Summary
يصف هذا البروتوكول طريقة شائعة وممكنة للحث على إصابة الكبد الحادة (ALI) عبر التعرض CCl4 من خلال أنبوب أموالمعدة. CCl4 التعرض يحفز ALI من خلال تشكيل أنواع الأكسجين التفاعلي خلال تحولها الحيوي في الكبد. وتستخدم هذه الطريقة لتحليل الفيزيولوجيا المرضية من ALI وفحص استراتيجيات الكبد المختلفة.
Abstract
إصابة الكبد الحادة (ALI) تلعب دورا حاسما في تطور الفشل الكبدي، الذي يتميز بضعف الكبد الشديد بما في ذلك مضاعفات مثل اعتلال الدماغ الكبدي وضعف تخليق البروتين. النماذج الحيوانية المناسبة حيوية لاختبار آلية والفيزيولوجيا المرضية لALI والتحقيق في استراتيجيات الكبد المختلفة. نظرا لقدرته على إجراء التحولات الكيميائية، ويستخدم على نطاق واسع رباعي كلوريد الكربون (CCl4)في الكبد للحث علي من خلال تشكيل أنواع الأكسجين التفاعلي. يمكن إجراء التعرض CCl4 داخل perperitoneally ، عن طريق الاستنشاق ، أو من خلال أنبوب الأنفي ة أو الأوروالمعدة. هنا ، نصف نموذج القوارض ، حيث يتم حث ALI من قبل التعرض CCl4 من خلال أنبوب أموالمعدة. هذه الطريقة غير مكلفة ، ويسهل تنفيذها ، ولها الحد الأدنى من خطر الخطر. النموذج قابل للاستنساخ للغاية ويمكن استخدامه على نطاق واسع لتحديد فعالية الاستراتيجيات المحتملة للوقاية الكبدية وتقييم علامات إصابة الكبد.
Introduction
ويتزايد تواتر الإهانات السامة للكبد، لا سيما بسبب تعاطي الكحول والمخدرات. ترتبط إصابة الكبد الحادة (ALI) بارتفاع معدلات الوفيات وتسببت في مخاوف سريرية1,2. تؤدي الإصابة السامة إلى مسارات تشير إلى الموت في الكبد ، مما يؤدي إلى موت الخلايا العضوية في الكبد ، أو النخر ، أو البيروبات. يلعب ALI دورًا حاسمًا في تطور الفشل الكبدي ، والذي يتميز بخلل حاد في الكبد بما في ذلك مضاعفات مثل اعتلال الدماغ الكبدي وضعف تخليق البروتين3،4. على الرغم من أن الأبحاث الحديثة قد زادت معرفتنا حول التغيرات الفسيولوجية والمرضية المصاحبة للفشل الكبدي ، إلا أنها لم تشرح تمامًا السمات الجزيئية المرضية التي تؤثر على آليات موت الخلايا. وعلاوة على ذلك، لا توجد أدوية متاحة حاليا لعكس التدهور التدريجي في المرضى ALI. حاليا، والعلاج الوحيد الفعال بشكل ملحوظ هو زرع الكبد5،6.
من أجل التحقيق في آلية والفيزيولوجيا المرضية من ALI واختبار استراتيجيات مختلفة للوقاية الكبدية، وتستخدم نماذج الحيوانات المختلفة للحث علي. يجب أن يحاكي النموذج الحيواني المفضل لـ ALI العملية المرضية للمرض عن طريق طريقة موثوقة ومعتمدة وغير مكلفة وسهلة التطبيق. ومن أمثلة النماذج التجريبية العوامل السامة للكبد، والعمليات الجراحية مثل استئصال الكبد الكلي أو الجزئي، وإزالة الأوعية الدموية بشكل كامل أو عابر، والإجراءات المعدية7،8،9. وتشمل المواد السامة للكبد المعروفة الجالاكتوزين والأسيتامينوفين والثيواسيتاميد والأزوكروميثان وCCl4. من هذه، يستخدم CCl4 على نطاق واسع على الرغم من أنه لم يتم حتى الآن وصف جيد10،11،12،13.
CCl4 هو مركب سائل عضوي عديم اللون مع رائحة حلوة ولا يكاد يكون قابلية للاشتعال في درجات حرارة أقل. التعرض لتركيزات عالية من CCl4 يمكن أن يسبب ضررا للجهاز العصبي المركزي، بما في ذلك تدهور الكبد والكلى. CCl4 يحفز ALI من خلال التحول الحيوي في الكبد، والذي يشكل أنواع الأكسجين التفاعلي. يحدث هذا عن طريق إنزيم السيتوكروم P450 2E1 ، مما يشكل المستقلب النشط ويؤدي إلى تلف الخلايا عن طريق ربط جزيء الماكرو ، وتعزيز بيروكسيد الدهون واضطراب التوازن الكالسيوم داخل الخلايا14. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن استخدام نموذج CCl4 لتحفيز الخلايا الفلكية على مستوى تخليق الحمض النووي الريبي15. وقد تم إعطاء هذا البذين الكبد بواسطة الطرق داخل perperitoneal، داخل البوابة، عن طريق الفم، وداخل المعدة16.
في هذا البروتوكول، ونحن نصف4بالتفصيل CCl 4-المستحثة ALI في الفئران عبر أنبوب orogastric. هذا الأسلوب يحفز قوية وقابلة للاستنساخ ALI التي يمكن استخدامها للتحقيق في الإمراض من ALI. يتم رصد تحديد شدة مرض الكبد عن طريق قياس الغلوتامات في الدم في الدم الترانساميناز (GPT) ، وإنزيمات الغلوتاماسيمية الغلوتازية الترانساميناز (GOT) ومجموع البيليروبين (السل) وكذلك التشخيص النسيجي النهائي بواسطة الهيماتوكسيلين والإيوسين (H & E) أنسجة الكبد الملطخة. التعرض لCCl4 من خلال الوصول داخل المعدة يسمح لطريقة عملية وغير مكلفة وطفيفة التوغل مع الحد الأدنى من خطر الخطر.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وأجريت التجارب وفقا لتوصيات إعلاني هلسنكي وطوكيو والمبادئ التوجيهية لاستخدام الحيوانات التجريبية للجماعة الأوروبية. وقد وافقت لجنة رعاية الحيوانات التابعة لجامعة بن غوريون في النقب على هذه التجارب.
ملاحظة: تم إنشاء نموذج CCl4 واستخدامه في دراسة سابقة17. يتم عرض الجدول الزمني للبروتوكول في الجدول 1.
1. إعداد الفئران للإجراء التجريبي
ملاحظة: اختر فئران سبراغ داولي الذكور البالغين التي تزن 300-350 غرام.
- الحصول على الموافقة على التجارب من اللجنة المؤسسية لرعاية الحيوان واستخدامه (IACUC).
- الحفاظ على الفئران في درجة حرارة الغرفة (22 درجة مئوية ± 1 درجة مئوية)، مع ضوء 12 ساعة و 12 ساعة دورات مظلمة. توفير تشاو الفئران والمياه الإعلانية libitum.
- إجراء جميع التجارب بين الساعة 6:00 صباحاً و12:00 ظهراً.
- قم بسلخ الفئران وتطهير الجلد بالكحول.
2. تحديد مستويات خط الأساس للمصل GOT و GPT والسل
- التخدير
- إعداد نظام إدارة الإيزوفدران المستمر للحث على التخدير. تأكد من أن نظام المبخّر مليء بالإيزوفدران.
- قم بأشيذ الجرذ مع 2% من الإيزوفيران تأكد من أن الفئران هو مُسطّح بالكامل من خلال مراقبة الحركة وانعكاس الدواسة استجابة للمحفزات الخارجية.
ملاحظة: استخدم 1-5% إيلوفوران لتحريض التخدير وصيانته.
- Cannulate الوريد الذيل مع قسطرة 22 G.
- جمع عينة دم 0.5 مل عند خط الأساس. تأكد من أن حجم الدم الذي تم استرداده لا يتجاوز إرشادات IACUC.
- إجراء تحليل كيميائي حيوي للدم بما في ذلك قياسات المصل GOT، GPT والسل، كما وصف سابقا18.
ملاحظة: أجريت فحوص لإنزيمات الكبد ومستوى السل في المختبر الكيميائي الحيوي التابع لمركز سوروكا الطبي. تم تحليل عينات الدم باستخدام طريقة الفلورسينس على محلل الكيمياء(جدول المواد).
3. تحريض إصابات الكبد الحادة في الفئران
تنبيه: التعرض لتركيزات عالية من CCl4، بما في ذلك الامتصاص من خلال البخار أو الجلد ، يمكن أن يكون له آثار سلبية على الجهاز العصبي المركزي ويسبب انحطاط الكبد والكلى. التعرض لفترات طويلة يمكن أن يسبب غيبوبة أو الموت.
- إعداد حل 50٪ من CCl4 (جدول المواد)عن طريق خلط CCl4 مع زيت الزيتون كسيارة بنسبة 1:1.
ملاحظة: يجب إعداد الحل وفقًا لإرشادات IACUC للمركبات غير الصيدلانية. - حث سمية الكبد في الجسم الحي من قبل إدارة CCl4 عبر أنبوب الأوروالمعدة.
- إدراج أنبوب 16 غ orogastric (3 بوصات عميقة) من خلال تجويف الفم من الفئران.
- تعريض الجرذ لجرعات مختلفة من CCl4 عن طريق حقن حقنة مع واحدة من الحلول المخففة التالية في معدة الفئران: 1 مل / كجم (ALI خفيفة) ، 2.5 مل / كجم (ALI معتدلة) ، أو 5 مل / كجم (ALI شديدة) من محلول 50٪. بالنسبة لمجموعة التحكم التي تعمل بشام، اعرض الجرذ لزيت الزيتون 5 مل/كغ فقط.
4. تحديد المصل GOT، GPT، ومستويات السل بعد 24 ساعة
- التخدير
- إعداد نظام إدارة الإيزوفدران المستمر للحث على التخدير. تأكد من أن نظام المبخّر مليء بالإيزوفدران.
- قم بأضاة الفئران بـ 2% من الإيزوفيران تأكد من أن الفئران هو مُسطّح بالكامل من خلال مراقبة الحركة وانعكاس الدواسة استجابة للمحفزات الخارجية.
- جمع عينات الدم في 24 ساعة من التعرض CCl4.
- إجراء تحليل كيميائي حيوي للدم بما في ذلك قياسات المصل GOT و GPT والسل.
5. جمع الكبد للفحص النسيجي
- القتل الرحيم للفأر عن طريق استبدال خليط الغاز المستوحى بنسبة 20٪ O2/80٪ CO2. تأكد من تسليمثاني أكسيد الكربون بمعدل محدد مسبقًا وفقًا للمبادئ التوجيهية لـ IACUC.
- ضمان الوفاة عن طريق التحقق من عدم وجود ضربات القلب وتأكيد من خلال طريقة ثانوية وفقا للمبادئ التوجيهية IACUC.
- ضع الجرذ على لوحة تشريح مع سطحه الظهري الذي يواجه أسفل والبطن التي تواجه. اقطع بطن الفأر
- مع مشرط، وقاطعة طول كامل من الجلد تنفيس من فتحة للشقإلى الذقن. فصل الجلد. اقطع جدار البطن بمشرط من الياب إلى الغضروف الإكسيفود، مما يعرض لزوجة البطن.
- باستخدام مقص وملقط، وعزل الكبد عن طريق تشريح ه من الأربطة والمرفقات. بدءا من هيلم الكبد، وإجراء بعناية استئصال الكبد عن طريق الإفراج عن جميع فصوص الكبد من المرفقات. تشريح وقطع جميع الأربطة والأوعية الدموية.
- نقل الكبد إلى طبق بيتري. إصلاح الكبد في محلول الفورمالديهايد المخزنة مؤقتا 4٪(جدول المواد)لمدة لا تقل عن 24 ساعة.
6- الفحص النسيجي
- إعداد العينة
- بعد التثبيت، قم بقص العينة إلى سلسلة شرائح سميكة بـ 5 ميكرومتر عن طريق المقاطع المجهرية.
- ضع الشرائح برفق على شرائح زجاجية مع فرشاة ناعمة، شريحة واحدة لكل شريحة.
- أداء H & E تلطيخ كما وصف سابقا19.
- فحص الشرائح تحت المجهر في التكبير 200x باستخدام عدسة موضوعية 20 ملم(جدول المواد).
ملاحظة: يجب تصنيف أقسام الكبد من قبل أخصائي أمراض متخصص أعمى إلى بروتوكول العلاج. درجة 0 يشير إلى عدم وجود تشوهات في الكبد, 1-2 يشير إلى إصابة الكبد خفيفة, 3-4 يشير إلى إصابة الكبد معتدلة, و 5-6 يشير إلى إصابة شديدة في الكبد20,,21,,22.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
مستويات السل، GOT، وGPT زيادة كبيرة 24 ساعة بعد حث ALI (أكثر في جرعات CCl4 أعلى) مقارنة مع الضوابط التي تعمل بصور (ع < 0.001)(الشكل 1). وكانت مستويات السل، وGOT، وGPT عند خط الأساس طبيعية ولم تكن مختلفة بشكل كبير عن الضوابط التي تعمل بصورية. في 24 ساعة، جميع المجموعات التدخلية الثلاث، 1 مل/كغ CCl4 (1، 1−2)، 2.5 مل/كغ CCl4 (3، 3−4)، و5 مل/كغ CCl4 (4، 4-5.75)، كان لديها درجة تصنيف النسيجأعلى بكثير من مجموعة التحكم التي تعمل بصور (0، 0−0) (p < 0.05، البيانات المقدمة على أنها متوسطة، 25-75%). تظهر صور H & E لعنصر تحكم يعمل بشام(الشكل 2A)والمجموعات المعرضة لجرعات CCl4 المختلفة(الشكل 2B−D)التغيرات الهسية 24 ساعة بعد التعرض CCl4. وقد تجلى اضطراب العمارة الكبدية من قبل CCl4 من خلال درجة عالية من إصابة الأنسجة مع تشوه الحاجز الليفي الكبير ، وتمديد الألياف ، وتراكم الكولاجين ، وفصل الفص الزائف في أقسام الكبد(الشكل 2).
الشكل 1: السل المصلي (A)، GOT (B)، ومستويات GPT (C) في عينات الدم 24 ساعة بعد التعرض لجرعات CCl4 مختلفة مقارنة بضوابط تعمل بصورية. شريط أزرق: التحكم; شريط أحمر: 24 ساعة بعد التعرض CCl4. يتم تحديد أهمية المقارنات بين CCl4-الفئران المكشوفة والجرذان غير المكشوفة باستخدام اختبار مان ويتني. واعتُبرت قيمة P قدرها <0.05 كبيرة. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: التغيرات النسيجية في أنسجة الكبد الملطخة بـ H & E بعد تسمم 24 ساعة CCl4 بجرعات مختلفة. (أ)التحكم الذي يتم تشغيله بصور، (B) 1 مل/كغ CCl4،(C)2.5 مل/كغ CCl4،و (D)5 مل/كغ CCl4. شريط المقياس = 50 ميكرومتر. تم التنبؤ بتوزيع النتائج النسيجية عن طريق الانحدار الخطي. يرجى الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| مجموعات | 0 ساعة | 24 ساعة |
| شام (15 جرذان) | GOT، GPT، مستوى خط الأساس للسل | GOT، GPT، مستوى السل |
| معتدل علي (15 الفئران) | ||
| متوسطة علي (15 الفئران) | CCl4 التعرض لمجموعات ALI وزيت الزيتون لمجموعة صورية | الفحص النسيجي |
| علي شديد (18 فئران) |
الجدول 1: عرض زمني للبروتوكول. وتشمل مجموعات مختلفة من الفئران في أوقات مختلفة مجموعة مراقبة تعمل بشام، ALI خفيفة (التعرض ل1 مل / كغ CCl4)،معتدلة ALI (التعرض ل2.5 مل / كغ CCl4)،وALI شديدة (التعرض ل5 مل / كجم CCl4). في الوقت 24 ساعة، تم قياس مستويات مصل GOT وGPT والسل، وتم إجراء الفحص النسيجي لجميع المجموعات الأربع.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
في هذا البروتوكول، يستخدم CCl4 كسم كبد يُحث على الحث على الـ ALI في الفئران. يتميز ALI بفقدان parenchyma الكبدي وdysregulation اللاحق لوظائف الكبد الأيضية والاصطناعية. الأدوية والفيروسات والسموم وأمراض المناعة الذاتية وأمراض التمثيل الغذائي واضطرابات الأوعية الدموية كلها تحفز موت الكبد ، والاستجابة الالتهابية اللاحقة تساهم في حدوث الإمراض في ALI.
الإهانة الأولية للكبد يؤدي إلى إنتاج السيتوكين، والإفراج عن chemokine، والتسلل اللاحق للخلايا الالتهابية في الكبد. ثلاثة من المؤشرات الحيوية التي تم اختبارها بشكل شائع لتقييم ALI هي مستويات GPT و GOT والسل. GPT و GOT هي إنزيمات تقاس بمستوى النشاط بينما يقيس مستوى السل وظائف الكبد بتركيز المصل. عندما مرتفعة, مستويات نشاط إنزيم المصل يدل على إصابة خلايا الكبد أو cholangiocytes23. تم الإبلاغ عن طريقة قياس الطيف السريع لأول مرة في عمل آرثر كارمن في عام 195524، مما سمح للتطبيق السريري على نطاق واسع لقياس إنزيم المصل. ومنذ ذلك الحين، تم أيضاً تطبيق قياسات GOT و GPT للكشف عن إصابة الكبد. يتم استخدام GPT بشكل أكثر تكرارًا ، وعادةً ما يكشف اختبار GPT المتزامن عن نتائج زائدة عن الحاجة. ويمكن استخدام الزيادة في مستويات نشاط GOT و GPT بين معدلات الإفراج ومعدلات التطهير من الخلايا المصابة لقياس معدل إصابة الخلايا تقريبًا. عندما تسبب خلايا الكبد المصابة فشل الكبد في أنشطته ابية، مثل معالجة وإزالة البيليروبين كما الصفراء، وهذا يشير إلى أن ALI هو أكثر شدة.
هناك عدة خطوات في البروتوكول حاسمة وتستحق دراسة متأنية. تتطلب معظم البروتوكولات اختبار العلامات الحيوية للمصل قبل وبعد التعرض لعامل التحقيق ، حيث أن الارتفاعات في مستويات تركيز إنزيم المصل شائعة. ومع ذلك ، بسبب التقلبات في توقيت ALT مرتفعة ، ينبغي إجراء العديد من الاختبارات بشكل دوري للكشف عن أي ارتفاع. في هذا البروتوكول، اخترنا اختبار مستويات GOT و GPT والسل عند خط الأساس و 24 ساعة بعد التعرض للسموم. وفقا لدراسات حديثة، ومستويات هذه المؤشرات الحيوية ترتبط بشكل جيد مع شدة ALI خلال هذه الفترة الزمنية17. كما هو مبين في الشكل 1، مستويات الدم GOT ، GPT ، والسل مرتفعة في جميع العينات 24 ساعة بعد تحفيز ALI. وهذا يشير إلى أن النموذج قد حدد النتائج كمياً في فترة زمنية قصيرة جداً منذ التعرض لـ CCl4. وينبغي للمرء أن يأخذ في الاعتبار أن في ALI شديدة يفقد الكبد قدرته على توليف GOT وGPT. لذلك ، في هذه الحالات قد تفتقر هذه الإنزيمات إلى قيمتها التنبؤية كما هو موضح في الأدب.
تتميز النتائج النسيجية للفئران المعرضة لـ CCl4 بتضخم الخلايا ونخر النخر المركزي ووجود أجسام عضو المجلس25. في هذا النموذج كان هناك ضرر واسع النطاق تبين أن تكون متناسبة مع جرعة CCl4 تدار.
هذه الطريقة من تحفيز ALI عبر التعرض CCl4 orogastric له مزايا عديدة. إنها بسيطة وغير مكلفة ، مع الحد الأدنى من المخاطر. يوفر البروتوكول نتائج هامة في فترة زمنية قصيرة جداً. النموذج قابل للاستنساخ للغاية ويمكن استخدامه بشكل شائع لتحديد فعالية الاستراتيجيات المحتملة للوقاية الكبدية وتقييم علامات إصابة الكبد.
من المهم ملاحظة أن CCl4 يؤثر بشكل رئيسي على المنطقة المركزية للكبد ، والتي لا تتطابق مع النخر الهائل الذي ينظر إليه عادة في فشل الكبد البشري. وعلاوة على ذلك، لا يتم استقلاب CCl4 تماما في الكبد، وبعض من CCl4 nonmetabolized يمكن أن تلحق الضرر الأجهزة الأخرى، بما في ذلك الرئتين والكلى16. بالإضافة إلى ذلك ، نظرًا لمستويات مختلفة من تطور وفعالية السيتوكروم P450 ، هناك اختلاف كبير في الحساسية اعتمادًا على الأنواع والعمر26. على الرغم من هذه القيود ، فإن طريقة CCl4orogastric - المستحثة ALI لا تزال بمثابة نموذج قارض قيم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.
Acknowledgments
ويشكر المؤلفان بامتنان بيرثا دلغادو، قسم علم الأمراض، مركز سوروكا الطبي، كلية العلوم الصحية، جامعة بن غوريون في النقب، لمساعدتها في المختبر وكذلك في تحليل علم الأنسجة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 22 G catheter BD Neoflon TM | Becton Dickinson Infusion Therapy AB | ||
| 4% buffered formaldehyde solution | Sigma - Aldrich lab materials technologies | ||
| BD Microtainer SST TM Tubes | Becton Dickinson and Company | ||
| Carbone tetrachloride | Sigma - Aldrich lab materials technologies | CAS 56-23-5 | |
| Isofluran, USP 100% | Piramamal Critical Care, Inc | ||
| Olympus AU2700 Chemistry-Immuno Analyzer | Olympus (MN, USA) | Analysis of blood samples was done by the fluorescence method | |
| Olympus BX 40 microscope | Olympus | ||
| RAT Feeding Needles | ORCHID SCIENTIFICS | ||
| SYRINGE SET 1 and 2 ml MEDI -PLUS | Shandong Zibo Shanchuan Medical Instruments Co., Ltd |
References
- Hoofnagle, J. H., Carithers, R. L., Shapiro, C., Ascher, N. Fulminant hepatic failure: Summary of a workshop. Hepatology. 21 (1), 240-252 (1995).
- Rakela, J., Lange, S. M., Ludwig, J., Baldus, W. P. Fulminant hepatitis: Mayo clinic experience with 34 cases. Mayo Clinic Proceedings. 60 (5), 289-292 (1985).
- Riordan, S. M., Williams, R. Treatment of hepatic encephalopathy. New England Journal of Medicine. 337, 473-479 (1997).
- Bernuau, J., Rueff, B., Benhamou, J. Fulminant and subfulminant liver failure: Definitions and causes. Seminars in Liver Disease. 6 (2), 97-106 (1986).
- Lidofsky, S. D. Liver transplantation for fulminant hepatic failure. Gastroenterology Clinics of North America. 22 (2), 257-269 (1993).
- Auzinger, G., Wendon, J. Intensive care management of acute liver failure. Current opinion in critical care. 14 (2), 179-188 (2008).
- Wu, Q., et al. Protection of regenerating liver after partial hepatectomy from carbon tetrachloride hepatotoxicity in rats: Roles of mitochondrial uncoupling protein 2 and ATP stores. Digestive Diseases and Sciences. 54 (9), 1918-1925 (2009).
- Tuñón, M. J., Alvarez, M., Culebras, J. M., González-Gallego, J. An overview of animal models for investigating the pathogenesis and therapeutic strategies in acute hepatic failure. World Journal of Gastroenterologyl. 15 (25), 3086-3098 (2009).
- van de Kerkhove, M. P., Hoekstra, R., van Gulik, T. M., Chamuleau, R. A. Large animal models of fulminant hepatic failure in artificial and bioartificial liver support research. Biomaterials. 25 (9), 1613-1625 (2004).
- Butterworth, R. F., et al. Experimental models of hepatic encephalopathy: ISHEN guidelines. Liver International. 29 (6), 783-788 (2009).
- Zhang, B., Gong, D., Mei, M. Protection of regenerating liver after partial hepatectomy from carbon tetrachloride hepatotoxicity in rats: Role of hepatic stimulator substance. Journal of Gastroenterology and Hepatology. 14 (10), 1010-1017 (1999).
- Ugazio, G., Danni, O., Milillo, P., Burdino, E., Congiu, A. M. Mechanism of protection against carbon tetrachloride toxicity. I. prevention of lethal effects by partial surgical hepatectomy. Drug and Chemical Toxicology. 5 (2), 115-124 (1982).
- Taniguchi, M., Takeuchi, T., Nakatsuka, R., Watanabe, T., Sato, K. Molecular process in acute liver injury and regeneration induced by carbon tetrachloride. Life Science. 75 (13), 1539-1549 (2004).
- Gordis, E. Lipid metabolites of carbon tetrachloride. Journal of Clinical Investigation. 48 (1), 203-209 (1969).
- Albrecht, J. Cerebral RNA synthesis in experimental hepatogenic encephalopathy. Journal of Neuroscience Research. 6 (4), 553-558 (1981).
- Terblanche, J., Hickman, R. Animal models of fulminant hepatic failure. Digestive Diseases and Sciences. 36 (6), 770-774 (1991).
- Gruenbaum, B. F., et al. Cell-free DNA as a potential marker to predict carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats. Hepatology International. 7 (2), 721-727 (2013).
- Juricek, J., et al. Analytical evaluation of the clinical chemistry analyzer Olympus AU2700 plus. Biochemia Medica. 20 (3), 334-340 (2010).
- Feldman, A. T., Wolfe, D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods in Molecular Biology. 1180, 31-43 (2014).
- Wang, T., et al. Protective effects of dehydrocavidine on carbon tetrachloride-induced acute hepatotoxicity in rats. Journal of Ethnopharmacology. 117 (2), 300-308 (2008).
- Ye, X., et al. Hepatoprotective effects of coptidis rhizoma aqueous extract on carbon tetrachloride-induced acute liver hepatotoxicity in rats. Journal of Ethnopharmacology. 124 (1), 130-136 (2009).
- Wills, P. J., Asha, V. V. Protective effect of lygodium flexuosum (L.) sw. extract against carbon tetrachloride-induced acute liver injury in rats. Journal of Ethnopharmacology. 108 (3), 320-326 (2006).
- Senior, J. R. Monitoring for hepatotoxicity: What is the predictive value of liver "function" tests. Clinical Pharmacology & Therapeutics. 85 (3), 331-334 (2009).
- Karmen, A. A note on the spectrometric assay of glutamic-oxalacetic transaminase in human blood serum. Journal of Clinical Investigation. 34 (1), 131-133 (1955).
- Hubner, G. Ultrastructural liver damage caused by direct action of carbon tetrachloride in vivo and in vitro. Virchows Archiv fur Pathologische Anatomie und Physiologie und fur Klinische Medizin. 339 (3), 187-197 (1965).
- Newsome, P. N., Plevris, J. N., Nelson, L. J., Hayes, P. C. Animal models of fulminant hepatic failure: A critical evaluation. Liver Transplantation. 6 (1), 21-31 (2000).
