Summary
Die Prävalenz von Diabetes und Adipositas nimmt weltweit kontinuierlich zu. Die Mechanismen zwischen Diabetes, Adipositas und der damit verbundenen Sterblichkeit und Komorbiditäten müssen weiter untersucht werden. Hier stellen wir ein Protokoll zur Hülsengastrektomie (SG) bei Tieren als unkompliziertes präklinisches Modell der bariatrischen Chirurgie vor.
Abstract
Die Zahl der Übergewichtigen und Fettleibigen nimmt sowohl in der Erwachsenen- als auch in der Jugendbevölkerung kontinuierlich zu. Dies fällt mit dem erhöhten universellen Phänomen von Typ-2-Diabetes (T2D) und anderen Stoffwechselproblemen zusammen. Bariatrische Chirurgie, wie SG, ist derzeit eine der effektivsten und am häufigsten verwendeten Langzeitbehandlung für Adipositas und T2D, aber der Zusammenhang zwischen ihnen ist noch nicht vollständig erforscht. Die Mechanismen, die den Ergebnissen nach der bariatrischen Operation beim Menschen zugrunde liegen, können auf der Grundlage präklinischer Tierstudien untersucht werden. Die SG reduziert Körpergewicht, Glukosespiegel und viele metabolische Parameter, und ist einfach mit einer geringen Inzidenz von Komplikationen durchzuführen. Ziel dieser Arbeit ist es, Forschern eine einfache Methode und ein unkompliziertes präklinisches Modell der bariatrischen Chirurgie bei Tieren zur Verfügung zu stellen.
Introduction
Die Prävalenz von Adipositas hat sich seit 1975 weltweit fast verdreifacht. Im Jahr 2016 waren mehr als 1,9 Milliarden Erwachsene über 18 Jahre übergewichtig und über 650 Millionen Erwachsene fettleibig. Die Prävalenz von T2D in der erwachsenen Bevölkerung hat sich ebenfalls von 4,7 % auf 8,5 % verdoppelt, wobei die Zahl zwischen 1980 und 2014 weltweit von 108 Millionen auf 422 Millionen Erwachsene gestiegen ist1. Die meisten bariatrischen Operationen führen zu signifikanten Gewichtsverlust, eine Verringerung des Körperfetts, und Verbesserung der Glukosetoleranz, Insulinresistenz und Diabetes-Kontrolle2. Neben Gewichtsverlust und Remission von T2D, bariatrische Chirurgie produziert weitere gesundheitliche Vorteile wie Bluthochdruck Kontrolle und eine geringere Inzidenz von bestimmten Arten von Adipositas im Zusammenhang mit Krebs Entwicklung und Progression3. Die bariatrische Chirurgie induziert auch eine dauerhafte vollständige, partielle Remission von T2D und verringert das Risiko für eine zehnjährige schwere koronare Herzkrankheit (CHD) und ein gewisses Maß an zerebrovaskulärem Risiko. Die zugrunde liegenden Mechanismen sind jedoch nicht vollständig verstanden4.
Es gibt mehrere Verfahren für bariatrische/metabolische Chirurgie. Sowohl restriktive als auch gastrointestinale Bypass-Operationen bieten positive Auswirkungen auf den Stoffwechsel5. Von den bariatrischen chirurgischen Modellen haben SG und modifizierter Roux-en-Y Magenbypass einen höheren Erfolg und niedrigere Sterblichkeitsraten und zeigen zuverlässige restriktive und gastrointestinale Bypass-Chirurgiemodelle bei Mäusen6. Obwohl die Magen-Darm-Bypass-Operation bietet mehr Gewichtsverlust und eine signifikante Verbesserung der Glukosetoleranz und Lebersteatose als das restriktive Verfahren auf lange Sicht, die SG produziert immer noch eine gute Kontrolle des Körpergewichts und Glukosespiegel und ist leicht mit einer geringen Inzidenz von Komplikationen durchzuführen6. Der Anteil der SG stieg von 30% auf 54% und Roux-en-Y Magenbypass-Chirurgie sank von 52% auf 32% von 2008 bis 20147. Derzeit ist laparoskopische SG das am häufigsten durchgeführte bariatrische Verfahren auf nationaler Ebene innerhalb akademischer Zentren in den Vereinigten Staaten8. Obwohl es viele veröffentlichte Berichte über die pathophysiologischen Prozesse zwischen bariatrischer Chirurgie, Diabetes und Adipositas gibt, brauchen wir weitere Tierversuche, um unbekannte Mechanismen weiter zu erforschen.
Dieses Protokoll zielt darauf ab, eine tiertierische Methode zu entwickeln, um die Mechanismen zu untersuchen, die den Ergebnissen nach bariatrischen Operationen beim Menschen zugrunde liegen. Die aktuelle translationale Studie kann Erkenntnisse über den Mechanismus der Adipositas und T2D-Behandlung von der SG liefern.
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Protocol
Alle Verfahren für die Tierverwendung wurden vom National Yang-Ming University Institutional Animal Care and Use Committee genehmigt und entsprachen dem "Guide for the Care and Use of Laboratory Animals". 8. Auflage, 2011". Das anästhetische Verfahren wurde gemäß der Richtlinie für die Schmerzkontrolle, Anästhesie, präoperative und postoperative Versorgung der Versuchstiere von der National Yang Ming University, ICAUC-016, 2015,1. Auflage durchgeführt.
1. Tierzubereitung
- Erhalten Sie 20 8 Wochen alte wilde Typ C57BL/6 männliche Mäuse aus dem National Laboratory Animal Center (NLAC), die etwa 16-18 Gramm wiegen. Ordnen Sie diese Mäuse zufällig der SG oder der Schein-Operationsgruppe mit jeweils 10 Mäusen zu.
- Starten Sie die Mäuse auf Chow oder eine fettreiche Ernährung (siehe Ergänzungsdatei) vor der bariatrischen oder Scheinoperationen9. Produzieren Sie ernährungsbedingte Fettleibigkeit mit mindestens 2 präoperativen Wochen der HFD.
- Beherbergen Sie die Mäuse im National Yang-Ming University Laboratory Animal Center unter einem helldunklen Zyklus von 12:12 mit Lichtbeginn um 07:00 A.M. und lassen Sie die kostenlose Fütterung an Standard-Nagetier Chow und Wasser.
- Beschränken Sie alle Tiere von der Nahrung, aber erlauben Sie freien Zugang zu Wasser in der Nacht vor der Operation.
2. Allgemeine präoperative Präparation
- Fasten Sie die Mäuse für mindestens 6 Stunden vor der Operation. Induzieren Anästhesie in einer Induktionskammer mit 5% Isofluran und Sauerstoff (beide 3-4 L/min).
- Überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie, um sicherzustellen, dass die Pinch-Stimulation (stumpf gekrümmte gezackte glatte Mikrozange) der Hinterpfote, der Vorderpfote und des Ohrs keinen motorischen Reflex hervorruft. Verabreichen Sie Antibiotika (25 mg/kg Cefazolin) durch subkutane Injektionen vor der Operation.
- Weisen Sie eine bestimmte Arbeitszone für chirurgische Eingriffe zu. Reinigen Sie den Operationsbereich und besprühen Sie den OPERATIONStisch vor einer Operation mit 75% Alkohollösung.
- Die Maus in den Nasenkegel legen und anästhesien mit 2% Isofluran (2 L/min) und Sauerstoff (4 L/min) erhalten.
- Für Hülsengastrektomie und Scheinoperation, nach Bestätigung der entsprechenden Tiefe der Anästhesie durch Zehenstimulation, wenden Sie das 0,2% Carbomer Augengel auf die Augen der Maus an, um trockene Augen zu verhindern.
- Verwenden Sie einen elektrischen Rasierer, um Haare vom Bauch bis zum Brustbein zu rasieren. Entfernen und reinigen Sie das restliche Haar mit einer Enthaarungscreme. Platzieren und fixieren Sie die Maus auf den OPERATIONStisch in einer Supine-Position.
- Desinfizieren Sie die Bauchwand der Maus mit Povidon-Jod-Lösungen abwechselnd mit 75% Alkohol für 3 Anwendungen.
3. Sleeve-Gasttrektomie und Schein-Verfahren
- Mediane Laparotomie
- Verwenden Sie eine Mikroschere, um einen 1-1,5 cm langen Mittellinienschnitt am Oberbauch zu machen.
- Magen- und Darmexternalisierung
- Führen Sie das SG-Verfahren mit Hilfe eines Lupensizierendes Mikroskops oder einer Lupe aus, um unvorhersehbare Blutungen und hypovolämische Schocks zu verhindern.
- Verwenden Sie zwei gekrümmte glatte gezackte Mikrozangen, um den Magen sanft zu bewegen und vollständig externisieren.
- Teilen Sie das gastrosplenische Band, das den linken Magen mit der Milz verbindet, vorsichtig mit einer Baumwollsonde und Elektrokauterie nach Bedarf, wodurch der Magenfundus von der umgebenden Milz und anderen inneren Organen seziert wird.
4. Magenisolierung und Clip
HINWEIS: Die SG für Mäuse wurde mit der neuen Clip-Applier-Technik durchgeführt, wie zuvor veröffentlicht10.
- Dehnen Sie den Fundus und pylorus des Magens sanft und seitlich mit Zangen, identifizieren Sie die Mittellinie (Abbildung 1 und Abbildung 2), und tragen Sie vorsichtig chirurgische Clips auf die Hälfte der medialen Seite der Magenmittellinie von der gastroösophagealen Kreuzung minderwertig und der unteren Pol überlegen auf. Klemmen und schließen Sie etwa 75-80% des Magens aus, wodurch die gesamte seitenärmelige Hülse des Magens entsteht(Abbildung 1 und Abbildung 2).
- Bewegen Sie den Darm auf die nackte Haut auf der Seite und bedecken Sie es mit einer warm-saline befeuchteten Gaze und führen Sie intraperitoneale Hydratation nach Bedarf, um Dehydrierung und Unterkühlung zu verhindern.
- Resektieren Sie den seitlich abgeschnittenen Magen, entfernen Sie die ausgeschlossene Hülse des Magens mit Mikroschere und sterilisieren Sie dann den Schnittrand des Magens mit Povidon-Jod-Lösung.
- Übernähen Sie die Clip-Linie mit einer 5-0 Monofilament-Nicht-Absorber-Naht, um keine Leckage zu gewährleisten. Knoten Sie die Enden der Naht und verankern Sie an den Clips an beiden Enden.
- Geben Sie Magen und Darm in die richtige Position in der Bauchhöhle zurück und schließen Sie den Bauch mit einem laufenden 5-0 Monofilament nicht resorbierbaren kontinuierlichen und diskontinuierlichen Naht an der Faszie und Bauchwand.
- Verabreichen Sie Analgetika mit Ketoprofen (2-5 mg/kg) und Antibiotika mit Cefazolin (25 mg/kg) intraperitoneal nach dem gesamten Verfahren.
5. Scheinverfahren der SG
- Führen Sie ein ähnliches Verfahren wie zuvor mit einer Mittellinien-Laparotomie beschrieben, und externalisieren Sie den Darm und Magen mit 37 °C nass warme Saline Gaze Abdeckung für 5 min.
- Bringen Sie Magen und Darm an die richtigen Stellen dieser inneren Organe zurück.
- Schließen Sie die Bauchwand sorgfältig, wie zuvor beschrieben, mit 2 Schichten kontinuierlichen und diskontinuierlichen Verschlusses an Faszien und Haut mit langsamen oder nicht resorbierbaren Monofilamentnähten. Verabreichen Sie Analgetika mit Ketoprofen (2-5 mg/kg) und Antibiotika mit Cefazolin (25 mg/kg) intraperitoneal nach dem gesamten Verfahren.
6. Allgemeine postoperative Versorgung
- Stoppen Sie Isofluran und fahren Sie mit einem Raumluftstrom von 3-5 L/min fort, bis die Maus vollständig wach ist.
- Beobachten Sie die Maus, während sie wieder beweglichkeit ist und beginnt, um den Käfig zu gehen.
- Legen Sie die Maus 5 Tage lang in einen unabhängigen Inkubator von 30 °C. Stellen Sie sicher, dass es nur eine Maus pro Käfig gibt, um zu verhindern, dass sich die Mäuse gegenseitig verletzen.
- Geben Sie 3 Tage nach der Operation freien Zugang zu einer Gel-Diät (fettreiche Gel-Diät: 10% Schmalz, 10% flüssiger Zucker, 57% Wasser) zurück und führen Sie die zuvor zugewiesene Diät 3 Tage nach der Operation wieder ein.
- Subkutan oder intraperitoneal Ketoprofen (2-5 mg/kg) und Cefazolin (25 mg/kg) für 1 Tag nach der Operation injizieren.
- Bewerten Sie das Körpergewicht der Maus wöchentlich während des gesamten Studienzeitraums. Ketoprofen (2-5 mg/kg) durch intraperitoneale Injektion zur Schmerzkontrolle einmal täglich nach Bedarf zur Schmerzkontrolle bereitstellen, wenn das Tier nach der Operation in Not ist.
HINWEIS: Hier lag die Überlebensrate von SG nach der Lernzeit bei 90%.
7. Metabolische Parameterbewertung
- Schnelle Mäuse für 6 h, und nehmen Sie Basisblutproben (0 min). Erhalten Sie alle Blutproben von der Spitze der Schwanzvene frei bewegender Mäuse11,12.
- Liefern Sie 1 mg/g 50% Dextrose durch intraperitoneale Injektion für den Glukosetoleranztest.
- Messen Sie den Blutzucker aus den Spitzen der Schwanzvenen frei beweglicher Mäuse bei 0, 5, 15, 30, 60 und 120 min nach Derglukoseverabreichung an doppelten Proben mit Glukometern und Teststreifen.
- Die Vollblutprobe (n = 10 pro Gruppe) bei Raumtemperatur mit Gerinnung 30 Minuten aufbewahren.
- Zentrifuge die Blutprobe bei 3.000 x g für 10 Minuten bei 4 °C zentrieren.
- Das Plasma in separate Röhrchen überführen, ohne blutgerinnsel zu stören und bei -80 °C aufzubewahren.
- Untersuchen Sie die Plasmaproben am Ende der Studie mit kommerziellen Mäusen ELISA-Kits für Hämoglobin A1c (HBA1c), Glukose, Cholesterin, und Insulinspiegel nach den Richtlinien des Herstellers.
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Representative Results
Die Ergebnisse des Vorgangs sind in Abbildung 3 und Abbildung 4dargestellt. Die Überlebensrate der Studie betrug 90%. Eine Maus starb in der Scheingruppe aufgrund von Schwächen und eine weitere Maus starb in der SG-Gruppe am dritten Tag nach der Operation aus unbekannten Gründen. Die Ergebnisse, die bei der Gewichtsabnahme(Abbildung 3A) nach der Operation (in Woche 3) an HFD-gefütterten Mäusen erzielt wurden, waren denen beim Menschen sehr ähnlich, mit einem endgültigen Körpergewichtsverlust von etwa 15-20%13. Die Studie zeigte auch, dass der Cholesterinspiegel (Abbildung 3B) nach einer SG-Operation bei den HFD-gefütterten Mäusen signifikant sank.
Eine bessere Insulinempfindlichkeit und Glukosetoleranz wurden kurz nach der Operation durch einen intraperitonealen Glukosetoleranztest (IPGTT) beobachtet. In der aktuellen Studie haben wir gezeigt, dass die HFD-induzierte Fettleibigkeit Insulinresistenz und Glukoseunverträglichkeit bei wild lebenden C57BL/6-Mäusen hervorruft und durch SG korrigiert werden kann. Nach SG, die Insulinresistenz, Glukose, und Lipidspiegel alle in dieser Studie verbessert.
Abbildung 1: Chirurgische Eingriffe von SG.
(A) Der in diesem Versuchsmodell verwendete 5-mm-Operationsclip. (B) Überprüfen Sie die Tiefe der Anästhesie mit Pinch Stimulation. (C,D) Tragen Sie den Clip auf die Hälfte der medialen Seite der Magenmittellinie von gastroösophagealen Knoten minderwertig und unteren Pol überlegen. (E) Sterilisieren und versäen Sie die Schnittkante des Magens, um keine Leckage zu gewährleisten. (F-H) Hydratisieren Sie die Mäuse mit warmer Herz, bringen Sie Magen und Darm zurück an die richtige Stelle in der Bauchhöhle. Schließen Sie die Bauchhöhle vorsichtig. Erholen Sie sich vom Anästhesisierungsstatus in der Induktionskammer und kehren Sie in den Käfig zurück, wenn der Zustand vollständig wiederhergestellt und stabilisiert wurde. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 2: Stellen der chirurgischen Clip-Nutzung für den Magen. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 3: Die Wirkung von SG auf (A) wöchentliche Körpergewichtsänderungen und (B) Cholesterinspiegel.
Die Daten werden als Mittelwert ± SD dargestellt. *P < 0,05; **P < 0.001. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
Abbildung 4: Wirkung von SG auf (A) IPGTT (B) Hba1c und (C) HOMA-IR am Ende der Studie.
(n = 5 VSG; n = 7 Schein); Die Daten werden als Mittelwert ± SD dargestellt. *P < 0,05; **P < 0.001. Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.
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Discussion
Die meisten prospektiven Kohortenstudien haben bestätigt, dass die Erhöhung des Body-Mass-Index mit der Erhöhung der Sterblichkeit zusammenhängt. Adipositas ist mit einem höheren Risiko für Diabetes, Herz-Kreislauf-Erkrankungen (CVD) und Tod bei beiden Geschlechtern verbunden. Die spezifischen pathologischen Prozesse haben einen Zusammenhang zwischen Diabetes, Adipositas und Sterblichkeit14hergestellt. Die systematischen Überprüfungen zeigen die Vorteile der bariatrischen Chirurgie bei der Verringerung der Risikofaktoren für CVD mit Evidenz für ventrikuläre Hypertrophie Regression und verbesserte diastolische Funktion sowie15. Bariatrische/metabolische Chirurgie kann traditionelle CVD-Risikofaktoren bei adipösen Diabetikern verbessern, und das 10-jährige CHD- und tödliche CHD-Risiko haben sich nach verschiedenen bariatrischen/metabolischen chirurgischen Eingriffen bei adipösen Patienten mit T2D4um bis zu 50 % verringert.
Bariatrische Chirurgie ist die effektivste langfristige therapeutische Strategie für Adipositas. Die signifikanten Verbesserungen der metabolischen Parameter aus der bariatrischen Chirurgie wie Lipidprofil, entzündliche Biomarker, Blutdruck, und Herzinsuffizienz werden auch besonders bei der unerwarteten Typ-2-Diabetikerkontrolle festgestellt. SG hat die Entzündung und Entwicklung von Fettgewebe reduziert und modifiziert und möglicherweise das Arteriosklerose-Risiko reduziert.
Veränderungen der Magen-Darm-Hormone könnten eine Rolle bei der langfristigen Gewichtskontrolle spielen16,17. Die SG hat auch die Kalorienzufuhr reduziert und die glykämische Kontrolle normalisiert18. Die Magenbypass-Chirurgie im Zusammenhang mit glykämischen Toleranzeffekte beziehen sich auf die Vorgut-Hormoneffekte, die durch Umgehung des proximalen Darms aus den aktuellen Theorien19hervorgerufen werden. Jedoch, die SG hat die vergleichbare antidiabetische Wirkung gezeigt, was darauf hindeutet, dass weitere nicht-umgehung sanieren verwandte unbekannte Mechanismen auch über die Wirkung von Glucagon-ähnliche Peptid 1 Rezeptor16,20. Lopez et al. haben gezeigt, dass SG gewichtsverlust fördert, verbessert das Cholesterin und Glukoseprofil, Leptin-Unempfindlichkeit, und verringert Insulinresistenz, die unabhängig von den Ghrelin-Spiegel Veränderungen bei übergewichtigen Zucker Ratten21ist. All diese oben genannten Fragen benötigen weitere Tierstudien, um den Zusammenhang mit Diabetes, Adipositas und Krankheiten zu klären. SG ist ein bariatrisches Verfahren, das keine Darmumgehung beinhaltet, die in den letzten Jahrzehnten in den USA und weltweit aufgrund niedriger Langzeitkomplikationen immer beliebter geworden ist22.
Der bariatrische chirurgische Eingriff ist technisch schwierig und zeitaufwändig mit hoher chirurgischer Mortalität und Langzeitkomplikation und ist der wichtigste kritische Schritt für kleine Tierversuche. Die SG ist derzeit die am häufigsten verwendete Operation zur Gewichtsreduktion in den USA, weil es ein einfaches Verfahren mit hoher Wirksamkeit, geringer Komorbidität und niedriger Sterblichkeit ist. Dieses Protokoll hat ähnliche Vorteile, die Gewichtsreduktion und metabolische Operationen, die routinemäßig beim Menschen praktiziert werden, nachahmen. Im Allgemeinen sind chirurgische Techniken bei Mäusen aufgrund der geringen Körpergröße recht schwierig, und ein Sezierendes Mikroskop wird häufig mit hoher chirurgischer Sterblichkeit benötigt.
Schlager et al. haben ein Mausmodell von SG mit einer chirurgischen Clip-Applikation anstelle eines handgenähten Verschlusses für den Magen entwickelt. Dieses Tiermodell hat ähnliche Effekte der Verringerung des Körpergewichts und der Glukosekontrolle gezeigt, aber es hat nicht gezeigt, signifikante Pankreas-Islet-Zellproliferation10. Dieser Effekt auf den Stoffwechsel dieses Mäusemodells ähnelt der menschlichen bariatrischen/metabolischen Chirurgie mit einer sehr niedrigen operativen Sterblichkeit.
Diese aktuelle Studie zeigt eine konstante Gewichtsreduktion nach der SG in den HFD gefütterten Mäusen mit verbessertem glykierten Hämoglobin, IPGTT, HOMA-IR (homöostatische Modellbewertung für Insulinresistenz) und Cholesterinspiegel. Dieser chirurgische Eingriff ist sicher und einfach bei Mäusen durchzuführen.
Die chirurgische Überlebensrate dieses Protokolls in unserem Labor beträgt nach einer Lernzeit etwa 90%, und der Eingriff dauert weniger als 15 Minuten. Dieses Protokoll kann einen erheblichen Wert in zukünftigen kleinen Nagetierstudien mit chirurgischer Machbarkeit, Sicherheit, Reproduzierbarkeit und klinischer Relevanz bieten. Diese Methode kann auch verwendet werden, um physiologische Veränderungen hervorzuheben, die nach einer bariatrischen Operation beim Menschen beobachtet wurden. Die Schwierigkeit der SG-Chirurgie spielt eine wichtige Rolle für den Erfolg von Tierstudien. Dieses Protokoll ist einfach durchzuführen und imitiert die SG, wie sie in anderen Tier- und Humanstudien üblich praktiziert wird.
Dieses Tiermodell kann die klinische Relevanz von Diabetes und Adipositas mit einem kurzen chirurgischen Eingriff mit Ärmelgastrektomie untersuchen. Diese Verfahren können die Operationszeit verkürzen und die chirurgische Überlebensrate verbessern. Der Hauptvorteil dieser Studie besteht darin, die klinischen Ergebnisse der bariatrischen Chirurgie bei menschlichen Patienten mit einem einfachen chirurgischen Modell nachzuahmen.
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Disclosures
Die Autoren erklären keinen Interessenkonflikt.
Acknowledgments
Wir danken Frau Isabelle Lu für die englische Erzählung.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.9% normal saline | China Chemical & Pharmaceutical Co., Ltd. | ||
| 5-0 monofilament suture | Shineteh Inc. Taiwan | Ethicon | |
| Alm | Shineteh Inc. Taiwan | ST-A072PK | UNIK |
| Animal Anesthesia | Step Technology | 0712VAP11076 | Matrx |
| Barraqer-Troutman forceps | Shineteh Inc. Taiwan | ST-N309(H-4410) | UNIK |
| cefazolin | Taiwan veteran pharmacy company | ||
| Chow diet | Research Diets | ||
| Glucose strips and glucometer | BeneCheck | BKM13-1 | BeneCheck |
| HbA1c kit | Level | OKEH00661 | |
| Hematology system | Fuji | FUJI DRI-CHEM 4000i | Europe |
| High Fat diet | Research Diets | 1810724 | LabDiet |
| Iris Forceps | Shineteh Inc. Taiwan | ST-1210 | UNIK |
| Iris Scissors | Shineteh Inc. Taiwan | ST-S011 | UNIK |
| Isoflurane | Panion & BF biotech INC | 8547 | Panion & BF |
| Ketoprofen | Sigma | 22071154 | Sigma-Aldrich |
| Stereo microscope | MicroTech | SZ-5T | MicroTech |
| Surgical clip (M) | Echicon Inc., Somerville, NJ | Size M, 5mm | |
| Vidisic gel | Dr. Gerhard Mann Chem.-pharm. Fabrik GmbH |
References
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