beskrevet, der opstår som en sekundær germinal zone fra ventrikulære zone niche. Cellerne i denne niche er defineret af celleoverfladen markør prominin-1 og er lokaliseret til at udvikle hvide stof af postnatal cerebellum. Denne niche tegner sig for den sene født molekylære lag GABAergic interneurons sammen med postnatalt genereret cerebellar astrocytter. Ud over deres udviklingsmæssige rolle, er denne niche vinder translationel betydning med hensyn til dens engagement i neurodegeneration og tumorigenesis. Biologien af disse celler har været svært at dechifrere på grund af mangel på effektive teknikker til deres rensning. Demonstreret her er effektive metoder til at rense, kultur, og differentiere disse postnatal cerebellar stamceller.
Introduction
Den lillerebellum har længe været anerkendt som en stor neuronal kredsløb koordinere frivillig bevægelse1. Det modtager input fra de brede dele af neuroakse, som omfatter proprioceptive oplysninger fra periferien, således at finjustere motoroutput og koordinere bevægelse. På det seneste har det også været involveret i reguleringen af kognition og følelser ved potentielt at bruge lignende informationsbehandlingsnet2,3,4.
Den voksne lillehjernen er sammensat af en ydre cerebellar cortex og indre hvide stof. Afbrudt inden for disse strukturer er dybe intracerebellar kerner. I lighed med resten af nervesystemet er udviklingen af lillehjernen drevet af spredning af multipotente stamceller (stamceller), der migrerer og differentierer for at give denne velorganiserede struktur. I den tidlige udvikling (E10.5-E13.5), en ventrikulær stilk niche omkring udviklingslandene fjerde ventrikel genererer GABAergic neuroner (dvs. Purkinje celler, Lugaro celler, Golgi celler) sammen med Bergmann glia5,6,7,8.
Senere i udvikling (postnatal uge et), en anden stamcelle niche i den rhombic læbe genererer MATH1- og Nestin-udtrykkende stamvirksomheder, der giver anledning til excitatoriske granulat neuroner9,10,11,12. For nylig en tredje stamcelle niche er blevet beskrevet13. Disse celler udtrykker prominin-1 (også kendt som CD133), en membran-spænder glycoprotein, der definerer en delmængde af stamceller i tarmen og hæmatopoietiske systemer14,15,16. In vivo skæbne kortlægning viser, at disse stamceller generere centrale molekylære lag interneuroner (dvs. kurv celler og stellate celler), sammen med astrocytter, i løbet af de første tre postnataluger. Tidligere har det været vanskeligt at undersøge disse celler in vitro, fordi tidligere metoder har krævet dyre og tidskrævende teknikker (dvs. fluorescensaktiveret cellesortering [FACS]), som er afhængige af prominin-1 farvning12,13,17. Denne protokol beskriver en immunomagnetisk baseret metode til isolering af disse stamceller, som derefter let kan dyrkes og differentieres.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dyreforsøg blev udført i overensstemmelse med NIH's vejledning for pleje og brug af laboratoriedyr (2011) og blev godkendt af Northwestern University IACUC (protokol IS00011368).
1. Udarbejdelse af løsninger
- Der fremstilles vævsdissociationsopløsning fremstillet af steril tøparødholdig Dulbeccos fosfatbufferede saltvand (DPBS) med papain (100 U/ml), cystein (0,2 mg/ml) og DNase (250 U/ml).
- Til fremstilling af DNase opløsning fortyndes 100 mg af det frysetørrede pulver af DNase I (en flaske) i 50 ml H2O. Bland godt og filtrer stamopløsningen. Forbered 10 ml bouillon aliquots. Opdel et stamrør i 0,5 ml enkeltanvendelsesaliquots. Disse enkeltanvendelsesalier opbevares ved -80 °C.
- Klargør magnetiske separationsreagenser ved at forberede magnetisk søjlebuffer X: 0,5% bovinserumalbumin (BSA) og 2 mM EDTA-opløsning.
- For at forberede neurosfæren medier, bruge neurobasal medium indeholdende penicillin/streptomycin med L-glutamin og supplere med 2% B27, 20 NG/mL menneskelige rekombinant epidermal vækstfaktor (EGF), og 20 ng/ml menneskelige rekombinant grundlæggende fibroblast vækstfaktor (bFGF).
- For at forberede differentieringsmedier, bruge neurobasalmedium og supplere med 10 NG/ml differentieret faktor blodplade-afledt vækstfaktor (PDGF-AA) eller 10 NG/ml leukæmi hæmmerfaktor (LIF) og 2% B27.
- Brug ultra-lav fastgørelse 12 godt (3,5 cm2)og 6 godt (9,6 cm2)kulturplader.
2. Dissektion af Cerebellum
- Bedøve mus hvalpe (P3-P7) med isofluran og halshugge ved hjælp af kirurgisk saks.
- Spray det separerede hoved af hvalpene med 70% ethanol.
- Overfør hvert hoved til en tom steril 10 cm kulturskål. Adskil huden ved hjælp af microdissection saks, derefter fjerne kraniet ved at køre saks sagittal langs midterlinjen.
- Brug #7 pincet, skaldu skrælle kraniet knogler begynder caudally fra hjernestammen. Løft forsigtigt hjernen ved hjælp af en spatel, hold lillehjernen intakt, og overfør hjernen til en frisk steril 10,0 cm skål indeholdende 15 ml iskold Hanks' Balanced Salt solution (HBSS) opløsning.
- Placer skålen, der indeholder hjernen under en dissektion mikroskop. Brug fine #5 pincet, fjerne meninges og store blodkar fra lillehjernen og adskille lillehjernen fra hjernestammen ved hjælp af spatel.
- Lillehjernen overføres til et 15 ml centrifugerør indeholdende 5,0 ml iskold HBSS-opløsning. Lillehjernen vaskes ved at skylle og dekantere 3x med 5,0 ml HBSS.
BEMÆRK: Hver lillehjernen skal placeres i sit eget rør til videre forarbejdning.
3. Forberedelse af cellesuspension
- Efter den sidste skylning tilsættes der 5 ml papainbaseret vævsdissociationsopløsning (baseret på tidligere arbejde13,18), som er forvarmet til 37 °C. Vævi 15 minutter ved 37 °C i et vandbad. Bland langsomt indholdet ved at vende røret op og ned 3x-5x hver 3 min enten ved hjælp af en nøddemiddel mixer eller i hånden.
- Forbered en bred diameter (almindelig glas pipette) og smal diameter Pasteur pipette (brand-poleret ved opvarmning over en Bunsen brænder) som beskrevet tidligere19.
- Vask vævet 3x med 5 ml HBSS-opløsning, så tab af vævet undgås, mens det dekanterer i hånden.
- Den sidste HBSS-vask fjernes, og der tilsættes 5 ml DPBS-opløsning indeholdende 250 μL DNase-opløsning til vævet. Dissociere vævet ved triturating 10x-15x ved hjælp af den brede diameter Pasteur pipette. Udfør dette trin forsigtigt for at undgå dannelsen af bobler.
- Derefter inkuberes gyllen i yderligere 10 minutter ved 37 °C i vandbadet, blandes ved at vende røret og rette.
- Brug pasteurpipetter med reduceret diameter til yderligere at triturate vævsgyllen 10x. Hvis der stadig er store stykker væv tilbage, skal du trykke vævsstykkerne mod bunden af røret med spidsen af pipetten forsigtigt og fortsætte pipettering, indtil cellerne når en fin suspension.
- Vævet inkuberes ved 37 °C i yderligere 10 minutter, og de foregående blandingstrin gentages.
4. Immunmærkning af stamceller
- Anbring centrifugerørene på is, og brug iskolde opløsninger til de næste trin. De frasidede celler stammes gennem en 40 μm cellesi i et 50 ml centrifugerør. Top filteret med 10,0 ml HBSS-opløsning for at sikre, at cellerne passerer gennem masken i denne ekstra opløsning.
- De filtrerede celler overføres til et nyt centrifugerør på 15 ml, og cellesuspensionen centrifugeres ved 300 x g i 10 min. ved 4 °C. Aspirerog kassér supernatanten helt ved forsigtigt at bruge en vakuumaspirator.
- Resuspender pellet i 160 μL magnetisk søjle buffer. For at opnå encellesuspensionen før magnetisk mærkning skal cellerne passeres gennem en 30 μm nylonmaske for at fjerne celleklumper, som ellers kan tilstoppe kolonnen.
- Der tilsættes 40 μL anti-prominin-1 mikroperler til hvert 15 ml rør, blandes og inkuberes i køleskab i 15 minutter, for at antistoffet kan binde sig til prominin-1-ekspresningsceller.
- Cellerne vaskes ved at tilsætte 1,0-2,0 ml kolonnebuffer X og centrifugereved 300 x g i 10 min. Aspirer supernatanten helt.
- Resuspender pellet i 1,0 ml kolonne buffer X.
BEMÆRK: Hvis der ses små klumper efter resuspension af pellet med 1,0 ml kolonnebuffer X, skal de fjernes omhyggeligt ved hjælp af en spids af Pasteur-pipetten, ellers kan disse klumper blokere den magnetiske kolonne under cellesortering.
5. Forberedelse af magnetiske kolonner, cellesortering og plating
BEMÆRK: Den magnetiske adskillelse fra forskellige genotype tilstande (sygdom vs. kontrol) skal udføres på samme tid, da enhver forsinkelse kan påvirke neurosfæren morfologi.
- Forbered de magnetiske kolonner ved at placere dem på det magnetiske stativ, der udsættes for magnetfeltet. Kolonnen skylles én gang med 500 μL buffer X ved at anvende buffer, der drypper ned i et centrifugerør, der skal kasseres.
BEMÆRK: Forbered frisk magnetisk kolonne buffer X for hvert eksperiment; hvis ikke, vil stamcelleudbyttet være lavt. - Anvend den mærkede cellesuspension på kolonnen. Den flowthrough, der indeholder ikke-mærkede celler, og som hovedsageligt består af cerebellar neuronal/gliaceller, indifriske 15 ml rør (figur 1A).
- Kolonnen 3x vaskes med 500 μL buffer X (hver vask tager ca. 2-4 min).
BEMÆRK: Cerebellar neuronal/glial blandet kultur beriget med cerebellar granulerede neuroner kan tjene som et nyttigt biprodukt af denne rensning trin. - Fjern kolonnen fra magnetfeltet og placer den i et 1,5 ml rør. Der tilsættes 1,0 ml kulturmedium (neurosfærens medium) til kolonnen, og skub stemplet ind i kolonnen for at skylle cellerne mærket med prominin-1 perler ud i et nyt 1,5 ml falkerør.
- For at forbedre renheden af prominin-1-mærkede celler, passere de eluerede celler over en anden kolonne efter trin 5.1-5.4.
- Tæl cellerne med et hæmocytometer. Det typiske udbytte er 107 celler pr. lillehjernen. Plader cellerne på ultralave fastgørelsesplader (6 eller 12 brønd, baseret på den tæthed, der kræves til downstream-eksperimenter).
6. Passaging af neurosfærer og differentiering
- Plade forpromin-1-mærket stamceller på ultra-lav vedhæftet fil 12 godt plader i neurosfæren medium (5.000 celler / godt).
- Efter 7-10 dage deler cellerne sig for at give kugleformede flydende neurosfærer (primære neurosfærer).
BEMÆRK: I dette eksperiment genereres sekundære neurosfærer, der udvider i antal, til videre brug. Primære neurosfærepopulationer anvendes ikke til disse eksperimenter, da de kan indeholde forurenende celler, der ikke har stamceller egenskaber og kan klumpe sammen med neurosfærer. - For passaging overføres de primære neurosfærer sammen med kulturmediet ved hjælp af 1,0 ml pipettespidser til et 15 ml sterilt centrifugerør. Pellet neurosfærerne ved centrifugering ved 300 x g i 5 min og kassér supernatanten.
- Resuspender pellet i 5 ml vævdissociation medier, der indeholder papain eller 0,05% trypsin opløsning. Inkuber ved 37 °C i 10 min.
- Cellesuspensionen centrifugeres ved 300 x g i 5 min. Resuspender cellerne i 5 ml neurosfæremedium og dissocier cellerne mekanisk ved hjælp af en pasteurpipetter af plast og langsomt pipetterer op og ned 10x.
- Plader cellerne (igen) i neurosfæremedier som beskrevet tidligere. Efter 7-10 dage i kultur, bør pladen beriges med sekundære neurosfærer.
BEMÆRK: Disse kulturer kan passages op til 8x med god effektivitet, hvorefter neurosfæren størrelse tendens til at være mindre og tyder på et fald i spredning. - Tæl cellerne på hæmocytometeret og plade det optimale antal for fremtidige eksperimenter på poly-D-lysin belagte plader (6 eller 12 brønde).
- For at differentiere stamcellerne indsamles neurosfærer fra anden til ottende passage ved centrifugering som beskrevet tidligere, bortset fra at tilføje differentieringsmedium til pelleten.
BEMÆRK: Efter 7 dage in vitro differentierer stamcellerne sig til neuroner, astrocytter og oligodendrocytter, som det fremgår af farvning med neuronal markøren β-III tubulin, astrocytisk markør GFAP og oligodendrocyte maker O4.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Prominin-1-positive postnatal cerebellar stamceller dannet neurosfærer i neurosfæren medium rig på vækstfaktorer (EGF og bFGF). Disse neurosfærer var positive for prominin-1-farvning, den markør, der anvendes til isolation, og også som en plet for andre stamcellemarkører såsom Nestin og GFAP13 (Figur 1). Stamcellemarkeringsudtrykket blev opretholdt i hele kulturen og i op til mindst otte passager20. Ved tilbagetrækning af vækstfaktorer og i nærværelse af LIF og PDGF-AA (som er faktorer, der understøtter neuronal og glial differentiering21,22), neurosfærerne differentieret i neuronal og glial slægtinger (Figur 2).
Figur 1: Isolering af prominin-1 stamceller fra postnatal cerebellum. (A) Cerebellar stamceller blev isoleret ved hjælp af immunmagnetiske forbjerg-1 perler. Toppanel: Rensede stamceller (kolonnebundne) dannede neurosfærer med omfattende sprednings- og selvfornyelsesegenskaber. Cellerne ubundet til kolonnen (flowthrough) var ude af stand til at danne neurosfærer; i stedet blev de cerebellar neuronal/glial blandede celler (β-III tubulin/GFAP). Nederste panel: neurosfærerne dannet af prominin-1+ celler, der udtrykker stamcellespecifikke markører: Nestin, prominin-1 og GFAP. (B) Celler i flowthrough farves negativ for stamcellemarkører prominin-1 og nestin og positiv for neuronal markør β-III tubulin. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Differentiering af prominin-1 positive neurosfærer. I nærvær af differentieringsfaktorer (PDGF-AA eller LIF), prominin-1-positive neurosfærer differentieret i neuroner (β-III tubulin), astrocytter (GFAP), og oligodendrocytes (O4). Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Prominin-1-ekspresning cerebellar stamceller opholde sig i den potentielle hvide stof i løbet af de første 3 uger af postnatal liv. Deres spredning er stramt kontrolleret af den soniske pindsvin vej understøttes af Purkinje celler17. Disse stamceller / progenitors bidrage til senere fødte GABAergic interneuroner kaldet kurv celler og stellate celler. Disse interneuroner bor i det molekylære lag, hvor de synapse på Purkinje celler og forme PC topografi og funktion via GABAergic hæmning13,17,23. Ud over at danne interneuroner, denne stamcellepopulation genererer også alle postnatalt afledte cerebellar astrocytter17,24.
Denne protokol beskriver en nem og omkostningseffektiv metode til at rense prominin-1/CD133 stamceller fra den postnatale mus lillehjernen. Stamceller skal dyrkes i ultra-lav fastgørelseplader. Dyrkning af disse stamceller i normale plader kan få neurosfærerne til at fastgøre til overfladen og føre til lav stamcellespredning og differentiering. Her svarer udbyttet af 200-300 neurosfærer pr. 5.000 celler til et stamcelleudbytte på omkring 1 x 107 celler fra et enkelt lillehjernen. Dette kan sammenlignes med, hvad der er blevet beskrevet for en FACS-baseret strategi, der er 10x dyrere. Desuden kræver FACS-udstyr et dyrt set-up og højt uddannet personale, og det er ikke umiddelbart tilgængeligt.
Disse stamceller får også stigende translationel betydning i forskning i kræft samt neuroudviklings- og neurodegenerative lidelser25,26,27. Ukontrolleret spredning af disse stamceller i det tidlige liv fører til medulloblastoma28, mens forskning fra vores eget laboratorium tyder på, at deres unormale spredning og differentiering kan bidrage til senere cerebellar degeneration i den genetiske sygdom spinocerebellar ataksi type 120. Disse nye protokoller vil være værdifulde for at studere disse celler og give ny indsigt i deres roller i sundhed og sygdom. Disse metoder kan også føre til fremskridt i regenerative behandlinger efter slagtilfælde eller traumer og andre fornærmelser mod hjernen, der ville berettige neuroregeneration. Det er tænkeligt, at disse teknikker kan generaliseres til at udtrække forbjerg-1-ekspresning stamceller fra andre væv, såsom tarm og knoglemarv, hvor de også udtrykkes15,29.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Der er ikke angivet interessekonflikter.
Acknowledgments
Vi takker Opal lab medlemmer for deres forslag. Dette arbejde blev støttet af NIH tilskud 1RO1 NS062051 og 1RO1NS08251 (Opal P)
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.05%Trypsin | Thermo Fisher Scientific | 25300054 | 0.05% |
| 2% B27 | Gibco; Thermo Fisher Scientific | 17504001 | |
| 2 mM EDTA solution | Corning | 46-034-CI | |
| Anti- Prominin-1 microbeads | Miltenyi Biote | 130-092-333 | |
| Bovine serum albumin | Sigma | A9418 | |
| Column MultiStand | Miltenyi Biotec | 130-042-303 | |
| Culture plates ultra - low attachment | Corning | 3473 | |
| Cysteine | Sigma | C7880 | |
| DNase | Sigma | D4513-1VL | 250 U/ml |
| Dulbecco’s Phosphate Buffer Saline | Thermo Fisher Scientific | 14040141 | |
| Hank's balanced salt solution-HBSS | Gibco | 14025-092 | |
| Human recombinant Basic Fibroblast Growth Factor | Promega | G507A | 20 ng/mL |
| Human recombinant Epidermal Growth Factor | Promega | G502A | 20 ng/mL |
| Leukemia Inhibitory Factor | Sigma | L5158 | |
| l-glutamine | Gibco | 25030081 | |
| Microscopy | Lieca TCS SP5 confocal microscopes | ||
| MiniMACS separator | Miltenyi Biotec | 130-042-102 | |
| Mouse anti-Prominin-1 | Affymetrix eBioscience | 14-1331 | 1 in 100 |
| Nestin | Abcam | ab27952 | 1 in 200 |
| Neurobasal medium | Thermo Fisher | 25030081 | |
| O4 | Millopore | MAB345 | |
| Papain | Worthington | LS003126 | (100 U/mL) |
| Platelet- Derived Growth Factor | Sigma | H8291 | 10 ng/mL |
| Poly-D-Lysine | Sigma | P6407 | |
| Rabbit anti-tubulin, b-III | Sigma | T2200 | 1 in 500 |
| Rabit anti-GFAP | Dako | Z0334 | 1 in 500 |
| Separation columns-MS columns | Miltenyi Biotec | 130-042-201 | |
| Sterile cell strainer | Fisher Scientific | 22363547 | 40 μm |
References
- Glickstein, M., Strata, P., Voogd, J. Cerebellum: history. Neuroscience. 162, 549-559 (2009).
- Carta, I., Chen, C. H., Schott, A. L., Dorizan, S., Khodakhah, K. Cerebellar modulation of the reward circuitry and social behavior. Science. 363, (2019).
- Sathyanesan, A., et al. Emerging connections between cerebellar development, behaviour and complex brain disorders. Nature Reviews Neuroscience. 20, 298-313 (2019).
- Wagner, M. J., Kim, T. H., Savall, J., Schnitzer, M. J., Luo, L. Cerebellar granule cells encode the expectation of reward. Nature. 544, 96-100 (2017).
- Araujo, A. P. B., Carpi-Santos, R., Gomes, F. C. A. The Role of Astrocytes in the Development of the Cerebellum. Cerebellum. , (2019).
- Seto, Y., et al. Temporal identity transition from Purkinje cell progenitors to GABAergic interneuron progenitors in the cerebellum. Nature Communication. 5, 3337 (2014).
- Marzban, H., et al. Cellular commitment in the developing cerebellum. Frontiers in Cell Neurosciences. 8, 450 (2014).
- Koziol, L. F., et al. Consensus paper: the cerebellum's role in movement and cognition. Cerebellum. 13, London, England. 151-177 (2014).
- Ben-Arie, N., et al. Math1 is essential for genesis of cerebellar granule neurons. Nature. 390, 169-172 (1997).
- Machold, R., Fishell, G. Math1 is expressed in temporally discrete pools of cerebellar rhombic-lip neural progenitors. Neuron. 48, 17-24 (2005).
- Wang, V. Y., Rose, M. F., Zoghbi, H. Y. Math1 expression redefines the rhombic lip derivatives and reveals novel lineages within the brainstem and cerebellum. Neuron. 48, 31-43 (2005).
- Li, P., et al. A population of Nestin-expressing progenitors in the cerebellum exhibits increased tumorigenicity. Nature Neurosciences. 16, 1737-1744 (2013).
- Lee, A., et al. Isolation of neural stem cells from the postnatal cerebellum. Nature Neurosciences. 8, 723-729 (2005).
- Toren, A., et al. CD133-positive hematopoietic stem cell "stemness" genes contain many genes mutated or abnormally expressed in leukemia. Stem Cells. 23, 1142-1153 (2005).
- Zhu, L., et al. Prominin 1 marks intestinal stem cells that are susceptible to neoplastic transformation. Nature. 457, 603-607 (2009).
- Man, S. M., et al. Critical Role for the DNA Sensor AIM2 in Stem Cell Proliferation and Cancer. Cell. 162, 45-58 (2015).
- Fleming, J. T., et al. The Purkinje neuron acts as a central regulator of spatially and functionally distinct cerebellar precursors. Developmental Cell. 27, 278-292 (2013).
- Panchision, D. M., et al. Optimized flow cytometric analysis of central nervous system tissue reveals novel functional relationships among cells expressing CD133, CD15, and CD24. Stem Cells. 25, 1560-1570 (2007).
- Beaudoin, G. M., et al. Culturing pyramidal neurons from the early postnatal mouse hippocampus and cortex. Nature Protocols. 7, 1741-1754 (2012).
- Edamakanti, C. R., Do, J., Didonna, A., Martina, M., Opal, P. Mutant ataxin1 disrupts cerebellar development in spinocerebellar ataxia type 1. Journal of Clinical Investigation. 128, 2252-2265 (2018).
- Erlandsson, A., Enarsson, M., Forsberg-Nilsson, K. Immature neurons from CNS stem cells proliferate in response to platelet-derived growth factor. Journal of Neurosciences. 21, 3483-3491 (2001).
- Galli, R., Pagano, S. F., Gritti, A., Vescovi, A. L. Regulation of neuronal differentiation in human CNS stem cell progeny by leukemia inhibitory factor. Developmental Neurosciences. 22, 86-95 (2000).
- Silbereis, J., Cheng, E., Ganat, Y. M., Ment, L. R., Vaccarino, F. M. Precursors with Glial Fibrillary Acidic Protein Promoter Activity Transiently Generate GABA Interneurons in the Postnatal Cerebellum. Stem Cells. 27, 1152-1163 (2009).
- Parmigiani, E., et al. Heterogeneity and Bipotency of Astroglial-Like Cerebellar Progenitors along the Interneuron and Glial Lineages. Journal of Neurosciences. 35, 7388-7402 (2015).
- Wojcinski, A., et al. Cerebellar granule cell replenishment postinjury by adaptive reprogramming of Nestin(+) progenitors. Nature Neurosciences. 20, 1361-1370 (2017).
- Yang, Z., Joyner, A. L. YAP1 is involved in replenishment of granule cell precursors following injury to the neonatal cerebellum. Developmental Biology. 1606 (19), 30207 (2019).
- Wang, S. S., Kloth, A. D., Badura, A. The cerebellum, sensitive periods, and autism. Neuron. 83, 518-532 (2014).
- Eberhart, C. G. Three down and one to go: modeling medulloblastoma subgroups. Cancer Cell. 21, 137-138 (2012).
- Takahashi, M., et al. CD133 is a positive marker for a distinct class of primitive human cord blood-derived CD34-negative hematopoietic stem cells. Leukemia. 28, 1308-1315 (2014).
