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Chemistry

Preparação de Complexos modelo sns cobalto(ii) de álcool hepático desidrogenase

doi: 10.3791/60668 Published: March 19, 2020

Summary

A preparação de complexos de cobalto pincer SNS (II) de álcool hepático desidrogenase é apresentada aqui. Os complexos podem ser preparados reagindo ao precursor do ligante com CoCl2·6H2O e podem então ser recristalizados permitindo que o éter dietil se difunde lentamente em uma solução de acetonitrilo que contém o complexo de cobalto.

Abstract

Complexos de modelos químicos são preparados para representar o local ativo de uma enzima. Neste protocolo, uma família de precursores de ligadores de pinça tridentato (cada um possuindo duas funcionalidades de átomo de doador de nitrogênio (SNS) e baseada sinuosa (compostos de bis-imidazole ou bis-triazole) são metalizadas com cocl2·6H2O para pagar complexos de cobalto de pinça sns tridentado(II). A preparação dos complexos do modelo de cobalto(II) para álcool hepático desidrogenase é fácil. Com base em uma rápida mudança de cor ao adicionar o CoCl2·6H2O à solução acetonitrila que contém o precursor do ligante, o complexo se forma rapidamente. A formação do complexo metálico é completa depois de permitir que a solução reflua durante a noite. Estes complexos de cobalto (II) servem como modelos para o local ativo de zinco no álcool hepático desidrogenase (LADH). Os complexos são caracterizados por difração de raios-X de cristal único, espectrometria de massa eletrospray, espectroscopia visível ultravioleta e análise elementar. Para determinar com precisão a estrutura do complexo, sua estrutura cristalina única deve ser determinada. Cristais únicos dos complexos adequados para a difração de raios-X são então cultivados através da difusão lenta de vapor de éter dietil em uma solução de acetonitrilo que contém o complexo de cobalto(II). Para cristais de alta qualidade, a recristalização normalmente ocorre durante um período de 1 semana, ou mais. O método pode ser aplicado à elaboração de outros complexos de coordenação de modelos e pode ser utilizado em laboratórios de ensino de graduação. Finalmente, acredita-se que outros possam encontrar esse método de recristalização para obter cristais únicos benéficos à sua pesquisa.

Introduction

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O objetivo do método apresentado é preparar análogos de pequenas moléculas de LADH para entender melhor a atividade catalítica das metaloenzimas. LADH é uma enzima dimérica que contém um domínio de ligação cofator e zinco(II) domínio catalítico contendo metal1. LADH, na presença do co-fator NADH, pode reduzir cetonas e aldeídos aos seus respectivos derivados de álcool2. Na presença de NAD+, LADH pode realizar catálise reversa de oxidação de álcoois a cetonas e aldeídos2. A estrutura cristalina do local ativo da LADH mostra que seu centro metálico de zinco (II) está ligado a um átomo de nitrogênio, fornecido por uma cadeia lateral de histidina e dois átomos de enxofre e oferecido por dois ligantes de cisteína3. Outras pesquisas mostraram que o centro metálico de zinco é ligado com uma molécula de água labile, resultando em geometria pseudo-tetraédrico ao redor do centro metálico4.

Já reportamos e utilizamos precursores de ligante sns, bem como metalizamos os precursores do ligante com ZnCl2 para formar complexos Zn(II) que contêm o precursor do ligante tridentato5,,6,7. Estes precursores de ligante são mostrados na Figura 1. Estes complexos de zinco (II) apresentaram atividade para a redução estequiométrica de aldeídos pobres em elétrons e, portanto, são complexos de modelo para LADH. Posteriormente, a síntese e caracterização de uma série de complexos de cobre(I) e cobre(II) que contêm precursores de ligantes SNS foram relatadas8,,9,10.

Embora ladh seja uma enzima de zinco (II), estamos interessados em preparar complexos de modelo de cobalto (II) de LADH, a fim de obter mais informações espectroscópicas sobre os análogos de cobalto (II) de LADH. Os complexos de cobalto (II) são coloridos, enquanto os complexos de zinco (II) são off-white. Uma vez que os complexos de cobalto (II) são coloridos, espectros visíveis ultravioletas dos complexos podem ser obtidos, nos quais também podem ser coletadas informações sobre a força do campo de ligante nos complexos de cobalto(II). Usando informações de cálculos gaussianos e dos espectros visíveis ultravioleta obtidos experimentalmente, informações sobre a força do campo de ligante podem ser deduzidas. O cobalto(II) é um bom substituto para o zinco(II), uma vez que ambos os íons têm raios iônicos semelhantes e acidez semelhante de Lewis11,12.

O método apresentado envolve sintetizar e caracterizar complexos de modelos para tentar imitar o comportamento catalítico natural de LADH5,6. Já metalizamos uma família de precursores de ligantes com ZnCl2 para formar complexos modelo de zinco (II) de LADH, que modelou a estrutura e a reatividade do local ativo de zinco em LADH4. Através de múltiplos experimentos, esses ligantes de pinça provaram ser robustos em diferentes condições ambientais e permaneceram estáveis com uma coleção diversificada de grupos R ligados. 5,,6

Os ligantes tridentatos são preferíveis em comparação com os ligantes monodentatos, porque eles têm sido mais bem sucedidos com metalização devido aos fortes efeitos chelates de ligantes tridentatos. Esta observação deve-se a uma entropia mais favorecida da formação de ligante sinuoso em comparação com um ligante monodentado13. Além disso, os ligantes de pinça tridentato susceptíveis de evitar a dimerização dos complexos metálicos, o que é favorecido porque a dimerização provavelmente retardará a atividade catalítica de um complexo14. Assim, o uso de ligantes de pinça tridentato tem se mostrado bem sucedido na química organometálica na preparação de complexos catalíticos ativos e robustos. Os complexos de pinças SNS têm sido menos estudados do que outros sistemas de pinça, uma vez que os complexos de pinça geralmente contêm metais de transição de segunda e terceirafileira15.

Esta pesquisa sobre metaloenzymes pode ajudar a aprofundar a compreensão de sua atividade enzimática, que pode ser aplicada a outras áreas da biologia. Este método de sintetizar complexos de modelos em comparação com o método alternativo (sintetizando toda a proteína de LADH) é favorável por uma série de razões. A primeira vantagem é que os complexos modelo são baixos em massa molecular e ainda são capazes de representar com precisão a atividade catalítica e as condições ambientais do local ativo da enzima natural. Em segundo lugar, os complexos de modelos são mais simples de trabalhar e produzir dados confiáveis e relacionáveis.

Este manuscrito descreve a preparação sintética e caracterização de dois complexos de pinça de cobalto (II) de LADH. Ambos os complexos apresentam um ligante pinça que contém átomos de enxofre, nitrogênio e doador de enxofre. O primeiro complexo (4) é baseado em um precursor imidazol, e o segundo (5) é baseado em um precursor triazol. Os complexos mostram reatividade para a redução da estequiometria de aldeídos pobres de elétrons na presença de um doador de hidrogênio. Esses resultados de reatividade serão relatados em um manuscrito subseqüente.

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Protocol

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1. Síntese de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-metilleneimidazol-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [4]

  1. Para preparar o complexo 4, adicione 0,121 g (3,12 x 10-4 mol) de 2,6-bis (N-isopropyl-N'-metileneimidazol-2-thione)piridina (C19H25N5S2)6 a 15 mL de acetonitrile em um frasco de fundo redondo de 100 mL. Em seguida, a esta solução, adicione 0,0851 g (3,58 x 10-4 mol) de cloreto de cobalto hexahidrato (CoCl2·6H2O). A solução de reação deve mudar de cor de amarelo claro para verde esmeralda imediatamente após a adição do hexahidrato de cloreto de cobalto (II).
  2. Adicione uma barra de agitação ao frasco. Refluxo e mexa a reação por 20 h para garantir a reação completa. Remova o solvente usando um rotovap sob pressão reduzida.

2. Recristalização de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-methyleneimidazol-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [4] por difusão lenta de vapor

  1. Dissolva o soluto em acetonitrilo (7,5 mL), filtre a solução e coloque a solução uniformemente em frascos de 1 dram. Encha cada frasco com 1,5 mL de solução acetonitrila.
    1. Adicione algodão para tampar os frascos, o que permite a difusão lenta de vapor. Coloque o algodão na abertura na parte superior do frasco.
    2. Coloque os frascos em um frasco de 240 mL contendo 50 mL de éter dietil. Feche o frasco com um boné.
    3. Permita que os cristais cresçam durante um período de 1 semana.
      NOTA: A recristalização pode levar mais de 1 dia.

3. Síntese de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-metilenetriazole-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [5]

  1. Para preparar o complexo 5, adicione 0,183 g (4,70 x 10-4 mol) de 2,6-bis (N-isopropyl-N'-metilenetriazole-2-thione)piridina (C17H23N7S2)6 a 15 mL de acetonitrile em um frasco de fundo redondo de 100 mL. A esta solução, adicione 0,223 g (9,37 x 10-4 mol) de hexahidrato de cloreto de cobalto (CoCl2·6H2O). A solução de reação deve mudar de cor de amarelo claro para azul real imediatamente após a adição do hexahidrato de cloreto de cobalto (II).
    1. Adicione uma barra de agitação ao frasco. Refluxo e mexa a reação por 20 h para garantir a reação completa. Remova o solvente usando um rotovap pressão reduzida.

4. Recristalização de cloro-(n3-S,S,N)-[2,6-bis(N-isopropyl-N'-metilenetriazole-2-thione)piridina]cobalto(II)tetraclorocobaltato [5] por difusão lenta de vapor

  1. Dissolva o soluto em acetonitrilo (9,0 mL), filtre a solução e coloque a solução uniformemente em frascos de 1 dram. Encha cada frasco com 1,5 mL de solução acetonitrila.
    1. Adicione algodão para tampar os frascos, o que permite a difusão lenta de vapor. Coloque o algodão na abertura na parte superior do frasco.
    2. Coloque os frascos em um frasco contendo 50 mL de éter dietil. Feche o frasco com um boné.
    3. Permita que os cristais cresçam durante um período de 1 semana.
      NOTA: A recristalização pode levar mais de 1 dia.

5. Cristalografia de raios-X

  1. Monte um cristal de 4 em um laço de nylon. Colete os dados em um difrômetro de difração de Rigaku Oxford. Aqui, os dados de difração de raios-X são coletados a 173(2) K. Resolva a estrutura de cristal usando programas de solução de estrutura Olex216 e ShelXT17 usando métodos diretos. Refinar a estrutura com o pacote de refinamento ShelXL18 usando minimização de quadrados mínimos.
  2. Monte um cristal de 5 em um laço de nylon. Coletar os dados de difração de raios-X em um difusômetro de difração de Rigaku Oxford. Aqui, os dados de difração de raios-X são coletados a 173(2) K. Resolva a estrutura de cristal usando programas de solução de estrutura Olex216 e ShelXT17 usando métodos diretos. Refinar a estrutura com o pacote de refinamento ShelXL18 usando minimização de quadrados mínimos.

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Representative Results

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Síntese
As sinestes dos complexos 4 e 5 foram realizadas com sucesso reagindo a uma solução de acetonitrilo contendo um precursor de ligante bis-thione com hexahidrato de cloreto de cobalto(II) (Figura 2). Esta reação ocorreu a uma temperatura de refluxo na presença de ar. Em geral, os complexos 4 e 5 foram observados como solúveis em acetonitrila, sulfóxido de dimetila, diclorometano e metanol. Complexo 4 era verde na cor e complexo 5 era azul de cor. O percentual de rendimento para os complexos 4 e 5 foi quantitativo.

Cristalografia de raios-X
Cristais únicos dos complexos 4 e 5 foram obtidos através de um método de difusão lenta de vapor, no qual os compostos foram dissolvidos em acetonitrilo, e vapor éter dietil foi permitido difundir lentamente em cada solução. Este método de recristalização é uma excelente maneira de cultivar cristais únicos para amostras difíceis de cristalizar. A Tabela 1 mostra dados de refinamento para os dois complexos, e as estruturas de cristal único são mostradas na Figura 3 e Figura 4. Com base nas estruturas de cristal único, cada célula unitária contém duas cações de pinça sns de cobalto (II) e uma [CoCl4]2- contra-anion. O estado de oxidação do íon de cobalto no íon e anion é Co2+. As estruturas cristalinas dos complexos 4 e 5 foram depositadas no Banco de Dados Estrutural de Cambridge (números de depoimento 1946448 e 1946449).

Ambos os complexos exibem geometria pseudo-tetraédrico sobre o centro metálico cobalto (II) com um nitrogênio e dois átomos doadores de enxofre coordenados ao centro metálico. Além disso, ambos os complexos apresentam um contra-ânion de tetracloreto. Os comprimentos de ligação Co-N e Co-S para os complexos 4 e 5 são quase idênticos em valor. O comprimento do vínculo Co-N é de 2.084(3) Å em 4 e 2.0763(16) Å em 5. Os comprimentos de ligação Co-S em 4 são 2.2927(12) Å e 2.3386(11) Å. Da mesma forma, os comprimentos de ligação Co-S em 5 são 2.3180(6) Å e 2.3227(6) Å. Para os complexos 4 e 5,os comprimentos de ligação são semelhantes aos relatados anteriormente19. Os comprimentos dos títulos Co-Cl são 2,2256(13) Å em 4 e 2,2116(6) Å em 5.

Os comprimentos de ligação carbono-enxofre de 1.710(4) Å e 1.714(4) Å em 4 e 1.693(2) Å e 1.698(2) Å em 5 são semelhantes para os dois complexos e entre o que é tipicamente observado para as ligações individuais C-S (1,83 Å) e C=S ligações duplas (1,61 Å)20.

Como mencionado anteriormente, os complexos 4 e 5 contêm um contra-ânion de tetracloreto. Os comprimentos de ligação co-cl contra-anion para 4 são 2.2709(12) Å, 2.2709(12) Å, 2.2949(11) Å e 2.2950(11) Å. Estes são comparáveis aos do complexo 5, que são 2.2737(6) Å, 2.2737(6) Å, 2.2956(6) Å, e 2.2956(6) Å. Os comprimentos de ligação Co-N e Co-S em 4 e 5 estão em boa concordância com os comprimentos de ligação Co-N (histidina) e Co-S(cisteína) no analógico substituído por cobalto (II) do álcool hepático desidrogenase. Nesta enzima, o comprimento da ligação cobalto-N(histidina) é de 2,04 Å, e os comprimentos de ligação cobalto-S(cisteína) são 2,29 Å e 2,33 Å.21

No complexo 4,os ângulos de ligação N-Co-S são 108,77(10)° e 114,03(10)°, enquanto no complexo 5 são 112,58(5)° e 114,15(5)°. Os ângulos de ligação N-Co-S estão próximos um do outro, e quaisquer diferenças podem ser devido à variação eletrônica dos dois complexos. Os ângulos de ligação N-Co-Cl em 4 e 5 são 107,91(10)° e 107,59(5)°, respectivamente. O ângulo S-Co-S foi medido em 99,79(5)° para 4 e 102,78(3)° para 5. Por último, os ângulos de ligação S-Co-Cl para 4 são 117,98(5)° e 108,43(5)° e para 5 são 111,76(3)° e 107,93(3)°.

O parâmetro tau-4 também foi determinado para os complexos 4 e 5. O parâmetro tau-4 para o complexo 4 é 0,907, e o parâmetro tau-4 para o complexo 5 é 0,94522. Ambos os parâmetros tau-4 são mais consistentes com geometria tetraédrico sobre o centro de cobalto do que geometria planar quadrada. O parâmetro tau-4 para um complexo tetraédrico é igual a um, e o parâmetro tau-4 para um complexo planar quadrado é igual a zero.

Análise elementar
Para estudar a pureza a granel de 4 e 5,os complexos recristalizados foram submetidos a análises elementares. Os resultados estão resumidos na Tabela 2. Os dados aqui sugerem que os complexos 4 e 5 são puros, porque as porcentagens calculadas de carbono, hidrogênio e nitrogênio estão em excelente acordo com as porcentagens encontradas de carbono, hidrogênio e nitrogênio.

Espectrometria de massa de eletrospray
A preparação dos complexos 4 e 5 também foi confirmada por meio da espectrometria de massa eletrospray. Os espectros de massa de eletrospray foram coletados usando uma injeção de fluxo direto. O volume de injeção era de 5 μL. Os dados foram coletados em um instrumento Agilent QTOF nos modos de íons positivos e negativos. As condições otimizadas foram as seguintes: capilar = 3000 kV, cone = 10 V, temperatura de origem = 120 °C. Para o complexo 4, no modo íon positivo, o íon molecular foi observado em m/z = 481,0631. No modo íon negativo, o [CoCl3]- íon foi observado em m/z 163.8433. Para o complexo 5, em modo íon positivo, o íon molecular foi observado em m/z 483.0503. No modo íon negativo, o [CoCl3]- íon foi observado em m/z 163.8413.

Espectroscopia visível ultravioleta
Os complexos 4 e 5 foram analisados utilizando espectroscopia visível ultravioleta para obter mais informações sobre o ambiente eletrônico dos complexos. Os complexos 4 e 5 foram dissolvidos em acetonitrilo para formar soluções separadas. O complexo 4 foi de 1,0 x 10-4 M de concentração e o complexo 5 foi 9,2 x 10-4 M de concentração. O complexo 4 apresentou três picos na região visível a 680 nm (ε = 1300 M-1cm-1), 632 nm (ε = 1100 M-1cm-1), e 589 nm (ε = 1200 M-1cm-1). O complexo 5 apresentou quatro picos na região visível em 682 nm (ε = 1300 M-1cm-1), 613 nm (ε = 850 M-1cm-1), 588 nm (ε = 790 M-1cm-1), e 573 nm (ε = 820 M-1cm-1).

Figure 1
Figura 1: Precursores de ligante de pinça SNS previamente utilizados. Precursores de ligandes baseados em moieties bis-imidazol e bis-triazole. (A) R = iPr, (B) R= neopentyl, (C) R = N-butil. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 2
Figura 2: Síntese dos complexos 4 e 5. Esquema sintético para preparar os complexos 4 e 5. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 3
Figura 3: Estrutura de estado sólido do complexo 4. Estrutura de cristal único de estado sólido do complexo 4. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 4
Figura 4: Estrutura de estado sólido do complexo 5. Estrutura de cristal único de estado sólido do complexo 5. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 5
Figura 5: Espectro visível ultravioleta do complexo 4. Espectro visível ultravioleta do complexo 4 (1,0 x 10-4 M) em acetonitrilo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figure 6
Figura 6: Espectro visível ultravioleta do complexo 5. Espectro visível ultravioleta do complexo 5 (9,15 x 10-4 M) em acetonitrilo. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

4 5
α/° 90 90
β/° 97.2252(19) 90.770(2)
γ/° 90 90
Volume/Å3 5462.6(2) 4852.0(2)
Z 4 4
ρcalcg/cm3 1.516 1.6
μ/mm 1 11.526 1.56
F(000) 2556 2380
Tamanho do cristal/mm3 0,24 × 0,22 × 0,06 0,28 × 0,08 × 0,06
Radiação CuKα (λ = 1,54184) MoKα (λ = 0,71073)
2Faixa de φ para coleta de dados/° 7.39 a 142.76 6.596 a 65.254
Faixas de índice -26 ≤ h ≤ 29, -8 ≤ k ≤ 8, -39 ≤ l ≤ 31 -27 ≤ h ≤ 28, -17 ≤ k ≤ 13, -33 ≤ l ≤ 32
Reflexões coletadas 10233 21514
Reflexões independentes 5235 [Rint = 0,0565, Rsigma = 0,0739] 8079 [Rint = 0,0262, Rsigma = 0,0315]
Dados/restrições/parâmetros 5235/0/312 8079/0/289
Bondade de ajuste na F2 0.978 1.035
Índices Finais de R [I>=2σ (I)] R1 = 0,0529, wR2 = 0,1246 R1 = 0,0398, wR2 = 0,0845
Índices Finais R [todos os dados] R1 = 0,0758, wR2 = 0,1361 R1 = 0,0610, wR2 = 0,0964
Maior diff. pico/buraco / e Å-3 0.99/-0.55 0.59/-0.46

Tabela 1: Dados de refinamento tabulados para os complexos 4 e 5. Requinte de raios-X e dados de coleta para os complexos 4 e 5.

Complexo Calc. % C Encontrado % C Calc. % H Encontrado % H Calc. % N Encontrado % N
4, [C38H50Cl2Co2N10S4][CoCl4]•2[CH3CN] 40.46 40.26 4.53 4.39 13.48 13.17
5, [C34H46Cl2Co2N14S4][CoCl4]•[CH3CN] 35.75 36.20 4.08 4.20 17.37 17.40

Tabela 2: Resultados de análise elementar para os complexos 4 e 5. Análises elementares resultam de percent carbon, hidrogênio e nitrogênio para os complexos 4 e 5.

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Discussion

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A preparação dos complexos 4 e 5 é fácil. O passo chave é adicionar o sólido CoCl2·6H2O a uma solução acetonitrila que contém o respectivo precursor do ligante. A solução fica verde escuro em segundos após a adição de CoCl2·6H2O para formar o complexo 4. A solução fica azul brilhante após a adição de CoCl2·6H2O para formar o complexo 5. Para garantir uma reação completa, a solução é colocada no refluxo durante a noite.

Para cultivar cristais únicos dos complexos 4 e 5,a solução acetonitrila que contém complexos 4 ou 5 precisa ser concentrada. Os complexos devem ser dissolvidos em uma quantidade mínima de acetonitrilo para produzir as soluções que contêm o complexo o mais concentrado possível. Cristais únicos de 4 e 5 são cultivados adicionando solução acetonitrila que contém frascos complexos de 4 ou 5 a 1 dram. Estes 1 frascos de dram que contêm uma solução de complexo 4 ou 5 são colocados em um frasco fechado que continha éter dietil. Para diminuir a taxa em que o éter dietil se difunde na solução de acetonitrilo, uma bola de algodão é adicionada a cada frasco de 1 dram. A bola de algodão deve ser muito confortável para diminuir a taxa de difusão. O uso de algodão para retardar a difusão do éter dietil pode ser utilizado por outros para cultivar cristais únicos para amostras resistentes.

Se a concentração do complexo metálico em acetonitrilo para a recristalização não for forte o suficiente, cristais únicos não se formarão. O produto após a tentativa de recristalização pode ser um resíduo oleoso. Os pesquisadores precisam garantir que o complexo metálico tenha uma concentração alta o suficiente para que cristais únicos se formem.

Pelo que sabemos, nenhum outro cobalto(II) substituiu complexos modelo súditos de álcool hepático desidrogenase foi publicado na literatura. Os trabalhos futuros se concentrarão em comparar espectros visíveis uv obtidos experimentalmente com os espectros previstos pelos cálculos gaussianos para determinar a força do campo de ligantes de ligantes. O trabalho atual no laboratório Miecznikowski está focado na preparação de complexos de modelo substituídos por cobalto de álcool hepático desidrogenase que não contêm [CoCl4]2- como o contra-ânion. Estes complexos estão atualmente sendo rastreados para a redução de aldeídos e cetonas pobres de elétrons.

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Disclosures

Os autores não têm nada para revelar.

Acknowledgments

John Miecznikowski recebeu apoio financeiro do seguinte para este projeto: a Connecticut NASA Space Grant Alliance (Número de Prêmio P-1168), o Fairfield University Science Institute, College of Arts and Sciences Publication Fund, Fairfield University Faculty Summer Research Stipend, e National Science Foundation-Major Research Instrumentation Program (Grant Number CHE-1827854) para fundos para adquirir um espectrômetro de RMN de 400 MHz. Ele também agradece a Terence Wu (Universidade de Yale) pela ajuda na aquisição de espectros de massa de eletrospray. Jerry Jasinski reconhece o Programa de Instrumentação de Pesquisa da Fundação Nacional de Ciência (Grant Number CHE-1039027) para obter fundos para a compra de um difrômetro de raios-X. Sheila Bonitatibus, Emilse Almanza, Rami Kharbouch e Samantha Zygmont reconhecem o Hardiman Scholars Program por fornecer seu subsídio de pesquisa de verão.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
100 mL Round Bottomed Flask Chem Glass CG150691 100mL Single Neck Round Bottomed Flask, 19/22 Outer Joint
Acetonitrile Fisher HB9823-4 HPLC Grade
Chiller for roto-vap Lauda L000638 Alpha RA 8
Cobalt Chloride hexahydrate Acros Organics AC423571000 Acros Organics
Diethyl Ether Fisher E-138-1 Diethyl Ether Anhydorus
graduated cylinder Fisher S63456 25 mL graduated cylinder
hotplate Fisher 11-100-49SH Isotemp Basic Stirring Hotplate
jars Fisher 05-719-481 250 mL jars
Ligand ----- ----- Synthezied previously by Professor Miecznikowski
medium cotton balls Fisher 22-456-80 medium cotton balls
one dram vials Fisher 03-339 one dram vials with TFE Lined Cap
pipet Fisher 13-678-20B 5.75 inch pipets
pipet bulbs Fisher 03-448-21 Fisher Brand Latex Bulb for pipet
recrystallizing dish for sand bath Fisher 08-741 D 325 mL recrystallizing dish for sand bath
reflux condensor Chem Glass CG-1218-A-22 Condenser with 19/22 inner joint
Rotovap Heidolph Collegiate 36000090 Brinkmann; Heidolph Collegiate Rotary Evaporator with Heidolph WB eco bath Heidolph Rotary Evaporator
sea sand for sandbath Acros Organics 612355000 washed sea sand for sand bath
Stir bar Fisher 07-910-23 Egg-Shaped Magnetic Stir Bar
Vacum grease Fisher 14-635-5D Dow Corning High Vacuum Grease
vacuum pump for rotovap Heidolph Collegiate 36302830 Heidolph Rotovac Valve Control

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Holm, R. H., Kennepohl, P., Solomon, E. I. Structural and Functional Aspects of Metal Sites in Biology. Chemical Reviews. 96, (7), 2239-2314 (1996).
  2. Ibers, J. A., Holm, R. H. Modeling coordination sites in metallobiomolecules. Science. 209, (4453), 223-235 (1980).
  3. Kannan, K. K., et al. Crystal structure of human erythrocyte carbonic anhydrase B. Three-dimensional structure at a nominal 2.2-A resolution. Proceedings of the National Academy of Sciences USA. 72, (1), 51-55 (1975).
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Preparação de Complexos modelo sns cobalto(ii) de álcool hepático desidrogenase
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Miecznikowski, J. R., Jasinski, J. P., Kaur, M., Bonitatibus, S. C., Almanza, E. M., Kharbouch, R. M., Zygmont, S. E., Landy, K. R. Preparation of SNS Cobalt(II) Pincer Model Complexes of Liver Alcohol Dehydrogenase. J. Vis. Exp. (157), e60668, doi:10.3791/60668 (2020).More

Miecznikowski, J. R., Jasinski, J. P., Kaur, M., Bonitatibus, S. C., Almanza, E. M., Kharbouch, R. M., Zygmont, S. E., Landy, K. R. Preparation of SNS Cobalt(II) Pincer Model Complexes of Liver Alcohol Dehydrogenase. J. Vis. Exp. (157), e60668, doi:10.3791/60668 (2020).

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