Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

גרימת פגיעה חמורה בכבד חולדות באמצעות פחמן טטרכללוריד (CCl4) חשיפה באמצעות צינורית אורוקיבה

Published: April 28, 2020 doi: 10.3791/60695
Automatic Translation
*1, *1, 2, 3, 1, 1, 4, 1, 1, 1
1Department of Anesthesiology and Critical Care, Soroka Medical Center, Ben-Gurion University of the Negev, 2Department of Anesthesiology, Yale University School of Medicine, 3Department of Neurosurgery, Soroka University Medical Center and the Faculty of Health Sciences, Ben-Gurion University of the Negev, 4Department of Ophthalmology, Soroka University Medical Center and the Faculty of Health Sciences, Ben-Gurion University of the Negev
* These authors contributed equally

Summary

פרוטוקול זה מתאר שיטה נפוצה ומקובלת לגרימת פגיעה בכבד חריפה (ALI) באמצעות החשיפה של CCl4 דרך צינור הקיבה. החשיפה CCl4 גורמת ALI דרך היווצרות של מינים חמצן תגובתי במהלך ביומרה בכבד. שיטה זו משמשת כדי לנתח את הפתופסולוגיה של עלי ולבחון אסטרטגיות hepatop, שונים.

Abstract

פגיעה חריפה בכבד (ALI) ממלאת תפקיד מכריע בהתפתחות כשל הכבד, אשר מאופיין בתפקוד כבד של בעיות כגון סיבוכים כגון אנצפלופתיה הכבד סינתזה חלבון לקויי. מודלים בעלי חיים מתאימים חיוניים לבדיקת המנגנון והפתופסולוגיה של עלי ולחקור אסטרטגיות שונות של hepatopquo. בשל יכולתה לבצע טרנספורמציות כימיות, פחמן טטרכלוריד (CCl4) נמצא בשימוש נרחב בכבד כדי לגרום ALI דרך היווצרות של מינים חמצן תגובתי. חשיפה CCl4 ניתן לבצע intraperitoneally, על ידי שאיפת, או דרך שפופרת או באמצעות צינור הקיבה. כאן, אנו מתארים מודל מכרסם, שבו עלי נגרמת על ידי חשיפה CCl4 דרך צינור הקיבה. שיטה זו זולה, מבוצעת בקלות והיא מסכנת סיכון מינימלי. המודל הוא מאוד ניתן לשימוש והוא יכול לשמש רבות כדי לקבוע את היעילות של אסטרטגיות hepatopquo פוטנציאלי ולהעריך סמנים של פציעה בכבד.

Introduction

תדירות העלבונות הרעילים לכבד, בעיקר בשל אלכוהול ושימוש בסמים, גוברת. פגיעה חריפה בכבד (עלי) קשורה לשיעורי תמותה גבוהים וגרמה לחששות קליניים1,2. פציעה רעילה מובילה למוות איתות מסלולים בכבד, וכתוצאה מכך ההיפטציט אפופטוזיס, נמק, או פירופסיס. עלי משחק תפקיד מכריע בהתפתחות כשל הכבד, אשר מאופיין בתפקוד כבד בעיות כולל סיבוכים כגון אנצפלופתיה הכבד סינתזה חלבון לקויי3,4. למרות שמחקרים אחרונים הגדילו את הידע שלנו על השינויים הפיזיולוגיים והפתולוגיים הנלווים לכישלון הכבד, הוא לא הסביר לחלוטין את התכונות הפתומקולריות המשפיעות על מנגנוני מוות התאים. יתר על כן, תרופות אינן זמינות כעת כדי להפוך את ההתדרדרות הפרוגרסיבית בחולים ALI. כיום, הטיפול האפקטיבי היחיד באופן משמעותי הוא השתלת כבד5,6.

על מנת לחקור את המנגנון ואת פתופסיולוגיה של עלי ולבדוק אסטרטגיות hepatopquo שונים, מודלים בעלי חיים שונים משמשים כדי לגרום ALI. מודל בעל חיים מועדפת של עלי לחקות את התהליך הפתולוגי של המחלה באמצעות שיטה אמינה, מאומתת, זולה וקלה להחלה. דוגמאות של מודלים ניסיוניים כוללים סוכני hepatotoxic, הליכים כירורגיים כגון סה כ כריתת העין הכוללת, מלאה או ארעי הליכים, ו-בהליכים מסוימים7,8,9. חומרים מוכרים כוללים את החומר הרעיל של גלטוסמיטין, פרצטמול, תיודרחאמיד, אזובמיתאן ו-CCl4. מאלה, ccl4 נמצא בשימוש נרחב למרות שזה עדיין לא מאופיין היטב10,11,12,13.

CCl4 הוא תרכובת נוזלית אורגנית עם ריח מתוק וכמעט ללא צבע בטמפרטורות נמוכות. חשיפה לריכוזים גבוהים של CCl4 יכול לגרום נזק למערכת העצבים המרכזית, כולל הידרדרות של הכבד והכליות. CCl4 גורם עלי באמצעות טרנספורמציה ביולוגית בכבד, אשר מהווה מיני חמצן תגובתי. זה מתרחש באמצעות האנזים P450 ציטוכרום 2E1, ויוצרים פעילות מטבוליט פעילה וכתוצאה מכך נזק לתא על ידי מקרומולקולה binding, שיפור peroxidation שומנים והפרעה של סידן תאיים הומאוסטזיס14. בנוסף, מודל CCl4 יכול לשמש כדי לעורר את האסטרוציטים ברמה של סינתזה RNA15. הפאטאוטוקסין הזה מנוהל על ידי הצפק, הפנים, דרך הפה, ודרכי העיכול16.

בפרוטוקול זה, אנו מתארים בפירוט CCl4המושרה עלי בחולדות באמצעות צינור הקיבה. שיטה זו מעוררת עלי החזקה והניתנת לקריאה, שניתן להשתמש בה כדי לחקור את הפתוגנזה של עלי. קביעת חומרת מחלת הכבד היא בפיקוח על ידי מדידה של הנסיוב גלוטמט-פירואמיאז (GPT), גלוטמית אוקסלואצטט טרנסאמיאז (יש) אנזימים הכולל בילירובין (TB), כמו גם אבחנה היסטולוגית סופית על ידי המטאוקסילין ואאוזין (H & E) רקמות הכבד ויטראז '. חשיפה ל-CCl4 דרך גישה התוך הקיבה מאפשר שיטה מעשית, זולה, פולשנית עם סיכון סכנה מינימלי.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הניסויים נערכו על פי המלצות ההצהרות של הלסינקי וטוקיו ולהנחיות לשימוש בבעלי חיים ניסיוניים בקהילה האירופית. הניסויים אושרו על ידי הוועדה לטיפול בבעלי חיים באוניברסיטת בן-גוריון בנגב.

הערה: דגם CCl4 נוצר ונעשה בו שימוש במחקר הקודם17. ציר הזמן של הפרוטוקול מוצג בטבלה 1.

1. הכנת חולדות להליך הניסיוני

הערה: בחירת הזכרים בוגרים מהספרג במשקל 300-350 גרם.

  1. לקבל אישור לניסויים מתוך הוועדה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים והשימוש (IACUC).
  2. לשמור על החולדות בטמפרטורת החדר (22 ° c ± 1 ° צ'), עם אור 12 h ו 12 h מחזורים כהים. . לספק משקה עכברים ומים ליסיביות
  3. בצע את כל הניסויים בין 6:00 לפנות בוקר לשעה 12:00.
  4. גלח את החולדה וחטא את העור באלכוהול.

2. קביעת הסרום מגיע, מסוג GPT, ו-TB רמות בסיסיות

  1. רדמה
    1. הכינו מערכת מינהל מתמשך. כדי לגרום להרדמה תוודא שמערכת האידוי. מלאה באיזוofלבנה
    2. הלבין את החולדה. בעלת 2% הנחה ודא שהעכברוש מורדם לחלוטין על-ידי התבוננות בתנועה וברפלקס הדוושה בתגובה לגירויים חיצוניים.
      הערה: השתמש ב-1-5% בגין הרדמה ותחזוקה.
  2. . צינורית בעורק הזנב עם צנתר בסול 22
  3. לאסוף דגימת דם 0.5 mL בבסיס. ודא שנפח הדם שאוחזר אינו חורג מהנחיות IACUC.
  4. לבצע ניתוח דם ביוכימיים כולל מדידות של סרום יש, GPT ו-TB, כפי שמתואר בעבר18.
    הערה: בדיקות אנזימי כבד ורמת השחפת בוצעו במעבדה הביוכימית של המרכז הרפואי סורוקה. דגימות דם נותחו באמצעות שיטה פלואורסצנטית על מנתח כימיה (טבלת חומרים).

3. אינדוקציה של פגיעה בכבד חריפה בחולדות

התראה: חשיפה לריכוזים גבוהים של CCl4, כולל קליטה באדים או בעור, יכולים להיות השפעות שליליות על מערכת העצבים המרכזית ולגרום לניוון של הכבד והכליות. חשיפה ממושכת יכולה. לגרום לתרדמת או מוות

  1. הכינו פתרון 50% של CCl4 (לוח חומרים) על ידי ערבוב ccl4 עם שמן זית כרכב ביחס 1:1.
    הערה: הפתרון צריך להיות מוכן על פי הנחיות IACUC עבור תרכובות שאינן תרופות כיתה.
  2. הvivo על ידי מנהל CCl4 באמצעות צינורית בקיבה.
    1. הכנס צינור 16 האורוקיבה (3 ס מ עמוק) דרך חלל אוראלי של החולדה.
    2. לחשוף את העכברוש למינונים שונים של CCl4 על ידי הזרקת מזרק עם אחד מהפתרונות הבאים מדולל לתוך הבטן של החולדה: 1 מ ל/ק"ג (מתון עלי), 2.5 ml/ק ג (עלי מתון), או 5 מ ל/ק"ג (ali חמור) של 50% פתרון. לקבוצת הבקרה הפועלת באמצעות התחזות, חשפו את החולדה לשמן זית של 5 מ ל/ק"ג בלבד.

4. קביעת הסרום יש, GPT, ו TB רמות לאחר 24 שעות

  1. רדמה
    1. הכינו מערכת מינהל מתמשך. כדי לגרום להרדמה תוודא שמערכת האידוי. מלאה באיזוofלבנה
    2. לעשות את החולדות. עם 2% בלבד ודא שהעכברוש מורדם לחלוטין על-ידי התבוננות בתנועה וברפלקס הדוושה בתגובה לגירויים חיצוניים.
  2. לאסוף דגימות דם ב 24 שעות מחשיפה CCl4 .
  3. לבצע ניתוח דם ביוכימיים כולל מדידות של סרום יש, GPT ו-TB.

5. הכבד אוסף לבדיקה היסטולוגית

  1. המתת חסד על ידי החלפת תערובת הגז השראה עם 20% O2/80% CO2. ודא כי CO2 מועברת בקצב מוגדר מראש בהתאם להנחיות IACUC.
  2. להבטיח מוות על ידי בדיקת חוסר דופק ולאשר על ידי שיטה משנית בהתאם הנחיות IACUC.
  3. מניחים את החולדה על לוח מבתר עם המשטח הפנימי שלו פונה כלפי מטה והבטן פונה כלפי מעלה. . תגלח את הבטן של העכברוש
  4. עם אזמל, מפרק את האורך המלא של העור הונרום מן פי הטבעת אל הסנטר. . הפרד את העור לחלל את קיר הבטן עם אזמל מן הרקטום אל הסחוס xyphoid, חשיפת מעיים הבטן.
  5. באמצעות מספריים ומלקחיים, לבודד את הכבד על ידי מבתר אותו מן הרצועות שלה וקבצים מצורפים. החל מתוך הכבד hilum, בזהירות לבצע כריתת המעי הריאה על ידי שחרור כל האונות הכבד מפני קבצים מצורפים. מנתחים וחותכים את כל הרצועות ואת כלי הדם.
  6. . להעביר את הכבד לצלחת פטרי לתקן את הכבד בתמיסה 4% פורמלדהיד באגירה (טבלת חומרים) לפחות 24 שעות.

6. בדיקה היסטולוגית

  1. הכנה לדוגמא
    1. לאחר קיבעון, לחתוך את המדגם לתוך 5 יקרומטר סדרת פרוסה עבה על ידי הפחתת מיקרוטום.
    2. מקם בעדינות את הפרוסות על שקופיות זכוכית עם מברשת רכה, פרוסה אחת לכל שקופית.
    3. לבצע כתמים H & E כפי שתואר בעבר19.
  2. בדוק את הפרוסות מתחת למיקרוסקופ בהגדלה של 200x באמצעות עדשת יעד של 20 מ"מ (טבלת חומרים).
    הערה: מקטעי הכבד צריך להיות מדורגים על ידי פתולוג מיוחד עיוור לפרוטוקול הטיפול. ציון של 0 מצביע על חריגות בכבד, 1 – 2 מציין פציעה בכבד מתון, 3 – 4 מציין פציעה בכבד מתון, ו-5 – 6 מעיד על פציעה חמורה בכבד20,21,22.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

שחפת, יש, ורמות GPT גדל באופן משמעותי 24 שעות לאחר גרימת עלי (יותר ב-CCl4 מינונים) בהשוואה לפקדים בעלי הפעלה מזויפת (p < 0.001) (איור 1). רמות של TB, הגיע, ו-GPT בתוכנית הבסיסית היו נורמליים ולא היו שונים באופן משמעותי מאשר בקרות מופעל המזויף. ב 24 שעות, כל שלוש קבוצות התערבותית, 1 מ"ל/ק"ג CCl4 (1, 1-2), 2.5 ml/ק"ג ccl4 (3, 3-4), ו-5 מ"ל/ק"ג ccl4 (4, 4-5.75), היה ציון גבוה יותר באופן משמעותי בדירוג היסטולוגית מאשר קבוצת הבקרה המופעלת באמצעות התחזות (0, 0-0) (p < 0.05, נתונים שהוצגו כחציון, 25 התמונות H & E של שליטה מופעלת התחזות (איור 2A) וקבוצות חשופים ccl4 מינונים (איור 2B-D) הצגת שינויים histopathological 24 שעות לאחר החשיפה ccl4 . שיבוש האדריכלות hepatocellular על ידי CCl4 הוכח על ידי כיתה גבוהה של פגיעה ברקמות עם דפורמציה סיבי septa גדול, הרחבה של סיבים, הצטברות קולגן, והפרדת אונה מדומה בסעיפים בכבד (איור 2).

Figure 1
איור 1: סרום טרה-בתים (A), יש (ב), ו-GPT (C) רמות בדגימות דם 24 שעות לאחר החשיפה ל-ccl שונים4 מינונים לעומת שולטת מופעל המזויף. סרגל כחול: שליטה; בר אדום: 24 שעות לאחר החשיפה CCl4 . המשמעות של השוואות בין החולדות החשופותשל CClלבין חולדות חשוף נקבעים באמצעות מבחן מאן-ויטני. ערך p של < 0.05 נחשב למשמעותי. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

Figure 2
איור 2: שינויים histopathological ברקמת הכבד עם מוכתם H & E לאחר 24 H CCl4 שיכרון במינונים שונים. (א) שליטהבפועל, (ב) 1 מ"ל/ק"ג ccl4, (ג) 2.5 ml/ק"ג ccl4, ו (ד) 5 מ"ל/ק"ג ccl4. סרגל קנה מידה = 50 μm. התפלגות התוצאות היסטולוגית החזוי על ידי רגרסיה לינארית. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.

קבוצות 0 שעות . עשרים וארבע שעות
בעלי (15 עכברושים) יש, GPT, הרמה הבסיסית של TB יש, GPT, רמת TB
עלי מתון (15 חולדות)
עלי מתון (15 חולדות) חשיפה לקבוצות של עלי ושמן זית לקבוצה מזויפת בדיקה היסטולוגית
עלי הקשה (18 חולדות)

טבלה 1: הדגמה של ציר הזמן של הפרוטוקול. הקבוצות השונות של חולדות בזמנים שונים כוללות קבוצת שליטה מופעלת התחזות, עלי מתון (חשיפה ל-1 מ"ל/ק"ג CCl4), עלי מתון (חשיפה ל-2.5 ml/ק"ג ccl4), ו-ali חמור (חשיפה ל-5 מ ל/ק"ג). בזמן 24 שעות, סרום הגיע, מסוג GPT ו-TB נמדדו, ו בדיקה היסטולוגית בוצעה עבור כל ארבע הקבוצות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

בפרוטוקול זה, CCl4 משמש רעלן הכבד כדי לגרום ALI בחולדות. עלי מאופיין על ידי אובדן של הכבד בתוך כימומה ולאחר הדיסתקנה של פונקציות מטבולית וסינתטי של ההכבד. תרופות, וירוסים, רעלים, מחלות אוטואימוניות, מחלות מטבוליות, ובעיות בכלי הדם כל לגרום מוות hepatocyte, ואת התגובה הדלקתית הבאה תורמת הפתוגנזה של עלי.

העלבון הראשוני לכבד מוביל לייצור cy, כימוקין שחרור, והסתננות לאחר מכן של תאים דלקתיים לתוך הכבד. שלושה מסמנים בעלי בדיקות נפוצות להערכת עלי הם GPT, יש ורמות TB. מסוג GPT ו-יש אנזימים הנמדדים ברמת הפעילות ואילו רמת השחפת מודדת את תפקוד הכבד על ידי ריכוז הנסיוב. כאשר רמות הפעילות של אנזימים מוגבהים, מציינות פגיעה בדלקת הפציטים או המרה23. שיטת spectrophotometric מהירה דווחה לראשונה ביצירתו של ארתור קרמן ב-195524, שאיפשר ליישום הקליני הנרחב של מדידת אנזימים בסרום. מאז הוחלו גם מדידות מסוג ' מקבל ' ו-GPT על מנת לזהות פציעה באמצעות ההיציט. מסוג GPT משמש לעתים תכופות יותר, ובדיקות GPT בו מגלה בדרך כלל תוצאות עודפות. הגידול ברמות הפעילות של יש ו-GPT בין שערי השחרור ושיעורי הסיווג מתאים פצועים ניתן להשתמש כדי למדוד בערך את שיעור הפגיעה בתאים. כאשר התאים הפצועים הכבד לגרום לכבד להיכשל בפעילות הרגילה שלה, כגון עיבוד והסרה של בילירובין כמו מרה, זה מצביע על כך עלי חמור יותר.

קיימים מספר שלבים בפרוטוקול הקריטיים והראויים לשיקול דעת. רוב הפרוטוקולים דורשים בדיקות בדיקת סרום לפני ואחרי החשיפה לסוכן החוקר, כמו הגבהים של הסרום ברמות ריכוז אנזימים נפוצים. עם זאת, עקב תנודות בעיתוי של ALT מוגבר, יש לערוך מספר בדיקות באופן תקופתי כדי לזהות כל העלאה. בפרוטוקול זה, בחרנו לבדוק יש, מסוג GPT ו-TB רמות בסיסית ו -24 שעות לאחר החשיפה לרעלן. על פי המחקרים האחרונים, רמות של בסמנים אלה בקורלציה היטב עם חומרת עלי בזמן זה מרווח17. כפי שמוצג באיור 1, רמות של דם יש, GPT, ו-TB היו גבוהות בכל הדגימות 24 h לאחר גרימת ALI. הדבר מצביע על כך שהמודל מכיל תוצאות בזמן קצר מאוד מאז החשיפה ל-CCl4. אחד צריך לקחת בחשבון כי בעלי הכבד חמור מאבד את יכולתו לסנתז יש ו-GPT. לכן, במקרים אלה ייתכן שאנזימים אלה לא יהיו בעלי ערך ניבוי שלהם כפי שמתואר בספרות.

ממצאים היסטולוגית של חולדות שנחשפו ל-CCl4 מאופיינים על ידי בלונים של תאים, ונמק בתוך הראש ונוכחות של גופי חבר המועצה25. במודל זה היה נזק נרחב הוכח להיות פרופורציונלי למינון של CCl4 מנוהל.

שיטה זו של גרימת לעלי באמצעות החשיפה CCl האורוקיבה4 יש יתרונות רבים. היא פשוטה, זולה, ובעלת סיכון מזערי לסיכונים. הפרוטוקול מספק תוצאות משמעותיות בפרק זמן קצר מאוד. המודל הוא מאוד הניתן לשימוש והוא יכול לשמש בדרך כלל כדי לקבוע את היעילות של אסטרטגיות hepatopquo פוטנציאלי ולהעריך סמנים של פציעה בכבד.

חשוב לציין כי CCl4 משפיע בעיקר על האזור המרכזי של הכבד, אשר אינו מתאים נמק מסיבי לראות בדרך כלל בספיקת כבד האדם. יתר על כן, CCl4 אינו מטבוליזם לחלוטין בכבד, וחלק ccl שאינם מטבוליזם4 יכול להזיק לאיברים אחרים, כולל הריאות והכליות16. בנוסף, בשל רמות שונות של פיתוח ויעילות P450 ציטוכרום, יש וריאציה גדולה ברגישות בהתאם מינים וגיל26. למרות מגבלות אלה, השיטה של CCl מושרה4עלי המושרה עדיין משמש מודל מכרסם רב ערך.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

. למחברים אין מה לגלות

Acknowledgments

המחברים מכירים בהכרת תודה את ברטה דלגדו, המחלקה לפתולוגיה, המרכז הרפואי סורוקה, הפקולטה למדעי הבריאות, אוניברסיטת בן-גוריון בנגב, לעזרתה במעבדה ובניתוח היסטולוגיה.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
22 G catheter BD Neoflon TM Becton Dickinson Infusion Therapy AB
4% buffered formaldehyde solution Sigma - Aldrich lab materials technologies
BD Microtainer SST TM Tubes Becton Dickinson and Company
Carbone tetrachloride Sigma - Aldrich lab materials technologies CAS 56-23-5
Isofluran, USP 100% Piramamal Critical Care, Inc
Olympus AU2700 Chemistry-Immuno Analyzer Olympus (MN, USA) Analysis of blood samples was done by the fluorescence method
Olympus BX 40 microscope Olympus
RAT Feeding Needles ORCHID SCIENTIFICS
SYRINGE SET 1 and 2 ml MEDI -PLUS Shandong Zibo Shanchuan Medical Instruments Co., Ltd

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hoofnagle, J. H., Carithers, R. L., Shapiro, C., Ascher, N. Fulminant hepatic failure: Summary of a workshop. Hepatology. 21 (1), 240-252 (1995).
  2. Rakela, J., Lange, S. M., Ludwig, J., Baldus, W. P. Fulminant hepatitis: Mayo clinic experience with 34 cases. Mayo Clinic Proceedings. 60 (5), 289-292 (1985).
  3. Riordan, S. M., Williams, R. Treatment of hepatic encephalopathy. New England Journal of Medicine. 337, 473-479 (1997).
  4. Bernuau, J., Rueff, B., Benhamou, J. Fulminant and subfulminant liver failure: Definitions and causes. Seminars in Liver Disease. 6 (2), 97-106 (1986).
  5. Lidofsky, S. D. Liver transplantation for fulminant hepatic failure. Gastroenterology Clinics of North America. 22 (2), 257-269 (1993).
  6. Auzinger, G., Wendon, J. Intensive care management of acute liver failure. Current opinion in critical care. 14 (2), 179-188 (2008).
  7. Wu, Q., et al. Protection of regenerating liver after partial hepatectomy from carbon tetrachloride hepatotoxicity in rats: Roles of mitochondrial uncoupling protein 2 and ATP stores. Digestive Diseases and Sciences. 54 (9), 1918-1925 (2009).
  8. Tuñón, M. J., Alvarez, M., Culebras, J. M., González-Gallego, J. An overview of animal models for investigating the pathogenesis and therapeutic strategies in acute hepatic failure. World Journal of Gastroenterologyl. 15 (25), 3086-3098 (2009).
  9. van de Kerkhove, M. P., Hoekstra, R., van Gulik, T. M., Chamuleau, R. A. Large animal models of fulminant hepatic failure in artificial and bioartificial liver support research. Biomaterials. 25 (9), 1613-1625 (2004).
  10. Butterworth, R. F., et al. Experimental models of hepatic encephalopathy: ISHEN guidelines. Liver International. 29 (6), 783-788 (2009).
  11. Zhang, B., Gong, D., Mei, M. Protection of regenerating liver after partial hepatectomy from carbon tetrachloride hepatotoxicity in rats: Role of hepatic stimulator substance. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 14 (10), 1010-1017 (1999).
  12. Ugazio, G., Danni, O., Milillo, P., Burdino, E., Congiu, A. M. Mechanism of protection against carbon tetrachloride toxicity. I. prevention of lethal effects by partial surgical hepatectomy. Drug and Chemical Toxicology. 5 (2), 115-124 (1982).
  13. Taniguchi, M., Takeuchi, T., Nakatsuka, R., Watanabe, T., Sato, K. Molecular process in acute liver injury and regeneration induced by carbon tetrachloride. Life Science. 75 (13), 1539-1549 (2004).
  14. Gordis, E. Lipid metabolites of carbon tetrachloride. Journal of Clinical Investigation. 48 (1), 203-209 (1969).
  15. Albrecht, J. Cerebral RNA synthesis in experimental hepatogenic encephalopathy. Journal of Neuroscience Research. 6 (4), 553-558 (1981).
  16. Terblanche, J., Hickman, R. Animal models of fulminant hepatic failure. Digestive Diseases and Sciences. 36 (6), 770-774 (1991).
  17. Gruenbaum, B. F., et al. Cell-free DNA as a potential marker to predict carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats. Hepatology International. 7 (2), 721-727 (2013).
  18. Juricek, J., et al. Analytical evaluation of the clinical chemistry analyzer Olympus AU2700 plus. Biochemia Medica. 20 (3), 334-340 (2010).
  19. Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).
  20. Wang, T., et al. Protective effects of dehydrocavidine on carbon tetrachloride-induced acute hepatotoxicity in rats. Journal of Ethnopharmacology. 117 (2), 300-308 (2008).
  21. Ye, X., et al. Hepatoprotective effects of coptidis rhizoma aqueous extract on carbon tetrachloride-induced acute liver hepatotoxicity in rats. Journal of Ethnopharmacology. 124 (1), 130-136 (2009).
  22. Wills, P. J., Asha, V. V. Protective effect of lygodium flexuosum (L.) sw. extract against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats. Journal of Ethnopharmacology. 108 (3), 320-326 (2006).
  23. Senior, J. R. Monitoring for hepatotoxicity: What is the predictive value of liver "function" tests. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 85 (3), 331-334 (2009).
  24. Karmen, A. A note on the spectrometric assay of glutamic-oxalacetic transaminase in human blood serum. Journal of Clinical Investigation. 34 (1), 131-133 (1955).
  25. Hubner, G. Ultrastructural liver damage caused by direct action of carbon tetrachloride in vivo and in vitro. Virchows Archiv fur Pathologische Anatomie und Physiologie und fur Klinische Medizin. 339 (3), 187-197 (1965).
  26. Newsome, P. N., Plevris, J. N., Nelson, L. J., Hayes, P. C. Animal models of fulminant hepatic failure: A critical evaluation. Liver Transplantation. 6 (1), 21-31 (2000).

Tags

רפואה סוגיה 158 פציעה חמורה בכבד (ALI) פחמן טטרלורוזה (CCl4) פציעה בכבד נזק להכבד מודל חולדה רעלן
גרימת פגיעה חמורה בכבד חולדות באמצעות פחמן טטרכללוריד (CCl<sub>4</sub>) חשיפה באמצעות צינורית אורוקיבה
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Frank, D., Savir, S., Gruenbaum, B.… More

Frank, D., Savir, S., Gruenbaum, B. F., Melamed, I., Grinshpun, J., Kuts, R., Knyazer, B., Zlotnik, A., Vinokur, M., Boyko, M. Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride (CCl4) Exposure Through an Orogastric Tube. J. Vis. Exp. (158), e60695, doi:10.3791/60695 (2020).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter